專利名稱：一種中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，屬于中藥的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心腦血管疾病如冠心病、腦血栓、老年性癡呆等均是當(dāng)今世界最常見和危害最大的疾病之一，在許多國家已成為人口死亡的主要原因之一；據(jù)調(diào)查，近年來的發(fā)病率有逐年增高趨勢，而且中、青年患者不斷增加，心腦缺血性疾病已成為危害我國人民健康的常見病、多發(fā)??；為了達(dá)到防治目的，許多發(fā)明人及藥品企業(yè)對其做了大量的研究工作。藥物制劑必須要在保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控安全的基礎(chǔ)之上，才能不斷的更新發(fā)展，為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費(fèi)者能全面認(rèn)識產(chǎn)品質(zhì)地，需要研究、控制該中藥復(fù)方制劑質(zhì)量的方法；目前，在相關(guān)藥物制劑中，一般僅以野黃芩苷、黃芪甲苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中的某種成分為檢測指標(biāo)，但是它根本不能全面反應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)量，僅以此用來控制中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量不是十分合理；如果用別的指標(biāo)進(jìn)行控制，由于沒有現(xiàn)成的檢測方案、檢測條件等等，所以比較難于實(shí)施。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法。這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機(jī)構(gòu)提供了檢測的指標(biāo)、檢測的手段、技術(shù)方法等等，以便更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費(fèi)者能全面認(rèn)識產(chǎn)品質(zhì)地。
該中藥復(fù)方制劑的藥味組成及配比如下(按重量份)由燈盞細(xì)辛10～500份、黃芪1～100份與三七1～100份制作而成；或是由相應(yīng)重量份藥材經(jīng)提取精制后得到的提取物加適當(dāng)輔料制作而成。
上述中藥復(fù)方制劑的劑型為注射劑或口服制劑；其中注射劑包括直接用于注射給藥的注射液、直接供靜脈滴注的靜脈輸液、需稀釋后用于靜脈滴注的注射用濃溶液和用冷凍干燥法或噴霧干燥法制備的注射用無菌粉末或無菌塊狀物；口服制劑包括片劑、分散片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、丸劑、微丸劑、散劑、滴丸劑、緩釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、凝膠劑、煎膏劑、浸膏劑和膜劑。臨床上用于治療冠心病、心絞痛、心律失常、腦血栓、老年性癡呆、肝腎綜合癥、心肺病、糖尿病及其并發(fā)癥等疾病。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)指紋圖譜測試，包括以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種；(2)燈盞細(xì)辛對照藥材、黃芪對照藥材、三七對照藥材、野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、總皂苷、總黃酮中全部或部分成分的含量測試方法。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量燈盞細(xì)辛和黃芪藥材中的主要活性成分對照品，包括野黃芩苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為0.5％～100％乙腈溶液或甲醇-0.005mol/L～5mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～5mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190～400nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～50個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±20％；b、采用液相色譜法測試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量黃芪和三七藥材中的主要活性成分對照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、黃芪甲苷中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈或甲醇-水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190～400nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～40個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±20％。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為80％乙腈，流動(dòng)相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動(dòng)相A的比例由15％升至70％，流動(dòng)相B的比例由85％降至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10％；b、采用液相色譜法測試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至14分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測波長203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10％。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷對照品中的一種或兩種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和燈盞細(xì)辛對照藥材溶液、野黃芩苷對照品溶液的一種或兩種各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.3％～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液或0.3～10％三氯化鐵乙醇溶液，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視或105℃烘1～15分鐘后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；b、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液2％～30％∶2％～30％∶96％～40％或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測波長為200～410nm；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；c、中藥復(fù)方制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，用正丁醇或乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚回流提取，棄去三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚液，殘?jiān)铀柡驼〈蓟虼姿嵋阴ヌ崛。崛∫杭影痹囈?，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，80℃～160℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；d、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液5％～40％∶95％～60％為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；e、中藥復(fù)方制劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.05％～5％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至3～6，用醋酸乙酯或正丁醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴セ蚣状蓟蛞掖既芙?，作為供試品溶液；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇1～30∶0.2～10為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；f、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇溶解后加于中性氧化鋁柱，用10％～70％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀芙夂蠹铀柡驼〈继崛?，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水1～30∶1～20∶0.2～10的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％～50％硫酸乙醇溶液，80～160℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；g、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，15％～85％∶85％～15％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測波長為190～410nm或蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；h、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品中的一種或兩種，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水0.5～10∶1～15∶1～20∶0.1～3為展開劑，展開，取出，晾干，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜與對照藥材相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；i、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇或乙腈，流動(dòng)相B為水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測波長為190～410nm，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷中的一種或幾種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點(diǎn)于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑；b、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測波長為335nm；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；c、中藥復(fù)方制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，用正丁醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；d、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；e、中藥復(fù)方制劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加乙醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至5～6，用醋酸乙酯提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，作為供試品溶液；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇10∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；f、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱，用40％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀芙夂蠹铀柡驼〈继崛?