專利名稱：一種治療呼吸系統(tǒng)疾患的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物，更具體地說(shuō)，涉及一種治療呼吸系統(tǒng)疾患的中藥組合物，以及其制備方法。
背景技術(shù)：
急性支氣管炎是呼吸系統(tǒng)疾病中最為常見(jiàn)的多發(fā)病之一，特別是小兒屬易感人群。據(jù)統(tǒng)計(jì)，該病約占小兒疾病中的9～11％，由于治療不當(dāng)，病情久延，反復(fù)發(fā)作，可嚴(yán)重的影響小兒身體的健康和發(fā)育。目前該病的治療方法較多，無(wú)論是西藥或中藥都有一定的療效，但都存在不足之處，諸如抗生素的使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可以產(chǎn)生耐藥菌株，尤其是可導(dǎo)致菌群紊亂，消化不良。而且，當(dāng)今呼吸道疾病90％以上是以病毒感染為主，當(dāng)前已有濫用抗菌素之勢(shì)，造成治療費(fèi)用的過(guò)大負(fù)擔(dān)，而中醫(yī)中藥治療病毒感染有一定的優(yōu)勢(shì)。
目前，中國(guó)藥典(2005年版)中所收載的和市場(chǎng)上有售的、功能主治類似品種有“小兒肺熱咳喘口服液”、“小兒咳喘顆?！奔凹敝菨{(顆粒)等，因各方組成、針對(duì)性及側(cè)重面等不同，故所產(chǎn)生的療效也有所不同。目前市場(chǎng)上有售的治療該類疾病的(特別是適用于小兒的)中成藥有小兒肺熱咳喘口服液和小兒咳喘顆粒等都是古方麻杏石甘湯的加減方，但在思路上都沒(méi)有突破性進(jìn)展；急支糖漿(顆粒)(也可用于小兒)是在現(xiàn)代藥理學(xué)基礎(chǔ)上組成的處方，卻缺少中醫(yī)藥學(xué)的整體觀念。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服了上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，是一種在中醫(yī)藥學(xué)的理論基礎(chǔ)上大膽創(chuàng)新，特別是把活血化瘀和疏通氣道的觀念引入本病的治療方案中的中藥方劑。
本發(fā)明的目的是提供一種新的治療呼吸系統(tǒng)疾患的中藥組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供制備上述中藥組合物的制備方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述中藥組合物的用途。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種檢驗(yàn)上述中藥組合物活性成份的方法。
本發(fā)明人經(jīng)過(guò)多年研究，反復(fù)的推敲和長(zhǎng)期臨床實(shí)踐，設(shè)計(jì)出一種治療呼吸系統(tǒng)疾病的中藥組合物，該種組合既繼承了古方的精華(麻杏石甘湯)，又結(jié)合現(xiàn)代急性支氣管炎屬痰熱咳嗽證的發(fā)病特點(diǎn)而臨證化載進(jìn)行了發(fā)展，故本方具有古方和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的雙重依據(jù)。該組合物用于治療急性支氣管炎痰熱咳嗽證(特別是小兒)，具有見(jiàn)效快、療程短、不良反應(yīng)少等特點(diǎn)，對(duì)肺炎恢復(fù)期的痰熱咳嗽證也有著較好的療效。其原料藥組成為(以制成1000g成品計(jì))麻黃(蜜炙) 75-175g石膏 750-1750g苦杏仁(炒) 75-175g桑白皮(蜜炙) 75-175g葶藶子(炒) 30-120g當(dāng)歸 125-250g丹參 125-250g地龍 75-175g僵蠶(炒) 75-175g甘草 75-175g優(yōu)選的原料組成為麻黃(蜜炙) 100-150g石膏 1000-1500g苦杏仁(炒) 100-150g桑白皮(蜜炙) 100-150g葶藶子(炒) 50-100g
當(dāng)歸 150-226g丹參 150-226g地龍 100-150g僵蠶(炒) 100-150g甘草 100-150g特別優(yōu)選的原料藥組成為麻黃(蜜炙) 112-137g石膏 112-1370g苦杏仁(炒) 112-137g桑白皮(蜜炙) 112-137g葶藶子(炒) 68-82g當(dāng)歸 170-206g丹參 170-26g地龍 112-137g僵蠶(炒) 112-137g甘草 112-137g最優(yōu)選的原料藥組成為麻黃(蜜炙) 125g石膏 1250g苦杏仁(炒) 125g桑白皮(蜜炙) 125g葶藶子(炒) 75g當(dāng)歸 188g丹參 188g地龍 125g僵蠶(炒) 125g甘草 125g急性支氣管炎屬于中醫(yī)“咳嗽”范疇，其病理病機(jī)與痰有關(guān)，病理部位在肺。祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為“肺主氣，外合皮毛、開(kāi)竅于鼻，職司呼吸和通調(diào)水道，肺氣易開(kāi)易肅降，特別是小兒臟腑嬌嫩，形氣未充，肌膚疏落，藩籬不固，加之寒暖不能自調(diào)，故六淫之邪可從口鼻或皮毛而人，致毛竅閉塞，肺失宣降而出現(xiàn)感冒，咳嗽痰鳴，喘息等癥。又由于小兒乃“稚陰稚陽(yáng)之體”，陽(yáng)常有余，陰常不足“，感受外邪易于化熱傷肺，肺之津液被灼為痰，痰熱壅肺，氣道不利，失于宣降則咳嗽，痰稠；肺氣上逆則熱痰阻于氣道，則喉中痰鳴；又因氣為血帥，氣行血行，氣滯則血瘀。痰熱凝聚不消，當(dāng)可導(dǎo)致瘀血內(nèi)生的病機(jī)。本方特色是在清化痰熱中稍加疏通氣道，活血化瘀之品，而屢獲良效。臨床證實(shí)其療效顯著，因熱清痰化，肺氣順暢則咳喘諸證可速愈矣。
本方以麻黃、生石膏為君藥。麻黃，性味辛、苦、溫。辛而能散，苦而能降，溫而能通，故能發(fā)汗、平喘利水。蜜炙后減弱發(fā)汗作用，取其平喘止咳之效。生石膏，味辛、甘、大寒。清熱瀉火，除煩止渴。主要用于肺胃氣分，實(shí)熱癥候，肺熱咳喘。味辛、甘、大寒而質(zhì)不燥，清熱瀉火之力甚強(qiáng)，并能清泄里熱而透散，用于熱郁與肺不得宣降所致發(fā)熱、咳嗽、氣喘最為相宜。二藥相合，共奏清熱泄肺，止咳平喘，除煩止咳之功效，而做為方中的君藥。
苦杏仁、桑白皮、葶藶子共為臣藥?？嘈尤剩犊辔?，有小毒，止咳平喘?！秱摗仿辄S杏仁石膏甘草湯為治肺熱咳喘，肺中壅熱，肺氣失于宣降，而見(jiàn)咳喘、口渴等證的主方。本方是在上方基礎(chǔ)上，根據(jù)痰熱咳嗽證進(jìn)行加味，其中桑白皮，性味甘寒，瀉肺平喘，古有“瀉肺之有余，非桑皮不可”之說(shuō)。葶藶子，苦辛大寒。瀉肺平喘，利水消腫，為肺家氣分藥。適用于痰涎壅盛，肅降失司，咳喘胸悶不得臥者?？嘈尤省⑸０灼?、葶藶子三藥同伍，共為臣藥，以輔君藥麻黃、生石膏以清熱瀉肺，止咳平喘之功效。
方中，當(dāng)歸、丹參、地龍、僵蠶共為佐藥。當(dāng)歸，甘辛補(bǔ)血調(diào)經(jīng)、活血止痛，為其常規(guī)用法。而《本經(jīng)》稱其能“主咳逆上氣”。先賢用當(dāng)歸于咳喘者為數(shù)不多，且多與祛痰止咳、平喘藥同用，如蘇子降氣湯，金水六君煎。丹參，苦微寒，活血祛瘀，涼血消癰，除煩安神。二藥合用，功能活血化瘀，祛痰止咳，使痰熱壅滯得以活化消散。地龍，成寒，清熱平喘；僵蠶，成辛平，祛風(fēng)解痙，化痰散結(jié)。二藥同伍，清熱解痙，平喘化痰散結(jié)，使氣道舒暢，，痰濁易咯，咳喘之苦頓消。僵蠶和地龍二者均有息風(fēng)止痙、化痰散結(jié)，平喘泄熱之功效?！侗静菟急驿洝吩疲弧鞍捉┬Q，味辛氣溫而性燥，故治濕勝之風(fēng)痰，...僵蠶劫痰濕而散肝風(fēng)，故主之?！爆F(xiàn)代藥理學(xué)亦已證實(shí)僵蠶有催眠與抗驚厥作用；地龍有解熱、鎮(zhèn)靜及平喘的作用，現(xiàn)代藥理學(xué)亦已表明其具有顯著的舒張支氣管之作用，能使支氣管平滑肌擴(kuò)張而達(dá)到氣道舒暢及平喘的目的，對(duì)緩解與治療急性支氣管炎痰熱壅肺證起到很重要的作用，增強(qiáng)了本方祛痰、平喘和鎮(zhèn)靜的作用。本發(fā)明組合物通過(guò)增加僵蠶和地龍兩味藥使本方配伍更加嚴(yán)謹(jǐn)周密，因而收到了令人滿意的臨床效果。在上述藥味的基礎(chǔ)上再加上以上四味藥，特別是后兩味藥，每每奏效，同時(shí)又能起到防止或治療其瘀血內(nèi)生和小兒痰喘發(fā)痙的作用。方中甘草為使藥，性味甘平。有清熱解毒，祛痰止咳，平喘，佐以活血化痰之功。
本方以清熱瀉肺為主，又能活血化瘀，使痰瘀凝結(jié)得以化散，更能使氣道舒暢，痰濁易咯，肺熱得清，宣瀉肅降得行，則痰熱壅肺諸證皆除。本方標(biāo)本兼治，以治標(biāo)為主。方藥以仲景麻黃杏仁石膏甘草湯為主，加清泄化瘀祛風(fēng)解痙之品，實(shí)屬本方特點(diǎn)。
本發(fā)明的中藥組合物的制備方法可采用中成藥制劑的常規(guī)制備方法，其中中藥成分的浸出方法可參見(jiàn)奚念珠主編的《藥劑學(xué)》(第三版)第二章(人民衛(wèi)生出版社，1996年)，并采用常規(guī)制劑的制備方法將該中藥組合物制備成顆粒劑、膠囊劑、片劑、口服液和膏劑等劑型。
