專利名稱：一種前列地爾脂肪乳劑滅菌工藝及測定的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種前列地爾脂肪乳劑(前列地爾注射液)滅菌工藝及測定的方法，前列地爾脂肪乳劑是一種含有前列腺素E1的脂肪乳脂微球制劑，主要用于治療肢未端缺血癥、糖尿病并發(fā)癥、脈管炎和一些心血管疾病，屬于藥品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
前列地爾脂肪乳劑的制備方法在日本公開特許公報(bào)昭58-222014已經(jīng)公開，是采用高壓乳勻機(jī)設(shè)備將主藥前列地爾(PGE1)溶于大豆油中，在磷脂類乳化劑作用下，高壓乳化而成，在該專利中，未說明滅菌方法。目前已上市的該品種通常采用全程無菌操作的方法，即在百級凈化車間，原輔料均已滅菌的情況下進(jìn)行生產(chǎn)。前列地爾注射液是一種水包油型脂肪乳劑，乳劑物理穩(wěn)定性較差，受很多滅菌因素影響，而主藥前列地爾也是一種不穩(wěn)定藥物，不耐熱，在高溫情況下容易分解，采用常規(guī)的已知的方法，如濕熱滅菌法，即采用熱壓115℃30分鐘，或121℃15分鐘，或流通蒸汽30分鐘，這些滅菌方法雖然可達(dá)到完全滅菌狀態(tài)，但是主藥將有較大的分解，主藥降解率超過50％，乳劑物理穩(wěn)定性也差，有飄油等現(xiàn)象發(fā)生。輻射滅菌法同樣將使前列地爾產(chǎn)生較大降解。紫外線和化學(xué)法不適合注射液的滅菌。而采用全程無菌的方法，控制條件非常嚴(yán)格，實(shí)際很難操作，不能保證所有產(chǎn)品處于無菌狀態(tài)。另外一種方法，是采用以0.22μm微孔濾膜過濾，由于前列地爾脂肪乳劑的粒徑通常在0.1～2μm之間，很難使全部含藥脂微球通過膜，部分細(xì)菌在壓力下，有擠過的可能，難以保證全部產(chǎn)品無菌。微波滅菌曾有作者龐淳在文獻(xiàn)“西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)，1986，2期”報(bào)道在針劑安瓿滅菌中進(jìn)行應(yīng)用，但文獻(xiàn)未提供乳劑藥液采用微波滅菌的方法，至今，在前列地爾注射液滅菌方面未見有關(guān)滅菌的應(yīng)用文獻(xiàn)或?qū)＠麍?bào)道。
控制前列地爾脂肪乳劑中的前列腺素E1(PGE1)及其相關(guān)物質(zhì)前列腺素A1含量是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中重要部分，以往前列腺素E1的含量測定，一般采用紫外分光光度法和高效液相法，紫外分光光度法主要采用將PGE1堿化轉(zhuǎn)變?yōu)镻GB1后在紫外278nm波長處進(jìn)行測定，由于不能區(qū)分PGE與PGA、PGB，已很少采用。高效液相法采用較多，一般采用柱后堿化衍生將PGE轉(zhuǎn)化為PGB，在278nm波長進(jìn)行測定或者將PGE甲脂化上機(jī)測定，也有采用PGE未端吸收方法，在205nm、214nm直接進(jìn)行測定。前列地爾脂肪乳劑中由于含有多種與前列腺素結(jié)構(gòu)類似的磷脂及脂肪酸，破乳困難，測定干擾較大，一直是該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測定難點(diǎn)。中國國家藥品監(jiān)督管理局(SFDA)公布的前列地爾注射液國家標(biāo)準(zhǔn)(WS1-(X-041)-2002Z)中，PGE1含量測定方法是采用固相萃取，然后經(jīng)液相色譜儀安置長達(dá)10m的柱后衍生管轉(zhuǎn)化為PGB1后進(jìn)行含量測定，該方法安置的柱后衍生管增加液相色譜儀泵負(fù)擔(dān)，需兩臺液相泵，強(qiáng)堿液易損壞儀器，損耗較大，不易控制。采用該方法中固相萃取制備的樣品通常是混濁的，破乳不完全，易損害層析柱，經(jīng)前處理的樣品供試液定量不準(zhǔn)確，回收率低，重現(xiàn)性不好，導(dǎo)致測定不夠準(zhǔn)確。所使用的衍生管及固相萃取柱是非標(biāo)設(shè)備，價(jià)格高昂，而固相萃取柱是一次性的，市場較少提供，衍生反應(yīng)管在使用幾次后就被腐蝕掉，浪費(fèi)較大。前列地爾脂肪乳劑測定的關(guān)鍵是解決破乳問題，而采用一般化學(xué)方法破乳，很難達(dá)到測定要求。
