專利名稱：吡啶鎓鹽作為血管保護(hù)劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及某些吡啶鹽制備血管保護(hù)劑的用途，該血管保護(hù)劑用于治療和/或預(yù)防與血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或內(nèi)皮前列環(huán)素(PGI2)產(chǎn)生不足有關(guān)的病癥或疾病，特別是但不唯一的是治療和/或預(yù)防伴有高膽固醇血癥/高甘油三酯血癥的上述病癥或疾病，以及吡啶鹽口服使用作為飲食輔助治療的用途。
越來越多的證據(jù)表明內(nèi)皮機(jī)能不良在動脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展中起至關(guān)重要的作用。最近人們已經(jīng)認(rèn)識到內(nèi)皮機(jī)能不良在粥狀動脈栓塞癥診斷、預(yù)斷和治療中的重要性(Heitzer T，SchlinzigT，Krohn K，Meinertz T，Munzel T.內(nèi)皮機(jī)能不良，氧化應(yīng)激和冠心病患者心血管疾病發(fā)作的危險性.Cirrculation 2001；1042673-2678；Schachinger V，Britten MB，Zeiher AM.冠狀動脈血管舒張機(jī)能不良對于冠心病的長期反向輸出的預(yù)后影響.Circulation 2000；1011899-1906；Perticone F，CeravoloR，Pujia A，Ventura G，Iacopino S，Scozzafava A，F(xiàn)erraro A，ChelloM，Mastroroberto P，Verdec-chia P，Schillaci G.高血壓患者內(nèi)皮機(jī)能不良預(yù)斷重要性.Circulation 2001；104191-196；SuwaidiJA，Hamasaki S，Higano ST，Nishimura RA，Holmes DR，Jr.，LermanA.輕微冠心病和內(nèi)皮機(jī)能不良患者的長期隨訪.Circulation2000；101948-954)。臨床上，內(nèi)皮機(jī)能不良與被診斷為血管舒張NO活性減退的NO生物活性減退視為等同。雖然PGI2的全身水平可能提高，但是NO活性減退伴隨著氧化應(yīng)激(Heitzer T，Schlinzig T，Krohn K，Meinertz T，Munzel T.內(nèi)皮機(jī)能不良，氧化應(yīng)激和冠心病患者心血管疾病發(fā)作的危險性.Circulation 2001；1042673-2678)和PGI2合成減少(Kyrle PA，Minar E，Brenner B，EichlerHG，Heistinger M，Marosi L，LechnerK.在動脈粥樣硬化患者微脈管系統(tǒng)中產(chǎn)生血栓素A2和前列環(huán)素-低劑量阿司匹林的作用.ThrombHaemost 1989；61374-377)。事實(shí)上，幾年前就提出了增強(qiáng)脂質(zhì)過氧化作用使內(nèi)皮細(xì)胞中前列環(huán)素合成的選擇性減少隨后激活血小板，從而可能促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)展(Gry-glewski RJ.前列環(huán)素和動脈粥樣硬化.TIPS 1980；1164-168；Gryglewski RJ.前列腺素，血小板和動脈粥樣硬化.CRC Crit Rev Biochem 1980；7291-338；Gryglewski RJ，Szczeklik A.前列環(huán)素和動脈粥樣硬化-實(shí)驗(yàn)和臨床方法.1983；213-226)。這一觀念后來為實(shí)驗(yàn)所支持?，F(xiàn)在很顯然內(nèi)皮組織中PGI2合成的減少可以導(dǎo)致內(nèi)皮組織和血管平滑肌細(xì)胞中的TP受體被TXA2、PGH2或其它類花生酸類物質(zhì)過度刺激，繼而發(fā)生血管收縮、血小板凝集、內(nèi)皮組織的炎癥應(yīng)答以及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡(Chlopicki S，Gryglewski RJ.“類花生酸”中的內(nèi)皮分泌作用和粥狀動脈栓塞癥，第23章，267-276頁，ed.P.Curtis-Prior，John Wiley和Sons公司，2004)。這表示PGI2缺乏可觸發(fā)或增強(qiáng)被認(rèn)為是動脈粥樣硬化關(guān)鍵因素的血管壁中的炎癥和血栓形成進(jìn)程。
