專利名稱：促進人體轉(zhuǎn)錄因子NF－κB活化的多核苷酸及其編碼多肽和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及基因表達調(diào)控領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一類新的編碼具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的蛋白的多核苷酸，及其編碼的多肽，多肽的抗體。本發(fā)明還涉及所述多肽、抗體在制備預(yù)防和治療與人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB相關(guān)的疾病，尤其炎癥、過敏性疾病、自身免疫病和腫瘤的藥物以及在開發(fā)調(diào)節(jié)淋巴細胞的活化、增殖和凋亡藥物上的用途。

背景技術(shù)：
細胞核因子NF-κB是人體最重要的轉(zhuǎn)錄因子之一，它參與誘導(dǎo)多種細胞及病毒化基因的表達，在多種類型細胞的基因表達調(diào)節(jié)中起多效性作用。這些基因?qū)ρ装Y、免疫和凋亡信號進行應(yīng)答而被激活，其中包括許多細胞因子、趨化因子、受體、粘附分子等。NF-κB也參與病毒啟動子轉(zhuǎn)錄的起始，例如I型人類免疫缺陷病毒(HIV-1)。
哺乳動物的NF-κB包含5種蛋白p65(RelA)、p50(NF-κB-1)、RelB、c-Rel、p52(NF-κB-2、p50B)，它們在氨基末端區(qū)有300個氨基酸相似，稱為Rel同源區(qū)。5種NF-κB蛋白質(zhì)分子可以形成同源或異源二聚體，以不同的結(jié)合特異性與特定的DNA識別部位結(jié)合，具有不同的反式激活活性。
由于NF-κB的活化能夠促進許多前炎癥因子的轉(zhuǎn)錄表達，所以，NF-κB的過度活化會引起炎癥的發(fā)生、過敏性疾病以及自身免疫??；由于NF-κB的活化能夠促進細胞生長抑制凋亡，所以其在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起重要的作用；此外，NF-κB的活化能夠阻斷一些細胞的凋亡，所以其在調(diào)節(jié)細胞的生長分化方面也具有重要的功能。
TNFα(腫瘤壞死因子α)、PMA(十四酸波沸酯)、IL-1(白細胞介素-1)、LPS(脂多糖)均可以促進NF-κB活化；MEKK(有絲分裂原活化蛋白激酶的激酶的激酶)、TRAF(腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子)等NF-κB信號通路正調(diào)節(jié)基因的表達也可以促進NF-κB活化；而IL-10(白細胞介素-10)、FK506(藤霉素)、糖皮質(zhì)激素、阿司匹林等則能明顯地抑制NF-κB的活化。
鑒于NF-κB在調(diào)節(jié)人體生理功能，以及在多種疾病的發(fā)生、發(fā)展中所起的重要作用(BurkeJ.R.Curr Opin Drug Discov Devel.2003 6(5)，720-8)，NF-κB的抑制劑和抑制基因在炎性疾病和腫瘤性疾病的治療中必將有著重要應(yīng)用。目前NF-κB活化調(diào)節(jié)領(lǐng)域已經(jīng)成為基礎(chǔ)醫(yī)學、臨床醫(yī)學研究以及藥物開發(fā)的一個焦點，例如I-KappaB-α、I-KappaB-β等與NF-κB活化有關(guān)的調(diào)節(jié)蛋白(美國專利5,597,898)。此外，NF-κB的許多負向調(diào)節(jié)物如抗白細胞介素-1的治療，抗腫瘤壞死因子的治療，激素治療，阿斯匹林，非激素類抗炎藥物等(參考綜述文章Nature ReviewImmunology，2002，2∶725；J Clin Invest，January 2001，Volume 107，Number 2，135-142)已被廣泛應(yīng)用于臨床，但這些藥物存在有特異性不強、抑制不夠明顯、不夠穩(wěn)定的缺點，而且往往有副作用。因此，有必要進一步探索抑制NF-κB活化的新的調(diào)控基因，并研究其在細胞內(nèi)的表達對NF-κB活化的調(diào)節(jié)功能，從而為開發(fā)治療炎癥、過敏性疾病、自身免疫病以及腫瘤的藥物提供必要的依據(jù)。


發(fā)明內(nèi)容
人基因組學研究目前是國際上的熱點，除大規(guī)模測序的方法外，還缺少從功能研究開始的高通量篩選具有功能的基因的方法。針對這種現(xiàn)狀及現(xiàn)有藥物或試劑的不足，本發(fā)明的目的是提供一類新的編碼具有促進人體轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化的蛋白的多核苷酸NFAF1、2、3、4、5、6這類多核苷酸的表達產(chǎn)物轉(zhuǎn)入細胞后具有明顯穩(wěn)定的促進NF-κB活化的作用。
本發(fā)明的另一目的是提供這類多核苷酸所編碼的多肽。
本發(fā)明的另一目的是提供含有這類多核苷酸的載體，和這類多核苷酸及其載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細胞。
本發(fā)明的另一目的是提供這類多核苷酸所編碼的多肽的抗體和用于檢測的核酸分子。
本發(fā)明的另一目的是提供這類新的多核苷酸在宿主細胞中外源表達促進NF-κB活化的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是提供生產(chǎn)這些多核苷酸和其編碼的多肽的方法以及該多核苷酸及其編碼的多肽的用途。
本發(fā)明的技術(shù)方案包括以下內(nèi)容 在本發(fā)明的第一方面，提供新穎的分離的多核苷酸，它包含編碼具有促進人體轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的蛋白的核苷酸序列，該核苷酸序列選自(a)與編碼含有SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8的氨基酸序列的多肽的多核苷酸有至少70％相似性的多核苷酸；(b)編碼含有與SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO10、SEQID NO12的氨基酸序列有至少70％相似性的氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸互補的多核苷酸。
較佳地，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12。
較佳地，該多核苷酸的序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相似性(a)SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11的編碼區(qū)序列或全長序列；(b)在遺傳密碼簡并范圍內(nèi)相應(yīng)于(a)中提到的序列的至少一個序列；(c)與(a)或(b)中提到的序列互補的序列雜交的至少一個序列。
更佳地，該多核苷酸的序列選自SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11的編碼區(qū)序列或全長序列。
在本發(fā)明的第二方面，提供了上述核苷酸所編碼的多肽，它包含具有選自下組中的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQID NO12；或與以上任一氨基酸序列具有至少90％以上相似性的多肽，或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
較佳地，該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ IDNO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12。
在本發(fā)明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的載體；以及被該載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細胞，還提供了被上述多核苷酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細胞。
在本發(fā)明的第四方面，提供了與上述多肽特異性結(jié)合的抗體，還提供了可用于檢測的核酸分子，它含有上述任一多核苷酸中8-100個連續(xù)的核苷酸。
在本發(fā)明的第五方面，提供了上述多核苷酸在宿主細胞中外源表達促進NF-κB活化的應(yīng)用。
在本發(fā)明的第六方面，提供了上述多核苷酸和多肽在制備預(yù)防和/或治療與人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB有關(guān)的疾病的藥物中的用途，或在制備調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡、存活、分化、癌變等的藥物或試劑中的用途。較佳地，在制備預(yù)防和/或治療與人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB有關(guān)的炎癥和腫瘤。
在本發(fā)明地第七方面，提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明中的具有促進人體轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的多肽及藥學上可接受的載體。
在本發(fā)明的第八方面，提供了一種神經(jīng)性退行疾病或腫瘤的體外檢測方法，利用上述抗體或核酸片段來檢測宿主樣品中的多肽的存在或水平。
本發(fā)明的其他方面由于本文的技術(shù)的公開，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。
如本文所用，“分離的”是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(如果是天然的物質(zhì)，原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多核苷酸或多肽如果從天然狀態(tài)中與共同存在的其他物質(zhì)分開，則為分離純化的。這樣的多核苷酸可能是某一載體的一部分，也可能這樣的多核苷酸或多肽是某一組合物的一部分，既然載體或組合物不是它們的天然環(huán)境的成分，這些多核苷酸或多肽仍然是分離的。
如本文所用，“相似性”是指核苷酸或多肽序列比對過程中用來描述檢測序列和目標序列之間相同DNA堿基或氨基酸殘基順序所占比例的高低，是一種直接的數(shù)量關(guān)系，通過部分相同或相似的百分比來度量核苷酸序列或者多肽序列之間相似的程度，此相似性百分比可以通過本領(lǐng)域已有的比對方法來計算，例子有兩兩序列間的比對方法FASTA程序(Pearson，W.R.and Lipman，D.J.1988.Improved tools for biological sequence comparison.Proc.Natl.Acad.Sci.852444-2448)，BLAST程序(Altschul，S.F.，et al.1990 Basic local alignment search tool.J.Mol.Biol.215403-410)等等，或多序列比對方法CLUSTAL W(CORPET，F(xiàn).1998 Multiplesequence alignment with hierarchical clustering.Nucleic Acids Res.，1610881-10890)等。同源序列是指從某一共同祖先經(jīng)趨異進化而形成的不同序列，根據(jù)相似性百分比可以判斷比對序列間的同源性。當基因或蛋白質(zhì)間相似程度很高時，表示它們具有一段共同的進化歷程，從而判斷它們會具有相似的生物學功能。當具有至少50％的相似程度時，比較容易推測檢測序列和目標序列可能是同源序列。較佳地，具有至少70％的相似程度；更佳地，具有至少85％的相似程度，最佳地，具有至少90％的相似程度。而當相似性程度低于20％時，就難以確定或者根本無法確定其是否具有同源性。
本發(fā)明的多核苷酸包括其互補鏈可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。如本文所用，“編碼具有促進人體轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的多肽的多核苷酸”可以是包括編碼此多肽的多核苷酸，也可以是還包括附加編碼序列和/或非編碼序列的多核苷酸。以多肽NM166-402為例(在本申請中，蛋白質(zhì)的命名采用其克隆編號)，編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQ ID NO13所示的編碼區(qū)序列相同或者是遺傳密碼簡并的變異體。如本文所用，“遺傳密碼簡并”是指一個氨基酸有幾個密碼子的現(xiàn)象。例如在本發(fā)明中編碼多肽NM166-402的遺傳密碼簡并的變異體指編碼具有SEQ ID NO12的多肽的核苷酸，且此核苷酸與SEQ ID NO11所示的編碼區(qū)序列有差別。對于其他具有激活人體轉(zhuǎn)錄因子NF-κB表達功能的多肽，可依此類推。
本發(fā)明還涉及上述多核苷酸的變異體，它編碼與本發(fā)明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、類似物和衍生物。該多核苷酸的變異體可以是天然發(fā)生的等位變異體或非天然發(fā)生的變異體。這些核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。如本領(lǐng)域所知的，等位變異體是一個多核苷酸的替換形式，它可能是一個或多個核苷酸的取代、缺失或插入，但不會從實質(zhì)上改變其編碼的多肽的功能。
本發(fā)明還涉及與本發(fā)明所述的多核苷酸序列的互補序列雜交且兩個序列之間具有至少50％，較佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本發(fā)明特別涉及在嚴格條件下與此多核苷酸序列的互補序列可雜交的多核苷酸。在本發(fā)明中，“嚴格條件”是指(1)在較低離子強度和較高溫度下的雜交和洗脫，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)雜交時加有變性劑，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)僅在兩條序列之間的相同性至少在95％以上，更好的是在97％以上時才發(fā)生雜交。并且，可雜交的多核苷酸編碼的多肽與本發(fā)明所述的多肽有相同的生物學功能和活性。
本發(fā)明的多核苷酸序列能用本領(lǐng)域已有的方法獲得。這些技術(shù)包括但不局限于(1)通過雜交技術(shù)分離DNA序列；(2)人工化學合成DNA序列；(3)通過構(gòu)建cDNA文庫大規(guī)模獲得所需的多核苷酸；(4)PCR擴增技術(shù)。
第一種方法是先構(gòu)建基因組文庫或者cDNA文庫，然后通過分子雜交等技術(shù)從基因組文庫或cDNA文庫中篩選出目的基因或序列。當生物基因組比較小時，此方法較易成功當生物基因組很大時，構(gòu)建其完整的基因組文庫較困難，再從龐大的文庫中去克隆目的基因的工程量也很大。