該中藥組合物的制備方法可以是稱取以上十味原料藥，加水20～3倍，優(yōu)選10～4倍；煎煮1～4次，優(yōu)選2～3次；每次0.5～4小時(shí)，優(yōu)選0.5～2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液靜置，取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.0-1.3(50～80℃)的清膏。根據(jù)制備劑型的要求加入相應(yīng)的輔料，例如制備顆粒劑，將適量檸檬酸加入所得的清膏，溶解，混勻，再加入干膏量1～5倍的蔗糖粉或和其它輔料及乙醇適量，制粒，分裝，即得顆粒劑；例如制備口服液，將適量蜂蜜及防腐劑苯甲酸鈉加入濃縮的上清液中，煮沸使其溶解，加水適量，攪勻，冷藏24～48小時(shí)，濾過(guò)，灌封，滅菌，即得口服液；例如制備膠囊，將得到的清膏放冷，加乙醇使含醇量達(dá)65％以上，攪勻，靜置24小時(shí)以上，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.0以上(70℃左右)，加干膏量2.5倍的糊精，噴霧干燥得粉末后，再進(jìn)行一步制粒，將制得顆粒裝膠囊即得膠囊劑；例如制備片劑，將得到的清膏放冷，加乙醇使含醇量達(dá)65％以上，攪勻，靜置24小時(shí)以上，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.0以上(70℃左右)，加干膏2倍量的預(yù)膠化淀粉，噴霧干燥得粉末后，再進(jìn)行一步制粒，整粒、壓片或者包薄膜衣或糖衣即得片劑。
需要指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，在制備的本發(fā)明中藥組合物的各種劑型時(shí)，可以采用添加其他輔料或者減少輔料、或者改進(jìn)工藝，所用的這些改變或者修飾都是藥物制劑技術(shù)中常用的手段，仍然為本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明中藥組合物中活性物檢驗(yàn)方法為鑒別方法(1)取本發(fā)明組合物10g，研細(xì)，加濃氨試液2ml，再加氯仿30ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過(guò)、濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，加甲醇1ml制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試液(20∶5∶0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以0.2％茚三酮乙醇試液，在105℃烘約5分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)。
(2)取本發(fā)明組合物10g，研細(xì)，加乙醇20ml，超聲處理20分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液5ul，對(duì)照藥材溶液1-3ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶10∶0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘約5分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的蘭紫色熒光主斑點(diǎn)。
(3)取本發(fā)明組合物10g研細(xì)，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?％氨溶液15ml分次溶解，合并，用氯仿提取2次，每次20ml，棄去氯仿液，取堿溶液加稀鹽酸2ml，混勻，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取阿魏酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液510ul，對(duì)照品溶液5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-甲醇-冰醋酸(30∶3∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置碘蒸氣中熏數(shù)分鐘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取丹參對(duì)照藥材1g，加水30ml煎煮30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液加稀鹽酸2ml，用乙醚提取二次，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典1995年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取鑒別(3)項(xiàng)下供試品溶液5ul，對(duì)照品溶液2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸(4∶1∶0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定(麻黃)測(cè)定方法1對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，加水制成每1ml含0.02mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本發(fā)明組合物適量，加氯化鈉和40％氫氧化鈉溶液后進(jìn)行水蒸氣蒸餾，餾出液置含稀鹽酸的量瓶中，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.0-7.0制成供試品溶液。
測(cè)定法取上述兩種溶液分別加入含溴麝香草酚藍(lán)的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液，再各加入氯仿進(jìn)行萃取，分取氯仿層，用分光光度法在414nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算即得。具體內(nèi)容為精密吸取上述兩種溶液各3ml，分別置具塞三角瓶中，各精密加入含0.0125％溴麝香草酚藍(lán)的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(pH7.6)10ml，搖勻后，再各精密加入氯仿10ml，充分振搖3分鐘，傾入分液漏斗中，輕輕搖動(dòng)，靜止10分鐘，分取氯仿層，靜止5分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VB)試驗(yàn)，在414nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算即得。
測(cè)定方法2對(duì)照溶液的制備將鹽酸麻黃堿用水稀釋后，加入高碘酸與氫氧化鈉溶液適量，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7，加甲醇適量制得對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備取本品適量加氫氧化鈉溶液適量搖勻后再加氯化鈉適量超聲后進(jìn)行蒸餾提取至預(yù)先盛有鹽酸溶液的量瓶中，取適量稀釋后再加入高碘酸與氫氧化鈉溶液適量，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7，加甲醇適量溶解過(guò)濾后取續(xù)濾液即得。
測(cè)定法取上述兩種溶液分別注入以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜儀中，以甲醇-水(1∶1)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿計(jì)算應(yīng)不低于3000。
以上述兩種方法計(jì)算，本發(fā)明組合物每1g含麻黃以鹽酸麻黃堿(C10H15NO·HCL)計(jì)，不得少于0.30mg。
通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)證明，本發(fā)明的組合物具有抗病毒、抗菌、解熱、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘及抗炎作用。
通過(guò)臨床試驗(yàn)表明本發(fā)明的組合物對(duì)小兒急性支氣管炎痰熱咳嗽癥，優(yōu)于臨床常用的“急支顆?！?，能明顯改善臨床癥狀與體征。具有療程短，見(jiàn)效快，劑型穩(wěn)定、無(wú)明顯毒副反應(yīng)的特點(diǎn)。因此，本發(fā)明的組合物可用于治療急性支氣管炎或肺炎恢復(fù)期的痰熱咳嗽證，特別是適用于小兒。
本發(fā)明的組合物是通過(guò)口服給藥的，以合劑為例，一歲至三歲一次10ml，三歲以上至七歲一次15ml，七歲以上至十二歲一次20ml，十二歲以上至十四歲一次30ml，十四歲以上一次40ml，一日三次；或遵醫(yī)囑。可參照口服液的劑量(以活性成份的含量折算)服用其他的劑型。


