專利名稱：具有hm74a受體活性的藥物的制作方法
專利說明具有HM74A受體活性的藥物 本發(fā)明涉及為黃嘌呤衍生物的治療活性化合物，制備所述衍生物的方法，含有所述活性化合物的藥物制劑以及所述化合物在治療、特別是在治療由HM74A受體激活不足(under-activation)所引起的疾病或者受益于激活HM74A受體的疾病中的用途。
血脂障礙是用于描述個體脂蛋白異常的統(tǒng)稱。在臨床上，用于治療患有血脂障礙以及由此引發(fā)的心血管疾病高?；颊叩闹饕衔镱愋褪撬固赝?statins)、貝特類(fibrates)、膽汁酸結(jié)合樹脂以及煙酸。煙酸(Niacin，維生素B)在臨床上用于治療患有不同形式的血脂障礙的患者已超過40余年。煙酸的主要作用模式是通過抑制對激素敏感的甘油三酯脂肪酶(HSL)，使得血漿非酯化脂肪酸(NEFA)減少，進(jìn)一步降低了肝臟脂肪代謝，從而減少LDL和VLDL(低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白)輸出。據(jù)信VLDL水平降低可以降低膽固醇脂轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)活性，導(dǎo)致HDL(高密度脂蛋白)水平升高，這可能是觀察到心血管受益的原因。因此，煙酸對脂蛋白產(chǎn)生了非常令人滿意的改變；降低了VLDL和LDL水平而同時升高了HDL水平。另外還證實煙酸具有調(diào)節(jié)疾病的優(yōu)勢，可以減輕動脈粥樣硬化病變的惡化并促進(jìn)其復(fù)原，以及在多個試驗中還減少了引發(fā)心血管事件的次數(shù)。
采用煙酸治療所觀察到的HSL抑制作用是通過細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷腺苷(cAMP)減少來調(diào)節(jié)，而細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷腺苷(cAMP)減少是由G-蛋白介導(dǎo)的腺苷酸環(huán)化酶抑制作用引起的。最近，已經(jīng)鑒定G-蛋白偶聯(lián)的受體HM74和HM74A是煙酸的受體(PCT專利申請WO02/84298；Wise等人.J Biol Chem.，2003，278(11)，9869-9874)。人HM74A的DNA序列可在Genbank中找到；登錄號AY148884。其它兩篇論文支持了上述發(fā)現(xiàn)(Tunaru等人.Nature Medicine，2003，9(3)，352-255和Soga等人.Biochem Biophys Res Commun.，2003，303(1)364-369)，但是其中所用術(shù)語有細(xì)微差異。在Tunaru的論文中，所稱人HM74實際上是HM74A，而在Soga的論文中，HM74b就是HM74A。轉(zhuǎn)染表達(dá)HM74A和/或HM74的細(xì)胞在曝露于煙酸之后，獲得了引發(fā)GiG-蛋白介導(dǎo)響應(yīng)的能力。在缺乏HM74A(m-PUMA-G)同系物的小鼠中，煙酸不能降低血漿NEFA水平。
現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)合成并公開了某些黃嘌呤衍生物。例如，EP0389282公開了用作腦血管障礙的潛在調(diào)節(jié)劑的黃嘌呤衍生物。Jacobson等人在J.Med.Chem.，1993，36，2639-2644中證實大量的黃嘌呤衍生物均為腺苷受體拮抗劑。
目前我們發(fā)現(xiàn)一類黃嘌呤衍生物，它是煙酸受體HM74A的選擇性激動劑，因而其在治療、預(yù)防和抑制由該受體激活不足所引起的疾病或者受益于激活該受體的疾病中是有益的。
發(fā)明概述 本發(fā)明提供了具有治療活性的黃嘌呤衍生物以及所述衍生物在治療、特別是在治療由HM74A受體激活不足所引起的疾病或者受益于激活該受體的疾病中的用途，所述疾病特別是脂類代謝疾病包括血脂障礙或高脂蛋白血癥例如糖尿病血脂障礙和混合血脂障礙(mixed dyslipidaemia)，心力衰竭，血膽脂醇過多癥(hypercholesteraemia)，心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥。本發(fā)明化合物同樣還可以用作冠狀動脈疾病，血栓癥，心絞痛，慢性腎衰竭，周圍血管疾病和中風(fēng)，以及與II型糖尿病、I型糖尿病、胰島素耐受性、高脂血癥、神經(jīng)性厭食癥、肥胖癥有關(guān)的心血管適應(yīng)癥的治療劑。本發(fā)明化合物還可用于治療如下面所述的各種炎性疾病或病癥。
本文所述的各種中間體、制劑、方法以及步驟構(gòu)成了本發(fā)明另一方面。
發(fā)明詳述 根據(jù)本發(fā)明一方面，提供了式(I)化合物及其生理學(xué)功能的衍生物，
其中 R1選自氫以及可任選被一個或多個選自CN和CF3中的基團(tuán)取代的C1-4烷基； R2選自未被取代的C3-10烷基、被一個或多個選自氟和CN中的基團(tuán)取代的C1-10烷基、C5鏈烯基、直鏈C4鏈烯基、以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基； 和R3選自鹵素和CN； 條件是 (i)當(dāng)R3表示Cl，且R1表示乙基時，R2不是丙基； (ii)當(dāng)R3表示Br，且R1表示丙基時，R2不是丙基； (iii)當(dāng)R3表示Cl或Br，且R1表示丁基時，R2不是丁基；以及 (iv)當(dāng)R1表示C1-4烷基、CH2CN或(CH2)3CF3時，R2不是支鏈烷基。
本發(fā)明化合物可用于治療由HM74A受體激活不足所引起的疾病或者受益于激活該受體的疾病，特別是脂類代謝疾病包括血脂障礙或高脂蛋白血癥例如糖尿病血脂障礙和混合血脂障礙，心力衰竭，血膽脂醇過多癥，心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥。本發(fā)明化合物同樣還可以用作冠狀動脈疾病，血栓癥，心絞痛，慢性腎衰竭，周圍血管疾病和中風(fēng)，以及與II型糖尿病、I型糖尿病、胰島素耐受性、高脂血癥、神經(jīng)性厭食癥、肥胖癥有關(guān)的心血管適應(yīng)癥的治療劑。本發(fā)明化合物同樣也可以用作HM74A的激動劑或部分激動劑(HM74A調(diào)節(jié)劑)。
在具體實施方案中，R1選自氫、C1-4烷基、CH2CN和(CH2)3CF3；在更具體的實施方案中，R1選自氫和甲基。
在部分實施方案中，R2選自未被取代的C3-10烷基、被一個或多個CN取代基取代的C1-6烷基、被一個或多個氟取代基取代的C1-10烷基、C5鏈烯基、直鏈C4鏈烯基、以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基。具體地，R2選自未被取代的C3-10烷基；(CH2)1-5CN；被一個或多個氟取代基取代的C2-5烷基；C5鏈烯基；以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基。更具體地，R2選自未被取代的C4-6正烷基，例如戊基；(CH2)1-3CN，例如(CH2)CN或(CH2)3CN；具有一個或多個氟取代基的C3-4烷基，特別是其中末端碳完全用氟飽和的C3-4烷基，例如(CH2)2-3CF3；以及C5鏈烯基，特別是其中僅有一個雙鍵的C5鏈烯基，例如其中雙鍵位于第四個和第五個碳之間的C5鏈烯基(末端鏈烯基)。
在具體實施方案中，R3表示鹵素。更具體地，R3選自氯和溴。最具體地，R3表示氯。
應(yīng)該理解的是，本發(fā)明包括這些具體實施方案的任何組合，并且覆蓋上述具體取代基的所有組合。
具體的本發(fā)明化合物包括 (8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)乙腈， 3-丁基-8-氯-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-1-甲基-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-溴-1-甲基-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(3，3，3-三氟丙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-1-丙基-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 3-丁基-8-氯-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， (3-丁基-8-氯-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基)乙腈， 8-氯-3-(2-環(huán)丙基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-1，3-雙(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 4-(8-氯-1-甲基-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)丁腈， 8-氯-1-乙基-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 1-甲基-2，6-二氧代-3-戊基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈， 8-氯-3-丙基-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(3-甲基丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-丙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 3-丁基-1-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈， 8-氯-3-(4-戊烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-己基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 4-(8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)丁腈， 8-氯-3-己基-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 3-丁基-8-氯-1-乙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， [8-氯-3-(2-環(huán)丙基乙基)-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基]乙腈， (8-氯-2，6-二氧代-3-丙基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基)乙腈， 8-氯-1-(4，4，4-三氟丁基)-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 2，2′-(8-氯-2，6-二氧代-6，7-二氫-1H-嘌呤-1，3(2H)-二基)二乙腈， 8-氯-1-甲基-3-(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(2-環(huán)己基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 1，3-二丁基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈， 1，3-二丁基-8-碘-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(4-甲基戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(6-甲基庚基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-辛基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-癸基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(環(huán)己基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， (+/-)-8-氯-3-(3-甲基戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(2-環(huán)戊基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(環(huán)丙基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， (+/-)-8-氯-3-(2-甲基丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， (+/-)-8-氯-3-(2-甲基戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(環(huán)丁基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(環(huán)戊基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(3-環(huán)丙基丙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(2-環(huán)丁基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(4-氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(3-氟丙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 8-氯-3-(5-氟戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 4-(8-氯-1-甲基-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)丁腈， 3-(3-丁烯-1-基)-8-氯-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮， 6-(8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)-2，2-二甲基己腈， 8-氯-3-(6-氟己基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮。
