專利名稱：用于治療自身免疫病和移植排斥反應(yīng)的蛋白激酶c抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白激酶C抑制劑的新用途。
特別是，本發(fā)明涉及式I、II、III或IV的蛋白激酶C抑制劑及其可藥用鹽、水合物或溶劑化物的新用途。
式I的蛋白激酶C抑制劑如下 其中R1和R’1各自獨(dú)立地是氫、烷基、鹵烷基、鏈烯基、芳烷基、烷氧基烷基、羥基烷基、氨基烷基、單烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、酰氨基烷基、酰氧基烷基、氰基烷基、脒基烷基、羧基烷基、烷氧基羰基烷基、氨基羰基烷基或式(a)、(b)或(c)的基團(tuán)-(CH2)n-W-Het(a) 其中Het表示雜環(huán)基團(tuán)；W表示NH、S或鍵；T表示NH或S；V表示O、S、NH或NCN；A表示烷硫基(alkylthio)、氨基、單烷基氨基或二烷基氨基；Ar表示芳基；R2和R’2各自獨(dú)立地是氫、烷基、烷氧基烷基、羥基烷基、C1-C3烷硫基、S(O)C1-C3烷基、CF3；或R1和R2一起形成-(CH2)r-X-CH2-，其中r是1、2或3，并且X是CHR8或NR8，其中R8是(CH2)sR9，其中R9是氫、羥基、烷氧基、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、疊氮基、酰氨基、烷氧基羰基、氰基、脒基或氨基羰基，并且s是0、1、2或3；R3是氫或CH3CO；R4、R’4、R5、R’5、R6、R’6、R7和R’7各自獨(dú)立地是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基、-COO(C1-C3烷基)、CF3、硝基、氨基、乙酰氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、C1-C3烷硫基或S(O)C1-C3烷基；并且n是1、2、3、4、5或6。
式II的蛋白激酶C抑制劑如下 其中R1是式(d)、(e)或(f)的基團(tuán) 其中p和q各自獨(dú)立地是1、2、3或4；s是0、1、2或3；t是1或2；u是0或1；并且R12是氫、烷基、鹵烷基、環(huán)烷基、乙?；?、芳基、-CH(芳基)2、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、胍基、-C(＝N(烷氧基羰基))NH(烷氧基羰基)、脒基、羥基、羧基、烷氧基羰基或雜環(huán)基；R’1是氫、C1-4烷基、氨基烷基、單烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；R2和R’2各自獨(dú)立地是氫、烷基、烷氧基烷基、羥基烷基、C1-C3烷硫基、S(O)C1-C3烷基、CF3；R3是氫或CH3CO-；并且R4、R’4、R5、R’5、R5、R’6、R7和R’7各自獨(dú)立地是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基、-COO(C1-C3烷基)、CF3、硝基、氨基、乙酰氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、C1-C3烷硫基或S(O)C1-C3烷基。
式III的蛋白激酶C抑制劑如下 其中R’1是氫、C1-C4烷基、氨基烷基、單烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；R’2是氫、烷基、烷氧基烷基、羥基烷基、C1-C3烷硫基、S(O)C1-C3烷基、CF3；R3是氫或CH3CO-；R4、R’4、R5、R’5、R6、R’6、R7和R’7各自獨(dú)立地是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基、-COO(C1-C3烷基)、CF3、硝基、氨基、乙酰氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、C1-C3烷硫基或S(O)C1-C3烷基；X是CR8R9，其中R8是(CH2)sR10，其中R9是(CH2)sR11，R10和R11各自獨(dú)立地是羥基、烷氧基、羧基、酰氧基、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、疊氮基、酰氨基、烷氧基羰基、氰基、脒基或氨基羰基，并且s是0、1、2或3；并且r是1、2或3。
式IV的蛋白激酶C抑制劑如下 其中R1是烷基單糖(alkylglycose)殘基或(g)或(h)的基團(tuán) 其中n是1、2、3、4、5或6；R’1是氫、C1-C4烷基、環(huán)丙基甲基、氨基烷基、單烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；R2和R’2各自獨(dú)立地是氫、烷基、烷氧基烷基、羥基烷基、C1-C3烷硫基、S(O)C1-C3烷基、CF3；R3是氫或CH3CO-；并且R4、R，4、R5、R，5、R6、R’6、R7和R’7各自獨(dú)立地是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基、-COO(C1-C3烷基)、CF3、硝基、氨基、乙酰氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、C1-C3烷硫基或S(O)C1-C3烷基。
