專利名稱：2位含脯氨酸或環(huán)狀氨基酸的肽類內(nèi)皮素受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有內(nèi)皮素受體拮抗活性的2位含脯氨酸或環(huán)狀氨基酸的肽類衍生物，其制備方法，含它們的藥物組合物及它們?cè)陬A(yù)防或治療與內(nèi)皮素及前列腺有關(guān)疾病的用途。
背景技術(shù)：
內(nèi)皮素(Endothelin，簡(jiǎn)稱ET)是由血管內(nèi)皮分泌的，它們是一類迄今發(fā)現(xiàn)的收縮血管作用最強(qiáng)的生物因子之一。人類或其它哺乳動(dòng)物基因組存在三種分別編碼內(nèi)皮素的基因，形成的大內(nèi)皮素在內(nèi)皮素轉(zhuǎn)換酶的作用下，轉(zhuǎn)變?yōu)镋T-1、ET-2、ET-3。它們均為二十一肽，含有兩個(gè)二硫橋鍵。ET-1不但表達(dá)于非血管細(xì)胞，而且是唯一存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮素。ET-2和ET-3主要在腦、腎和腎上腺及小腸中。ET與靶細(xì)胞中的特異受體結(jié)合，最終產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)。迄今已發(fā)現(xiàn)三類ET受體，即ETA，ETB，和ETC。ETA主要分布于主動(dòng)脈、心房、胎盤，肺、腦血管及腎臟血管的平滑肌中；ETB存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、脈落叢上皮細(xì)胞、肺、胎血、腎小球內(nèi)皮、心室、腦中等，在血管平滑肌也有分布；ETC則主要分布于內(nèi)皮細(xì)胞中。三種受體對(duì)各型ET的親和力不同。內(nèi)皮素及受體在人體內(nèi)具有廣泛的生理病理學(xué)反應(yīng)。參與了如高血壓、充血性心衰、心肌缺血、腦窒息、休克、急性腎衰、肺源性高血壓、血管痙攣性疾病等過(guò)程。因此ET受體被認(rèn)為是治療心腦血管疾病的切實(shí)可行的新靶點(diǎn)，其受體拮抗劑有助于預(yù)防/治療心腦血管疾病。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是尋找水溶性良好的新的內(nèi)皮素受體拮抗劑。
本發(fā)明人經(jīng)研究，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)式(I)肽類衍生物R-CO-AA1-AA2-AA3-OH式(I)
或其立體異構(gòu)體具有良好的內(nèi)皮素受體拮抗活性，而且水溶性良好，因此式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體可作為藥物用于預(yù)防或治療與內(nèi)皮素及前列腺有關(guān)的疾病。
本發(fā)明第一方面涉及式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團(tuán) 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數(shù)，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當(dāng)n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為ABO；m1、m2、m3和m4為0，1，2整數(shù)，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當(dāng)它們?yōu)镹H或CH2時(shí)，可作為N端結(jié)構(gòu)R，形式為N或CH；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為DAD；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為CSO；z為O、S、NH、CH2；k為N、Ck1(k1為H、CH3、CH2CH3)；j為H、CH3、CH2CH3、CH1(CH3)2；當(dāng)z＝NH，k＝N，j＝H，R為哌嗪基；當(dāng)z＝O，k＝N，j＝H，R為嗎啉基；AA1為L(zhǎng)或D型Ser、Thr、Phe、Cys、Gln、Asn、Ala、Ile、Leu、MeVal、Val或其它脂肪族非天然氨基酸，如β-Ala、γ-氨基丁酸、或氨基異丁酸；AA2為如下結(jié)構(gòu)(包括D構(gòu)型和L構(gòu)型) 式中n為0、1、2整數(shù)；A為O、S、CH2；R1為H、COOH、OH；R2為H、COOH、OH；R3為H、COOH、OH；R1，R2，R3中有且只有一個(gè)為COOH；其中，當(dāng)n＝0，A＝CH2，R1＝COOH，R2＝R3＝H時(shí)，AA2為脯氨酸；當(dāng)n＝0，A＝CH2，R1＝COOH，R2＝OH，R3＝H時(shí)AA2為羥脯氨酸；AA3為D型的非天然芳香性氨基酸、色氨酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。