本說明書和權(quán)利要求書中通篇使用的措辭“含有”和“包括”及其各種變型是指包含在內(nèi)的意思。也就是說，在上下文允許的情形下，這些措辭意味著可以含有其它沒有明確指明的元素和個體。
本文所使用的術(shù)語“鹵素”或“鹵”是指氟、氯、溴和碘。
本文所使用的術(shù)語“烷基”(當(dāng)被用作基團(tuán)或基團(tuán)中的一部分使用時)是指直鏈或支鏈烴鏈，除非另有限定，是指含有指定數(shù)目的碳原子的直鏈或支鏈烴鏈。例如，C3-C10烷基是指含有至少3個、至多10個碳原子的直鏈或支鏈烴鏈。本文所使用的烷基實例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基和異丙基。術(shù)語“正烷基”具體是指直鏈烴鏈。
本文所使用的術(shù)語“環(huán)烷基”是指含有3-6個碳原子、不含雜原子或共軛雙鍵的烴環(huán)。本文所使用的環(huán)烷基的實例包括但不限于環(huán)丙基和環(huán)己基。
本文所使用的術(shù)語“鏈烯基”是指含有指定數(shù)目的碳原子、一個或多個雙鍵的直鏈或支鏈烴鏈。
在本文中，當(dāng)某基團(tuán)被稱作被另一基團(tuán)“取代”或者具有“一個或多個取代基”時，除非明確指出了所述取代基的具體位置，應(yīng)該理解所述取代基可以存在于該基團(tuán)的任意位置上。
本文所使用的術(shù)語“生理學(xué)功能的衍生物”是指本發(fā)明化合物的任意可藥用衍生物例如其酰胺，包括式(I)化合物的任意可藥用鹽、以及式(I)化合物的任意可藥用溶劑化物，向哺乳動物例如人施用之后，它們能夠提供(直接或間接地)式(I)化合物或其活性代謝物或殘余物。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，可以在式(I)化合物的任意功能基團(tuán)上對其進(jìn)行修飾得到其生理學(xué)功能的衍生物，并且式(I)化合物可以在不止一個位置上進(jìn)行上述修飾。
在本文中，與可包含在向患者施用的藥物制劑中的成分(活性成分或賦形劑)關(guān)聯(lián)使用的術(shù)語“可藥用”，是指在與該藥物制劑中其它任意成分配伍方面可以接受、并且對其接受者無毒的成分。
本文所使用的術(shù)語“溶劑化物”是指由溶質(zhì)(在本發(fā)明中為式(I)化合物、或其鹽或其生理學(xué)功能的衍生物)與溶劑形成的具有可變化學(xué)計量的絡(luò)合物。滿足本發(fā)明目的的這類溶劑不會干擾所述溶質(zhì)的生理活性。所用溶劑可以是可藥用溶劑。適宜的可藥用溶劑的實例包括水、乙醇和乙酸?？墒褂萌軇┑膶嵗撬谠撉樾沃?，所述溶劑化物可稱作被討論溶質(zhì)的水合物。
對于藥學(xué)應(yīng)用應(yīng)該理解，上述“鹽或溶劑化物”可以為可藥用鹽或溶劑化物。當(dāng)然，其它的鹽或溶劑化物可用于例如式(I)化合物或者其可藥用鹽或溶劑化物的制備中。
可藥用鹽包括Berge，Bighley和Monkhouse，J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19中所述的鹽。適宜的可藥用鹽包括由加入堿金屬例如堿金屬氫氧化物形成的堿金屬鹽。適宜的堿金屬鹽的實例是鈉鹽或鉀鹽。其它適宜的可藥用鹽包括堿土金屬鹽，例如鈣鹽或鎂鹽、銨鹽；或與有機(jī)堿例如乙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、三乙胺、膽堿和葡甲胺形成的鹽；或者與氨基酸例如精氨酸、賴氨酸和組氨酸形成的鹽。
式(I)化合物在治療和緩解諸多脂類代謝疾病癥狀中具有潛在的治療效果，所述疾病包括血脂障礙或高脂蛋白血癥例如糖尿病血脂障礙和混合血脂障礙，心力衰竭，血膽脂醇過多癥，心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥，II型糖尿病，I型糖尿病，胰島素耐受性，高脂血癥，神經(jīng)性厭食癥，肥胖癥。本發(fā)明化合物同樣還可用作冠狀動脈疾病、血栓癥、心絞痛、慢性腎衰竭、周圍血管疾病和中風(fēng)的治療劑。
此外，據(jù)信HM74和HM74A受體與炎癥有關(guān)。炎癥代表了對于創(chuàng)傷的一系列血管、細(xì)胞和神經(jīng)響應(yīng)?？梢詫⒀装Y描述為炎癥細(xì)胞例如單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和粒性白細(xì)胞向組織內(nèi)的移動。這通常伴隨著內(nèi)皮屏障作用降低和組織內(nèi)水腫。與疾病相關(guān)的炎癥通常被稱作慢性炎癥，甚至可以持續(xù)終生。這類慢性炎癥可以通過疾病癥狀表現(xiàn)出來。因此，抗炎治療的目的在于減輕慢性炎癥，使得愈合和組織修復(fù)的生理步驟得以進(jìn)行。
本發(fā)明化合物所適用的炎性疾病或病癥的實例包括關(guān)節(jié)炎性疾病或病癥，特別是關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假關(guān)節(jié)失靈(prostheticjoint failure))、或者胃腸道炎癥(例如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、以及其它炎性腸病和胃腸疾病、由感染引起的胃炎和粘膜炎癥、由非甾體消炎藥物引起的腸病)、肺部發(fā)炎(例如成人呼吸窘迫綜合征、哮喘、囊性纖維化病、或慢性阻塞性肺疾患)、心臟發(fā)炎(例如心肌炎)、神經(jīng)組織炎癥(例如多發(fā)性硬化)、胰腺炎癥(例如與糖尿病及其并發(fā)癥相關(guān)的炎癥、腎臟發(fā)炎(例如腎小球腎炎)、皮膚發(fā)炎(例如皮炎、銀屑病、濕疹、蕁麻疹、燒傷)、眼部發(fā)炎(例如青光眼)、以及移植器官(例如排異反應(yīng))和多器官疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、膿毒癥)炎癥、和病毒或細(xì)菌感染的炎性后遺癥、以及與動脈粥樣硬化相關(guān)的炎癥和接下來出現(xiàn)在例如大腦或缺血性心臟病中的含氧量低的或缺血性(ischaemic)創(chuàng)傷(包括或不包括再灌注)。
具體地說，本發(fā)明化合物可用于治療和預(yù)防炎癥、糖尿病和心血管疾病或病癥，包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、高甘油三酯血癥、和混合血脂障礙。
煙酸具有明顯的副作用，這可能是歸于其按照高水平(每日的克數(shù)量(gram quantities))給藥的緣故。最常見的副作用是強(qiáng)烈的皮膚發(fā)紅。在本發(fā)明的某些實施方案中，本發(fā)明化合物具有相對于煙酸而言更低的副作用。已經(jīng)鑒定HM74A是煙酸的高親和力受體，而HM74是低親和力受體。本發(fā)明化合物可用作具有選擇性的HM74A激動劑或部分激動劑；在這樣的情形下，本發(fā)明化合物對HM74A顯示出比對HM74更高的親和力。
式(I)化合物活化HM74A的效能可以采用下述酶和體外全細(xì)胞測定加以證實 體外測試 為了進(jìn)行瞬時轉(zhuǎn)染，將HEK293T細(xì)胞(穩(wěn)定表達(dá)SV40大T-抗原的HEK293細(xì)胞)保持在含有10％胎兒小牛血清和2mM谷氨酰胺的DMEM中。細(xì)胞接種在90mm培養(yǎng)皿中，在轉(zhuǎn)染前生長至60-80％融合(18-24小時)。將人HM74A(GenBankTM登錄號AY148884)亞克隆在哺乳動物表達(dá)載體(pcDNA3；Invitrogen)中，使用Lipofectamine試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染。為了進(jìn)行轉(zhuǎn)染，將9μgDNA與30μl Lipofectamine混和在0.6ml Opti-MEM(LifeTechnologies Inc.)中，在室溫下培養(yǎng)30分鐘，然后加入1.6ml Opti-MEM。將細(xì)胞曝露于Lipofectamine/DNA混合物下5小時，然后加入6ml 20％(v/v)胎兒小牛血清的DMEM溶液。細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后收獲(harvested)48小時。通過以50ngml-1向介質(zhì)中補(bǔ)充16小時，完成百日咳毒素治療。全部瞬時轉(zhuǎn)染研究涉及受體與Gi/oG蛋白Go1α的共轉(zhuǎn)染。
為了生成穩(wěn)定的細(xì)胞系，上述方法被用于轉(zhuǎn)染接種在六孔皿中、且生長至30％融合的CHO-K1細(xì)胞。將這些細(xì)胞保持在含有10％胎兒小牛血清和2mM谷氨酰胺的DMEM F-12HAM介質(zhì)中。轉(zhuǎn)染48小時后，將介質(zhì)用400μg/ml遺傳霉素(G418，Gibco)補(bǔ)充，進(jìn)行抗菌素耐受性細(xì)胞選擇。在加入煙酸之后，穩(wěn)定表達(dá)HM74A的克隆CHO-K1細(xì)胞系通過[35S]-GTPγS結(jié)合測量加以確認(rèn)。
P2膜制備-由收獲(harvest)后冷凍于-80℃下的細(xì)胞團(tuán)(cell paste)制備得到含有P2顆粒部分的質(zhì)膜。全部步驟在4℃下進(jìn)行。將細(xì)胞小球(pellet)再次懸浮于1ml的10mM Tris-HCl和0.1mM EDTA，pH7.5(緩沖液A)中，使用Ultra Turrax勻化20秒鐘，接著通過(5次)25-號針。將細(xì)胞裂解物(lysates)在微量離心機(jī)中、在1,000g下離心10分鐘，使胞核和未破損細(xì)胞形成小球，P2顆粒部分通過在16,000g下微量離心30分鐘進(jìn)行回收。將P2顆粒部分再次懸浮于緩沖液A中，儲存在-80℃下直到被需要時。
[35S]-GTPγS結(jié)合-根據(jù)先前所述的方法(Wieland，T.和Jakobs，K.H.(1994)Methods Enzymol.237，3-13)在室溫下的384-孔中進(jìn)行測定。簡單地說，制備標(biāo)準(zhǔn)或測試化合物的稀釋品，然后以體積為10μl加入至384-孔板中。將膜(HM74A或HM74)稀釋在測試緩沖液(20mM HEPES，100mM NaCl，10mMMgCl2，pH7.4)中，用皂苷(60μg/ml)、Leadseeker WGA珠(Amersham；250μg/孔)和10μM GDP補(bǔ)充，使得加入至各孔中的20μl體積含有5μg膜。將[35S]-GTPγS(1170 Ci/mmol，Amersham)稀釋(1∶1500)在測試緩沖液中，向每個孔中加入20μl。加入放射性配體之后，將板密封，脈沖旋轉(zhuǎn)(pulse spun)，并在室溫下孵育4小時。在孵育期結(jié)束時，在Leadseeker機(jī)器(VIEWLUX PLUS；Perkin-Elmer)上讀板，測定特異性結(jié)合水平。
體內(nèi)試驗 在研究前已禁食至少12天的雄性Spague-Dawley大鼠(200-250g)中測試HM74A激動劑。化合物通過靜脈內(nèi)(5ml/kg)或經(jīng)口強(qiáng)飼法(oral gavage)(10ml/kg)給藥。在給藥前以及給藥后的三個時間點(diǎn)(從給藥后15分鐘至8小時的時間段)采集血樣(0.3ml尾部靜脈血)。將每個血樣轉(zhuǎn)移至肝素試管(BectonDickinson Microtainer，PST LH)中，離心(10,000g，5分鐘)得到血漿樣本。使用商購得到的試劑盒(Randox)測定該血漿樣本的非酯化脂肪酸(NEFA)水平。采用對血漿NEFA水平的抑制(相對于給藥前的水平而言)表示HM74A激動劑活性。
為了確定HM74A化合物是否顯示出與煙酸相關(guān)的發(fā)紅響應(yīng)，將其給藥于麻醉后的豚鼠。雄性Dunkin Hartley豚鼠(300-800g)在用含有鹽酸氯胺酮(Vetalar，40mg/kg i.m.)、賽拉嗪(Rompun，8mg/kg i.m.)和戊巴比妥鈉(Sagatal，30mg/kg i.p.)的混合物麻醉之前，禁食12小時。麻醉后，進(jìn)行氣管造口術(shù)，將動物用室內(nèi)空氣機(jī)械通風(fēng)(10-12mL/kg，60次呼吸/分鐘)。向頸靜脈和頸動脈插入導(dǎo)管以靜脈內(nèi)給藥測試化合物，然后分別收集血液。在左耳頂部3-5mm處放置紅外溫度傳感器(Extech Instruments)。在給藥測試化合物之前5分鐘至給藥測試化合物后40分鐘內(nèi)，每分鐘記錄一次溫度測量結(jié)果。在Psion計算機(jī)上自動收集數(shù)據(jù)，然后在Excel表格程序中轉(zhuǎn)換進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。在給藥化合物之前以及之后的頻繁時間點(diǎn)上，通過頸動脈插管采集血樣(0.3ml)，并轉(zhuǎn)移至含有肝素鋰(lithium heparin)的Microtainer(BD)試管中。樣本在血液滾筒(roller)上充分混和，然后儲存在冰上，之后在1200g下離心5分鐘。
煙酸(10mg/kg i.v.)引起相當(dāng)于10.42+1.44(曲線下面積；隨機(jī)單元；n＝6)的耳朵溫度的平均(+s.e.m.)升高。通過對照，實施例30的化合物(10mg/kg i.v.)產(chǎn)生相當(dāng)于1.52+0.39(曲線下面積；隨機(jī)單元；n＝6)的耳朵溫度的平均(+s.e.m.)升高，減少85％。
合成得到根據(jù)式(I)的化合物(參見下面的合成實施例)，并在上述的一個或多個所述試驗中進(jìn)行測試。所有的實施例化合物均具有4.9(+/-0.3對數(shù)單位)或更高的pEC50以及30％或更高的效力。下面例舉了部分具體化合物。
一般純化和分析方法 質(zhì)譜(MS)是在使用電噴射陽極電離作用[(ES+ve得到MH+和M(NH4)+分子離子]或者電噴射陰極電離作用[(ES-ve得到(M-H)-分子離子]模式的FisonsVG Platform質(zhì)譜儀上記錄的。
1H NMR譜使用Bruker DPX 400MHz光譜儀記錄，使用四甲基甲硅烷作為外標(biāo)。