已經(jīng)公認(rèn)低密度脂蛋白膽固醇(LDL)和/或甘油三酯(TG)血漿水平的升高是動脈粥樣硬化發(fā)展的主要危險因子(Levine GN，KeaneyJF Jr，Vita JA.心血管疾病中膽固醇減少.臨床益處和可能機(jī)制.NEngl J Med 1995；332512-521)。而且，低的高密度脂蛋白膽固醇(HDL)是動脈粥樣硬化的重要獨(dú)立危險因子。HDL由于增加NO和PGI2的利用度而具有預(yù)防和校正內(nèi)皮機(jī)能不良的潛在能力。(Ng DS.治療低的HDL-從實(shí)驗(yàn)室到臨床.Clin Biochem 2004；37649-659；Chapman MJ，Assman G，F(xiàn)ruchartJC，Shepherd J，Sirtoti C.升高高密度脂蛋白膽固醇減少患心血管疾病的危險性煙酸的作用-關(guān)于HDL-C的歐洲共識小組的意見書.Curr Med Res Opin 2004；201253-1268；Calabresi L，Gomarashi M，F(xiàn)ranceschini G.高密度脂蛋白的內(nèi)皮保護(hù)作用.Arterioscler Thromb Vasc Biol.2003；2902292-2300)。
WO 00/40559中公開了某些煙酰胺衍生物，1，3-二取代吡啶鹽，包括1-甲基煙酰胺(MNA+)和1-甲基-N′-(羥甲基)煙酰胺(MNAF+)鹽的治療學(xué)和美容用途。據(jù)報道，所述衍生物具有局部治療皮膚疾病特別是腿潰瘍、痤瘡、牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、白癜風(fēng)以及燒傷燙傷和促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的功用。所述衍生物還有促進(jìn)毛發(fā)再生的活性，因此用于治療不同起因的脫發(fā)。描述了這些化合物施用于皮膚或粘膜表面的不同類型的局部用制劑，如洗發(fā)劑、軟膏、乳膏、凝膠、洗劑、溶液劑、噴霧劑等等，以及口服給藥治療皮膚病的制劑。還描述了這些化合物的美容作用，特別是使皮膚再生和變光滑。
最近出版物中描述了1-甲基煙酰胺氯化物(MNA+)在一些皮膚疾病中的作用(Gebicki J，Sysa-Jedrzejowska A，Adamus J，WozniackaA，Rybak M，Zielonka J.1-甲基煙酰胺一種有效的維生素源抗炎藥.Pol J Pharmacol.2003；55109-112)。雖然沒有闡述作用機(jī)制，但是猜想MNA+顯示了抗炎作用。
出版物(Takashi Sakurai，Haruo Hosoya.煙酰胺-腺嘌呤二核苷酸類似物和吖啶黃單核苷酸的電荷轉(zhuǎn)移復(fù)合物.Bio-chim.Biophys.Acta 1966；112(3)359-468)中描述了1-甲基-3-乙酰吡啶鹽(MAP+)。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)MAP+和WO00/40559中描述的一些化合物特別是MNA+和MNAF+具有獨(dú)特的與其從血管內(nèi)皮中釋放內(nèi)源性前列環(huán)素(PGI2)能力有關(guān)的藥理學(xué)性質(zhì)，這種性質(zhì)使其區(qū)別于結(jié)構(gòu)近似的有關(guān)煙酰胺、煙酸、葫蘆巴堿及內(nèi)源性MNA+代謝物，如1-甲基-2-吡啶酮-5-羧基酰胺(2-PYR)和1-甲基-4-吡啶酮-3-羧基酰胺(4-PYR)。令人驚訝的是本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)某些化合物具有校正脂蛋白分布，特別是降低LDL和/或TG的血漿水平，升高HDL血漿水平的能力，導(dǎo)致其抗動脈粥樣硬化效應(yīng)。與本發(fā)明的某些吡啶鹽對于脂蛋白分布的效應(yīng)無關(guān)，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)吡啶鹽增加PGI2的合成，顯示了在下述多種疾病包括伴隨著高膽固醇血癥/高甘油三酯血癥疾病中的治療可能性，內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或PGI2不足在上述疾病中起致病機(jī)制的作用。
附圖簡要說明

圖1檢測藥物在大鼠體內(nèi)溶血栓作用的方法的圖解(依照Gryglewski)圖2靜脈內(nèi)給藥MNA+(30mg/kg)誘導(dǎo)產(chǎn)生的體內(nèi)溶血栓響應(yīng)圖3靜脈內(nèi)給藥MNA+(30mg/kg)后6-酮(keto)-PGF1α(·)和TXB2(o)血漿水平的變化圖4靜脈內(nèi)給藥煙酰胺和煙酸(30mg/kg)后沒有溶血栓響應(yīng)圖5靜脈內(nèi)給藥2-PYR或葫蘆巴堿(30mg/kg)后沒有溶血栓響應(yīng)圖6靜脈內(nèi)給藥MAP+(30mg/kg)誘導(dǎo)產(chǎn)生的體內(nèi)溶血栓響應(yīng)圖7靜脈內(nèi)給藥MAP+(30mg/kg)后體內(nèi)6-酮-PGF1α(·)和TXB2(o)血漿水平的變化圖8靜脈內(nèi)給藥MNAF+(30mg/kg)誘導(dǎo)產(chǎn)生的溶血栓響應(yīng)圖9MNA+對于膠原誘導(dǎo)的血小板凝集(1mg/mL)無作用圖10MNA+對于膠乳誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞激活作用無影響首先一方面本發(fā)明提供式I的吡啶鹽制備用于治療或預(yù)防與血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或內(nèi)皮前列環(huán)素(PGI2)產(chǎn)生不足有關(guān)的病癥或疾病的血管保護(hù)劑的用途， 其中R是NH2、CH3或N(H)CH2OH，X是藥學(xué)可接受的平衡離子。
