專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療子宮內(nèi)膜異位的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物及該組合物的制備方法和質(zhì)量控制方法，特別涉及一種用于治療子宮內(nèi)膜異位的中藥組合物，同時(shí)涉及該組合物的制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
子宮內(nèi)膜異位癥是婦科常見(jiàn)病、多發(fā)病之一，近年來(lái)發(fā)病率明顯增加，育齡婦女中發(fā)病率為10-20％，約40％的子宮內(nèi)膜異位癥合并不孕。子宮內(nèi)膜異位癥嚴(yán)重影響著婦女的身心健康。雖然子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)現(xiàn)已有一百多年的歷史，但其病因病機(jī)還不十分清楚，治療也無(wú)理想的方法。近幾十年來(lái)，西醫(yī)一直在探索應(yīng)用性激素類(lèi)藥物治療子宮內(nèi)膜異位癥。目前有假孕療法、假絕經(jīng)療法、促性腺激素釋放激動(dòng)劑療法及在此基礎(chǔ)上予以反向添加治療的方法。這些治療方法對(duì)近期緩解癥狀，有一定療效。但復(fù)發(fā)率高，副作用大，且價(jià)格昂貴不易推廣。手術(shù)治療中的保守手術(shù)，術(shù)后易復(fù)發(fā)，根治手術(shù)對(duì)年輕婦女不合適，絕經(jīng)期綜合癥發(fā)生率較高。由于上述種種原因，治療上比較棘手。中醫(yī)藥治療子宮內(nèi)膜異位癥優(yōu)于西藥，療效確切，未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用，且中藥不抑制排卵，對(duì)妊娠有利。而且安全、服用方便，價(jià)格便宜，質(zhì)量穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于公開(kāi)一種治療子宮內(nèi)膜異位的中藥組合物；本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開(kāi)一種治療子宮內(nèi)膜異位的中藥組合物的制備方法；本發(fā)明的第三個(gè)目的在于公開(kāi)該治療子宮內(nèi)膜異位的中藥組合物的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比如下赤芍7-8重量份當(dāng)歸5-7重量份蒲黃4-6重量份川芎4-6重量份桂枝2-4重量份胡索7-8重量份柴胡4-6重量份生黃芪9-11重量份補(bǔ)骨脂4-6重量份細(xì)辛1-2重量份制沒(méi)藥2-4重量份上述原料藥的優(yōu)選配比為赤芍7.5重量份當(dāng)歸6重量份生蒲黃5重量份川芎5重量份 桂枝3重量份 延胡索7.5重量份柴胡5重量份 生黃芪10重量份 補(bǔ)骨脂5重量份細(xì)辛1.5重量份制沒(méi)藥3重量份上述原料藥的優(yōu)選配比還可以為赤芍7重量份 當(dāng)歸7重量份 生蒲黃4重量份川芎6重量份 桂枝2重量份 延胡索8重量份柴胡4重量份 生黃芪11重量份 補(bǔ)骨脂4重量份細(xì)辛2重量份 制沒(méi)藥2重量份上述原料藥的優(yōu)選配比還可以為赤芍8重量份 當(dāng)歸5重量份 生蒲黃6重量份川芎4重量份 桂枝4重量份 延胡索7重量份柴胡6重量份 生黃芪9重量份補(bǔ)骨脂6重量份細(xì)辛1重量份 制沒(méi)藥4重量份按藥劑學(xué)方法，可以將上述原料藥制備成各種臨床可接受的劑型，包括但不限于如下劑型當(dāng)中的一種如片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、軟膠囊劑及栓劑等固體制劑，混懸劑、口服液、灌腸劑等液體制劑，優(yōu)選膠囊劑型、片劑或顆粒劑型。
本藥物組合物的制備方法按配比劑量取藥物組合物原料藥十一味，當(dāng)歸、川芎、補(bǔ)骨脂、延胡索用5-8倍量50-70％的乙醇加熱回流，提取2-4次，每次1.5-3小時(shí)，合并乙醇提取液，藥液備用；桂枝、細(xì)辛、沒(méi)藥加3-7倍量水，浸泡0.5-3小時(shí)，水蒸汽蒸餾提取2-8小時(shí)，收集揮發(fā)油，水溶液和藥渣備用；取揮發(fā)油用4-8倍量的倍他環(huán)糊精及40-80倍量的水進(jìn)行包結(jié)，30-60℃攪拌0.5-1.5小時(shí)，冷藏10-18小時(shí)，濾過(guò)，包結(jié)物30-55℃低溫干燥，粉碎成細(xì)粉，備用；柴胡、赤芍、蒲黃及黃芪加7-10倍量水，提取2-4次，每次0.5-1.5小時(shí)，將末次提取液與上述桂枝等藥渣合煎，合并煎液，濾過(guò)，濾液與上述水溶液合并，合并液濃縮至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.10-1.15，加乙醇使含醇量達(dá)60-80％，冷藏過(guò)夜，濾過(guò)，濾液與上述當(dāng)歸等藥液分別回收乙醇至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.15-1.20，干燥，與上述揮發(fā)油β環(huán)糊精包結(jié)物細(xì)粉及糊精按重量比1∶0.5-1.5混勻，制成顆粒，干燥，制成膠囊劑、片劑或顆粒劑。
本組合物制成藥劑的質(zhì)量控制方法包括鑒別和/或含量測(cè)定。
質(zhì)量控制方法的鑒別方法包括如下方法中的一種和/或幾種A.取相當(dāng)日服用劑量1/6倍的本藥物組合物制劑，研細(xì)，加甲醇15-25ml，超聲處理10-30分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.6mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5-15μl、對(duì)照品溶液5-15μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以35-45∶4-6∶8-12∶0.15-0.25的氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以3-6％香草醛的45-55％磷酸乙醇溶液，在100-110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B.取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2-0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述鑒別A項(xiàng)下的供試品溶液5-15μl、對(duì)照品溶液4-10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以7-9∶1.5-2.5正己烷—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5-15％氫氧化鈉甲醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；C.取相當(dāng)日服用劑量5/24倍的本藥物組合物制劑，研細(xì)，加入乙醇10-20ml，超聲處理0.5-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取當(dāng)歸對(duì)照藥材、川芎對(duì)照藥材各1.5-2.5g，各加入乙醇8-12ml，分別超聲處理0.5-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各5-15μ1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以8-10∶0.8-1.2環(huán)己烷—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；D.取相當(dāng)日服用劑量1/2倍的本藥物組合物制劑，研細(xì)，加入氨試液1.5-2.5ml和氯仿25-35ml，超聲處理30-50分鐘，濾過(guò)，濾液回收氯仿至干，殘?jiān)尤胍掖?-6ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.15-0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10-15μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以4-6∶3-5∶0.3-0.5正己烷—醋酸乙酯—氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；E.取相當(dāng)日服用劑量的本藥物組合物制劑，研細(xì)，置200-300ml的圓底燒瓶中，加入水40-60ml，連接揮發(fā)油提取器，自測(cè)定器上端加水使充滿刻度，60～90℃加入石油醚1.0-2.0ml，然后連接回流冷凝管；將燒瓶?jī)?nèi)容物加熱至沸，并保持1.5-2.5小時(shí)，停止加熱，取石油醚層作為供試品溶液；另取細(xì)辛對(duì)照藥材8-12g提取揮發(fā)油，加氯仿25-35ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10-20μl、對(duì)照品溶液2-5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以92-98∶4-6苯—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以0.8-0.12％香草醛硫酸溶液，在100-110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；F.取相當(dāng)日服用劑量1/4倍的本藥物組合物制劑，研細(xì)，加入硅藻土1.5-2.5g，混勻，加入2％氫氧化鈉的甲醇溶液15-25ml，加熱回流提取0.5-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，加水25-35ml使溶解，每次用35-45ml水飽和的正丁醇提取，提取2-4次，合并正丁醇液，以水洗滌1-3次，棄去水液，再以0.8-1.2％磷酸二氫鉀溶液洗滌1-2次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-2.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.2-0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10-15μl、對(duì)照品溶液5-7μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以18-22∶6-8∶1.5-2.5氯仿—甲醇—水的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％的硫酸乙醇溶液，在100-110℃烘烤至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