BiotageTM色譜法是指使用由Dyax Corporation銷售的裝置(Flash 40i或Flash 150i)和預(yù)先用KPSil裝填的柱進(jìn)行純化。
質(zhì)量定向自動化制備(Mass directed autoprep)是指這樣一種方法其中物質(zhì)通過高效液相色譜法、在HPLCABZ+5μm柱(5cm×10mm i.d.)上使用0.1％HCO2H的水溶液以及95％MeCN、5％水(0.5％HCO2H)進(jìn)行純化，采用下述梯度洗脫條件0-1.0分鐘5％B，1.0-8.0分鐘5→30％B，8.0-8.9分鐘30％B，8.9-9.0分鐘30→95％B，9.0-9.9分鐘95％B，9.9-10分鐘95→0％B，流速為8ml分鐘-1(體系2)。Gilson 202-部分收集器在檢測感興趣的質(zhì)量峰時由VG Platform質(zhì)譜儀啟動。
制備性h.p.l.c.是指這樣一種方法其中物質(zhì)通過高效液相色譜法、在HPLCABZ+5μm柱(10cm×21.2mm i.d.)上使用0.1％HCO2H的水溶液(A)和MeCN(0.5％HCO2H)(B)進(jìn)行純化，采用具有下述梯度體系表達(dá)為“x至y”的一般梯度洗脫條件0-1.45分鐘x％B，1.45-20分鐘x→y％B，20-24分鐘y→95％B，24-30分鐘95％B，32-34分鐘95→x％B，流速為8ml分鐘-1。Gilson233部分收集器由UV(254nm)啟動。
SPE(固相萃取)是指采用由International Sorbent Technology Ltd銷售的柱。
Strata Phenyl SPE是指使用由Phenomenex銷售的柱。將化合物裝填在預(yù)先經(jīng)MeCN調(diào)節(jié)(conditioned)、然后用5％MeCN的水溶液平衡的柱上。將化合物用0.1％HCO2H的水溶液和MeCN(0.5％HCO2H)，按照適宜的梯度在Combifiash Optix 10上洗脫。
如上所示，發(fā)現(xiàn)式(I)化合物可用于人藥或獸藥，特別是用作HM74A激活劑用于控制血脂障礙和高脂蛋白血癥。
因此，本發(fā)明另一方面提供了式(I)化合物或其生理學(xué)功能的衍生物用于人藥或獸藥，特別是用于治療脂類代謝障礙包括血脂障礙或高脂蛋白血癥例如糖尿病血脂障礙和混合血脂障礙，心力衰竭，血膽脂醇過多癥，心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥，II型糖尿病，I型糖尿病，胰島素耐受性，高脂血癥，神經(jīng)性厭食癥，肥胖癥。本發(fā)明化合物同樣被提供用于治療冠狀動脈疾病、血栓癥、心絞痛、慢性腎衰竭、周圍血管疾病和中風(fēng)。
本發(fā)明另一方面提供了式(I)化合物或其生理學(xué)功能的衍生物用于制備治療脂類代謝障礙包括血脂障礙或高脂蛋白血癥例如糖尿病血脂障礙和混合血脂障礙，心力衰竭，血膽脂醇過多癥，心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥，II型糖尿病，I型糖尿病，胰島素耐受性，高脂血癥，神經(jīng)性厭食癥，肥胖癥的藥物。本發(fā)明化合物同樣被提供用于治療冠狀動脈疾病、血栓癥、心絞痛、慢性腎衰竭、周圍血管疾病和中風(fēng)。
應(yīng)該理解的是，本文中的治療延伸包括預(yù)防、防止癥狀的復(fù)發(fā)和抑制以及對已確診病癥的治療。
根據(jù)本發(fā)明另一方面，提供了式(II)化合物及其生理學(xué)功能的衍生物，
其中 R1選自氫以及可任選被一個或多個選自CN和CF3中的基團(tuán)取代的C1-4烷基； R2選自未被取代的C2-10烷基、被一個或多個選自氟和CN中的基團(tuán)取代的C1-10烷基、C5鏈烯基、直鏈C4鏈烯基、以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基； 和R3選自鹵素和CN； 在制備用于治療脂類代謝障礙包括血脂障礙或高脂蛋白血癥的藥物中的用途。具體地，所述用途為提供式(II)化合物在制備用于治療糖尿病血脂障礙或混合血脂障礙，心力衰竭，血膽脂醇過多癥，II型糖尿病，I型糖尿病，胰島素耐受性，高脂血癥，神經(jīng)性厭食癥，肥胖癥，冠狀動脈疾病，血栓癥，心絞痛，慢性腎衰竭，中風(fēng)以及心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥的藥物中的用途。
在本發(fā)明一實施方案中，提供了式(II)化合物用于治療脂類代謝障礙包括血脂障礙或高脂蛋白血癥。具體地，所述用途為提供式(II)在制備用于治療糖尿病血脂障礙或混合血脂障礙，心力衰竭，血膽脂醇過多癥，II型糖尿病，I型糖尿病，胰島素耐受性，高脂血癥，神經(jīng)性厭食癥，肥胖癥，冠狀動脈疾病，血栓癥，心絞痛，慢性腎衰竭，中風(fēng)以及心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥的藥物中的用途。
在具體實施方案中，R1選自氫、C1-4烷基、CH2CN和(CH2)3CF3。在更具體的實施方案中，R1選自氫和甲基。
在某些實施方案中，R2選自未被取代的C3-10烷基、被一個或多個選自氟和CN中的基團(tuán)取代的C1-10烷基、C5鏈烯基、直鏈C4鏈烯基、以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基。具體地，R2選自未被取代的C3-10烷基、具有一個或多個CN取代基的C1-6烷基、具有一個或多個氟取代基的C1-10烷基、C5鏈烯基、直鏈C4鏈烯基、以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基。更具體地，R2選自未被取代的C3-10烷基；(CH2)1-5CN；具有一個或多個氟取代基的C2-5烷基；C5鏈烯基；以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基。最具體地，R2選自未被取代的C4-6正烷基，例如戊基；(CH2)1-3CN，例如(CH2)CN或(CH2)3CN；具有一個或多個氟取代基的C3-4烷基，特別是其中末端碳完全用氟飽和的C3-4烷基，例如(CH2)2-3CF3；以及C5鏈烯基，特別是其中僅有一個雙鍵的C5鏈烯基，例如其中雙鍵位于第四個和第五個碳之間的C5鏈烯基(末端鏈烯基)。
在具體實施方案中，R3表示鹵素。更具體地，R3選自氯和溴。最具體地，R3表示氯。
用于治療脂類代謝障礙包括血脂障礙或高脂蛋白血癥、或者制備用于治療脂類代謝障礙包括血脂障礙或高脂蛋白血癥的藥物的具體化合物包括 (8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)乙腈、 3-丁基-8-氯-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-1-甲基-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-溴-1-甲基-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(3，3，3-三氟丙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-1-丙基-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 3-丁基-8-氯-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 (3-丁基-8-氯-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基)乙腈、 8-氯-3-(2-環(huán)丙基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-1，3-雙(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 4-(8-氯-1-甲基-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)丁腈、 8-氯-1-乙基-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 1-甲基-2，6-二氧代-3-戊基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈、 8-氯-3-丙基-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(3-甲基丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-丙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 3-丁基-1-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈、 8-氯-3-(4-戊烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-己基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 4-(8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)丁腈、 8-氯-3-己基-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 3-丁基-8-氯-1-乙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 [8-氯-3-(2-環(huán)丙基乙基)-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基]乙腈、 (8-氯-2，6-二氧代-3-丙基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基)乙腈、 8-氯-1-(4，4，4-三氟丁基)-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 2，2′-(8-氯-2，6-二氧代-6，7-二氫-1H-嘌呤-1，3(2H)-二基)二乙腈、 8-氯-1-甲基-3-(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(2-環(huán)己基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 1，3-二丁基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈、 1，3-二丁基-8-碘-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(4-甲基戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(6-甲基庚基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-辛基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-癸基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(環(huán)己基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 (+/-)-8-氯-3-(3-甲基戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(2-環(huán)戊基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(環(huán)丙基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 (+/-)-8-氯-3-(2-甲基丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 (+/-)-8-氯-3-(2-甲基戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(環(huán)丁基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(環(huán)戊基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(3-環(huán)丙基丙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(2-環(huán)丁基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(4-氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(3-氟丙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-(5-氟戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤2，6-二酮、 4-(8-氯-1-甲基-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)丁腈、 3-(3-丁烯-1-基)-8-氯-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 6-(8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)-2，2-二甲基己腈、 8-氯-3-(6-氟己基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮、 8-氯-3-乙基-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮。
應(yīng)該理解的是，本發(fā)明該方面包括這些具體實施方案的任何組合，并且覆蓋針對式(II)化合物的上述具體取代基的所有組合。
