專利名稱：包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
黃豆苷元(Daidzein)即4，7-二羥基異黃酮，分子式C15H10O4，分子量254.24，部分文獻(xiàn)稱本品黃豆甙元，是大豆種子中含有的異黃酮化合物之一，1972年由我國(guó)人工合成，由于它能與雌激素受體結(jié)合具有雌激素樣作用，故稱為植物雌激素，具有抗氧化、提高機(jī)體免疫力、雌激素作用、抗腫瘤作用、以及對(duì)血管和骨質(zhì)疏松癥的防護(hù)等作用，目前使用為普通片劑和膠囊劑。臨床上治療心絞痛、高血壓、突發(fā)性耳聾、偏頭痛以及婦女更年期綜合癥等。除此之外，黃豆苷元在食品、畜牧業(yè)和化妝品等行業(yè)也有著極其廣泛的用途。
黃豆苷元為類白色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭、無(wú)味，是心血管疾病和婦女更年期綜合癥的良藥，但是其水溶性與脂溶性都很差，生物利用度低，一般需連續(xù)服藥一周以上才顯效。為了改善黃豆苷元吸收率低下的難題，人們作了多種研究探索，其中張淑秋等(張淑秋，蔡玉珉，戴忠，等.葛根黃豆甙元-PVP分散物的研究.沈陽(yáng)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1993，10(1)9-13.)關(guān)于固體分散技術(shù)對(duì)黃豆苷元溶解度及其制劑溶出度和生物利用度的影響的系統(tǒng)研究，具有突出的技術(shù)效果。采用PVP制備的黃豆苷元∶PVP＝1∶9固體分散物37℃使黃豆苷元溶解度提高了8倍多(由5.445μg/ml提高到44.82μg/ml)，采用固體分散物制備的分散膠囊溶出度達(dá)到普通膠囊的9倍，進(jìn)一步以健康志愿者研究了分散膠囊的生物利用度(張淑秋，蔡玉珉葛根黃豆甙元固體分散物生物利用度的研究.沈陽(yáng)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1993，10(3)157-159.)，結(jié)果顯示，人體口服分散膠囊的生物利用度為市售膠囊的504％，黃豆苷元溶解度提高8倍使人體口服生物利用度提高了5倍。由此表明，增加其溶解性、改善溶出度是提高黃豆苷元口服生物利用度的關(guān)鍵，增加黃豆苷元溶解性成為研究熱點(diǎn)。
目前已經(jīng)發(fā)展了多種方法以解決黃豆苷元溶解性能的技術(shù)難題CN1431204A公開(kāi)了將黃豆苷元的羥基衍生成鹽型化合物的方式改善水溶性的技術(shù)；CN1442148A公開(kāi)了采用熔融聚乙二醇添加表面活性劑，制備黃豆苷元滴丸新劑型的方法；CN1528286A通過(guò)超微粉碎和滴丸劑生產(chǎn)工藝技術(shù)，以達(dá)到提高黃豆苷元崩解溶散速度、溶出速率和溶出度的技術(shù)；CN1561989A則公開(kāi)了助溶劑、稀釋劑、乳化劑和崩解劑綜合應(yīng)用以提高黃豆苷元水溶性和分散性的技術(shù)。經(jīng)過(guò)多種技術(shù)改進(jìn)，目前市售的黃豆苷元片劑、膠囊劑45分鐘1000ml純水中可溶出標(biāo)示量的70％以上。試驗(yàn)表明，這些化學(xué)的或物理混合物的改進(jìn)方法能夠較好地解決黃豆苷元的初始溶出性能，但是，其制備的體系穩(wěn)定性不高、溶解度提高有限，黃豆苷元難以保持持續(xù)較高而穩(wěn)定的溶解濃度，如市售黃豆苷元片水中快速溶出后，65分鐘即開(kāi)始析出藥物，3-4小時(shí)后溶液中黃豆苷元大部析出。黃豆苷元片在模擬胃液試驗(yàn)中溶出性能差，析出現(xiàn)象更明顯。這種藥物快速溶出又快速析出沉淀的不穩(wěn)定性質(zhì)難以根本解決黃豆苷元生物利用度難題。
環(huán)糊精包合技術(shù)對(duì)難溶藥物具有很好的增溶作用，已被應(yīng)用到提高黃豆苷元溶解性的研究中，文獻(xiàn)(王淑君等，改善葛根黃豆甙元體外溶出.遼寧藥物與臨床，2000，3(3)125-127)采用DMF和乙醇為溶劑，分別以黃豆苷元∶β-環(huán)糊精1∶4及1∶6質(zhì)量比(摩爾比1∶1)，研磨法制備包合物，黃豆苷元的溶解度分別由3.14μg/ml增加到9.90μg/ml和9.97μg/ml，僅提高約3.2倍。結(jié)果表明，環(huán)糊精包合技術(shù)明顯不如固體分散體技術(shù)效果好(比例相近的PVP分散體溶解度增加到28.0μg/ml以上)，文獻(xiàn)認(rèn)為其原因可能由于黃豆苷元的分子量過(guò)大不能被包合進(jìn)環(huán)糊精，或不能與之牢固結(jié)合，因而，環(huán)糊精不能有效改善黃豆苷元溶解度和溶出。