圖1表示正常鼠肺組織(×200)圖2表示肺泡壁內(nèi)小血管輕度擴(kuò)張(×100)圖3表示肺泡壁小血管明顯擴(kuò)張、充血(×100)圖4表示肺泡壁內(nèi)小血管擴(kuò)張充血，伴有灶性出血(×100)圖5表示本發(fā)明制劑的清熱作用具體實(shí)施方式
下面通過(guò)實(shí)施例來(lái)具體地說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，這些具體的實(shí)施例僅表明為了達(dá)到本發(fā)明的目的而選擇實(shí)施的技術(shù)方案，但不是對(duì)技術(shù)方案的限制，根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)行改進(jìn)是顯然的，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
實(shí)施例1原料藥麻黃(蜜炙) 125g石膏1250g 苦杏仁(炒) 125g桑白皮(蜜炙) 125g葶藶子(炒) 75g 當(dāng)歸 188g丹參 188g地龍125g 僵蠶(炒) 125g甘草 125g制備方法以上十味，加6.5倍水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液靜置，取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2-1.25(50℃)的清膏，加入檸檬酸2.5g，溶解，混勻，再加入蔗糖粉(為干膏量的2.99倍)及乙醇適量，制粒，制成1000g本發(fā)明顆粒劑I-A，即得250袋或25瓶(每袋裝4g/袋，或每瓶裝40g)。
根據(jù)上述的活性成份檢測(cè)方法，測(cè)得每1g含麻黃以鹽酸麻黃堿(C10H15NO·HCL)計(jì)，大于0.60mg。
實(shí)施例2參照實(shí)施例1，不同處為加8倍水煎煮二次，每次2小時(shí)。制得本發(fā)明顆粒劑I-B。
實(shí)施例3麻黃(蜜炙)175g石膏750g 苦杏仁(炒) 175g桑白皮(蜜炙) 75g 葶藶子(炒) 120g 當(dāng)歸 125g丹參 250g地龍75g 僵蠶(炒) 175g甘草 75g取以上十味原料藥，加8倍水煎煮2～3次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.1-1.2(50℃)，加適量蜂蜜及0.2％的苯甲酸鈉，煮沸使溶解，加水適量，攪勻，冷藏24～48小時(shí)，濾過(guò)，灌封，滅菌，即得100瓶(每瓶10ml)本發(fā)明口服液制劑II-A。
實(shí)施例4參照實(shí)施例3，不同處為加6倍水煎煮2～3次，每次1小時(shí)。即得本發(fā)明口服液制劑II-B。
實(shí)施實(shí)例5麻黃(蜜炙)150g膏 1500g苦杏仁(炒)150g桑白皮(蜜炙)150g葶藶子(炒)100g當(dāng)歸226g丹參 226g地龍150g僵蠶(炒) 150g甘草150g稱取以上十味原料藥，加12倍水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度1.1～1.25(80℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達(dá)65％以上，攪勻，靜置24小時(shí)以上，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.0以上(70℃左右)，加干膏量2.5倍的糊精，噴霧干燥得粉末后，再進(jìn)行一步制粒，將制得顆粒裝膠囊即得3000粒本發(fā)明膠囊制劑III-A。
實(shí)施例6
參照實(shí)施例5，不同處為加水10倍煎煮3次，每次2小時(shí)。即得本發(fā)明膠囊制劑III-B。
實(shí)施例7麻黃(蜜炙)137g石膏 1370g苦杏仁(炒)137g桑白皮(蜜炙) 137g葶藶子(炒)82g 當(dāng)歸 206g丹參 206g地龍 137g僵蠶(炒) 137g甘草 137g稱取以上十味原料藥，加水10倍，煎煮2～3次，每次1～2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度1.1～1.25(80℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達(dá)65％以上，攪勻，靜置24小時(shí)以上，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.0以上(70℃左右)，加干膏2倍量的預(yù)膠化淀粉，噴霧干燥得粉末后，再進(jìn)行一步制粒，整粒、壓片及包薄膜衣即得1600片本發(fā)明片劑制劑IV-A。
實(shí)施例8片劑4-2參照實(shí)施例7，不同處為加水8倍。即得本發(fā)明片劑制劑IV-B。以下實(shí)施例將研究本發(fā)明中藥組合物的性能試驗(yàn)?zāi)康挠^察本發(fā)明中藥組合物的抗病毒、抗菌、解熱、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘及抗炎作用，以實(shí)施例1的顆粒劑I-A為受試樣品。
試驗(yàn)材料1、藥物與試劑(※為補(bǔ)充試驗(yàn)內(nèi)容)本發(fā)明制劑實(shí)施例1的本發(fā)明顆粒劑I-A。
含量；相當(dāng)生藥2.45g/g顆粒。
空白對(duì)照(賦型劑)由本發(fā)明人自制。(參照實(shí)施例1制備顆粒劑的方法，由蔗糖和檸檬酸細(xì)粉制成，兩者的比例為2.99∶0.01)細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，批號(hào)924，中國(guó)藥品生物制品檢定所。
肺炎鏈球菌菌號(hào)31001，批號(hào)20，為標(biāo)準(zhǔn)菌株，由中國(guó)藥品生物制品檢定所。
呼吸道合胞病毒(RSV)標(biāo)準(zhǔn)毒株Long株，Vero細(xì)胞單層培養(yǎng)液。
TCID50＝10-6。由中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所提供。
安乃近批號(hào)950810，沈陽(yáng)第五制藥廠。
急支糖漿批號(hào)950121，由四川涪陵制藥廠生產(chǎn)※批號(hào)980907104，由太極集團(tuán)涪陵制藥廠生產(chǎn)。
阿斯匹林批號(hào)950710，中國(guó)山西太原晉陽(yáng)制藥廠。
苯巴比妥鈉批號(hào)951124，上海新亞藥業(yè)公司。
※氫化可的松沈陽(yáng)第一制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)950605。
氯化胺批號(hào)950608，北京向陽(yáng)制藥廠。
雙黃連沖劑批號(hào)970101，哈爾濱天工制藥有限公司。
雙黃連口服液批號(hào)；97110341，中國(guó)鄭州眾生制藥廠。
2、藥物配制臨用時(shí)用蒸餾水配成不同濃度，等容積給藥。
3、動(dòng)物昆明種小鼠，SD大鼠，均由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。合格證號(hào)遼實(shí)動(dòng)字第522號(hào)，普通級(jí)一級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
Balb/c鼠，由湖北省醫(yī)學(xué)科學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號(hào)第042號(hào)。
※昆明種小白鼠，雌雄各半，體重18-22g。
Wistar大白鼠，雌雄各半，體重200-250g。
豚鼠，雌雄各半，體重252.1±46.6g。
以上動(dòng)物購(gòu)于沈陽(yáng)藥科大學(xué)動(dòng)物飼養(yǎng)室，動(dòng)物合格證號(hào)碼遼實(shí)動(dòng)字033號(hào)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)遼實(shí)動(dòng)字036號(hào)。
4、儀器751型紫外分光光度計(jì)。
試驗(yàn)期間實(shí)驗(yàn)室溫度18-22℃。
實(shí)施例9本發(fā)明中藥組合物抗呼吸道合胞病毒的體內(nèi)試驗(yàn)(1)病毒毒力測(cè)定①感染RSV臨床Ba1b/c鼠5只用細(xì)胞培養(yǎng)病毒滴鼻感染，取原液50-60μl滴鼻。感染后24h小鼠出現(xiàn)毛聳，活動(dòng)減少，食少等癥狀。第3-4天后癥狀好轉(zhuǎn)，食欲、精神恢復(fù)。第8天剖殺，取血分離血，取肺。
②瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)血清RSV抗體以RSV-McAb抗體為對(duì)照，樣品血清以1∶50，1∶100稀釋。加樣后37℃過(guò)夜，均出現(xiàn)沉淀線，尤以1∶50樣品為顯。
③小鼠肺勻漿，用10％鼠肺懸液上清(過(guò)濾清潔后)，在Vero培養(yǎng)測(cè)定RSV50＝10-1-0表1 病毒毒力測(cè)定結(jié)果