，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；g、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解后用水飽和正丁醇提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；h、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素中的一種或兩種，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水2.5∶3∶4∶0.5為展開劑，展開，展距5cm，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；i、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至20分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測波長為250nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑含量的測試方法應(yīng)包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液2％～30％∶2％～30％∶96％～40％或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測波長為200～410nm；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于2mg；b、中藥復(fù)方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，用甲醇或水溶解并稀釋至合適濃度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在335±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算；或取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解并稀釋至合適濃度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，加50％甲醇或水1～25ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4～10ml，再加50％甲醇或水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以蘆丁或野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在500±10nm處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以蘆丁或野黃芩苷計(jì)，不得少于5mg；c、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于2.5mg；每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于3.5mg；每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.25mg；每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于6mg；d、中藥復(fù)方制劑中總皂苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，搖勻，30～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以黃芪甲苷或人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以黃芪甲苷或人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1計(jì)，不得少于10mg；e、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，15％～85％∶85％～15％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測波長為190～410nm或蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.02mg；f、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇或乙腈，流動(dòng)相B為水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測波長為190～410nm，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或兩項(xiàng)(1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.01mg；(2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.01mg。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑含量的測試方法是以下一種或幾種方法a、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測波長為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg；b、中藥復(fù)方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計(jì)，不得少于10mg；c、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg；d、中藥復(fù)方制劑中總皂苷的含量測定取待測藥物適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg；e、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解后用水飽和正丁醇提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.04mg；f、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測波長為250nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或兩項(xiàng)(1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg；(2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射制劑的含量測定結(jié)果，按照重量百分比計(jì)算，野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、總皂苷、總黃酮中的全部或部分物質(zhì)的總含量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能更加完善的控制以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量。中藥成分復(fù)雜，如果只用其中一、兩種成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更無法判斷其藥效的指標(biāo)成分。因此本申請人制定了以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜、鑒別和含量測定來全面控制中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量。但是由于中藥復(fù)方制劑中的各藥材之間所含的化學(xué)成分復(fù)雜，對指紋圖譜的制定、鑒別和含量測定造成干擾，導(dǎo)致鑒別、含量測定和各部分指紋圖譜特征不穩(wěn)定，所以必須控制流動(dòng)相、展開劑等色譜條件，才能得到良好的薄層色譜、含測條件和指紋圖譜。也就是說，由于處方中各成分相互之間的干擾影響，導(dǎo)致中藥復(fù)方制劑中以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜特征峰發(fā)生改變，而只有采用本發(fā)明的條件，才能得到理想的薄層色譜、含測條件和指紋圖譜。
通過實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明質(zhì)量控制方法對以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度、穩(wěn)定性均較高。
實(shí)驗(yàn)例1以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的制備a、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及樣品
對照品野黃芩苷中國藥品生物制品檢定所b、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)1.色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)Kromasil C18(200mm×4.6mm，5μm)、Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號的色譜柱均可達(dá)到較好的分離效果，其中Diamonsil C18色譜柱分離效果最好，柱效最高，可以達(dá)到70000(以參照物野黃芩苷計(jì)算)。故最終選用Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)為實(shí)驗(yàn)研究柱。
2.流動(dòng)相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶90)，(3)乙腈-水(梯度洗脫)(4)流動(dòng)相A為80％乙腈，流動(dòng)相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動(dòng)相A的比例由15％升至70％，流動(dòng)相B的比例由85％升至30％四種流動(dòng)相系統(tǒng)。結(jié)果顯示流動(dòng)相(1)條件下，峰形較差，1小時(shí)內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動(dòng)相(2)流動(dòng)相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴(yán)重，出峰不完全；流動(dòng)相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測波長的確定研究中在流動(dòng)相A為80％乙腈，流動(dòng)相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫流動(dòng)相條件下，分別考察了在不同波段典型波長230、254、270、300下的色譜峰情況，結(jié)果表明，230nm檢測時(shí)能兼顧各成分色譜峰的峰度、分離度和基線，故選擇230nm為本品指紋圖譜檢測波長。
4.儀器、色譜柱及積分參數(shù)4.1儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的LC-10Avp高效液相色譜儀，WML-2010色譜工作站。色譜柱為Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)；柱溫40℃，流速1.0ml/min。
4.2積分參數(shù)峰寬10；斜率100；最小峰面積50000。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計(jì)算，同時(shí)保證與參照物的相關(guān)性。
5.供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。
6.參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液。
7.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)根據(jù)10批樣品制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實(shí)驗(yàn)例2以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜a、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及樣品對照品人參皂苷Rg1中國藥品生物制品檢定所b、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)1.色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均為C18，4.6mm×200mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號的色譜柱均可達(dá)到較好的分離效果，其中Diamonsil ODS色譜柱分離效果最好，柱效最高，可以達(dá)到5400(以參照物人參皂苷Rg1計(jì)算)。故最終選用Diamonsil ODS色譜柱(4.6mm×200mm，5μm)為實(shí)驗(yàn)研究柱。
2.流動(dòng)相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶90)，(3)乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液(梯度洗脫)(4)乙腈-水(梯度洗脫)(梯度洗脫體積配比為從0分鐘至14分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％)四種流動(dòng)相系統(tǒng)。結(jié)果顯示流動(dòng)相(1)條件下，峰形較差，1小時(shí)內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動(dòng)相(2)流動(dòng)相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴(yán)重，出峰不完全；流動(dòng)相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測波長的確定研究中在乙腈-水(梯度洗脫)流動(dòng)相條件下，分別考察了在不同波段典型波長203、210、230、254下的色譜峰情況，結(jié)果顯示，在203nm下色譜峰較多，峰形較好，故最終選用203nm±2作為檢測波長。
4.儀器、色譜柱及積分參數(shù)4.1儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的Agilent1100系列高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站。色譜柱為Diamonsil ODS(4.6mm×200mm，5μm)；柱溫40℃，流速1.0ml/min。
4.2積分參數(shù)Slope Sensitivity1，peak width0.05，最小峰面積為參照物(S)峰峰面積的5％，最小峰高為S峰峰高的5％。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計(jì)算，同時(shí)保證與參照物的相關(guān)性。
5.供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，即得。
6.參照物溶液的制備人參皂苷Rg1為三七主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占比例較大且較穩(wěn)定，同時(shí)兼顧中間體和藥材的研究，因此選定人參皂苷Rg1作為參照物。