此外，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其生理學(xué)功能的衍生物在制備用于治療關(guān)節(jié)炎性疾病或病癥，特別是關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假關(guān)節(jié)失靈)、或者胃腸道炎癥(例如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、以及其它炎性腸病和胃腸疾病、由感染引起的胃炎和粘膜炎癥、由非甾體消炎藥物引起的腸病)、肺部發(fā)炎(例如成人呼吸窘迫綜合征、哮喘、囊性纖維化病、或慢性阻塞性肺疾患)、心臟發(fā)炎(例如心肌炎)、神經(jīng)組織炎癥(例如多發(fā)性硬化)、胰腺炎癥(例如與糖尿病及其并發(fā)癥相關(guān)的炎癥、腎臟發(fā)炎(例如腎小球腎炎)、皮膚發(fā)炎(例如皮炎、銀屑病、濕疹、蕁麻疹、燒傷)、眼部發(fā)炎(例如青光眼)、以及移植器官(例如排異反應(yīng))和多器官疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、膿毒癥)炎癥、和病毒或細(xì)菌感染的炎性后遺癥、以及與動脈粥樣硬化相關(guān)的炎癥和接下來出現(xiàn)在例如大腦或缺血性心臟病中的含氧量低的或缺血性創(chuàng)傷(包括或不包括再灌注)的藥物中的用途。
在另一或替代方面，提供了治療患有由HM74A受體激活不足所引起的病癥或者受益于激活HM74A受體的病癥的人或動物的方法，所述方法包括向所述人或動物對象給藥有效量的式(I)化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
同樣應(yīng)該理解的是，本發(fā)明該方面包括這些具體實施方案的任何組合，并且覆蓋針對式(I)化合物的上述具體取代基的所有組合。
更具體地，本發(fā)明提供了治療脂類代謝障礙包括血脂障礙或高脂蛋白血癥例如糖尿病血脂障礙和混合血脂障礙，心力衰竭，血膽脂醇過多癥，心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥，II型糖尿病，I型糖尿病，胰島素耐受性，高脂血癥，神經(jīng)性厭食癥，肥胖癥的方法，所述方法包括向所述人或動物對象給藥有效量的式(I)化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。同樣，這些化合物還可用于治療冠狀動脈疾病、血栓癥、心絞痛、慢性腎衰竭、周圍血管疾病和中風(fēng)的方法中，所述方法包括向所述人或動物對象給藥有效量的式(I)化合物。
獲得理想生物效應(yīng)所需的HM74A調(diào)節(jié)劑的量當(dāng)然取決于各種因素，例如給藥模式和接受者具體的臨床病癥。一般來說，日劑量可以為0.1mg-1g/kg，通常為0.1-100mg/kg。靜脈內(nèi)給藥劑量可以例如為0.01mg-0.1g/kg，通常為0.01mg-10mg/kg，其可以方便地通過0.1μg-1mg/分鐘輸注給藥。適合上述目的的輸注液體可以含有例如0.01μg-0.1mg/毫升。單位劑量中可以含有例如0.01μg-1g HM74A調(diào)節(jié)劑。因此，注射安瓿中可以含有例如0.01μg-0.1g，口服單位劑量制劑例如片劑或膠囊劑中可以含有例如0.1mg-1g。當(dāng)本發(fā)明化合物以上述劑量范圍給藥時，未發(fā)現(xiàn)/預(yù)期到毒性效應(yīng)。
本發(fā)明化合物本身可用于治療由HM74A受體激活不足所引起的疾病或者受益于激活該受體的疾病，其實例是將本發(fā)明化合物與可接受載體以藥物制劑的形式存在。當(dāng)然，所述載體在能與制劑中其它成分配伍方面必須是可接受的，同時對接受者必須無毒。所述載體可以是固體或液體、或者兩者兼有，可以將HM74A調(diào)節(jié)劑制備成單位劑量制劑形式，例如片劑，其中含有0.05重量％-95重量％的HM74A調(diào)節(jié)劑。
所述制劑包括那些適合口服、直腸、局部、口腔(例如舌下)和腸胃外(例如皮下、肌內(nèi)、皮內(nèi)或靜脈內(nèi))給藥的制劑。
根據(jù)本發(fā)明還提供了制備這類藥物組合物的方法，所述方法包括將各種成分進(jìn)行混和。
適合口服給藥的制劑可以以個別的單位形式存在，例如各自含有預(yù)定量的HM74A調(diào)節(jié)劑的膠囊劑、扁囊劑、錠劑或片劑；粉劑或顆粒劑形式；在水或非水液體中的溶液劑或混懸劑形式；或者水包油或油包水乳劑形式。一般來說，通過將活性HM74A調(diào)節(jié)劑與液體或細(xì)分的固體載體、或者兩者兼有進(jìn)行均勻且致密的混和，然后如果需要的話，使產(chǎn)品成型，這樣可以制備得到上述制劑。例如，片劑可以通過將HM74A調(diào)節(jié)劑的粉末或顆粒與任選的一種或多種輔助成分壓制或成型而制備得到。壓制片劑可以通過在適宜的機(jī)器中將自由流動(free-flowing)形式的本發(fā)明化合物例如任選與(一種或多種)粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑和/或表面活性劑和/或分散劑混合的粉末或顆粒進(jìn)行壓制而制備得到。模制(Moulded)片劑可以通過在適宜的機(jī)器中將用惰性液體稀釋劑潤濕的粉狀化合物進(jìn)行模制而制備得到。
口服給藥的片劑和膠囊劑中可以含有常規(guī)賦形劑例如粘合劑，如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、西黃蓍膠、淀粉粘液或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑，如乳糖、微晶纖維素、糖、玉米淀粉、磷酸鈣或山梨糖醇；潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解劑，如馬鈴薯淀粉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉或淀粉羥乙酸鈉；或者潤濕劑，如十二烷基硫酸鈉。片劑可以按照本領(lǐng)域熟知的方法包衣。口服液體制劑可以是例如水性或油性混懸劑、溶液劑、乳劑、糖漿劑或酏劑形式，或者也可以是在使用前與水或其它適宜載體重構(gòu)(constitution)的干燥產(chǎn)品形式。這種液體制劑可以含有常規(guī)添加劑例如助懸劑，如山梨糖醇糖漿、甲基纖維素、葡萄糖/食用糖糖漿、明膠、羥甲基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或者氫化食用脂；乳化劑，如卵磷脂、脫水山梨糖醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水載體(其中可以含有食用油)，如杏仁油、分餾椰子油(fractionated coconut oil)、油性酯、丙二醇或乙醇；或者防腐劑，如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或者山梨酸。如果適合的話，制劑中還可以含有緩沖鹽、調(diào)味劑、著色劑和/或甜味劑(例如甘露醇)。
適合口腔(舌下)給藥的制劑包括在調(diào)味基質(zhì)(通常為蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠)中含有HM74A調(diào)節(jié)劑的錠劑、以及在惰性基質(zhì)例如明膠和甘油或者蔗糖和阿拉伯膠中含有HM74A調(diào)節(jié)劑的軟錠劑。
適合腸胃外給藥的本發(fā)明制劑通常包括HM74A調(diào)節(jié)劑的無菌含水制劑，所述制劑可與預(yù)期接受者體內(nèi)的血液等滲。這些制劑可以通過靜脈內(nèi)給藥，當(dāng)然還可以通過皮下、肌內(nèi)、或皮內(nèi)注射實現(xiàn)。這類制劑通?？梢酝ㄟ^將HM74A調(diào)節(jié)劑與水進(jìn)行混和，然后將所得到的溶液滅菌并使其與血液等滲而制備得到。根據(jù)本發(fā)明的可注射組合物通常含有0.1-5％w/w HM74A調(diào)節(jié)劑。
因此，可以將含有本發(fā)明化合物的適合腸胃外給藥的本發(fā)明制劑配制成通過快速濃注(bolus injection)或連續(xù)輸注進(jìn)行腸胃外給藥的形式，并且可以以單位劑量形式存在，例如安瓿、小瓶(vials)、小體積輸液或者預(yù)裝注射器形式，或者以具有添加的防腐劑的多劑量容器形式存在。所述組合物可以采取例如在水或非水載體(vehicles)中的溶液劑、混懸劑、或乳劑形式，并且可以含有各種配制制劑例如抗氧化劑、緩沖劑、抗微生物劑和/或毒性調(diào)節(jié)劑。或者，所述活性成分可以為在使用之前與適宜載體例如無菌無熱原的水重構(gòu)的粉末形式。所述干燥固體形式可以通過將無菌粉末無菌填入單獨(dú)的無菌容器中制備得到，或者通過將無菌溶液無菌填入各容器中，然后再凍干而制備得到。
適合直腸給藥的制劑可以以單位劑量栓劑形式存在。所述單位劑量栓劑可以通過將HM74A調(diào)節(jié)劑與一種或多種常規(guī)固體載體例如可可豆脂或甘油酯混和，然后再使所得到的混合物成型而制備得到。
適合局部應(yīng)用至皮膚的制劑可以采取軟膏劑、乳劑、洗劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑、或油劑形式。可使用的載體包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇類、以及其中的兩種或多種的混合物。所述HM74A調(diào)節(jié)劑通常以占組合物0.1-15％w/w、例如0.5-2％w/w的濃度存在。
本文所使用的局部給藥包括吹入和吸入給藥。用于局部給藥的各種類型的制劑實例包括軟膏劑、乳劑、洗劑、粉劑、陰道栓劑、噴霧劑、氣霧劑、膠囊劑、用于吸入器或吹入器中的藥筒或者滴劑(例如滴眼劑或滴鼻劑)。
軟膏劑和乳劑可以通過例如使用水性或油性基質(zhì)，同時加入適宜的增稠劑和/或膠凝劑和/或溶劑配制得到。因此，這類基質(zhì)可以例如包括水和/或油例如液體凡士林或者植物油例如花生油或蓖麻油或者溶劑例如聚乙二醇?？墒褂玫脑龀韯┌ㄜ浭?、硬脂酸鋁、十八醇十六醇混合物、聚乙二醇、微晶蠟和蜂蠟。
洗劑可以使用水性或油性基質(zhì)配制得到，并且一般來說，還可以含有一種或多種乳化劑、穩(wěn)定劑、分散劑、助懸劑或增稠劑。
用于外敷的粉劑可以借助于適宜的粉末基質(zhì)例如滑石、乳糖或淀粉形成。滴劑可以使用水性或非水性基質(zhì)配制得到，并且還可以含有一種或多種分散劑、增溶劑或助懸劑。
噴霧組合物可以被配制成例如水溶液劑或混懸劑形式或者由加壓包裝中借助適宜的推進(jìn)劑遞送的氣霧劑，其中推進(jìn)劑例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷、1，1，1，2-四氟乙烷、二氧化碳或其它適宜的氣體。
可以將用于吸入器或吹入器中的膠囊劑和藥筒(cartridges)(例如明膠)配制成包含本發(fā)明化合物與適宜的粉末基質(zhì)例如乳糖或淀粉的粉末的混合物。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物還可以與其它的治療劑組合(combination)使用，例如與其它類型的血脂障礙藥物(例如斯特汀、貝特類(fibrates)、膽汁酸結(jié)合樹脂或煙酸)組合使用。
本發(fā)明化合物可以與一種或多種其它治療劑組合使用，例如與其它類型的血脂障礙藥物組合使用，如3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑(斯特汀)或貝特類或膽汁酸結(jié)合樹脂或者煙酸。因此本發(fā)明另一方面提供了所述組合(combination)在治療由HM74A受體激活不足所引起的疾病或者受益于激活該受體的疾病中的用途，以及式(I)或(II)化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或生理學(xué)功能的衍生物在制備用于聯(lián)合治療(combination therapy)脂類代謝障礙包括血脂障礙或高脂蛋白血癥例如糖尿病血脂障礙和混合血脂障礙，心力衰竭，血膽脂醇過多癥，心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥，II型糖尿病，I型糖尿病，胰島素耐受性，高脂血癥，神經(jīng)性厭食癥或肥胖癥的藥物中的用途。
當(dāng)本發(fā)明化合物與其它治療劑組合使用時，這些化合物可以通過任何常規(guī)途徑依次或者同時給藥。
前面所稱的組合可以方便地通過使用藥物制劑的形式來實現(xiàn)，因此含有上述組合以及任選的可藥用載體或賦形劑的藥物制劑構(gòu)成了本發(fā)明另一方面。這類組合中的單獨(dú)組分可以以單獨(dú)或合并的藥物制劑形式依次或同時給藥。
當(dāng)被組合在同一制劑中時，應(yīng)該理解這兩種組分必須是穩(wěn)定的，并且能夠彼此配伍以及與制劑中的其它組分同樣能夠配伍，并且還可以配制用于給藥。當(dāng)分別配制時，它們可以以任意的常規(guī)制劑形式(通常是本領(lǐng)域針對這類化合物已知的方式)提供。
當(dāng)與對抗相同疾病的第二治療劑組合時，每種組分的劑量可以與化合物單獨(dú)使用的劑量不同。適宜的劑量可以方便地由本領(lǐng)域技術(shù)人員加以確定。
因此，本發(fā)明另一方面提供了含有式(I)或(II)化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物與其它治療活性劑的組合。
前面所稱組合可以方便地通過使用藥物制劑的形式來實現(xiàn)，因此含有上述組合與其可藥用載體的藥物制劑構(gòu)成了本發(fā)明另一方面。
本發(fā)明化合物具有有益的作用持續(xù)時間。
本發(fā)明化合物及其鹽和溶劑化物可以按照下文中所述的方法制備，這構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面。
方法A 根據(jù)本發(fā)明的制備其中R1是H或者與R2相同、和R3是Cl的式(I)或式(II)化合物的方法，所述方法包括
i)使用烯丙基溴烷基化鳥嘌呤 ii)使用亞硝酸鈉重氮化，接著再水解形成黃嘌呤 iii)氯化 iv)在N3上烷基化和/或在N1和N3上二烷基化 v)鈀催化除去烯丙基 方法B 根據(jù)本發(fā)明的制備其中R3是CN的式(I)或式(II)化合物的方法，所述方法包括方法A中的步驟(i)和(ii)，接著
iii)在N3上烷基化 iv)在N1上烷基化 v)通過用LiHMDS鋰化和DMF猝滅，在C8上形成醛 vi)將醛轉(zhuǎn)化為腈 vii)鈀催化除去烯丙基 方法C 根據(jù)本發(fā)明的制備其中R3是Cl或Br的式(I)或式(II)化合物的方法，所述方法包括方法B中的步驟(i)-(iv)，接著
i)在C8上用NCS或NBS鹵化 ii)鈀催化除去烯丙基 方法D 根據(jù)本發(fā)明的制備其中R3是CN的式(I)或式(II)化合物的方法，所述方法包括方法B中的步驟(i)-(iv)，接著
