專利名稱：具有4－甲基麥角甾－7－烯－3－醇骨架的糖苷及高血糖改善劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇骨架的新型糖苷3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇及含有此糖苷的組合物，以及含有它們的醫(yī)藥品或者飲食品。
背景技術(shù)：
已知4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇為存在于植物中的物質(zhì)(非專利文獻1)。但是，對于此化合物的先有技術(shù)，只有涉及具有與該化合物相似構(gòu)造的洛飛烯醇(4-甲基膽甾-7-烯-3-醇的立體異構(gòu)體之一)的生合成體系的技術(shù)(非專利文獻2)，對于這些化合物的用途還是完全未知的。
百合科蘆薈屬是含有庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)、木立蘆薈(Aloe arborescen Miller var.natalensis Berger)等的植物群，經(jīng)驗上已知具有各種功效，在涉及蘆薈屬植物用途的先有技術(shù)中，有免疫修飾性多糖類(專利文獻1)、以含有蘆薈提取物的丁醇餾分或者蘆薈素為特征的免疫抑制改善劑(專利文獻2)、屬于HSP60家族蛋白質(zhì)的含有蘆薈素衍生物的合成抑制劑(專利文獻3～5)、來源于蘆薈葉皮的植物凝血素活性蛋白質(zhì)(專利文獻6)等。
作為涉及蘆薈屬植物的改善血糖值的先有技術(shù)，公開了在美國的臨床試驗(非專利文獻3)、在動物中的降血糖作用(非專利文獻4和非專利文獻5)、蘆薈屬植物中的多糖類(專利文獻7)，但是在這些先有技術(shù)中，蘆薈屬植物的降血糖作用成分被推測為多糖類或者糖蛋白質(zhì)。另外，公開了在庫拉索蘆薈壓榨液以及以該壓榨液作為有效成分的降糖藥(專利文獻8)中，F(xiàn)T-IR譜圖中酯基特有的峰與活性相關(guān)，有效成分為多糖類、氨基酸、蘋果酸等，而在市售的庫拉索蘆薈凝膠粉末、庫拉索蘆薈凝膠液或者庫拉索蘆薈凝膠提取液中，上述有效成分被破壞。并且，在其他文獻中也分別公開了蘆薈多糖類的降血糖作用(專利文獻9)、蘆薈中含有的7-羥基色酮的抗氧化作用(專利文獻10)。
此外，在庫拉索蘆薈葉皮中含有具有緩瀉作用的蘆薈苷及蘆薈大黃素，以往在工業(yè)上不優(yōu)選。
血紅蛋白Alc是葡萄糖和血紅蛋白的結(jié)合物，依存于糖濃度并隨著高血糖的程度而增加，一次生成的血紅蛋白Alc直到紅血球的壽命(120天)完結(jié)都不會消減，因此反映過去長期的血糖控制狀態(tài)(非專利文獻6)。血紅蛋白Alc從1996年開始被采用于老人健康法的基本健康審查的選擇檢查中，還在1999年的糖尿病新診斷標(biāo)準(zhǔn)中被用作糖尿病的輔助診斷指標(biāo)，因此認(rèn)為其是臨床上具有重大意義的指標(biāo)(非專利文獻7)。
一旦高血糖的狀態(tài)持續(xù)，則認(rèn)為是葡萄糖特異性胰島素分泌不足和胰島素抵抗性，成為導(dǎo)致高血糖進一步惡化的要因(非專利文獻8)。由于為了預(yù)防從高血糖狀態(tài)到糖尿病發(fā)病必需長期控制血糖值，因此認(rèn)為有必要抑制血紅蛋白Alc值的上升。為了控制前糖尿病(疑似糖尿病的狀態(tài))中的血糖值，推廣了飲食療法及運動。雖然已經(jīng)有售各種用于抑制進食后引起的血糖值上升的功能性食品(特定保健用食品)，但任何一種都無非是對一過性血糖值上升具有抑制作用。因此，不能夠期待長期控制血糖值，急切盼望著此次對血紅蛋白Alc降低作用物質(zhì)的研究。
此外，現(xiàn)在作為糖尿病的治療藥，α-葡萄糖苷酶抑制劑、作為胰島素分泌促進劑的磺酰脲類藥物、作為胰島素抵抗性改善藥的噻唑烷衍生物等都作為醫(yī)藥品被使用。但是它們的藥效并不令人滿意，而且多有由于血糖急劇下降而引起昏睡狀態(tài)的副作用等問題。
考慮到上述狀況，急切盼望發(fā)現(xiàn)不引起低血糖、可安全攝取，且具有使血紅蛋白Alc值下降的長期血糖值控制作用的物質(zhì)。
以往，在先有技術(shù)文獻中，作為具有抑制血糖值上升效果的物質(zhì)公開了如含有來源于大花紫薇成分的血糖值上升抑制劑(專利文獻11)、以麥類發(fā)酵物的濃縮浸膏作為有效成分的血糖值上升抑制劑(專利文獻12)等。
此外，作為以三萜糖苷為有效成分的技術(shù)，公開了如將從廣東匙羹藤中提取出來的糖苷作為有效成分的糖尿病預(yù)防劑(專利文獻13)、含有從大花紫薇中提取出來的科羅索酸作為有效成分的代謝改善方法以及用于此的組合物(專利文獻14)、脂肪酶抑制劑(專利文獻15)、具有免疫抑制活性的三萜衍生物(專利文獻16)。
另外，公開了在基于具有羊毛甾烷骨架或者3，4-開環(huán)羊毛甾烷骨架的化合物的胰島素作用增強活性(專利文獻17)中，雖然對胰腺疾病的效果不明確，但其效果為增強脂肪細胞的分化調(diào)節(jié)中的胰島素作用。
并且，公開了將選自在甾類化合物基本骨架的部分中不含雙鍵的24-烷基膽甾烯-3-酮及24-烷基膽甾烷-3-酮的化合物作為血糖降低劑(專利文獻18)。
作為具有結(jié)構(gòu)類似物即4-甲基豆甾-7-烯-3-醇骨架的糖苷，報告了3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基豆甾-7-烯-3-醇存在于為瓜科植物的白瀉根(Bryonia alba)中(非專利文獻9)，但并不是通常具有食用經(jīng)驗的植物，并且也沒有全合成的例子。