7.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)根據(jù)10批樣品制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實(shí)驗(yàn)例3中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法為了突出燈盞細(xì)辛的特征，選擇了燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷作為其特征，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對野黃芩苷進(jìn)行了展開條件 問題正己烷-苯-甲酸乙酯-甲酸(5-5-10-4)硅膠H薄層板對照品展開至前沿醋酸乙酯-苯-乙酸(5-4-3)硅膠H薄層板 對照品未分開，陰性有干擾醋酸乙酯-苯-甲酸(5-4-3)硅膠G薄層板 對照品未分開，陰性有干擾氯仿-醋酸乙酯-甲醇(7-2-4)硅膠GF254薄層板對照品未分開，陰性有干擾甲苯-醋酸乙酯(8-1)硅膠H薄層板 對照品未分開，陰性有干擾甲醇-醋酸乙酯-甲酸(10-5-0.5)硅膠G薄層板 對照品展開至前沿甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7-2-1)聚酰胺膜 分離清晰，Rf值適中陰性無干擾經(jīng)過篩選，確定了以聚酰胺膜為固定相，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7-2-1)為展開劑，在此條件下，野黃芩苷的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例4中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法為了突出燈盞細(xì)辛的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了野黃芩苷作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動(dòng)相對野黃芩苷進(jìn)行了分離條件 問題甲醇-0.05mol/L磷酸氫二鈉(80∶20)八烷基硅烷鍵合硅膠 出峰時(shí)間過快乙腈-0.05mol/L磷酸氫二鈉(40∶60)十八烷基硅烷鍵合硅膠 陰性有干擾甲醇-四氫呋喃-0.05mol/L磷酸氫二鈉(20∶10∶70)十八烷基陰性有干擾硅烷鍵合硅膠乙腈-四氫呋喃-0.05mol/L磷酸氫二鈉(20∶10∶70)十八烷基峰形不太對稱硅烷鍵合硅膠甲醇-四氫呋喃-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70)十八烷基硅烷陰性有干擾鍵合硅膠乙腈-四氫呋喃-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70)十八烷基硅烷峰形不太對稱鍵合硅膠保留時(shí)間適中，峰行尖甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)十八烷基硅烷鍵合硅膠 銳，對稱，陰性無干擾經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)為流動(dòng)相，在此條件下，野黃芩苷保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例5中藥復(fù)方制劑人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的薄層色譜鑒別方法為了突出三七的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對麥冬進(jìn)行了展開
條件 問題氯仿-甲酸乙酯-水(20∶60∶10)10℃以下放置的下層溶對照品展開至前沿液硅膠G薄層板正丁醇-甲酸乙酯-甲醇(10-1-5)硅膠H薄層板 對照品展開至前沿氯仿-甲酸乙酯-甲酸-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置對照品未分開，陰性有干擾的下層溶液硅膠G薄層板氯仿-醋酸乙酯-甲酸-水(10∶40∶15∶5)10℃以下放置對照品未分開，陰性有干擾的下層溶液硅膠G薄層板正丁醇-甲酸乙酯-甲醇(5-1-5)硅膠G薄層板 對照品未分開，陰性有干擾正丁醇-甲酸乙酯-乙醇(2-1.5-0.5)硅膠H薄層板 對照品未分開，陰性有干擾確定條件氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10分離清晰，Rf值適中陰性無干擾℃以下放置的下層溶液硅膠G薄層板經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，在此條件下，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例6中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的液相色譜鑒別方法為了突出三七的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動(dòng)相對人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1進(jìn)行了分離
條件 問題甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鈉(70∶30)十八烷基硅烷鍵合硅膠出峰時(shí)間過快乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉(55∶45)十八烷基硅烷鍵合硅膠出峰時(shí)間過快甲醇-0.05mol/L磷酸氫二鈉(80∶20)八烷基硅烷鍵合硅膠 陰性有干擾甲醇-0.05mol/L磷酸氫二鈉(80∶20)十八烷基硅烷鍵合硅膠陰性有干擾乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鉀(90∶10)八烷基硅烷鍵合硅膠 陰性有干擾甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鉀(85∶15)十八烷基硅烷鍵合硅膠陰性有干擾乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上保留時(shí)間適中，峰行尖升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％十八烷基硅銳，對稱，陰性無干擾烷鍵合硅膠經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％，在此條件下，人人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例7中藥復(fù)方制劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法為了突出黃芪的特征，選擇了黃芪對照藥材作為其特征斑點(diǎn)，但是由于中藥復(fù)方制劑中存在較多與黃芪對照藥材結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對黃芪對照藥材進(jìn)行了展開條件 問題正丁醇-冰醋酸-水(6∶4∶3)硅膠H薄層板 陰性有干擾丙酮-冰醋酸-水(8∶2∶1)硅膠G薄層板特征斑點(diǎn)不清晰二氯甲烷-甲醇(7-3)硅膠GF254薄層板 陰性有干擾三氯甲烷-丙酮-甲酸(20∶2∶1)硅膠G薄層板 陰性有干擾三氯甲烷-丙酮-甲醇(20∶3∶2)硅膠H薄層板 陰性有干擾三氯甲烷-丙酮-甲醇(20∶2∶10)硅膠G薄層板 對照品展開至前沿三氯甲烷-甲醇(10-1)硅膠G薄層板分離清晰，Rf值適中陰性無干擾經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-甲醇(10-1)為展開劑，在此條件下，黃芪對照藥材特征斑點(diǎn)的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例8中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法為了突出黃芪的特征，選擇了黃芪甲苷作為其特征斑點(diǎn)，但是由于中藥復(fù)方制劑中存在較多與黃芪甲苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對黃芪甲苷進(jìn)行了展開條件 問題三氯甲烷-丙酮-水(10-8-0.5)硅膠G薄層板陰性有干擾二氯甲烷-丙酮-水(10-8-0.5)硅膠G薄層板陰性有干擾二氯甲烷-丙酮(2-9)硅膠H薄層板對照品展至前沿三氯甲烷-丙酮(10-5)硅膠GF254薄層板 陰性有干擾三氯甲烷-乙醇(13-7)硅膠H薄層板 陰性有干擾三氯甲烷-甲醇(13-7)硅膠G薄層板 陰性有干擾三氯甲烷-甲醇-水(13-7-2)下層溶液 分離清晰，Rf值適中陰性無干擾經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-甲醇-水(13-7-2)的下層溶液為展開劑，在此條件下，黃芪甲苷特征斑點(diǎn)的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例9中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法為了突出黃芪的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了黃芪甲苷作為其特征成分，但是由于中藥復(fù)方制劑中存在較多與黃芪甲苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動(dòng)相對黃芪甲苷進(jìn)行了分離條件問題甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鈉(70∶30)八烷基硅烷鍵合硅膠 出峰時(shí)間過快乙腈-0.02mol/L磷酸氫二鈉(50∶50)十八烷基硅烷鍵合硅膠 出峰時(shí)間過快甲醇-0.05mol/L磷酸氫二鈉(40∶60)十八烷基硅烷鍵合硅膠 陰性有干擾乙腈-0.05mol/L磷酸氫二鈉(30∶70)十八烷基硅烷鍵合硅膠 峰形不太對稱甲醇-四氫呋喃-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70)十八烷基硅烷陰性有干擾鍵合硅膠乙腈-甲醇-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70)十八烷基硅烷鍵合峰形不太對稱硅膠保留時(shí)間適中，峰乙腈-水(32∶68)十八烷基硅烷鍵合硅膠 行尖銳，對稱，陰性無干擾經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-水(32∶68)為流動(dòng)相，在此條件下，黃芪甲苷保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例10中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的薄層色譜鑒別方法為了突出黃芪黃酮類成分的特征，選擇了芒柄花素、毛蕊芒柄花素作為其特征斑點(diǎn)，但是由于中藥復(fù)方制劑中存在較多與芒柄花素、毛蕊芒柄花素結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對芒柄花素、毛蕊芒柄花素進(jìn)行了展開條件 問題苯-丙酮-甲醇(5-3-1)硅膠G薄層板 陰性有干擾甲苯-醋酸乙酯-水(10-8-0.5)硅膠G薄層板 陰性有干擾正己烷-甲醇(6-0.5)硅膠H薄層板 陰性有干擾環(huán)己烷-丙酮(5-5)硅膠GF254薄層板 對照品展至前沿苯-甲酸乙酯-甲醇(6-2-1)硅膠H薄層板 陰性有干擾甲苯-正己烷-甲醇(8-4-4)硅膠G薄層板 陰性有干擾三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水(2.5-3-4-0.5)硅膠G薄層板 分離清晰，Rf值適中陰性無干擾經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水(2.5-3-4-0.5)為展開劑，在此條件下，芒柄花素、毛蕊芒柄花素特征斑點(diǎn)的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例11中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的液相色譜鑒別方法為了突出黃芪黃酮類成分的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了芒柄花素、毛蕊芒柄花素作為其特征成分，但是由于中藥復(fù)方制劑中存在較多與芒柄花素、毛蕊芒柄花素結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動(dòng)相對芒柄花素、毛蕊芒柄花素進(jìn)行了分離條件 問題甲醇-水(70∶30)八烷基硅烷鍵合硅膠 出峰時(shí)間過快乙腈-水(50∶50)十八烷基硅烷鍵合硅膠 出峰時(shí)間過快甲醇-1％冰醋酸(40∶60)十八烷基硅烷鍵合硅膠 陰性有干擾乙腈-0.5％甲酸(30∶70)十八烷基硅烷鍵合硅膠 出峰時(shí)間過慢甲醇-0.1％磷酸(20∶10∶70)十八烷基硅烷鍵合硅膠 陰性有干擾乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉(30∶70)十八烷基硅烷鍵合硅膠陰性有干擾甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例由40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例由50％保留時(shí)間適中，峰行尖升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％十八烷基硅烷鍵銳，對稱，陰性無干擾合硅膠經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例由40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例由50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％為流動(dòng)相，在此條件下，芒柄花素、毛蕊芒柄花素保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例12中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷含量測定1儀器與試藥1.1主要儀器高效液相色譜儀 LC-2010AHTSHIMADZU紫外/可見分光光度儀TU-1810SPC北京普析通用儀器有限公司電子分析天平 BP211DSARTORIUS超聲波清洗機(jī) KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司1.2試藥野黃芩苷中國藥品生物制品檢定所甲醇分析純北京化工廠乙腈色譜純迪馬公司磷酸分析純北京化學(xué)試劑公司2野黃芩苷由中國藥品生物制品檢定所提供野黃芩苷，經(jīng)高效液相色譜法(歸一化法)測定純度為96.40％，符合含量測定用對照品要求(在測定中，按照96.40％的純度進(jìn)行折算)。
3檢測波長的選擇取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.0463mg的溶液，在190～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，野黃芩苷在284nm及335nm處有最大吸收，根據(jù)《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》相關(guān)品種并結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，選擇335nm作為野黃芩苷含量測定的檢測波長。
4色譜條件色譜儀SHIMADZULC-2010AHT；色譜柱Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；流動(dòng)相甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)；流 速1.0ml/min；柱 溫30℃；進(jìn)樣量10μl；檢測波長335nm。
對照品溶液的制備精密稱取野黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
根據(jù)上述色譜條件得到野黃芩苷對照品、供試品色譜圖，其理論板數(shù)n均大于2000，野黃芩苷色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5，溶劑無干擾。
5提取時(shí)間的選擇 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.25g(共3份)，精密稱定，分置25ml量瓶中，加甲醇適量，分別超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5、10、20min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
提取時(shí)間考察