烷基，單獨(dú)或聯(lián)合，可以是包含1-7個(gè)碳原子，優(yōu)選為1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基基團(tuán)，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基和戊基?！癈1-C3烷基”是限制到1-4個(gè)碳原子的烷基。鏈烯基可以是2-7個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴，其包含一個(gè)或多個(gè)雙鍵，優(yōu)選為一個(gè)或兩個(gè)雙鍵。鏈烯基的實(shí)例包括亞乙烯基、1，3-亞丙烯基、1，3-丁間二烯基和1，3，5-己三烯基。
環(huán)烷基，單獨(dú)或聯(lián)合，可以是3-7個(gè)碳的環(huán)烷基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。
烷氧基，單獨(dú)或聯(lián)合，可以是通過(guò)-O-鍵共價(jià)結(jié)合的烷基。烷氧基的實(shí)例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基和叔丁氧基。烷氧基烷基可以是如CH3(CH2)-O-(CH2)m，可以是如叔丁氧基羰基或BOC。
鹵烷基可以是具有一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選為1-3個(gè)鹵原子的烷基，如CH2Cl、CF3、CH2CF3、CH2(CF2)2CF3以及類似基團(tuán)。
酰氨基或酰氨基烷基基團(tuán)的?；糠謥?lái)源于含有最多7個(gè)碳原子，優(yōu)選為最多4個(gè)碳原子的鏈烷酸，如乙?；⒈；蚨□；?，或來(lái)源于芳香羧酸，如苯甲酰基。酰氧基是一個(gè)通過(guò)-O-鍵結(jié)合的?；?，如乙酰氧基、CH3C(＝O)O-。酰氨基是如CH3(C＝O)NH-(乙酰氨基)。同樣，酰氨基烷基是CH3(C＝O)NH(CH2)m-。
芳基，單獨(dú)或聯(lián)合，可以是未取代的苯基或含有一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選為1-3個(gè)取代基的苯基，上述取代基獨(dú)立地選自鹵素、烷基、羥基、芐氧基、烷氧基、鹵烷基、硝基、氨基、酰氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；颓杌?。芳烷基優(yōu)選為芐基。
鹵素可以是氟、氯、溴或碘。
“Het”或“雜環(huán)基”表示的雜環(huán)基團(tuán)可以是穩(wěn)定的、飽和的、部分未飽和的或芳香5-或6-元雜環(huán)基團(tuán)。雜環(huán)的環(huán)由碳原子和1-3個(gè)獨(dú)立地選自氮、氧和硫的雜原子組成。雜環(huán)基團(tuán)可以任選地被1-3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、烷基、羥基、烷氧基、鹵烷基、硝基、氨基、酰氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、烷基亞磺酰基和烷基磺?；娜〈〈?，或當(dāng)雜環(huán)基團(tuán)是芳香的含氮雜環(huán)基團(tuán)時(shí)，氮原子可以帶有氧化物基團(tuán)。這種雜環(huán)基團(tuán)的實(shí)例包括咪唑基、咪唑啉基、噻唑啉基、吡啶基、吲哚基、呋喃基和嘧啶基。
“烷基單糖殘基”可以是在C-1位通過(guò)C2-C4烷基與吲哚基連接的單糖部分。包含于烷基單糖殘基中的單糖基是天然的或非天然的5或6碳糖，優(yōu)選為選自阿洛糖基、阿卓糖基、葡糖基、甘露糖基、古洛糖基、艾杜糖基、半乳糖基、塔羅糖基、阿拉伯糖基、木糖基、來(lái)蘇糖基、鼠李糖基、核糖基、脫氧呋喃糖基、脫氧吡喃糖基和脫氧核糖基。單糖可以是疊氮基取代的，O-乙?；?，O-甲基化的，氨基、單或二烷基氨基取代的或酰氨基取代的。如，烷基單糖殘基包括 式I-IV化合物可以以游離形式或鹽形式，例如，與如有機(jī)或無(wú)機(jī)酸的加成鹽存在，如鹽酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、甲磺酸鹽、檸檬酸鹽或酒石酸鹽。根據(jù)本發(fā)明，游離形式或鹽形式的式I-IV化合物可以以水合物或溶劑化物形式、無(wú)定形或晶體形式使用。
特別優(yōu)選的蛋白激酶C抑制劑是式Ia、Ib、IIa和IIIa化合物或它們的鹽。
