專(zhuān)利名稱(chēng)：丹參組分、制劑及其制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療心血管疾病的中藥提取物，具體地說(shuō)涉及從丹參中提取的有效組分，制劑及其制備方法與用途，該有效組分主要含有丹酚酸B(Salvianolic acid B)，新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)。
背景技術(shù)：
冠心病和心絞痛是危害人類(lèi)健康的“第一殺手”，近年來(lái)，隨著我國(guó)人口老年化以及人們工作、生活、飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境等的變化，冠心病等心腦血管疾病的發(fā)生率也逐年增多，嚴(yán)重威脅著人民的身心健康。天然產(chǎn)物中許多活性物質(zhì)具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已開(kāi)發(fā)成治療冠心病和心絞痛的新藥，如治療冠心病的藥物地奧心血康，它是由從中藥中提取的8種甾體皂甙制成的純中藥制劑；心達(dá)康是以沙棘為原料提取加工而成的純天然藥物，其有效成分為沙棘總黃酮。因而從天然產(chǎn)物中尋找具有抗心肌缺血、缺氧生理活性的有效物質(zhì)，是發(fā)現(xiàn)、開(kāi)發(fā)新藥的有效途徑之一。我國(guó)藥用生物資源十分豐富，其生理活性物質(zhì)是研究和發(fā)現(xiàn)新藥先導(dǎo)化學(xué)物，開(kāi)發(fā)新藥的天然寶庫(kù)。目前，我國(guó)從天然產(chǎn)物中提取活性物質(zhì)，用于開(kāi)發(fā)成治療冠心病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產(chǎn)物中提取活性物質(zhì)，開(kāi)發(fā)成具有抗心肌缺血，用于治療冠心病和心絞痛的新藥，具有重要應(yīng)用價(jià)值和廣闊發(fā)展前景。
丹參，別名血生根、赤根、血參、紅根。丹參來(lái)自植物Salvia miltiorrhiza的根莖。丹參入藥始載于漢代的《神農(nóng)本草經(jīng)》。中醫(yī)認(rèn)為，其味苦性微寒，具有活血通經(jīng)、祛淤止痛、清心除煩、涼血消癰之功效，適用于治療月經(jīng)不調(diào)，冠心病，動(dòng)脈硬化癥，高血脂，心絞痛，痛經(jīng)，經(jīng)閉，崩漏，帶下，跌打瘀血，失眠，乙肝，神經(jīng)衰弱，血吸蟲(chóng)病肝脾腫大，骨節(jié)疼痛等疾病，尤為婦科、內(nèi)科及外傷科證屬血淤兼熱者所常用?，F(xiàn)代研究表明，丹參中主要含丹參酮I、IIA、IIB(Tanshinone I，IIA，IIB)、異丹參酮I、IIA(Isotanshinone I，IIA)、隱丹參酮(Cryptotanshinone)、異隱丹參酮(Isocryptotanshinone)、甲基丹參酮(Methyltanshinone)、羥基丹參酮等。
丹參是治療心血管疾病的常用藥物，近幾十年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究機(jī)構(gòu)對(duì)丹參進(jìn)行了大量的研究，各種含丹參藥材的成藥被開(kāi)發(fā)用于治療冠心病、心絞痛、缺血性中風(fēng)等疾病。丹參對(duì)心血管系統(tǒng)的影響有(1)增加冠脈流量。丹參、素等成分可增加冠脈血流量、促進(jìn)側(cè)枝循環(huán)、改善心肌微循環(huán)，同時(shí)并不增加心室作功及心肌耗氧量。(2)改善微循環(huán)。丹參具有改善微循環(huán)的有效成分。此外，丹參中有效成分可影響多種凝血因子、改善血液流變性、對(duì)冠心病患者可降低血漿粘度、調(diào)節(jié)細(xì)胞電泳率及紅細(xì)胞壓積，改善微循環(huán)，對(duì)血瘀患者的血液“粘、聚、滯”傾向有較好的治療作用。研究表明，丹參能抑制血小板聚集和抗血栓的作用。正因?yàn)榈⒕哂幸陨蠈?duì)心血管系統(tǒng)的藥理作用，因此，從丹參中分離出有效組分，開(kāi)發(fā)出治療心血管疾病的現(xiàn)代中藥具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種丹參有效組分。
本發(fā)明的另一目的在于提供該丹參有效組分的制備方法。
本發(fā)明還提供了含有該丹參有效組分的制劑及該組分的用途。
本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案本發(fā)明的丹參有效組分主要含有丹酚酸B和新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)。其中，以重量百分比計(jì)，丹酚酸B的含量為6～11％，新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)的含量為29～39％。
優(yōu)選的，本發(fā)明的丹參有效組分中，丹酚酸B的含量為7～10％，新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)的含量為31～37％。
最佳的，本發(fā)明的丹參有效組分中，丹酚酸B的含量為8～9％，新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)的含量為33～35％。
本發(fā)明的丹參有效組分的制備方法，包括下列步驟將丹參藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫。
優(yōu)選的，本發(fā)明的丹參有效組分制備方法，包括下列步驟將丹參藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶0.8～1.2)，加熱回流0.8～1.2小時(shí)，提取1～3次，合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯(47～53∶1)作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇(8～13∶1)作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫，流速為2.8～3.2ml/min，柱溫為室溫。