(2)藥物抗病毒試驗(yàn)Ba1b/c小鼠用RSV病毒原液每鼻孔50μl商鼻，4小時(shí)后開(kāi)始給藥，按表2所示劑量連續(xù)給藥8天，每天一次。給藥后第8天剖殺小鼠，取血分離血清，用間接免疫熒光染色法檢測(cè)RSV抗體；觀察肺部病理變化；測(cè)定肺懸液在Vero細(xì)胞中病毒滴度(TCID50)。
①分組與給藥取雌性6周齡Balb/c小鼠110只，體重18-22克，隨機(jī)分為八組(見(jiàn)表2)第一組為正常對(duì)照組(小鼠未感染RSV)，等容積蒸餾水；第二組至第八級(jí)感染RSV；第二組為蒸餾水組；第三組為空白對(duì)照組；第四組為嗎啉呱組，劑量為0.01g/kg/d；第五組為雙黃連口服液組，劑量為11.0ml/kg/d；第六組為本發(fā)明顆粒劑I-A小劑量組(6g/kg/d)；第七組為本發(fā)明顆粒劑I-A中劑量組(9g/kg/d)；第八組為本發(fā)明顆粒劑I-A大劑量組(12.5g/kg/d)。ig給藥八天，每天一次。
表2 本發(fā)明制劑抗RSV-Balb/c鼠體內(nèi)試驗(yàn)分組