本藥物組合物含量測(cè)定方法包括如下方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；65-75∶425-435乙腈—水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220-240nm；理論塔板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2-1.0mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，研細(xì)，取1.0-1.5g，置具塞錐形瓶中，稱(chēng)定，加入甲醇15-25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理20-30分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.40-0.50um微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別吸取上述對(duì)照品溶液5-15μl、供試品溶液14-20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本藥物組合物按日服用劑量含赤芍以芍藥苷C23H28O11計(jì)，不得少于69.0mg。
其中在質(zhì)量控制方法中所述的本發(fā)明藥物組合物制劑的日服用劑量相當(dāng)于日服用生藥量約61.5g。
在本藥物組合物的制備工藝研究實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)飲片浸泡時(shí)間、加水量對(duì)細(xì)辛揮發(fā)油優(yōu)選實(shí)驗(yàn)，保證提取揮發(fā)油含量高；以補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素的含量作為考察指標(biāo)，從正交試驗(yàn)結(jié)果表中選擇醇提條件的優(yōu)選實(shí)驗(yàn)；以芍藥苷為考察指標(biāo)，選擇水煎提取的最佳工藝為；在乙醇不同醇濃度條件下測(cè)定各浸膏粉中的芍藥苷含量，選擇分離、純化及醇沉最佳實(shí)驗(yàn)；通過(guò)不同的干浸膏粉與糊精的比例、不同濃度乙醇溶液作潤(rùn)濕劑進(jìn)行制粒，選擇優(yōu)選比例及濃度。
本藥物組合物制劑含量測(cè)定中超聲提取比加熱回流節(jié)省時(shí)間和能源，操作簡(jiǎn)單。含量測(cè)定的空白試驗(yàn)顯示空白溶液在與芍藥苷對(duì)照品相應(yīng)的保留時(shí)間處未顯色譜峰，分離無(wú)干擾。精密度試驗(yàn)計(jì)算芍藥苷的RSD為0.9948％，說(shuō)明儀器的精密度良好；穩(wěn)定性考察得芍藥苷在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。重復(fù)性試驗(yàn)計(jì)算RSD為1.5880％，說(shuō)明含量測(cè)定方法穩(wěn)定，重現(xiàn)性較好；回收率試驗(yàn)計(jì)算平均回收率為99.05％，RSD為0.9356％。說(shuō)明含量測(cè)定方法可行。線性關(guān)系的考察說(shuō)明芍藥苷的峰面積和進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。
通過(guò)對(duì)兔子子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型的影響試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)卵泡刺激素(FSH)含量顯著降低、黃體生成素(LH)有降低、催乳素(PRL)、雌二醇(E2)含量顯著降低、異位內(nèi)膜體積明顯縮小及異位內(nèi)膜重量明顯減輕、子宮內(nèi)膜異位病變程度輕于模型組、改善動(dòng)物血液流變學(xué)的趨勢(shì)；通過(guò)對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型的影響試驗(yàn)，同樣發(fā)現(xiàn)FSH含量明顯降低、LH、PRL、E2含量均有下降趨勢(shì)、異位內(nèi)膜體積均明顯縮小及異位內(nèi)膜重量明顯減輕、子宮異位內(nèi)膜病變程度輕于模型組；通過(guò)對(duì)大鼠在體子宮收縮的影響試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本藥物組合物顆粒劑對(duì)催產(chǎn)素引起子宮強(qiáng)烈收縮有抑制作用、降低子宮活動(dòng)幅度及抑制子宮活動(dòng)力的作用；通過(guò)微循環(huán)作用試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本藥物組合物顆粒劑改善小鼠腸系膜微循環(huán)的作用、對(duì)局部血液循環(huán)障礙有保護(hù)作用；通過(guò)抗炎作用試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本藥物組合物顆粒劑對(duì)大鼠肉芽腫炎癥模型有明顯抑制作用、明顯抑制足跖腫脹作用；通過(guò)鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本藥物組合物顆粒劑能提高痛閾值，有明顯的鎮(zhèn)痛作用；通過(guò)對(duì)免疫功能低下小鼠吞嗜功能的影響試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本藥物組合物顆粒劑對(duì)免疫功能低下小鼠單核細(xì)胞吞嗜功能有明顯的增強(qiáng)作用；通過(guò)對(duì)免疫功能低下小鼠遲發(fā)性變態(tài)反映的影響試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本藥物組合物顆粒劑對(duì)免疫功能低下小鼠的細(xì)胞免疫反應(yīng)有增強(qiáng)作用。
下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)例1粉碎度及提取時(shí)間的確定實(shí)驗(yàn)根據(jù)藥物組合物配比劑量稱(chēng)取桂枝60g、細(xì)辛30g、制沒(méi)藥60g各三份，三份的規(guī)格分別為飲片、10目、20目。分別加入6倍量水，進(jìn)行水蒸汽蒸餾。結(jié)果見(jiàn)表1表1 細(xì)辛揮發(fā)油提取時(shí)間的考察

由以上結(jié)果可以看出，10目提油量最少，20目藥材粉在生產(chǎn)中容易造成糊鍋，飲片的提油率和20目相比，已達(dá)到85.7％，且少一道工序，節(jié)省能源，故選擇以飲片直接提油。提取8小時(shí)已經(jīng)基本提盡，加熱蒸餾1小時(shí)出油最快，達(dá)到總量的30％，8小時(shí)能基本提盡，所以揮發(fā)油的最佳提取時(shí)間選為8小時(shí)。
實(shí)驗(yàn)例2細(xì)辛揮發(fā)油包結(jié)工藝優(yōu)選實(shí)驗(yàn)以揮發(fā)油和β-環(huán)糊精的比例(A)、加水量(B)、包合溫度(C)、攪拌時(shí)間(D)為考察因素，選擇不同水平，按照L9(34)正交表進(jìn)行包結(jié)，再分別用微量揮發(fā)油提取器提取，計(jì)算揮發(fā)油利用率，進(jìn)行方差分析，方差分析采用正交多項(xiàng)式回歸法。
表2 揮發(fā)油包結(jié)因素水平表

表3 揮發(fā)油包結(jié)工藝正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 揮發(fā)油包結(jié)工藝方差分析結(jié)果

F1-0.05(1，3)＝10.13 F1-0.01(1，3)＝34.12注“△”項(xiàng)合并作為試驗(yàn)誤差平方和?！?*”表示有非常顯著性差異，“*”表示有顯著性差異。由表4中可知，A因素、B因素、C因素有非常顯著性影響，從正交試驗(yàn)結(jié)果表中選擇A2B1C1為最佳條件，D因素為不顯著性因素，選擇攪拌時(shí)間為1小時(shí)。由上述試驗(yàn)可知揮發(fā)油包結(jié)的最佳條件為即將6g β-CD加入60ml水中充分溶解，在40℃條件下，加入1ml揮發(fā)油進(jìn)行包結(jié)，攪拌時(shí)間為1小時(shí)。
