專利名稱：脂質(zhì)載體及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)載體，特別涉及一種具有酸堿敏感性與血清穩(wěn)定性的脂質(zhì)載體及其制造方法。
背景技術(shù)：
基因治療一直被公認(rèn)是未來醫(yī)療發(fā)展的重點(diǎn)，尤其對(duì)于一些傳統(tǒng)藥物無法治愈的遺傳性或后天疾病，如先天免疫不全癥或癌癥等更是重要?；蛑委熢谶^去十五年中，已由體外試驗(yàn)，成功進(jìn)入動(dòng)物活體試驗(yàn)與人體臨床試驗(yàn)，雖然大多仍在臨床一、二期，但已給病人無限的希望。一般遞送基因藥物的載體有兩類，包括病毒載體與非病毒載體，而目前85％的基因治療臨床試驗(yàn)使用前者。
然而，在1999年9月，美國賓州大學(xué)發(fā)生了一起醫(yī)療意外，一名18歲男孩在接受基因治療其鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶缺乏癥(ornithine transcarbamylase deficiency，OTC)時(shí)死亡，隔年2月，美國食品藥物管制局即停止該中心所有的基因治療臨床試驗(yàn)。無獨(dú)有偶的，2002年9月，法國也發(fā)生第一個(gè)接受基因治療的男孩產(chǎn)生白血病的案例，該案例是X性聯(lián)染色體多重免疫性的疾病，病人為俗稱的泡泡男孩(bubble boys)，到了2003年又發(fā)生第二例白血病案例。雙重的挫敗，嚴(yán)重打擊基因治療的研發(fā)領(lǐng)域，探究其原因，其實(shí)是使用的病毒載體造成免疫與毒性等原因所致。因此，如何研發(fā)出一套非病毒基因藥物的傳送系統(tǒng)，就成了基因治療成功與否的關(guān)鍵因素。目前，基因治療使用的非病毒基因藥物載體種類，包括脂質(zhì)與高分子兩大類載體，在此，即以脂質(zhì)類載體為主要探究對(duì)象。
正電荷脂質(zhì)載體是目前最常使用的非病毒載體，也是非病毒載體中轉(zhuǎn)染效率最高的，目前已有數(shù)種體外試劑上市，最常使用的為Life technology公司生產(chǎn)的微脂體(Lipofectin及Lipofectamine)，主要用于基因及蛋白質(zhì)學(xué)術(shù)研究。正電荷脂質(zhì)載體除了轉(zhuǎn)染效率高之外，還具有胞內(nèi)裂解(endosomolysis)效果及生體相容性高等優(yōu)點(diǎn)。然而，正電荷脂質(zhì)載體與DNA形成的復(fù)合體粒徑通常大于500納米，且在血清中不穩(wěn)定，因此，只能用于體外或是局部給藥。而第一個(gè)進(jìn)入臨床試驗(yàn)的微脂粒載體是匹茲堡大學(xué)Leaf Huang博士研發(fā)的DC-微脂體，其應(yīng)用于頭頸癌與乳癌治療，目前在臨床試驗(yàn)第二期，給藥方式以局部注射為主。
為解決正電荷脂質(zhì)載體與DNA復(fù)合體粒徑過大的問題，LeafHuang博士開發(fā)了包覆型微脂粒系統(tǒng)(LPD)。在組成中添加正電荷肽(如精蛋白(protamine)或多熔素(polylysine))，不但成功縮小粒徑，并增加轉(zhuǎn)染效率。但由于該微脂粒的粒子表面仍帶有正電荷，在血液中仍不穩(wěn)定，遂使用上依然受到限制。
考慮到載體的正電荷會(huì)產(chǎn)生血清不穩(wěn)定性及毒性等缺點(diǎn)，T.M.Allen與S.C.Semple等人將DNA包裹于表面不帶電的中性微脂粒中，以減少載體與血液中蛋白質(zhì)非專一性作用，進(jìn)而增加其血清穩(wěn)定性。他們發(fā)現(xiàn)，中性電荷微脂粒可顯著延長DNA半衰期至8～24小時(shí)(DNA本身半衰期不到30分鐘)，并可將DNA帶至腫瘤局部，但卻發(fā)現(xiàn)此種微脂粒的轉(zhuǎn)染效率偏低，這可能是載體本身過于穩(wěn)定，且缺乏正電荷與細(xì)胞作用，因此很難進(jìn)入細(xì)胞。目前的解決方式是使用標(biāo)的配體，借著與特定細(xì)胞表面受體的鍵結(jié)，啟動(dòng)細(xì)胞吞噬(endocytosis)機(jī)制，以增加DNA的轉(zhuǎn)染效率。
目前，使用于臨床試驗(yàn)的脂質(zhì)載體僅在臨床二期，顯見還有許多問題必須解決，其中增加載體的血清穩(wěn)定性將是開發(fā)重點(diǎn)，以及如何有效克服包覆率不佳與轉(zhuǎn)染效率過低的問題。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種具有酸堿敏感性與血清穩(wěn)定性的脂質(zhì)載體及其制造方法。