優(yōu)選地，所述的血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或內(nèi)皮前列環(huán)素(PGI2)產(chǎn)生不足伴著高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥或者低HDL水平。
式I化合物特別有利的活性是伴隨PGI2釋放的內(nèi)皮作用，由此所述的式I化合物可以改善組織灌流，產(chǎn)生抗凝集、血栓溶解、抗細(xì)胞凋亡、抗動脈粥樣硬化活性，以及保護(hù)胃腸粘膜。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)還在于式I化合物的血栓溶解作用不伴隨降壓活性。
本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，所述的病癥或疾病是任何種類的血管床的動脈粥樣硬化，包括慢性冠心病、腦血管局部缺血性發(fā)作或四肢動脈粥樣硬化，包括血栓性脈管炎閉塞。
在另一個實(shí)施方案中，所述的狀況或疾病是與動脈粥樣硬化有關(guān)的急性心血管事件特別是心臟性猝死，急性冠脈綜合征(包括不穩(wěn)定型冠心病、心肌梗塞)，需要冠狀動脈血管成形術(shù)(PCI)、冠狀主動脈旁通道手術(shù)(CABG)、缺血性中風(fēng)或末梢循環(huán)血管形成術(shù)。
又一實(shí)施方案中，所述的病癥或疾病選自動脈粥樣硬化危險因素組，包括以下高膽固醇血癥、動脈高血壓、吸煙、高同型半胱氨酸血癥、胰島素抵抗、糖尿病、絕經(jīng)、衰老、肥胖癥、心理應(yīng)激、感染、炎癥狀態(tài)包括牙周疾病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、異體移植物血管病變或硝酸鹽耐藥性。
還有另一實(shí)施方案，所述的病癥或疾病是血脂障礙，特別是高膽固醇血癥或高甘油三酯血癥，尤其是伴有低HDL血漿水平的高膽固醇血癥或高甘油三酯血癥。
還有另一實(shí)施方案，所述病癥或疾病是與動脈粥樣硬化非直接相關(guān)的血栓形成，特別是與金屬人工血管(支架)移植、冠狀主動脈旁通道手術(shù)(CABG)、任意類型體外循環(huán)手術(shù)、血液透析、靜脈血栓栓塞性疾病相關(guān)的血栓形成。
還有一個實(shí)施方案，所述的病癥或疾病選自以下的組慢性心力衰竭、肺動脈高壓、微脈管糖尿病并發(fā)癥、類糖尿病性視網(wǎng)膜病和腎病、糖尿病性神經(jīng)病變、腎病綜合征、慢性腎功能衰竭、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、囊性纖維病變、慢性閉塞性肺部疾病(COPD)、先兆子癇/子癇、勃起機(jī)能障礙、多囊卵巢綜合征、睡眠性呼吸暫停、全身性紅斑狼瘡、鐮狀細(xì)胞性貧血、非特異性炎性腸病、胃或十二指腸潰瘍、青光眼、慢性肝病、原發(fā)性淀粉樣變性、神經(jīng)退行性疾病、特別是選自血管性癡呆、阿爾茨海默氏病和帕金森氏病的神經(jīng)退行性疾病。
另一優(yōu)點(diǎn)是式I化合物制備預(yù)防或治療胃或十二指腸潰瘍藥物的用途。
一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的病癥或疾病是慢性肝病，特別是慢性病毒性肝炎。
一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的病癥或疾病是慢性閉塞性肺部疾病(COPD)。
所述的藥劑可以是適于任何給藥途徑，如經(jīng)口、胃腸道外、鼻內(nèi)或吸入途徑給藥的劑型。當(dāng)然給藥途徑取決于被治療的具體情況或疾病。
在藥劑預(yù)期用來治療慢性閉塞性肺部病變(COPD)的情況下，優(yōu)選以適用于經(jīng)呼吸途徑吸入給藥的劑型存在。
如上所述，X可以是任意的生理學(xué)上可接受的平衡離子。因此，式I的鹽可以衍生自任意生理學(xué)上可接受的有機(jī)酸和無機(jī)酸。與無機(jī)酸形成的適合鹽例如氯化物、溴化物、碘化物和碳酸鹽；與有機(jī)酸形成的適合鹽可以是與單、二和三羧酸形成的鹽，如醋酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、羥乙酸鹽、乳酸鹽、丙二酸鹽和檸檬酸鹽。優(yōu)選的鹽是氯化物、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽和乳酸鹽，特別有利的是氯化物。
式I的具體化合物是1-甲基煙酰胺鹽(MNA+)、1-甲基-3-乙酰吡啶鹽(MAP+)和1-甲基-N′-(羥甲基)煙酰胺鹽(MNAF+)。