實(shí)驗(yàn)例3藥物組合物制劑的鑒別試驗(yàn)赤芍的薄層特征鑒別，芍藥苷購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，編號(hào)為0736-9811。曾采用赤芍的薄層展開(kāi)系統(tǒng)氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸(40∶5∶10∶0.2)和醋酸乙酯—甲醇—水(8∶3∶2.5)的上層溶液進(jìn)行展開(kāi)，發(fā)現(xiàn)后者展開(kāi)效果不理想，而前者得到的芍藥苷斑點(diǎn)清晰集中，同法制備的陰性對(duì)照品無(wú)干擾。顯色劑原來(lái)采用5％香草醛硫酸溶液，但該顯色劑加熱時(shí)間稍長(zhǎng)斑點(diǎn)即變黑，顯色時(shí)間不好掌握，后改為5％香草醛的50％磷酸乙醇溶液，顯色劑靈敏、專(zhuān)屬性強(qiáng)，長(zhǎng)時(shí)間加熱斑點(diǎn)不發(fā)黑。按照此方法經(jīng)樣品及陰性對(duì)照試驗(yàn)，確認(rèn)技術(shù)方案中方法可行。
補(bǔ)骨脂的薄層鑒別補(bǔ)骨脂素購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，編號(hào)為0739-9706。異補(bǔ)骨脂素購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，編號(hào)為738-8802。在試驗(yàn)的過(guò)程中，由于實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有氫氧化鉀，用氫氧化鈉代替，發(fā)現(xiàn)顯色效果亦不錯(cuò)，故顯色劑使用10％氫氧化鈉甲醇溶液。同法制備的陰性對(duì)照品無(wú)干擾。按照此方法經(jīng)樣品及陰性對(duì)照試驗(yàn)，確認(rèn)技術(shù)方案中方法可行。
當(dāng)歸、川芎的薄層鑒別當(dāng)歸對(duì)照藥材購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，編號(hào)為927-9303，川芎對(duì)照藥材購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，編號(hào)為918-9202。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)以乙醇提取當(dāng)歸、川芎對(duì)照藥材以及樣品時(shí)，斑點(diǎn)很明顯，比乙醚和乙酸乙酯好。同法制備的當(dāng)歸陰性、川芎陰性及當(dāng)歸川芎陰性對(duì)照品無(wú)干擾。經(jīng)樣品及陰性對(duì)照試驗(yàn)，確認(rèn)技術(shù)方案中方法可行。
延胡索的薄層鑒別延胡索乙素購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，編號(hào)為0726-9605。曾采用正己烷—氯仿—甲醇(10∶6∶1)、正丁醇—濃鹽酸—水(4∶1∶0.5)等展開(kāi)系統(tǒng)進(jìn)行展開(kāi)，發(fā)現(xiàn)展開(kāi)效果不理想，又用正己烷—醋酸乙酯—氨水(5∶4∶0.4)為展開(kāi)系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)斑點(diǎn)清晰集中。同法制備的陰性對(duì)照品無(wú)干擾。經(jīng)樣品及陰性對(duì)照試驗(yàn)，確認(rèn)技術(shù)方案中方法可行。
細(xì)辛揮發(fā)油的薄層鑒別細(xì)辛對(duì)照藥材購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，編號(hào)為121204-0101。曾經(jīng)用25ml氯仿為溶劑對(duì)成品進(jìn)行超聲處理，取濾液作為供試品溶液，但是在揮去氯仿的同時(shí)揮發(fā)油也有較大量的損失，所以改用同法制備的陰性對(duì)照品無(wú)干擾。經(jīng)樣品及陰性對(duì)照試驗(yàn)，確認(rèn)技術(shù)方案中方法可行。
黃芪甲苷的薄層鑒別黃芪甲苷購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，編號(hào)為781-200009。曾采用藥典所載黃芪的薄層鑒別方法進(jìn)行薄層層析，但薄層板上樣品色譜成帶狀，掩蓋了黃芪甲苷的斑點(diǎn)，且黃芪甲苷對(duì)照品的Rf值較小。所以用堿提法處理樣品，得到的黃芪甲苷斑點(diǎn)清晰，為橙黃色斑點(diǎn)，同法制備的陰性對(duì)照品無(wú)干擾，確認(rèn)技術(shù)方案中方法可行。
實(shí)驗(yàn)例4含量測(cè)定流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)比較了甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(藥典法)、甲醇—水—冰醋酸(30∶70∶0.5)及乙睛—水(14∶86)等，甲醇—水—冰醋酸(30∶70∶0.5)系統(tǒng)下芍藥苷峰拖尾，藥典法及乙睛—水系統(tǒng)芍藥苷峰分離尚好，但前者和后者相比，有一定的酸度，對(duì)色譜柱易造成損壞，而乙睛—水(14∶86)峰形對(duì)稱(chēng)，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間也合適，故最佳流動(dòng)相選用乙睛—水14∶86。
實(shí)驗(yàn)例5含量測(cè)定超聲處理時(shí)間的選擇實(shí)驗(yàn)稱(chēng)取樣品4份，稱(chēng)定，加入甲醇20ml，稱(chēng)定重量，分別超聲處理15分鐘、20分鐘、25分鐘、30分鐘。
表5 甲醇超聲時(shí)間的選擇

以上結(jié)果表明，超聲處理25分鐘，含量相對(duì)較高，故選擇甲醇超聲處理25分鐘。
樣品含量測(cè)定按照技術(shù)方案含量測(cè)定的方法，測(cè)定三批成品，稱(chēng)取3份樣品，每袋重8g，結(jié)果見(jiàn)表6。
表6 樣品測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例6本藥物組合物顆粒劑對(duì)兔子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型內(nèi)分泌水平的影響取健康新西蘭大白兔用3％戊巴比妥鈉靜脈麻醉，背位固定，腹部去毛，以2％碘酒及75％酒精常規(guī)消毒腹部皮膚。打開(kāi)腹腔，找出子宮，切下左側(cè)子宮一段，行端斷端吻合術(shù)。將切下的子宮用卡尺測(cè)量，切成0.5cm×0.5cm，分別種植于左、右卵巢及左、右子宮角附近，縫合線為3號(hào)錦綸單絲線，假手術(shù)組打開(kāi)腹腔不種植子宮內(nèi)膜，然后縫合腹壁。1個(gè)月后隨機(jī)取出12只動(dòng)物處死，打開(kāi)腹腔，找出子宮，剝離種植內(nèi)膜，以10％甲醛溶液固定，石蠟包埋，HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察，病理組織學(xué)檢查證實(shí)。
(1)對(duì)卵泡刺激素(FSH)含量的影響經(jīng)子宮內(nèi)膜移植建立模型1個(gè)月后，各組FSH明顯升高，與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P＜0.001)；手術(shù)4個(gè)月后，模型組FSH升高更為顯著，與術(shù)前、術(shù)后1個(gè)月比較有顯著性差異。本藥物組合物顆粒劑三個(gè)劑量組及丹那唑均有明顯抑制FSH升高的作用，給藥3個(gè)月后，三個(gè)劑量組的FSH含量與模型組比較差異顯著(P＜0.05～0.001(2)對(duì)黃體生成素(LH)含量的影響手術(shù)造模1個(gè)月后LH含量明顯升高，模型組與手術(shù)前比較有顯著性差異(P＜0.001)。4個(gè)月后LH仍維持較高水平；給藥3個(gè)月后，本藥物組合物顆粒劑三個(gè)劑量組有抑制LH值升高的作用，大劑量組抑制LH升高的作用較為明顯，與手術(shù)前比較無(wú)明顯差異。與模型組比較亦無(wú)明顯差異(3)對(duì)催乳素(PRL)含量的影響手術(shù)后1個(gè)月PRL含量明顯升高，各組與造模前比較均有顯著性差異(P＜0.01)。手術(shù)4個(gè)月后模型組PRL含量顯著升高，與造模前比較(P＜0.001)。給藥3個(gè)月后，本藥物組合物顆粒劑中、大劑量組及丹那唑組PRL含量明顯降低，與模型組比較有顯著性差異均(P＜0.001)。造模1個(gè)月自身比較，本藥物組合物顆粒劑中、大劑量組及丹那唑組PRL含量亦明顯降低均(P＜0.001)。
(4)對(duì)雌二醇(E2)含量的影響手術(shù)造模后E2值升高，各組與造模前比較均有顯著性差異(P＜0.001)。造模4個(gè)月后模型組E2含量顯著升高，與造模前比較有顯著性差異(P＜0.001)。給藥3個(gè)月后，與模型組比較，本藥物組合物顆粒劑中、大劑量組及丹那唑組E2含量明顯降低(P＜0.01～＜0.001)。與造模1個(gè)月后比較，本藥物組合物顆粒劑中、大劑量組及丹那唑組E2含量亦見(jiàn)明顯降低(P＜0.05～0.0001)。
表7本藥物組合物顆粒劑對(duì)兔子宮內(nèi)膜異位癥模型內(nèi)分泌水平的影響(X±SD)

注與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。與造模前比較#P＜0.05；##P＜0.01；###P＜0.001。
與造模后1個(gè)月比較△P＜0.05；△△P＜0.01；△△△P＜0.001。
實(shí)驗(yàn)例7本藥物組合物顆粒劑對(duì)兔子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型血液流變學(xué)的影響實(shí)驗(yàn)本藥物組合物顆粒劑大劑量組高切變率下的全血粘度明顯低于模型組(P＜0.05)。本藥物組合物顆粒劑三個(gè)劑量組中切1中切2低切變率下的全血粘度有降低趨勢(shì)。