最佳的，本發(fā)明的丹參有效組分制備方法，包括下列步驟取丹參藥材，將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1)，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液I。藥渣加入70％乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50％甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用5％甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改換60％甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱(Lichrospher C18；10.0mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為水(A)和乙腈(B)，梯度洗脫程序如下0min時(shí)，流動(dòng)相A為85％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為15％的乙腈溶液；10in時(shí)，流動(dòng)相A為79％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為21％的乙腈溶液；15min時(shí)，流動(dòng)相A為69％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為31％的乙腈溶液；30min時(shí)，流動(dòng)相A為63％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為37％的乙腈溶液；35min時(shí)，流動(dòng)相A為15％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為85％的乙腈溶液；45min時(shí)，流動(dòng)相A為15％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為85％的乙腈溶液；流速為3ml/min，柱溫為室溫；樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段36.0～45.0min收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。
本發(fā)明的丹參有效組分可以作為活性成分，加入藥劑學(xué)上接受的輔料，按照藥劑學(xué)上記載的制劑的制備方法制成制劑。
本發(fā)明的丹參有效組分還可以作為活性成分之一，加入藥劑學(xué)上接受的輔料，按照藥劑學(xué)上記載的制劑的制備方法制成制劑。
所述的制劑包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。
本發(fā)明的丹參有效組分及其制劑可在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果為1.本發(fā)明的提取分離工藝中使用了正相硅膠柱，能有效地除去糖、蛋白質(zhì)、氨基酸等雜質(zhì)，提高有效成分的含量，同時(shí)采用了制備色譜，能快速準(zhǔn)確的得到有效成分。
2.本發(fā)明提供的丹參有效組分化學(xué)成分簡(jiǎn)單明確，在藥理研究上更易于闡明其作用機(jī)制，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。


圖1為本發(fā)明丹參有效組分的HPLC分析圖。
具體實(shí)施例方式
下面將結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容，該實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而對(duì)本發(fā)明并沒(méi)有限制。
實(shí)施例一 丹參有效組分的制備將200g丹參藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液I，棄之。藥渣加入乙醇，加熱提取得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏102.4g，用甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用低濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改換高濃度甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品10.24g；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫，樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段36.0～45.0min收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分0.39g。