第二種方法是按設(shè)計好的序列一次合成100-200bp長的DNA片段，再用這些合成的片段組合連接成完整的基因。這種合成長的基因序列的方法的價格十分昂貴。此方法主要用于合成作為引物、接頭等的核酸片段。
第三種方法是用本領(lǐng)域通常的方法構(gòu)建cDNA文庫，多次測序后，結(jié)合生物信息學分析技術(shù)(Ota et al.Nat Genet.2004 Jan；36(1)40-5)，大規(guī)模獲得目的cDNA克隆。生物信息學分析技術(shù)包括但不限于用BLAST或BLAT與已有的公共數(shù)據(jù)庫比對，如refseq數(shù)據(jù)庫等；用Phred算法評估測序質(zhì)量；用計算轉(zhuǎn)錄起始密碼子ATG的出現(xiàn)概率的ATGpr算法篩選全長cDNA序列等。
第四種方法用PCR技術(shù)擴增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；2301350-1354)。用于PCR的引物可根據(jù)本文所公開的本發(fā)明的序列信息適當?shù)剡x擇，并可用常規(guī)方法合成。可用常規(guī)方法如通過凝膠電泳分離和純化擴增的DNA/RNA片段。本發(fā)明優(yōu)選應(yīng)用的方法是兩步法通量化RT-PCR技術(shù)在混合cDNA文庫中擴增得到大量的cDNA克隆。混合cDNA文庫包括現(xiàn)有的cDNA文庫和腫瘤文庫。
本發(fā)明的基因，或者各種DNA片段等核苷酸序列的測定可用常規(guī)方法，如雙脫氧鏈終止法(Sanger et al.PNAS，1977，745463-5467)；也可用商業(yè)測序試劑盒等。為了獲得全長的cDNA序列，測序需要反復(fù)進行。有時需要測定多個克隆的cDNA序列，才能拼接成全長的cDNA序列。
本發(fā)明還涉及從大量的cDNA克隆中篩選本發(fā)明的多核苷酸，利用本領(lǐng)域熟知的方法即可。這些方法包括但不限于(1)DNA-DNA或DNA-RNA雜交，如Southern印跡法、Northern印跡法或原位雜交等；(2)標志基因功能的出現(xiàn)或喪失；(3)測定具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化作用的蛋白的轉(zhuǎn)錄本的水平；(4)通過免疫學技術(shù)和測定生物學活性來檢測基因表達的蛋白產(chǎn)物，如Western印跡法，放射免疫沉淀法，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。上述方法可以單獨使用，也可以聯(lián)合使用。本發(fā)明優(yōu)選雙熒光素酶報告基因法來篩選具有促進NF-κB活化作用的基因。
雙熒光素酶報告基因法采用的是體內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑順式報導(dǎo)系統(tǒng)，其中所用的NF-κB-luc報告質(zhì)粒載有螢火蟲熒光素酶基因，該基因的表達由合成的啟動子所調(diào)控，其中包含基本的啟動子元件(TATA box)，以及轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的結(jié)合位點， NF-κB-luc報告質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)圖如圖2所示。當細胞內(nèi)的NF-κB通過某種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑而被活化時，NF-κB便會結(jié)合于報告質(zhì)粒NF-κB-luc的增強子元件，從而啟動報告基因螢火蟲熒光素酶基因的轉(zhuǎn)錄，進一步胞內(nèi)翻譯成熒光素酶，導(dǎo)致細胞內(nèi)熒光素酶數(shù)量增加，活性增強；相反，當細胞內(nèi)的NF-κB活化受到抑制的時候，熒光素酶的表達量及活性就低。所以，通過檢測熒光素酶的活性，便可以反映不同刺激物以及共轉(zhuǎn)染的目的基因?qū)毎麅?nèi)NF-κB是否具有促進活化或者抑制活化的功能。pRL-SV40報告質(zhì)粒載體含有水母熒光素酶基因，該基因的表達由猿猴病毒40(SV40)增強子/啟動子所調(diào)控，轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞后可以產(chǎn)生較強的基本水平的水母熒光素酶的表達，且表達的活性不受NF-κB活化與否的調(diào)節(jié)，所以在實驗中用作內(nèi)對照報告基因。
本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優(yōu)選重組多肽。本發(fā)明的多肽可以是天然純化的產(chǎn)物，或是化學合成的產(chǎn)物，或使用重組技術(shù)從原核或真核宿主(如細菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動物細胞)中產(chǎn)生。本發(fā)明的多肽可以是糖基化的，也可以是非糖基化的。本發(fā)明的多肽可以包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。
本發(fā)明還包括具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化的多核苷酸編碼的人蛋白多肽的片段、衍生物和類似物。術(shù)語“片段”、“衍生物”和“類似物”是指基本上保持與本發(fā)明的天然具有激活人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的人蛋白多肽相同的生物學功能或活性的多肽。本發(fā)明的多肽片段、衍生物和類似物可以是(a)有一個或多個保守或非保守性氨基酸殘基(優(yōu)先保守性氨基酸殘基)被取代的多肽，而這樣取代的氨基酸殘基可以是也可以不是由遺傳密碼編碼的，或(b)在一個或多個氨基酸殘基中具有取代基團的多肽，或(c)成熟多肽與另一個化合物(比如延長多肽半衰期的化合物)融合所形成的多肽，或(d)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前導(dǎo)序列或分泌序列或用來純化此多肽的序列或蛋白原序列)。
本發(fā)明的多肽可以通過常規(guī)的重組DNA技術(shù)，利用本發(fā)明的多核苷酸序列來表達或生產(chǎn)重組的具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的蛋白多肽(Science，1984；2241431)。包括以下步驟 (1)用本發(fā)明的多核苷酸(或其變異體)，或用含有此多核苷酸的表達載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)合適的宿主細胞； (2)在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)步驟(1)得到的宿主細胞； (3)從培養(yǎng)基或細胞中分離、純化所需的蛋白多肽。
本發(fā)明中的多核苷酸和多肽優(yōu)選以分離的形式提供，更佳地被純化至均質(zhì)。
本發(fā)明也涉及包含本發(fā)明所述多核苷酸的載體。本發(fā)明中，編碼具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的人蛋白多肽的多核苷酸序列可以插入到重組表達載體中。術(shù)語“重組表達載體”指本領(lǐng)域熟知的細菌質(zhì)粒、噬菌體、酵母質(zhì)粒、植物細胞病毒、哺乳動物細胞病毒，如腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒，或者其他載體。在本發(fā)明中適用的載體可以是原核表達載體，也可以是真核表達載體，如在細菌中表達的基于T7的表達載體(Rosenberg，et al.Gene，1987，56125)，在哺乳動物細胞中高表達的真核表達載體pcDNATM3.1/myc-hisB(-)(Invitrogen，以下縮寫為pcDB)，pcDNA3.1/V5-His-TOPO(Invitrogen，以下縮寫為pcDT)。本發(fā)明優(yōu)選pcDT，它可以直接與PCR產(chǎn)物連接來構(gòu)建真核表達載體，大大提高了規(guī)模化生產(chǎn)的效率。只要能在宿主體內(nèi)復(fù)制和穩(wěn)定，任何質(zhì)粒和載體都可以應(yīng)用。表達載體的一個重要特征是通常含有復(fù)制起點、啟動子、標記基因和翻譯控制元件。用本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法來構(gòu)建含有本發(fā)明所述多核苷酸序列和轉(zhuǎn)錄/翻譯控制信號的表達載體即可。這些方法包括體外重組DNA技術(shù)、DNA合成技術(shù)、體內(nèi)重組DNA技術(shù)等(Sambrook，et al.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，Cold SpringHarbor Laboratory.New York，1989)。
本發(fā)明的多核苷酸序列可有效地連接到表達載體中的適當?shù)膯幼由蟻碇笇?dǎo)mRNA合成。這些啟動子的代表性例子有大腸桿菌的lac或trp啟動子；λ噬菌體的PL啟動子；真核啟動子包括CMV立即早期啟動子、HSV胸苷激酶啟動子、早期和晚期SV40啟動子、反轉(zhuǎn)錄病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核細胞或其病毒中表達的啟動子。表達載體還包括翻譯起始用的核糖體結(jié)合位點和轉(zhuǎn)錄終止子。表達載體優(yōu)選的包含一個或多個選擇性標記基因，以提供用于選擇轉(zhuǎn)化的宿主細胞的表型性狀，如用于大腸桿菌的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性、或真核細胞培養(yǎng)用的綠色熒光蛋白(GFP)、新霉素抗性及二氫葉酸還原酶。
本發(fā)明還涉及用上述載體或者本發(fā)明的多核苷酸經(jīng)基因工程產(chǎn)生的宿主細胞。本發(fā)明的載體和多核苷酸可以用于轉(zhuǎn)化適當?shù)乃拗骷毎?，以使其能夠表達具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的蛋白質(zhì)。宿主細胞可以是原核細胞，如細菌細胞；或是低等真核細胞，如酵母細胞；或是高等真核細胞，如哺乳動物細胞。代表性例子有大腸桿菌；植物細胞；果蠅S2或Sf9的昆蟲細胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤細胞的動物細胞；T293、hella細胞等。
本發(fā)明的多核苷酸在高等真核細胞中表達時，如果在載體中插入增強子序列時將會使轉(zhuǎn)錄增強。增強子是DNA的順式作用因子，通常有10-300個堿基對，作用于啟動子以增強基因的轉(zhuǎn)錄。例子有在復(fù)制起始點下游的100-270個堿基對的SV40增強子、在復(fù)制起始點下游的多瘤增強子以及腺病毒增強子等。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員都知道如何選擇適當?shù)妮d體、啟動子、增強子和宿主細胞。
用重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細胞可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)進行。當宿主細胞為原核細胞如大腸桿菌時，能吸收DNA的感受態(tài)細胞可在指數(shù)生長期后收集，用CaCl2法處理，所用步驟是本領(lǐng)域眾所周知的?？晒┻x擇的是MgCl2處理。也可用電穿孔的方法處理。當宿主是真核細胞時，可選擇以下轉(zhuǎn)染方法磷酸鈣共沉淀法、常規(guī)機械方法如顯微注射、電穿孔、脂質(zhì)體包裝等。獲得的轉(zhuǎn)化子可以用常規(guī)方法培養(yǎng)，來表達本發(fā)明的多核苷酸所編碼的多肽。根據(jù)所選的宿主細胞選擇合適的常規(guī)培養(yǎng)基，在適于宿主細胞生長的條件下培養(yǎng)。當宿主細胞生長到適當?shù)募毎芏群螅眠m當?shù)姆椒ㄈ鐪囟绒D(zhuǎn)化或化學誘導(dǎo)，來誘導(dǎo)選擇的啟動子，將細胞再培養(yǎng)一段時間。
上述方法中的重組多肽可包被于細胞內(nèi)、細胞外或在細胞膜上表達或分泌到細胞外。如果需要，可利用其物理的、化學的和其他特性通過各種分離方法分離和純化重組多肽。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，如常規(guī)的復(fù)性處理，用蛋白沉淀劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超處理、超離心、分子篩層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析和其它各種液相層析技術(shù)或這些方法的結(jié)合。
本發(fā)明還涉及與本發(fā)明多核苷酸的任何一部分同源的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的長度至少含有15個核苷酸，較好的是至少30個核苷酸，更好的是至少50個核苷酸，最好的是至少100個核苷酸。此核酸片段通常是在本發(fā)明的核苷酸序列信息的基礎(chǔ)上化學合成的DNA序列。上述核酸片段可以用于PCR擴增技術(shù)(如作為引物)以確定和/或分離編碼具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的多核苷酸；也可以作為雜交所用的探針。本發(fā)明的多核苷酸的一部分或全部也可作為探針固定在微陣列(Microarray)或DNA芯片上，用于分析組織中基因的差異表達和基因診斷。探針的標記可用放射性同位素，熒光素或酶(如堿性磷酸酶)等。
NF-κB是一種有重要生理功能的轉(zhuǎn)錄因子，其與免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)、胚胎和細胞系的發(fā)育、細胞凋亡、炎癥、細胞周期、腫瘤發(fā)生、病毒復(fù)制及多種自身免疫性疾病相關(guān)。本發(fā)明的多核苷酸和多肽具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化的功能，可以阻止與NF-κB相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展，可以用于制備預(yù)防和治療治療炎癥、和腫瘤以及調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡、存活、分化、癌變等的新藥物，為開創(chuàng)新的臨床診斷、療效評價及預(yù)后指標奠定必要的基礎(chǔ)。
本發(fā)明的多肽可以直接作為藥物治療疾病，如炎癥和腫瘤等；還可用于篩選促進或?qū)咕哂写龠MNF-κB活化功能的蛋白的抗體、多肽或其它配體，例如，篩選可用于促進或抑制本發(fā)明的蛋白的功能的抗體。用表達的重組的本發(fā)明的蛋白來篩選多肽庫，用于尋找有治療價值的能夠促進或抑制本發(fā)明的蛋白的功能的多肽分子。
本發(fā)明的多肽可以單獨使用或者與合適的藥物載體組合后使用。組合物包含安全有效量的多肽或拮抗劑及不影響藥物效果的載體和賦型劑。這些載體可以是水、葡萄糖、乙醇、鹽類、緩沖液、甘油及它們的組合。藥物組合物可以以方便的方式給藥，如通過局部、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)或皮內(nèi)的給藥途徑。給藥于患者的用量取決于許多因素，如給藥方式、待治療者的健康條件和診斷醫(yī)生的判斷。