微波滅菌是近年發(fā)展起來的一種滅菌新方法，在對液體藥物滅菌中取得顯著效果，但在注射液中目前沒有實(shí)際應(yīng)用。微波滅菌主要利用微波照射，使微生物細(xì)胞受到強(qiáng)烈微波幅射，同時使物體溫度急劇升高，導(dǎo)致微生物死亡，這主要依靠熱效應(yīng)和生物效應(yīng)進(jìn)行滅菌，該方法較適合對含水液體的滅菌。微波滅菌針對不同的介質(zhì)溶液，達(dá)到滅菌的條件存在差別，前列地爾脂肪的注射液由于是乳劑，具有水包油微球結(jié)構(gòu)，吸收微波能量完全不同于一般水溶液，升溫和滅菌過程變化也將不同，它對微波輻射有一定耐受限度，當(dāng)超過這個限度時，乳劑結(jié)構(gòu)會遭到破壞，造成飄油、分層等現(xiàn)象發(fā)生。另一方面，前列地爾脂肪主藥在微波輻射升溫，時間超過限度時，也會發(fā)生降解。因此，需要研究開發(fā)前列地爾脂肪乳注射微波滅菌方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決目前已知的滅菌方法不適合前列地爾注射液這一技術(shù)問題而開發(fā)的，本發(fā)明通過試驗(yàn)研究提供了一種前列地爾脂肪乳注射微波滅菌方法，從根本上解決了上述技術(shù)問題。按照本發(fā)明的微波滅菌技術(shù)方法，采用915MHz或2450MHz頻率微波設(shè)備，對放置在微波設(shè)備內(nèi)的1ml和2ml安瓿前列地爾注射液進(jìn)行微波照射，使安瓿溫度升高至65-140℃，并維持10秒-5分鐘，迅速冷卻至室溫。其中溫度越高，所需要的時間越少。對應(yīng)的溫度時間關(guān)系是120-140℃需要10-30秒；110-120℃需要20-60秒；90-110℃需要60-180秒；65-90℃需要90-300秒。采用這種方法主藥降解量小于5％或沒有分解。
本發(fā)明前列地爾脂肪乳劑的滅菌工藝如下采用915MHz或2450MHz頻率微波滅菌設(shè)備，對已灌封的前列地爾脂肪乳劑安瓿滅菌10-300秒，即得。
所述滅菌工藝是將已灌封的前列地爾脂肪乳劑，采用微波設(shè)備，以915MHz或2450MHz照射，使安瓿升溫120-140℃，維持10-30秒。
所述滅菌工藝是將已灌封的前列地爾脂肪乳劑，采用微波設(shè)備，以915MHz或2450MHz照射，使安瓿升溫110-120℃，維持20-60秒。
所述滅菌工藝是將已灌封的前列地爾脂肪乳劑，采用微波設(shè)備，以915MHz或2450MHz照射，使安瓿升溫90-110℃，維持60-180秒。
所述滅菌工藝是將已灌封的前列地爾脂肪乳劑，采用微波設(shè)備，以915MHz或2450MHz照射，使安瓿升溫65-90℃，維持90-300秒；所述對前列地爾脂肪乳劑滅菌優(yōu)選2450MHz頻率微波設(shè)備。
驗(yàn)證上述滅菌技術(shù)的滅菌效果的方法如下采用嗜熱性桿菌芽孢接種前列地爾注射液中，數(shù)量為1×106，按照上述滅菌條件進(jìn)行滅菌，取出后，按照中國藥典2005版附錄登載的微生物限度檢查法和無菌檢查法進(jìn)行檢查計(jì)數(shù)。
安瓿溫度的測定采用紅外溫度遙測儀。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種簡單準(zhǔn)確的前列地爾脂肪乳劑中主藥PGE1和其有關(guān)物質(zhì)PGA1的測定方法。
本發(fā)明前列地爾脂肪乳劑的測定方法1、前處理步驟，將前列地爾脂肪乳劑冷凍干燥去乳化后，使其成為油狀物；2、萃取步驟，采用有機(jī)溶媒萃取法，即向干燥的上述油狀物中加入適量的有機(jī)溶媒進(jìn)行萃取，棄油層，合并有機(jī)溶媒層，定容，為供試液；3、測定步驟，將上述供試液直接在高效液相色譜儀上進(jìn)行測定，即在波長204nm～214nm處按照外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法或加校正因子的主成分自身對照法測定、計(jì)算前列地爾脂肪乳劑主藥PGE1及雜質(zhì)PGA1含量。
所述萃取步驟中加入有機(jī)溶媒進(jìn)行萃取還可以采用如下方法，定量加入甲醇或乙酸乙酯或丙酮或二氯甲烷溶解油狀物，對提取液進(jìn)行冷凍處理、過濾，將除掉其中大多數(shù)溶解度低的磷脂和脂肪酸類物質(zhì)，續(xù)濾液為供試液。
所述測定步驟在測定前列地爾脂肪乳劑主藥PGE1時優(yōu)選204nm為測定波長，測定前列地爾脂肪乳劑雜質(zhì)PGA1時優(yōu)選214nm為測定波長。
所述對前列地爾脂肪乳劑定容時，定量加入內(nèi)標(biāo)物，本發(fā)明加入二甲氨基苯甲醛作為內(nèi)標(biāo)物或?qū)GE1作為PGA1的內(nèi)標(biāo)物。
所述冷凍干燥去乳化時間在20～50小時之間，優(yōu)選30～36小時。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及效果如下前列地爾脂肪乳劑經(jīng)過本發(fā)明提供的滅菌方法，即采用微波滅菌的方法，完全可以達(dá)到產(chǎn)品無菌要求。使用本發(fā)明微波滅菌工藝滅菌后，經(jīng)檢測前列地爾脂肪乳劑粒徑小于1μm，PGE1未降解或降解較少(小于5％)。