實(shí)施例二 丹參有效組分的制備將500g丹參藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶0.8～1.2)，加熱回流0.8～1.2小時(shí)，提取1～3次，合并濾液得提取液I，棄之。在藥渣中加入60％～80％乙醇，加熱回流0.8～1.2小時(shí)，提取1～3次，濾液合并得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏255.86g，用40％～60％甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用3％～8％甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改換50％～70％甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品25.31g；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫，流速為2.8～3.2ml/min，柱溫為室溫，在時(shí)間段36.0～45.0min收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分0.93g。
實(shí)施例三 丹參有效組分的制備取丹參藥材250g，將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1)，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液I。藥渣加入70％乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏得138.3g，用50％甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用5％甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改換60％甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品13.83g；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱(LichrospherC18；10.0mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為水(A)和乙腈(B)，梯度洗脫程序如下0min時(shí)，流動(dòng)相A為85％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為15％的乙腈溶液；10in時(shí)，流動(dòng)相A為79％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為21％的乙腈溶液；15min時(shí)，流動(dòng)相A為69％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為31％的乙腈溶液；30min時(shí)，流動(dòng)相A為63％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為37％的乙腈溶液；35min時(shí)，流動(dòng)相A為15％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為85％的乙腈溶液；45min時(shí)，流動(dòng)相A為15％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為85％的乙腈溶液；流速為3ml/min，柱溫為室溫；樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段36.0～45.0min收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分0.52g。
實(shí)施例四 丹參有效組分的分析(1)丹參提取物中紫草酸，丹酚酸B，新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)的含量測(cè)定(高效液相色譜法)色譜條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A相為0.2％冰醋酸水溶液，流動(dòng)相B相為含0.2％冰醋酸的乙腈溶液；梯度洗脫程序如下0分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為80％的0.2％冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為20％的0.2％冰醋酸的乙腈溶液；15分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為50％的0.2％冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為50％的0.2％冰醋酸的乙腈溶液；20分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為50％的0.2％冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為50％的0.2％冰醋酸的乙腈溶液；流速0.5mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)全波長(zhǎng)；柱溫30℃；DAD檢測(cè)在190-400nm范圍內(nèi)掃描；進(jìn)樣量5μL。
供試品溶液的制備稱(chēng)取本品，用甲醇溶液溶解在容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。測(cè)定方法 精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
(2)上述丹參提取物HPLC-ELSD指紋圖譜測(cè)定方法參見(jiàn)(1)上述丹參提取物中的丹酚酸B，新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)含量測(cè)定(高效液相色譜法)。記錄色譜時(shí)間為25分鐘。
分析結(jié)果丹參有效組分的HPLC-ELSD分析譜圖見(jiàn)圖l。圖1中的1、2號(hào)峰分別為丹酚酸B和新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)。
實(shí)施例五 滴丸的制備取實(shí)施例三的丹參有效組分0.5g與10.5g聚乙二醇-6000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸滴灌中，藥液滴至6～8℃液體石蠟中，除油，制得滴丸300粒。