本發(fā)明還涉及含至少一種式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團(tuán) 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數(shù)，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當(dāng)n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為ABO；m1、m2、m3和m4為0，1，2整數(shù)，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當(dāng)它們?yōu)镹H或CH2時(shí)，可作為N端結(jié)構(gòu)R，形式為N或CH；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為DAD；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為CSO；z為O、S、NH、CH2；k為N、Ck1(k1為H、CH3、CH2CH3)；j為H、CH3、CH2CH3、CH1(CH3)2；當(dāng)z＝NH，k＝N，j＝H，R為哌嗪基；當(dāng)z＝O，k＝N，j＝H，R為嗎啉基；AA1為L(zhǎng)或D型Ser、Thr、Phe、Cys、Gln、Asn、Ala、Ile、Leu、MeVal、Val或其它脂肪族非天然氨基酸，如β-Ala、γ-氨基丁酸、或氨基異丁酸；AA2為如下結(jié)構(gòu)(包括D構(gòu)型和L構(gòu)型)
式中n為0、1、2整數(shù)；A為O、S、CH2；R1為H、COOH、OH；R2為H、COOH、OH；R3為H、COOH、OH；R1，R2，R3中有且只有一個(gè)為COOH。其中，當(dāng)n＝0，A＝CH2，R1＝COOH，R2＝R3＝H時(shí)，AA2為脯氨酸；當(dāng)n＝0，A＝CH2，R1＝COOH，R2＝OH，R3＝H時(shí)AA2為羥脯氨酸；AA3為D型的非天然芳香性氨基酸、色氨酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。
本發(fā)明還涉及制備式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體的方法，其包括1)將化合物RCO-A-OH與B-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成RCO-A-B-OP，其中R，A和B，如前面所定義，P為C1-4烷基。
2)將1)中所得產(chǎn)物在1M堿/醇溶液中皂化，然后用酸酸化，生成RCO-A-B-OH。
3)將2)中產(chǎn)物RCO-A-B-OH與C-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成RCO-A-B-C-OP，其中P為C1-4烷基。所得產(chǎn)物如2)中所述進(jìn)行皂化反應(yīng)，生成式(I)RCO-A-B-C-OH。
4)將2)中產(chǎn)物RCO-A-B-OH在THF、NMM中與氯甲酸異丁酯反應(yīng)5-10分鐘，再加入C-ONa，生成RCO-A-B-C-ONa，然后用酸酸化，生成式(I)RCO-A-B-C-OH。
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，其包括式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體及藥用載體或賦形劑。
本發(fā)明還涉及式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體在預(yù)防或治療與內(nèi)皮素及前列腺有關(guān)疾病或癥狀的藥物中用途。
本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)“式(I)肽類衍生物立體異構(gòu)體”是指其相應(yīng)的D-或L-立體構(gòu)型。
根據(jù)該發(fā)明，式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體包含下面2位為D型脯氨酸的化合物序列1R-CO-AA1-D-Pro-D-Phe(4-Cl)-OHR＝ABO，DAD，HIM，MOP；AA1＝Ser，Thr，Phe，Cys，Gln，Asn，Ala，Ile，Leu，MeVal，Val。
序列2R-CO-AA1-D-Pro-D-Phe(4-F)-OHR＝ABO，DAD，HIM，MOP；AA1＝Ser，Thr，Phe，Cys，Gln，Asn，Ala，Ile，Leu，MeVal，Val。
序列3R-CO-AA1-D-Pro-D-Trp-OHR＝ABO，DAD，HIM，MOP；AA1＝Ser，Thr，Phe，Cys，Gln，Asn，Ala，Ile，Leu，MeVal，Val。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體可按本領(lǐng)域已知方法、文獻(xiàn)方法或下面所示的反應(yīng)路線1制備反應(yīng)路線1 在反應(yīng)路線1中式R-CO-AA1-OH化合物(其中R，AA1如上定義)與AA2-OP(其中AA2如上定義，P為C1-4烷基，其可選自甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，優(yōu)選甲基和乙基)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成R-CO-AA1-AA2-OP化合物(其中R，AA1，AA2，P如上定義)。