本發(fā)明第二方面提供治療和/或預(yù)防與血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或內(nèi)皮PGI2產(chǎn)生不足有關(guān)的病癥或疾病(伴有或不伴有高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥或低HDL水平)，特別是例如上面討論過的病癥或疾病的方法，包括給予需要這種治療的受體治療有效量的上面定義的式I吡啶鹽。
本發(fā)明治療方法的一個實(shí)施方案中，所述的病癥或疾病是任何種類血管床的動脈粥樣硬化，包括慢性冠心病、腦血管局部缺血性發(fā)作或四肢動脈粥樣硬化，包括血栓閉塞性脈管炎。
本發(fā)明治療方法的另一個實(shí)施方案中，所述的狀況或疾病是與動脈粥樣硬化有關(guān)的急性心血管疾病事件，特別是心臟性猝死、急性冠脈綜合征(包括不穩(wěn)定型冠心病、心肌梗塞)、需要冠狀動脈血管成形術(shù)(PCI)、冠狀主動脈旁通道手術(shù)(CABG)、缺血性中風(fēng)或末梢循環(huán)血管形成術(shù)。
本發(fā)明治療方法的又一實(shí)施方案中，所述的病癥或疾病選自動脈粥樣硬化危險因素組，包括以下高膽固醇血癥、動脈高血壓、吸煙、高同型半胱氨酸血癥、胰島素抵抗、糖尿病、絕經(jīng)、衰老、肥胖癥、心理應(yīng)激、感染、炎癥狀態(tài)包括牙周疾病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、異體移植物血管病變或硝酸鹽耐藥性。
本發(fā)明治療方法的又一實(shí)施方案中，所述的病癥或疾病是血脂障礙，特別是高膽固醇血癥或高甘油三酯血癥，尤其是伴有低HDL血漿水平的高膽固醇血癥或高甘油三酯血癥。
本發(fā)明治療方法中還有另一實(shí)施方案，所述病癥或疾病是與動脈粥樣硬化非直接相關(guān)的血栓形成，特別是與金屬人工血管(支架)移植、冠狀主動脈旁通道手術(shù)(CABG)、任意類型的體外循環(huán)手術(shù)、血液透析、靜脈血栓栓塞性疾病相關(guān)的血栓形成。
本發(fā)明治療方法的又一個實(shí)施方案中，所述的病癥或疾病選自以下的組慢性心力衰竭、肺動脈高壓、微脈管糖尿病并發(fā)癥、類糖尿病性視網(wǎng)膜病和腎病、糖尿病性神經(jīng)病變、腎病綜合征、慢性腎功能衰竭、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、囊性纖維病變、慢性閉塞性肺部疾病(COPD)、先兆子癇/子癇、勃起機(jī)能障礙、多囊卵巢綜合征、睡眠性呼吸暫停、全身性紅斑狼瘡、鐮狀細(xì)胞性貧血、非特異性炎性腸病、胃或十二指腸潰瘍、青光眼、慢性肝病、原發(fā)性淀粉樣變性、神經(jīng)退行性疾病、特別是選自血管性癡呆、阿爾茨海默氏病和帕金森氏病的神經(jīng)退行性疾病。
一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的病癥或疾病是慢性肝病，特別是慢性病毒性肝炎。
一個更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的病癥或疾病是慢性閉塞性肺部疾病(COPD)。
另一優(yōu)點(diǎn)是式I化合物在預(yù)防或治療胃或十二指腸潰瘍的方法中的用途。
式I的吡啶鹽可以單獨(dú)給藥或者與其它心血管藥物聯(lián)合給藥。
式I的吡啶鹽尤其可以以常規(guī)的口服制劑形式如片劑、膠囊劑、藥物可接受的液體載體的口服溶液劑/混懸液經(jīng)口服給藥。所述制劑可以用本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法制備，包含常規(guī)的藥物賦形劑和載體。
式I的吡啶鹽也可以以注射劑的形式包括皮下和靜脈內(nèi)注射的注射液和輸液經(jīng)胃腸道外給藥。
其它預(yù)期的給藥途徑是吸入、鼻內(nèi)和直腸給藥。
當(dāng)然無論如何，給藥途徑都取決于被治療的特定疾病。
例如，在吡啶鹽用來治療慢性閉塞性肺部病變(COPD)時，優(yōu)選適用于經(jīng)呼吸途徑吸入給藥的劑型。
式I吡啶鹽的日劑量范圍是10-1000mg，可以單次或分多次給藥。
本發(fā)明還涉及提高哺乳動物前列環(huán)素水平的方法，包括口服給予有效量的上述式I吡啶鹽。
本發(fā)明還提供用于飲食輔助治療中的上述式I吡啶鹽。式I吡啶鹽用作飲食輔劑時，提高前列環(huán)素水平，因此作為血管保護(hù)劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供上述式I吡啶鹽制備營養(yǎng)制劑的用途，用于哺乳動物與血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或內(nèi)皮前列環(huán)素(PGI2)產(chǎn)生不足，特別是還伴隨著高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥或低HDL水平有關(guān)的狀態(tài)或疾病下的血管保護(hù)。
所述的可以給予營養(yǎng)制劑的病癥或疾病是動脈粥樣硬化，特別是患有慢性冠心病、局部缺血性腦血管發(fā)作或四肢動脈粥樣硬化包括血栓閉塞性脈管炎患者的動脈粥樣硬化。