專利文獻1特表2001-520019號公報專利文獻2特開平08-208495號公報專利文獻3特開平10-120576號公報專利文獻4特開平10-045604號公報專利文獻5特開平10-036271號公報專利文獻6特開平09-059298號公報專利文獻7特開昭60-214741號公報專利文獻8特開2003-286185號公報專利文獻9美國專利第4598069號說明書專利文獻10美國專利申請公開第2003/0207818號說明書專利文獻11特開2003-095941號公報專利文獻12特開2002-371003號公報專利文獻13特開平05-247086號公報專利文獻14特開2002-205949號公報專利文獻15特開平09-040689號公報專利文獻16特表平11-511482號公報專利文獻17特開平10-330266號公報專利文獻18特開2003-048837號公報非專利文獻1Chem.Pharm.Bull.，第624～626頁，1993年非專利文獻2Biochemica Biophysica Acta，第63～88頁，2000年非專利文獻3Phytomedicine，第3卷，第245～248頁，1996年非專利文獻4Phytotherapy Research，第15卷，第157～161頁，2001年非專利文獻5Phytotherapy Research，第7卷，第37～42頁，1993年非專利文獻6日本臨床，通卷第748號，第1卷，第615～617頁，1999年非專利文獻7日本臨床，通卷第808號，第2卷，第405～409頁，2002年非專利文獻8矢崎義雄·村松正寬主編，“糖尿病的最前沿”，第126～139頁，羊土社，1997年非專利文獻9Khimiya Prirodnykh Soedinenii，第3卷，蘇聯(lián)，1977年發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的課題在于提供不引起低血糖、可安全攝取，且具有降低血紅蛋白Alc值的長期血糖值控制作用的新型化合物。本發(fā)明的其他課題在于研究由在食用經(jīng)驗上可安全攝取、且容易獲得的原料制備不含工業(yè)上非優(yōu)選成分且含有有效量的上述化合物的組合物的方法。
本發(fā)明人等為了解決上述課題進行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)從庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)的葉肉(透明膠體部分)提取并精制的新型糖苷即3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇，其不引起低血糖、可安全攝取，并且具有降低血紅蛋白Alc值的長期血糖值控制作用?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明為具有下述化學(xué)式(1)所示結(jié)構(gòu)的化合物(以下也稱為“本發(fā)明化合物”)。
另外，本發(fā)明提供含有按干燥質(zhì)量計為大于等于0.001質(zhì)量％本發(fā)明化合物的組合物(以下也稱為“本發(fā)明組合物”)。本發(fā)明組合物優(yōu)選為百合科植物的提取物或者其餾分，百合科植物特別優(yōu)選為庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)。
本發(fā)明還提供將本發(fā)明化合物或者本發(fā)明組合物作為有效成分來含有的高血糖改善劑(以下也稱為“本發(fā)明藥劑”)。
本發(fā)明還提供含有上述高血糖改善劑的醫(yī)藥品或飲食品。
本發(fā)明還提供帶有用于改善高血糖的說明的飲食品，其特征在于，將本發(fā)明化合物或者本發(fā)明組合物作為有效成分來含有，并具有高血糖改善作用。
以下，將上述醫(yī)藥品或者飲食品總稱為“本發(fā)明的醫(yī)藥品或者飲食品”。
本發(fā)明進一步提供一種方法，其為本發(fā)明化合物或者本發(fā)明組合物的制備方法，其特征在于，從含有如權(quán)利要求1中所述化合物的百合科植物或其一部分或者它們的粉碎物中，用有機溶劑或者熱水提取和濃縮含有相同化合物的餾分，百合科植物特別優(yōu)選為庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)。
本發(fā)明還提供在高血糖改善用醫(yī)藥品的制備中，本發(fā)明化合物或者含有該化合物的組合物的應(yīng)用。對于本發(fā)明的應(yīng)用而言，上述組合物優(yōu)選為含有按干燥質(zhì)量計為大于等于0.001質(zhì)量％上述化合物的百合科植物的提取物或者其餾分，百合科植物特別優(yōu)選為庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)。
本發(fā)明還提供一種方法，其為改善高血糖的方法，其特征在于，將本發(fā)明化合物或者含有該化合物的組合物給予欲改善高血糖的對象。本發(fā)明的方法，上述組合物優(yōu)選為含有按干燥質(zhì)量計為大于等于0.001質(zhì)量％上述化合物的百合科植物的提取物或者其餾分，百合科植物特別優(yōu)選為庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)。


是本發(fā)明的糖苷的苷元部分乙?；锏腉C-MS譜圖(代替附圖的照片顯示器上顯示的半色調(diào)圖像)[圖2]是本發(fā)明的糖苷的苷元部分乙?；锏?3C-NMR譜圖(代替附圖的照片顯示器上顯示的半色調(diào)圖像)。
是表示給予了本發(fā)明化合物的小鼠的平常血糖值的經(jīng)時變化圖。
是表示給予了本發(fā)明化合物的小鼠的空腹時血糖值的經(jīng)時變化圖。
具體實施例方式
接下來，對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行詳細說明。但本發(fā)明并不限于以下的優(yōu)選實施方式，可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)進行自由改變。