式Ia化合物如下 其中R1式氫、氨基烷基、單烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；R’1是氫、C1-4烷基、氨基烷基、單烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；并且R2是氫或甲基。
式Ib化合物如下
其中R’1是氫或C1-C4烷基；X是CR8R9或NR8，其中R8是(CH2)sR10，其中R9是(CH2)sR11R10和R11各自獨(dú)立地是氫、羥基、氨基、單烷基氨基或二烷基氨基，并且s是1；并且r是1或2。
式IIa化合物如下 其中R1是 其中或者s’是0并且R’12是氫或C1-4烷基；或者s’是1并且R’12是吡啶基，優(yōu)選為2-吡啶基，并且R’1是氫、C1-4烷基或；式IIIa化合物如下
其中R’1是氫、烷基、氨基烷基、單烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；X是CR8R9或NR8其中R8是(CH2)sR10，其中R9是(CH2)sR11R10和R11各自獨(dú)立地是羥基、羧基、烷氧基羰基、氨基、單烷基氨基或二烷基氨基，并且s是0或1；并且r是1或2。
更優(yōu)選的是游離形式或鹽形式(如鹽酸鹽)的3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-{(1-吡啶-2-基甲基)-哌啶-4-基}-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮，也稱為L(zhǎng)Y 317615(下文中的化合物A)，和3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮(下文中的化合物B)。
式I、II、III和IV化合物可以如本領(lǐng)域中公知的，如在US 5,545,636中描述的合成。
基于觀察到的抑制蛋白激酶Cβ-1和β-2同工酶(如US 5,545,636中描述的)的活性，已發(fā)現(xiàn)式I、II、III或IV的蛋白激酶C抑制劑及其可藥用鹽、水合物或溶劑化物可有效治療糖尿病相關(guān)疾病及其并發(fā)癥、以及與β-1和β-2同工酶升高相關(guān)的疾病，如局部缺血、炎癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙、心血管疾病、皮膚病、阿爾茨海默病和癌癥。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式I、II、III或IV，如式Ia、Ib、IIa和IIIa的蛋白激酶C抑制劑及其可藥用鹽、水合物或溶劑化物可用于治療和預(yù)防器官、組織或細(xì)胞移植排斥反應(yīng)，如可用于治療實(shí)體器官或組織，如心臟、肺、心肺聯(lián)合(combined heart-lung)、肝、腎、胰腺、皮膚或角膜移植，或細(xì)胞(如干細(xì)胞)或產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞(如胰島細(xì)胞)的接受者。它們也說(shuō)明可預(yù)防移植物抗宿主疾病，如下文的骨髓移植。
根據(jù)本發(fā)明的特殊發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供1.1在需要的受試者中治療器官、組織或細(xì)胞移植排斥反應(yīng)，如心臟、肺、心肺聯(lián)合、肝、腎、胰腺、皮膚或角膜移植排斥反應(yīng)，以及預(yù)防移植物抗宿主疾病的方法，該方法包括對(duì)該受試者施用治療有效量的式I、II、III或IV，如式Ia、Ib、IIa和IIIa的蛋白激酶C抑制劑，優(yōu)選為化合物A或B，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物。
另外，現(xiàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式I、II、III或IV，如式Ia、Ib、IIa和IIIa的蛋白激酶C抑制劑及其可藥用鹽或溶劑化物可用于治療和預(yù)防自身免疫病，如結(jié)節(jié)病、纖維化肺、自發(fā)間質(zhì)性肺炎、阻塞性氣道疾病，包括如哮喘、內(nèi)源性哮喘、外源性哮喘、粉塵性哮喘、特別是慢性或頑固性哮喘(例如晚期哮喘和氣道高反應(yīng))的病癥、支氣管炎，包括支氣管哮喘、嬰兒哮喘、變應(yīng)性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎病綜合征狼瘡、橋本甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、重癥肌無(wú)力、眼色素層炎、腎病綜合征、類固醇依賴性和類固醇抵抗性腎病、掌跖膿皰病、過(guò)敏性腦脊髓炎、腎小球腎炎、銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、變應(yīng)性濕疹(變應(yīng)性皮炎)、接觸性皮炎和其他的濕疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔癬、天皰瘡、大皰性類天皰瘡、大皰性表皮松懈、蕁麻疹、血管性水腫、血管炎、紅斑、皮膚嗜酸性粒細(xì)胞增多、痤瘡、斑形脫發(fā)、嗜酸性粒細(xì)胞增多性肌膜炎、動(dòng)脈粥樣硬化、結(jié)膜炎、角膜結(jié)膜炎、角膜炎、春季結(jié)膜炎、伴有貝赫切特病的眼色素層炎、皰疹性角膜炎、圓錐形角膜、角膜上皮營(yíng)養(yǎng)不良、角膜白斑、眼天皰瘡、莫倫潰瘍、鞏膜炎、嚴(yán)重的眼內(nèi)炎癥、粘膜或如白三烯B4介導(dǎo)的疾病的血管炎癥、胃潰瘍、局部缺血疾病和血栓形成引起的血管損傷、缺血性腸病、炎性腸病(例如克隆病和潰瘍性結(jié)腸炎)、壞死性小腸結(jié)腸炎、腎病，包括間質(zhì)性腎炎、古德帕斯丘綜合征、溶血性尿毒癥綜合征和糖尿病腎病、選自多發(fā)性肌炎、吉-巴綜合征、梅尼埃病和神經(jīng)根病的神經(jīng)疾病、膠原病包括，硬皮病、韋格納肉芽腫病和Sogren綜合征、慢性自身免疫肝病包括自身免疫肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化和硬化性膽管炎、部分肝切除術(shù)、急性肝壞死(如由中毒、病毒性肝炎、休克或缺氧引起的壞死)、乙型病毒性肝炎、非甲/非乙型肝炎和肝硬化、爆發(fā)型肝炎、膿皰性銀屑病、貝赫切特病、慢性活動(dòng)性肝炎、埃文斯綜合征、花粉癥、特發(fā)性甲狀旁腺功能減退、艾迪生病、自身免疫萎縮性胃炎、類狼瘡肝炎、腎小管間質(zhì)腎炎、膜腎炎、肌萎縮性側(cè)索硬化或風(fēng)濕熱、特別是炎性腸病(IBD)，如克隆病和潰瘍性結(jié)腸炎；肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)；多發(fā)性硬化；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或丙型肝炎。
因此，本發(fā)明提供1.2在需要的受試者中治療或預(yù)防如上所述的自身免疫病的方法，該方法包括對(duì)該受試者施用治療有效量的式I、II、III或IV，如式Ia、Ib、IIa和IIIa的蛋白激酶C抑制劑，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物。
在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“治療(teatment或treat)”指的是保護(hù)性或預(yù)防性治療以及有療效的或減輕疾病的治療，包括治療處于感染疾病危險(xiǎn)中或疑似已經(jīng)感染疾病的患者以及患病或已經(jīng)被診斷為患有疾病或醫(yī)學(xué)病癥的患者。
在一系列其他具體或選擇性的實(shí)施方案中，本發(fā)明也提供2.式I、II、III或IV的蛋白激酶C抑制劑，優(yōu)選為化合物A或B，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物在如上定義的方法中作為免疫抑制劑或免疫調(diào)制劑的用途。
3.式I、II、III或IV的蛋白激酶C抑制劑，優(yōu)選為化合物A或B，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物在如上定義的方法中制備作為免疫抑制劑或免疫調(diào)制劑藥物組合物中的用途。
4.在如上定義的方法中藥物組合物作為免疫抑制劑或免疫調(diào)制劑的用途，該藥物組合物包含式I、II、III或IV的蛋白激酶C抑制劑，優(yōu)選為化合物A或B，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物以及一種或多種可藥用的稀釋劑或載體。
本發(fā)明的化合物在治療和/或預(yù)防如以上所述的疾病或病癥中的用途可在如以下描述的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物或臨床試驗(yàn)中證明。
體外MLR
如T.Meo在“Immunological Methods”，L. Lefkovits和B.Peris編輯，Academic Press，N.Y.第227-239頁(yè)(1979)中描述的鼠動(dòng)物模型MLR，用于證明本發(fā)明的方法中使用的化合物的免疫抑制作用。Balb/c小鼠(雌性，8-10周)的脾細(xì)胞(0.5×106)與0.5×106照射(2000拉德)或絲裂霉素C處理的CBA小鼠(雌性，8-10周)脾細(xì)胞共同培養(yǎng)5天。照射的異源細(xì)胞誘導(dǎo)Balb/c脾細(xì)胞的增殖應(yīng)答，該應(yīng)答可以通過(guò)摻入到DNA中的標(biāo)記前體測(cè)定。因?yàn)榇碳の锛?xì)胞被照射(或絲裂霉素C處理)，所以它們對(duì)Balb/c細(xì)胞未作出增殖應(yīng)答而是保持其抗原性。測(cè)定不同稀釋度的化合物對(duì)Balb/c細(xì)胞的抗增殖作用。并且計(jì)算引起50％細(xì)胞增殖抑制的濃度(IC50)。例如化合物B的IC50為195nM。