本發(fā)明提供一種脂質(zhì)載體，包括一脂質(zhì)微粒，由一正電荷脂質(zhì)(cationic lipid)、一膽固醇(cholesterol)、一中性磷脂質(zhì)(neutral phospholipid)與一中性脂質(zhì)(neutral lipid)所組成，其中該正電荷脂質(zhì)大體為100重量份、該膽固醇大體為25～100重量份、該中性磷脂質(zhì)大體為25～100重量份以及該中性脂質(zhì)大體為25～150重量份。
本發(fā)明的脂質(zhì)載體，還包括一藥物，包覆于該脂質(zhì)微粒內(nèi)部。
本發(fā)明的脂質(zhì)載體，還包括一配體，接枝于該脂質(zhì)微粒表面。
本發(fā)明還提供一種脂質(zhì)載體的制造方法，包括下列步驟混合一正電荷脂質(zhì)、一膽固醇、一中性磷脂質(zhì)、一中性脂質(zhì)、乙醇與水以形成一脂質(zhì)溶液，其中該正電荷脂質(zhì)、該膽固醇、該中性磷脂質(zhì)與該中性脂質(zhì)為制作脂質(zhì)微粒的材料，且該正電荷脂質(zhì)大體為100重量份、該膽固醇大體為25～100重量份、該中性磷脂質(zhì)大體為25～100重量份以及該中性脂質(zhì)大體為25～150重量份；加入一含藥物的溶液于該脂質(zhì)溶液中以形成一混合溶液，該混合溶液包含多個(gè)包覆藥物的脂質(zhì)微粒；以及加熱該混合溶液，以制作完成一脂質(zhì)載體。
本發(fā)明的脂質(zhì)載體具有均一粒徑、高包覆率與高血清穩(wěn)定性，也具備酸堿敏感性。


圖1為本發(fā)明脂質(zhì)載體于不同酸堿環(huán)境中的藥物釋放率；圖2為本發(fā)明脂質(zhì)載體在有或無血清干擾下對(duì)PC14PE6細(xì)胞傳輸效率的比較。其中，P是統(tǒng)計(jì)值，一般而言，P小于0.05時(shí)，就表示在統(tǒng)計(jì)上具有顯著性，而以*p表示。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供一種脂質(zhì)載體，包括一脂質(zhì)微粒，由一正電荷脂質(zhì)、一膽固醇、一中性磷脂質(zhì)與一中性脂質(zhì)所組成，其中正電荷脂質(zhì)大體為100重量份、膽固醇大體為25～100重量份、中性磷脂質(zhì)大體為25～100重量份以及中性脂質(zhì)大體為25～150重量份。
帶正電荷的脂質(zhì)類化合物可包括1，2-二油酰氧基-3-(三甲氨基)丙烷(1，2-dioleoyloxy-3-(trimethylamino)propane，DOTAP)、N-[1-(2，3-二-(十四烷氧基))丙基]-N，N-二甲基-N-羥乙基溴化銨(N-[1-(2，3-ditetradecyloxy)propyl]-N，N-dimethyl-N-hydroxyethylammonium bromide，DMRIE)、N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N-二甲基-N-羥乙基溴化銨(N-[1-(2，3，-dioleyloxy)propyl]-N，N-dimethyl-N-hydroxyethylammonium bromide，DORIE)、N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基氯化銨(N-[1-(2，3-dioleyloxy)propyl]- N，N，N- trimethylammoniumchloride，DOTMA)、3β-[N-(N′，N′-二甲基胺乙基)胺基甲?；鵠膽固醇(3β-[N-(N′，N′-dimethylaminoethane)carbamyl]cholesterol，DC-Chol)或二甲基二(十八烷)銨(dimethyldioctadecylammonium，DDAB)，其中以1，2-二油酰氧基-3-(三甲氨基)丙烷(DOTAP)為較佳選擇。
中性的磷脂質(zhì)化合物可包括例如為氫化大豆磷脂酰膽堿(hydrogenated soy phosphatidyl choline，HSPC)的磷脂酰膽堿(phosphatidyl choline，PC)或磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)。而中性的脂質(zhì)化合物可包括二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(distearoylphosphatidylethanolamine-polyethyleneglycol，DSPE-PEG)。