實(shí)際上，環(huán)糊精對(duì)難溶藥物的增溶作用是以包合作用體現(xiàn)的，包合物與物理混合物具有明顯而本質(zhì)的區(qū)別，前者是藥物與環(huán)糊精通過(guò)分子識(shí)別而進(jìn)入環(huán)糊精空腔形成的結(jié)構(gòu)有序的超分子；后者則無(wú)超分子的基本特征，是無(wú)規(guī)則的混合。如果簡(jiǎn)單將環(huán)糊精與難溶藥物混合(物理混合物)將難以發(fā)揮環(huán)糊精包合作用，也即達(dá)不到所需的技術(shù)效果。制備難溶藥物的環(huán)糊精包合物需要采用獨(dú)特的技術(shù)和方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中“黃豆苷元不能被包合進(jìn)環(huán)糊精，或不能與之牢固結(jié)合”的傳統(tǒng)偏見(jiàn)，提供一種黃豆苷元的環(huán)糊精包合物，使黃豆苷元具有較高而穩(wěn)定的溶解度；以解決黃豆苷元溶解度小、溶出性能差的技術(shù)難題。本發(fā)明同時(shí)提供該包合物的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物，其組成是β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基-β-環(huán)糊精三者中的單一環(huán)糊精、或其中兩種或三種環(huán)糊精的混合物；黃豆苷元；所述的環(huán)糊精與黃豆苷元的摩爾比是1∶1～0.1；該組合物的包合穩(wěn)定常數(shù)Ka為335M-1～521M-1。
以上方案的進(jìn)一步限定，所述的包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物，是由環(huán)糊精與1～0.1摩爾比的黃豆苷元，在水溶液中先堿化加熱，后酸化冷卻得到的包合態(tài)組合物。
換言之，該組合物是使用β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基-β-環(huán)糊精三者中的單一環(huán)糊精、或其中兩種或三種環(huán)糊精的混合物，在水溶液中采用先堿化后酸化的包合方法，制備各種合適比例的黃豆苷元包合物(包合組合物)。
所述的先堿化加熱，后酸化冷卻，是在環(huán)糊精的水溶液中加入1～0.1摩爾比的黃豆苷元，加熱至50℃～80℃，緩慢滴加堿溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾，于35℃～50℃攪拌下用酸調(diào)pH至中性析出的固體物。
所述的堿溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液；所述的酸為鹽酸或磷酸。
技術(shù)原理環(huán)糊精應(yīng)用于藥物的基本特征是環(huán)糊精對(duì)藥物分子產(chǎn)生包合作用并且能夠形成穩(wěn)定的包合物，包合物不是物理混合物，而是分子間存在特殊作用(如空間效應(yīng)、VDW力、氫鍵、疏水鍵等弱作用)的超分子體。環(huán)糊精-藥物分子間發(fā)生包合作用需具備兩個(gè)基本條件1)分子間空間合適；2)分子間存在弱作用。計(jì)算機(jī)模擬計(jì)算結(jié)果，β-環(huán)糊精具有7.84～9.07的空腔內(nèi)徑，而黃豆苷元分子呈直片狀，分子最寬處距離4.32，最長(zhǎng)距離13.13。由此可見(jiàn)，β-環(huán)糊精與黃豆苷元分子包合具備合適的作用空間；黃豆苷元水溶性小而疏水性較強(qiáng)，β-環(huán)糊精內(nèi)腔疏水外端親水的特點(diǎn)，適合與含有羥基的黃豆苷元形成VDW力、疏水鍵和氫鍵等分子間弱作用。由此分析認(rèn)為，黃豆苷元具備與β-環(huán)糊精及其衍生物形成包合物的可能。這與現(xiàn)有技術(shù)認(rèn)為的“黃豆苷元不能被包合進(jìn)環(huán)糊精，或不能與之牢固結(jié)合”具有完全不同的結(jié)論。黃豆苷元形成包合物必定對(duì)分子理化性質(zhì)產(chǎn)生重要影響，其作用效果將明顯區(qū)別于混合物。
UV光譜試驗(yàn)表明，極稀水溶液中，各種環(huán)糊精對(duì)黃豆苷元存在明顯包合作用，且包合物形成的穩(wěn)定常數(shù)Ka在335M-1～521M-1范圍，說(shuō)明水溶液中黃豆苷元與環(huán)糊精可以形成穩(wěn)定的包合物。