注正常對(duì)照組小鼠未感染RSV。
②血清RSV抗體的測(cè)定以1∶50和1∶100稀釋血清，采用RSV-McAb和Vero細(xì)胞用間接免疫熒光法檢測(cè)血清RSV抗體。結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 Balb/c小鼠血清RSV抗體的測(cè)定結(jié)果

n動(dòng)物數(shù)
③病毒滴度的測(cè)定Balb/c小鼠于給藥第八天，制備鼠肺懸液，在Vero細(xì)胞中進(jìn)行病毒滴度測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 肺懸液病毒滴度的測(cè)定結(jié)果

④Balb/c小鼠于給藥第八天，取鼠肺組織做石臘包埋，切片，HE染色，光鏡(×100，×200)下觀察肺病變C1、C2組個(gè)別鼠肺泡內(nèi)小血管輕度擴(kuò)張；C3、B1、B2、A1組鼠肺組織正常；A2、A3組小鼠肺泡壁小血管明顯擴(kuò)張，充血，并伴有肺泡內(nèi)灶性出血。
參見(jiàn)圖1、2、3、4。
綜上所述，本發(fā)明制劑在抗RSV小鼠體內(nèi)試驗(yàn)中表明，口服本發(fā)明顆粒劑I-A9g-12.5g/kg/d，有明顯的抗RSV作用，與對(duì)照組比較有明顯差異，間接免疫熒光檢測(cè)抗體陰性率為94.4％，與陽(yáng)性對(duì)照藥物嗎啉呱抗RSV效果接近；鼠肺組織切片可見(jiàn)，本發(fā)明顆粒劑I-A治療8天后，肺組織恢復(fù)正常，而陰性對(duì)照組呈現(xiàn)肺炎癥表現(xiàn)；用該樣品治療后鼠肺懸液在Vero細(xì)胞培養(yǎng)中已測(cè)不出病毒滴度。上述試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明制劑有明顯抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用。
實(shí)施例10本發(fā)明中藥組合物抑菌試驗(yàn)(1)對(duì)肺炎鏈球菌感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)作用取昆明種小鼠90只，隨機(jī)分為6組，分組原則及情況同止咳作用項(xiàng)。陽(yáng)性對(duì)照組為雙黃連沖劑組(ig80％雙黃連沖劑25ml/kg，相當(dāng)雙黃連20g/kg)；每組動(dòng)物15只，每天給藥二次(上午9∶00一次，下午3∶00一次)，預(yù)防給藥7天后，用在血清肉湯培養(yǎng)液中培養(yǎng)18小時(shí)的肺炎鏈球菌菌液(菌液濃度為106/ml)感染小鼠，腹腔注射，每鼠0.5ml。感染后各組按原劑量繼續(xù)ig給藥7天，每天兩次觀察動(dòng)物反應(yīng)，記錄動(dòng)物死亡數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表5。
表5 本發(fā)明制劑對(duì)肺炎鏈球菌感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)作用