在本發(fā)明脂質(zhì)微粒中，正電荷脂質(zhì)、膽固醇、中性磷脂質(zhì)與中性脂質(zhì)的較佳組成比例大體為正電荷脂質(zhì)100重量份、膽固醇50重量份、中性磷脂質(zhì)50重量份以及中性脂質(zhì)65重量份。
脂質(zhì)微?？捎脕戆菜幬?，作為活體內(nèi)傳輸藥物的載體，適用的藥物包括核酸藥物、蛋白質(zhì)藥物、肽藥物或有機(jī)合成藥物等，其中核酸藥物更包括質(zhì)體DNA(plasmid DNA)、反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide)或RNA干擾素(RNAi)。載體中，藥物與正電荷脂質(zhì)的重量比大體介于1∶4～1∶12，較佳大體為1∶6。
脂質(zhì)微粒的直徑大體介于35～95納米，其ζ電位(zetapotential)大體介于-10～10毫伏特，而其包覆率大體介于85～100％。此脂質(zhì)載體在pH值4～5環(huán)境中的藥物釋放率大體為60～70％，且其在血清中的活性可維持在60～100％。
此外，若在脂質(zhì)微粒表面接枝(graft)一配體(ligand)，作為辨識(shí)活體內(nèi)標(biāo)的細(xì)胞之用，則此種脂質(zhì)載體于活體中的傳輸效率大體會(huì)高于無配體的脂質(zhì)載體10倍以上。
本發(fā)明還提供一種脂質(zhì)載體的制造方法， 包括下列步驟首先，混合一正電荷脂質(zhì)、一膽固醇、一中性磷脂質(zhì)、一中性脂質(zhì)、乙醇與水以形成一脂質(zhì)溶液，其中正電荷脂質(zhì)、膽固醇、中性磷脂質(zhì)與中性脂質(zhì)為制作脂質(zhì)微粒的材料，且正電荷脂質(zhì)大體為100重量份、膽固醇大體為25～100重量份、中性磷脂質(zhì)大體為25～100重量份以及中性脂質(zhì)大體為25～150重量份，接著，加入一含藥物的溶液于脂質(zhì)溶液中以形成一混合溶液，此混合溶液包含多個(gè)包覆藥物的脂質(zhì)微粒，最后，加熱上述混合溶液，即完成此一脂質(zhì)載體的制作。
加熱步驟中，混合溶液的溫度須加熱至大體50～70攝氏度，較佳大體為65攝氏度。而乙醇與水的體積比大體介于3∶7～5∶5，較佳大體為4∶6。
本發(fā)明提供了新穎的載體配方及其特殊的混合比例，再配合控制乙醇/水比例、藥物/正電荷脂質(zhì)比例及加熱處理等，而制得一均一粒徑、高包覆率與高血清穩(wěn)定性的脂質(zhì)微粒，且由于此特殊的組成比例，使載體也具備了酸堿敏感性，當(dāng)其進(jìn)入細(xì)胞后，會(huì)選擇在適當(dāng)酸性(pH值4～5)的溶酶體(lysosome)內(nèi)釋出藥物，并不會(huì)先被溶酶體的酵素分解、破壞，大幅提高基因藥物的轉(zhuǎn)染效率。
以下通過實(shí)施例來更進(jìn)一步說明本發(fā)明的特征及優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)施例脂質(zhì)載體的制作首先，將0.05毫升的乙醇滴入1.5毫升離心管中，接著，將0.1毫克帶正電荷的1，2-二油酰氧基-3-(三甲氨基)丙烷(DOTAP)、0.05毫克的膽固醇、0.05毫克的氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)與0.065毫克的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)溶入乙醇溶液中，并以65攝氏度的水浴助溶，之后，加入去離子水至溶液總體積達(dá)0.095毫升并混合均勻，即制備完成一脂質(zhì)溶液。
接著，將0.005毫升含寡核苷酸的溶液(10mg/ml)加入脂質(zhì)溶液中以形成一均勻混合溶液，此混合溶液會(huì)包含多個(gè)包覆寡核苷酸的脂質(zhì)微粒，最后，加入0.1毫升的磷酸鹽緩沖溶液(pH值7.4)至離心管中并以65攝氏度水浴加熱10分鐘，即可完成脂質(zhì)載體的制作。
粒徑與ζ電位(zeta potential)測(cè)定本發(fā)明以Coulter N4 Plus次微米顆粒測(cè)定儀(Miami，F(xiàn)L)測(cè)定載體粒徑，以ZetaPlus ζ電位分析儀(BrookhavenInstruments corporation，Holtsville，NY)測(cè)定載體ζ電位。結(jié)果測(cè)得的粒徑與ζ電位分別為72.0±22.5納米及-0.302毫伏特。
包覆率測(cè)定本發(fā)明先以層析管柱分離被包覆與未被包覆(free)的寡核苷酸，再測(cè)定載體的包覆率。包覆率的計(jì)算公式如下包覆率(％)＝(寡核苷酸總量-未被包覆寡核苷酸量)/寡核苷酸總量×100％結(jié)果測(cè)得的包覆率為95±5％。