結(jié)果表明，超聲處理5min即可提取完全。
6線性關(guān)系考察精密量取野黃芩苷對照品溶液(C＝0.978mg/ml)0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定。以峰面積為縱坐標(biāo)，野黃芩苷的量(μg)為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
野黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

回歸方程Y＝3222232.53x+3654.50相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999結(jié)果表明野黃芩苷在0.1886μg～0.9428μg范圍內(nèi)線性良好。
經(jīng)計(jì)算，野黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線過原點(diǎn)，因此選用外標(biāo)一點(diǎn)法測定野黃芩苷的含量。
7精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取野黃芩苷對照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，測定5次，考察對照品溶液精密度，測定結(jié)果見下表。
精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)8.1對照品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取野黃芩苷對照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測定。
對照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8.2供試品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測定。
供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

結(jié)果表明，供試品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
9重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品，按正文供試品溶液的制備和測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

10加樣回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.13g(共6份)，精密稱定，分置25ml量瓶中，分別精密加入野黃芩苷對照品溶液(C＝0.626mg/ml)1.0ml，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的含量為4.643mg/g。
加樣回收率實(shí)驗(yàn)

平均回收率＝97.57％，RSD＝0.85％11樣品含量測定 取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測定法項(xiàng)下的操作。
野黃芩苷含量測定

實(shí)驗(yàn)例13中藥復(fù)方制劑中總黃酮含量測定1儀器與試藥(1)主要儀器紫外分光光度計(jì) TU-1810SPC 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司電子分析天平BP211D SARTORIUS超聲波清洗機(jī)KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司(2)試藥蘆丁中國藥品生物制品檢定所(批號0080-9705)乙醇分析純阿托茲精細(xì)化工有限公司硝酸鋁 分析純天津市化學(xué)試劑三廠亞硝酸鈉分析純天津市化學(xué)試劑三廠氫氧化鈉分析純天津市北方化玻購銷中心2檢測波長的選擇 取蘆丁對照品，按正文對照品溶液的制備方法進(jìn)行操作，獲得對照品溶液。取中藥復(fù)方制劑，按正文測定法中供試品溶液的制備方法進(jìn)行操作，獲得供試品溶液。吸取蘆丁對照品溶液，供試品溶液，按正文總黃酮測定項(xiàng)下擬定的方法，在400～800nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果表明，對照品溶液與供試品溶液均在510nm有最大吸收，溶劑無干擾，因此選擇510nm作為分光光度法測定中藥復(fù)方制劑中總黃酮含量的檢測波長。
3對照品溶液的制備 精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品20mg，置100ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加60％乙醇溶液至刻度，搖勻，精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.1mg)。
4供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，取約0.25g，置25ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加60％乙醇溶液至刻度，搖勻，即得。
5測定法 精密量取對照品溶液與供試品溶液各3.0ml，分置10ml量瓶中，各加30％乙醇溶液使成5.0ml，精密加亞硝酸鈉溶液(1→20)0.3ml搖勻，放置6分鐘，再加硝酸鋁溶液(1→10)0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在510nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算，即得。
6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取蘆丁對照品溶液(C＝0.1064mg/ml)0.0ml，1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，分置10ml量瓶中，分別加30％乙醇溶液使成5.0ml，精密加亞硝酸鈉溶液(1→20)0.3ml，搖勻，放置6分鐘，再加硝酸鋁溶液(1→10)0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在510nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

回歸方程Y=lO.818x-0.0005相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999；結(jié)果表明蘆丁在0.0110～0.0530mg/ml范圍內(nèi)線性良好。
經(jīng)計(jì)算，蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線過原點(diǎn)，因此選用外標(biāo)一點(diǎn)法測定總黃酮的含量。
7精密度試驗(yàn) 精密吸取蘆丁對照品溶液(濃度0.1064mg/ml)3.0ml，置10ml量瓶中，按正文測定法項(xiàng)下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，測定5次。
精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
8穩(wěn)定性試驗(yàn)8.1對照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取蘆丁對照品溶液(濃度0.1064mg/ml)3.0ml，置10ml量瓶中，按正文測定法項(xiàng)下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，分別在0、5、10、15、30分鐘重復(fù)測定一次。
對照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液穩(wěn)定性良好。
8.2供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液1.0ml，置10ml量瓶中，按正文測定法項(xiàng)下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，分別在0、5、10、15、30min測定吸收度。
供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，供試品溶液在30min內(nèi)穩(wěn)定性良好。
9重復(fù)性試驗(yàn) 取本品，按正文供試品溶液的制備和測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性試驗(yàn)

結(jié)果表明，重復(fù)性良好。
10加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，取0.13g(共6份)，精密稱定，分置25ml量瓶中，精密稱取經(jīng)120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品30.24mg，置25ml量瓶中，加60％乙醇適量超聲處理使溶解，取出，放至室溫，用60％乙醇定至刻度，搖勻，精密量取1.5ml(共6份)，分置上述25ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，用60％乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液3.0ml，分置10ml量瓶中，照正文測定法項(xiàng)下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，計(jì)算，即得。
中藥復(fù)方制劑中總黃酮的含量為15.85mg/g。
加樣回收率試驗(yàn)

平均回收率＝97.89％，RSD＝0.85％。
11樣品的含量測定 取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測定法項(xiàng)下的操作，測定樣品含量。
總黃酮的含量測定

實(shí)驗(yàn)例14中藥復(fù)方制劑中總皂苷含量測定1儀器、試藥1.1儀器普析通TU-1810SPC紫外/可見分光光度儀SARTORIUSBP211D電子分析天平1.2試藥香草醛分析純天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所甲醇色譜純J.T.Baker
冰醋酸分析純上海試劑一廠高氯酸分析純天津市鑫源化工廠純凈水娃哈哈2方法與結(jié)果2.1檢測波長的選擇 精密稱取人參皂苷Rg15.14mg，置100ml量瓶中，加適量甲醇超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，在700～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果表明，黃芪甲苷在547nm處有最大吸收，空白無干擾，因此選擇547nm為分光光度法測定中藥復(fù)方制劑中總皂苷的檢測波長。
2.2對照品溶液的制備 人參皂苷Rg15mg，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。
2.3供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V A)，在547nm的波長處測定吸收度。以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算，即得。
3線性關(guān)系的考察 精密稱取人參皂苷Rg1對照品5.03mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V A)，在547nm的波長處測定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷的量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
回歸方程Y＝0.0062X+0.0047；r＝0.9999人參皂苷Rg1在20.12～100.6μg范圍線性良好。
人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)曲線測定數(shù)據(jù)