包合物制備與化學(xué)反應(yīng)類似，有了形成穩(wěn)定包合物的可能性并不等于能夠?qū)嶋H制備出理想的包合物。文獻(xiàn)按照常規(guī)方法難以獲得包合物，說(shuō)明黃豆苷元的包合具有熱力學(xué)有利而動(dòng)力學(xué)不利的特性，制備包合物具有難度。包合作用一般在溶液狀態(tài)進(jìn)行，動(dòng)力學(xué)性質(zhì)主要體現(xiàn)出濃度為制約的主要因素。常規(guī)方法包合過(guò)程中，進(jìn)入溶液狀態(tài)的黃豆苷元濃度太小，導(dǎo)致包合速度過(guò)低而難以在有限時(shí)間內(nèi)得到包合物；增加溶液中黃豆苷元濃度將加快包合速度而有利于包合物制備。黃豆苷元羥基具弱酸性，與堿反應(yīng)成鹽能夠顯著提高溶解度，另外試驗(yàn)證明，堿性條件下(pH9～10)鹽型黃豆苷元形成包合物具有較高的穩(wěn)定常數(shù)，Ka為400M-1～550M-1。可見(jiàn)，堿性條件下，鹽型黃豆苷元即具有形成包合物的可能性，又具有足夠的濃度，因此，改變條件為堿性后，黃豆苷元包合作用即轉(zhuǎn)化成為熱力學(xué)有利且動(dòng)力學(xué)也可行的過(guò)程，將容易制備得到包合物。
本發(fā)明采用加入堿使黃豆苷元成鹽的方法提高體系中黃豆苷元濃度，鹽型黃豆苷元快速形成包合物(堿化后稍加熱體系即完全溶解)，然后酸化體系至pH5～7，黃豆苷元包合物溶解度小于鹽型包合物而從體系中沉淀析出，過(guò)濾洗滌除去無(wú)機(jī)鹽，即得到高純度黃豆苷元包合物。
試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，pH9～10條件下鹽型黃豆苷元溶液加熱數(shù)分鐘、鹽型包合物溶液加熱2小時(shí)體系即變化為深色(HPLC測(cè)定出現(xiàn)多個(gè)雜質(zhì)峰)，顯示鹽型黃豆苷元極不穩(wěn)定，久置、光照及受熱易氧化，因此，制備過(guò)程中體系加熱加堿溶解后，宜盡快冷卻并酸化體系使鹽型包合物轉(zhuǎn)化為黃豆苷元包合物，長(zhǎng)時(shí)間溫度過(guò)高和加堿過(guò)量將影響包合物產(chǎn)品質(zhì)量及產(chǎn)率。
已有試驗(yàn)表明，包合物溶解度比黃豆苷元提高了12～350倍。包合增溶效果與環(huán)糊精種類及用量有關(guān)。增溶效果磺丁基-β-環(huán)糊精＞羥丙基-β-環(huán)糊精＞β-環(huán)糊精；增加環(huán)糊精用量增溶效果顯著提高。由于羥丙基-β-環(huán)糊精和磺丁基-β-環(huán)糊精價(jià)格高，β-環(huán)糊精中加入少量羥丙基-β-環(huán)糊精或磺丁基-β-環(huán)糊精即可顯著提高溶解度，因此混合環(huán)糊精十分有利于降低成本。磺丁基-β-環(huán)糊精指3-環(huán)糊精的磺丁基化衍生物藥用SBE7-β-CD(樣品由南京師范大學(xué)新藥研究中心提供，制備方法參考文獻(xiàn)QI QU，EDWARDTUCKER and SHERRIL D.CHRISTIANSulfoalkyl Ether β-CyclodextrinDerivativesSynthesis and Characterizations.Journal of Inclusion Phenomenaand Macrocyclic Chemistry 43213-221，2002.)。
以上所述的“少量”是指混合環(huán)糊精中采用少于β-環(huán)糊精的、其摩爾比為β-環(huán)糊精0.5倍以下比例的磺丁基-β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精與β-環(huán)糊精組成混合環(huán)糊精。
包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物的制備方法如下將上述的環(huán)糊精與2～8倍質(zhì)量比例水混合，加入1～0.1摩爾比的黃豆苷元，加熱至50℃～80℃，緩慢滴加氫氧化鈉溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾，于35℃～50℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性析出固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即得固體包合物。
本發(fā)明針對(duì)不同環(huán)糊精的組合物推薦以下優(yōu)化方案將β-環(huán)糊精與6～8倍質(zhì)量比例水混合，加入0.5～0.1摩爾比的黃豆苷元加熱至80℃，緩慢滴加氫氧化鈉溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾，于50℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性即析出固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即得固體包合物。