由表5可見(jiàn)，本發(fā)明顆粒劑I-A在所用大、中兩個(gè)劑量時(shí)能減少動(dòng)物死亡數(shù)，具有一定的抑菌作用。
(2)體外抑菌作用(試管二倍稀釋法)取肺炎鏈球菌菌株進(jìn)行增菌培養(yǎng)(37℃，6小時(shí))，用肉湯稀釋成1∶105試驗(yàn)菌液。將樣品用肉湯配成1g/ml的樣品溶液(PH＝7.2)，取滅菌試管三組，每組10支。每支試管內(nèi)加樣品溶液0.5ml，然后每組進(jìn)行兩倍稀釋，最后一管做陰性對(duì)照。每個(gè)試管各加入試驗(yàn)菌液0.5ml，混合均勻，將三組試管于37℃孵箱中培養(yǎng)18小時(shí)后觀察結(jié)果。重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6。
表6 本發(fā)明制劑體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果

雙黃連的MIC為0.125g/ml，本發(fā)明顆粒劑I-A的MIC為0.25g/ml，輔料不抑菌。
由表6可見(jiàn)，本發(fā)明顆粒劑I-A在體外抑菌試驗(yàn)中具有一定的抑菌作用。
實(shí)施例11本發(fā)明中藥組合物的解熱試驗(yàn)取SD大鼠，雌雄各半，體重160-180克，用肛門(mén)溫度計(jì)測(cè)肛門(mén)溫度，每半小時(shí)測(cè)一次，共測(cè)兩次，以兩次溫度的平均值作為該鼠的正常體溫。選擇兩次溫差不過(guò)0.5℃，正常體溫在37.0-38.0℃的大鼠，腹腔注射細(xì)菌內(nèi)毒素(600Eu/Kg)，1小時(shí)后測(cè)體溫一次，選出體溫升高1-2℃的大鼠60只，隨機(jī)分為6組蒸餾水對(duì)照組(ig等容積的蒸餾水)；空白對(duì)照組(ig等容積的賦型劑)；受試物高劑量組(ig100％本發(fā)明顆粒劑I-A25ml/kg，相當(dāng)顆粒25g/kg，相當(dāng)生藥61.3g/kg，約為臨床劑量4.92倍)；受試物中劑量組(ig50％本發(fā)明顆粒劑I-A溶液25ml/kg，相當(dāng)顆粒12.5g/kg，相當(dāng)生藥30.7g/kg，約為臨床劑量2.46倍)；受試物低劑量組(ig25％本發(fā)明顆粒劑I-A溶液25ml/kg，相當(dāng)顆粒6.25g/kg，相當(dāng)生藥15.3g/kg，約為臨床劑量1.23倍)；安乃近對(duì)照組(ig8％安乃近溶液25ml/kg)；每組10只，ig給藥一次，給藥后每半小時(shí)測(cè)體溫一次，共測(cè)6次。記錄體溫，計(jì)算給藥后體溫與致熱溫度的升(降)值，進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表7、圖5。
表7 本發(fā)明制劑的清熱作用(X±SD)


*P＜0.05**P＜0.01
由表7可見(jiàn)，本發(fā)明顆粒劑I-A在大、中兩個(gè)劑量時(shí)，具有明顯的清熱作用。安乃近的清熱作用也非常顯著，與大劑量組作用相當(dāng)。
實(shí)施例12本發(fā)明中藥組合物的止咳試驗(yàn)(1)小鼠氨水引咳法取昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重18-22克，隨機(jī)分為6組蒸餾水對(duì)照組(ig等容積的蒸餾水)；空白對(duì)照組(ig等容積的賦型劑)；受試物高劑量組(ig200％本發(fā)明顆粒劑I-A溶液25ml/kg，相當(dāng)顆粒50g/kg，相當(dāng)生藥122.5g/kg，約為臨床劑量4.84倍)；受試物中劑量組(ig100％本發(fā)明顆粒劑I-A溶液25ml/kg，相當(dāng)顆粒25g/kg，相當(dāng)生藥61.3g/kg，約為臨床劑量2.42倍)；受試物低劑量組(ig本發(fā)明顆粒劑I-A溶液25ml/kg，相當(dāng)顆粒12.5g/kg，相當(dāng)生藥30.6g/kg，約為臨床劑量1.21倍)；急支糖漿對(duì)照組(ig原藥液50ml/kg，大約與受試物中劑量相當(dāng))。每組動(dòng)物10只。給藥七天，每天一次，末次給藥1小時(shí)后，將小鼠置于500ml燒杯中，并用平皿將燒杯蓋好，用噴霧裝置將氨水定量噴入燒杯中，然后觀察和記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2分鐘內(nèi)的咳嗽次數(shù)，結(jié)果列于表8，可知受試物組與空白對(duì)照組相比，能明顯延長(zhǎng)咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數(shù)，經(jīng)過(guò)t檢驗(yàn)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上非常有意義(p＜0.01，p＜0.05)，且呈良好的量效關(guān)系。急支糖漿的止咳作用也非常顯著，與中劑量組作用相當(dāng)。
表8 本發(fā)明制劑的止咳作用(小鼠氨水引喘法)

*P＜0.05**P＜0.01(與空白對(duì)照組比較)※(2)豚鼠枸橡酸引咳法取豚鼠47只，體重132.9±20.2g，隨機(jī)分為五組。第一組豚鼠灌胃等容積生理鹽水；第二組豚鼠灌胃急支糖漿30ml/kg；第三一五組豚鼠灌胃本發(fā)明顆粒劑I-A30g/kg，15g/kg和7.5g/kg，連續(xù)灌胃7天，末次給藥后40分鐘，將豚鼠放于700ml玻璃鐘罩內(nèi)，向鐘罩內(nèi)噴入17.5％枸橡酸溶液10秒鐘，觀察豚鼠的咳嗽潛伏期和5分鐘內(nèi)咳嗽次數(shù)，數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表9。
表9 本發(fā)明制劑對(duì)枸橡酸引發(fā)豚鼠咳嗽的影響

注*與生理鹽水組比較 P＜0.05**與生理鹽水組比較 P＜0.01***與生理鹽水組比較 P＜0.001由表9數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明顆粒劑I-A具有比較明顯的抑制因枸橡酸引發(fā)豚鼠咳嗽的作用，可使豚鼠的咳嗽潛伏期明顯延長(zhǎng)，5分鐘的咳嗽次數(shù)明顯減少。
實(shí)施例13本發(fā)明中藥組合物的化痰試驗(yàn)(1)大鼠毛細(xì)玻璃管排痰量法取SD大鼠60只，雌雄各半，體重180-220克，隨機(jī)分為6組，分組原則及情況同止咳作用項(xiàng)。陽(yáng)性對(duì)照組為氯化胺組(ig所配氯化胺溶液25ml/kg，相當(dāng)氯化胺1g/kg)。禁食12小時(shí)，苯巴比妥鈉(100mg/kg)腹腔注射麻醉后，仰位固定。剪開(kāi)頸正中部皮膚，分離出氣管。在甲狀軟骨下緣正中兩軟骨環(huán)之間用尖銳的注射器針頭扎一小孔，然后插入玻璃毛細(xì)管一根，使毛細(xì)管剛好接觸氣管底部表面，借以吸取氣管后部之痰液。當(dāng)毛細(xì)管內(nèi)被痰充滿時(shí)，立即另?yè)Q一根。以毛細(xì)管吸取痰液長(zhǎng)度作為評(píng)價(jià)藥物的化痰效果。記錄給藥前2小時(shí)的正常分泌量，按以上所示劑量給藥一次，繼續(xù)觀察4小時(shí)，記錄分泌量。比較給藥前后平均每小時(shí)的分泌量。結(jié)果列于表10，可知受試物組與空白對(duì)照組比較，能使痰液排出量明顯增加，經(jīng)t檢驗(yàn)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上非常有意義(P＜0.01)，且有量效關(guān)系。氯化胺的化痰作用也非常顯著，與大劑量組相當(dāng)。
表10 本發(fā)明制劑的化痰作用(毛細(xì)玻管排痰量法)