所述的可以給予營養(yǎng)制劑的病癥或疾病還可以選自動脈粥樣硬化危險因素組，包括以下高膽固醇血癥、動脈高血壓、吸煙、高同型半胱氨酸血癥、胰島素抵抗、糖尿病、絕經(jīng)、衰老、肥胖癥、心理應(yīng)激、感染、炎癥狀態(tài)包括牙周疾病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、異體移植物血管病變或硝酸鹽耐藥性。
所述的可以施用營養(yǎng)制劑的病癥或疾病是血脂障礙，特別是高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥，尤其是伴有低HDL血漿水平的高膽固醇血癥或高甘油三酯血癥。
所述的可以施用營養(yǎng)制劑的癥狀或疾病可以是與動脈粥樣硬化非直接相關(guān)的血栓形成，特別是與金屬人工血管(支架)移植、冠狀主動脈旁通道手術(shù)(CABG)、任意類型體外循環(huán)手術(shù)、血液透析、靜脈血栓栓塞性疾病相關(guān)的血栓形成。
用作飲食輔助治療和/或營養(yǎng)制劑的具體的吡啶鹽是式I化合物，其中R是CH3。
用作飲食輔助治療和/或營養(yǎng)制劑的具體的吡啶鹽是式I化合物，其中R是NH2。
用作飲食輔助治療和/或營養(yǎng)制劑的具體的吡啶鹽是式I化合物，其中R是N(H)CH2OH。
飲食補(bǔ)劑和營養(yǎng)制劑可以是適合經(jīng)口攝取的劑型，如片劑、膠囊劑、飲用的溶液劑和混懸液以及類似的、常規(guī)的、制劑領(lǐng)域公知的、用常規(guī)的輔料和載體按照本領(lǐng)域公知方法制備的劑型。
飲食補(bǔ)劑或營養(yǎng)制劑中混合至少5％重量的式I吡啶鹽是有益的。
通過以下顯示吡啶鹽藥學(xué)活性的實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，實(shí)施例1血栓溶解活性應(yīng)用Gryglewski等人的原始方法評價吡啶鹽的血栓溶解活性(Gryglewski RJ，Korbut R，Ocet-kiewicz A，Stachura J.測定藥物在體內(nèi)抗血小板效力的方法.Naunyn Schmiedebergs ArchPharmacol 1978；30225-30)，圖解見圖1。
將體重300-350g的Wistar大鼠麻醉(腹腔內(nèi)注射硫噴妥鈉30mg·kg-1)并肝素化(靜脈內(nèi)注射未分級肝素800i.u.·kg-1)。
從插套管的右側(cè)頸動脈測定動脈血壓，在左側(cè)頸動脈和左側(cè)頸靜脈之間建立體外循環(huán)。以1.5mL·min-1的速度向家兔跟腱的膠原帶中灌注體外循環(huán)的動脈血，用Harvard張力傳感器連續(xù)監(jiān)測其重量。
在灌注的最初20-30分鐘內(nèi)，由于富血小板血栓的沉積作用膠原帶增加重量80-120mg，在隨后的3-5小時內(nèi)控制條件不變。通過血栓重量的降低檢測血栓溶解響應(yīng)。同時監(jiān)測動脈血壓，所以這一模型能夠分析化合物的血栓溶解和降壓作用(圖1)。
這一實(shí)驗(yàn)設(shè)置中血栓溶解響應(yīng)的分析還補(bǔ)充了動脈血中6-氧代-PGF1α、TXB2和PGE2的測定。為此在Eppendorff管中收集血樣(500μL)，其中吲哚美辛的終濃度為10μM，EDTA終濃度為1mM。然后以2,000xg轉(zhuǎn)速離心血樣5分鐘。血漿樣品保存在-70℃。用酶免疫分析試劑盒(Cayman Chemical Co，Ann Arbor，MI)測定前列腺素。
靜脈內(nèi)給藥MNA+(3-30mg/kg)在體外循環(huán)Wistar大鼠中產(chǎn)生濃度依賴性血栓溶解作用。在MNA+劑量為30mg/kg時觀察到最大響應(yīng)。以30mg/kg單次注射MNA+誘導(dǎo)產(chǎn)生42±4％水平的長效溶栓響應(yīng)，在觀測期間內(nèi)保持大約相同的水平2-3小時。與MNA+相比，煙酰胺、煙酸、葫蘆巴堿和2-PYR(內(nèi)源性MNA+代謝物)在30mg/kg劑量時沒有誘導(dǎo)產(chǎn)生顯著的溶栓響應(yīng)。煙酰胺和煙酸誘導(dǎo)的響應(yīng)非常短暫(少于15-20分鐘)，在其最大劑量時分別僅為9±0.6％，5±0.9％)。葫蘆巴堿不誘導(dǎo)產(chǎn)生任何溶栓響應(yīng)，對2-PYR的響應(yīng)也非常微弱(＜10％)并且短暫(＜15分鐘)。對MNA+、煙酰胺和煙酸產(chǎn)生溶栓作用的效能和持續(xù)時間與這些化合物誘導(dǎo)6-氧代-PGF1α釋放入動脈血中的模式有關(guān)。在注射MNA+(30mg/kg)15分鐘后就誘導(dǎo)產(chǎn)生6-氧代-PGF1α水平的極大增加(由104±7pg/mL增至460±58pg/mL)，隨后達(dá)到平臺值大約400pg/mL至少維持1小時。另一方面，在對MNA+的響應(yīng)中TXB2和PGE2水平均無顯著變化。TXB2水平的緩慢增加是時間依賴性的，注射鹽溶液后也觀察的到。在注射煙酰胺或注射煙酸(30mg/kg)后6-氧代-PGF1α的水平不增加。