體外PKC試驗(yàn)根據(jù)以下方法測(cè)定本發(fā)明化合物對(duì)PKC的活性。試驗(yàn)在白色透明底的具有非結(jié)合表面的384孔微量滴定板上進(jìn)行。反應(yīng)混合物(25μL)包含在pH7.4的20mM Tris-HCl緩沖液中的1.5μM的十三肽受體底物(用Ala→Ser替換模仿PKC α假底物序列)、10μM33p-ATP、10mMMg(NO3)2、0.2mM CaCl2、蛋白濃度為25-400ng/mL(取決于所使用的同種型)的PKC、最終脂質(zhì)濃度為0.5mM的脂囊泡(包含30mol％磷脂酰絲氨酸、5mol％DAG和65mol％磷脂酰膽堿)及0.1％BSA。溫育在室溫下進(jìn)行60分鐘。反應(yīng)通過(guò)加入50μL終止混合物(100mM EDTA、200μM ATP、0.1％ Triton X-100磷酸緩沖鹽w/o Ca、Mg中的0.375mg/孔鏈霉親合素包被的SPA珠)終止。在室溫下溫育10分鐘后，懸液以300g旋轉(zhuǎn)沉降10分鐘。摻入的放射性在Trilux計(jì)數(shù)器中測(cè)定1分鐘。IC50測(cè)定是通過(guò)用1-1000μM范圍內(nèi)的濃度溫育系列稀釋的抑制劑的常規(guī)原理進(jìn)行。IC50值通過(guò)用XL fit軟件擬合的曲線圖譜計(jì)算。
在本試驗(yàn)中，本發(fā)明的化合物，如式IIa化合物，抑制PKC的IC50≤1μM，優(yōu)選為≤10nM。例如，化合物B抑制PKCα的IC50為3.0nM，PKCβ的IC50為2.0nM，PKCδ的IC50為2.0nM，PKCε的IC50為2.0nM。
體內(nèi)大鼠心臟移植聯(lián)合使用的種類雄性Lewis(RT1單元型)和DA(RT1單元型)。動(dòng)物用可吸入的異熒烷(isofiuorane)麻醉。接下來(lái)供體大鼠通過(guò)腹下腔靜脈和主動(dòng)脈同時(shí)放血進(jìn)行肝素化，打開(kāi)胸腔并使心臟迅速冷卻。結(jié)扎主動(dòng)脈并將遠(yuǎn)端分為第一分支，且頭臂動(dòng)脈在第一杈處分開(kāi)。左側(cè)肺動(dòng)脈結(jié)扎并分開(kāi)，右側(cè)分開(kāi)但保持開(kāi)放。其他所有的血管被自由剝離、結(jié)扎和分開(kāi)并將供體心臟移至冰冷的生理鹽水中。
受體通過(guò)下腎腹主動(dòng)脈和腔靜脈剖分和橫斷鉗閉術(shù)制備。移植物用端邊吻合進(jìn)行移植，在供體頭臂動(dòng)脈和受體主動(dòng)脈以及供體右側(cè)肺動(dòng)脈和受體腔靜脈之間使用10/0單絲縫合線。移去鉗子，移植物束縛在后腹腔，腹腔內(nèi)容物用溫生理鹽水洗滌并且將動(dòng)物縫合，使其在加熱燈下恢復(fù)。移植物的存活通過(guò)每日觸診腹壁的供體心臟跳動(dòng)來(lái)監(jiān)控。當(dāng)心跳停止時(shí)認(rèn)為排斥完成。在用式I、II、III或IV化合物或其可藥用鹽或溶劑化物以日劑量10-30mg/kg，每日兩次口服給藥治療的動(dòng)物中獲得了增加的移植物存活。在此模型中，當(dāng)每日兩次施用劑量為30mg/kg的式A化合物時(shí)，獲得了移植物存活延長(zhǎng)14、25、26天。
體內(nèi)移植物抗宿主模型Wistar/F大鼠脾細(xì)胞(2×107)皮下注射到(Wistar/F×Fischer344)F1雜種鼠的右側(cè)后足墊內(nèi)。左足未處理。動(dòng)物連續(xù)4天(0-3)用試驗(yàn)化合物治療。腘淋巴結(jié)在第7天消失，并確定兩個(gè)相應(yīng)的淋巴結(jié)之間的重量差異。比較試驗(yàn)組淋巴結(jié)重量差異與未用試驗(yàn)化合物治療的動(dòng)物組的相應(yīng)的淋巴結(jié)重量差異，結(jié)果表示為淋巴結(jié)增大的抑制(以百分比計(jì))。在此試驗(yàn)中，當(dāng)每日兩次施用劑量為30mg/kg的式A化合物時(shí)，獲得了60-80％，優(yōu)選為70-80％的抑制。
體內(nèi)治療多發(fā)性硬化SJL/J小鼠慢性進(jìn)行性實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎(EAE)模型免疫在第0天，雌性SJL/J小鼠用200μL接種物免疫(皮下脅腹注射)，該接種物包含乳化于完全弗氏佐劑(CFA)中的500μg小牛髓鞘堿性蛋白(MBP)。在第9天，小鼠通過(guò)第二次MBP注射增強(qiáng)并且另外皮下輔助注射200ng百日咳桿菌(B.pertussis)毒素。在第11天進(jìn)行最后的Pertussis注射。