表8.本藥物組合物顆粒劑對(duì)兔血液流變學(xué)的影響(n＝10 X±SD)

注與模型組比較*P＜0.05。
實(shí)驗(yàn)例8本藥物組合物顆粒劑對(duì)兔子宮內(nèi)膜異位體積及重量的影響本藥物組合物顆粒劑中、大劑量組及丹那唑組異位內(nèi)膜體積明顯縮小，重量明顯減輕，與模型組比較分別(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001)。
表9.本藥物組合物顆粒劑對(duì)兔子宮異位內(nèi)膜體積及重量的影響(X±SD)

注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
實(shí)驗(yàn)例9本藥物組合物顆粒劑對(duì)兔子宮內(nèi)膜異位病理組織學(xué)檢查實(shí)驗(yàn)假手術(shù)組子宮、卵巢及輸卵管周?chē)匆?jiàn)異位的內(nèi)膜。模型組纖維脂肪組織中可見(jiàn)部分纖維、平滑肌和內(nèi)膜成分。內(nèi)膜上皮可見(jiàn)形態(tài)不一，有扁平、立方、低柱狀或高柱狀。內(nèi)膜層腺體大小不等，部分密集，部分稀疏，有些內(nèi)膜層由于增生過(guò)度突入腔內(nèi)，呈片狀或島嶼狀，個(gè)別腺體擴(kuò)張呈束狀。
丹那唑組大部分異位腺體可見(jiàn)，局部密集，異位的內(nèi)膜上皮扁平、破碎、脫落，個(gè)別異位腺體固縮。
本藥物組合物顆粒劑小劑量組異位內(nèi)膜區(qū)域內(nèi)，內(nèi)膜層較薄，部分區(qū)域上皮可見(jiàn)鋸齒狀，上皮有破碎、脫落，內(nèi)膜層腺體大部分不明顯，個(gè)別可見(jiàn)固縮、破碎。
本藥物組合物顆粒劑中劑量組異位內(nèi)膜可見(jiàn)，但內(nèi)膜層較薄，腺上皮部分長(zhǎng)勢(shì)尚可，呈巨齒狀結(jié)構(gòu)，部分上皮脫落，內(nèi)膜層腺體不明顯。本藥物組合物顆粒劑大劑量組鏡下同中、小劑量組，內(nèi)膜層變薄，上皮細(xì)胞立方或扁平，部分有脫落，纖維組織內(nèi)可見(jiàn)單個(gè)腺體。
實(shí)驗(yàn)例10本藥物組合物顆粒劑對(duì)大鼠在體子宮收縮的影響實(shí)驗(yàn)取健康大鼠70只，隨機(jī)分組，實(shí)驗(yàn)前24-48小時(shí)取健康未孕雌性大鼠皮下注射己烯雌酚(2mg/kg體重)，人工促使動(dòng)物處在動(dòng)情前期或動(dòng)情期，以提高子宮對(duì)藥物的敏感性。實(shí)驗(yàn)時(shí)用戊巴比妥鈉腹腔麻醉(50mg/kg)，背位固定，打開(kāi)腹腔找出子宮，用線將一側(cè)子宮提起與壓力換能器連接，局部保溫。記錄一段正常曲線后(10分鐘)，從股靜脈注入催產(chǎn)素(3u/只)，同時(shí)由十二指腸給予受試藥物，模型組(既催產(chǎn)素組給生理鹽水10ml/kg)，觀察給藥前后子宮收縮的頻率、幅度和子宮活動(dòng)力(頻率×幅度)。
表10本藥物組合物顆粒劑對(duì)正常子宮活動(dòng)力的影響(n＝10，X±SD)

注與對(duì)照組比較△△P＜0.01。與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
自身比較#P＜0.05；，##P＜0.01，###＜0.001。
本藥物組合物顆粒劑小、中、大三個(gè)劑量組、消炎痛組及丹那唑組給藥后30、40、50、60分鐘時(shí)均有明顯抑制催產(chǎn)素引起子宮活動(dòng)力的作用，與模型組(催產(chǎn)素組)比較(P＜0.05～P＜0.001)。
實(shí)驗(yàn)例11本藥物組合物顆粒劑對(duì)小鼠腸系膜微循環(huán)的影響實(shí)驗(yàn)健康小鼠60只隨機(jī)分組，每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7天。鹽酸消旋山莨菪堿注射液組(65-42組)肌肉注射給藥1次，給藥后15分鐘，其它各給藥組末次給藥后30分鐘用戊巴比妥鈉腹腔麻醉(50mg/kg)，打開(kāi)腹腔，拉出一段腸袢，平鋪于平皿上，腸系膜上滴加溫?zé)嵘睇}水，以防干燥，局部保溫，尾靜脈注射15％高分子右旋糖苷(10ml/kg)，注射后10、20、30分鐘時(shí)在體表微循環(huán)觀測(cè)儀，觀察給藥后不同時(shí)間的血液流態(tài)，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用參比差值法進(jìn)行組間比較。
模型組尾靜脈給于注射高分子右旋糖苷后血流流態(tài)由+級(jí)變化至+++級(jí)，流速由快逐漸減慢，造成血流障礙，直至血流停止。本藥物組合物顆粒劑小劑量組尾靜脈注射高分子右旋糖苷后10min時(shí)與模型組比較有明顯差異(u＜0.05)，中、大劑量組及丹那唑組尾靜脈注射高分子右旋糖苷后10、20、30min時(shí)，小鼠腸系膜微循環(huán)的流態(tài)明顯改善，血流流態(tài)多為++級(jí)以下，與模型組比較有顯著性差異分別(u＜0.05～u＜0.01)。
表11.對(duì)小鼠腸系膜微循環(huán)障礙血液流態(tài)的影響 (n＝10)

注與模型組比較*u＜0.05.**u＜0.01結(jié)果表明，本藥物組合物顆粒劑中、大劑量組對(duì)局部血液循環(huán)障礙有一定保護(hù)作用。
實(shí)驗(yàn)例12本藥物組合物顆粒劑抗炎作用——對(duì)大鼠肉芽腫的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為5組，實(shí)驗(yàn)時(shí)大鼠以1％戊巴比妥鈉腹腔麻醉，常規(guī)消毒腋窩皮膚，打開(kāi)切口，將稱(chēng)重棉球(每個(gè)棉球重30mg)經(jīng)高壓滅菌后，每棉球加胺芐青霉素1mg/0.1ml，50℃烘箱烘干后分別植入左、右側(cè)腋窩部皮下。手術(shù)當(dāng)天開(kāi)始灌胃給藥，每日給藥1次，連續(xù)7天，7天后頸椎脫臼處死，取出棉球用電子天平稱(chēng)濕重，然后在60度烘箱放置12小時(shí)后再稱(chēng)干重。計(jì)算比較致炎后各組肉芽腫的平均濕重及干重(均減去原棉球重量)，用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。
本藥物組合物顆粒劑中、大劑量組及阿斯匹林組肉芽腫棉球的干重及濕重均明顯低于模型組(P＜0.05～0.01)，本藥物組合物顆粒劑有明顯抑制棉球肉芽腫的作用。小劑量組肉芽腫棉球的干重、濕重亦比模型組輕，但與模型組比較無(wú)明顯差異。
表12.本藥物組合物顆粒劑對(duì)棉球所致大鼠肉芽腫的影響(X±SD)

注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
實(shí)驗(yàn)例13本藥物組合物顆粒劑鎮(zhèn)痛作用——對(duì)醋酸誘發(fā)疼痛的影響試驗(yàn)小鼠分為5組，每組10只，各組動(dòng)物每日灌胃給藥1次，連續(xù)7天，度冷丁組灌胃給藥1次，模型組給同體積生理鹽水，各組均于末次給藥后30分鐘腹腔注射0.6％醋酸(0.2ml/只)，觀察20分鐘內(nèi)各組動(dòng)物由醋酸誘發(fā)的扭體次數(shù)，進(jìn)行組間比較(t檢驗(yàn))。
腹腔注射醋酸后可引起小鼠較持久的疼痛刺激，小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)。本藥物組合物顆粒劑中、大劑量均有不同程度減少疼痛的作用，動(dòng)物扭體次數(shù)明顯少于模型組(P＜0.05～0.01)。
表13對(duì)小鼠疼痛(扭體)作用的影響(X±SD)

注與對(duì)照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
實(shí)驗(yàn)例14本藥物組合物顆粒劑對(duì)免疫功能低下小鼠血清凝集素的影響試驗(yàn)取小鼠66只，隨機(jī)分為6組，每組11只，每日給藥1次，連續(xù)給藥7天，給藥48小時(shí)后即給藥第3天，每只小鼠腹腔注射5％羊紅細(xì)胞(SRBC)0.25ml進(jìn)行免疫，同時(shí)再皮下注射環(huán)磷酰胺100mg/kg 1次(空白對(duì)照組除外)。免疫后的第6天由眼球后靜脈叢取血，離心，分離血清，以微量凝集法測(cè)定血清中抗SRBC抗體滴度。
環(huán)磷酰胺組小鼠血清中抗體積數(shù)明顯降低，與空白對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.01)；本藥物組合物顆粒劑中、大劑量組均顯著地提高了環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠血清中抗羊紅細(xì)胞抗體的水平，與環(huán)磷酰胺組比較差異非常顯著(P＜0.01～0.001)；陽(yáng)性對(duì)照藥左旋咪唑亦顯著提高了小鼠對(duì)羊紅細(xì)胞的抗體反應(yīng)(P＜0.01)。說(shuō)明本藥物組合物顆粒劑能提高環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠的體液免疫功能。
表14本藥物組合物顆粒劑對(duì)免疫功能低下小鼠血清凝集素的作用(n＝11 X±SD)

注與環(huán)磷酰胺組比較。
實(shí)驗(yàn)例15本藥物組合物顆粒劑對(duì)免疫功能低下小鼠吞噬功能的影響實(shí)驗(yàn)取小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7天，給藥48小時(shí)后即給藥第3天給小鼠皮下注射環(huán)磷酰胺100mg/kg(空白對(duì)照組除外)，給藥的第8天以10％印度墨汁0.2ml/只給小鼠尾靜脈注射。在注射后2分和10分鐘分別眼球后靜脈叢取血0.02ml，加入到裝有4ml蒸餾水的試管中溶解紅細(xì)胞，然后在波長(zhǎng)為600nm的UV-120-02型分光光度計(jì)測(cè)定光密度(OD)值，計(jì)算在單位時(shí)間內(nèi)血清中碳粒廓清的速度K。OD2和OD10分別注射印度墨汁后2分鐘和10分鐘所取血樣的OD值，t2和t10為取血時(shí)間。試驗(yàn)結(jié)果t檢驗(yàn)。