**P＜0.01(與空白對(duì)照組比較)※(2)小鼠氣管段酚紅法取昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重20.3±1.1g，隨機(jī)分為五組，每組10只。第一組小鼠經(jīng)口灌胃等容積生理鹽水；第二組小鼠經(jīng)口灌胃急支糖漿30ml/kg；第三-五組小鼠經(jīng)口灌胃本發(fā)明顆粒劑I-A劑30、15、7.5g/kg，給藥30分鐘后，腹腔注射5％酚紅0.1ml/10g體重，注射酚紅后30分鐘，處死小鼠，剝離氣管周圍組織。剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2.0ml生理鹽水的試管中，10分鐘后加2滴5％的NaOH，在波長(zhǎng)546nm處測(cè)光密度值，由酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出酚紅排泌量，與對(duì)照組比較差異的顯著性，結(jié)果見(jiàn)表11。
表11 本發(fā)明制劑對(duì)小鼠氣管酚紅排泌量的影響

注*與生理鹽水組比較 P＜0.05
**與生理鹽水組比較 P＜0.01**與生理鹽水組比較 P＜0.001由表11數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明顆粒劑I-A具有明顯的祛痰作用，大、中劑量對(duì)酚紅排泌量有明顯的促進(jìn)作用，排泌量增多，急支糖漿組作用最為明顯，與生理鹽水對(duì)照組比較，P＜0.001。
實(shí)施例14本發(fā)明中藥組合物的平喘作用取豚鼠50只，雌雄各半，體重120±17g，隨機(jī)分為五組，每組10只。第一組動(dòng)物灌胃等容積生理鹽水；第二組動(dòng)物灌胃急支糖漿3ml/100g體重；第三-五組灌胃本發(fā)明顆粒劑I-A30g/kg，15g/kg和7.5g/kg，連續(xù)給藥7天，在給藥的末次40分鐘，將豚鼠放于700ml玻璃鐘罩中，逐只用2％的乙酰膽堿和0.1％的組織胺混合液定時(shí)10秒噴霧，觀察豚鼠的引喘潛伏期(即從噴霧開(kāi)始到哮喘發(fā)作，呼吸極度困難，直至抽搐跌倒的時(shí)間)，結(jié)果見(jiàn)表12。
表12 本發(fā)明制劑對(duì)豚鼠的平喘作用

注*與生理鹽水組比較P＜0.05**與生理鹽水組比較 P＜0.01***與生理鹽水組比較 P＜0.001由表12數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明顆粒劑I-A有著比較明顯的抑制由Ach-His混合液誘發(fā)的豚鼠支氣管痙攣所導(dǎo)致的呼吸困難、喘息的作用，可使引喘潛伏期明顯地延長(zhǎng)，說(shuō)明本發(fā)明顆粒劑I-A具有較明顯的平喘作用。
實(shí)施例15本發(fā)明中藥組合物的抗炎作用(1)小鼠耳二甲苯致炎法取昆明種雄性小鼠60只，體重26-30克，隨機(jī)分為6組蒸餾水對(duì)照組(ig等容積的蒸餾水)；空白對(duì)照組(ig等容積的賦型劑)；受試物高劑量組(ig200％本發(fā)明顆粒劑I-A溶液30ml/kg，相當(dāng)顆粒60g/kg，相當(dāng)生藥147.0g/kg，約為臨床劑量5.80倍)；受試物中劑量組(ig100％本發(fā)明顆粒劑I-A溶液30ml/kg，相當(dāng)顆粒30g/kg，相當(dāng)生藥73.5g/kg，約為臨床劑量2.90倍)；受試物低劑量組(ig 50％本發(fā)明顆粒劑I-A溶液30ml/kg，相當(dāng)顆粒15.0g/kg，相當(dāng)生藥36.8g/kg，約為臨床劑量1.45倍)；阿斯匹林組(ig所配阿斯匹林溶液25ml/kg，相當(dāng)阿斯匹林0.2g/kg)。Ig給藥十天，每天一次，末次給藥后1h于小鼠右耳涂0.05ml二甲苯致炎。2h后將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9mm打孔器分別在小鼠左、右耳片同一部位打下圓耳片，稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度，進(jìn)行t檢驗(yàn)，并按下式計(jì)算各組腫脹抑制率，結(jié)果列于表13，可知受試物與空白對(duì)照組比較能顯著抑制二甲苯所致小習(xí)耳腫脹，經(jīng)t檢驗(yàn)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上非常有意義(P＜0.01)，且有量效關(guān)系。阿斯匹林的抗炎作用也非常顯著，與大劑量組作用相當(dāng)。

表13 本發(fā)明制劑對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

**P＜0.01(與空白對(duì)照組比較)※(2)大鼠足趾蛋清致炎法取大鼠50只，體重252.1±46.6g，雌雄各半，隨機(jī)分為五組，每組10只。第一組灌胃等容積蒸餾水；第二組-第四組灌胃本發(fā)明顆粒劑I-A30g/kg，15g/kg和7.5g/kg，連續(xù)灌胃給藥7天；第五組大鼠在第七天時(shí)皮下注射氫化可地松30mg/kg，全部動(dòng)物末次給藥后20分鐘于大鼠右后足皮下向關(guān)節(jié)方向注射新鮮蛋清0.1ml/只，分別于注射蛋清后30，45，60，90分鐘，分別用大鼠足腫脹儀測(cè)量足腫脹度，結(jié)果見(jiàn)表14。
足腫脹度＝注射蛋清后足容積-注射蛋清前足容積表14 本發(fā)明制劑對(duì)大鼠足腫脹的影響

注*與生理鹽水組比較P＜0.05***與生理鹽水組比較P＜0.001表14數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明制劑具有明顯的抑制大鼠足趾腫脹的作用。
結(jié)論本發(fā)明制劑具有顯著的抗病毒、解熱、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗炎和一定的抑菌作用。
綜上所述，通過(guò)主要藥效學(xué)試驗(yàn)方面的研究，充分證明了本發(fā)明制劑的有效性和安全性，既為本發(fā)明制劑進(jìn)行臨床試驗(yàn)提供了依據(jù)，也為臨床試驗(yàn)用藥提供了安全用藥的參考劑量。
實(shí)施例16臨床實(shí)驗(yàn)本發(fā)明顆粒劑I-A對(duì)照組急支顆粒根據(jù)II期臨床試驗(yàn)計(jì)劃，采用多中心隨機(jī)雙盲雙模擬的對(duì)照方法進(jìn)行臨床觀察研究。全部213例受試對(duì)象均來(lái)源于三家國(guó)家臨床藥理研究基地(天津中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，河南省中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院)的兒科門(mén)診、病房或急診觀察室。213例中，除5例因不符合試驗(yàn)計(jì)劃要求剔除外，納入統(tǒng)計(jì)者208例，包括試驗(yàn)組102例，其中門(mén)診病例73例，占71.57％，住院病例21例，占20.59％，觀察室病例8例，占7.84％；對(duì)照組106例，其中門(mén)診病例73例，占68.87％，住院病例24例，占22.64％，觀察室病例9例，占8.49％。兩組病例來(lái)源比較，X2＝0.1820，P＞0.05，差異無(wú)顯著性意義。
表15 兩組患者急性支氣管炎總療效比較