3精密度試驗(yàn) 精密量取對照品溶液(0.0503mg/ml)1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，按正文測定法項(xiàng)下操作，連續(xù)測定5次。
精密度實(shí)驗(yàn)

5穩(wěn)定性試驗(yàn)5.1對照品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取對照品溶液(0.0503mg/ml)1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，按正文測定法項(xiàng)下操作，分別在0、10、20、40、60分鐘時(shí)測定。
對照品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

5.2供試品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取本品裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約50mg，按正文測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作，分別在0、10、20、40、60分鐘時(shí)測定。
供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

6重復(fù)性試驗(yàn) 取本品裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約50mg(共5份)，按正文測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

7回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約25mg(共5份)，精密稱定，分置25ml量瓶中；精密量取人參皂苷Rg1對照品溶液(0.662mg/ml)1ml(共5份)，精密稱定，分置上述25ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml具塞試管中，按正文測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作，以隨行溶劑為空白，依法測定吸收度，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算，即得。
中藥復(fù)方制劑中總皂苷的含量26.53mg/g加樣回收率實(shí)驗(yàn)

平均回收率＝97.71％ RSD＝0.88％8三批中試樣品含量測定取本品樣品三批，按正文所述方法處理。
三批樣品含量測定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例15中藥復(fù)方制劑中三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1含量測定1儀器與試藥1.1儀器Alltech UVIS-201高效液相色譜儀，Alltech HPLC system工作站(美國)KQ250B超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)ZK-30ABX電熱真空干燥箱(北京中興偉業(yè)儀器公司)
Mettler AE240電子天平(上海梅特勒公司)1.2試藥三七皂苷R1中國藥品生物制品檢定所人參皂苷Rg1中國藥品生物制品檢定所人參皂苷Rb1中國藥品生物制品檢定所所用甲醇、乙腈均為色譜純，均購于德國Merck公司水為重蒸水，其它試劑均為分析純。
2色譜條件色譜柱Diamonsil(TM)C18，5μm；250×4.6mm；流動(dòng)相乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫；梯度洗脫系統(tǒng)

流速1ml/min，兩次進(jìn)樣間隔平衡時(shí)間3min；檢測波長203nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μl理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
檢測波長的選擇 三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1，均在203nm波長處有最大吸收，因此選用203nm作為本品的檢測波長。
3對照品溶液的制備 取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每ml含三七皂苷R10.62mg、人參皂苷Rg11.42mg和人參皂苷Rb12.14mg的溶液，作為貯備液；再分別吸取上述溶液各1ml，置同一5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每ml含三七皂苷R10.124mg、人參皂苷Rg10.284mg和人參皂苷Rb10.428mg的對照品溶液。
4供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中精密稱取2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
5陰性供試品溶液的制備 照本品處方稱取除三七外的其它成分，按本品制備工藝制成陰性供試品。精密稱取2.40572g，照供試品溶液的制備項(xiàng)下方法制備，作為陰性供試品溶液。
6系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 根據(jù)上述色譜條件得到三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、混合對照品、樣品、陰性色譜圖，理論板數(shù)n大于3000，樣品中各對照品峰與相近峰分離清晰完全，分離度大于1.5，陰性無干擾。
7線性關(guān)系的考察 取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每ml含三七皂苷R10.62mg、人參皂苷Rg11.42mg和人參皂苷Rb12.14mg的溶液，作為貯備液；精密量取前述對照品貯備液各0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml，分置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，依次注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
回歸方程為三七皂苷R1Y＝208361.76X-1972.29 r＝0.9995；人參皂苷Rg1Y＝293933.01X-13982.75 r＝0.9994；人參皂苷Rb1Y＝192503.18X-9202.56 r＝0.9993。
結(jié)果表明三七皂苷R1在0.248-2.480μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Rg1在0.568-5.680μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Rb1在0.856-8.560μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
線性關(guān)系試驗(yàn)測定結(jié)果

8精密度試驗(yàn) 取對照品混合溶液(三七皂苷R10.124mg/ml、人參皂苷Rg10.284mg/ml和人參皂苷Rb10.428mg/ml)，連續(xù)測定5次，考察對照品溶液精密度。
精密度試驗(yàn)

9穩(wěn)定性試驗(yàn)
9.1對照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對照品混合溶液(三七皂苷R10.124mg/ml、人參皂苷Rg10.284mg/ml和人參皂苷Rb10.428mg/ml)，分別在0、2、6、10、24小時(shí)進(jìn)樣測定，考察對照品溶液穩(wěn)定性。
對照品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

9.2供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約2.5g，精密稱定，按正文供試品溶液制備下進(jìn)行操作，分別在0、2、6、10、24小時(shí)進(jìn)樣測定。
穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。
10重復(fù)性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約2.5g(共5份)，按正文測定法供試品溶液制備和測定項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性試驗(yàn)

結(jié)果表明，本法重復(fù)性較好。
11、加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約1.25g(共5份)，分別置50ml量瓶中，另精密量取混合對照品溶液4ml(其中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的濃度為0.3784mg/ml、1.4904mg/ml、2.2136mg/ml)，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
經(jīng)測定已知中藥復(fù)方制劑中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的含量分別是2.325、7.187、8.292mg/g。
三七皂苷R1加樣回收率試驗(yàn)

平均回收率＝98.28％；RSD＝0.57％。
人參苷Rg1加樣回收率試驗(yàn)

平均回收率＝96.82％；RSD＝1.07％。
人參苷Rb1加樣回收率試驗(yàn)

平均回收率＝97.52％；RSD＝0.94％。
12三批中試樣品含量測定取本品樣品三批，按正文所述方法處理。
三批樣品含量測定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例16黃芪甲苷含量測定儀器與試藥(1)主要儀器高效液相色譜儀P-426 Alltech蒸發(fā)光散射檢測器 2000ES Alltech高效液相色譜儀1100series Agilent超聲波清洗機(jī) KQ250B 昆山市超聲儀器有限公司電熱真空干燥箱ZK-30ABX北京中興偉業(yè)儀器公司電子分析天平 AE240 Mettler(2)試藥黃芪甲苷中國藥品生物制品檢定所所用甲醇、乙腈均為色譜純，均購于天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)開發(fā)公司水為重蒸水，其它試劑均為分析純。
照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定。
1色譜條件色譜柱Platinum C18 4.6×250mm 5μm；流動(dòng)相乙腈-水(32∶68)；流速1.0ml/min；蒸發(fā)光檢測器檢測漂移管溫度110℃，氣流量2.7L/min；柱溫30℃。
根據(jù)上述條件得到黃芪甲苷、供試品、陰性色譜圖；黃芪甲苷峰達(dá)到基線分離，與相近峰分離清晰完全，保留時(shí)間適中，峰形尖銳，對稱，理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
2對照品溶液的制備 分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥器減壓干燥24小時(shí)的黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，即得。
3供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中精密稱取約5g，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，和并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。
4測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl，供試品溶液200μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算黃芪甲苷的含量，即得。
5線性關(guān)系考察 精密吸取黃芪甲苷(O.2085mg/ml)對照品溶液2、4、8、12、16μl，注入液相色譜儀，以黃芪甲苷的量(μg)的常用對數(shù)值為橫坐標(biāo)，峰面積的常用對數(shù)值為縱坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
黃芪甲苷線性關(guān)系