本發(fā)明的化合物為具有上述化學(xué)式(1)所示結(jié)構(gòu)的化合物，即3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇。即，本發(fā)明的化合物具有4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇的3位羥基與D-葡萄糖的1位羥基脫水縮合的結(jié)構(gòu)。
此外，本發(fā)明的組合物為含有按干燥質(zhì)量計為大于等于0.001質(zhì)量％、優(yōu)選為大于等于0.01質(zhì)量％、更優(yōu)選為大于等于0.1質(zhì)量％本發(fā)明化合物的百合科植物的提取物或者其餾分。本發(fā)明的組合物中含有的本發(fā)明化合物的含量的上限沒有特別限定，可以舉出50質(zhì)量％、70質(zhì)量％或者90質(zhì)量％。
本發(fā)明的化合物或者含有該化合物的組合物，可以如下制備例如屬于百合科植物、含有本發(fā)明化合物的植物或其一部分或者它們的粉碎物中，利用有機溶劑或者熱水提取并濃縮含有相同化合物的餾分。
作為上述屬于百合科的植物可以舉出屬于蘆薈屬或者蔥屬的植物。作為蘆薈屬植物可以舉出庫拉索蘆薈(Aloe barbadensisMiller)，好望角蘆薈(Aloe ferox Miller)，非洲蘆薈(Aloe africanaMiller)，木立蘆薈(Aloe arborescen Miller var.natalensis Berger)，女王錦蘆薈(Aloe spicata Baker)等。在制備本發(fā)明的化合物或者含有該化合物的組合物時，可以使用上述植物的全部，但優(yōu)選使用葉肉(透明膠質(zhì)部分)。將這種植物或其一部分優(yōu)選使用均化器等進行粉碎而成為液狀，并用有機溶劑或者熱水進行提取。作為有機溶劑，可以舉出甲醇、乙醇、丁醇等醇；醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丙酯、醋酸丁酯等酯；丙酮、甲基異丁基酮等酮；乙醚、石油醚等醚；己烷、環(huán)己烷、甲苯、苯等烴；四氯化碳、二氯甲烷、氯仿等鹵代烴；吡啶等雜環(huán)化合物，乙二醇等二元醇；聚乙二醇等多元醇；乙腈等腈溶劑以及這些溶劑的混合液等。此外，這些溶劑可以是無水的，也可以是含水狀態(tài)。在這些溶劑中，特別優(yōu)選醋酸乙酯/丁醇混合液(3∶1)或者氯仿/甲醇混合液(2∶1)。
作為提取方法可以使用在通常的植物成分提取中使用的方法。這些方法可以舉出通常相對于1質(zhì)量份新鮮植物或者干燥植物，使用1～300質(zhì)量份的有機溶劑，一邊攪拌或者振蕩，一邊在小于等于溶劑沸點的溫度下加熱回流或者在常溫下用超聲波進行提取。提取液可以通過過濾或者離心分離等適當(dāng)方法將不溶物分離，得到粗提取物。
粗提取物可以通過比如正相或反相的硅膠柱色譜法的各種色譜方法進行精制。在正相硅膠柱色譜法中，如果作為洗脫溶劑使用氯仿/甲醇混合液的梯度溶劑，在氯仿∶甲醇＝5∶1左右本發(fā)明的化合物就會被洗脫。而在反相硅膠柱色譜法中，如果作為洗脫溶劑使用甲醇/水混合液的梯度溶劑，在濃度為95％左右的甲醇中，本發(fā)明化合物就會被洗脫。
得到的餾分可以進一步用HPLC等進行精制。
例如，通過后述實施例中所示的方法可以確認(rèn)如上得到的化合物或者含有此化合物的組合物都含有本發(fā)明的化合物。例如可以通過13C-NMR等確認(rèn)其是在苷元部分上結(jié)合有葡萄糖的糖苷，而且苷元部分為4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇。
本發(fā)明的化合物還可以通過縮合D-葡萄糖和4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇而進行制備。4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇可以通過從植物中進行提取和精制而獲得。D-葡萄糖和4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇的縮合可以組合如第4版實驗化學(xué)講座26、1992年(第272頁、第297頁以及第342頁中記載)所示方法而進行。即，將D-葡萄糖完全乙?；?，將異頭位變換成α-溴化物。在乙醚中使4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇與α-溴化物反應(yīng)而進行β-糖基化后，在甲醇鈉·甲醇中使乙?；猓玫侥繕?biāo)化合物。
本發(fā)明的化合物具有降低血紅蛋白Alc值的作用，其結(jié)果能夠長期控制血糖值。因此，能夠作為高血糖改善劑的有效成份進行使用。
此外，以往在庫拉索蘆薈的葉皮中含有具有緩瀉作用的蘆薈苷和蘆薈大黃素，因而認(rèn)為不優(yōu)選作為不希望有緩瀉作用的醫(yī)藥品或者飲食品。另一方面，在本發(fā)明組合物的優(yōu)選方式中，由于能夠通過從食用經(jīng)驗上可安全攝取的庫拉索蘆薈葉肉(透明膠質(zhì)部分)中進行提取和分餾而得到，因此不含有蘆薈苷和蘆薈大黃素，且含有有效量的本發(fā)明化合物。因此，本發(fā)明的組合物也優(yōu)選作為高血糖改善劑的有效成分。
本發(fā)明的化合物或者組合物，可以原樣用作本發(fā)明的藥劑或者飲食品的有效成分。并且，本發(fā)明的組合物可以是溶液，也可以通過常規(guī)方法進行冷凍干燥或者噴霧干燥而作為粉末來保存、使用。