本發(fā)明前列地爾脂肪乳劑的測定方法與國家前列地爾注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(WS1-(X-041)-2002Z)的測定方法的比較，經(jīng)前處理得到的供試液是通過定容定量的，這樣定量準(zhǔn)確，樣品不通過固相柱吸附，沒有主藥損失。通過回收率試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，精密稱取PGE1，制成濃度為80％、100％、120％的乳劑，按照不同的含量測定方法進(jìn)行測定，得出回收率數(shù)據(jù)，本發(fā)明方法回收率為99％～102％，國家標(biāo)準(zhǔn)方法為80％～90％，本發(fā)明的測定方法回收率明顯好于國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法。
本方法可將PGE1、PGA1與其它雜質(zhì)良好分離，回收率高，重現(xiàn)性好，測定準(zhǔn)確，方法簡便，易于控制操作。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明。
實(shí)施例1本發(fā)明前列地爾脂肪乳劑的滅菌工藝如下將采用高壓乳均機(jī)制備的前列地爾脂肪乳注射液，灌裝，采用2450MKz微波滅菌設(shè)備進(jìn)行滅菌，過程為升溫至80℃，維持200秒，即得。
實(shí)施例2按照實(shí)施例1，升溫至65℃，維持300秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例3按照實(shí)施例1，升溫至70℃，維持240秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例3按照實(shí)施例1，升溫至75℃，維持180秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例4按照實(shí)施例1，升溫至85℃，維持160秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例5按照實(shí)施例1，升溫至90℃，維持120秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例6按照實(shí)施例1，升溫至90℃，維持90秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例7按照實(shí)施例1，升溫至100℃，維持180秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例8按照實(shí)施例1，升溫至95℃，維持120秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例9按照實(shí)施例1，升溫至110℃，維持60秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例10按照實(shí)施例1，升溫至105℃，維持40秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例11按照實(shí)施例1，升溫至110℃，維持60秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例12按照實(shí)施例1，升溫至120℃，維持60秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例13按照實(shí)施例1，升溫至130℃，維持20秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例14按照實(shí)施例1，升溫至125℃，維持30秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例15按照實(shí)施例1，升溫至135℃，維持20秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例16按照實(shí)施例1，升溫至140℃，維持10秒。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例17按照實(shí)施例1，采用915MKz微波滅菌設(shè)備進(jìn)行滅菌。其余同實(shí)施例1。