黃芪甲苷回歸方程Y＝1.0700X+6.0705；黃芪甲苷相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999；黃芪甲苷在0.417～3.336μg范圍內(nèi)線性良好。
6精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液(0.1668mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次。
對照品溶液精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明，精密度良好。
7穩(wěn)定性試驗(yàn)7.1對照品穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液(0.1668mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，分別于0、6、12、24、48小時(shí)重復(fù)測定1次，記錄峰面積積分值。
對照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液在48小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
7.2供試品穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，分別在0、6、12、24、48小時(shí)重復(fù)測定1次，記錄峰面積積分值。
供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，供試品溶液在48小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8重復(fù)性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中精密稱取約5g(共5份)，按正文供試品溶液的制備和測定項(xiàng)下的方法進(jìn)行處理，分別從中精密吸取20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
供試品重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，重現(xiàn)性良好。
9加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中精密稱取約2.5g(共6份)，分置具塞錐形瓶中；精密吸取黃芪甲苷對照品水溶液(0.1224mg/ml)1ml(共6份)，分置上述具塞錐形瓶中，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，和并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。精密吸取續(xù)濾液20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。經(jīng)測定已知藥物組合物中黃芪甲苷的含量分別是0.06301mg/g。
黃芪甲苷加樣回收率試驗(yàn)

黃芪甲苷平均回收率＝98.37％；RSD＝0.72％10三批樣品黃芪甲苷含量測定 取中試樣品三批，按正文所述方法處理，精密吸取20μl進(jìn)樣測定。
三批中試樣品黃芪甲苷含量測定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例17中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素含量測定1儀器與試藥1.1主要儀器高效液相色譜儀 LC-2010AHTSHIMADZU紫外/可見分光光度儀TU-1810SPC北京普析通用儀器有限公司電子分析天平 BP211DSARTORIUS超聲波清洗機(jī) KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司1.2試藥甲醇分析純北京化工廠乙腈色譜純迪馬公司磷酸分析純北京化學(xué)試劑公司2芒柄花素、毛蕊芒柄花素 由中國藥品生物制品檢定所提供芒柄花素、毛蕊芒柄花素，經(jīng)高效液相色譜法(歸一化法)測定純度均大于98％，符合含量測定用對照品要求。
3檢測波長的選擇 取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品適量，精密稱定，分加甲醇制成每1ml各含約0.05mg的溶液，在190～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，芒柄花素、毛蕊芒柄花素均在250nm處有最大吸收，選擇250nm作為芒柄花素、毛蕊芒柄花素含量測定的檢測波長。
4色譜條件色譜儀SHIMADZU LC-2010AHT；色譜柱Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；流動(dòng)相甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μl；
檢測波長250nm。
對照品溶液的制備 精密稱取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.005mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.5g，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
根據(jù)上述色譜條件得到芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品、供試品色譜圖，其理論板數(shù)n均大于2000，芒柄花素、毛蕊芒柄花素色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5，溶劑無干擾。
5線性關(guān)系考察 精密量取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品混合溶液(每1ml分別含芒柄花素0.04808mg、毛蕊芒柄花素0.04912mg)0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定。分別以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
芒柄花素標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

回歸方程Y＝6249485.23x+73.50相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999結(jié)果表明芒柄花素在0.019232μg～0.09616μg范圍內(nèi)線性良好。
毛蕊芒柄花素標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

回歸方程Y＝5184777.08x-37.30相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999結(jié)果表明毛蕊芒柄花素在0.019648μg～0.09824μg范圍內(nèi)線性良好。
經(jīng)計(jì)算，芒柄花素、毛蕊芒柄花素的標(biāo)準(zhǔn)曲線均過原點(diǎn)，因此選用外標(biāo)一點(diǎn)法測定芒柄花素、毛蕊芒柄花素的含量。
6精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品混合溶液(每1ml分別含芒柄花素0.004808mg、毛蕊芒柄花素0.004912mg)10μl，注入液相色譜儀，測定5次，考察對照品溶液精密度，測定結(jié)果見下表。
精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)7.1對照品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品混合溶液(每1ml分別含芒柄花素0.004808mg、毛蕊芒柄花素0.004912mg)10μl，注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測定。
對照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
7.2供試品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測定。
供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

結(jié)果表明，供試品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品，按正文供試品溶液的制備和測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

9加樣回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.25g，精密稱定，置5ml量瓶中；精密量取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品混合溶液(每1ml分別含芒柄花素0.00956mg、毛蕊芒柄花素0.00972mg)1ml(共5份)，分置上述5ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
中藥復(fù)方制劑中芒柄花素的含量為0.04323mg/g；毛蕊芒柄花素的含量為0.04680mg/g芒柄花素加樣回收率實(shí)驗(yàn)

平均回收率＝97.76％，RSD＝0.98％
毛蕊芒柄花素加樣回收率實(shí)驗(yàn)

平均回收率＝97.56％，RSD＝0.84％10樣品含量測定 取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測定法項(xiàng)下的操作。
含量測定