本發(fā)明的藥劑，可以將本發(fā)明的化合物或組合物、或者將它們與制劑學(xué)上允許的制劑載體進行組合，通過口服或者非口服方式給予包括人在內(nèi)的哺乳動物。此外，在本發(fā)明的藥劑中，本發(fā)明的化合物可以使用可藥用鹽。作為可藥用鹽，包含金屬鹽(無機鹽)和有機鹽兩種，它們的清單可以舉出“Remington’s PharmaceuticalSciences，第17版，第1418頁，1985年”中公開的物質(zhì)。具體而言，如鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽及氫溴酸鹽等無機酸鹽，蘋果酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、醋酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、雙羥萘酸鹽、水楊酸鹽和硬脂酸鹽等有機酸鹽，但本發(fā)明并不限定于此。還可以為鈉、鉀、鈣、鎂、鋁等金屬鹽，或者與賴氨酸等氨基酸形成的鹽。此外，上述化合物或者其可藥用鹽的水合物等溶劑合物也包含在本發(fā)明中。
本發(fā)明的藥劑的制劑方式?jīng)]有特別限定，可以根據(jù)治療目的進行適當(dāng)選擇，具體而言，可以舉出片劑、丸劑、散劑、液劑、懸濁劑、乳劑、顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑、栓劑、注射劑、軟膏劑、貼劑、滴眼劑、滴鼻劑等。在制劑化中，作為制劑載體可以使用在通常的高血糖改善用醫(yī)藥品中廣泛使用的賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、穩(wěn)定劑、矯味劑、稀釋劑、表面活性劑、注射劑用溶劑等添加劑。另外，只要不損害本發(fā)明的效果，還可以并用本發(fā)明的化合物或組合物及其它具有高血糖改善作用的藥劑。
本發(fā)明的藥劑中含有的本發(fā)明化合物或者組合物的量沒有特別限定，可以適當(dāng)選擇，如作為本發(fā)明的化合物的量，在制劑中可以是0.001～10質(zhì)量％、優(yōu)選為0.01～1質(zhì)量％、特別優(yōu)選為0.05～1質(zhì)量％。
本發(fā)明的藥劑有助于治療或者預(yù)防由高血糖狀態(tài)引起的疾病、如糖尿病和前糖尿病(疑似為糖尿病的狀態(tài))。特別是可用于預(yù)防從高血糖狀態(tài)到糖尿病發(fā)病。
本發(fā)明的醫(yī)藥品中含有上述本發(fā)明的藥劑(高血糖改善劑)，有助于治療或者預(yù)防由高血糖狀態(tài)引起如糖尿病和前糖尿病(疑似為糖尿病的狀態(tài))的疾病。特別是可用于預(yù)防從高血糖狀態(tài)到糖尿病發(fā)病。而且，本發(fā)明的醫(yī)藥品能夠治療或者預(yù)防由高血糖狀態(tài)引起的各種疾病·并發(fā)癥等，以及減輕這些疾病·并發(fā)癥等的危險。
作為這種高血糖狀態(tài)引起的各種疾病·并發(fā)癥，可以舉出糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性腎病、糖尿病性神經(jīng)障礙、糖尿病性壞疽、糖尿病引起的腦中風(fēng)、糖尿病引起的心肌梗塞等。
另外，高血糖狀態(tài)是指在正常范圍以外的狀態(tài)，正常范圍是指一般規(guī)定為空腹時血糖值為小于等于110mg/dl、負荷75g糖后1小時的血糖值為小于等于160mg/dl和2小時的血糖值為小于等于120mg/dl的狀態(tài)(日本臨床，通卷第806號，第1卷，第28～35頁，2002年)。本發(fā)明的藥劑優(yōu)選用于治療血紅蛋白Alc值高于健康常人的狀態(tài)、如血紅蛋白Alc值為大于等于5.8％的患者。
本發(fā)明的藥劑或者醫(yī)藥品的給藥時間沒有特別限定，可根據(jù)疾病對象的治療方法選擇適當(dāng)?shù)慕o藥時間。另外，給藥方式優(yōu)選根據(jù)制劑形態(tài)、患者年齡、性別、其他條件及患者癥狀的程度等來決定。
本發(fā)明藥劑的有效成分的給藥量根據(jù)用法、患者年齡、性別、疾病的程度及其他條件等進行適當(dāng)選擇。通常，作為有效成分的本發(fā)明化合物的量可以將優(yōu)選為0.01～10mg/kg/日、更優(yōu)選為0.1～1mg/kg/日范圍的量作為標(biāo)準(zhǔn)，此外，在使用本發(fā)明組合物時，作為組合物的干燥重量可以將優(yōu)選為0.1～1000mg/kg/日、更優(yōu)選為1～100mg/kg/日范圍的量作為標(biāo)準(zhǔn)。在任何情況下都可以1日1次或者分為多次給藥。
本發(fā)明的藥劑或醫(yī)藥品、或者為它們的有效成分的本發(fā)明化合物或組合物，都可以包含在飲食品(飲料或者食品)中。作為飲食品，只要是不損害上述有效成分的效果、可口服攝取的物質(zhì)，在形態(tài)、性狀上就沒有特別限定，除了含有上述有效成分以外，可以使用通常用于飲食品的原料，并利用通常的方法進行制備。
本發(fā)明的飲食品中含有的本發(fā)明化合物或者組合物的量沒有特別限定，可進行適當(dāng)選擇，例如作為本發(fā)明化合物的量，在飲食品中可以為0.0001～1質(zhì)量％、優(yōu)選為0.001～1質(zhì)量％、特別優(yōu)選為0.005～1質(zhì)量％。
作為本發(fā)明的飲食品的用途，可以是利用高血糖改善效果之類的各種用途。例如，可以舉出適于開始注意血糖值者的飲食品、有助于降低·除去糖尿病等生活習(xí)慣病的危險要因的飲食品等用途。
此外，在本發(fā)明的飲食品中，“高血糖改善”是指改善或預(yù)防由高血糖引起的對健康的種種損害，作為與上述“高血糖改善”意思相同的詞句，在本發(fā)明中還可以例舉出“高血糖預(yù)防”、“抑制血糖值上升”、“改善血糖值上升”、“預(yù)防血糖值上升”、“改善高血糖蛋白Alc值”等。
此外，本發(fā)明的飲食品有助于預(yù)防由高血糖狀態(tài)引起的如糖尿病及前糖尿病(疑似為糖尿病的狀態(tài))的疾病。特別是還可以用于預(yù)防從高血糖狀態(tài)到糖尿病發(fā)病。并且，本發(fā)明的飲食品能夠預(yù)防由高血糖引起的種種疾病·并發(fā)癥等，以及降低這些疾病·并發(fā)癥等的風(fēng)險。