在吲哚美辛(5mg/kg)存在時，對MNA+的溶栓響應(yīng)消失，類似于MNA-誘導(dǎo)的6-氧代-PGF1α的釋放。重要的是，MNA+(30mg/kg)誘導(dǎo)的血栓溶解與動脈血壓降低無關(guān)。在體外，膠原誘導(dǎo)的富血小板血漿的凝集作用在MNA+濃度高達(dá)10mM時也不受影響，由于MNA+直接作用于血小板，因此排除了富血小板血栓在體內(nèi)消散的可能性。而且，MNA+(1mM)不抑制膠乳誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞的激活作用，暗示MNA+可能選擇性地作用于內(nèi)皮。
圖2顯示了在體內(nèi)MNA+誘導(dǎo)的溶栓響應(yīng)，圖3顯示血液中6-氧代-PGF1α(穩(wěn)定的PGI2代謝物)水平附隨增加。煙酰胺、煙酸(圖4)、葫蘆巴堿和2-PYR(圖5)沒有表現(xiàn)出顯著的血栓溶解活性。然而，MAP+(30mg/kg)和MNAF+(30mg/kg)均誘導(dǎo)產(chǎn)生與30mg/kgMNA+誘導(dǎo)的血栓溶解響應(yīng)相當(dāng)?shù)娜芩憫?yīng)(圖6和圖8)。MAP+誘導(dǎo)的血栓溶解作用與PGI2的釋放有關(guān)(圖7)，與MNA+誘導(dǎo)的血栓溶解情形相似。MNA+(30-300mg/kg)不引起低血壓。如圖9和圖10顯示，MNA+不抑制膠原誘導(dǎo)的血小板凝集作用和膠乳誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞激活作用。前一種響應(yīng)依賴于COX1-TXA2，被阿司匹林所消除，而后一種則依賴于NADPH氧化酶，被DPI或夾竹桃麻素所消除。
實(shí)施例2患者體內(nèi)抗動脈硬化作用在15名脂質(zhì)代謝障礙患者中研究MNA+的抗動脈硬化作用。
入組標(biāo)準(zhǔn)是高TG水平(≥250mg/dl)，低HDL水平(男性≤35mg/dl，女性≤45mg/dl)?；颊咂骄挲g是61.4歲(45-81歲之間)。
患者用MNA+治療2周。MNA+經(jīng)口服給藥，一日三次，餐后一個膠囊(30mg MNA+)。
在基線和治療后2周測定TC、TG、HDL的血漿水平。如果可能的話(歸因于高TG水平)在上述情況下測定LDL水平。
發(fā)現(xiàn)在基線和測定2周之間MNA+降低了TC(267.0相對于225.1mg/dl)(-15.7％)和TG(472.6相對于249.9mg/dl)(-47.1％)的水平。在2周的治療后還觀察到HDL水平增高(39.2對53.4mg/dl)(36.2％)。觀察到TG/HDL比顯著降低(13.9對5.8)。
權(quán)利要求
1.式I的吡啶鹽 其中R是NH2、CH3或N(H)CH2OH，X是藥學(xué)可接受的平衡離子，制備治療和/或預(yù)防與血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或內(nèi)皮前列環(huán)素PGI2產(chǎn)生不足有關(guān)的病癥或疾病的血管保護(hù)劑的用途。
2.如權(quán)利要求1的用途，其中所述的血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或內(nèi)皮前列環(huán)素PGI2產(chǎn)生不足伴隨著高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥或低HDL水平。
3.如權(quán)利要求1或2的用途，其中所述的病癥或疾病是動脈粥樣硬化。
4.如權(quán)利要求1或2的用途，其中所述的病癥或疾病是與動脈粥樣硬化有關(guān)的急性心血管事件特別是心臟性猝死、急性冠脈綜合征(包括不穩(wěn)定型冠心病和心肌梗塞)、需要冠狀動脈血管成形術(shù)(PCI)、冠狀主動脈旁通道手術(shù)(CABG)、任意類型的體外循環(huán)手術(shù)、缺血性中風(fēng)或末梢循環(huán)血管形成術(shù)。
5.如權(quán)利要求1或2的用途，其中所述的病癥或疾病是慢性冠心病、局部缺血性腦血管發(fā)作或者是四肢動脈粥樣硬化包括血栓閉塞性脈管炎患者的動脈粥樣硬化。
6.如權(quán)利要求1的用途，其中所述的病癥或疾病選自動脈粥樣硬化危險因素組，包括以下高膽固醇血癥、動脈高血壓、吸煙、高同型半胱氨酸血癥、胰島素抵抗、糖尿病、絕經(jīng)、衰老、肥胖癥、心理應(yīng)激、感染、炎癥狀態(tài)包括牙周疾病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、異體移植物血管病變或硝酸鹽耐藥性。
7.如權(quán)利要求1的用途，其中所述的病癥或疾病是血脂障礙，特別是高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥，尤其是伴有低HDL血漿水平的高膽固醇血癥或高甘油三酯血癥。
8.如權(quán)利要求1的用途，其中所述的病癥或疾病是與動脈粥樣硬化非直接相關(guān)的血栓形成，特別是與金屬人工血管(支架)移植、冠狀主動脈旁通道手術(shù)(CABG)、血液透析、靜脈血栓栓塞性疾病相關(guān)的血栓形成。