具體實(shí)施方式
實(shí)施例1采用液相色譜法測定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測凍干粉針適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為80％乙腈，流動(dòng)相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動(dòng)相A的比例由15％升至70％，流動(dòng)相B的比例由85％升至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有24個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測凍干粉針中以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測凍干粉針的指紋圖譜；(6)將待測凍干粉針的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，符合下列要求I.計(jì)算待測凍干粉針的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測凍干粉針指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％。
實(shí)施例2采用液相色譜法測試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測凍干粉針適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至14分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測波長203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有15個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測凍干粉針中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測凍干粉針的指紋圖譜；(6)將待測凍干粉針的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，符合下列要求I.計(jì)算待測凍干粉針的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測凍干粉針指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％。
實(shí)施例3采用液相色譜法測定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取凍干粉針適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得；
(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為80％乙腈，流動(dòng)相B為1％冰醋酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動(dòng)相A的比例由15％升至70％，流動(dòng)相B的比例由85％升至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有26個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測凍干粉針中以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測凍干粉針的指紋圖譜；(6)將待測凍干粉針的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，符合下列要求I.計(jì)算待測凍干粉針的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測凍干粉針指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％。
實(shí)施例4采用液相色譜法測試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測凍干粉針適量，加乙醇制成每1ml含50mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加乙醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-1％冰醋酸，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至14分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測波長203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有14個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測凍干粉針中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測凍干粉針的指紋圖譜；(6)將待測凍干粉針的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，符合下列要求I.計(jì)算待測凍干粉針的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測凍干粉針指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％。
實(shí)施例5采用液相色譜法測定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密量取注射液1ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為0.2％甲酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動(dòng)相A的比例由18％升至65％，流動(dòng)相B的比例由82％降至35％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為35℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有25個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射液中以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測注射液的指紋圖譜；(6)將待測注射液的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，符合下列要求I.計(jì)算待測注射液的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測注射液針指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％。
實(shí)施例6采用液相色譜法測試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜
(1)供試品溶液的制備取注射液作為供試品溶液(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為甲醇-0.1％磷酸，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，甲醇的比例為20％，從10分鐘至40分鐘，甲醇的比例為從20％升至40％，從45分鐘至60分鐘，甲醇的比例為從400％升至80％，流速為1ml/min、檢測波長203±2nm，柱溫40℃(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有13個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射液中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射液的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，符合下列要求I.計(jì)算待測注射液的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測注射液指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％。
實(shí)施例7凍干粉針中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測凍干粉針1g，加甲醇10ml提取，離心，取上清液作為供試品溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點(diǎn)于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑。
實(shí)施例8凍干粉針中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測凍干粉針0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測波長為335nm；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例9凍干粉針中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的薄層色譜鑒別方法取待測凍干粉針5g，用正丁醇20ml提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例10凍干粉針中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的液相色譜鑒別取待測凍干粉針2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例11凍干粉針中黃芪的薄層色譜鑒別方法取待測中凍干粉針5g，加乙醇20ml提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液10ml溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至5～6，用醋酸乙酯20ml提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇10∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例12凍干粉針中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法取待測凍干粉針5g，加甲醇10ml溶解后加于中性氧化鋁柱，用40％甲醇40ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解后加水飽和正丁醇提取3次，每次10ml，和并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例13凍干粉針中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法取待測凍干粉針5g，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，和并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例14凍干粉針中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的薄層色譜鑒別方法取待測凍干粉針3g，加甲醇10ml提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水2.5∶3∶4∶0.5為展開劑，展開，展距5cm，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例15凍干粉針中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的液相色譜鑒別方法取待測凍干粉針0.5g，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至20分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測波長為250nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例16凍干粉針中野黃芩苷的含量測定取待測凍干粉針0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％50％為流動(dòng)相，檢測波長為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，該制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg。
實(shí)施例17凍干粉針中總黃酮的含量測定取待測凍干粉針0.25g，置25ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加60％乙醇溶液至刻度，搖勻，精密量取3ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，該制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計(jì)，不得少于10mg。
實(shí)施例18凍干粉針中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的含量測定取待測凍干粉針2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下幾項(xiàng)(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg。
實(shí)施例19凍干粉針中總皂苷的含量測定取待測凍干粉針50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg。
實(shí)施例20凍干粉針中黃芪甲苷的含量測定取待測凍干粉針5g，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，和并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，該制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.04mg。
實(shí)施例21凍干粉針中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的含量測定取待測凍干粉針0.5g，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測波長為250nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下兩項(xiàng)(1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg；(2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。
實(shí)施例22注射液中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測注射液10ml，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液；取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水7∶2∶1∶0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鋁乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例23注射液中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測注射液5ml，置25ml量瓶中，加水定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液45％∶55％為流動(dòng)相，檢測波長為335nm；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例24注射液中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的薄層色譜鑒別方法取待測注射液20ml，蒸干，殘?jiān)眉状?ml，作為供試品溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加二氯甲烷回流提取，棄去二氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛。崛∫杭影痹囈海秩∩蠈?，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水5∶1∶33的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例25注射液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的液相色譜鑒別取待測注射液25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在35℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例26注射液中黃芪的薄層色譜鑒別方法取待測注射液20ml，蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液10ml溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至5～6，用正丁醇20ml提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇5∶0.8為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例27注射液中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法取待測注射液20ml，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解后加于中性氧化鋁柱，用40％甲醇40ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解后加水飽和正丁醇提取3次，每次10ml，和并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙醇-水13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例28注射液中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法取待測注射液20ml，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，和并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、30％甲醇30ml、65％甲醇80ml洗脫，收集65％甲醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，30％∶70％乙腈-0.5％冰醋酸為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例29注射液中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的薄層色譜鑒別方法取待測注射液30ml，蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素中對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙醇-醋酸乙酯-水3∶4∶3∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例30注射液中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的液相色譜鑒別方法取待測注射液10ml，蒸干，殘?jiān)眉状歼m量使溶解并定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從45％升至55％，從10分鐘至20分鐘，水的比例為從55％升至65％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為65％，檢測波長為250nm，柱溫40℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例31注射液中野黃芩苷的含量測定取待測注射液30ml，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解并定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，已經(jīng)-1％冰醋酸水溶液40％∶60％為流動(dòng)相，檢測波長為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，該制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg。
實(shí)施例32注射液中總黃酮的含量測定精密量取待測注射液2.5ml，置50ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，該制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計(jì)，不得少于10mg。
實(shí)施例33注射液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量測定取待測注射液25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測注射液以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下幾項(xiàng)(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg。
實(shí)施例34注射液中總皂苷的含量測定精密量取待測注射液0.8ml，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液1ml，高氯酸4ml，搖勻，60℃水浴上加熱7分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，該注射液以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg。
實(shí)施例35注射液中黃芪甲苷的含量測定取待測注射液20ml，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，和并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、30％甲醇30ml、65％甲醇80ml洗脫，收集65％甲醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，30％∶70％乙腈-0.5％冰醋酸為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，該制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.04mg。
實(shí)施例36注射液中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的含量測定取待測注射液10ml，蒸干，殘?jiān)眉状歼m量使溶解并定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為水，梯度沈脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從45％升至55％，從10分鐘至20分鐘，水的比例為從55％升至65％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為65％，檢測波長為250nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測注射液以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下兩項(xiàng)(1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg；(2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。