藥物釋放率測(cè)定將上述0.2毫升的載體溶液與100mM各種酸堿值的緩沖溶液(pH值分別為6.8，6，5.5，5，4.5，及4)混合，置于37攝氏度的水浴槽加熱5分鐘，之后，以Sepharose CL 4B(瓊脂糖凝膠CL 4B)層析管柱分離并測(cè)定寡核苷酸的釋放率。結(jié)果請(qǐng)參見圖1，由圖中可看出，本發(fā)明特殊配方的載體在pH值小于5的酸性環(huán)境中具有較佳的藥物釋放率，大體為60～70％。
血清穩(wěn)定性測(cè)試將PC14PE6細(xì)胞于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前一日先培養(yǎng)在1平方厘米的玻片上，每片含有2×104個(gè)細(xì)胞，于培養(yǎng)隔夜后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)步驟如下，將細(xì)胞與包覆寡核苷酸的載體于37攝氏度條件下培養(yǎng)4小時(shí)(培養(yǎng)基分成含10％血清與不含血清組)，之后，以磷酸鹽緩沖溶液沖洗細(xì)胞三次，再以含1％ Triton X-100(曲拉通X-100)的磷酸鹽緩沖溶液與細(xì)胞培養(yǎng)1小時(shí)使細(xì)胞溶解，取出細(xì)胞溶出物后，以螢光測(cè)定儀分析其螢光強(qiáng)度(激發(fā)光波長494納米，輻射光波長519納米)。結(jié)果可測(cè)知本發(fā)明載體于血清中的活性可維持在60～100％。
含配體載體的傳輸效率測(cè)定將PC14PE6細(xì)胞于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前一天先培養(yǎng)在24個(gè)孔中，每個(gè)孔含有5×104個(gè)細(xì)胞，于培養(yǎng)隔夜后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)步驟如下，分別將細(xì)胞與含tamoxifen(它莫西芬)配體的載體以及不含tamoxifen配體的載體于37攝氏度條件下培養(yǎng)4小時(shí)(培養(yǎng)基分成含10％血清與不含血清組)，之后，以磷酸鹽緩沖溶液沖洗細(xì)胞一次，吸去磷酸鹽緩沖溶液后，再以含1％ Triton X-100的磷酸鹽緩沖溶液與細(xì)胞培養(yǎng)1小時(shí)使細(xì)胞溶解，取出細(xì)胞溶出物后，以螢光儀測(cè)定其螢光強(qiáng)度(激發(fā)光波長494納米，輻射光波長519納米)。
結(jié)果請(qǐng)參見圖2，由圖中可看出，含配體的載體其傳輸效率大約為無配體載體的10倍以上，且不因血清存在與否而有所不同，再次驗(yàn)證本發(fā)明脂質(zhì)載體的血清穩(wěn)定性。
以上所述僅為本發(fā)明較佳實(shí)施例，然其并非用以限定本發(fā)明的范圍，任何熟悉本項(xiàng)技術(shù)的人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，可在此基礎(chǔ)上做進(jìn)一步的改進(jìn)和變化，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng)以本申請(qǐng)的權(quán)利要求書所界定的范圍為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種脂質(zhì)載體，包括一脂質(zhì)微粒，由一正電荷脂質(zhì)、一膽固醇、一中性磷脂質(zhì)與一中性脂質(zhì)所組成，其中該正電荷脂質(zhì)為100重量份、該膽固醇為25～100重量份、該中性磷脂質(zhì)為25～100重量份以及該中性脂質(zhì)為25～150重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)載體，其中該正電荷脂質(zhì)包括1，2-二油酰氧基-3-(三甲氨基)丙烷、N-[1-(2，3-二-(十四烷氧基))丙基]-N，N-二甲基-N-羥乙基溴化銨、N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N-二甲基-N-羥乙基溴化銨、N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基氯化銨、3β-[N-(N′，N′-二甲基胺乙基)胺基甲?；鵠膽固醇或二甲基二(十八烷)銨。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)載體，其中該中性磷脂質(zhì)包括磷脂酰膽堿或磷脂酰乙醇胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的脂質(zhì)載體，其中該磷脂酰膽堿包括氫化大豆磷脂酰膽堿。