9.如權(quán)利要求1的用途，其中所述的病癥或疾病選自以下的組慢性心力衰竭、肺動脈高壓、微脈管糖尿病并發(fā)癥如糖尿病性視網(wǎng)膜病和腎病、糖尿病性神經(jīng)病變、腎病綜合征、慢性腎功能衰竭、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、囊性纖維病變、慢性阻塞性肺病(COPD)、先兆子癇/子癇、勃起機(jī)能障礙、多囊卵巢綜合征、睡眠性呼吸暫停、全身性紅斑狼瘡、鐮狀細(xì)胞性貧血、非特異性炎性腸病、胃或十二指腸潰瘍、青光眼、慢性肝病、原發(fā)性淀粉樣變性、神經(jīng)退行性疾病。
10.如權(quán)利要求9的用途，其中所述的病癥或疾病是慢性阻塞性肺病。
11.如權(quán)利要求9的用途，其中所述的病癥或疾病是慢性肝病，特別是病毒性肝炎。
12.如權(quán)利要求9的用途，其中所述的神經(jīng)退行性疾病選自血管性癡呆、阿爾茨海默氏病和帕金森氏病。
13.如權(quán)利要求9的用途，其中所述的疾病是胃或十二指腸潰瘍。
14.如權(quán)利要求1至13任一項(xiàng)的用途，其中所述的血管保護(hù)劑是口服給藥劑型。
15.如權(quán)利要求1至13任一項(xiàng)的用途，其中所述的血管保護(hù)劑是胃腸道外給藥劑型。
16.如權(quán)利要求1至13任一項(xiàng)的用途，其中所述的血管保護(hù)劑是通過吸入給藥至氣管的劑型。
17.如權(quán)利要求10的用途，其中所述的病癥或疾病是慢性阻塞性肺病，藥劑是吸入給藥劑型。
18.如權(quán)利要求1至17任一項(xiàng)的用途，其中R是CH3基團(tuán)。
19.如權(quán)利要求1至17任一項(xiàng)的用途，其中R是NH2基團(tuán)。
20.如權(quán)利要求1至17任一項(xiàng)的用途，其中R是N(H)CH2OH基團(tuán)。
21.如權(quán)利要求1或2的用途，其中所述的吡啶鹽是1-甲基煙酰胺鹽，所述的病癥或疾病是高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥或低HDL水平。
22.一種治療或預(yù)防與血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和內(nèi)皮PGI2產(chǎn)生不足有關(guān)的病癥或疾病的方法，包括給予有需要的受試者治療有效量的式I吡啶鹽 其中R是NH2、CH3或N(H)CH2OH，X是藥學(xué)可接受的平衡離子。
23.如權(quán)利要求22的方法，其中所述的血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或內(nèi)皮PGI2產(chǎn)生不足伴隨著高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥或低HDL水平。
24.如權(quán)利要求22或23的方法，其中所述的病癥或疾病是動脈粥樣硬化。
25.如權(quán)利要求22或23的方法，其中所述的狀況或疾病是與動脈粥樣硬化有關(guān)的急性心血管事件特別是心臟性猝死、急性冠脈綜合征(包括不穩(wěn)定型冠心病和心肌梗塞)、需要冠狀動脈血管成形術(shù)(PCI)、冠狀主動脈旁通道手術(shù)(CABG)、缺血性中風(fēng)或末梢循環(huán)血管形成術(shù)。
26.如權(quán)利要求22或23的方法，其中所述的病癥或疾病是慢性冠心病、局部缺血性腦血管發(fā)作或者是四肢動脈粥樣硬化包括血栓閉塞性脈管炎患者的動脈粥樣硬化。
27.如權(quán)利要求22或23的方法，其中所述的病癥或疾病選自動脈粥樣硬化危險因素組，包括以下高膽固醇血癥、動脈高血壓、吸煙、高同型半胱氨酸血癥、胰島素抵抗、糖尿病、絕經(jīng)、衰老、肥胖癥、心理應(yīng)激、感染或炎癥狀態(tài)包括牙周疾病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、異體移植物血管病變或硝酸鹽耐藥性。
28.如權(quán)利要求22或23的方法，其中所述的病癥或疾病是血脂障礙，特別是高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥，尤其是伴有低HDL血漿水平的高膽固醇血癥或高甘油三酯血癥。
29.如權(quán)利要求22或23的方法，所述病癥或疾病是與動脈粥樣硬化非直接相關(guān)的血栓形成，特別是與金屬人工血管(支架)移植、冠狀主動脈旁通道手術(shù)(CABG)、任意類型的體外循環(huán)手術(shù)、血液透析、靜脈血栓栓塞性疾病相關(guān)的血栓形成。
30.如權(quán)利要求22或23的方法，其中所述的病癥或疾病選自以下的組慢性心力衰竭、肺動脈高壓、微脈管糖尿病并發(fā)癥如糖尿病性視網(wǎng)膜病和腎病、糖尿病性神經(jīng)病變、腎病綜合征、慢性腎功能衰竭、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、囊性纖維病變、慢性阻塞性肺病(COPD)、先兆子癇/子癇、勃起機(jī)能障礙、多囊卵巢綜合征、睡眠性呼吸暫停、全身性紅斑狼瘡、鐮狀細(xì)胞性貧血、非特異性炎性腸病、胃或十二指腸潰瘍、青光眼、慢性肝病、原發(fā)性淀粉樣變性、神經(jīng)退行性疾病。