實(shí)施例37片劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中的薄層色譜鑒別方法取待測片劑，粉碎，從中取約1g，加醋酸乙酯10ml提取，離心，上清液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解作為供試品溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加正丁醇提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水7∶2∶1∶∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鋁乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例38片劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取本品0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加流動(dòng)相定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.5％甲酸水溶液45％∶55％為流動(dòng)相，檢測波長為335nm；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例39片劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的薄層色譜鑒別方法取本品10g，用水溶解，濾過，濾液用水飽和正丁醇20ml提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右掖?ml溶解，作為供試品溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加乙醚回流提取，棄去乙醚液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓鳛閷φ账幉娜芤?；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇-水10∶35∶20∶8在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例40片劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的液相色譜鑒別取本品10g，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，已經(jīng)-0.5％甲酸為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至13分鐘，乙腈的比例為18％，從13分鐘至20分鐘，乙腈的比例由18％上升至42％，從20分鐘至25分鐘，乙腈的比例為42％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在40℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例41片劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法取本品10g，加正丁醇20ml提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液10ml溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至5～6，用醋酸乙酯20ml提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醇9∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例42片劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法取本品10g，加乙醇40ml超聲處理使溶解，取出，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解后加于中性氧化鋁柱，用50％乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解后加水飽和正丁醇提取3次，每次10ml，和并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-水15∶5∶5的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例43片劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法取本品10g，加水20ml溶解后用醋酸乙酯提取，每次40ml，和并醋酸乙酯液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，醋酸乙酯液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、35％乙醇50ml、65％乙醇50ml洗脫，收集65％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，45％∶55％甲醇-0.5％甲酸為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例44片劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的薄層色譜鑒別方法取本品6g，加甲醇10ml提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水3∶2∶5∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例45片劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的液相色譜鑒別方法取本品1g，精密稱定，置5ml量瓶中，加流動(dòng)相適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加流動(dòng)相定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05％磷酸水溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，流動(dòng)相B的比例為從45％升至55％，從10分鐘至20分鐘，流動(dòng)相B的比例為從55％升至65％，從30分鐘至50分鐘，流動(dòng)相B的比例為65％，檢測波長為250nm，柱溫35℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例46片劑中野黃芩苷的含量測定取本品0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加流動(dòng)相定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.5％甲酸水溶液45％∶55％為流動(dòng)相，檢測波長為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，該制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg。
實(shí)施例47片劑中總黃酮的含量測定取本品0.5g，置25ml量瓶中，加甲醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇液至刻度，搖勻，精密量取3ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，該制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計(jì)，不得少于10mg。
實(shí)施例48片劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量測定取本品10g，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，已經(jīng)-0.5％甲酸為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至13分鐘，乙腈的比例為18％，從13分鐘至20分鐘，乙腈的比例由18％上升至42％，從20分鐘至25分鐘，乙腈的比例為42％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在40℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下幾項(xiàng)(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg。
實(shí)施例49片劑中總皂苷的含量測定取本品0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加3％香草醛-冰醋酸溶液1ml，高氯酸2.0ml，搖勻，70℃水浴上加熱10分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg。
實(shí)施例50片劑中黃芪甲苷的含量測定取本品10g，加水20ml溶解后用醋酸乙酯提取，每次40ml，和并醋酸乙酯液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，醋酸乙酯液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、35％乙醇50ml、65％乙醇50ml洗脫，收集65％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，45％∶55％甲醇-0.5％甲酸為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，該制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.04mg。
實(shí)施例51凍干粉針中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的含量測定取本品粉末1g，精密稱定，置5ml量瓶中，加流動(dòng)相適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加流動(dòng)相定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05％磷酸水溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，流動(dòng)相B的比例為從45％升至55％，從10分鐘至20分鐘，流動(dòng)相B的比例為從55％升至65％，從30分鐘至50分鐘，流動(dòng)相B的比例為65％，檢測波長為250nm，柱溫35℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下兩項(xiàng)(1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg；(2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。
權(quán)利要求
1.一種以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)指紋圖譜測試，包括以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種；(2)燈盞細(xì)辛對照藥材、黃芪對照藥材、三七對照藥材、野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、總皂苷、總黃酮中全部或部分成分的含量測試方法。
2.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量燈盞細(xì)辛和黃芪藥材中的主要活性成分對照品，包括野黃芩苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為0.5％～100％乙腈溶液或甲醇-0.005mol/L～5mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～5mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190～400nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～50個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±20％；b、采用液相色譜法測試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量黃芪和三七藥材中的主要活性成分對照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、黃芪甲苷中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈或甲醇-水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190～400nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～40個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±20％。
3.按照權(quán)利要求2所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相A為80％乙腈，流動(dòng)相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動(dòng)相A的比例由15％升至70％，流動(dòng)相B的比例由85％降至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以燈盞細(xì)辛、黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10％；b、采用液相色譜法測試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至14分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測波長203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個(gè)；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計(jì)算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10％。
4.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷對照品中的一種或兩種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和燈盞細(xì)辛對照藥材溶液、野黃芩苷對照品溶液的一種或兩種各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.3％～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液或0.3～10％三氯化鐵乙醇溶液，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視或105℃烘1～15分鐘后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；b、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液2％～30％∶2％～30％∶96％～40％或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測波長為200～410nm；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；c、中藥復(fù)方制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，用正丁醇或乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚回流提取，棄去三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚液，殘?jiān)铀柡驼〈蓟虼姿嵋阴ヌ崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙猓鳛閷φ账幉娜芤?；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，80℃～160℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；d、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液5％～40％∶95％～60％為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；e、中藥復(fù)方制劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.05％～5％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至3～6，用醋酸乙酯或正丁醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴セ蚣状蓟蛞掖既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇1～30∶0.2～10為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；f、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇溶解后加于中性氧化鋁柱，用10％～70％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀芙夂蠹铀柡驼〈继崛?，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水1～30∶1～20∶0.2～10的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％～50％硫酸乙醇溶液，80～160℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；g、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，15％～85％∶85％～15％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測波長為190～410nm或蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；h、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品中的一種或兩種，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水0.5～10∶1～15∶1～20∶0.1～3為展開劑，展開，取出，晾干，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜與對照藥材相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；i、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇或乙腈，流動(dòng)相B為水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測波長為190～410nm，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
5.按照權(quán)利要求4所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷中的一種或幾種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點(diǎn)于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑；b、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測波長為335nm；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；c、中藥復(fù)方制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，用正丁醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；d、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；e、中藥復(fù)方制劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加乙醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至5～6，用醋酸乙酯提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；另取黃芪對照藥材、同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇10∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；f、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱，用40％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀芙夂蠹铀柡驼〈继崛?，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；g、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解后用水飽和正丁醇提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；h、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素中的一種或兩種，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水2.5∶3∶4∶0.5為展開劑，展開，展距5cm，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；i、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至20分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測波長為250nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
6.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑含量的測試方法應(yīng)包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液2％～30％∶2％～30％∶96％～40％或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測波長為200～410nm；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于2mg；b、中藥復(fù)方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，用甲醇或水溶解并稀釋至合適濃度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在335±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算；或取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解并稀釋至合適濃度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，加50％甲醇或水1～25ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4～10ml，再加50％甲醇或水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以蘆丁或野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在500±10nm處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以蘆丁或野黃芩苷計(jì)，不得少于5mg；c、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于2.5mg；每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于3.5mg；每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.25mg；每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于6mg；d、中藥復(fù)方制劑中總皂苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，搖勻，30～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以黃芪甲苷或人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以黃芪甲苷或人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1計(jì)，不得少于10mg；e、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，15％～85％∶85％～15％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測波長為190～410nm或蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.02mg；f、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇或乙腈，流動(dòng)相B為水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測波長為190～410nm，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或兩項(xiàng)(1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.01mg；(2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.01mg。
7.按照權(quán)利要求6所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑含量的測試方法是以下一種或幾種方法a、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測波長為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg；b、中藥復(fù)方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計(jì)，不得少于10mg；c、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg；d、中藥復(fù)方制劑中總皂苷的含量測定取待測藥物適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg；e、中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解后用水飽和正丁醇提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.04mg；f、中藥復(fù)方制劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測波長為250nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或兩項(xiàng)(1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg；(2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。
8.按照權(quán)利要求6或7所述的以燈盞細(xì)辛、三七、黃芪制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射制劑的含量測定結(jié)果，按照重量百分比計(jì)算，野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、總皂苷、總黃酮中的全部或部分物質(zhì)的總含量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由燈盞細(xì)辛、三七、黃芪或其提取物、有效部位制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法包括該組方制劑中燈盞細(xì)辛、黃芪、三七的指紋圖譜測試方法和/或鑒別測試方法和/或含量測定方法，本發(fā)明為該組方制劑的質(zhì)量控制提供了一種可靠、穩(wěn)定、全新的方法，使該制劑的工藝控制更加嚴(yán)格合理，質(zhì)量更加穩(wěn)定，同時(shí)為大生產(chǎn)提供了可靠穩(wěn)定的檢測方法，為確?；颊哂盟幍挠行?、安全性提供了數(shù)字化的說明。
文檔編號A61K36/258GK1951426SQ20051010939
公開日2007年4月25日 申請日期2005年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月19日
發(fā)明者于文風(fēng) 申請人:北京奇源益德藥物研究所