或，將磺丁基-β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精與2～4倍質(zhì)量比例水混合，加入1～0.3摩爾比的黃豆苷元加熱至50℃～60℃，緩慢滴加氫氧化鈉溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾，于35℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性即析出固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即得固體包合物。
或，將β-環(huán)糊精與0.5～0.1摩爾比的磺丁基-β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精混合，再與3～4倍質(zhì)量比例水混合，加入0.5～0.2摩爾比的黃豆苷元，加熱至50℃～60℃，緩慢滴加氫氧化鈉溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾，于35℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性即析出固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即得固體包合物。
以下試驗(yàn)說(shuō)明了本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)點(diǎn)(1)包合常數(shù)的測(cè)定pH6.86混合磷酸緩沖液配制黃豆苷元飽和溶液，稀釋5倍得黃豆苷元稀溶液，用此稀溶液配制環(huán)糊精的濃溶液。取黃豆苷元稀溶液紫外掃描得249nm的吸收值(A0)，改變環(huán)糊精濃度為1.67×10-4～8.94×10-4mol/L，得各組不同環(huán)糊精濃度溶液的紫外吸收(A1-An)由公式1/ΔAn＝1/(KaΔε[G]0)*1/[CD]n+1/(Δε[G]0)整理數(shù)據(jù)1/[CD]n和1/ΔAn(ΔA為加入環(huán)糊精后紫外吸收值變化，[CD]n環(huán)糊精總濃度，[G]0黃豆苷元濃度，Δε包合前后摩爾吸光系數(shù)之差)，以1/ΔAn對(duì)1/[CD]n作圖，由直線截距/斜率得黃豆苷元/環(huán)糊精的包合常數(shù)Ka見(jiàn)下表，測(cè)定的紫外掃描圖如圖1所示為例。

(2)差示熱分析驗(yàn)證制備產(chǎn)物為包合物稱取黃豆苷元、環(huán)糊精、黃豆苷元的環(huán)糊精物理混合物、包合物共四種樣品各5.0mg，進(jìn)行差示掃描熱分析Al2O3參比，量程±50μV，升溫范圍30℃～400℃，升溫速率10℃/min，得DTA圖譜。以β-環(huán)糊精為例，各樣品差熱分析圖如圖2所示。
(3)1H-NMR說(shuō)明包合物結(jié)構(gòu)樣品黃豆苷元/β-環(huán)糊精包合物(黃豆苷元過(guò)量20％)、β-環(huán)糊精，溶劑D2O，測(cè)定溫度25℃。β-環(huán)糊精1H-NMR譜如圖3、包合物譜如圖4所示。
核磁共振譜分析包合物中環(huán)糊精各質(zhì)子δ(ppm)均出現(xiàn)高場(chǎng)位移，說(shuō)明黃豆苷元已進(jìn)入β-環(huán)糊精形成了包合物。指向β-環(huán)糊精空腔內(nèi)側(cè)的C5-H和C3-H因接近黃豆苷元，受芳香環(huán)流影向?qū)е赂蟮奈灰?，其中伯羥基面C5-H(內(nèi)徑小)比仲羥基面C3-H(內(nèi)徑大)更接近于黃豆苷元芳香環(huán)，因此，位移更加明顯，說(shuō)明黃豆苷元不僅深入β-環(huán)糊精，且到達(dá)深處于環(huán)的伯羥基面位置，而形成黃豆苷元整體穿過(guò)β-環(huán)糊精的包合物。包合前后β-環(huán)糊精的葡糖環(huán)上各碳連接質(zhì)子的化學(xué)位移δ見(jiàn)下表。

(4)溶解度測(cè)定精密稱取黃豆苷元對(duì)照品19.5mg于100ml容量瓶中，無(wú)水乙醇溶解定容，得195μg/ml的黃豆苷元試液，純凈水稀釋成0.975μg/ml～7.8μg/ml系列溶液，249nm下測(cè)定紫外吸收A，以A對(duì)濃度C(μg/ml)作圖繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得C＝8.1774 A+0.1077(r＝0.9997)。純凈水加過(guò)量黃豆苷元或包合物，25℃±1℃振蕩16h達(dá)溶解平衡，過(guò)濾，移取濾液適量，純凈水稀釋，249nm處測(cè)定紫外吸光度，依標(biāo)準(zhǔn)曲線得黃豆苷元或包合物25℃下溶解度，各包合物溶解度見(jiàn)下表


從表中可以看出環(huán)糊精包合以后黃豆苷元溶解度得到了明顯提高，3.5摩爾量羥丙基-β-環(huán)糊精可使溶解度提高達(dá)350倍，環(huán)糊精包合技術(shù)對(duì)黃豆苷元的增溶效果顯著優(yōu)于現(xiàn)有的固體分散技術(shù)。