本發(fā)明的多肽也可以通過在活體表達這些多肽來使用。例如患者的細胞可以通過在體外用編碼本發(fā)明多肽的基因進行基因工程操作，然后將工程細胞提供給患者，使工程細胞在體內(nèi)高表達這種多肽，從而達到治療的目的。
具有促進NF-κB活化功能的人蛋白的多核苷酸也可用于多種治療目的?？捎迷诨蛑委熂夹g(shù)中來治療由于具有促進NF-κB活化功能的人蛋白表達異常或活性異常導(dǎo)致的疾病。重組的基因治療載體(如病毒載體)可設(shè)計成表達變異的具有促進NF-κB活化功能的人蛋白，來抑制內(nèi)源性的具有促進NF-κB活化功能的人蛋白的活性。重組的具有促進NF-κB活化功能的人蛋白基因也可包裝到脂質(zhì)體中轉(zhuǎn)移至細胞內(nèi)。
抑制本發(fā)明多肽mRNA的寡聚核苷酸(包括反義RNA和DNA)以及核酶也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。反義RNA和DNA以及核酶可用本領(lǐng)域已有的方法合成。為了增加核酸分子的穩(wěn)定性，可用多種方法對其進行修飾，如增加兩側(cè)的序列長度，核糖核苷間的連接用磷酸硫酯鍵或肽鍵。
本發(fā)明的多肽及其片段、衍生物、類似物或表達它們的細胞可以作為抗原來生產(chǎn)抗體。這些抗體包括但不限于單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段和Fab表達文庫產(chǎn)生的抗體。本發(fā)明的多肽的抗體可用本領(lǐng)域公知的抗體制備方法來生產(chǎn)。例子有單克隆抗體可用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)(Kohler and Milstein.Nature，1975，256495-497)。多克隆抗體的生產(chǎn)可用本發(fā)明的多肽免疫動物，如家兔、小鼠、大鼠等。多種佐劑可用于增強免疫反應(yīng)，包括但不限于弗氏佐劑。將人恒定區(qū)和非人源的可變區(qū)結(jié)合的嵌合抗體可用已有的技術(shù)產(chǎn)生(Morrison etal.PNAS，1985，816851)。單鏈抗體也可用已有的技術(shù)生產(chǎn)(U.S.Pat No.4946778)。
本發(fā)明的抗體可用于免疫組織化學技術(shù)中，檢測活體標本中的具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的蛋白。還可以在臨床上用于炎癥性疾病、過敏性疾病、自身免疫病以及腫瘤的臨床診斷、治療、療效評價等。例如用放射性同位素標記與本發(fā)明的多肽結(jié)合的單克隆抗體，然后注入體內(nèi)跟蹤其位置和分布，可以作為一種非創(chuàng)傷性診斷方法來定位腫瘤細胞，或判斷腫瘤細胞是否轉(zhuǎn)移。本發(fā)明中的抗體還可以用于治療或預(yù)防與具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的人蛋白相關(guān)的炎癥或腫瘤疾病。給予適當劑量的抗體可以刺激或阻斷具有促進細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的人蛋白的產(chǎn)生或活性。
本發(fā)明還涉及定量和定位檢測具有促進NF-κB活化功能的蛋白水平的診斷試驗方法。這些試驗是本領(lǐng)域所熟知的，且包括FISH測定和放射免疫測定。試驗中檢測的具有促進NF-κB活化功能的蛋白水平，可以用作解釋具有促進NF-κB活化功能的蛋白在各種疾病中的重要性和用于診斷具有促進NF-κB活化功能的蛋白起作用的疾病。
具有促進NF-κB活化功能的蛋白的多核苷酸可用于具有促進NF-κB活化功能的蛋白相關(guān)疾病的診斷和治療。在診斷方面，具有促進NF-κB活化功能的蛋白的多核苷酸可用于檢測具有促進NF-κB活化功能的蛋白的表達與否，或在疾病狀態(tài)下具有促進NF-κB活化功能的蛋白的異常表達。如具有促進NF-κB活化功能的蛋白的DNA序列可用于對活檢標本的雜交以判斷具有促進NF-κB活化功能的蛋白的表達異常。雜交技術(shù)是本領(lǐng)域已公開的成熟技術(shù)，包括Southern印跡法、Northern印跡法、原位雜交等，相關(guān)的試劑盒可以從商業(yè)途徑獲得。本發(fā)明的多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列(Microarray)或DNA芯片上，用于分析組織中基因的差異表達和基因診斷。用具有促進NF-κB活化功能的蛋白特異的引物進RNA-聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)體外擴增也可以檢測具有促進NF-κB活化功能的蛋白的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。
檢測具有促進NF-κB活化功能的蛋白基因的突變也可用于診斷具有促進NF-κB活化功能的蛋白相關(guān)的疾病。具有促進NF-κB活化功能的蛋白基因的突變形式包括與正常野生型的具有促進NF-κB活化功能的蛋白的DNA序列相比的點突變、易位、缺失、重組和其它任何異常等?？捎帽绢I(lǐng)域已有的技術(shù)如Southern印跡法、DNA序列分析、PCR和原位雜交檢測突變。另外，突變有可能影響蛋白的表達，因此用Northern印跡法、Westen印跡法可間接判斷基因有無突變。
基因NFAF1、2、3、4、5、6在實驗中所有用到的正常組織、胎兒組織、腫瘤組織中都有表達，說明其為人體自身重要的NF-κB影響因子；在不同的組織中表達量高低有差別，說明其在不同的組織中發(fā)揮功能的程度不同。
以下對本發(fā)明的實施方案進一步詳細說明。
本發(fā)明通過對NCBI的refseq數(shù)據(jù)庫進行人功能未知預(yù)測基因檢索，獲得人未知功能基因序列，進一步利用Human_est數(shù)據(jù)庫通過BLASTn方法進行序列校正，根據(jù)校正后得到的序列設(shè)計基因特異引物，從混合人組織cDNA文庫中通過兩步法通量化RT-PCR技術(shù)擴增得到目的基因的編碼區(qū)cDNA片段。此編碼區(qū)cDNA片段與pcDT重組構(gòu)建真核表達載體。采用雙熒光素酶報告基因法檢測本發(fā)明中的基因?qū)F-κB的促進活化功能。試驗證明，本發(fā)明的多肽具有顯著、穩(wěn)定的促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化的作用。
本發(fā)明的優(yōu)點 1、提供了規(guī)?；寺『秃Y選新基因的技術(shù)平臺。
2、提供了人類新基因NFAF1、2、3、4、5、6的cDNA序列及其編碼多肽，并首次發(fā)現(xiàn)該類基因具有促進NF-κB活化的功能； 3、基因NFAF1、2、3、4、5、6具有促進NF-κB活化的作用，并且高效、穩(wěn)定，表明它們在細胞內(nèi)有比較高的親和力和效力； 4、NFAF1、2、3、4、5、6在機體多數(shù)正常細胞表達，說明其為自身重要的NF-κB調(diào)控分子。
5、基于上述的4個優(yōu)點，本發(fā)明為進一步研究NFAF1、2、3、4、5、6與NF-κB之間的調(diào)控關(guān)系，以及開發(fā)治療炎癥、和腫瘤以及調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡、存活、分化、癌變等的新藥物，為開創(chuàng)新的臨床診斷、療效評價及預(yù)后指標奠定必要的基礎(chǔ)。



圖1 真核表達載體pcDT-NFAFx的構(gòu)建示意圖，其中x為1、2、3、4、5、6之一。
圖2 pNF-κB-luc熒光素酶基因報告質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)圖。
圖3 NFAF1、2、3、4、5、6促進NF-κB的活化。

具體實施例方式 下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，如《分子克隆實驗指南》(2002年第三版[美]薩姆布魯克等箸，科學出版社)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實施例1、兩步法通量化RT-PCR技術(shù)擴增目的基因 (1)對NCBI的refseq數(shù)據(jù)庫進行人功能未知預(yù)測基因檢索，獲得人未知功能基因序列，并利用Human_est數(shù)據(jù)庫通過BLASTn方法進行序列校正，最終得到的序列設(shè)定為下組序列SEQID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11。根據(jù)此類序列設(shè)計基因NFAF1、2、3、4、5、6的特異引物 (2)用上述引物，按目的基因的表達譜在現(xiàn)有的cDNA文庫和腫瘤文庫中選擇模板，進行初擴?，F(xiàn)有的文庫包括12種人體正常組織(心、胰、睪丸、卵巢、前列腺、結(jié)腸、小腸、骨骼肌、胸腺、淋巴結(jié)、扁桃體、白細胞)；6種人腫瘤組織(肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌)；和8種胎兒組積(胎肺、胎心、胎肝、胎脾、胎腎、胎腦、胎骨骼肌、胎胸腺)的cDNA文庫(Clonetch，K1420-1，1241-1)。初擴反應(yīng)條件如下50μl PCR反應(yīng) PCR延伸時間根據(jù)所擴目的基因的最長片段，按50sec/Kb的原則進行擴增
初擴產(chǎn)物純化到30μl，以去除PCR反應(yīng)體系中大量的引物及dNTPs等，并濃縮整個體系，得到對應(yīng)目的基因序列的二級擴增庫，可作為二擴(大擴)的模板。
(3)將(2)中的純化產(chǎn)物作為模板，對每個目的基因進行二擴，反應(yīng)條件如下50μl PCR(每個基因)反應(yīng) PCR延伸時間根據(jù)所擴目的基因的最長片段，按50sec/Kb的原則進行擴增
得到的PCR產(chǎn)物取10μl上樣電泳，挑選有擴增條帶的PCR產(chǎn)物，進行等體積純化(40μl)。
通過兩步PCR反應(yīng)擴增出非單一條帶的基因用Qiagen膠回收試劑盒切膠回收目的片段。擴增的結(jié)果表明，這些組織的細胞中都存在基因NFAF1、2、3、4、5、6的cDNA，說明NFAF1、2、3、4、5、6在這些組織的細胞中都產(chǎn)生了基因NFAF1、2、3、4、5、6的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，有較廣的表達圖譜，在多種組織中參與轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)。
實施例2、基因NFAF1、2、3、4、5、6真核表達載體的構(gòu)建 將二擴純化產(chǎn)物和真核表達載體pcDNA3.1/V5-His-TOPO(Invitrogen，)，按照試劑盒制造廠商建議的條件進行連接反應(yīng)。電擊法轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，轉(zhuǎn)化物在含氨芐青霉素的固體LB平板培養(yǎng)基上生長，挑選生長的單一克隆菌落，提取質(zhì)粒，用EcoRI酶切，酶切產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳鑒定，挑選有插入片段的陽性克隆，通過測序(使用ABI PRISM 3700 DNA分析儀)，選出正確的正向插入克隆，各自命名為pcDT-NFAF1、2、3、4、5、6。
同時收集培養(yǎng)液，用SDS-PAGE分析沉淀蛋白，獲得NFAF1、2、3、4、5、6多肽。
NFAF1、2、3、4、5、6蛋白分析結(jié)果顯示NFAF1、2、3、4、5、6蛋白序列如下組序列SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12所示。
實施例3、雙熒光素酶報告基因法測定目的基因?qū)F-κB活化的促進作用 用目的基因和報告基因NF-κB-luc，pRL-SV40共轉(zhuǎn)染人胚胎腎293T細胞，通過分別檢測兩種熒光素酶活性來測定NF-κB的活性。共轉(zhuǎn)染的方法為脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，采用LipfectanineTM2000(Invitrogen，11668027)，按產(chǎn)品說明書所述進行。
轉(zhuǎn)染操作步驟如下 (1)細胞培養(yǎng)將293T細胞(ATCC NumberCRL-11268)(2.0×104)用含10％胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)培養(yǎng)基(Hyclone，SH0022.02)鋪在96孔細胞培養(yǎng)板(Costar，3599)上，在5％CO2，37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16小時。
(2)制備DNA-LipfectamineTM2000復(fù)合物用25μl不含血清的DMEM培養(yǎng)基稀釋20ng NF-κB-luc，2ng pRL-SV40和20ng pcDT-NFAF1、2、3、4、5、6，緩慢混合均勻；同樣用25μl DMEM培養(yǎng)基稀釋適當量的LipfectaminTM2000，緩慢混合均勻，在室溫下保溫5分鐘后，與稀釋的DNA緩慢混合，室溫放置20分鐘，以形成DNA-Lipofectamine 2000復(fù)合物。
(3)轉(zhuǎn)染將DNA-Lipofectamine 2000復(fù)合物緩慢滴入細胞培養(yǎng)板(50μl/孔)，輕微搖勻。5％CO2，37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
檢測時加入Reporter Lysis Buffer(Promega，E4030)，在-80℃下放置30分鐘以上，取出后在室溫自然融化，使細胞裂解，然后將細胞裂解液移入熒光板(Gronier，655075)，用Dual-Luciferase Reporter Assay System 10-Pack(Promaga，E1960)，通過GENios Pro(TECAN)檢測熒光素酶活性。
設(shè)定轉(zhuǎn)染pcDT空載體、不加刺激物時細胞內(nèi)的熒光素酶活性比值(螢火蟲熒光素酶熒光強度/水母熒光素酶熒光強度表示)為1，其他條件下細胞內(nèi)的熒光素酶活性比值以此為標準，用相對值表示。結(jié)果參照圖3，分別用20ng pcDT-NFAF1、2、3、4、5、6和20ng NF-κB-luc共轉(zhuǎn)染293T細胞，待檢質(zhì)?？擅黠@促進NF-κB的活化，pNF-κB-luc熒光素酶活性明顯上調(diào)，與陽性對照MEKK效果相似，表明NFAF1、2、3、4、5、6在293T細胞中的表達產(chǎn)物對NF-κB活化有強的促進作用。
實施例4、抗體制備 抗原選用原核細胞或真核細胞表達的NFAF1、2、3、4、5、6蛋白全長或部分肽段，也可以合成多肽作為抗原。