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)載體，其中該中性脂質(zhì)包括二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)載體，其中該正電荷脂質(zhì)為100重量份、該膽固醇為50重量份、該中性磷脂質(zhì)為50重量份以及該中性脂質(zhì)為65重量份。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)載體，還包括一藥物，包覆于該脂質(zhì)微粒內(nèi)部。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的脂質(zhì)載體，其中該藥物包括核酸藥物、蛋白質(zhì)藥物、肽藥物或有機(jī)合成藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的脂質(zhì)載體，其中該核酸藥物包括質(zhì)體DNA、反義寡核苷酸或RNA干擾素。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的脂質(zhì)載體，其中該藥物與該正電荷脂質(zhì)的重量比介于1∶4～1∶12。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的脂質(zhì)載體，其中該藥物與該正電荷脂質(zhì)的重量比為1∶6。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)載體，其中該脂質(zhì)微粒的直徑介于35～95納米。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)載體，其中該脂質(zhì)微粒的ζ電位介于-10～10毫伏特。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)載體，其中該脂質(zhì)微粒的包覆率介于85～100％。
15.根據(jù)權(quán)利要求7所述的脂質(zhì)載體，其中該脂質(zhì)載體于pH值小于5的酸性環(huán)境中的藥物釋放率介于60～70％。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)載體，其中該脂質(zhì)載體于血清中的活性介于60～100％。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)載體，還包括一配體，接枝于該脂質(zhì)微粒表面。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的脂質(zhì)載體，其中該配體是用來辨識(shí)活體內(nèi)的標(biāo)的細(xì)胞。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的脂質(zhì)載體，其中該脂質(zhì)載體于活體中的傳輸效率高于無配體脂質(zhì)載體10倍以上。
20.一種脂質(zhì)載體的制造方法，包括下列步驟混合一正電荷脂質(zhì)、一膽固醇、一中性磷脂質(zhì)、一中性脂質(zhì)、乙醇與水以形成一脂質(zhì)溶液，其中該正電荷脂質(zhì)、該膽固醇、該中性磷脂質(zhì)與該中性脂質(zhì)為制作脂質(zhì)微粒的材料，且該正電荷脂質(zhì)為100重量份、該膽固醇為25～100重量份、該中性磷脂質(zhì)為25～100重量份以及該中性脂質(zhì)為25～150重量份；加入一含藥物的溶液于該脂質(zhì)溶液中以形成一混合溶液，該混合溶液包含多個(gè)包覆藥物的脂質(zhì)微粒；以及加熱該混合溶液，以制作完成一脂質(zhì)載體。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該正電荷脂質(zhì)包括1，2-二油酰氧基-3-(三甲氨基)丙烷、N-[1-(2，3-二-(十四烷氧基))丙基]-N，N-二甲基-N-羥乙基溴化銨、N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N-二甲基-N-羥乙基溴化銨、N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基氯化銨、3β-[N-(N′，N′-二甲基胺乙基)胺基甲?；鵠膽固醇或二甲基二(十八烷)銨。
22.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該中性磷脂質(zhì)包括磷脂酰膽堿或磷脂酰乙醇胺。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該磷脂酰膽堿包括氫化大豆磷脂酰膽堿。