(5)溶出度的測(cè)定黃豆苷元/β-環(huán)糊精摩爾比1∶2包合物與常用輔料按下表比例混合，過(guò)100目篩混勻，5％聚維酮水溶液制軟材，16目篩濕法制粒，60℃烘箱干燥5h，20目篩整粒，干顆粒中加入處方量的硬脂酸鎂(200篩)混2～3min，7kg左右壓力壓片，制備1000片黃豆苷元包合片。黃豆苷元包合片劑(黃豆苷元＝50mg/片)制備處方表如下


黃豆苷元包合片6片，市售黃豆苷元片6片，依照“黃豆苷元片”溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2005年版二部)測(cè)定45分鐘溶出度。為說(shuō)明本發(fā)明產(chǎn)品溶出度性能，又加時(shí)測(cè)定了2小時(shí)、4小時(shí)和6小時(shí)溶出度。結(jié)果包合片和市售黃豆苷元片45分鐘法定時(shí)間內(nèi)的平均溶出度分別為73.73％和71.97％，均符合藥典規(guī)定。但隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，兩種片劑溶出度發(fā)生明顯變化產(chǎn)生很大區(qū)別，市售黃豆苷元片1小時(shí)后溶出度開(kāi)始下降，黃豆苷元逐漸析出；而包合物制劑溶出平穩(wěn)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，溶出度不下降還緩慢上升，6小時(shí)后兩種產(chǎn)品溶出度比較包合片制劑是市售黃豆苷元片溶出的7.62倍(附圖4)?？梢?jiàn)，環(huán)糊精包合技術(shù)對(duì)黃豆苷元溶出性能的改進(jìn)方式結(jié)果均不同于現(xiàn)有的固體分散技術(shù)，溶出效果顯著優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。
高而且穩(wěn)定的溶出性能使口服包合片制劑可在整個(gè)用藥期內(nèi)保持體內(nèi)高而穩(wěn)定的溶解濃度，將有利于穩(wěn)定藥物吸收。市售黃豆苷元片溶出后又析出，與文獻(xiàn)溶出試驗(yàn)基本一致，對(duì)比生物利用度試驗(yàn)(張淑秋，蔡玉珉.葛根黃豆甙元固體分散物生物利用度的研究.沈陽(yáng)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1993，10(3)157-159.)，溶出試驗(yàn)結(jié)果與人體用藥1小時(shí)前吸收快速上升、2小時(shí)后血藥濃度快速下降的現(xiàn)象基本對(duì)應(yīng)，Cp過(guò)高、t1/2過(guò)短對(duì)臨床用藥是不利的。
(6)包合物和包合片穩(wěn)定性試驗(yàn)按新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則分別對(duì)黃豆苷元包合物和黃豆苷元包合片進(jìn)行了影響因素試驗(yàn)及加速試驗(yàn)。考察性狀、含量及雜質(zhì)，測(cè)定方法均按照中國(guó)藥典2005年版二部黃豆苷元片有關(guān)項(xiàng)進(jìn)行。
(6.1)影響因素試驗(yàn)取摩爾比1∶2包合物50g和包合片若干片，按以下三個(gè)方面試驗(yàn)，于第0、5、10天分別取樣考察試驗(yàn)。
1)光照試驗(yàn)取包合物10g和包合片50片，置于透明密封容器中，放在裝有日光燈的光照箱內(nèi)，在4500±500LX光照度的條件下放置10天，于0、5、10天取樣檢查分析，結(jié)果與零天樣品比較。
2)高溫試驗(yàn)取包合物10g和包合片50片，分別置于密封潔凈容器中，在60℃的溫度下放置10天，于0、5、10天取樣檢查分析，結(jié)果與零天樣品比較。
3)高濕度試驗(yàn) 取包合物10g和包合片50片，置恒濕密閉器皿中于室溫25℃下，在相對(duì)濕度90±5％(飽和KNO3溶液)條件下放置10天，于0、5、10天取樣檢查分析，結(jié)果與零天樣品比較。
影響因素試驗(yàn)結(jié)果表明，本品在光照(4500±500LX)和高溫(60℃)條件下放置10天，外觀顏色沒(méi)有改變，含量未見(jiàn)降低，雜質(zhì)無(wú)變化(高溫試驗(yàn)HPLC供試品溶液圖譜幾無(wú)雜質(zhì)峰，見(jiàn)附圖6)。在高濕度(RH90±5％)下放置，包合物受潮現(xiàn)象明顯，含量有所降低，包合片受潮較輕微，但含量未見(jiàn)明顯降低，降解物及雜質(zhì)未見(jiàn)增多。
(6.2)加速試驗(yàn)取包合物60g和包合片60片，包合物置于玻璃廣口瓶，包合片模擬市售包裝，于40℃相對(duì)濕度75％條件下放置6個(gè)月，于0、1、2、3、6個(gè)月取樣分析，結(jié)果與零月樣品比較。