作為由此高血糖狀態(tài)引起的種種疾病·并發(fā)癥，可以舉出糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性腎病、糖尿病性神經(jīng)障礙、糖尿病性壞疽、糖尿病引起的腦中風(fēng)、糖尿病引起的心肌梗塞等。
本發(fā)明的飲食品優(yōu)選作為帶有用于改善高血糖的說明的飲食品等進行售賣，所述飲食品例如“表示為用于高血糖改善、含有具有高血糖改善效果化合物的飲食品”、或者“表示為用于高血糖改善、含有植物提取物的飲食品”及“記載為用于高血糖改善、含有庫拉索蘆薈提取物的飲食品”等。
此外，本發(fā)明的化合物或者組合物等由于具有高血糖改善作用，因此認(rèn)為高血糖改善的說明中也含有抑制血糖上升的意思。因此，本發(fā)明的飲食品能夠表示為“用于抑制血糖上升”。即，上述用于高血糖改善的表示也可以表示為這種“用于抑制血糖上升”。
此外，為了進行上述表示所使用的語句不僅限于“用于高血糖改善”或者“用于抑制血糖上升”，也可以為另外的語句，只要是表示改善高血糖或者抑制血糖值上升的效果的語句，就自然包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。作為這種語句，也可以是如相對于需要者，基于確認(rèn)高血糖改善或者抑制血糖值上升的效果的各種用途的表示。例如可以舉出“適于對血糖值開始注意者”，“利于減輕·除去糖尿病等生活習(xí)慣病的危險要因(風(fēng)險)”等表示。
上述的“表示”是指為了使需要者了解到上述用途的全部行為，只要是使想起·類推出上述用途的表示，不限于任何表示目的、表示內(nèi)容、表示對象物·介質(zhì)等，全部相當(dāng)于本發(fā)明的“表示”。但是，優(yōu)選通過需要者能夠直接認(rèn)識到上述用途的表述而表示。具體而言，可例舉出在本發(fā)明的飲食品涉及的商品或者商品包裝上記載上述用途的行為；將在商品或商品包裝上記載有上述用途的表示進行轉(zhuǎn)讓或交付，為了轉(zhuǎn)讓或者交付所進行的展示、進口的行為；在與商品有關(guān)的廣告、價格表或者貿(mào)易文件上記載上述用途，對它們進行展示或分發(fā)的行為，或者在將這些作為內(nèi)容的信息中記載上述用途并通過電磁(國際互聯(lián)網(wǎng)等)方法進行提供的行為等。
另一方面，作為表示，優(yōu)選為被行政部門等認(rèn)可的表示(例如，以行政部門規(guī)定的各種制度為基礎(chǔ)而被認(rèn)可，以這種認(rèn)可為基礎(chǔ)的方式進行表示)，特別是優(yōu)選為在包裝、容器、目錄、小冊子、POP等售賣現(xiàn)場的廣告材料及其他書類等上的表示。
另外，例如可以舉出作為保健食品、功能性食品、經(jīng)腸營養(yǎng)食品、特殊用途食品、營養(yǎng)功能食品、準(zhǔn)藥品等的表示，其他被厚生勞動省認(rèn)可的表示可以舉出如特定保健用食品，被與此類似的制度認(rèn)可的表示。作為后者的例子，可以舉出作為特定保健用食品的表示、作為附帶條件的特定保健用食品的表示、旨在影響身體構(gòu)造和機能的表示、減輕疾病風(fēng)險的表示等，詳細而言，作為典型的例子可以舉出作為在健康增進法實施細則(平成15年4月30日日本厚生勞動省令第86號)中規(guī)定的特定保健用食品的表示(特別是保健用途的表示)以及與此類似的表示。
實施例1接著給出實施例對本發(fā)明進行更詳細的說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。
以下給出從庫拉索蘆薈中制備3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇的例子。
按下述方法從庫拉索蘆薈中提取并精制3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇。
利用均化器使100kg庫拉索蘆薈的葉肉(透明膠質(zhì)部分)形成液狀，向其中添加100L醋酸乙酯/丁醇混合液(3∶1)，并進行攪拌。
放置一晚后，分層為醋酸乙酯/丁醇混合液和水層，回收醋酸乙酯/丁醇混合液。將此醋酸乙酯/丁醇混合液在減壓下濃縮，得到的醋酸乙酯/丁醇混合液提取物的重量為13.5g。
使用上述水層和醋酸乙酯/丁酯混合液提取物，使用后述的糖尿病模型小鼠進行高血糖改善作用的評價，結(jié)果確認(rèn)了與醋酸乙酯/丁醇混合液提取物相同的效果，因此嘗試了此提取物成分的分離、精制。首先，通過薄層色譜法(Merck公司制，硅膠60F254及RP-18F2543)對上述提取物進行研究，結(jié)果認(rèn)為使用了氯仿/甲醇混合液的正相硅膠柱色譜法的分離方法是適合的。因此，在填充有400g硅膠60(Merck公司制)的柱中，上樣在1ml氯仿/甲醇混合液(1∶1)中溶解有13g上述提取物的溶液，使其吸附于柱后，使用氯仿/甲醇混合液，通過使甲醇濃度逐步上升的逐步梯度洗脫法(各混合比為氯仿/甲醇＝100∶1、25∶1、10∶1、5∶1及1∶1)進行洗脫，在每個上述混合液的混合比下分餾洗脫液。除去各餾分溶劑后的粗精制物的收量分別為1.44g、3.0g、1.17g、1.28g、2.27g。在這些餾分中，通過使用了上述模型動物的方法確認(rèn)了在氯仿∶甲醇＝5∶1下洗脫的餾分(粗精制物A)中存在活性成分。而且，在利用薄層色譜法進行分析后，未能確認(rèn)存在蘆薈苷和蘆薈大黃素。