將R-CO-AA1-AA2-OP化合物在1M NaOH/甲醇溶液中皂化，然后用鹽酸酸化，生成R-CO-AA1-AA2-OH化合物(其中R，AA1，AA2如上定義)。將式R-CO-AA1-AA2-OH與AA3-OP(其中AA3，P如上定義)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成式R-CO-AA1-AA2-AA3-OP(其中R，AA1，AA2，AA3，P如上定義)化合物。然后將所得R-CO-AA1-AA2-AA3-OP在1M NaOH/甲醇溶液中皂化，然后用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH。或者將化合物R-CO-AA1-AA2-OH在THF、NMM中與氯甲酸異丁酯反應(yīng)，再與AA3-ONa生成R-CO-AA1-AA2-AA3-ONa，然后用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH三肽衍生物或其立體異構(gòu)體。
根據(jù)該發(fā)明，式(I)肽類衍生物立體異構(gòu)體是指其相應(yīng)的D-或L-立體構(gòu)型。
根據(jù)該發(fā)明，式(I)肽類衍生物及其立體異構(gòu)體在動(dòng)物抗ET1受體模型中顯示出優(yōu)良效果，因此可作為心腦血管藥用于動(dòng)物，優(yōu)選用于哺乳動(dòng)物，特別是人。
本發(fā)明因此還涉及含有作為活性成分的有效劑量的至少一種式(I)肽類衍生物和/或其立體異構(gòu)體以及常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法制備。用于此目的時(shí)，如果需要，可將式(I)肽類衍生物和/或其立體異構(gòu)體與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?br> 本發(fā)明式(I)肽類衍生物及其立體異構(gòu)體或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。給藥劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質(zhì)體、透皮劑、口含片、栓劑、凍干粉針劑等?？梢允瞧胀ㄖ苿?、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子，如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、硫酸鈣、氯化鈉、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤(rùn)劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進(jìn)劑，如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤(rùn)滑劑，如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級(jí)醇、高級(jí)醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中制成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。為了將給藥單元制成注射用制劑，如溶液劑、乳劑、凍干粉針劑和混懸劑，可以使用本領(lǐng)域常用的所有稀釋劑，如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧基化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
本發(fā)明式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動(dòng)物的性別、年齡、體重及個(gè)體反應(yīng)，所用的具體化合物，給藥途徑及給藥次數(shù)等。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個(gè)，例如二、在、四個(gè)劑量形式給藥。
在本發(fā)明中使用的縮寫(xiě)具有下面的含義Ala-丙氨酸，Asn-天冬酰胺，DAD-1，4-二氧-8-氮雜螺[4，5]癸烷，DCC-二環(huán)己基碳二亞胺，DCM-二氯甲烷，DMF-二甲基甲酰胺，GABA-γ-氨基丁酸，Gly-甘氨酸，Gln-谷氨酰胺，HIM-六亞甲基亞胺，HMPA-六甲基膦酰胺，HOBt-1-羥基苯并三唑，Ile-異亮氨酸，Leu-亮氨酸，MeVal-甲基纈氨酸，Mob-β-胡椒基丙氨酸，MOP-嗎啡啉，NMM-N-甲基嗎啡啉，Phe-苯丙氨酸，
Phg-苯基甘氨酸，Pro-脯氨酸，Pya-β-吡啶基丙氨酸，Ser-絲氨酸，TEA-三乙胺，THF-四氫呋喃，Thr-蘇氨酸，Trp-色氨酸，Trt-三苯甲基，Val-纈氨酸，本發(fā)明中，所有氨基酸構(gòu)型除注明為D-型外，均為L(zhǎng)-型。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例下面的實(shí)例及生物活性實(shí)驗(yàn)用來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但這并不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限制。