加速試驗(yàn)結(jié)果表明在此條件下放置6個(gè)月后，包合物和包合片外觀性狀、含量及雜質(zhì)與0月相比，均無(wú)明顯變化，說(shuō)明樣品是穩(wěn)定的。
本發(fā)明克服了“黃豆苷元不能被包合進(jìn)環(huán)糊精，或不能與之牢固結(jié)合”的傳統(tǒng)偏見(jiàn)，具有如下優(yōu)點(diǎn)黃豆苷元與環(huán)糊精形成包合物后，其溶解度顯著提高，溶出度明顯增大，并且具有穩(wěn)定的溶解度。包合物制劑溶出性能與現(xiàn)有產(chǎn)品比較具有明顯提高，溶出后無(wú)沉淀析出。
采用純水條件制備包合物，不加入任何有機(jī)溶劑，避免有機(jī)溶劑的殘留，保證用藥安全。
黃豆苷元包合物性質(zhì)穩(wěn)定、與其他藥用輔料相容性好，易于配伍制劑加工。能夠很好地增強(qiáng)制劑穩(wěn)定性、改善制劑藥學(xué)性能。
制備方法簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、原料易得、成本低且無(wú)環(huán)境污染。包合物易儲(chǔ)存易運(yùn)輸、無(wú)毒害。


圖1為黃豆苷元/β-環(huán)糊精包合常數(shù)測(cè)定的紫外掃描圖。
圖2為黃豆苷元、β-環(huán)糊精、黃豆苷元與β-環(huán)糊精物理混合物、黃豆苷元與β-環(huán)糊精包合物的DTA圖譜。
圖3為β-環(huán)糊精的1H-NMR圖，溶劑D2O。
圖4為黃豆苷元/β-環(huán)糊精包合物的1H-NMR圖，溶劑D2O。
圖5為黃豆苷元/β-環(huán)糊精包合片與市售黃豆苷元片的溶出度變化。
圖6為高溫試驗(yàn)后黃豆苷元/β-環(huán)糊精包合片的HPLC測(cè)定雜質(zhì)圖譜具體實(shí)施方式
實(shí)施例1，取0.10摩爾β-環(huán)糊精與910ml水混合，加入0.01摩爾的黃豆苷元加熱攪拌至80℃，緩慢滴加氫氧化鈉溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾得淺亮黃色濾液，于50℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性即析出白色固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即得固體包合物。
實(shí)施例2，將0.10摩爾β-環(huán)糊精與230ml水混合，加入0.01摩爾的黃豆苷元加熱攪拌至80℃，緩慢滴加氫氧化鉀溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾得淺亮黃色濾液，于50℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性即析出白色固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即得固體包合物。
實(shí)施例3，取0.10摩爾β-環(huán)糊精與910ml水混合，加入0.10摩爾黃豆苷元加熱攪拌至80℃，緩慢滴加氫氧化鈉溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾得淺亮黃色濾液，于50℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性即析出白色固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即，得固體包合物。
實(shí)施例4，與實(shí)施例2基本相同，但是加入0.05摩爾黃豆苷元。
實(shí)施例5，與實(shí)施例1基本相同，但是加熱至50℃緩慢滴加氫氧化鉀溶液；酸化采用磷酸溶液。
實(shí)施例6，與實(shí)施例1基本相同，但是是在35℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性。
實(shí)施例7，與實(shí)施例2基本相同，但是用羥丙基-β-環(huán)糊精取代β-環(huán)糊精。
實(shí)施例8，與實(shí)施例2基本相同，但是用磺丁基-β-環(huán)糊精取代β-環(huán)糊精。
實(shí)施例9，與實(shí)施例3基本相同，但是再加入0.05摩爾的羥丙基-β-環(huán)糊精與230ml水混合，以混合環(huán)糊精包合，得固體包合物。
實(shí)施例10，與實(shí)施例3基本相同，但是再加入0.05摩爾的磺丁基-β-環(huán)糊精，以混合環(huán)糊精包合，得固體包合物。。
實(shí)施例11，與實(shí)施例3基本相同，但是再加入0.1摩爾的羥丙基-β-環(huán)糊精，以混合環(huán)糊精包合，得固體包合物。
實(shí)施例12，與實(shí)施例3基本相同，但是再加入0.1摩爾磺丁基-β-環(huán)糊精，以混合環(huán)糊精包合，得固體包合物。