大多數(shù)MBP免疫小鼠在第21天出現(xiàn)嚴(yán)重的EAE發(fā)作。接下來(lái)恢復(fù)期開(kāi)始于第25天左右，在恢復(fù)期中小鼠保持約20天無(wú)癥狀。然后，在笫45-47天，大約50％的動(dòng)物進(jìn)入疾病的發(fā)展期。因此，除非另行規(guī)定，用試驗(yàn)化合物的治療開(kāi)始于第21天(疾病完全明確時(shí))并且連續(xù)到第70天。重組小鼠β干擾素(INFβ Calbiochem/Biosciences)溶解于生理鹽水中并且每周腹膜注射3次。本發(fā)明的化合物，如化合物A，通過(guò)管飼法每周口服給藥5次。載體對(duì)照組的小鼠用MBP免疫并用水處理。
每個(gè)試驗(yàn)組由10只小鼠組成，每天檢查這些小鼠的臨床EAE癥狀。同時(shí)記錄疾病發(fā)生率和EAE發(fā)作日。用0-3的等級(jí)評(píng)價(jià)EAE的臨床等級(jí)。任何在開(kāi)始藥物治療后發(fā)生的疾病相關(guān)死亡記錄為最高分?jǐn)?shù)3。
實(shí)施本發(fā)明的方法需要的日劑量將不同，其取決于如所使用的化合物、宿主、給藥方式和治療疾病的嚴(yán)重程度。作為單劑量或分劑量的日劑量范圍優(yōu)選為大約1-1000mg活性成分。
式I、II、III或IV，如式Ia、Ib、IIa或IIIa化合物可以以如上所述的游離形式或可藥用鹽形式施用。該鹽可以通過(guò)常規(guī)的方法制備并且與游離化合物表現(xiàn)同樣的活性順序。
式I、II、III或IV，如式Ia、Ib、IIa或IIIa化合物，優(yōu)選為化合物A或化合物B，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物可以以單獨(dú)活性成分施用或與在免疫調(diào)節(jié)方面(如用于治療或預(yù)防異源或異種移植物急性或慢性排斥反應(yīng)或自身免疫病)的其他藥物聯(lián)合施用。例如，它們可以與下列藥物聯(lián)合使用鈣依賴磷酸酶抑制劑，如環(huán)孢菌素A、ISA Tx247、FK506、ABT-281、ASM 981；mTOR抑制劑，如瑞帕霉素、40-O-(2-羥乙基)-瑞帕霉素、CCI779、ABT578或rapalog，如AP23573、AP23464、AP23675、AP23841、TAFA-93、biolimus 7或biolimus 9等等；糖皮質(zhì)激素；環(huán)磷酰胺；硫唑嘌呤(azathioprene)；甲氨蝶呤；S1P受體激動(dòng)劑，如FTY 720或其類似物；來(lái)氟洛米或其類似物；咪唑立賓；霉酚酸或其鹽，如鈉鹽；霉酸酯；15-脫氧斯潘格寧(deoxyspergualine)或其類似物；免疫抑制劑單克隆抗體，如白細(xì)胞受體的單克隆抗體，如MHC、CD2、CD3、CD4、CD11a/CD18、CD7、CD25、CD27、B7、CD40、CD45、CD58、CD137、ICOS、CD150(SLAM)、OX40、4-1BB或它們的配體，如CD154；或其他的免疫調(diào)節(jié)化合物，如具有至少一部分CTLA4細(xì)胞外區(qū)域的重組結(jié)合分子或其突變體，如至少CTLA4的細(xì)胞外部分或其突變體與非CTLA4蛋白序列如CTLA4Ig(如指定的ATCC68629)或其突變體，如LEA29Y連接，或其他的粘附分子抑制劑，如mAbs或低分子量抑制劑包括LFA-1拮抗劑、選擇素拮抗劑和VLA-4拮抗劑。
根據(jù)前述本發(fā)明在另一方面提供5.上述定義的方法，包括如同時(shí)或相繼聯(lián)合施用治療有效量的式I、II、III或IV，如式Ia、Ib、IIa或IIIa的蛋白激酶C抑制劑，如化合物A或化合物B，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物，以及第二種藥物，所述的第二種藥物是如上所述的免疫抑制劑或免疫調(diào)制劑藥物。
6.治療聯(lián)合，如藥盒，包含a)式I、II、III或IV，如式Ia、Ib、IIa或IIIa的蛋白激酶C抑制劑，如化合物A或化合物B，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物，和b)至少一種選自免疫抑制劑和免疫調(diào)制劑藥物的第二種藥物。組分a)和組分b)可以同時(shí)或相繼使用。該藥盒可以包含給藥說(shuō)明書(shū)。
如上面說(shuō)明的，當(dāng)式I、II、III或IV，如式Ia、Ib、IIa或IIIa的蛋白激酶C抑制劑，或其可藥用鹽或溶劑化物與其他的免疫抑制劑或免疫調(diào)制劑藥物聯(lián)合施用，如用于預(yù)防或治療上述急性或慢性移植排斥反應(yīng)或自身免疫病時(shí)，聯(lián)合施用的免疫抑制劑或免疫調(diào)制劑化合物的劑量自然將不同，其取決于使用的聯(lián)合藥物的類型，如其是類固醇還是環(huán)孢菌素、應(yīng)用的具體藥物、治療的疾病等。
優(yōu)選化合物A和化合物B，特別是應(yīng)用于治療或預(yù)防移植物排斥反應(yīng)和預(yù)防移植物抗宿主疾病。
權(quán)利要求