24.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該中性脂質(zhì)包括二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇。
25.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該正電荷脂質(zhì)為100重量份、該膽固醇為50重量份、該中性磷脂質(zhì)為50重量份以及該中性脂質(zhì)為65重量份。
26.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中乙醇與水的體積比介于3∶7～5∶5。
27.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中乙醇與水的體積比為4∶6。
28.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該藥物包括核酸藥物、蛋白質(zhì)藥物、肽藥物或有機(jī)合成藥物。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該核酸藥物包括質(zhì)體DNA、反義寡核苷酸或RNA干擾素。
30.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該藥物與該正電荷脂質(zhì)的重量比介于1∶4～1∶12。
31.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該藥物與該正電荷脂質(zhì)的重量比為1∶6。
32.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中加熱該混合溶液的溫度至50～70攝氏度。
33.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中加熱該混合溶液的溫度至65攝氏度。
34.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該脂質(zhì)微粒的直徑介于35～95納米。
35.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該脂質(zhì)微粒的ζ電位介于-10～10毫伏特。
36.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該脂質(zhì)微粒的包覆率介于85～100％。
37.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該脂質(zhì)載體于pH值小于5的酸性環(huán)境中的藥物釋放率介于60～70％。
38.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該脂質(zhì)載體于血清中的活性介于60～100％。
39.根據(jù)權(quán)利要求20所述的脂質(zhì)載體的制造方法，還包括一配體，接枝于該脂質(zhì)微粒表面。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該配體是用來辨識(shí)活體內(nèi)的標(biāo)的細(xì)胞。
41.根據(jù)權(quán)利要求39所述的脂質(zhì)載體的制造方法，其中該脂質(zhì)載體于活體中的傳輸效率高于無配體脂質(zhì)載體10倍以上。
全文摘要
本發(fā)明提供一種脂質(zhì)載體及其制造方法。本發(fā)明的脂質(zhì)載體包括一脂質(zhì)微粒，由一正電荷脂質(zhì)、一膽固醇、一中性磷脂質(zhì)與一中性脂質(zhì)所組成，其中該正電荷脂質(zhì)大體為100重量份、該膽固醇大體為25～100重量份、該中性磷脂質(zhì)大體為25～100重量份以及該中性脂質(zhì)大體為25～150重量份。本發(fā)明還提供一種脂質(zhì)載體的制造方法。本發(fā)明的脂質(zhì)載體具有均一粒徑、高包覆率與高血清穩(wěn)定性，也具備酸堿敏感性。
文檔編號(hào)A61K47/28GK1947702SQ20051013525
公開日2007年4月18日 申請(qǐng)日期2005年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月14日
發(fā)明者黎世達(dá), 王藹君 申請(qǐng)人:財(cái)團(tuán)法人工業(yè)技術(shù)研究院