實(shí)施例13，與實(shí)施例3基本相同，但是加入0.02摩爾的黃豆苷元，再加入0.01摩爾磺丁基-β-環(huán)糊精，以混合環(huán)糊精包合，得固體包合物。
實(shí)施例14，與實(shí)施例3基本相同，但是再加入0.1摩爾磺丁基-β-環(huán)糊精和0.1摩爾羥丙基-β-環(huán)糊精，以三種環(huán)糊精混合包合，得固體包合物。
實(shí)施例15，與實(shí)施例3基本相同，但是再加入0.01摩爾磺丁基-β-環(huán)糊精和0.01摩爾羥丙基-β-環(huán)糊精，以三種環(huán)糊精混合包合，得固體包合物。
實(shí)施例16，與實(shí)施例3基本相同，但是再加入0.03摩爾的羥丙基-β-環(huán)糊精和0.03摩爾羥丙基-β-環(huán)糊精，以三種環(huán)糊精混合包合，得固體包合物。
實(shí)施例17，與實(shí)施例3基本相同，但是再加入0.05摩爾的磺丁基-β-環(huán)糊精和0.05摩爾羥丙基-β-環(huán)糊精，以三種環(huán)糊精混合包合，得固體包合物。
實(shí)施例19，與實(shí)施例3基本相同，但環(huán)糊精采用磺丁基-β-環(huán)糊精，其與黃豆苷元的摩爾比為1∶1。
實(shí)施例20，與實(shí)施例3基本相同，但環(huán)糊精采用磺丁基-β-環(huán)糊精，其與黃豆苷元的摩爾比為1∶0.3。
實(shí)施例21，與實(shí)施例3基本相同，但環(huán)糊精采用羥丙基-β-環(huán)糊精，其與黃豆苷元的摩爾比為1∶1。
實(shí)施例22，與實(shí)施例3基本相同，但環(huán)糊精采用羥丙基-β-環(huán)糊精，其與黃豆苷元的摩爾比為1∶0.3。
實(shí)施例23，黃豆苷元與pH6.86的混合磷酸緩沖液混合，超聲處理1小時(shí)，過(guò)濾配制得黃豆苷元溶液，將其稀釋5倍得黃豆苷元稀溶液(a)。用此稀溶液配制成0.00132mol/l的β-環(huán)糊精濃溶液(b)。取黃豆苷元稀溶液a紫外掃描得249nm的吸收值(A0)，在a溶液中加入溶液b，混合均勻后紫外掃描得249nm的吸收值(A1)。依次不斷加入溶液b，逐次遞增β-環(huán)糊精濃度，使β-環(huán)糊精濃度改變范圍為1.67×10-4～8.94×10-4mol/L，依次得不同β-環(huán)糊精濃度溶液的紫外吸收(A1～An)，計(jì)算ΔAn(加入環(huán)糊精后體系紫外吸收值變化，ΔAn＝An-A0)和各An值下的β-環(huán)糊精濃度[CD]n，整理數(shù)據(jù)1/[CD]n和1/ΔAn，以1/ΔAn對(duì)1/[CD]n作圖，回歸得直線方程1/ΔAnn＝0.04511/[CD]n+18.274(R2＝0.9817)，由直線方程截距/斜率得黃豆苷元/β-環(huán)糊精的包合常數(shù)Ka＝405M-1。
實(shí)施例24，與實(shí)施例23基本相同，但環(huán)糊精采用磺丁基-β-環(huán)糊精，回歸得直線方程1/ΔAnn＝0.04110/[CD]n+21.370(R2＝0.9917)，由直線方程截距/斜率得黃豆苷元/磺丁基-β-環(huán)糊精的包合常數(shù)Ka＝521M-1。
實(shí)施例25，與實(shí)施例23基本相同，但環(huán)糊精采用羥丙基-β-環(huán)糊精，回歸得直線方程1/ΔAnn＝0.04181/[CD]n+14.015(R2＝0.9974)，由直線方程截距/斜率得黃豆苷元/羥丙基-β-環(huán)糊精的包合常數(shù)Ka＝335M-1。
權(quán)利要求
1.一種包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物，其組成是β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基-β-環(huán)糊精三者中的單一環(huán)糊精、或其中兩種或三種環(huán)糊精的混合物；黃豆苷元；所述的環(huán)糊精與黃豆苷元的摩爾比是，1∶1～0.1；該組合物的包合穩(wěn)定常數(shù)Ka為335M-1～521M-1。
2.按照權(quán)利要求1所述的包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物，其特征在于所述的包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物，是由環(huán)糊精與1～0.1摩爾比的黃豆苷元，在水溶液中先堿化加熱，后酸化中和冷卻得到的組合物。
3.按照權(quán)利要求2所述的包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物，其特征在于，所述的先堿化加熱，后酸化中和冷卻，是在環(huán)糊精的水溶液中加入1～0.1摩爾比的黃豆苷元，加熱至50℃～80℃，緩慢滴加堿溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾，于35℃～50℃攪拌下用酸調(diào)pH至中性析出的固體物。