多克隆抗體的制備免疫動物選用成年雄性新西蘭兔或BALb/c小鼠，初次免疫用200ug(新西蘭兔)或20ug(BALb/c小鼠)抗原與等體積弗氏完全佐劑(FCA)充分乳化后，于背部皮下多點注射。初次免疫后21、42、63天，用弗氏不完全佐劑(FIA)完全乳化的抗原蛋白，各加強免疫1次，用量同前。每次免疫后7~10天，ELISA方法檢測血清效價，達到1×10-4時，放血分離血清.Western blot鑒定抗體特異性。
單克隆抗體制備免疫BALb/c小鼠同前，取脾臟制成B細胞懸液，與對數(shù)生長期的骨髓瘤細胞SP2/0融合，通過HAT(H，次黃嘌呤；A，氨基喋呤；T，胸腺嘧啶核苷)選擇性培養(yǎng)，獲得雜交細胞系，再通過ELISA方法檢測抗體效價，篩選出特定的雜交瘤細胞系，并得到單克隆抗體。
序列表
<110>北京諾賽基因組研究中心有限公司
<120>促進人體轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化的多核苷酸及其編碼多肽和用途
<130>
<160>12
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>1358
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(20)..(835)
<400>1
tggcacgagg gtctcatcc atg gct tcc gcg gac tcg cgc cgg gtg gca gat52
Met Ala Ser Ala Asp Ser Arg Arg Val Ala Asp
1 5 10
ggc ggc ggt gcc ggg ggc acc ttc cag ccc tac cta gac acc ttg cgg100
Gly Gly Gly Ala Gly Gly Thr Phe Gln Pro Tyr Leu Asp Thr Leu Arg
15 20 25
cag gag ctg cag cag acg gac cca acg ctg ttg tca gta gtg gtg gcg148
Gln Glu Leu Gln Gln Thr Asp Pro Thr Leu Leu Ser Val Val Val Ala
30 35 40
gtt ctt gcg gtg ctg ctg acg cta gtc ttc tgg aag tta atc cgg agc196
Val Leu Ala Val Leu Leu Thr Leu Val Phe Trp Lys Leu Ile Arg Ser
45 50 55
aga agg agc agt cag aga gct gtt ctt ctt gtt ggc ctt tgt gat tcc244
Arg Arg Ser Ser Gln Arg Ala Val Leu Leu Val Gly Leu Cys Asp Ser
60 65 70 75
ggg aaa acg ttg ctc ttt gtc agg ttg tta aca ggc ctt tat aga gac292
Gly Lys Thr Leu Leu Phe Val Arg Leu Leu Thr Gly Leu Tyr Arg Asp
80 85 90
act cag acg tcc att act gac agc tgt gct gta tac aga gtc aac aat340
Thr Gln Thr Ser Ile Thr Asp Ser Cys Ala Val Tyr Arg Val Asn Asn
95 100 105
aac agg ggc aat agt ctg acc ttg att gac ctt ccc ggc cat gag agt388
Asn Arg Gly Asn Ser Leu Thr Leu Ile Asp Leu Pro Gly His Glu Ser
110 115 120
ttg agg ctt cag ttc tta gag cgg ttt aag tct tca gcc agg gct att436
Leu Arg Leu Gln Phe Leu Glu Arg Phe Lys Ser Ser Ala Arg Ala Ile
125 130 135
gtg ttt gtt gtg gat agg gca cca ttc cag cga gag cgg aaa gat gtg484
Val Phe Val Val Asp Arg Ala Pro Phe Gln Arg Glu Arg Lys Asp Val
140 145 150 155
gct gag ttt ctg tat caa gcc ctc att gac agt atg ggt ctg aag aat532
Ala Glu Phe Leu Tyr Gln Ala Leu Ile Asp Ser Met Gly Leu Lys Asn
160 165 170
aca cca tca ttc tta ata gcc tgc aat aag caa gat att gca atg gca580
Thr Pro Ser Phe Leu Ile Ala Cys Asn Lys Gln Asp Ile Ala Met Ala
175 180 185
aaa tca gca aag tta att caa cag cag ctg gag aaa gaa ctc aac acc628
Lys Ser Ala Lys Leu Ile Gln Gln Gln Leu Glu Lys Glu Leu Asn Thr
190 195 200
tta cga gtt acc cgt tct gct gcc ccc agc aca ctg gac agt tcc agc676
Leu Arg Val Thr Arg Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Asp Ser Ser Ser
205 210 215
act gcc cct gct cag ctg ggg aag aaa ggc aaa gag ttt gaa ttc tca724
Thr Ala Pro Ala Gln Leu Gly Lys Lys Gly Lys Glu Phe Glu Phe Ser
220 225 230 235
cag ttg ccc ctc aaa gtg gag ttc ctg gag tgc agt gcc aag ggt gga772
Gln Leu Pro Leu Lys Val Glu Phe Leu Glu Cys Ser Ala Lys Gly Gly
240 245 250
aga ggg gac gtg ggc tct gct gac atc cag gac ttg gag aaa tgg ctg820
Arg Gly Asp Val Gly Ser Ala Asp Ile Gln Asp Leu Glu Lys Trp Leu
255 260 265
gct aaa att gcc tga gaggcagctc taaagcacaa gacctggatg tgtgacacac 875
Ala Lys Ile Ala
270
agttttggaa aaaggtctgt ggtagtctgg agttgatgag gaaggggtac aagatgtggt935
tagaaacatt tctttgttct ggaaacaaag tactgttgaa accagcttgg aatttttttt995
tttttttttt tttaagttca gttctccctt atggctgcct ttcaaacaag taccttttat 1055
ctgatgcctg tatcttccct ttgttaaggt gtaacttgat gtagggtcaa ggtttttgtg 1115
acaacaggca gactccacac agagaggata tgatgagaat atggccatca cctgaaaagt 1175
tttcttatct tctgtgcttt tggtccctgg aaacaaatcc gcctatgtat gaagctagtt 1235
gatttccagt tgcactattt ccagttgcct ctgaagttca caggcaatac attgtctagt 1295
cctttgcgaa tttctctgat ttgtgggcac agttatgaag tttccccaca tgtgaagaca 1355
ggt 1358
<210>2
<211>271
<212>PRT
<213>人
<400>2
Met Ala Ser Ala Asp Ser Arg Arg Val Ala Asp Gly Gly Gly Ala Gly
1 5 10 15
Gly Thr Phe Gln Pro Tyr Leu Asp Thr Leu Arg Gln Glu Leu Gln Gln
20 25 30
Thr Asp Pro Thr Leu Leu Ser Val Val Val Ala Val Leu Ala Val Leu
35 40 45
Leu Thr Leu Val Phe Trp Lys Leu Ile Arg Ser Arg Arg Ser Ser Gln
50 55 60
Arg Ala Val Leu Leu Val Gly Leu Cys Asp Ser Gly Lys Thr Leu Leu
65 70 75 80
Phe Val Arg Leu Leu Thr Gly Leu Tyr Arg Asp Thr Gln Thr Ser Ile
85 90 95
Thr Asp Ser Cys Ala Val Tyr Arg Val Asn Asn Asn Arg Gly Asn Ser
100 105 110
Leu Thr Leu Ile Asp Leu Pro Gly His Glu Ser Leu Arg Leu Gln Phe
115 120 125
Leu Glu Arg Phe Lys Ser Ser Ala Arg Ala Ile Val Phe Val Val Asp
130 135 140
Arg Ala Pro Phe Gln Arg Glu Arg Lys Asp Val Ala Glu Phe Leu Tyr
145 150 155 160
Gln Ala Leu Ile Asp Ser Met Gly Leu Lys Asn Thr Pro Ser Phe Leu
165 170 175
Ile Ala Cys Asn Lys Gln Asp Ile Ala Met Ala Lys Ser Ala Lys Leu
180 185 190
Ile Gln Gln Gln Leu Glu Lys Glu Leu Asn Thr Leu Arg Val Thr Arg
195 200 205
Ser Ala Ala Pro Ser Thr Leu Asp Ser Ser Ser Thr Ala Pro Ala Gln
210 215 220
Leu Gly Lys Lys Gly Lys Glu Phe Glu Phe Ser Gln Leu Pro Leu Lys
225 230 235 240
Val Glu Phe Leu Glu Cys Ser Ala Lys Gly Gly Arg Gly Asp Val Gly
245 250 255
Ser Ala Asp Ile Gln Asp Leu Glu Lys Trp Leu Ala Lys Ile Ala
260 265 270
<210>3
<211>1909
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(123)..(842)
<400>3
agatgcaagg cggcgatttt cccttctgtc agatcttgat gaacaaagca gtcataattc 60
atctctagaa agatttatat cctggcattt gaaatgcttt ttatttagaa tagtagtaaa120
aa atg gaa aaa gaa aaa gga aat gat gat gga ata cca gac caa gag 167
Met Glu Lys Glu Lys Gly Asn Asp Asp Gly Ile Pro Asp Gln Glu
1 5 10 15
aat tcc ttg gat ttt tct gaa cac ttt aac caa ctt gaa ttg ttg gaa 215
Asn Ser Leu Asp Phe Ser Glu His Phe Asn Gln Leu Glu Leu Leu Glu
20 25 30
aca cat gga cac ctt att cct act ggt act caa agt ctt tgg gta ggc 263
Thr His Gly His Leu Ile Pro Thr Gly Thr Gln Ser Leu Trp Val Gly
35 40 45
aat tct gat gaa gat gag gag caa gat gac aaa aat gaa gag tgg tat 311
Asn Ser Asp Glu Asp Glu Glu Gln Asp Asp Lys Asn Glu Glu Trp Tyr
50 55 60
cga ttg caa gaa aaa aaa atg gaa aaa gac cca agc aga ttg ctt ctt 359
Arg Leu Gln Glu Lys Lys Met Glu Lys Asp Pro Ser Arg Leu Leu Leu
65 70 75
tgg gct gct gaa aaa aat cgg ctt acc aca gtg cgg aga ctc ctt tct 407
Trp Ala Ala Glu Lys Asn Arg Leu Thr Thr Val Arg Arg Leu Leu Ser
80 85 90 95
gaa aag gcc act cac gtg aac act agg gat gaa gat gag tat acc cct 455
Glu Lys Ala Thr His Val Asn Thr Arg Asp Glu Asp Glu Tyr Thr Pro
100 105 110
ctt cat cga gca gcc tac agt gga cac tta gat att gtt cag gag ctc 503
Leu His Arg Ala Ala Tyr Ser Gly His Leu Asp Ile Val Gln Glu Leu
115 120 125
att gca cag ggg gcc gat gtt cat gca gtg act gtg gat ggc tgg acg 551
Ile Ala Gln Gly Ala Asp Val His Ala Val Thr Val Asp Gly Trp Thr
130 135 140
ccc ctg cac agt gct tgt aag tgg aat aat acc aga gtg gct tct ttc 599
Pro Leu His Ser Ala Cys Lys Trp Asn Asn Thr Arg Val Ala Ser Phe
145 150 155
tta ctg cag cat gat gca gat atc aat gcc caa aca aaa ggc ctc ttg 647
Leu Leu Gln His Asp Ala Asp Ile Asn Ala Gln Thr Lys Gly Leu Leu
160 165 170 175
acc ccc ttg cat ctt gct gct ggg aac aga gac agc aag gat acc cta 695
Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Gly Asn Arg Asp Ser Lys Asp Thr Leu
180 185 190
gaa ctc ctc ctg atg aac cgt tac gtc aga cca ggg ctg aaa aac aac 743