v)形成酯 vi)甲基酯的水解 vii)將酸轉(zhuǎn)化為酰胺 viii)將酰胺轉(zhuǎn)化為腈 ix)鈀催化除去烯丙基 方法E 根據(jù)本發(fā)明的制備其中R3是Cl的式(I)或式(II)化合物的方法，所述方法包括
i)在N3上烷基化 ii)在N1上烷基化 iii)脫芐基反應(yīng) iv)在C8上氯化 方法F 根據(jù)本發(fā)明的制備其中R1與R2不同、且R3是Cl的式(I)或式(II)化合物的方法，所述方法包括方法A中的步驟(i)-(iv)，接著
v)在N1上烷基化 vi)鈀催化除去烯丙基 方法G 根據(jù)本發(fā)明的制備其中R1與R2不同、和R3是Cl的式(I)或式(II)化合物的方法，所述方法包括方法F中的步驟(i)-(v)(其中方法F中的R2具體為SEM或MEM)，接著
vi)裂解MEM或SEM保護(hù)基團(tuán) vii)在N3上烷基化，接著鈀催化除去烯丙基 方法H 根據(jù)本發(fā)明的制備其中R3是Cl、Br、I或F的式(I)或式(II)化合物的方法，所述方法包括方法B中的步驟(i)-(iv)，接著
v)鈀催化除去烯丙基 vi)在C8上使用NCS、NBS或NIS鹵化 方法I 根據(jù)本發(fā)明的制備其中R1是H或烷基、R2是烷基、和R3是Cl的式(I)或式(II)化合物的方法，所述方法包括
i)形成嘧啶二酮 ii)亞硝基化 iii)使用Na2S2O4或者類似的還原劑還原 iv)形成黃嘌呤 v)在N1上烷基化(任選) vi)在C8上使用NCS鹵化 如果適合或者需要的話，作為任意一種上述合成方法中的最后步驟，可以將所得到的式(I)或式(II)化合物轉(zhuǎn)化為生理學(xué)上可接受的鹽形式，或者反之亦然，將一種鹽形式轉(zhuǎn)化為另一種生理學(xué)上可接受的鹽形式。
縮寫 THF 四氫呋喃 Ac 乙?；? DCM 二氯甲烷 DMEMDulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基 HEPES 4-(2-羥基乙基)哌嗪-1-乙磺酸 DMSO二甲亞砜 NBS N-溴代琥珀酰亞胺 NCS N-氯代琥珀酰亞胺 NIS N-碘代琥珀酰亞胺 DMF 二甲基甲酰胺 LiHMDS 六甲基二甲硅烷基氨基化鋰 DBAD偶氮二羧酸二芐基酯 DIPEA 二異丙基乙基胺 PyBOP 苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基磷 (tripyrrolidinophosphonium)六氟磷酸鹽 MEM 甲氧基乙氧基甲基 SEM 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基 TFA 三氟乙酸 RT 室溫 △ 加熱 利用下述非限制性實施例對本發(fā)明進(jìn)行示例性說明 合成實施例 實施例18-氯-3-(4-戊烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)2-氨基-7-(2-丙烯-1-基)-1，7-二氫-6H-嘌呤-6-酮
在室溫、氮?dú)夥障?，將含有鳥苷(20g，0.071mol)、烯丙基溴(14.7ml，0.169mol)和無水DMSO(100ml)的混合物攪拌18小時。以一批加入濃HCl(50ml，37％)，將混合物攪拌45分鐘后，傾入MeOH(600ml)中。該甲醇溶液用2M NaOH(aq)溶液中和，通過過濾收集所得到的白色沉淀。該白色固體在50℃下真空干燥18小時，得到標(biāo)題化合物(16g粗產(chǎn)物，119％)。m/z192.2[MH+]。
b)7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將2-氨基-7-(2-丙烯-1-基)-1，7-二氫-6H-嘌呤-6-酮(40g，0.209mol)在AcOH(900ml)和水(100ml)中的混合物在55℃下加熱。逐滴加入亞硝酸鈉(57.74g，0.837mol)的水(100ml)溶液。注意有毒氣體。加料完畢后(大約25分鐘)，反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，然后濃縮至其初始體積的大約1/3。加入水(500ml)，所得到的沉淀通過過濾收集。殘余物用水洗滌，然后在50℃下用P2O5真空干燥2小時，得到標(biāo)題化合物(17.20g)。含水部分濃縮后，加入水(100ml)。所得到的固體再次過濾并干燥。這次得到更多的標(biāo)題化合物(2.31g)。合并產(chǎn)物(19.52g，49％)。m/z193.2[MH+]。
c)8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮)(10.52g，54.7mmol)的無水DMF(60ml)溶液中加入NCS(8.04g，60.2mmol)。反應(yīng)混合物在氮?dú)夥铡?0℃下攪拌6小時。反應(yīng)混合物真空濃縮得到琥珀色油狀物。加入MeOH，放置18小時。所得到的殘余物過濾并真空干燥，得到標(biāo)題化合物(7.69g，62％)。m/z227.2[MH+]。
d)8-氯-3-(4-戊烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.10g，0.44mmol)溶解于含有碳酸鈉(0.12g，0.49mmol)和5-溴戊烯(0.07g，0.49mmol)的DMF(1.5ml)中，混合物攪拌18小時。烷基化完畢后，加入嗎啉(0.5ml)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.08g，0.07mmol)，繼續(xù)攪拌3.5小時。反應(yīng)用乙酸乙酯(10ml)稀釋，依次用2N鹽酸(2×5ml)和鹽水(3×5ml)洗滌，分離有機(jī)相，干燥(MgSO4)并濃縮。將粗產(chǎn)物懸浮于甲醇(2ml)中，然后在氨基丙基SPE(5g)上純化，先用甲醇洗脫，再用5％乙酸的甲醇溶液洗脫，濃縮后分離得到為白色固體的標(biāo)題化合物(0.039g，35％)。NMR；(400MHz，d6-DMSO)1.75(m，2H)，2.05(m，2H)，3.85(t，2H，J＝7Hz)，4.95(m，1H)，5.05(m，1H)，5.8(m，1H)，11.1(br s，1H)，一個可交換質(zhì)子未觀察到δH13；m/z255[MH+]。
實施例28-氯-3-己基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
使用己基碘化物，按照類似于實施例1的方式制備，得到標(biāo)題化合物。NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)0.85(t，3H，J＝7Hz)，1.25(br s，6H)，1.6(m，2H)，3.85(t，2H，J＝8Hz)，11.2(br.s，1H)，一個可交換質(zhì)子未觀察到δH 13；m/z271[MH+]。
實施例3和4(8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)乙腈和2，2′-(8-氯-2，6-二氧代-6，7-二氫-1H-嘌呤-1，3(2H)-二基)二乙腈
a)[8-氯-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基]乙腈和2，2′-[8-氯-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-6，7-二氫-1H-嘌呤-1，3(2H)-二基]二乙腈
將8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.445g，2.0mmol)的DMF(8ml)溶液用碳酸鈉(0.18g，1.7mmol)和溴代乙腈(0.1ml，1.4mmol)處理。攪拌后的混合物在70℃下加熱3小時，然后冷卻至50℃，進(jìn)一步用溴代乙腈(0.06ml，0.8mmol)處理?；旌衔镌?0℃下繼續(xù)保持2小時，然后冷卻至環(huán)境溫度并蒸發(fā)至干。殘余物用1M鹽酸水溶液(20ml)處理，并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。合并有機(jī)部分，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物溶解于二氯甲烷(2ml)中，20分鐘后，濾出生成的沉淀固體(未反應(yīng)的8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮)，進(jìn)一步用二氯甲烷洗滌。濾液真空濃縮后，經(jīng)快速色譜法處理，使用梯度洗脫為1∶3至4∶1的乙酸乙酯/環(huán)己烷作為洗脫劑。得到兩個標(biāo)題化合物 [8-氯-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基]乙腈 白色固體(0.084g，16％)；m/z266[MH+]。
2，2′-[8-氯-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-6，7-二氫-1H-嘌呤-1，3(2H)-二基]二乙腈 白色固體(0.195g，32％)；m/z305[MH+]。
b)(8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)乙腈
將[8-氯-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基]乙腈(0.084g，0.32mmol)的THF(5ml)溶液通過連續(xù)向反應(yīng)混合物施加真空和氮?dú)鈮撼怏w。溶液依次用嗎啉(0.3ml，3.4mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.03g，0.03mmol)處理。2小時后，混合物用2M鹽酸水溶液(3ml)和氯仿(5ml)處理?；旌衔锓蛛x后，蒸發(fā)有機(jī)相。產(chǎn)物由殘余物中使用質(zhì)量定向(mass-directed)HPLC純化，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(0.018g，25％)。NMR δH(400MHz，d6-DMSO)4.95(s，2H)，11.49(s，1H)，14.63(br.s，1H)；m/z226[MH+]。
c)2，2′-(8-氯-2，6-二氧代-6，7-二氫-1H-嘌呤-1，3(2H)-二基)二乙腈
使用合成(8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)乙腈所描述的條件，由2，2′-[8-氯-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-6，7-二氫-1H-嘌呤-1，3(2H)-二基]二乙腈制備得到標(biāo)題化合物。得到為白色固體的標(biāo)題化合物0.06g(4％)；NMR δH(400MHz，d6-DMSO)4.88(s，2H)，5.06(s，2H)，NH未觀察到δH 14；m/z282[MNH4+]。
實施例58-氯-3-(3，3，3-三氟丙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
使用3-溴-1，1，1-三氟丙烷作為烷基化試劑，按照類似于實施例3的方式制備，得到標(biāo)題化合物。
NMR δH(400MHz，d6-DMSO)2.64-2.76(m，2H)，4.12(t，2H，J＝7Hz)，11.30(s，1H)，14.46(br.s，1H)；m/z283[MH+]。
實施例68-氯-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
使用2-溴-1，1，1-三氟乙烷作為烷基化試劑和碳酸氫鈉作為堿，按照類似于實施例3的方式制備，得到標(biāo)題化合物。
δH(400MHz，d4-MeOD)4.68(q，2H，J＝8.5Hz)；m/z267.1[M-H]-。
實施例7和88-氯-3-(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮和8-氯-1，3-雙(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3-(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮和8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-1，3-雙(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(1.5g，6.64mmol)、碳酸鈉(844mg，7.9mmol)和4-溴-1，1，1-三氟丁烷(1.39g，7.3mmol)在二甲基甲酰胺(25ml，干燥)中攪拌7天。反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分配。有機(jī)相分離后用鹽酸(2N)、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物用乙醚研磨，固體通過過濾收集，得到為白色固體的8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3-(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(1.23g，57％)。m/z337[MH+]。
濃縮后的濾液在二氧化硅、SPE柱(20g)上色譜處理。用環(huán)己烷∶乙酸乙酯(10∶1至2∶1)洗脫，得到為漿狀物的8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-1，3-雙(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(480mg，16％)。m/z447[MH+]。
b)8-氯-3-(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3-(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(84mg，0.25mmol)和嗎啉(220μl，2.5mmol)用氮?dú)庠谒臍溥秽?3ml)中除氣，然后加入四(三苯基膦)鈀(0)(29mg，0.025mmol)，反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。通過過濾收集白色沉淀，用四氫呋喃和乙醚洗滌，得到標(biāo)題化合物的嗎啉鹽(59mg)。將其用2N HCl和甲醇處理，溶劑蒸發(fā)至干，然后重新溶解于DMSO/MeOH中，通過制備性HPLC純化，使用10-40％梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(11mg，14.9％)。NMR δH(400MHz，d4-MeOD)1.92-2.03(m，2H)，2.19-2.33(m，2H)，4.06(t，2H，J＝7Hz)；m/z297[MH+]。