4.按照權(quán)利要求1或2或3所述的包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物，其特征在于采用不同環(huán)糊精時(shí)的摩爾比分別是β-環(huán)糊精與黃豆苷元為1∶0.5～0.1；磺丁基-β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精與黃豆苷元為1∶1～0.3；β-環(huán)糊精與0.5～0.1摩爾比的磺丁基-β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精混合物，與黃豆苷元的摩爾比為1∶0.5～0.2。
5.一種權(quán)利要求1所述的包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物的制備方法，其步驟是將環(huán)糊精與2～6倍質(zhì)量比例水混合，加入1～0.1摩爾比的黃豆苷元加熱至50℃～80℃，緩慢滴加堿溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾，于35℃～50℃攪拌下用酸調(diào)pH至中性析出固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即得固體包合物，所述的環(huán)糊精為β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、磺丁基-β-環(huán)糊精三者中的單一環(huán)糊精、或其中兩種或三種環(huán)糊精的混合物。
6.按照權(quán)利要求5所述的包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物的制備方法，其特征在于，所述的堿溶液為氫氧化鈉溶液，氫氧化鉀溶液；所述的酸為鹽酸或磷酸溶液。
7.按照權(quán)利要求5或6所述的包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物的制備方法，其特征在于，采用不同環(huán)糊精時(shí)的具體操作步驟分別是將β-環(huán)糊精與6～8倍質(zhì)量比例水混合，加入0.5～0.1摩爾比的黃豆苷元加熱至80℃，緩慢滴加氫氧化鈉溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾，于50℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性即析出固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即得固體包合物；或，將磺丁基-β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精與2～4倍質(zhì)量比例水混合，加入1～0.3摩爾比的黃豆苷元加熱至50℃～60℃，緩慢滴加氫氧化鈉溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾，于35℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性即析出固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即得固體包合物；或，將β-環(huán)糊精與0.5～0.1摩爾比的磺丁基-β-環(huán)糊精或羥丙基-β-環(huán)糊精混合，再與3～4倍質(zhì)量比例水混合，加入0.5～0.2摩爾比的黃豆苷元，加熱至50℃～60℃，緩慢滴加氫氧化鈉溶液至體系全溶時(shí)止，熱過(guò)濾，于35℃攪拌下用鹽酸調(diào)pH至中性即析出固體物，冷卻、過(guò)濾、水洗沉淀物，真空干燥即得固體包合物。
全文摘要
包合態(tài)的黃豆苷元/環(huán)糊精組合物，組成是β－環(huán)糊精、羥丙基－β－環(huán)糊精、磺丁基－β－環(huán)糊精中的一種或兩種、三種環(huán)糊精的混合物與黃豆苷元；兩者的摩爾比是，1∶1～0.1；包合穩(wěn)定常數(shù)Ka為335M
文檔編號(hào)A61K31/724GK1978509SQ20051012294
公開(kāi)日2007年6月13日 申請(qǐng)日期2005年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月9日
發(fā)明者任勇, 王敏, 董祥玉, 馬學(xué)琴 申請(qǐng)人:南京師范大學(xué), 南京巨環(huán)醫(yī)藥科技開(kāi)發(fā)有限公司