Glu Leu Leu Leu Met Asn Arg Tyr Val Arg Pro Gly Leu Lys Asn Asn
195 200 205
ttg gaa gaa act gca ttt gat att gcc agg agg aca agt atc tat cac 791
Leu Glu Glu Thr Ala Phe Asp Ile Ala Arg Arg Thr Ser Ile Tyr His
210 215 220
tac ctc ttt gaa att gtg gaa ggc tgt aca aat tct tca cct cag tct 839
Tyr Leu Phe Glu Ile Val Glu Gly Cys Thr Asn Ser Ser Pro Gln Ser
225 230 235
taa caattctagt aattttccta agtttctaaa taccagtgcc tcctgtgtgt 892
gagatgtatt cccataatca aagttgacgt caaacatctt actacaaaaa ttcagtgaca952
ttcattataa cattcttcca agtgaattgc ctgactttga tgtcaaaatg tatttgaaag1012
taatttgcat atatctttaa ttatttctgt ggagtttgtg atttttttat cagaaataat1072
tttaatgtgt gtatacttaa aaacttgaca cgggttgtac agaaactggt atttttggtg1132
ctgatacaag agaaatgtat ttttaaatat cccacatcct ggatctttgt tgggtattta1192
gtatattgac atatattttt ataaggtgag gtaactcaga acttaattta aaagtcttaa1252
atattctgat acaatccagc tgtcttctct accttaccat agccagttgc tttcatttta1312
aaccagagca agtaacatat tagtgacttg aatcttcata agttaaagta aaaaacagca1372
aaaaacctag atctttgtct tttagaacac agaccatttt caggaaagca gttagctaag 1432
tgtttaattc atgaatattg tatactgcat cccctaccac aatttacaca atcctgtgga1492
tagtcctacc tcaccctggt caacctacat gatccttaag ctaatggcga atcacgatga1552
ccttgtagac atgcacacaa ctataccttt gtccaacaga tcataatata tctgctatcc1612
aactggtttt acctgcctaa tcctactgat ttgggcactg cttgtatagt ctctcaagtt1672
cacaggaaat gttgattttc taaggtcctc atttttacag agtatacagg caaagtgaca1732
ggggaaaagg aattagtcta agagtaaggg gatgattatt atattgaggc taaaaccaca1792
aagtggctca ggctttaaaa aaaaaacact gtggataatg acaaaaagca taagtaaaaa1852
tatttgagaa aaataaagta caagttttga acaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 1909
<210>4
<211>239
<212>PRT
<213>人
<400>4
Met Glu Lys Glu Lys Gly Asn Asp Asp Gly Ile Pro Asp Gln Glu Asn
1 5 10 15
Ser Leu Asp Phe Ser Glu His Phe Asn Gln Leu Glu Leu Leu Glu Thr
20 25 30
His Gly His Leu Ile Pro Thr Gly Thr Gln Ser Leu Trp Val Gly Asn
35 40 45
Ser Asp Glu Asp Glu Glu Gln Asp Asp Lys Asn Glu Glu Trp Tyr Arg
50 55 60
Leu Gln Glu Lys Lys Met Glu Lys Asp Pro Ser Arg Leu Leu Leu Trp
65 70 75 80
Ala Ala Glu Lys Asn Arg Leu Thr Thr Val Arg Arg Leu Leu Ser Glu
85 90 95
Lys Ala Thr His Val Asn Thr Arg Asp Glu Asp Glu Tyr Thr Pro Leu
100 105 110
His Arg Ala Ala Tyr Ser Gly His Leu Asp Ile Val Gln Glu Leu Ile
115 120 125
Ala Gln Gly Ala Asp Val His Ala Val Thr Val Asp Gly Trp Thr Pro
130 135 140
Leu His Ser Ala Cys Lys Trp Asn Asn Thr Arg Val Ala Ser Phe Leu
145 150 155 160
Leu Gln His Asp Ala Asp Ile Asn Ala Gln Thr Lys Gly Leu Leu Thr
165 170 175
Pro Leu His Leu Ala Ala Gly Asn Arg Asp Ser Lys Asp Thr Leu Glu
180 185 190
Leu Leu Leu Met Asn Arg Tyr Val Arg Pro Gly Leu Lys Asn Asn Leu
195 200 205
Glu Glu Thr Ala Phe Asp Ile Ala Arg Arg Thr Ser Ile Tyr His Tyr
210 215 220
Leu Phe Glu Ile Val Glu Gly Cys Thr Asn Ser Ser Pro Gln Ser
225 230 235
<210>5
<211>4067
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(3309)..(3923)
<400>5
gcctagtaga gatctggagc cagaagccca gagacagccg agtgcgccgt gcggtctccg60
gacgctcgct gctcagcccg atccccgcca actgtgcagg cggctgaccc gcagcggcag120
cggcagcagc gaggactcga gcgctggctg cagcgacacc atggatctct cctttatggc 180
cgcgcagctg cccatgatgg ggggagcttt catggactcg cccaacgagg acttcagcac240
cgagtactcc ctgtttaact cctctgccaa tgtccacgcg gctgccaatg gccagggcca 300
gccggaagat cctcctcggt cctccaacga cgccgtcttg ctatggattg ccatcatagc 360
tacgctgggg aacatcgtgg tggtgggcgt ggtgtatgcc ttcaccttct gaggacggca 420
caccctgcac caccatgggg tgaggcttgg cacgtagctc tgacttgctg tcggcctttg 480
gcttctcctg tgttctagaa ccaggagttt tgaccagggg cggcggccgt ccttctggaa 540
tttctcccca gcagccctga tttcaaatat cccatgttgt ggtcaagctg agtcagaaga 600
catggaagta tgggcctcct gcccctagag gcatgacggg gcaaggcctt cagagggcag 660
attggggatc cttgaaacta cattccagga acatgggacc agatgagaca gctagttaag 720
tttaaaacat agacatgatt tgatgatcgc ttgctggtgg taaataatca ctcgtgtgtc 780
ttgtttttat gcaaacttat cgaacctagg gcgtggggtg ctggggcaag agcagccctc840
agaacttcag tgttcctgac ccaattctgg tttcacattc agtcccttgg ccatctagta900
gggccattgg atgttcctag tttgactttg aaatggcacc tttgccacca gacacctggt960
cccttccaag acccaagtgc attgggagac ccagggatgg ggggttactg gtaataggtg1020
gggtttctgg gggtgttgtt ggtggttttt atctcctggt cggactttct cttcttttta1080
agaagaggag aggatgtctt taagagctag atgtgccagg cagtggactc ttcaggccac1140
ccacgtgaga atgctgtttc ttctctgagg aatcgtggaa ttttaaagat gaacaagatt1200
cacatccact gaattattca acggatgggt cagaaagggg ggtgatttgc ctgtggtcac1260
caggcaggtt tgtggaggag tcggaacaga aagatgtgtc ctcactctca gctcactgag1320
ctctctgccc caactaagca cttccctgag gaggttgctg agaagctgcc ctcaggagaa1380
tgtccaggca tcttgaaggt gggtgcgaga ttggcaggct gctcagatac ccgtccttta1440
cattcagtgt ggataccgtg cattctcctg aagctgtgaa agtgcttctg cccaagccac1500
ttccttaaat tctgaaatat cagcatctgg ggtcctggca agcaaggaag cttccaagta1560
aaaaccagag agaagggcac acttttcttt cttcattagg aaatcttatt gcacaggaac1620
cacccccacc cccacccccc acaccttccc aaggcagcat cccagtgcag atagagtggg1680
aaaggtccca gaagggggct cactcacctc taggcccaga gaggctttct cctcacttta1740
tacactgcaa aaacagaaga attgtgtcaa taacaccctc tgtagtggag aaacttaaaa1800
agctggttag gaagctctcg tgtatattta gagacaatta caagaaagct ggacttgccg1860
ctgtggtctc aggagaaatg agtgttcttg atgacaggca aagggacatc ttagttgtcc1920
agaagcggca ctcttccctg gaagccgcca tgttaatagg attactagcc tggctccaga1980
cagtgcctgc tcatggctgc cagttcttac cgatcacatc tgtcactgcc accgtatatc2040
atctgccagt gcatcagctt aaggggaggt cacgagtgca aaagaacctg acccttgaca2100
atgagggaga agggacatgg accacctgtc tggaattcct ggaatcactg gcagggtgga2160
ggctgggctg gggagttagc cgcggtgtgc gtgaatggct ctgtctccag caagtctctc2220
tccatcaaac cccaggtctg ccccataagc aagatcttta acagatggat gtctccatga2280
gaaaacccaa ggcgagaagc ccagagccat ggcggggttg cttgacgtcc tcatggagtc2340
actctgcccc acatgctcaa atcttccctc tggccccaca tccctaggag ggcctgaccc2400
ctgtaaagat acaggaggca gctccctggc ctccaaatgg cccatggaga tggcagtcgg2460
gagacagggt tctgtgtttg ctgcggtgaa gggaggagaa ggcaggagga aaaaggatgg2520
cttctagccc tgaagaggac tccagcatcc caggcaccgg gtgcttctgg ctgcagtttt2580
ccctatggag gcccctcagc ctccagccct aacataaatg tcggttaaat tcagttttca2640
agcctctctc ccttttcagt gtcagagcag tagatggtcc agggcattgg aggcctcgac2700
cactctgcat tgcagattac agtgacttcc tcggggttgc cccatcttgg tctcctgtgg2760
tttcttcatc agcttttttt ttaccagcat ctctcaaata acaatgaaga tagatatgcc2820
cattagtgtc tgattaagga gcaaaggctg gatttctggc cacagcgagc tgcactctcc2880
ctcctgcctc agccggggtc cgtcttagca gtttggaaag gggaaaaaga tgccggtcct2940
cactgcttaa gttttgtgtc caggtgccac tagacttgca tgcacactaa ctccttacaa3000
tcaccacaca gcatcatcgc cccagtgcac agatgaggaa ccagaggctc agaggagtga3060
agttgccttc ctgaggtcac acagcatgaa agtgatgagc taggatttga atctgggaag3120
ttgggctcta gagccagact gtactgcctt ctgccacact gtactgcctt ctgtgactgg3180
gtggcacctc cagggcacat ttacacaagg ccctgaatct gcagaggctg tttctcaaga3240
tgcccgtcat ggtgtggcct gggccagctc tggcttccac aggtccctga ctgtcctcag3300
agtggaac atg ctc aac ctc ccg ccc act gct ctc tct ctg ccc aga ttt 3350
Met Leu Asn Leu Pro Pro Thr Ala Leu Ser Leu Pro Arg Phe
1 5 10
cag ggg tgc cgg tcc cca agg cct gcc ccc ttc ttt aag act gaa ctc 3398