表15本藥物組合物顆粒劑對(duì)免疫功能低下小鼠吞噬功能的影響(n＝10 X±SD)

注與環(huán)磷酰胺組比較。
如表所示，環(huán)磷酰胺組明顯地降低了正常小鼠單核細(xì)胞的吞噬功能，與空白對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05)；陽(yáng)性對(duì)照藥左旋咪唑的碳粒廓清指數(shù)顯著高于環(huán)磷酰胺組(P＜0.001)，本藥物組合物顆粒劑中、大劑量組可明顯提高環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠碳粒廓清指數(shù)，與環(huán)磷酰胺組比較差異顯著分別(P＜0.05～0.01)。該藥對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠非特異性免疫功能有增強(qiáng)作用。
實(shí)驗(yàn)例16本藥物組合物顆粒劑對(duì)免疫功能低下小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的影響實(shí)驗(yàn)取小鼠70只，隨機(jī)分為7組，每組10只，每日給藥1次，連續(xù)給藥8天，于給藥第3天除空白對(duì)照組動(dòng)物外，各組小鼠用1％DNFB丙酮橄欖油溶液50μl均勻涂抹于腹部脫毛處1次致敏。同時(shí)除空白對(duì)照組和模型組動(dòng)物外，所有動(dòng)物皮下注射環(huán)磷酰胺100mg/kg 1次。于致敏后的第5天全部小鼠用同上抗原20μl均勻涂抹于每只小鼠右耳兩面進(jìn)行攻擊。攻擊后24h，將小鼠頸椎脫臼處死，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑8mm的耳片，稱(chēng)重。腫脹度結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)。
表16本藥物組合物顆粒劑對(duì)免疫功能低下小鼠FPR的作用(n＝10 X±SD)

注△與空白對(duì)照組比較；#與模型組比較；*與環(huán)磷酰胺組比較。
如表所示，模型對(duì)照組小鼠耳腫脹度明顯增大，與空白對(duì)照組比較P＜0.001，說(shuō)明遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)已形成；環(huán)磷酰胺組小鼠耳腫脹度明顯比模型組輕，與模型組比較差異顯著P＜0.001，免疫功能低下小鼠模型形成；陽(yáng)性對(duì)照藥左旋咪唑組與環(huán)磷酰胺組比較有明顯提高免疫功能P＜0.001，受試藥本藥物組合物顆粒劑小、中、大劑量組均對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠耳腫脹度有顯著的增強(qiáng)作用，與環(huán)磷酰胺組比較差異十分顯著均P＜0.001，該藥對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠的細(xì)胞免疫功能有增強(qiáng)作用。
實(shí)施例1藥物組合物顆粒劑制備赤芍313g柴胡208g蒲 黃208g黃 芪417g當(dāng)歸250g川芎208g補(bǔ)骨脂208g延胡索313g桂枝125g細(xì)辛62g 沒(méi)藥(制)125g以上十一味，當(dāng)歸、川芎、補(bǔ)骨脂、延胡索用6倍量60％的乙醇加熱回流，提取3次，每次2小時(shí)，合并乙醇提取液，藥液備用；桂枝、細(xì)辛、沒(méi)藥加6倍量水，浸泡2小時(shí)，水蒸汽蒸餾提取8小時(shí)，收集揮發(fā)油，水溶液和藥渣備用；取揮發(fā)油用6倍量的倍他環(huán)糊精及60倍量的水進(jìn)行包結(jié)，40℃攪拌1小時(shí)，冷藏12小時(shí)，濾過(guò)，包結(jié)物40℃低溫干燥，粉碎成細(xì)粉，備用；柴胡、赤芍、蒲黃及黃芪加8倍量水，提取3次，每次1小時(shí)，第三次和上述桂枝等藥渣合煎，合并煎液，濾過(guò)，濾液與上述水溶液合并，合并液濃縮至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.10-1.15，加乙醇使含醇量達(dá)70％，冷藏過(guò)夜，濾過(guò)，濾液與上述當(dāng)歸等藥液分別回收乙醇至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.15-1.20，干燥，與上述揮發(fā)油倍他環(huán)糊精包結(jié)物細(xì)粉及糊精適量(約500g)混勻，制成顆粒，干燥，制成顆粒1000g，即得。
實(shí)施例2藥物組合物膠囊劑的制備赤芍7kg當(dāng)歸7kg生蒲黃4kg川芎6kg桂枝2kg延胡索8kg柴胡4kg生黃芪11kg 補(bǔ)骨脂4kg細(xì)辛2kg沒(méi)藥(制)2kg當(dāng)歸、川芎、補(bǔ)骨脂、延胡索用5倍量70％的乙醇加熱回流，提取2次，每次3小時(shí)，合并乙醇提取液，藥液備用；桂枝、細(xì)辛、沒(méi)藥加5倍量水，浸泡3小時(shí)，水蒸汽蒸餾提取7小時(shí)，收集揮發(fā)油，水溶液和藥渣備用；取揮發(fā)油用8倍量的倍他環(huán)糊精及60倍量的水進(jìn)行包結(jié)，60℃攪拌0.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，濾過(guò)，包結(jié)物35℃低溫干燥，粉碎成細(xì)粉，備用；柴胡、赤芍、蒲黃及黃芪加9倍量水，提取2次，每次1.5小時(shí)，再將第二次提取液與上述桂枝等藥渣合煎，合并煎液，濾過(guò)，濾液與上述水溶液合并，合并液濃縮至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.10，加乙醇使含醇量達(dá)80％，冷藏過(guò)夜，濾過(guò)，濾液與上述當(dāng)歸等藥液分別回收乙醇至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.15，干燥，與上述揮發(fā)油β環(huán)糊精包結(jié)物細(xì)粉及糊精按重量比1∶0.5混勻，制成顆粒，干燥，制成膠囊劑。
實(shí)施例3藥物組合物片劑的制備赤芍8kg當(dāng)歸5kg生蒲黃6kg川芎4kg桂枝4kg延胡索7kg柴胡6kg生黃芪9kg 補(bǔ)骨脂6kg細(xì)辛1kg制沒(méi)藥4kg當(dāng)歸、川芎、補(bǔ)骨脂、延胡索用7倍量50％的乙醇加熱回流，提取2次，每次1.5小時(shí)，合并乙醇提取液，藥液備用；桂枝、細(xì)辛、沒(méi)藥加7倍量水，浸泡1.5小時(shí)，水蒸汽蒸餾提取9小時(shí)，收集揮發(fā)油，水溶液和藥渣備用；取揮發(fā)油用4倍量的倍他環(huán)糊精及80倍量的水進(jìn)行包結(jié)，40℃攪拌1.5小時(shí)，冷藏12-18小時(shí)，濾過(guò)，包結(jié)物35℃低溫干燥，粉碎成細(xì)粉，備用；柴胡、赤芍、蒲黃及黃芪加7倍量水，提取2次，每次0.5小時(shí)，再將第二次提取液與上述桂枝等藥渣合煎，合并煎液，濾過(guò)，濾液與上述水溶液合并，合并液濃縮至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.15，加乙醇使含醇量達(dá)80％，冷藏過(guò)夜，濾過(guò)，濾液與上述當(dāng)歸等藥液分別回收乙醇至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.20，干燥，與上述揮發(fā)油β環(huán)糊精包結(jié)物細(xì)粉及糊精按重量比1∶0.5混勻，制成顆粒，干燥，制成片劑。
實(shí)施例4顆粒劑的制備赤芍313g柴胡208g蒲黃208g黃芪417g當(dāng)歸250g川芎208g補(bǔ)骨脂208g 延胡索313g 桂枝125g細(xì)辛62g沒(méi)藥(制)125g共制成顆粒劑1000g，子宮內(nèi)膜異位患者服用，每次8g，每日3次。
實(shí)施例5膠囊劑的制備赤芍7kg當(dāng)歸7kg生蒲黃4kg川芎6kg桂枝2kg延胡索8kg 柴胡4kg生黃芪11kg 補(bǔ)骨脂4kg 細(xì)辛2kg制沒(méi)藥2kg共制成膠囊劑5750g，子宮內(nèi)膜異位患者服用，每次2g，每日3次。
實(shí)施例6片劑的制備赤芍8kg當(dāng)歸5kg生蒲黃6kg川芎4kg桂枝4kg延胡索7kg 柴胡6kg生黃芪9kg補(bǔ)骨脂6kg 細(xì)辛1kg制沒(méi)藥4kg共制成片劑6200g，子宮內(nèi)膜異位患者服用，每次2g，每日3次。
實(shí)施例7口服劑的制備赤芍8kg當(dāng)歸5kg生蒲黃6kg川芎4kg桂枝4kg延胡索7kg 柴胡6kg生黃芪9kg補(bǔ)骨脂6kg 細(xì)辛1kg制沒(méi)藥4kg按上述制備工藝提取，加入輔料，制得口服液，每瓶100ml，共3100瓶，子宮內(nèi)膜異位患者服用，每次10ml，每日3次。
實(shí)施例8滴丸的制備赤芍7kg當(dāng)歸7kg生蒲黃4kg川芎6kg桂枝2kg延胡索8kg 柴胡4kg生黃芪11kg 補(bǔ)骨脂4kg 細(xì)辛2kg制沒(méi)藥2kg按上述制備工藝提取，加入輔料，制成滴丸，每粒0.05g。子宮內(nèi)膜異位患者服用，一次20粒，一日3次。