實(shí)施例化合物熔點(diǎn)由RY-1型熔點(diǎn)儀測(cè)定，溫度未經(jīng)校正；1H NMR圖譜由Bruker ARX 400型或US Varian Unity Inova 600型核磁儀測(cè)定；FAB質(zhì)譜由Zabspect高分辨磁質(zhì)譜儀測(cè)定；元素分析由CarloErba 1106型元素分析儀測(cè)定；紫外光譜由UV-260紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定；紅外光譜由Magna IRTM550紅外儀測(cè)定。實(shí)施例制備所用反應(yīng)試劑均為商品化產(chǎn)品。
實(shí)施例1HIM-CO-Leu-D-Pro-D-Phe(4-Cl)-OH的制備將D-脯氨酸甲酯鹽酸鹽83毫克(0.5mmol)，溶于2毫升DMF中，加入N-甲基嗎啡啉55微升(0.5mmol)，使其溶解，加入HIM-CO-Leu-OH128毫克(0.5mmol)，用2毫升DCM溶解。冰浴條件下加入HOBt71毫克(0.525mmol)和DCC108毫克(0.525mmol)。繼續(xù)保持冰浴0.1-5小時(shí)后，室溫反應(yīng)1-10小時(shí)。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分別用1％-30％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉各洗三次，乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥3-6小時(shí)。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無(wú)色油狀物。將該油狀物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌，TLC檢測(cè)，待反應(yīng)完全后，用1％-30％檸檬酸酸化至pH2-4左右，析出固體，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌后，用無(wú)水硫酸鈉干燥3-6小時(shí)。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無(wú)色油狀物。冰浴下加入石油醚，析出固體，濾集干燥得176毫克固體(100％)。將該固體溶于2毫升DCM中，加入125毫克D-4-氯苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，用2毫升DMF溶解，再加入N-甲基嗎啡啉55微升(0.5mmol)。冰浴條件下加入HOBt71毫克(0.525mmol)和DCC108毫克(0.525mmol)。繼續(xù)保持冰浴0.1-5小時(shí)后，室溫反應(yīng)1-10小時(shí)。濃縮，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分別用1％-30％檸檬酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉各洗三次，乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉干燥3-6小時(shí)。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無(wú)色油狀物。將該油狀物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌，TLC檢測(cè)，待反應(yīng)完全后，用1％-30％檸檬酸酸化至pH2-4左右，析出固體，乙酸乙酯提取，飽和氯化鈉溶液洗滌后，用無(wú)水硫酸鈉干燥3-6小時(shí)。濾除干燥劑，濃縮濾液，得無(wú)色油狀物。冰浴下加入石油醚，析出固體，濾集干燥得251毫克固體(93.7％)。MS[M+H]＝535.5。TLC檢測(cè)氯仿∶甲醇∶冰醋酸(10∶1∶0.5)，Rf＝0.69。
按照實(shí)施例1的方法合成的化合物舉例

其余化合物也均按照實(shí)施例1的方法和途徑合成。
生物活性實(shí)驗(yàn)材料Wistar大鼠 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心臺(tái)式自動(dòng)平衡記錄儀 上海大華儀器廠ET-1American peptide company10％碳酸鉀自配改良Kreb’s-Ringer緩沖液自配抗ET-1致離體大鼠主動(dòng)脈環(huán)收縮實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法樣品溶液的配制定量稱取樣品2×10-6摩爾，加入120微升10％堿金屬碳酸鹽和1-80微升DMSO溶解，用改良Kreb’s-Ringer緩沖液定量稀釋為5.0毫升，作為貯備液冰箱中保存。用緩沖液稀釋為10-6、10-7、10-8和10-9摩爾四個(gè)濃度。