Gln Gly Cys Arg Ser Pro Arg Pro Ala Pro Phe Phe Lys Thr Glu Leu
15 20 25 30
aag tct cct tgg aag gcc ccg gtg aag ctc cca gag act ggt ttt ctt3446
Lys Ser Pro Trp Lys Ala Pro Val Lys Leu Pro Glu Thr Gly Phe Leu
35 40 45
ggg atg cag gca gaa ggg gac cct ccc tgg cca aca ccc agg agc cca3494
Gly Met Gln Ala Glu Gly Asp Pro Pro Trp Pro Thr Pro Arg Ser Pro
50 55 60
gca gaa gca ccc aca cgt aga aag agg ctc act aca gcc aga agt gca3542
Ala Glu Ala Pro Thr Arg Arg Lys Arg Leu Thr Thr Ala Arg Ser Ala
65 70 75
gag tca gag tcc tgg gac cat ctt gtt ctg caa ggt gac ccc agg ctc3590
Glu Ser Glu Ser Trp Asp His Leu Val Leu Gln Gly Asp Pro Arg Leu
80 85 90
ccc agg aca ggg gag agg gat cgt cct cat tca gac tct agc tgg ggc3638
Pro Arg Thr Gly Glu Arg Asp Arg Pro His Ser Asp Ser Ser Trp Gly
95 100 105 110
ctc tgt act ggc ttc tcc ctg ggt ggg gtt gcc tgt tac ata gct gtg3686
Leu Cys Thr Gly Phe Ser Leu Gly Gly Val Ala Cys Tyr Ile Ala Val
115 120 125
cct cag aga aag ggt cct gca ttt tct gga atg ttc tct gtg ctt acc3734
Pro Gln Arg Lys Gly Pro Ala Phe Ser Gly Met Phe Ser Val Leu Thr
130 135 140
cct ctg tgt gcc cct cca ttg ctc ctc tac aag caa tta ggt gat tca3782
Pro Leu Cys Ala Pro Pro Leu Leu Leu Tyr Lys Gln Leu Gly Asp Ser
145 150 155
aaa gag caa ctt agg ctg ggt gca gtg act cac acc cgt aat ccc ggc3830
Lys Glu Gln Leu Arg Leu Gly Ala Val Thr His Thr Arg Asn Pro Gly
160 165 170
act ttg gga ggc cga ggc ggg cag gga cag gag ttc aag acc agc ctg3878
Thr Leu Gly Gly Arg Gly Gly Gln Gly Gln Glu Phe Lys Thr Ser Leu
175 180 185 190
gcc aac atg gtg aaa ccc tgt ctc tac aaa aaa tac aaa aat taa3923
Ala Asn Met Val Lys Pro Cys Leu Tyr Lys Lys Tyr Lys Asn
195 200
ccagacattg tggcatgtgc ctgtaatccc agctactcag gaggctgaca caggagaatt3983
gcttgaacca ggaggcggag gctgcagtga gctgagattg tgccactgca ctccagcctg4043
ggcaacagaa cgagactctg tctc 4067
<210>6
<211>204
<212>PRT
<213>人
<400>6
Met Leu Asn Leu Pro Pro Thr Ala Leu Ser Leu Pro Arg Phe Gln Gly
1 5 10 15
Cys Arg Ser Pro Arg Pro Ala Pro Phe Phe Lys Thr Glu Leu Lys Ser
20 25 30
Pro Trp Lys Ala Pro Val Lys Leu Pro Glu Thr Gly Phe Leu Gly Met
35 40 45
Gln Ala Glu Gly Asp Pro Pro Trp Pro Thr Pro Arg Ser Pro Ala Glu
50 55 60
Ala Pro Thr Arg Arg Lys Arg Leu Thr Thr Ala Arg Ser Ala Glu Ser
65 70 75 80
Glu Ser Trp Asp His Leu Val Leu Gln Gly Asp Pro Arg Leu Pro Arg
85 90 95
Thr Gly Glu Arg Asp Arg Pro His Ser Asp Ser Ser Trp Gly Leu Cys
100 105 110
Thr Gly Phe Ser Leu Gly Gly Val Ala Cys Tyr Ile Ala Val Pro Gln
115 120 125
Arg Lys Gly Pro Ala Phe Ser Gly Met Phe Ser Val Leu Thr Pro Leu
130 135 140
Cys Ala Pro Pro Leu Leu Leu Tyr Lys Gln Leu Gly Asp Ser Lys Glu
145 150 155 160
Gln Leu Arg Leu Gly Ala Val Thr His Thr Arg Asn Pro Gly Thr Leu
165 170 175
Gly Gly Arg Gly Gly Gln Gly Gln Glu Phe Lys Thr Ser Leu Ala Asn
180 185 190
Met Val Lys Pro Cys Leu Tyr Lys Lys Tyr Lys Asn
195 200
<210>7
<211>1173
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(377)..(937)
<400>7
cacgcgtccg ctgccgtacg tcccttccca tgaggatgag atgacccatc tgttgcatcc60
cggctgctga taaaacaaga ccctcggagc caagaaacaa cactgagttc cagatttcgg120
aaggttcacg agtgttgccg acacgccctc ccaactgcag acatcctccc tggaggacct180
gctgtgctca catgcccccc tgtccagcga ggacgacacc tccccgggct gtgcagcccc240
ctcccaggca cccttcaagg ccttcctcag tcccccagag ccacatagcc accgaggcac300
cgacaggaag ctgtccccgc tcctgagccc cttgcaagac tcactggtgg acaagaccct360
gctggagccc agggag atg gtc cgg cct aag aag gtg tgt ttc tcg gag agc412
Met Val Arg Pro Lys Lys Val Cys Phe Ser Glu Ser
1 5 10
agc ctg ccc acc ggg gac agg acc agg agg agc tac tac ctc aat gag 460
Ser Leu Pro Thr Gly Asp Arg Thr Arg Arg Ser Tyr Tyr Leu Asn Glu
15 20 25
atc cag agc ttc gcg ggc gcc gag aag gac gcg cgc gtg gtg ggc gag 508
Ile Gln Ser Phe Ala Gly Ala Glu Lys Asp Ala Arg Val Val Gly Glu
30 35 40
atc gcc ttc cag ctg gac cgc cgc atc ctg gcc tac gtg ttc ccg ggc 556
Ile Ala Phe Gln Leu Asp Arg Arg Ile Leu Ala Tyr Val Phe Pro Gly
45 50 55 60
gtg acg cgg ctc tac ggc ttc acg gtg gcc aac atc ccc gag aag atc 604
Val Thr Arg Leu Tyr Gly Phe Thr Val Ala Asn Ile Pro Glu Lys Ile
65 70 75
gag cag acc tcc acc aag tct ctg gac ggc tcc gtg gac gag agg aag 652
Glu Gln Thr Ser Thr Lys Ser Leu Asp Gly Ser Val Asp Glu Arg Lys
80 85 90
ctg cgc gag ctg acg cag cgc tac ctg gcc ctg agc gcg cgc ctg gag 700
Leu Arg Glu Leu Thr Gln Arg Tyr Leu Ala Leu Ser Ala Arg Leu Glu
95 100 105
aag ctg ggc tac agc cgc gac gtg cac ccg gcg ttc agc gag ttc ctc 748
Lys Leu Gly Tyr Ser Arg Asp Val His Pro Ala Phe Ser Glu Phe Leu
110 115 120
atc aac acc tac gga atc ctg aag cag cgg ccc gac ctg cgc gcc aac 796
Ile Asn Thr Tyr Gly Ile Leu Lys Gln Arg Pro Asp Leu Arg Ala Asn
125 130 135 140
ccc ctg cac agc agc ccg gcc gcg ctg cgc aag ctg gtc atc gac gtg 844
Pro Leu His Ser Ser Pro Ala Ala Leu Arg Lys Leu Val Ile Asp Val
145 150 155
gtg ccc ccc aag ttc ctg ggc gac tcg ctg ctg ctg ctc aac tgc ctg 892
Val Pro Pro Lys Phe Leu Gly Asp Ser Leu Leu Leu Leu Asn Cys Leu
160 165 170
tgc gag ctc tcc aag gag gac ggc aag ccc ctc ttc gcc tgg tga 937
Cys Glu Leu Ser Lys Glu Asp Gly Lys Pro Leu Phe Ala Trp
175 180 185
gccgccccgc gcccgccgcc ttgcctgcag taaacgcgtt tgttccaacc cggggccgcg 997
gtgcctcctg cgcgtccccc cggaggggaa agggccgcgt cccccgcgcg cgaggccaga1057
gaaggccccg ctcccaccgg tgctgggccc cgaccgcagc ccgccgctgc ccgcacctgc1117
ggagtgcttc tcacccctca ttaaaatcat ccgtttgcaa aaaaaaaaaa aaaaaa1173
<210>8
<211>186
<212>PRT
<213>人
<400>8
Met Val Arg Pro Lys Lys Val Cys Phe Ser Glu Ser Ser Leu Pro Thr
1 5 10 15
Gly Asp Arg Thr Arg Arg Ser Tyr Tyr Leu Asn Glu Ile Gln Ser Phe
20 25 30
Ala Gly Ala Glu Lys Asp Ala Arg Val Val Gly Glu Ile Ala Phe Gln
35 40 45
Leu Asp Arg Arg Ile Leu Ala Tyr Val Phe Pro Gly Val Thr Arg Leu
50 55 60
Tyr Gly Phe Thr Val Ala Asn Ile Pro Glu Lys Ile Glu Gln Thr Ser
65 70 75 80
Thr Lys Ser Leu Asp Gly Ser Val Asp Glu Arg Lys Leu Arg Glu Leu
85 90 95
Thr Gln Arg Tyr Leu Ala Leu Ser Ala Arg Leu Glu Lys Leu Gly Tyr
100 105 110
Ser Arg Asp Val His Pro Ala Phe Ser Glu Phe Leu Ile Asn Thr Tyr
115 120 125
Gly Ile Leu Lys Gln Arg Pro Asp Leu Arg Ala Asn Pro Leu His Ser
130 135 140
Ser Pro Ala Ala Leu Arg Lys Leu Val Ile Asp Val Val Pro Pro Lys
145 150 155 160
Phe Leu Gly Asp Ser Leu Leu Leu Leu Asn Cys Leu Cys Glu Leu Ser
165 170 175
Lys Glu Asp Gly Lys Pro Leu Phe Ala Trp
180 185
<210>9
<211>1530
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(289)..(966)
<400>9
agattaggtc gctctggggc tatcaggcca gcatggacgc tggcaaagcg gggcagaccc60
tgaagactca ctgctcagcc caggtgagag ccttctgagc tgtgcctggg gctgggggga120
cagggccctg gaaccccagc agccggcggg tctgggagct gctgtccttg agttggttgg180
gccctgggaa gctgggttct ggcagcctgg tccctgaatg ggtccagcct gtacagctgg240
ggtcccaggt gggggtggga caggagccat gagatctgag tcccaaga atg ggg gct 297
Met Gly Ala
1
ggg ctg ggt ttc ggc tca gta gct ccc cac tcc cca aag cgc cca gat345
Gly Leu Gly Phe Gly Ser Val Ala Pro His Ser Pro Lys Arg Pro Asp
5 10 15
gtc tgc agg tgg ctg agc ccc ttc atc ctc tcc tgc tgc gtg tac ttc393
Val Cys Arg Trp Leu Ser Pro Phe Ile Leu Ser Cys Cys Val Tyr Phe
20 25 30 35