實(shí)施例9藥物組合物的質(zhì)量控制方法中的鑒別方法A.取本藥物組合物顆粒劑劑4g，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液12μl、對(duì)照品溶液10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以40∶5∶10∶0.2氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％香草醛的50％磷酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B.取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述鑒別A項(xiàng)下的供試品溶液12μl、對(duì)照品溶液8μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以8∶2正己烷—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％氫氧化鈉甲醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；C.取本藥物組合物顆粒劑劑5g，研細(xì)，加入乙醇15ml，超聲處理1小時(shí)，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取當(dāng)歸對(duì)照藥材、川芎對(duì)照藥材各2g，各加入乙醇10ml，分別超聲處理1小時(shí)，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以9∶1環(huán)己烷—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；D.取本藥物組合物顆粒劑劑12g，研細(xì)，加入氨試液2ml和氯仿30ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)，濾液回收氯仿至干，殘?jiān)尤胍掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各12μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以5∶4∶0.4正己烷—醋酸乙酯—氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；E.取本藥物組合物顆粒劑劑24g，研細(xì)，置250ml的圓底燒瓶中，加入水50ml，連接揮發(fā)油提取器，自測(cè)定器上端加水使充滿刻度，60～90℃加入石油醚1.5ml，然后連接回流冷凝管；將燒瓶?jī)?nèi)容物加熱至沸，并保持微沸2小時(shí)，停止加熱，取石油醚層作為供試品溶液；另取細(xì)辛對(duì)照藥材10g提取揮發(fā)油，加氯仿30ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液15μl、對(duì)照品溶液3μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以95∶5苯—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；F.取本藥物組合物顆粒劑劑6g，研細(xì)，加入硅藻土2g，混勻，加入2％氫氧化鈉的甲醇溶液20ml，加熱回流提取1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，加水30ml使溶解，每次用40ml水飽和的正丁醇提取，提取3次，合并正丁醇液，以水洗滌2次，棄去水液，再以1％磷酸二氫鉀溶液洗滌1次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液12μl、對(duì)照品溶液6μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以20∶7∶2氯仿—甲醇—水的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；實(shí)施例10藥物組合物質(zhì)量控制方法中的含量測(cè)定方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；70∶430乙腈—水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；理論塔板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備 稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 取本藥物組合物顆粒劑劑裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，研細(xì)，取1.2g，置具塞錐形瓶中，稱(chēng)定，加入甲醇20ml，稱(chēng)定重量，超聲處理25分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法 分別吸取上述對(duì)照品溶液10μl、供試品溶液15μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本品每袋(8g裝)含赤芍以芍藥苷C23H28O11計(jì)，不得少于23.0mg；實(shí)施例11藥物組合物的質(zhì)量控制方法A.取本藥物組合物顆粒劑劑4g，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液12μl、對(duì)照品溶液10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以40∶5∶10∶0.2氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％香草醛的50％磷酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B.取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述鑒別A項(xiàng)下的供試品溶液12μl、對(duì)照品溶液8μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以8∶2正己烷—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％氫氧化鈉甲醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；C.取本藥物組合物顆粒劑劑5g，研細(xì)，加入乙醇15ml，超聲處理1小時(shí)，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取當(dāng)歸對(duì)照藥材、川芎對(duì)照藥材各2g，各加入乙醇10ml，分別超聲處理1小時(shí)，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以9∶1環(huán)己烷—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
D.取本藥物組合物顆粒劑劑12g，研細(xì)，加入氨試液2ml和氯仿30ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)，濾液回收氯仿至干，殘?jiān)尤胍掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各12μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以5∶4∶0.4正己烷—醋酸乙酯—氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；E.取本藥物組合物顆粒劑劑24g，研細(xì)，置250ml的圓底燒瓶中，加入水50ml，連接揮發(fā)油提取器，自測(cè)定器上端加水使充滿刻度，60～90℃加入石油醚1.5ml，然后連接回流冷凝管；將燒瓶?jī)?nèi)容物加熱至沸，并保持微沸2小時(shí)，停止加熱，取石油醚層作為供試品溶液；另取細(xì)辛對(duì)照藥材10g提取揮發(fā)油，加氯仿30ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液15μl、對(duì)照品溶液3μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以95∶5苯—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；F.取本藥物組合物顆粒劑劑6g，研細(xì)，加入硅藻土2g，混勻，加入2％氫氧化鈉的甲醇溶液20ml，加熱回流提取1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，加水30ml使溶解，每次用40ml水飽和的正丁醇提取，提取3次，合并正丁醇液，以水洗滌2次，棄去水液，再以1％磷酸二氫鉀溶液洗滌1次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液12μl、對(duì)照品溶液6μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以20∶7∶2氯仿—甲醇—水的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；70∶430乙腈—水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；理論塔板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備 稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 取本藥物組合物顆粒劑劑裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，研細(xì)，取1.2g，置具塞錐形瓶中，稱(chēng)定，加入甲醇20ml，稱(chēng)定重量，超聲處理25分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法 分別吸取上述對(duì)照品溶液10μl、供試品溶液15μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本品每袋(8g裝)含赤芍以芍藥苷C23H28O11計(jì)，不得少于23.0mg。