c)8-氯-1，3-雙(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-1，3-雙(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(478mg，1.1mmol)和嗎啉(937μl，11mmol)用氮?dú)庠谒臍溥秽?10ml)中除氣，然后加入四(三苯基膦)鈀(0)(123mg，0.11mmol)，反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物在二氯甲烷和鹽酸2N之間分配。有機(jī)相分離后，濃縮得到粗產(chǎn)物。將其通過氨基丙基SPE(5g)純化，然后由乙腈重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(75.5mg，16.9％)。NMR.δH(400MHz，CDCl3)1.96-2.13(m，4H)，2.15-2.29(m，4H)，4.15-4.23(m，4H)，12.94(br.s，1H)；m/z407[MH+]。
實施例98-氯-3-(2-環(huán)丙基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)8-氯-3-(2-環(huán)丙基乙基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(1.5g，6.64mmol)、碳酸鈉(844mg，7.9mmol)和甲磺酸2-環(huán)丙基乙酯(1.19g，7.3mmol)在80℃下的二甲基甲酰胺(25ml，無水)中攪拌2天。反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分配。有機(jī)相分離后，用鹽酸(2N)、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物用乙醚研磨，通過過濾收集固體，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(0.96g，49％)。m/z295[MH+]。
b)8-氯-3-(2-環(huán)丙基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-3-(2-環(huán)丙基乙基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(74mg，0.25mmol)和嗎啉(220μl，2.5mmol)用氮?dú)庠谒臍溥秽?3ml)中除氣，然后加入四(三苯基膦)鈀(0)(29mg，0.025mmol)，反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。通過過濾收集白色沉淀，用四氫呋喃和乙醚洗滌，得到標(biāo)題化合物的嗎啉鹽(52mg)。將其用2N HCl和甲醇處理，溶劑蒸發(fā)至干，然后重新溶解于DMSO/MeOH中，通過制備性HPLC純化，使用10-40％梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(22mg，34.6％)。NMR δH(400MHz，d4-MeOD)0.00-0.05(m，2H)，0.37-0.43(m，2H)，0.67-0.77(m，1H)，1.61(q，2H，J＝7Hz)，4.06-4.11(m，2H)；m/z255[MH+]。
實施例103-丁基-8-氯-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)3-丁基-8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向3-丁基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(3.34g，13.4mmol)的無水DMF(19ml)溶液中加入NCS(1.97g，14.8mmol)，然后在室溫和氮?dú)夥障聰嚢?2小時。混合物真空濃縮，得到黃色固體，過濾后用甲醇洗滌。濾液濃縮后重復(fù)上述步驟。濾液最后一次洗滌后，通過SPE(Si，20g)柱純化，用1∶1的EtOAc環(huán)己烷洗脫。合并的固體真空干燥后，得到標(biāo)題化合物(2.42g，64％)；m/z283.3[MH+]。
b)3-丁基-8-氯-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將3-丁基-8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(100mg，0.35mmol)在無水THF(4ml)和無水DMSO(0.4ml)中的溶液用Pd(PPh3)4(61mg，0.053mmol)處理?；旌衔镌谳p度真空下除氣，加入嗎啉(308μL，3.5mmol)，在室溫和氮?dú)夥障聰嚢?小時。黃色溶液在2M HCl(aq)和EtOAc之間分配。有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。殘余物溶于(taken up)MeOH中，通過氨基丙基SPE(5g)，用MeOH洗脫，再用5％AcOH/MeOH洗脫。各部分產(chǎn)物合并后真空濃縮，得到為灰白色固體的標(biāo)題化合物(30mg，35％)。NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)0.89(t，3H，J＝7.5Hz)，1.23-1.34(m，2H)，1.55-1.65(m，2H)，3.85(t，2H，J＝7Hz)，11.17(s，1H)，14.37(br.s，1H)；m/z 243.3[MH+]。
實施例118-氯-3-丙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將3-丙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(J.Med.Chem，1993，36(10)，1380-6)(0.3g，1.5mmol)和N-氯代琥珀酰亞胺(0.21g，1.5mmol)溶解于DMF(5ml)中，溶液攪拌5小時。溶液濃縮后，固體殘余物用甲醇洗滌，過濾得到為白色固體的產(chǎn)物(0.148g，42％)。NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)0.85(t，3H，J＝7Hz)，1.65(m，2H)，3.8(t，2H，J＝7Hz)，11.2(s，1H)，一個可交換質(zhì)子未觀察到δH 13；m/z229[MH+]。
實施例128-氯-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)8-氯-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(100mg，0.44mmol)的無水DMF(3ml)溶液中加入碳酸鈉(0.051g，0.484mmol)。在室溫下攪拌10分鐘后，加入戊基碘化物(0.063ml，0.484mmol)，在氮?dú)夥?、室溫下繼續(xù)攪拌18小時。反應(yīng)混合物用水(25ml)稀釋，用EtOAc(2×25ml)萃取。干燥合并的有機(jī)萃取物(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)。通過SPE(Si，5g)純化，用4∶1 EtOAc/環(huán)己烷洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(96mg，74％)；m/z 297.2[MH+]。
b)8-氯-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將含有四(三苯基膦)鈀(0)(56mg，0.049mmol)的燒瓶用氮?dú)鉀_洗，然后加入8-氯-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(96mg，0.323mmol)的無水THF(1.5ml)溶液，接著加入DMSO(0.1ml)和嗎啉(0.28ml，0.049mmol)。所得到的混合物在室溫、氮?dú)夥障聰嚢?2小時。反應(yīng)混合物溶解于EtOAc(25ml)中，用2M HCl水溶液(25ml)洗滌。干燥有機(jī)萃取物(MgSO4)、過濾并減壓蒸發(fā)。通過裝填氨基丙基SPE(2g)純化，用甲醇洗滌，然后產(chǎn)物用5％乙酸的甲醇溶液洗脫。含有產(chǎn)物的部分蒸發(fā)后，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(27mg，33％)。NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)0.85(t，3H，J＝7Hz)，1.20-1.34(m，4H)，1.57-1.67(m，2H)，3.84(t，2H，J＝7Hz)，11.19(s，1H)，14.38(br.s，1H)；m/z257.2[MH+]。
實施例138-氯-3-(3-甲基丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)8-氯-3-(3-甲基丁基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(1.5g，6.6mmol)的DMF(40ml)溶液用碳酸鈉(0.9g，8.5mmol)和1-溴-3-甲基丁烷(1.04g，6.9mmol)處理。攪拌后的混合物在50℃下加熱18小時，然后冷卻并蒸發(fā)至干。殘余物用水(60ml)處理，用乙酸乙酯(3×80ml)萃取。有機(jī)部分合并后，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物用二乙醚和環(huán)己烷的混合物研磨，得到為白色固體的產(chǎn)物，將其濾出后干燥。得到為白色固體的標(biāo)題化合物m/z297[MH+]。
b)8-氯-3-(3-甲基丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-3-(3-甲基丁基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.074g，0.25mmol)的THF(2ml)溶液用嗎啉(0.035ml，4.0mmol)處理，混合物通過向反應(yīng)器中反復(fù)施加真空和氮?dú)鈦沓龤??；旌衔镫S后用四(三苯基膦)鈀(0)(0.03g，0.026mmol)在除氣的THF(0.5ml)中的溶液處理。2小時后，混合物用2M鹽酸水溶液(2ml)和二乙醚(3ml)處理。濾出沉淀析出的產(chǎn)物，用二乙醚洗滌并干燥。得到為白色固體的標(biāo)題化合物(0.036g，56％)。NMR δH(400MHz，d6-DMSO)；0.91(d，6H，J＝6.3Hz)，1.47-1.62(m，3H)，3.87(t，2H，J＝7.5Hz)，11.19(br.s，1H)，14.38(br.s，1H)；m/z257，259[MH+]。
實施例144-(8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)丁腈
使用4-溴丁腈作為烷基化試劑，按照實施例13制備。
NMRδH(400MHz，d6-DMSO)；1.89-2.00(m，2H)，2.55(t，2H，J＝7.0Hz)，3.95(t，2H，J＝6.5Hz)，11.25(br.s，1H)，14.40(br.s，1H)；m/z254[MH+]。
實施例158-氯-3-(2-環(huán)己基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(100mg，0.442mmol)與碳酸鈉(52mg，0.486mmol)在無水DMF(3ml)中攪拌30分鐘。加入環(huán)己基乙基溴化物(93mg，0.486mmol)，混合物在37-40℃、氮?dú)夥障聰嚢?5小時，接著在90℃下加熱18小時。冷卻后，溶液通過抽空和引入氮?dú)鈹?shù)次而除氣，加入四(三苯基膦)鈀(0)(76mg，0.066mmol)和嗎啉(0.385ml，4.42mmol)，然后混合物攪拌18小時。繼續(xù)加入一定量的四(三苯基膦)鈀(0)(50mg，0.043mmol)和嗎啉(0.2ml)后，繼續(xù)攪拌1小時。加入乙酸乙酯和2M HCl水溶液(各為大約10ml)，有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌并蒸發(fā)。殘余物溶解于THF中，裝填在5g氨基丙基SPE柱上。柱用THF洗滌，再用MeOH洗滌，酸性產(chǎn)物用AcOH的MeOH溶液(由5％升至10％)洗脫。所得到的產(chǎn)物進(jìn)一步通過自動制備性(autoprep)HPLC純化，得到標(biāo)題化合物，5.5mg，3％。
NMRδH(400MHz，d6-DMSO)0.80-0.95(m，2H)，1.05-1.35(m，4H)，1.45-1.55(m，2H)，1.55-1.70(m，3H)，1.70-1.80(m，2H)，3.86(t，2H，J＝8Hz)，11.07(s，1H)，一個可交換質(zhì)子未觀察到。m/z 297(MH+)。
實施例163-丁基-1-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈
a)3-丁基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將攪拌后的7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(10g，52mmol)的無水DMF(100ml)溶液用K2CO3(7.91g，57.2mmol)處理，10分鐘后加入BuI(6.51ml，57.2mmol)。反應(yīng)2天后，反應(yīng)混合物在2M HCl(aq)和EtOAc之間分配。有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮，得到灰白色固體。將其用熱環(huán)己烷洗滌并真空干燥，得到標(biāo)題化合物(8.87g，68％)；m/z249.3[MH+]。