注總有效率，指痊愈率+顯效率(即愈顯率)，以下同此。
Ridit分析U＝2.4404，P＜0.05。兩組比較，差異有顯著性意義。典型病例病例1GY，女，5歲。2001年3月5日開(kāi)始試驗(yàn)。隨機(jī)號(hào)甲A10。
主訴咳嗽2天。
現(xiàn)病史2天前開(kāi)始咳嗽，1天前咳嗽明顯加重。現(xiàn)咳嗽頻繁，有痰量不多，痰色黃白，口渴，尿不黃，大便干。
查體體溫36.3℃，神清，精神尚好，呼吸平。咽充血，雙肺呼吸音粗糙，偶聞及干鳴音，心音有力，心率85次/分，未聞及雜音，腹軟。舌質(zhì)紅，苔黃，脈滑。
實(shí)驗(yàn)室檢查血常規(guī)WBC8.4×109/L，N30.8％，HB112g/L，RBC4.69×1012/L。
X線胸透雙肺紋理稍多。
診斷與辨證小兒急性支氣管炎(痰熱咳嗽證)診治經(jīng)過(guò)確診后予甲A10號(hào)試驗(yàn)藥物。每次給予本發(fā)明藥物和急支顆粒模擬藥各15ml，每日3次，口服。治療3天，咳嗽減輕，有痰如故，雙肺干鳴音消失，呼吸音仍粗糙。治療5天，咳嗽、痰諸證消失，體溫36.5℃，咽不紅，雙肺呼吸音清，心音有力，心率86次/分。舌質(zhì)淡紅，苔薄，脈平。
復(fù)查血常規(guī)WBC8.7×109/L，N44.9％，HB126g/L，RBC4.83×1012/L。X線胸透仍示心肺無(wú)著變。根據(jù)療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，總療效為痊愈(0/15＝0)，證候療效為顯效(0/11＝0)。試驗(yàn)中。未發(fā)現(xiàn)有任何不良反應(yīng)，安全性評(píng)價(jià)為一級(jí)。
病例2ZMY，女，4歲。2001年4月4日住院治療。隨機(jī)號(hào)乙D10。
主訴咳嗽2天。
現(xiàn)病史患兒2天前開(kāi)始咳嗽。，咳嗽陣作，有痰量不多，痰色黃白，尿不黃，大便不干。
查體體溫37.2℃，神清，精神尚好，呼吸平。咽充血，雙肺呼吸音粗糙，心音有力，心率120次/分，未聞及雜音，腹軟。舌質(zhì)紅，苔黃，脈數(shù)。
實(shí)驗(yàn)室檢查血常規(guī)WBC5.0×109/L，L32.9％，N59.0％，HB119g/L，PLT222×109/L。
尿常規(guī)、便常規(guī)(-)。
X線胸透雙肺紋理增多紊亂。
診斷與辨證小兒急性支氣管炎(小兒咳嗽痰熱咳嗽證)診治經(jīng)過(guò)確診后予乙D10號(hào)試驗(yàn)藥物。每次給予本發(fā)明藥物和急支顆粒模擬藥各15ml，每日3次，口服。治療1天，咳嗽減輕，治療4天，咳嗽、有痰、大便干諸證消失，體溫36.2℃，雙肺呼吸音清，心音有力，心率110次/分。舌質(zhì)淡紅，苔薄，脈平。復(fù)查血常規(guī)WBC10.0×109/L，L19％，N77.0％，HB143g/L，PLT179×109/L。X線胸透(-)。根據(jù)療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，總療效、證候療效均評(píng)為痊愈。試驗(yàn)中，未發(fā)現(xiàn)有任何不良反應(yīng)，安全性評(píng)價(jià)為一級(jí)。
病例3YC，男，2歲。2001年7月3日開(kāi)始試驗(yàn)。隨機(jī)號(hào)丙D06。
主訴咳嗽、低熱1天。
現(xiàn)病史1天前開(kāi)始咳嗽、發(fā)熱。現(xiàn)咳嗽頻繁，喉間有痰鳴音，低熱，口不渴，尿不黃，大便正常。
查體體溫37.9℃，神清，精神尚好，呼吸粗促，31次/分。因充血，雙肺呼吸音粗糙，偶聞及痰鳴音，心音有力，心率120次/分，未聞及雜音，腹軟。舌質(zhì)紅，苔黃，指紋紫。
實(shí)驗(yàn)室檢查血常規(guī)WBC3.7×109/L，N75.8％，HB125g/L，RBC4.25×1012/L，PLT129×109/L。尿常規(guī)、大便常規(guī)(-)。
X線胸透雙肺紋理粗重。
診斷與辨證小兒急性支氣管炎(痰熱咳嗽證)診治經(jīng)過(guò)確診后予丙D06號(hào)試驗(yàn)藥物。每次給予本發(fā)明藥物和急支顆粒模擬藥各15ml，每日3次，口服。治療3天，低熱消失，咳嗽次數(shù)減少，仍有喉間痰鳴，體溫正常，呼吸平穩(wěn)，雙肺呼吸音粗糙。治療5天，咳嗽、痰諸證消失，體溫36.4℃，咽稍紅，雙肺呼吸音清，心音有力，心率86次/分。舌質(zhì)淡紅，苔薄，指紋淡紫。復(fù)查血常規(guī)WBC5.2×109/L，N77.9％，HB137g/L，RBC4.18×1012/L，PLT117×109/L。尿常規(guī)、大便常規(guī)(-)。X線胸透仍示心肺無(wú)著變。根據(jù)療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，總療效為痊愈(0/15＝0)，證候療效為顯效(0/11＝0)。安全性評(píng)價(jià)為一級(jí)。
以上結(jié)果表明，本發(fā)明顆粒劑I-A是以清肺化痰、止咳平喘，佐以活血化瘀為主要功效中藥新藥，主治小兒急性支氣管炎痰熱咳嗽證。試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)組的總療效，痊愈率為34.31％，總有效率(痊愈+顯效率)為86.27％；而對(duì)照組的痊愈率為21.70％，總有效率為74.53％。兩組比較，試驗(yàn)組療效高于對(duì)照組，差異有顯著性意義。試驗(yàn)組對(duì)痰熱咳嗽證候的痊愈率為27.45％，總有效率為90.20％；而對(duì)照組的痊愈率為19.81％，總有效率為75.47％。兩組比較，差異無(wú)顯著性意義。試驗(yàn)組的總積分值和證候積分值差值的均值也均高于對(duì)照組，差異有顯著性意義。
各項(xiàng)指標(biāo)改善情況的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，兩組治療后咳嗽、咯痰等癥狀、異常舌脈及肺部體征均較治療前有明顯改善，其中試驗(yàn)組咳嗽、異常舌苔的改善作用優(yōu)于對(duì)照組，差異有顯著性意義。治療前，兩組患者的血白細(xì)胞計(jì)數(shù)和X線胸片異常情況比較，均無(wú)顯著性差異，具有可比性。治療后，兩組血白細(xì)胞計(jì)數(shù)均有明顯改善，X線胸片異常也有一定程度的改善，但兩組組間比較，差異均無(wú)顯著性意義。說(shuō)明兩藥對(duì)血白細(xì)胞計(jì)數(shù)增高和X線胸片肺紋理增粗的改善作用相近。兩組治療前鼻咽部病毒檢測(cè)及咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)的陽(yáng)性率比較，差異無(wú)顯著性意義；兩組治療后的陰轉(zhuǎn)率比較，差異也無(wú)顯著性意義，但兩組的陰轉(zhuǎn)率均在80％以上，說(shuō)明兩藥均有較好的抗病毒及抗菌作用。
本組213例患兒，除1例(試驗(yàn)組病例)在治療過(guò)程中出現(xiàn)口唇發(fā)干(安全性評(píng)價(jià)為“二級(jí)”)外，均未發(fā)現(xiàn)有不良反應(yīng)，安全性評(píng)價(jià)均為“一級(jí)”。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)包括血尿便常規(guī)、肝腎功能、心電圖治療前后變化分析，也未發(fā)現(xiàn)與試驗(yàn)藥物有關(guān)的異常改變。說(shuō)明本發(fā)明顆粒劑I-A按試驗(yàn)劑量臨床應(yīng)用，比較安全。
結(jié)論本發(fā)明顆粒劑I-A按試驗(yàn)劑量、5天療程應(yīng)用，對(duì)小兒支氣管炎痰熱咳嗽證具有較好療效，其在總療效、咳嗽主癥改善以及中醫(yī)證候總計(jì)分減少等方面，均明顯高于對(duì)照藥(急支顆粒)，充分證實(shí)其清肺化痰、止咳平喘的功效，另外，通過(guò)對(duì)患兒服藥前后鼻因部病毒檢測(cè)和咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果也從臨床上證實(shí)了本品所具有的抗病毒及抗菌作用(III期陽(yáng)性轉(zhuǎn)陰率為100％)，且未見(jiàn)明顯毒副作用。
權(quán)利要求
1.一種治療呼吸系統(tǒng)疾患的中藥組合物，其原料藥組成為，以制成1000g成品計(jì)麻 黃(蜜炙)75-175g石 膏 750-1750g苦杏仁(炒) 75-175g桑白皮(蜜炙)75-175g葶藶子(炒) 30-120g當(dāng) 歸 125-250g丹 參 125-250g 地 龍 75-175g僵 蠶(炒) 75-175g甘 草 75-175g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中原料藥組成為，以制成1000g成品計(jì)麻 黃(蜜炙)100-150g 石 膏 1000-1500g苦杏仁(炒) 100-150g 桑白皮(蜜炙)100-150g葶藶子(炒) 50-100g當(dāng) 歸 150-226g丹 參 150-226g 地 龍 100-150g僵 蠶(炒) 100-150g 甘 草 100-150g。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中原料藥組成為，以制成1000g成品計(jì)麻 黃(蜜炙)112-137g 石 膏 112-1370g苦杏仁(炒) 112-137g 桑白皮(蜜炙)112-137g葶藶子(炒) 68-82g 當(dāng) 歸 170-206g丹 參 170-26g地 龍 112-137g僵 蠶(炒) 112-137g 甘 草 112-137g。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中原料藥組成為，以制成1000g成品計(jì)麻 黃(蜜炙)125g 石 膏 1250g苦杏仁(炒)125g桑白皮(蜜炙)125g葶藶子(炒)75g 當(dāng) 歸 188g丹 參188g地 龍 125g僵 蠶(炒)125g甘 草 125g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一權(quán)利要求所述的組合物，可制備的劑型選自顆粒劑、膠囊劑、口服液、膏劑或片劑。
6.權(quán)利要求1至4任一權(quán)利要求所述組合物的制備方法，其包括如下步驟(1)稱取所述的十味原料藥，加水20～3倍，煎煮1～4次，每次0.5～4小時(shí)；(2)合并煎液，濾過(guò)，濾液靜置；(3)取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.0-1.3(50～80℃)的清膏。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其包括如下步驟(1)稱取所述的十味原料藥，加水20～4倍，煎煮2～4次，每次0.5～4小時(shí)；(2)合并煎液，濾過(guò)，濾液靜置；(3)取上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.0-1.3(50～80℃)的清膏。
8.權(quán)利要求1至4任一權(quán)利要求所述的組合物的應(yīng)用，包括抗病毒、抗菌、解熱、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘及抗炎。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其為在制備治療急性支氣管炎或肺炎恢復(fù)期的痰熱咳嗽證藥物中的應(yīng)用。
10.檢測(cè)權(quán)利要求1至4任一權(quán)利要求所述組合物的活性物含量的方法，其包括對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，加水適量制得對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本發(fā)明組合物適量，加氯化鈉和40％氫氧化鈉溶液后進(jìn)行水蒸氣蒸餾，餾出液置含稀鹽酸的量瓶中，用40％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.0-7.0制成供試品溶液；測(cè)定法 取上述兩種溶液分別加入含溴麝香草酚藍(lán)的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液，再各加入氯仿進(jìn)行萃取，分取氯仿層，用分光光度法在414nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算即得；以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品，以分光光度法測(cè)定供試品中的麻黃含量每1g所述組合物含麻黃以鹽酸麻黃堿(C10H15NO·HCL)計(jì)，不得少于0.30mg。
11.檢測(cè)權(quán)利要求1至4任一權(quán)利要求所述組合物的活性物含量的方法，其包括對(duì)照溶液的制備將鹽酸麻黃堿用水稀釋后，加入高碘酸與氫氧化鈉溶液適量，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7，加甲醇適量制得對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本品適量加氫氧化鈉溶液適量搖勻后再加氯化鈉適量超聲后進(jìn)行蒸餾提取至預(yù)先盛有鹽酸溶液的量瓶中，取適量稀釋后再加入高碘酸與氫氧化鈉溶液適量，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7，加甲醇適量溶解過(guò)濾后取續(xù)濾液即得；測(cè)定法取上述兩種溶液分別注入以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜儀中，以甲醇-水(1∶1)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿計(jì)算應(yīng)不低于3000；以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品，以液相色譜法測(cè)定供試品中的麻黃含量每1g所述組合物含麻黃以鹽酸麻黃堿(C10H15NO·HCl)計(jì)，不得少于0.30mg。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療呼吸系統(tǒng)疾患的中藥組合物，其原料藥組成為麻黃(蜜炙)、石膏、苦杏仁(炒)、桑白皮(蜜炙)、葶藶子(炒)、當(dāng)歸、丹參、地龍、僵蠶(炒)、甘草。還公開(kāi)了該中藥制劑的抗病毒、抗菌、解熱、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘及抗炎應(yīng)用及其制備方法和活性成分的檢測(cè)方法。該組合物是以清肺化痰、止咳平喘，佐以活血化瘀為主要功效的中藥，主治急性支氣管炎或肺炎恢復(fù)期的痰熱咳嗽證，并且特別適用于小兒。
文檔編號(hào)A61K35/64GK1742845SQ200510105489
公開(kāi)日2006年3月8日 申請(qǐng)日期2005年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月28日
發(fā)明者張成海, 李時(shí)海, 楊向武, 畢文生, 陳心, 董述祥 申請(qǐng)人:大連美羅中藥廠有限公司