為了進一步從上述粗精制物A中進行活性成分的分離精制，使用薄層色譜法(Merck公司制，硅膠60F254及RP-18F2543)對此粗精制物A進行研究后，認(rèn)為使用了甲醇的反相硅膠柱色譜法的分離方法是適合的。因此，將上述粗精制物A溶解在1ml氯仿/甲醇混合液(1∶1)中，并上樣于填充有180g COSMOSIL 140(Nacalai Tesque公司制)的柱上，使其吸附在柱上后，依次用600ml的85％甲醇溶液、600ml的95％甲醇溶液及100ml的100％甲醇進行洗脫。3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇從95％甲醇的洗脫餾分中被濃縮分離出來，除去其溶劑后的重量為370mg。以下，稱此化合物為化合物1。
對化合物1進行薄層色譜法研究，結(jié)果顯示了與β-谷甾醇葡萄糖苷極為接近的Rf值，因此推測其為在苷元部分結(jié)合有1分子糖的糖苷。并且，為了研究化合物1的糖組成，將化合物1進行甲醇分解后作為TMS衍生物，并利用GC-MS進行測定。其結(jié)果如下測定化合物1糖部分的TMS衍生物，其主峰的保留時間為14.28min、14.61min、16.34min，與葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(Nacalai Tesque公司制)主峰的保留時間14.27min、14.60min、16.33min基本一致。另外，并未見到與半乳糖標(biāo)準(zhǔn)品(Kishida公司制)和木糖標(biāo)準(zhǔn)品(Kishida公司制)的主峰相當(dāng)?shù)姆濉Ｒ虼?，確認(rèn)化合物1中含有的糖的種類為葡萄糖。
由以上的結(jié)果推測化合物1為在苷元部分結(jié)合有1分子葡萄糖的糖苷。但是，用13C-NMR(125MHz、CDCl3)測定化合物1，其結(jié)果確認(rèn)了雜質(zhì)的存在，因此認(rèn)為在結(jié)構(gòu)確定上還必需進行進一步精制。因此，將化合物1甲醇分解后，進行乙?；?，從而確認(rèn)了苷元部分的結(jié)構(gòu)及苷元部分與糖的結(jié)合部位。以下給出其方法。
將50mg化合物1溶解于含有5％鹽酸的甲醇(50ml)后，加熱回流6小時進行甲醇水解，然后進行干燥，即得殘渣(約30mg)。用硅膠柱色譜法(己烷∶氯仿＝9∶1)精制該殘渣，即得化合物2(10mg)。在該化合物2(5mg)中加入醋酸酐·吡啶(各2滴)，在70℃下加熱30分鐘進行乙?；?，然后蒸餾除去反應(yīng)液的溶劑，即得化合物3。用GC-MS和13C-NMR(125MHz、CDCl3)分析該化合物3，結(jié)果分別示于圖1和圖2中。測定條件和結(jié)果如下。另外，作為標(biāo)準(zhǔn)物使用的3-乙酰氧基-4-甲基麥角甾烷-7-烯，是從蘆薈中提取精制后，用13C-NMR確認(rèn)了結(jié)構(gòu)后進行乙?；瞥傻?。
；C-136.8，C-227.3，C-378.7，C-437.0，C-546.9，C-626.8，C-7117.4，C-8139.4，C-949.7，C-1034.9，C-1121.6，C-1239.7，C-1343.6，C-1455.1，C-1523.1，C-1628.2，C-1756.3，C-1812.0，C-1914.2，C-2036.5，C-2119.0，C-2233.9，C-2330.6，C-2439.1，C-2532.6，C-2620.4，C-2718.4，C-2815.6，C-2915.3[GC-MS]裝置GC-17A/GCMS5050A(島津)GC柱NEUTRA BOND-5(GL Scienses)柱溫100℃(2分)→(10℃/分)→300℃(28分)進樣溫度250℃載氣He(1.3mL/分)界面溫度300℃MS方式EI離子化能量70eV[結(jié)果]標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)3-乙酰氧基-4-甲基麥角甾-7-烯4tR[min]＝39.4；m/z456[M]+，441[M-CH3]+，396[M-AcOH]+，381[M-CH3-AcOH]+化合物3tR[min]＝39.2；m/z 456[M]+，441[M-CH3]+，396[M-AcOH]+，381[M-CH3-AcOH]+由NMR的測定結(jié)果可知，化合物3與3-乙酰氧基-4-甲基麥角甾-7-烯的文獻值一致(油化學(xué)，第36卷，第5號，第301～319頁，1987年)。由此結(jié)果可確認(rèn)化合物2為4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇。使用FAB-MS進行測定，結(jié)果是化合物1的分子量為576。在脫水縮合化合物2(苷元部分)和葡萄糖時，所得化合物的分子量為414(化合物2)+180(葡萄糖)-18(水)＝576，與化合物1的分子量一致。
由上述結(jié)果可確認(rèn)化合物1的結(jié)構(gòu)為3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇。
以下給出各自的分子式、分子量及化學(xué)式。
(化合物1)分子式C35H60O6分子量576化學(xué)式下述化學(xué)式(1)[化2] (化合物2)分子式C29H50O分子量414化學(xué)式下述化學(xué)式(2)[化3]
(化合物3)分子式C31H52O2分子量456化學(xué)式下述化學(xué)式(3)[化4] [制備例2]加熱干燥庫拉索蘆薈的葉肉(透明膠質(zhì)部分)，在0.3g粉碎的干燥庫拉索蘆薈粉末中加入60ml的60％、80％、或者100％乙醇后，在60℃下加熱回流1小時。將提取液在1500rpm下離心分離20分鐘，將上清液在減壓下濃縮，完全除去乙醇，即得粗提取物。使用60％、80％及100％的乙醇提取得到的粗提取物干燥重量分別為65mg、42mg、18mg。通過薄層色譜法確認(rèn)這些粗提取物中都含有3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇。