體外血管實(shí)驗(yàn)將大鼠斷頭處死，迅速開(kāi)胸，摘取主動(dòng)脈，置于盛有血管營(yíng)養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，清除血污，仔細(xì)分離血管周圍組織，剪成長(zhǎng)約3毫米的動(dòng)脈環(huán)，分別將兩根直徑為0.1毫米的不銹鋼鋼絲小心穿入，做成三角環(huán)狀。隨后置于盛有10毫升血管營(yíng)養(yǎng)液的37℃恒溫浴槽中，下端固定，上端通遷張力換能器連于臺(tái)式自動(dòng)平衡記錄儀，持續(xù)通入95％氧氣和5％二氧化碳混合氣。動(dòng)脈環(huán)負(fù)荷0.5克，穩(wěn)定后開(kāi)始給藥。
拮抗實(shí)驗(yàn)先用10nM量的ET-1誘發(fā)血管環(huán)收縮，約10分鐘左右，達(dá)到平臺(tái)后，給予10-9M樣品，觀察拮抗收縮效應(yīng)。當(dāng)?shù)蜐舛葲](méi)效時(shí)，逐漸升高濃度至10-6M。
結(jié)果按照上述方法，測(cè)試了已合成化合物，大部分表現(xiàn)出較強(qiáng)的拮抗活性。舉例如下LKGF004(DAD-CO-Leu-D-Pro-D-Trp-OH)的IC50為2.22nM，LKGF005(DAD-CO-Leu-D-Pro-D-Phe(4-Cl)-OH)的IC50為6.80nM。
抗ET-1誘發(fā)整體大鼠血壓升高實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法Wistar大鼠，雄性，戊巴比妥鈉50～60mg/kg腹腔麻醉，切開(kāi)頸部皮膚，分離皮下組織，做氣管插管術(shù)，右側(cè)頸動(dòng)脈插管，并與壓力換能器相連，穩(wěn)定10～15min后靜注ET-1，記錄ET-1給藥前及給藥后5、10、20、30min血壓變化。計(jì)算預(yù)防給藥后ET-1誘發(fā)高血壓大鼠的頸動(dòng)脈血壓升高幅度。
用以上方法測(cè)試了已合成化合物，大部分有明顯的降壓活性，舉例如下

權(quán)利要求
1.式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體R-CO-AA1-AA2-AA3-OH式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團(tuán) 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數(shù)，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當(dāng)n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為ABO；m1、m2、m3和m4為0，1，2整數(shù)，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當(dāng)它們?yōu)镹H或CH2時(shí)，可作為N端結(jié)構(gòu)R，形式為N或CH；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為DAD；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為CSO；z為O、S、NH、CH2；k為N、Ck1(k1為H、CH3、CH2CH3)；j為H、CH3、CH2CH3、CH1(CH3)2；當(dāng)z＝NH，k＝N，j＝H，R為哌嗪基；當(dāng)z＝0，k＝N，j＝H，R為嗎啉基；AA1為L(zhǎng)或D型Ser、Thr、Phe、Cys、Gln、Asn、Ala、Ile、Leu、MeVal、Val或其它脂肪族非天然氨基酸，如β-Ala、γ-氨基丁酸、或氨基異丁酸；AA2為如下結(jié)構(gòu)(包括D構(gòu)型和L構(gòu)型) 式中n為0、1、2整數(shù)；A為O、S、CH2；R1為H、COOH、OH；R2為H、COOH、OH；R3為H、COOH、OH；R1，R2，R3中有且只有一個(gè)為COOH。其中，當(dāng)n＝0，A＝CH2，R1＝COOH，R2＝R3＝H時(shí)，AA2為脯氨酸；當(dāng)n＝0，A＝CH2，R1＝COOH，R2＝OH，R3＝H時(shí)AA2為羥脯氨酸；AA3為D型的非天然芳香性氨基酸、色氨酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。
2.權(quán)利要求1的肽類衍生物或其立體異構(gòu)體包含下面2位為D型脯氨酸的化合物1R-CO-AA1-D-Pro-D-Phe(4-Cl)-OHR＝ABO，DAD，HIM，MOP；AA1＝Ser，Thr，Phe，Cys，Gln，Asn，Ala，Ile，Leu，MeVal，Val；2R-CO-AA1-D-Pro-D-Phe(4-F)-OHR＝ABO，DAD，HIM，MOP；AA1＝Ser，Thr，Phe，Cys，Gln，Asn，Ala，Ile，Leu，MeVal，Val；3R-CO-AA1-D-Pro-D-Trp-OHR＝ABO，DAD，HIM，MOP；AA1＝Ser，Thr，Phe，Cys，Gln，Asn，Ala，Ile，Leu，MeVal，Val。