權(quán)利要求
1.一種治療子宮內(nèi)膜異位的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥按重量份制成赤芍7-8重量份當(dāng) 歸5-7重量份 生蒲黃4-6重量份川芎4-6重量份桂 枝2-4重量份 延胡索7-8重量份柴胡4-6重量份生黃芪9-11重量份補(bǔ)骨脂4-6重量份細(xì)辛1-2重量份制沒(méi)藥2-4重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥按重量份制成赤芍7.5重量份當(dāng) 歸6重量份 生蒲黃5重量份川芎5重量份 桂 枝3重量份 延胡索7.5重量份柴胡5重量份 生黃芪10重量份 補(bǔ)骨脂5重量份細(xì)辛1.5重量份制沒(méi)藥3重量份。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥按重量份制成赤芍7重量份 當(dāng) 歸7重量份 生蒲黃4重量份川芎6重量份 桂 枝2重量份 延胡索8重量份柴胡4重量份 生黃芪11重量份 補(bǔ)骨脂4重量份細(xì)辛2重量份 制沒(méi)藥2重量份。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥按重量份制成赤芍8重量份 當(dāng) 歸5重量份 生蒲黃6重量份川芎4重量份 桂 枝4重量份 延胡索7重量份柴胡6重量份 生黃芪9重量份 補(bǔ)骨脂6重量份細(xì)辛1重量份 制沒(méi)藥4重量份。
5.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物，其特征在于該組合物可以制成一種臨床上或藥學(xué)上接受的劑型片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、軟膠囊劑、栓劑、混懸劑、口服液或灌腸劑。
6.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟按配比劑量取藥物組合物原料藥十一味，當(dāng)歸、川芎、補(bǔ)骨脂、延胡索用5-8倍量50-70％的乙醇加熱回流，提取2-4次，每次1.5-3小時(shí)，合并乙醇提取液，藥液備用；桂枝、細(xì)辛、沒(méi)藥加3-7倍量水，浸泡0.5-3小時(shí)，水蒸汽蒸餾提取2-8小時(shí)，收集揮發(fā)油，水溶液和藥渣備用；取揮發(fā)油用4-8倍量的β-環(huán)糊精及40-80倍量的水進(jìn)行包結(jié)，30-60℃攪拌0.5-1.5小時(shí)，冷藏10-18小時(shí)，濾過(guò)，包結(jié)物30-55℃低溫干燥，粉碎成細(xì)粉，備用；柴胡、赤芍、蒲黃及黃芪加7-10倍量水，提取2-4次，每次0.5-1.5小時(shí)，將末次提取液與上述桂枝等藥渣合煎，合并煎液，濾過(guò)，濾液與上述水溶液合并，合并液濃縮至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.10-1.15，加乙醇使含醇量達(dá)60-80％，冷藏過(guò)夜，濾過(guò)，濾液與上述當(dāng)歸等藥液分別回收乙醇至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.15-1.20，干燥，與上述揮發(fā)油β-環(huán)糊精包結(jié)物細(xì)粉及糊精按重量比1∶0.5-1.5混勻，制成顆粒，干燥，制成膠囊劑、片劑或顆粒劑。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟按配比劑量取藥物組合物原料藥十一味，當(dāng)歸、川芎、補(bǔ)骨脂、延胡索用6倍量60％的乙醇加熱回流，提取3次，每次2小時(shí)，合并乙醇提取液，藥液備用；桂枝、細(xì)辛、沒(méi)藥加6倍量水，浸泡2小時(shí)，水蒸汽蒸餾提取8小時(shí)，收集揮發(fā)油，水溶液和藥渣備用；取揮發(fā)油用6倍量的β-環(huán)糊精及60倍量的水進(jìn)行包結(jié)，40℃攪拌1小時(shí)，冷藏12小時(shí)，濾過(guò)，包結(jié)物40℃低溫干燥，粉碎成細(xì)粉，備用；柴胡、赤芍、蒲黃及黃芪加8倍量水，提取3次，每次1小時(shí)，再將提取液與上述桂枝等藥渣合煎，合并煎液，濾過(guò)，濾液與上述水溶液合并，合并液濃縮至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.10-1.15，加乙醇使含醇量達(dá)70％，冷藏過(guò)夜，濾過(guò)，濾液與上述當(dāng)歸等藥液分別回收乙醇至50℃時(shí)測(cè)相對(duì)密度1.15-1.20，干燥，與上述揮發(fā)油β-環(huán)糊精包結(jié)物細(xì)粉及糊精按重量比1∶1混勻，制成顆粒，干燥，制成膠囊劑、片劑或顆粒劑。
8.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種和/或幾種A.取相當(dāng)日服用劑量1/6倍的藥物組合物制劑，研細(xì)，加甲醇15-25ml，超聲處理10-30分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.6mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5-15μl、對(duì)照品溶液5-15μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以35-45∶4-6∶8-12∶0.15-0.25的氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以3-6％香草醛的45-55％磷酸乙醇溶液，在100-110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B.取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2-0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述鑒別A項(xiàng)下的供試品溶液5-15μl、對(duì)照品溶液4-10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以7-9∶1.5-2.5正己烷—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5-15％氫氧化鈉甲醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；C.取相當(dāng)日服用劑量5/24倍的藥物組合物制劑，研細(xì)，加入乙醇10-20ml，超聲處理0.5-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取當(dāng)歸對(duì)照藥材、川芎對(duì)照藥材各1.5-2.5g，各加入乙醇8-12ml，分別超聲處理0.5-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各5-15μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以8-10∶0.8-1.2環(huán)己烷—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；D.取相當(dāng)日服用劑量1/2倍的藥物組合物制劑，研細(xì)，加入氨試液1.5-2.5ml和氯仿25-35ml，超聲處理30-50分鐘，濾過(guò)，濾液回收氯仿至干，殘?jiān)尤胍掖?-6ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.15-0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10-15μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以4-6∶3-5∶0.3-0.5正己烷—醋酸乙酯—氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；E.取相當(dāng)日服用劑量1倍的藥物組合物制劑，研細(xì)，置200-300ml的圓底燒瓶中，加入水40-60ml，連接揮發(fā)油提取器，自測(cè)定器上端加水使充滿刻度，60～90℃加入石油醚1.0-2.0ml，然后連接回流冷凝管；將燒瓶?jī)?nèi)容物加熱至沸，并保持1.5-2.5小時(shí)，停止加熱，取石油醚層作為供試品溶液；另取細(xì)辛對(duì)照藥材8-12g提取揮發(fā)油，加氯仿25-35ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10-20μl、對(duì)照品溶液2-5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以92-98∶4-6苯—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以0.8-0.12％香草醛硫酸溶液，在100-110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；F.取相當(dāng)日服用劑量1/4倍的藥物組合物制劑，研細(xì)，加入硅藻土1.5-2.5g，混勻，加入2％氫氧化鈉的甲醇溶液15-25ml，加熱回流提取0.5-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，加水25-35ml使溶解，每次用35-45ml水飽和的正丁醇提取，提取2-4次，合并正丁醇液，以水洗滌1-3次，棄去水液，再以0.8-1.2％磷酸二氫鉀溶液洗滌1-2次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-2.