加熱干燥庫拉索蘆薈的葉肉(透明膠質(zhì)部分)，在0.3g粉碎的干燥庫拉索蘆薈粉末中加入60ml水后，在95℃下加熱回流5小時。將提取液在1500rpm下離心分離20分鐘，將上清液冷凍干燥，即得75mg粗提取物。通過薄層色譜法確認(rèn)此粗提取物中含有3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇。
加熱干燥庫拉索蘆薈的葉肉(透明膠質(zhì)部分)，將其粉碎并進行干燥，在21kg由此制備的庫拉索蘆薈粉末中，加入90升氯仿/甲醇混合液(2∶1)后，在室溫下浸漬一晚，然后過濾，向過濾殘渣中再次加入90升氯仿/甲醇混合液(2∶1)，進行4次同樣的操作。在28℃下濃縮得到的濾液(350升)，最終得到784g粗提取物。其中，向780g粗提取物中加入2升氯仿/甲醇混合液(2∶1)，攪拌1小時后過濾，回收氯仿/甲醇混合液層(A)。向過濾殘渣中依次加入2.5升水和2升醋酸乙酯，攪拌1小時后回收醋酸乙酯層(B)，向殘余的水層中再次加入5升氯仿，攪拌1小時后回收氯仿層(C)。
混合回收的A、B及C有機溶劑提取液，在23℃下濃縮后，上樣于硅膠柱(玻璃柱52mm×350mm，填充劑IR-63/210-W(Daiso株式會社制))。接著，用薄層色譜法檢測洗脫物，同時依次用10升己烷/氯仿混合液(1∶1)、10升氯仿、20升氯仿/甲醇混合液(10∶1)及20升氯仿/甲醇混合液(5∶1)進行洗脫，按各洗脫溶劑的順序，回收餾分1(約1升)、餾分2(約1.5升)、餾分3(約1.5升)和餾分4(約1.5升)。
其中，由薄層色譜法確認(rèn)餾分3中含有目標(biāo)糖苷后，除去溶劑，即得131.6g粗提取物。將此130g粗提取物再次上樣于硅膠柱[玻璃硅膠柱70mm×500mm，填充劑SP-60-40/60(Daiso株式會社制)]，分別將10升氯仿/甲醇混合液(30∶1)、50升氯仿/甲醇混合液(20∶1)、10升氯仿/甲醇混合液(10∶1)、10升氯仿/甲醇混合液(1∶1)作為洗脫溶劑，在壓力10kgfcm-2、流速40ml/min的條件下依次洗脫。用餾分收集器將洗脫液劃分為每100ml一個餾分，回收餾分1～8。
利用薄層色譜法確認(rèn)回收的餾分，結(jié)果可知在餾分7中存在目標(biāo)糖苷和雜質(zhì)，因此濃縮此餾分，再次上樣于硅膠柱[玻璃柱70mm×500mm，填充劑SP-60-40/60(Daiso株式會社制)]分別將10升氯仿/甲醇混合液(20∶1)、10升氯仿/甲醇混合液(10∶1)作為洗脫溶劑，在壓力10kgfcm-2、流速40ml/min的條件下依次洗脫。結(jié)果在氯仿/甲醇混合液(10∶1)洗脫餾分中得到了25.3g為目標(biāo)糖苷的3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇。
本試驗用于評價3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇對高血糖狀態(tài)的改善效果。
(1)樣品的制備將在上述制備例1中得到的3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇作為試驗樣品。
(2)試驗方法作為II型糖尿病模型小鼠使用了6周齡、雄性db/db小鼠(從CLEA JAPAN公司購入)。將該小鼠分組為1組7只。將試驗樣品溶解于DMSO后，用生理鹽水將3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇的濃度調(diào)至15μg/ml。最終DMSO濃度調(diào)至0.2％。使用灌胃器對該II型糖尿病模型小鼠1日1次連日口服給予1ml試驗樣品溶液。而且將不含有試驗樣品的溶液作為陰性樣品。使用AntsenseII(拜耳三共公司制)經(jīng)時測定空腹時血糖值和平常血糖值?？崭箷r血糖值是在絕食15小時后進行測定的。
(3)高血糖改善效果圖3和圖4中顯示了平常血糖值和空腹時血糖值在試驗樣品給藥期間的經(jīng)時變化。雖然觀察到在給予了陰性樣品的小鼠中，在平常血糖值和空腹時血糖值的任何一個中血糖值都急劇上升，但在連續(xù)給予了試驗樣品的小鼠中，明顯地觀察到了抑制血糖值上升的效果。
本試驗用于評價3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇對血紅蛋白Alc的降低作用。
(1)樣品的制備將在上述制備例1中制備的3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾烷-7-烯-3-醇作為試驗樣品。
(2)試驗方法作為II型糖尿病模型小鼠使用了6周齡、雄性db/db小鼠(從CLEA JAPAN公司購入)。將該小鼠分組為1組7只。將試驗樣品溶解于DMSO后，用生理鹽水將3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇的濃度調(diào)成1、5、15μg/ml。最終DMSO濃度調(diào)至0.2％。使用灌胃器對該II型糖尿病模型小鼠1日1次連日口服給予1ml試驗樣品溶液。而且將不含有試驗樣品的溶液作為陰性樣品。在開始給藥后的第35天，使用DCA2000(拜耳三共公司制)測定血紅蛋白Alc。
(3)血紅蛋白Alc的降低作用開始給藥后第35天的血紅蛋白Alc測定結(jié)果示于表1中。與給予了陰性樣品時的血紅蛋白Alc值相比，統(tǒng)計學(xué)上可見連續(xù)給予了5或15μg的試驗樣品組均具有顯著性的血紅蛋白Alc下降，顯示了長期血糖值控制效果。此外，在給藥期間，發(fā)生副作用癥狀和給藥后引起低血糖狀態(tài)的例子一次都沒有，體重和病理檢查也未發(fā)現(xiàn)異常。
表1

*統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異。