實(shí)施例18本發(fā)明前列地爾脂肪乳劑的測定方法如下取前列地爾脂肪乳劑10ml，于凍干瓶中，冷凍干燥36小時，凍干至油狀體，取出后，向凍干瓶內(nèi)加入甲醇約5ml，振搖10分鐘，置于-30℃冰箱中冷凍1hr，在冰箱內(nèi)過濾，由冷凍甲醇2ml洗凍干瓶，再沖洗濾渣，再用2ml凍甲醇洗濾渣一次，合并濾液，定容10ml，為供試液，取20μl供試液，注入液相色譜儀，在204nm波長處測定PGE1，在波長214nm處測定PGA1，按外標(biāo)法計(jì)算即得。
實(shí)施例19按實(shí)施例18的方法，將甲醇換成乙酸乙酯，按照同樣步驟，按外標(biāo)法測定即得。
實(shí)施例20按實(shí)施例18，將甲醇溶劑用丙酮代替，其它同實(shí)施例18，按外標(biāo)法進(jìn)行測定，計(jì)算即得。
實(shí)施例21同實(shí)施例18，樣品凍干成油狀物后，向凍干瓶內(nèi)加入5ml甲醇，振搖10分鐘，靜置15分鐘，分離甲醇層，然后再分別用2ml甲醇萃取2次油狀物，合并甲醇，定容至10ml，為供試液，取供試液注入液相色譜儀中，在波長204nm處測定PGE1，在波長214nm處測定PGA1，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。
實(shí)施例22同實(shí)施例18，在定容甲醇溶液時，加入內(nèi)標(biāo)物二甲氨基苯甲醛，濃度為0.9μg/ml，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算，即得。
實(shí)施例23同實(shí)施例21，在定容甲醇溶液時，加入內(nèi)標(biāo)物二甲氨基苯甲醛，濃度為0.9μg/ml，以下同實(shí)施例21，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算，即得。
實(shí)施例24按實(shí)施例18，冷凍干燥的時間改為24小時。
權(quán)利要求
1.一種前列地爾脂肪乳劑的滅菌工藝，其特征在于采用915MHz或2450MHz頻率微波滅菌設(shè)備，對已灌封的前列地爾脂肪乳劑安瓿滅菌，滅菌過程是升溫至65-140℃，維持10～300秒。
2.按照權(quán)利要求1所述的前列地爾脂肪乳劑的滅菌工藝，其特征在于所述前列地爾脂肪乳劑安瓿滅菌過程是升溫至120-140℃，維持10-30秒；或升溫至110-120℃，維持20-60秒；或升溫至90-110℃，維持60-180秒；或升溫至65-90℃，維持90-300秒。
3.一種前列地爾脂肪乳劑的測定方法，其特征在于包括下述步驟(1)、前處理步驟，將前列地爾脂肪乳劑冷凍干燥去乳化后，使其成為油狀物；(2)、萃取步驟，采用有機(jī)溶媒萃取法，即向干燥的上述油狀物中加入適量有機(jī)溶媒進(jìn)行萃取，棄油層，合并有機(jī)溶媒層，定容，為供試液；(3)、測定步驟，將上述供試液直接在高效液相色譜儀上進(jìn)行測定，即在波長204nm～214nm處按照外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法或加校正因子的主成分自身對照法測定、計(jì)算前列地爾脂肪乳劑主藥PGE1及前列地爾脂肪乳劑雜質(zhì)PGA1。
4.按照權(quán)利要求3所述的前列地爾脂肪乳劑的測定方法，其特征在于所述萃取步驟中加入有機(jī)溶媒進(jìn)行萃取的方法為定量加入甲醇或乙酸乙酯或丙酮或二氯甲烷溶解油狀物，對提取液進(jìn)行冷凍處理、過濾，將除掉其中大多數(shù)溶解度低的磷脂和脂肪酸類物質(zhì)，續(xù)濾液為供試液。
5.按照權(quán)利要求3所述的前列地爾脂肪乳劑的測定方法，其特征在于所述測定步驟在測定前列地爾脂肪乳劑主藥PGE1時優(yōu)選205nm為測定波長，測定前列地爾脂肪乳劑雜質(zhì)PGA1時優(yōu)選214nm為測定波長。
6.按照權(quán)利要求3所述的前列地爾脂肪乳劑的測定方法，其特征在于所述對前列地爾脂肪乳劑定容時，定量加入內(nèi)標(biāo)物，加入二甲氨基苯甲醛作為內(nèi)標(biāo)物。
7.按照權(quán)利要求3所述的前列地爾脂肪乳劑的測定方法，其特征在于所述冷凍干燥去乳化時間在20～50小時之間，優(yōu)選30～36小時。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種前列地爾脂肪乳劑方法及主藥的測定方法。采用915MHz或2450MHz頻率微波設(shè)備，對放置在微波設(shè)備內(nèi)的1ml和2ml安瓿前列地爾注射液進(jìn)行微波照射，使安瓿溫度升高至65－140℃，并維持10秒－5分鐘，進(jìn)行滅菌，可完全殺滅制劑中微生物。制劑中主藥PGE
文檔編號A61P9/00GK1823786SQ20051012848
公開日2006年8月30日 申請日期2005年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月21日
發(fā)明者董英杰 申請人:董英杰