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.2-0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10-15μl、對(duì)照品溶液5-7μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以18-22∶6-8∶1.5-2.5氯仿—甲醇—水的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％的硫酸乙醇溶液，在100-110℃烘烤至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種和/或幾種A.取藥物組合物制劑日服用劑量1/6倍，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液12μl、對(duì)照品溶液10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以40∶5∶10∶0.2氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％香草醛的50％磷酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；B.取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述鑒別A項(xiàng)下的供試品溶液12μl、對(duì)照品溶液8μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以8∶2正己烷—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％氫氧化鈉甲醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；C.取藥物組合物制劑日服用劑量5/24倍，研細(xì)，加入乙醇15ml，超聲處理1小時(shí)，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取當(dāng)歸對(duì)照藥材、川芎對(duì)照藥材各2g，各加入乙醇10ml，分別超聲處理1小時(shí)，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對(duì)照藥材溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以9∶1環(huán)己烷—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；D.取藥物組合物制劑日服用劑量1/2倍，研細(xì)，加入氨試液2ml和氯仿30ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)，濾液回收氯仿至干，殘?jiān)尤胍掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各12μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G預(yù)制薄層板上，以5∶4∶0.4正己烷—醋酸乙酯—氨水為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；E.取藥物組合物制劑相當(dāng)于日服用劑量，研細(xì)，置250ml的圓底燒瓶中，加入水50ml，連接揮發(fā)油提取器，自測(cè)定器上端加水使充滿刻度，60～90℃加入石油醚1.5ml，然后連接回流冷凝管；將燒瓶?jī)?nèi)容物加熱至沸，并保持微沸2小時(shí)，停止加熱，取石油醚層作為供試品溶液；另取細(xì)辛對(duì)照藥材10g提取揮發(fā)油，加氯仿30ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液15μl、對(duì)照品溶液3μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以95∶5苯—醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；F.取藥物組合物制劑日服用劑量1/4倍，研細(xì)，加入硅藻土2g，混勻，加入2％氫氧化鈉的甲醇溶液20ml，加熱回流提取1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，加水30ml使溶解，每次用40ml水飽和的正丁醇提取，提取3次，合并正丁醇液，以水洗滌2次，棄去水液，再以1％磷酸二氫鉀溶液洗滌1次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液12μl、對(duì)照品溶液6μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以20∶7∶2氯仿—甲醇—水的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
10.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測(cè)定包括如下測(cè)定方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；65-75∶425-435乙腈—水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220-240nm；理論塔板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備 稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2-1.0mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 取本藥物組合物制劑裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，研細(xì)，取1.0-1.5g，置具塞錐形瓶中，稱(chēng)定，加入甲醇15-25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理20-30分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.40-0.50um微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法 分別吸取上述對(duì)照品溶液5-15μl、供試品溶液14-20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；本藥物組合物按日服用劑量含赤芍以芍藥苷C23H28O11計(jì)，不得少于69.0mg。
11.如利要求10所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測(cè)定為包括如下測(cè)定方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；70∶430乙腈—水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；理論塔板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備 稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；供試品溶液的制備 取藥物組合物制劑裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，研細(xì)，取1.2g，置具塞錐形瓶中，稱(chēng)定，加入甲醇20ml，稱(chēng)定重量，超聲處理25分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法 分別吸取上述對(duì)照品溶液10μl、供試品溶液15μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；藥物組合物按日服用劑量含赤芍以芍藥苷C23H28O11計(jì)，不得少于69.0mg。
12.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物在制備治療子宮內(nèi)膜異位的藥物中的應(yīng)用。
13.如權(quán)利要求12所述的藥物組合物的應(yīng)用，其特征在于所述的治療子宮內(nèi)膜異位是指降低卵泡刺激素FSH、黃體生成素LH、催乳素PRL或雌二醇E2的含量、縮小異位內(nèi)膜體積、減輕異位內(nèi)膜重量、減輕子宮內(nèi)膜異位病變程度、改善動(dòng)物血液流變學(xué)的趨勢(shì)、降低子宮活動(dòng)幅度及抑制子宮活動(dòng)力、改善腸系膜微循環(huán)的作用、對(duì)局部血液循環(huán)障礙的保護(hù)作用、抗炎作用、鎮(zhèn)痛作用或增強(qiáng)免疫功能作用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療子宮內(nèi)膜異位的藥物組合物、其制備方法和質(zhì)量控制方法。該藥物組合物由赤芍、當(dāng)歸、生蒲黃、川芎、桂枝、延胡索、柴胡、生黃芪、補(bǔ)骨脂、細(xì)辛和制沒(méi)藥制成；本藥物組合物用于治療子宮內(nèi)膜異位療效確切，作用快且無(wú)毒副作用。
文檔編號(hào)A61P15/00GK1943680SQ20051010801
公開(kāi)日2007年4月11日 申請(qǐng)日期2005年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月9日
發(fā)明者任明非, 楊世林, 萬(wàn)方, 王衛(wèi)華 申請(qǐng)人:成都華神集團(tuán)股份有限公司