tgc ctc tgg att ccc gag gac cag ctg tcc tgg ttc gct gcc ctg gtc441
Cys Leu Trp Ile Pro Glu Asp Gln Leu Ser Trp Phe Ala Ala Leu Val
40 45 50
aag tgc ctg ccc gtc ctc tgc ctg gct ggg ttc ctg tgg gtc atg tcc489
Lys Cys Leu Pro Val Leu Cys Leu Ala Gly Phe Leu Trp Val Met Ser
55 60 65
cca agc ggg ggc tac acc cag ctc ctc cag gga gcc ctt gtg tgc tcg537
Pro Ser Gly Gly Tyr Thr Gln Leu Leu Gln Gly Ala Leu Val Cys Ser
70 75 80
gct gtg ggg gac gct tgc ctc atc tgg ccg gca gcc ttc gtc cct ggc585
Ala Val Gly Asp Ala Cys Leu Ile Trp Pro Ala Ala Phe Val Pro Gly
85 90 95
atg gcc gcc ttt gcc acc gcc cac ctc ctc tac gtc tgg gcc ttc ggc633
Met Ala Ala Phe Ala Thr Ala His Leu Leu Tyr Val Trp Ala Phe Gly
100 105 110 115
ttc tct ccc ctg cag ccc ggc ctg ctg ctg ctc atc atc ctg gcc cct681
Phe Ser Pro Leu Gln Pro Gly Leu Leu Leu Leu Ile Ile Leu Ala Pro
120 125 130
ggc ccc tac ctc agc ctt gtg ctc cag cac ctc gag ccg gat atg gtc729
Gly Pro Tyr Leu Ser Leu Val Leu Gln His Leu Glu Pro Asp Met Val
135 140 145
ctg ccg gtg gca gcc tat ggg ctg atc ctg atg gcc atg ctg tgg cgc777
Leu Pro Val Ala Ala Tyr Gly Leu Ile Leu Met Ala Met Leu Trp Arg
150 155 160
ggc ctg gcc cag ggc ggg agt gcc ggc tgg ggc gcg ctg ctc ttc acg825
Gly Leu Ala Gln Gly Gly Ser Ala Gly Trp Gly Ala Leu Leu Phe Thr
165 170 175
ctc tct gat ggc gtg ctg gcc tgg gac acc ttc gcc cag ccc ctg ccc873
Leu Ser Asp Gly Val Leu Ala Trp Asp Thr Phe Ala Gln Pro Leu Pro
180 185 190 195
cat gcc cgc ctg gtg atc atg acc acc tac tat gct gcc cag ctc ctc 921
His Ala Arg Leu Val Ile Met Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala Gln Leu Leu
200 205 210
atc aca ctg tca gcc ctc agg agc ccg gtg ccc aag act gac tga 966
Ile Thr Leu Ser Ala Leu Arg Ser Pro Val Pro Lys Thr Asp
215 220 225
ctagggagct tgaagggccg gtgttcaggc cctctcctcc tgcaaggacc tgggcctccc1026
agcccagccc agcctgagaa ataccctcag cagcgaagct tcctgacgcc tgtctgcagg1086
cgccgctgcc gccgtcgctt ctggctgaag acgtttgagg acgatttgcg gaattccaag1146
tccactactg ggttccagct gccttccccc ggttctgact ccagatccct ggctcctcag1206
ccaggcccac atggagccct cccagccacc agcctgcctc catgttcact gtcggcccca1266
cagcctgccc gccccctgct gctgctctga atccgttttc cctgtgggtg tggaaccgta1326
gatgttgctg ttaccgtagg agaggcctcg gggagggtca tgattgtgat aaaccatcgc1386
ggttaatgac agcagaaggt tctttgtcgc tccccatgga ccaggcctgg tgcccagtgg1446
gaccctccat ggccctctgg tggggggatt cggggggata aagtgaggat tgtgcagaac1506
tgaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa 1530
<210>10
<211>225
<212>PRT
<213>人
<400>10
Met Gly Ala Gly Leu Gly Phe Gly Ser Val Ala Pro His Ser Pro Lys
1 5 10 15
Arg Pro Asp Val Cys Arg Trp Leu Ser Pro Phe Ile Leu Ser Cys Cys
20 25 30
Val Tyr Phe Cys Leu Trp Ile Pro Glu Asp Gln Leu Ser Trp Phe Ala
35 40 45
Ala Leu Val Lys Cys Leu Pro Val Leu Cys Leu Ala Gly Phe Leu Trp
50 55 60
Val Met Ser Pro Ser Gly Gly Tyr Thr Gln Leu Leu Gln Gly Ala Leu
65 70 75 80
Val Cys Ser Ala Val Gly Asp Ala Cys Leu Ile Trp Pro Ala Ala Phe
85 90 95
Val Pro Gly Met Ala Ala Phe Ala Thr Ala His Leu Leu Tyr Val Trp
100 105 110
Ala Phe Gly Phe Ser Pro Leu Gln Pro Gly Leu Leu Leu Leu Ile Ile
115 120 125
Leu Ala Pro Gly Pro Tyr Leu Ser Leu Val Leu Gln His Leu Glu Pro
130 135 140
Asp Met Val Leu Pro Val Ala Ala Tyr Gly Leu Ile Leu Met Ala Met
145 150 155 160
Leu Trp Arg Gly Leu Ala Gln Gly Gly Ser Ala Gly Trp Gly Ala Leu
165 170 175
Leu Phe Thr Leu Ser Asp Gly Val Leu Ala Trp Asp Thr Phe Ala Gln
180 185 190
Pro Leu Pro His Ala Arg Leu Val Ile Met Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala
195 200 205
Gln Leu Leu Ile Thr Leu Ser Ala Leu Arg Ser Pro Val Pro Lys Thr
2l0 215 220
Asp
225
<210>11
<211>3014
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(231)..(1439)
<400>11
caggtggccc tgaattcatt gcctgctcag caaaataaag gcccagtgtg gaagccggaa60
cttgcatttg aagaaggatg ggaaggatgg gttgaggagg gcccatcccc agcagcccga120
gagggaggag gccacggaga cttggagcat tcccgtttct tccagagcgc tgcgggataa180
aggaggagcg tcctgcttcc cggctgccct gttgctgtcg gagtcacagg atg gcg 236
Met Ala
1
gct gtc atc ctg ccc tcg act gct gct ccg tct tcc ctg ttc cca gcc 284
Ala Val Ile Leu Pro Ser Thr Ala Ala Pro Ser Ser Leu Phe Pro Ala
5 10 15
tct cag caa aaa gga cac aca cag ggc gga gag ctg gtt aat gag ctc 332
Ser Gln Gln Lys Gly His Thr Gln Gly Gly Glu Leu Val Asn Glu Leu
20 25 30
ctg aca agc tgg cta cgg ggc ttg gta acc ttc gag gat gtg gcc gtg 380
Leu Thr Ser Trp Leu Arg Gly Leu Val Thr Phe Glu Asp Val Ala Val
35 40 45 50
gag ttc acc cag gag gag tgg gcg ttg ctg gac cct gcc caa agg aca 428
Glu Phe Thr Gln Glu Glu Trp Ala Leu Leu Asp Pro Ala Gln Arg Thr
55 60 65
ctg tac agg gat gtg atg ctg gag aac tgc agg aac ctg gcc tca cta476
Leu Tyr Arg Asp Val Met Leu Glu Asn Cys Arg Asn Leu Ala Ser Leu
70 75 80
ggg tgt cgt gtt aat aaa ccc agt ctg ata tcc cag ttg gaa caa gac524
Gly Cys Arg Val Asn Lys Pro Ser Leu Ile Ser Gln Leu Glu Gln Asp
85 90 95
aag aag gtg gtg aca gag gaa aga gga att cta cca agc acc tgt cca572
Lys Lys Val Val Thr Glu Glu Arg Gly Ile Leu Pro Ser Thr Cys Pro
100 105 110
gat ttg gag act cta ctt aaa gcc aaa tgg tta act cct aag aag aat620
Asp Leu Glu Thr Leu Leu Lys Ala Lys Trp Leu Thr Pro Lys Lys Asn
115 120 125 130
gtt ttc aga aaa gaa cag tct aaa ggt gta aaa acg gaa aga agt cat668
Val Phe Arg Lys Glu Gln Ser Lys Gly Val Lys Thr Glu Arg Ser His
135 140 145
cgt gga gtg aaa ctc aat gaa tgt aat cag tgt ttt aaa gtc ttc agc716
Arg Gly Val Lys Leu Asn Glu Cys Asn Gln Cys Phe Lys Val Phe Ser
150 155 160
acg aaa tct aac cta act cag cac aag aga att cat act gga gaa aaa764
Thr Lys Ser Asn Leu Thr Gln His Lys Arg Ile His Thr Gly Glu Lys
165 170 175
ccc tat gac tgt agt caa tgt ggg aag tcc ttc agt agc aga tct tac812
Pro Tyr Asp Cys Ser Gln Cys Gly Lys Ser Phe Ser Ser Arg Ser Tyr
180 185 190
ctt act att cat aag aga atc cat aat ggg gag aaa ccc tat gaa tgc860
Leu Thr Ile His Lys Arg Ile His Asn Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys
195 200 205 210
aat cac tgt ggg aaa gca ttt agt gat ccc tca tcc ctt aga ctg cat908
Asn His Cys Gly Lys Ala Phe Ser Asp Pro Ser Ser Leu Arg Leu His
215 220 225
ttg aga att cac act gga gaa aaa ccc tat gaa tgt aac cag tgt ttt956
Leu Arg Ile His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Asn Gln Cys Phe
230 235 240
cac gtt ttc cgc acc agt tgt aac ctc aaa agc cac aag agg att cac1004
His Val Phe Arg Thr Ser Cys Asn Leu Lys Ser His Lys Arg Ile His
245 250 255
acg ggg gag aat cac cat gaa tgt aat cag tgt gga aaa gct ttc agc1052
Thr Gly Glu Asn His His Glu Cys Asn Gln Cys Gly Lys Ala Phe Ser
260 265 270
aca agg tcc tct ctc act ggg cac aat agc att cat aca ggg gag aaa1100
Thr Arg Ser Ser Leu Thr Gly His Asn Ser Ile His Thr Gly Glu Lys
275 280 285 290
cct tat gaa tgt cac gat tgt ggg aaa acc ttc agg aag agc tcc tat1148
Pro Tyr Glu Cys His Asp Cys Gly Lys Thr Phe Arg Lys Ser Ser Tyr
295 300 305
ctg aca cag cac gta aga act cat act gga gaa aaa ccc tat gaa tgt1196
Leu Thr Gln His Val Arg Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys
310 315 320
aac gag tgt ggg aaa tcc ttc agc agt agc ttt tct ctt act gtg cac1244
Asn Glu Cys Gly Lys Ser Phe Ser Ser Ser Phe Ser Leu Thr Val His