b)3-丁基-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將攪拌后的3-丁基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(1.0g，4.03mmol)的無水DMF(10ml)溶液用Na2CO3(470mg，4.43mmol)處理，再用甲基碘化物(275μl，4.43mmol)處理?；旌衔镌?5℃下加熱17小時。加入K2CO3(500mg，3.6mmol)和甲基碘化物(275μl，4.43mmol)，然后在50℃下繼續(xù)攪拌18小時。反應(yīng)混合物放冷后，在2M HCl(aq)和EtOAc之間分配。有機(jī)層分離后，水層用EtOAc萃取不止一次。合并的萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮得到黃色/褐色油狀物(1.24g)。產(chǎn)物通過二氧化硅SPE(10g)純化，用EtOAc/環(huán)己烷混合物洗脫。產(chǎn)物部分合并后，濃縮得到為淺黃色固體的標(biāo)題化合物(1.11g，定量)；m/z263.3[MH+]。
c)3-丁基-1-甲基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-甲醛
將裝填有3-丁基-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(300mg，1.14mmol)和無水THF(6ml)的預(yù)干燥燒瓶在氮?dú)夥障吕鋮s至-75℃，然后用LiHMDS(1.37ml的1.0M THF溶液)處理。所得到的溶液在1.5小時內(nèi)溫?zé)嶂?60℃，然后加入無水DMF(177μl，2.29mmol)。溶液在3小時內(nèi)溫?zé)嶂?10℃，然后將其用飽和NH4Cl(aq)溶液猝滅?；旌衔镌?M HCl(aq)和EtOAc之間分配。有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮得到褐色油狀物(350mg)。產(chǎn)物通過SPE(Si，10g)純化，用EtOAc/環(huán)己烷混合物洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(131mg，39％)；NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)0.91(t，3H，J＝7.5Hz)，1.28-1.39(m，2H)，1.63-1.73(m，2H)，3.25(s，3H)，4.02(t，2H，J＝7.5Hz)，5.03(dd，1H，J＝17和1Hz)，5.17(dd，1H，J＝10和1Hz)，5.31(app.d，2H，J＝5.5Hz)，5.98-6.09(m，1H)，9.88(s，1H)。
d)3-丁基-1-甲基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈
將3-丁基-1-甲基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-甲醛的無水吡啶(5ml)溶液用羥胺鹽酸鹽(63mg，0.91mmol)處理，同時在50℃下加熱1小時?；旌衔锓爬浜?，濃縮，用乙酸酐(5ml)處理，然后在100℃下加熱2.5小時，在125℃下加熱45分鐘。混合物再次放冷后，在水和EtOAc之間分配。有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮，得到為黃色殘余物的標(biāo)題化合物(230mg粗產(chǎn)物，114％)；m/z 288.3[MH+]。
e)3-丁基-1-甲基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈
將3-丁基-1-甲基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈(230mg，0.80mmol)在無水THF(5ml)和無水DMSO(0.5ml)中的溶液用Pd(PPh3)4(185mg，0.16mmol)處理?；旌衔镌谳p度真空下除氣，加入嗎啉(698μL)，在室溫、氮?dú)夥障路胖脭嚢?小時。黃色溶液在2M HCl(aq)和EtOAc之間分配。有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。殘余物溶于MeOH中，通過氨基丙基SPE(5g)，依次用MeOH、5％AcOH、10％、20％和30％AcOH/MeOH混合物洗脫。產(chǎn)物部分合并后濃縮得到淺黃色固體(116mg)。將其用MeOH洗滌，為白色固體的標(biāo)題化合物通過過濾收集，然后真空干燥(55mg，28％)。NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)0.90(t，3H，J＝7.5Hz)，1.25-1.35(m，2H)，1.59-1.68(m，2H)，3.24(s，3H)，3.96(t，2H，J＝7Hz)，NH未觀察到δH15；m/z 248.2[MH+]。
實施例171-甲基-2，6-二氧代-3-戊基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈
a)3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.61g，3.2mmol)、碳酸鈉(0.60g，5.7mmol)和戊基碘化物(0.64g，3.2mmol)在50℃的DMF(5ml)中攪拌18小時。溶液冷卻后，在乙酸乙酯和鹽水之間分配，有機(jī)層分離后干燥(MgSO4)并濃縮。在二氧化硅上色譜處理(用二氯甲烷至5∶1二氯甲烷/乙酸乙酯梯度洗脫)，得到為淺黃色固體的標(biāo)題化合物(0.47g，56％)。m/z263[MH+]。
b)1-甲基-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.20g，0.76mmol)、碳酸鉀(0.4g，2.9mmol)和甲基碘化物(0.5ml，4.9mmol)在50℃的DMF(5ml)中攪拌加熱3小時。溶液放冷后在乙酸乙酯和鹽水之間分配。有機(jī)層分離后，干燥(MgSO4)并濃縮，得到標(biāo)題化合物(0.21g，100％)。m/z277[MH+]。
c)1-甲基-2，6-二氧代-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-甲醛
在-78℃下，向1-甲基-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(1.05g，3.6mmol)的THF(15ml)溶液中在10分鐘內(nèi)加入LiHMDS(4ml，1M己烷溶液，4mmol)，溶液攪拌0.5小時。加入DMF(0.5ml)，溶液在-78℃下繼續(xù)攪拌0.5小時，然后用冷卻浴在2小時內(nèi)溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度。反應(yīng)用2N鹽酸(3ml)猝滅，然后在乙酸乙酯和鹽水之間分配。有機(jī)層分離后干燥并濃縮。粗產(chǎn)物在二氧化硅上色譜處理(用二氯甲烷至5∶1二氯甲烷/乙酸乙酯梯度洗脫)，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(0.35g，30％)。m/z305[MH+]。
d)1-甲基-2，6-二氧代-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈
將1-甲基-2，6-二氧代-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-甲醛(0.18g，0.6mmol)和羥胺鹽酸鹽(0.053g，0.76mmol)在50℃的吡啶(5ml)中加熱1小時，然后冷卻至環(huán)境溫度。加入乙酸酐(0.08g，0.78mmol)后，溶液攪拌18小時。溶液濃縮得到乙酸酯，將其溶解于乙酸酐(3ml)中，同時加熱至130℃，持續(xù)3小時，冷卻后濃縮得到粗產(chǎn)物。在二氧化硅上色譜處理(用二氯甲烷洗脫)，得到為透明油狀物的標(biāo)題化合物(0.17g，95％)。m/z302[MH+]。
e)1-甲基-2，6-二氧代-3-戊基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈
將1-甲基-2，6-二氧代-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈(0.17g，0.56mmol)和嗎啉(0.6ml，6.7mmol)溶解于含有DMSO(0.5ml)的THF(5ml)中。將含有該溶液的燒瓶置于真空下，用氮?dú)馓鎿Q其中的空氣(x3)。加入四(三苯基膦)鈀(0)(0.13g，0.11mmol)，溶液攪拌2.5小時。溶液在乙酸乙酯(20ml)和2N鹽酸(10ml)之間分配，有機(jī)層分離后，用鹽水(3×10ml)洗滌。然后有機(jī)層用2N氫氧化鈉溶液(2×10ml)洗滌，水層用2N鹽酸酸化，用乙酸乙酯(2×10ml)萃取。有機(jī)層分離后，干燥(MgSO4)并濃縮得到標(biāo)題化合物(0.026g，18％)。NMR；δH(400MHz，CDCl3)0.92(t，3H，J＝7Hz)，1.32-1.43(m，4H)，1.79(m，2H)，3.54(s，3H)，4.15(t，2H，J＝7.5Hz)，14.35(br.s，1H)；m/z 262[MH+]。
實施例188-氯-3-己基-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)8-氯-3-({[2-(甲氧基)乙基]氧基}甲基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(6g，26.5mmol)的無水DMF(30ml)溶液中加入碳酸鈉(3.09g，29.15mmol)。在室溫下攪拌10分鐘后，加入甲氧乙氧基甲基氯化物(3.03ml，26.5mmol)，繼續(xù)在氮?dú)夥蘸褪覝叵聰嚢?6小時。反應(yīng)混合物真空濃縮后，殘余物溶解于EtOAc(100ml)中，用鹽水(100ml)洗滌，含水萃取物用DCM(100ml)萃取，干燥有機(jī)萃取物(MgSO4)并合并后真空濃縮。殘余物用EtOAc研磨，濾出固體。濾液濃縮得到淺褐色油狀物，將其吸附在二氧化硅上，通過SPE(Si，50g)純化，用梯度為1∶1的EtOAc/環(huán)己烷-EtOAc洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(2g，24％)，m/z315.2[MH+]。
b)8-氯-1-甲基-3-({[2-(甲氧基)乙基]氧基}甲基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-3-({[2-(甲氧基)乙基]氧基}甲基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(2g，6.37mmol)的無水DMF(15ml)溶液中加入碳酸鈉(0.743g，7mmol)。在室溫下攪拌10分鐘后，加入甲基碘化物(0.44ml，7mmol)，在氮?dú)夥蘸褪覝叵吕^續(xù)攪拌18小時。反應(yīng)混合物真空濃縮后，殘余物溶解于EtOAc(100ml)中，用鹽水(100ml)洗滌。干燥有機(jī)萃取物(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)得到為棕褐色油狀物的標(biāo)題化合物(85％純度)(2.98g，定量)，m/z329.2[MH+]。
c)8-氯-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-1-甲基-3-({[2-(甲氧基)乙基]氧基}甲基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(2.9g，6.37mmol)的二烷(20ml)和水(20ml)溶液中加入5M HCl(20ml)。所得到的混合物在100℃和氮?dú)夥障录訜?8小時。反應(yīng)混合物隨后真空濃縮，殘余物溶解于EtOAc(100ml)中，用水洗滌。干燥有機(jī)萃取物(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)。通過SPE(Si，20g)純化，用2∶3 EtOAc/環(huán)己烷洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(1.04g，68％)。m/z241.1[MH+]。
或者，8-氯-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮也可以采用SEM保護(hù)制備得到。
a)8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]氧基}甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(5g，22.1mmol)的DMF(80ml)溶液中加入2-2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物(4.3ml，24.2mmol)和碳酸鈉(2.6g，24.2mmol)。在室溫下攪拌過夜后，繼續(xù)加入2-2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物(4.3ml，24.2mmol)和碳酸鈉(1.3g，12.1mmol)，繼續(xù)攪拌2小時。反應(yīng)混合物隨后在5％LiCl水溶液和乙酸乙酯之間分配。有機(jī)萃取物分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。通過使用二氧化硅柱的BiotageTM色譜法純化，用1∶4-1∶2乙酸乙酯/環(huán)己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物(3.14g，40％)；m/z374.2[MNH4+]。