本試驗用于進行提取粗精制物A對血紅蛋白Alc的降低作用和給藥量的研究，其中，該粗精制物A含有源自庫拉索蘆薈的3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇。
(1)樣品的制備使用在上述制備例1中得到的含有3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-4-甲基麥角甾-7-烯-3-醇的提取粗精制物A。
(2)試驗方法作為II型糖尿病模型小鼠使用了6周齡、雄性db/db小鼠(從CLEA JAPAN公司購入)。將該小鼠分組為1組7只。將試驗樣品溶解于DMSO后，用生理鹽水將提取粗精制物A的濃度調(diào)成25、100、200μg/ml。最終DMSO濃度調(diào)至0.2％。使用灌胃器對該II型糖尿病模型小鼠1日1次連日口服給予1ml試驗樣品溶液。而且將不含有試驗樣品的溶液作為陰性樣品。在開始給藥后的第35天，使用DCA2000(拜耳三共公司制)測定血紅蛋白Alc。
(3)血糖值和血紅蛋白Alc值開始給藥后第35天的血紅蛋白Alc測定結(jié)果示于表2中。與陰性試驗的血紅蛋白Alc值相比，可見連續(xù)給予了100或200μg試驗樣品組的血紅蛋白Alc降低，在統(tǒng)計學(xué)上顯示了有顯著性差異的長期血糖值控制效果。而且，在給藥期間，發(fā)生副作用癥狀和給藥后引起低血糖狀態(tài)的例子一次沒有發(fā)生，體重和病理檢查也未發(fā)現(xiàn)異常。
表2

*統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異。
產(chǎn)業(yè)實用性本發(fā)明的化合物為不引起低血糖、可安全地給藥或攝取，且具有可降低血紅蛋白Alc值的長期血糖值控制作用。此外，本發(fā)明的組合物可使用食用經(jīng)驗上可安全攝取、獲得容易的植物如蘆薈屬或者蔥屬的百合科植物來進行制備。另外，本發(fā)明的組合物為含有有效量的本發(fā)明化合物的物質(zhì)，優(yōu)選方式中不含有為醫(yī)藥品或飲食品中非優(yōu)選成分的蘆薈苷或蘆薈大黃素。
權(quán)利要求
1.一種化合物，其具有下述化學(xué)式(1)所示結(jié)構(gòu)。[化1]
2.一種組合物，其含有按干燥質(zhì)量計為大于等于0.001質(zhì)量％的權(quán)利要求1所述化合物。
3.如權(quán)利要求2所述的組合物，其為百合科植物的提取物或者其分餾物。
4.如權(quán)利要求3所述的組合物，其中，百合科植物為庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)。
5.一種高血糖改善劑，其將權(quán)利要求1所述化合物或者權(quán)利要求2～4任一項所述組合物作為有效成分。
6.一種醫(yī)藥品，其特征在于，含有權(quán)利要求5所述高血糖改善劑。
7.一種飲食品，其特征在于，含有權(quán)利要求5所述高血糖改善劑。
8.一種飲食品，其帶有以用于改善高血糖為宗旨的說明，其特征在于，將權(quán)利要求1所述化合物或權(quán)利要求2～4任一項所述組合物作為有效成分而含有，并具有高血糖改善作用。
9.一種方法，其為權(quán)利要求1所述化合物或者含有相同化合物的組合物的制備方法，其特征在于，從含有權(quán)利要求1所述化合物的百合科植物或其一部分、或者它們的粉碎物中，用有機溶劑或者熱水提取和濃縮含有相同化合物的餾分。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中，百合科植物為庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)。
11.在制備用于改善高血糖的醫(yī)藥品中，對具有下述化學(xué)式(1)所示構(gòu)造的化合物或者含有此化合物的組合物的應(yīng)用。[化2]
12.如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其中，上述組合物為含有按干燥質(zhì)量計為大于等于0.001質(zhì)量％上述化合物的百合科植物的提取物或者其分餾物。
13.如權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其中，百合科植物為庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)。
14.一種方法，其為改善高血糖的方法，其特征在于，向欲改善高血糖的對象給子具有下述化學(xué)式(1)所示構(gòu)造的化合物或者含有該化合物的組合物。[化3]
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中，上述組合物為含有按干燥質(zhì)量計為大于等于0.001質(zhì)量％上述化合物的百合科植物的提取物或其分步分離物。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中，百合科植物為庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)。
全文摘要
3－O－β－D－吡喃葡萄糖基－4－甲基麥角甾－7－烯－3－醇，或者含有該化合物的百合科植物的提取物或其分餾物，將含有大于等于0.001質(zhì)量％上述化合物的組合物作為高血糖改善劑的有效成分。
文檔編號A61K31/7028GK1842536SQ20058000080
公開日2006年10月4日 申請日期2005年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月31日
發(fā)明者樋口隆一, 稻垣昌宣, 早澤宏紀(jì), 山田宗夫, 田中美順, 三澤江里子, 脅元式子, 伊藤洋介 申請人:森永乳業(yè)株式會社