31.如權(quán)利要求30的方法，其中所述的神經(jīng)退行性疾病選自血管性癡呆、阿爾茨海默氏病和帕金森氏病。
32.如權(quán)利要求30的方法，其中所述的疾病是胃或十二指腸潰瘍。
33.如權(quán)利要求30的方法，其中所述的病癥或疾病是慢性阻塞性肺病。
34.如權(quán)利要求30的方法，其中所述的病癥或疾病是慢性肝病，特別是病毒性肝炎。
35.如權(quán)利要求22或23的方法，其中式I的吡啶鹽通過口服給藥。
36.如權(quán)利要求22或23的方法，其中式I的吡啶鹽經(jīng)胃腸道外給藥。
37.如權(quán)利要求22或23的方法，其中式I的吡啶鹽通過吸入給藥至氣管。
38.如權(quán)利要求22或23的方法，其中所述的病癥或疾病是慢性阻塞性肺病，藥劑為吸入給藥劑型。
39.如權(quán)利要求22或23的方法，其中R是CH3基團(tuán)。
40.如權(quán)利要求22或23的方法，其中R是NH2基團(tuán)。
41.如權(quán)利要求22或23的方法，其中R是N(H)CH2OH基團(tuán)。
42.如權(quán)利要求22或23的方法，其中吡啶衍生物與心血管藥一起給藥。
43.如權(quán)利要求22或23的方法，其中所述的吡啶鹽是1-甲基煙酰胺鹽，所述的病癥或疾病是高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥或低HDL水平。
44.提高哺乳動物前列環(huán)素水平的方法，包括口服給藥有效量的式I吡啶鹽 其中R是NH2、CH3或N(H)CH2OH，X是藥學(xué)可接受的平衡離子。
45.式I吡啶鹽 其中R是NH2、CH3或N(H)CH2OH，X是身體消耗可接受的平衡離子，在口服食品補(bǔ)充劑中的用途。
46.式I吡啶鹽 其中R是NH2，CH3或N(H)CH2OH，X是身體消耗可接受的平衡離子，制備用于哺乳動物與血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或內(nèi)皮前列環(huán)素(PGI2)產(chǎn)生不足有關(guān)的狀態(tài)或疾病下血管保護(hù)的營養(yǎng)制劑的用途。
47.如權(quán)利要求46的用途，其中所述的血管內(nèi)皮機(jī)能不良、氧化應(yīng)激和/或內(nèi)皮前列環(huán)素(PGI2)產(chǎn)生不足伴隨著高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥或低HDL水平。
48.如權(quán)利要求46或47的用途，其中所述的病癥或疾病是慢性冠心病、局部缺血性腦血管發(fā)作或者是四肢動脈粥樣硬化包括血栓閉塞性脈管炎患者的動脈粥樣硬化。
49.如權(quán)利要求46或47的用途，其中所述的病癥或疾病選自動脈粥樣硬化危險因素組，包括以下高膽固醇血癥、動脈高血壓、吸煙、高同型半胱氨酸血癥、胰島素抵抗、糖尿病、絕經(jīng)、衰老、肥胖癥、心理應(yīng)激、感染、炎癥狀態(tài)包括牙周疾病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、異體移植物血管病變或硝酸鹽耐藥性。
50.如權(quán)利要求46或47的用途，其中所述的病癥或疾病是血脂障礙，特別是高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥，尤其是伴有低HDL血漿水平的高膽固醇血癥或高甘油三酯血癥。
51.如權(quán)利要求46或47的用途，所述病癥或疾病是與動脈粥樣硬化非直接相關(guān)的血栓形成，特別是與金屬人工血管(支架)移植、冠狀主動脈旁通道手術(shù)(CABG)、任意類型的體外循環(huán)手術(shù)、血液透析、靜脈血栓栓塞性疾病相關(guān)的血栓形成。
52.如權(quán)利要求46的用途，其中內(nèi)皮前列環(huán)素產(chǎn)生不足與衰老有關(guān)。
53.如權(quán)利要求46至52的用途，其中R是CH3基團(tuán)。
54.如權(quán)利要求46至52的用途，其中R是NH2基團(tuán)。
55.如權(quán)利要求46至52的用途，其中R是N(H)CH2OH基團(tuán)。
56.如權(quán)利要求46至52的用途，其中所述的吡啶鹽是1-甲基煙酰胺鹽，所述的病癥或疾病是高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥或低HDL水平。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I的吡啶鎓鹽其中R是NH
文檔編號A61P3/10GK1905875SQ200580001712
公開日2007年1月31日 申請日期2005年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月12日
發(fā)明者J·戈比克, S·馳羅匹克 申請人:法米納有限公司