325 330 335
aag aga ata cat acc gga gag aaa ccc tac gag tgc agt gac tgt gga1292
Lys Arg Ile His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Ser Asp Cys Gly
340 345 350
aaa gcc ttt aat aat ctc tca gct gtg aag aaa cac tta aga act cac1340
Lys Ala Phe Asn Asn Leu Ser Ala Val Lys Lys His Leu Arg Thr His
355 360 365 370
act gga gaa aaa ccc tat gaa tgt aat cat tgt ggg aaa tcc ttc aca1388
Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Asn His Cys Gly Lys Ser Phe Thr
375 380 385
agt aac tcc tat ctt tct gtg cac aag aga ata cat aat aga tgg ata1436
Ser Asn Ser Tyr Leu Ser Val His Lys Arg Ile His Asn Arg Trp Ile
390 395 400
tga attactgcag gaacttctgg aggaaagcac tcattgatct ttcatcccta 1489
agatagtttg agagagctca cactggatat ataagttatt tgttgcagca taacaaatga 1549
tccccgcaaa ttttgtggct tcaaacacga aatgtttatt ctctaacaat ttctacagat 1609
caggaattca agaacagctt atctctgtag ttacactgca ggatctctca tgcctttact1669
tacaatcaag atgtcagcca aagctatagt catctaacat ctttactgat gaacagtcca1729
cttccaagat gacttattca catgcctgga aagttgatgt tggttgttgt caggggacct1789
tcagtcatta ccatgtaggc ctctttacaa ggcccagctc cttgacaatt tggcaataag1849
ttctcgccaa ggttagtgat ccaagagagg accaatacag aggccaaaat ggcttttatg1909
acctatcctc aggaggactg ctaagctttc acttatttcc tattgtgttg gtctcacaac1969
acaccaatcc tgatacaatg tgagagactg cagaaggtat gaataccagg aaacagataa2029
ctcagaagca tctgggaaat ttgccatgga attaatgaag aaaagccctc agcacatcat2089
ccttctactc taatcaatat gaaatagcat tcagtaactc ctattaattc actctgaaga2149
gaaacctttt gaggacaatc tgtatggtaa agctctcagc tcgaattctc accttcatgg2209
gcccagaaga ttatgtactg agagaatcct gaagaatgga acagctgtag aaagccttca2269
gtgctatcag cagggattca tgtgacagct cacactaagg gagaaaacct gtgaaggtct2329
cagaaggctt cagtgacagt catcccttaa gacacactgg aaatcacaca atggaacaac2389
actcagaaat gcggaatacc ctgcagcaaa agtgttcaca ttactgagca aactatagtg2449
tggtattctg cagtgactat gggaaagcct tgaatgttct atcggttttt aagggacttg2509
agaattaatt ctggagagaa tgccccattg aacatcatca atattggaga gctttctgtt2569
tttctacatt tgttaggaaa cttgtgagca ttcacactac agagaaactt gaaatataaa2629
gaagaagaga aagccttcag tgatgcctct gtgttaggga aaatatggaa cttctccctg2689
gatgcaaaac ctatgagtat attaatattg gaaaattttt cagtgattct tctctttctt2749
gtatatgaga gaacttatat ggagaaaccc ctaggaatgt aatcagtgtt aggatgcctc2809
agcctgaact cttcactgag tggccacaat tttcactggg aacaaaaagt ataatcactg2869
ttttgagtgt gggatatcct ttatcagtgt ctcatctgta gattggactg ctggctcatt2929
aattttttta gtcttttttt cttttaatat aaacatttgt gtatagctgt tccctaaaat2989
aaacattaac atatttcata atttt 3014
<210>12
<211>402
<212>PRT
<213>人
<400>12
Met Ala Ala Val Ile Leu Pro Ser Thr Ala Ala Pro Ser Ser Leu Phe
1 5 10 15
Pro Ala Ser Gln Gln Lys Gly His Thr Gln Gly Gly Glu Leu Val Asn
20 25 30
Glu Leu Leu Thr Ser Trp Leu Arg Gly Leu Val Thr Phe Glu Asp Val
35 40 45
Ala Val Glu Phe Thr Gln Glu Glu Trp Ala Leu Leu Asp Pro Ala Gln
50 55 60
Arg Thr Leu Tyr Arg Asp Val Met Leu Glu Asn Cys Arg Asn Leu Ala
65 70 75 80
Ser Leu Gly Cys Arg Val Asn Lys Pro Ser Leu Ile Ser Gln Leu Glu
85 90 95
Gln Asp Lys Lys Val Val Thr Glu Glu Arg Gly Ile Leu Pro Ser Thr
100 105 110
Cys Pro Asp Leu Glu Thr Leu Leu Lys Ala Lys Trp Leu Thr Pro Lys
115 120 125
Lys Asn Val Phe Arg Lys Glu Gln Ser Lys Gly Val Lys Thr Glu Arg
130 135 140
Ser His Arg Gly Val Lys Leu Asn Glu Cys Asn Gln Cys Phe Lys Val
145 150 155 160
Phe Ser Thr Lys Ser Asn Leu Thr Gln His Lys Arg Ile His Thr Gly
165 170 175
Glu Lys Pro Tyr Asp Cys Ser Gln Cys Gly Lys Ser Phe Ser Ser Arg
180 185 190
Ser Tyr Leu Thr Ile His Lys Arg Ile His Asn Gly Glu Lys Pro Tyr
195 200 205
Glu Cys Asn His Cys Gly Lys Ala Phe Ser Asp Pro Ser Ser Leu Arg
210 215 220
Leu His Leu Arg Ile His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Asn Gln
225 230 235 240
Cys Phe His Val Phe Arg Thr Ser Cys Asn Leu Lys Ser His Lys Arg
245 250 255
Ile His Thr Gly Glu Asn His His Glu Cys Asn Gln Cys Gly Lys Ala
260 265 270
Phe Ser Thr Arg Ser Ser Leu Thr Gly His Asn Ser Ile His Thr Gly
275 280 285
Glu Lys Pro Tyr Glu Cys His Asp Cys Gly Lys Thr Phe Arg Lys Ser
290 295 300
Ser Tyr Leu Thr Gln His Val Arg Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr
305 310 315 320
Glu Cys Asn Glu Cys Gly Lys Ser Phe Ser Ser Ser Phe Ser Leu Thr
325 330 335
Val His Lys Arg Ile His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Ser Asp
340 345 350
Cys Gly Lys Ala Phe Asn Asn Leu Ser Ala Val Lys Lys His Leu Arg
355 360 365
Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Tyr Glu Cys Asn His Cys Gly Lys Ser
370 375 380
Phe Thr Ser Asn Ser Tyr Leu Ser Val His Lys Arg Ile His Asn Arg
385 390 395 400
Trp Ile
權(quán)利要求
1.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸含有編碼具有促進人體轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化功能的多肽的核苷酸序列，該核苷酸序列選自
(a)與編碼含有SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12的氨基酸序列的多肽的多核苷酸有至少70％相似性的多核苷酸；
(b)編碼含有與SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12的氨基酸序列有至少70％相似性的氨基酸序列的多肽的多核苷酸；
(c)與(a)或(b)的多核苷酸互補的多核苷酸。
2.如權(quán)利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ IDNO12。
3.如權(quán)利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相似性
(a)SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11的編碼區(qū)序列或全長序列；
(b)在遺傳密碼簡并范圍內(nèi)相應(yīng)于(a)中提到的序列的至少一個序列；
(c)與(a)或(b)中提到的序列互補的序列雜交的至少一個序列；
4.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列選自SEQ ID NO1、SEQ IDNO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11的編碼區(qū)序列或全長序列。
5.權(quán)利要求1所述的多核苷酸編碼的多肽，其特征在于，所述多肽包含選自下組中的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQID NO12；或與以上任一氨基酸序列具有至少90％相似性的多肽；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
6.權(quán)利要求5所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12。
7.一種載體，其特征在于，所述載體含有權(quán)利要求1所述的多核苷酸。
8.一種遺傳工程宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞選自
(a)用權(quán)利要求7所述的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細胞；
(b)用權(quán)利要求1所述的多核苷酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細胞。
9.一種抗體，其特征在于，所述抗體是能與權(quán)利要求5所述的多肽特異性結(jié)合的抗體。
10.一種核酸片段，其特征在于，所述核酸片段含有權(quán)利要求1所述的任一多核苷酸中8-100個連續(xù)的核苷酸。
11.一種分離的多核苷酸在促進NF-κB活化中的應(yīng)用，其特征在于所述多核苷酸選自權(quán)利要求1所述的多核苷酸，該多核苷酸在宿主細胞中外源表達會促進NF-κB的活化。
12.權(quán)利要求1所述的多核苷酸或權(quán)利要求5所述的多肽在制備預(yù)防和/或治療與人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF-κB有關(guān)的疾病的藥物中的用途，或在制備調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡、存活、分化、癌變等的藥物或試劑中的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其中所述疾病選自炎癥和腫瘤。
14.含有權(quán)利要求5所述的多肽和藥學上可接受的載體的藥物組合物。
15.一種炎癥性疾病或腫瘤的體外檢測方法，其特征在于，利用權(quán)利要求9所述的抗體或權(quán)力要求10所述的核酸片段來檢測宿主樣品中的多肽的存在或水平。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類新的編碼具有促進人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF－кB活化功能的蛋白的多核苷酸，及其編碼的多肽，多肽的抗體。本發(fā)明還公開了所述多肽、抗體在制備預(yù)防和治療與人體細胞轉(zhuǎn)錄因子NF－кB相關(guān)的疾病，尤其炎癥、過敏性疾病、自身免疫病和腫瘤的藥物以及在開發(fā)調(diào)節(jié)淋巴細胞的活化、增殖和凋亡藥物上的用途。
文檔編號A61K38/17GK1952134SQ20051011297
公開日2007年4月25日 申請日期2005年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月18日
發(fā)明者石太平, 高霞, 馬大龍, 鄧唯唯, 王欣宇, 張晨穎, 高鵬, 郭金海, 程華玲, 于鵬, 童郁蓉, 馬進京, 陸陽, 李娜, 蔡恬靜, 王峰, 王平章 申請人:北京諾賽基因組研究中心有限公司