1.式I、II、III或IV的蛋白激酶C抑制劑或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物在制備用于治療和預(yù)防自身免疫病的藥物組合物中的用途，其中式I化合物是 其中R1和R’1各自獨(dú)立地是氫、烷基、鹵烷基、鏈烯基、芳烷基、烷氧基烷基、羥基烷基、氨基烷基、單烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、酰氨基烷基、酰氧基烷基、氰基烷基、脒基烷基、羧基烷基、烷氧基羰基烷基、氨基羰基烷基或式(a)、(b)或(c)的基團(tuán) 其中Het表示雜環(huán)基團(tuán)；W表示NH、S或鍵；T表示NH或S；V表示O、S、NH或NCN；A表示烷硫基、氨基、單烷基氨基或二烷基氨基；Ar表示芳基；R2和R’2各自獨(dú)立地是氫、烷基、烷氧基烷基、羥基烷基、C1-C3烷硫基、S(O)C1-C3烷基、CF3；或R1和R2一起形成-(CH2)r-X-CH2-，其中r是1、2或3，并且X是CHR8或NR8，其中R8是(CH2)sR9，其中R9是氫、羥基、烷氧基、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、疊氮基、酰氨基、烷氧基羰基、氰基、脒基或氨基羰基，并且s是0、1、2或3；R3是氫或CH3CO；R4、R’4、R5、R’5、R6、R’6、R7和R’7各自獨(dú)立地是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基、-COO(C1-C3烷基)、CF3、硝基、氨基、乙酰氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、C1-C3烷硫基或S(O)C1-C3烷基；并且n是1、2、3、4、5或6；并且式II化合物是 其中R1是式(d)、(e)或(f)的基團(tuán) 其中p和q各自獨(dú)立地是1、2、3或4；s是0、1、2或3；t是1或2；u是0或1；且R12是氫、烷基、鹵烷基、環(huán)烷基、乙?；⒎蓟?、-CH(芳基)2、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、胍基、-C(＝N(烷氧基羰基))NH(烷氧基羰基)、脒基、羥基、羧基、烷氧基羰基或雜環(huán)基；R’1是氫、C1-4烷基、氨基烷基、單烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；R2和R’2各自獨(dú)立地是氫、烷基、烷氧基烷基、羥基烷基、C1-C3烷硫基、S(O)C1-C3烷基、CF3；R3是氫或CH3CO-；且R4、R’4、R5、R’5、R6、R’6、R7和R’7各自獨(dú)立地是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基、-COO(C1-C3烷基)、CF3、硝基、氨基、乙酰氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、C1-C3烷硫基或S(O)C1-C3烷基；并且式III化合物是 其中R’1是氫、C1-C4烷基、氨基烷基、單烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；R’2是氫、烷基、烷氧基烷基、羥基烷基、C1-C3烷硫基、S(O)C1-C3烷基、CF3；R3是氫或CH3CO-；R4、R’4、R5、R’5、R6、R’6、R7和R’7各自獨(dú)立地是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基、-COO(C1-C3烷基)、CF3、硝基、氨基、乙酰氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、C1-C3烷硫基或S(O)C1-C3烷基；X是CR8R9，其中R8是(CH2)sR10，其中R9是(CH2)sR11，R10和R11各自獨(dú)立地是羥基、烷氧基、羧基、酰氧基、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、疊氮基、酰胺基、烷氧基羰基、氰基、脒基或氨基羰基，并且s是0、1、2或3；且r是1、2或3；且并且式IV化合物是 其中R1是烷基單糖殘基或(g)或(h)的基團(tuán) 其中n是1、2、3、4、5或6；R’1是氫、C1-C4烷基、環(huán)丙基甲基、氨基烷基、單烷基氨基烷基或二烷基氨基烷基；R2和R’2各自獨(dú)立地是氫、烷基、烷氧基烷基、羥基烷基、C1-C3烷硫基、S(O)C1-C3烷基、CF3；R3是氫或CH3CO-；并且R4、R’4、R5、R’5、R6、R’6、R7和R’7各自獨(dú)立地是氫、鹵素、烷基、羥基、烷氧基、-COO(C1-C3烷基)、CF3、硝基、氨基、乙酰氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、C1-C3烷硫基或S(O)C1-C3烷基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述自身免疫病選自如克隆病和潰瘍性結(jié)腸炎的炎性腸病、肌萎縮性側(cè)索硬化、多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或丙型肝炎。