3.藥物組合物，其包括至少一種式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體及藥用載體或賦形劑，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH式(I)其中，R為雙取代鏈烴亞胺基、六亞甲基亞胺基或以下基團(tuán) 式中n1、n2、n3為0，1，2，3整數(shù)，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1為NH、O、S、CH2；X2為N、CH；當(dāng)n1＝n2＝1，n3＝2，X1為CH2，X2為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為ABO；m1、m2、m3和m4為0，1，2整數(shù)，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3為CH2、O、S和NH，當(dāng)它們?yōu)镹H或CH2時(shí)，可作為N端結(jié)構(gòu)R，形式為N或CH；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2為O原子，y3為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為DAD；當(dāng)m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3為CH2，y1為O原子，y2為N原子時(shí)，R縮寫(xiě)為CSO；z為O、S、NH、CH2；k為N、Ck1(k1為H、CH3、CH2CH3)；j為H、CH3、CH2CH3、CH1(CH3)2；當(dāng)z＝NH，k＝N，j＝H，R為哌嗪基；當(dāng)z＝0，k＝N，j＝H，R為嗎啉基；AA1為L(zhǎng)或D型Ser、Thr、Phe、Cys、Gln、Asn、Ala、Ile、Leu、MeVal、Val或其它脂肪族非天然氨基酸，如β-Ala、γ-氨基丁酸、或氨基異丁酸；AA2為如下結(jié)構(gòu)(包括D構(gòu)型和L構(gòu)型) 式中n為0、1、2整數(shù)；A為O、S、CH2；R1為H、COOH、OH；R2為H、COOH、OH；R3為H、COOH、OH；R1，R2，R3中有且只有一個(gè)為COOH。其中，當(dāng)n＝0，A＝CH2，R1＝COOH，R2＝R3＝H時(shí)，AA2為脯氨酸；當(dāng)n＝0，A＝CH2，R1＝COOH，R2＝OH，R3＝H時(shí)AA2為羥脯氨酸；AA3為D型的非天然芳香性氨基酸、色氨酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香環(huán)中的苯基可在2、3、4或5位上被選自鹵素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基單取代或二取代。
4.權(quán)利要求3的藥物組合物，其中式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體包含下列2位為D型脯氨酸的化合物1R-CO-AA1-D-Pro-D-Phe(4-Cl)-OHR＝ABO，DAD，HIM，MOP；AA1＝Ser，Thr，Phe，Cys，Gln，Asn，Ala，Ile，Leu，MeVal，Val；2R-CO-AA1-D-Pro-D-Phe(4-F)-OHR＝ABO，DAD，HIM，MOP；AA1＝Ser，Thr，Phe，Cys，Gln，Asn，Ala，Ile，Leu，MeVal，Val；3R-CO-AA1-D-Pro-D-Trp-OHR＝ABO，DAD，HIM，MOP；AA1＝Ser，Thr，Phe，Cys，Gln，Asn，Ala，Ile，Leu，MeVal，Val。
5.式(I)肽類衍生物或其立體異構(gòu)體衍生物的制備方法，其包括1)將化合物R-CO-AA1-OH與AA2-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成R-CO-AA1-AA2-OP，其中R，AA1，AA2，如權(quán)利要求1中定義，P為C1-4烷基。2)將1)中所得產(chǎn)物在1MNaOH/甲醇溶液中皂化，然后用鹽酸酸化，生成R-CO-AA1-AA2-OH；3)將2)中產(chǎn)物R-CO-AA1-AA2-OH與AA3-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成R-CO-AA1-AA2-AA3-OP，其中P為C1-4烷基。所得產(chǎn)物在1MNaOH/甲醇溶液中皂化，然后用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH。4)將2)中產(chǎn)物R-CO-AA1-AA2-OH在THF、NMM中與氯甲酸異丁酯反應(yīng)5-10分鐘，再加 AA3-ONa，生成R-CO-AA1-AA2-AA3-ONa，然后用鹽酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有內(nèi)皮素受體拮抗活性的2位含脯氨酸或環(huán)狀氨基酸的肽類衍生物，其制備方法，含它們的藥物組合物及它們?cè)谥委熍c內(nèi)皮素及前列腺有關(guān)疾病的用途。
文檔編號(hào)A61P13/08GK1951955SQ20051010945
公開(kāi)日2007年4月25日 申請(qǐng)日期2005年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月20日
發(fā)明者劉克良, 高鋒, 董俊軍, 宮澤輝, 董華進(jìn), 鄭建全 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所