實(shí)施例六 凍干粉針劑的制備取實(shí)施例三的丹參有效組分0.5g、葡萄糖4.5g、硫代硫酸鈉0.9g和蒸餾水1ml，上述組分混合均勻后，冷凍干燥，分裝400支，即得。
實(shí)施例七 凍干粉針劑的制備取降香油1.5g，加入到13ml飽和的羥丙基β-環(huán)糊精中，攪拌溶解，濾過(guò)，濾液低溫干燥得降香油和羥丙基β-環(huán)糊精的包合物粉末。除上述降香油合羥丙基β-環(huán)糊精的包合物粉木外，再取實(shí)施例三的丹參提取物0.5g、甘露醇5.5g、依地酸鈣鈉0.9g和蒸餾水2ml，上述組分混勻后，冷凍干燥，分裝350支，即得。
實(shí)施例八 丹參有效組分的藥理實(shí)驗(yàn)1藥理模型乳鼠心肌細(xì)胞缺血缺氧模型原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)出生1～3天SD乳鼠處死后，取心臟，經(jīng)PBS液清洗后減成1mm3左右的碎塊。用0.125％胰蛋白酶(Sigma，USA)+0.05％膠原酶II(Gibco，USA)于37度消化3～4次。差速貼壁法分離成纖維細(xì)胞1.5小時(shí)后，細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至48孔板中(每孔約4×105細(xì)胞)。經(jīng)DMEM(Gibco，USA)加10％胎牛血清(Falcon，USA)培養(yǎng)3-6天的細(xì)胞供藥效篩選。篩選前1天替換為無(wú)血清培養(yǎng)液。培養(yǎng)3～6天的心肌細(xì)胞，PBS洗滌后加入含藥培養(yǎng)液。置于95％N2和5％CO2培養(yǎng)箱中缺氧6小時(shí)。然后在CO2培養(yǎng)箱中復(fù)氧3小時(shí)。取細(xì)胞上清液測(cè)定LDH含量。
給藥方案提取得到的丹參有效組分用無(wú)糖Hanks液配成10-4g/mL供試液，脂溶性成分可加入少量DMSO助溶(DMSO終濃度控制在0.2％以下)。各組分在培養(yǎng)液中的終濃度控制在10-5g/mL。
乳酸脫氫酶含量測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶含量能夠表示細(xì)胞損傷程度。漏入上清液中的乳酸脫氫酶含量越高，表明細(xì)胞損傷也顯著。乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。測(cè)定方法為取30微升細(xì)胞上清液，加入50微升基質(zhì)緩沖液及10微升乳酸脫氫酶輔酶，37度振蕩15分鐘，再加入50微升2，4-二硝基苯肼，37度振蕩15分鐘。平行空白。取反應(yīng)液50微升加入200微升0.4mol/L氫氧化鈉溶液，靜置3～4分鐘后，用酶標(biāo)儀于450nm測(cè)定光度值。
藥效結(jié)果所有數(shù)據(jù)用均值±方差表示。采用單邊方差分析和T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。與模型組相比，P＜0.05認(rèn)為顯著有效。藥效結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)心肌細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)結(jié)果，丹參有效組分對(duì)降低LDH釋放有非常顯著效果。
表1

2藥理模型臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)取健康新生兒臍帶，用30～50mlHanks液洗凈靜脈血管內(nèi)的殘留血跡。視臍帶長(zhǎng)度加入相應(yīng)量的0.1％膠原酶I，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱消化15～20分鐘。隨后將臍帶內(nèi)消化液小心收集到燒杯中，并用Hanks液將燒杯潤(rùn)洗兩次，一并收集到燒杯中分裝于離心管，900rpm離心10分鐘。吸去上清液，用M199培養(yǎng)液(含10％胎牛血清，100U/ml雙抗，0.15mg/ml Heparin，10uM VC)充分溶解沉淀。將所得細(xì)胞懸液分裝于5cm2培養(yǎng)瓶，置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。第二天換成采用含30ug/ml ECGS的M199培養(yǎng)液，之后每三天換一次培養(yǎng)液直至細(xì)胞鋪滿底面。所用細(xì)胞均為原代內(nèi)皮細(xì)胞。造模前將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞接種至96孔板并培養(yǎng)一天，所用細(xì)胞量為3.5～4萬(wàn)/孔。造模時(shí)，吸棄舊的M199培養(yǎng)液，加入含藥無(wú)酚紅M199培養(yǎng)液，每孔總量為100ul。置于95％N2和5％CO2培養(yǎng)箱中缺氧12小時(shí)，然后在CO2培養(yǎng)箱中復(fù)氧2小時(shí)。取細(xì)胞上清液測(cè)定LDH含量和NO含量。
給藥方案提取得到的丹參有效組分用無(wú)糖Hanks液配成10-4g/mL供試液，脂溶性成分可加入少量DMSO助溶(DMSO終濃度控制在0.2％以下)。各組分在無(wú)酚紅M199培養(yǎng)液中的終濃度控制在10-5g/mL。
NO含量測(cè)定采用Greiss試劑法測(cè)定，取90ul細(xì)胞上清液，加入等量Greiss試劑，室溫下靜置10分鐘，用酶標(biāo)儀于550nm測(cè)定吸光度值。
藥效結(jié)果所有數(shù)據(jù)用均值±方差表示。采用單邊方差分析和T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。與模型組相比，P＜0.05認(rèn)為顯著有效。藥效結(jié)果見(jiàn)表2。根據(jù)內(nèi)皮細(xì)胞NO含量檢測(cè)結(jié)果，枳殼有效組分對(duì)抑制內(nèi)皮細(xì)胞缺氧一復(fù)氧后NO過(guò)度表達(dá)有非常顯著效果。