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I、II、III或IV的蛋白激酶C抑制劑或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物在制備用于治療和預(yù)防器官或組織移植排斥反應(yīng)及預(yù)防移植物抗宿主疾病的藥物組合物中的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述蛋白激酶C抑制劑是式Ia、Ib、IIa、IIIa化合物或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述蛋白激酶C抑制劑是3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-{(1-吡啶-2-基甲基)-哌啶-4-基}-1H-吲哚-3-基]-吡各2，5-二酮，或3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物。
6.用于治療和預(yù)防器官或組織移植排斥反應(yīng)及預(yù)防移植物抗宿主疾病和/或自身免疫病的藥物組合物，其包含式I、II、III或IV的蛋白激酶C抑制劑或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物以及一種或多種可藥用稀釋劑或載體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中所述蛋白激酶C抑制劑是式Ia、Ib、IIa、IIIa化合物或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中所述蛋白激酶C抑制劑是3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-{(1-吡啶-2-基甲基)-哌啶-4-基}-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮或3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-吡咯2，5-二酮，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物。
9.一種藥物組合，其包含a)式I、II、III或IV的蛋白激酶C抑制劑或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物，及b)至少一種選自免疫抑制劑和免疫調(diào)制劑藥物的第二種藥劑。
10.一種藥物組合，其包含a)式Ia、Ib、IIa或IIIa的蛋白激酶C抑制劑，如3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-{(1-吡啶-2-基甲基)-哌啶-4-基}-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮或3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-吡各2，5-二酮，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物，及b)至少一種選自免疫抑制劑和免疫調(diào)制劑藥物的第二種藥劑。
11.一種在需要的受試者中治療或預(yù)防器官或組織移植排斥反應(yīng)或自身免疫病，或預(yù)防移植物抗宿主疾病的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的式I、II、III或IV的蛋白激酶C抑制劑，如式Ia、Ib、IIa、IIIa化合物，優(yōu)選為3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-{(1-吡啶-2-基甲基)-哌啶-4-基}-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮或3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[1-(哌啶-4-基)-1H-吲哚-3-基]-吡咯-2，5-二酮，或其可藥用鹽、水合物或溶劑化物。
全文摘要
本發(fā)明涉及如說(shuō)明書(shū)中描述的式I、II、III或IV化合物在移植和自身免疫病中的用途。
文檔編號(hào)A61P19/02GK1938019SQ200580010625
公開(kāi)日2007年3月28日 申請(qǐng)日期2005年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月8日
發(fā)明者J·瓦格納, W·舒勒 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司