表2

權(quán)利要求
1.一種丹參有效組分，其特征在于，以重量百分比計(jì)，丹酚酸B的含量為6～11％，新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)的含量為29～39％。
2.如權(quán)利要求1所述的丹參有效組分，其特征在于，以重量百分比計(jì)，丹酚酸B的含量為7～10％，新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)的含量為31～37％。
3.如權(quán)利要求1所述的丹參有效組分，其特征在于，以重量百分比計(jì)，丹酚酸B的含量為8～9％，新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)的含量為33～35％。
4.權(quán)利要求1所述丹參有效組分的制備方法，包括下列步驟將丹參藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫。
5.如權(quán)利要求書(shū)4所述的丹參有效組分的制備方法，包括下列步驟將丹參藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱回流0.8～1.2小時(shí)，提取1～3次，合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫，流速為2.8～3.2ml/min，柱溫為室溫。
6.如權(quán)利要求5所述的丹參有效組分的制備方法，其中乙酸乙酯和乙醇的體積比為1∶0.8～1.2，石油醚和乙酸乙酯的體積比為47～53∶1，氯仿和甲醇的體積比為8～13∶1。
7.如權(quán)利要求書(shū)4所述的丹參有效組分的制備方法，包括下列步驟取丹參藥材，將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液I。藥渣加入70％乙醇，加熱回流1小時(shí)，提取2次，濾液合并得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50％甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用5％甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液I，然后改換60％甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱(LichrospherC18；10.0mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為水(A)和乙腈(B)，梯度洗脫程序如下0min時(shí)，流動(dòng)相A為85％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為15％的乙腈溶液；10in時(shí)，流動(dòng)相A為79％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為21％的乙腈溶液；15min時(shí)，流動(dòng)相A為69％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為31％的乙腈溶液；30min時(shí)，流動(dòng)相A為63％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為37％的乙腈溶液；35min時(shí)，流動(dòng)相A為15％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為85％的乙腈溶液；45min時(shí)，流動(dòng)相A為15％的水+0.1％醋酸溶液，流動(dòng)相B為85％的乙腈溶液；流速為3ml/min，柱溫為室溫；樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段36.0-45.0min收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。
8.如權(quán)利要求7所述的丹參有效組分的制備方法，其特征在于，乙酸乙酯和乙醇的體積比為1∶1。
9.含有權(quán)利要求1-3任一權(quán)利要求所述的丹參有效組分的藥用制劑，其特征是，按照藥劑學(xué)允許的制備方法制成藥劑學(xué)接受的任一藥用制劑。
10.權(quán)利要求1-3任一權(quán)利要求所述的丹參有效組分在制備治療和預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種丹參有效組分，制劑及其制備方法與用途。在有效組分中，以重量百分比計(jì)，丹酚酸B的含量為6～11％，新隱丹參酮(Neocryptotanshinone)的含量為29～39％。本發(fā)明的丹參有效組分的制備方法包括下列步驟將丹參藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動(dòng)相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動(dòng)相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品，即得。本發(fā)明提供的丹參有效組分化學(xué)成分簡(jiǎn)單明確，在藥理研究上更易于闡明其作用機(jī)制，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1981810SQ20051012234
公開(kāi)日2007年6月20日 申請(qǐng)日期2005年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月14日
發(fā)明者程翼宇, 賀慶, 王毅, 王學(xué)偉, 李云飛, 胡興江, 葛志偉 申請(qǐng)人:天津天士力現(xiàn)代中藥研究開(kāi)發(fā)有限公司