b)8-氯-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]氧基}甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]氧基}甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(3.14g，8.82mmol)的DMF(50ml)溶液中加入甲基碘化物(0.659ml，10.58mmol)和碳酸銫(3.45g，10.58mmol)，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物在水和乙酸乙酯之間分配。有機(jī)萃取物分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮，得到標(biāo)題化合物2.99g(92％)；m/z388[MNH4+]。
c)8-氯-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3-({[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]氧基}甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(2.99g，8.08mmol)的DCM(20ml)溶液中加入TFA(10ml)，反應(yīng)在室溫下攪拌2.5小時。反應(yīng)混合物隨后濃縮，殘余物再用DCM處理，同時蒸發(fā)不止一次。通過SPE(Si)純化，用1∶9-4∶1乙酸乙酯/環(huán)己烷洗脫，得到不純產(chǎn)物(1.31g)，將其溶解于甲醇(20ml)中，用飽和碳酸鉀水溶液(20ml)處理。攪拌過夜后，混合物在含有2M HCl(1ml)的水和乙酸乙酯之間分配。有機(jī)萃取物分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮得到標(biāo)題化合物0.87g(45％)；m/z241.1[MH+]。
d)8-氯-3-己基-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(100mg，0.42mmol)的無水DMF(3ml)溶液中加入碳酸鈉(58mg，0.54mmol)，攪拌10分鐘后，加入己基碘化物(0.08ml，0.54mmol)，反應(yīng)混合物在室溫和氮?dú)夥障聰嚢?0小時。然后加入Pd(PPh3)4(73mg，0.063mmol)，反應(yīng)器抽空后用氮?dú)鉀_洗(x3)，加入嗎啉(0.37ml，4.3mmol)，在室溫和氮?dú)夥障吕^續(xù)攪拌4小時。反應(yīng)混合物用EtOAc(25ml)稀釋，用2M HCl水溶液(25ml)洗滌。干燥有機(jī)萃取物(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)。通過將化合物裝填入氨基丙基SPE(5g)純化，用MeOH洗滌后，產(chǎn)物用5％AcOH/MeOH洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(65mg，54％)。NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)0.85(t，3H，J＝7Hz)，1.23-1.33(m，6H)，1.58-1.68(m，2H)，3.22(s，3H)，3.91(t，2H，J＝7.5Hz)，14.46(br.s，1H)；m/z285.3[MH+]。
實施例198-氯-1-甲基-3-丙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
按照類似于實施例18的方式制備，但是使用丙基碘化物在N3上烷基化。NMRδH(400MHz，d6-DMSO)0.87(t，3H，J＝7.5Hz)，1.61-1.73(m，2H)，3.22(s，3H)，3.89(t，2H，J＝7.5Hz)，14.45(br.s，1H)，m/z243[MH+]。
實施例201，3-二丁基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈
a)1，3-二丁基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將1，3-二-N-丁基黃嘌呤(10g，38mmol)的無水DMF(80ml)溶液用K2CO3(5.2g，38mmol)處理，再用烯丙基溴(3.6ml，42mmol)處理?；旌衔镌?5℃和氮?dú)夥障录訜?8小時。冷卻至室溫后，混合物在水和EtOAc之間分配。加入幾毫升2M HCl(aq)幫助分離。有機(jī)層分離后，水層用EtOAc萃取不止一次。合并的萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮，得到為灰白色固體的標(biāo)題化合物(12.23g，106％)。m/z305.3[MH+]。
b)1，3-二丁基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-羧酸甲酯
將1，3-二丁基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(3.0g，9.9mmol)的無水THF(30ml)溶液冷卻至-50℃，并用LiHMDS(18ml的1.0M THF溶液，17.8mmol)處理。在-50℃下1小時后，加入氯甲酸甲酯(1.9ml，24.6mmol)，混合物在2小時內(nèi)溫?zé)嶂?30℃，然后用飽和NH4Cl(aq)溶液猝滅?；旌衔镌贓tOAc和1M HCl(aq)之間分配。有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮，得到暗橙色油狀物(4.07g)。將該油狀物溶于(taken up)15％EtOAc/環(huán)己烷中，通過Si BiotageTM色譜柱。產(chǎn)物部分合并后，濃縮得到為黃色固體的標(biāo)題化合物(1.35g，38％)。m/z363.2[MH+]。
c)1，3-二丁基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-羧酸
將攪拌后的1，3-二丁基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-羧酸甲酯(1.30g，3.6mmol)的MeOH(15ml)溶液用LiOH(215mg)和水(1.5ml)處理。在室溫下處理3小時后，混合物用水稀釋，用2M HCl(aq)調(diào)節(jié)pH至大約pH5。加入EtOAc后分離，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮，得到為黃色固體的標(biāo)題化合物85％純度(1.2g，88％)。m/z.349.2[MH+]。
d)1，3-二丁基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-甲酰胺
將攪拌后的1，3-二丁基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-羧酸(1.0g，2.9mmol)的無水DMF(10ml)溶液依次用DIPEA(1.1ml)、PyBOP、和2M NH3(3.6ml)處理。2小時后，將產(chǎn)物混合物在2M HCl(aq)和EtOAc之間分配。有機(jī)層分離后，用飽和NaHCO3(aq)溶液、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮，得到橙色油狀物(大約2g)。產(chǎn)物通過BiotageTM色譜法純化，用5％→40％EtOAc/環(huán)己烷混合物洗脫。適宜部分合并后濃縮得到酰胺90％純度(790mg，78％)。m/z.392.3[M+甲酸-H]-。
e)1，3-二丁基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈(carbonitrile)
將1，3-二丁基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-甲酰胺(300mg)的無水DMF(7ml)溶液在0℃下逐滴用POCl3(237μL)處理。除去冰浴，2小時后混合物在水和Et2O之間分配。水層再次用Et2O萃取，合并的萃取物分離后，用水(x2)、鹽水洗滌，然后干燥(MgSO4)并濃縮，得到黃色油狀物(312mg)。將該油狀物溶于(taken up)環(huán)己烷中，通過SPE(Si，10g)純化，用EtOAc/環(huán)己烷混合物洗脫。產(chǎn)物部分濃縮后，得到為無色油狀物的標(biāo)題化合物(150mg，53％)；m/z.330.3[MH+]。
f)1，3-二丁基-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈
將1，3-二丁基-2，6-二氧代-7-(2-丙烯-1-基)-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-8-腈(140mg，0.43mmol)在無水THF(4ml)和無水DMSO(0.4ml)中的溶液用Pd(PPh3)4(74mg，0.064mmol)處理。混合物在輕度真空下除氣，加入嗎啉(371μL)。在室溫和氮?dú)夥障路胖脭嚢?小時。黃色溶液在2M HCl(aq)和EtOAc之間分配。有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。將殘余物溶于(taken up)MeOH中，通過氨基丙基SPE(5g)，依次用MeOH、5％→50％AcOH/MeOH洗脫。洗脫的產(chǎn)物濃縮后含有少許雜質(zhì)，用環(huán)己烷洗凈后得到為灰白色固體的標(biāo)題化合物(30mg，24％)。NMR δH(400MHz，d6-DMSO)0.89(app.td，6H，J＝7和3Hz)，1.25-1.35(m，4H)，12.48-1.55(m，2H)，1.58-1.69(m，2H)，3.87(t，2H，J＝7Hz)，3.95(t，2H，J＝7Hz)，NH未觀察到δH 15；m/z290.3[MH+]。
實施例211，3-二丁基-8-碘-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將攪拌后的1，3-二-N-丁基黃嘌呤(100mg，3.39mmol)的無水DMF(3ml)溶液用NIS(94mg，3.75mmol)處理，然后在室溫和氮?dú)夥障路胖脭嚢?3小時。混合物在飽和Na2SO3(aq)溶液和EtOAc之間分配。有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮。產(chǎn)物經(jīng)通過SPE(Si，5g)柱純化，用EtOAc/環(huán)己烷混合物洗脫。產(chǎn)物部分濃縮得到為白色固體的標(biāo)題化合物(75mg，51％)；NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)(app.td，6H，J＝7.5和4Hz)，1.21-1.34(m，4H)，1.45-1.54(m，2H)，1.56-1.66(m，2H)，3.84(t，2H，J＝7.5Hz)，3.93(t，2H，J＝7.5Hz)，14.10(s，1H)；m/z 391.3[MH+]。
實施例22(3-丁基-8-氯-2，6-二氫代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基)乙腈
向3-丁基-8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(200mg，0.707mmol)和Cs2CO3(254mg，0.778mmol)的無水DMF(5ml)溶液中加入氯乙腈(0.054ml，0.85mmol)?；旌衔镌?0℃下加熱18小時，然后冷卻至室溫，在輕度真空下除氣，隨后引入氮?dú)?。重?fù)上述步驟兩次。加入Pd(PPh3)4(82mg，0.071mmol)，混合物除氣不止一次，然后加入嗎啉(0.617ml，7.07mmol)，混合物在室溫下放置攪拌3小時。混合物在2M HCl(aq)和EtOAc之間分配。有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。將殘余物溶于(takenup)MeOH中，通過氨基丙基SPE(5g)，用MeOH洗脫，再用5-10％AcOH/MeOH洗脫。產(chǎn)物部分濃縮得到標(biāo)題化合物52mg(26％)；NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)0.90(t，3H，J＝7.5Hz)，1.26-1.37(m，2H)，1.60-1.69(m，2H)，3.94(t，2H，J＝7.5Hz)，4.87(s，2H)，14.72(br s，1H)；m/z299.2[MNH4+]。
實施例23(8-氯-2，6-二氧代-3-丙基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基)乙腈
a)8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3-丙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(1.5g，6.6mmol)、1-碘丙烷(1.2g，6.9mmol)和碳酸鈉(0.9g，8.5mmol)在DMF(40ml)中的混合物在50℃下加熱18小時。反應(yīng)混合物真空濃縮后，殘余物用水(60ml)處理，用乙酸乙酯(3×80ml)萃取。干燥合并的有機(jī)萃取物(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)。殘余物用乙醚/環(huán)己烷研磨，固體濾出后干燥得到標(biāo)題化合物(0.82g，46％)；m/z269.1[MH+]。
b)(8-氯-2，6-二氧代-3-丙基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基)乙腈
將8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3-丙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.067g，0.25mmol)的DMF(2ml)溶液用碳酸銫(0.082g，0.25mmol)和溴代乙腈(0.044g，0.37mmol)處理。混合物在80℃下加熱4小時，然后冷卻至環(huán)境溫度。真空除去DMF，殘余物用THF(2ml)處理。溶劑通過連續(xù)向反應(yīng)混合物施加真空和氮?dú)鈦沓龤??；旌衔镫S后用嗎啉(0.035ml，0.4mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.03g，0.026mmol)處理。2小時后，混合物用2M鹽酸水溶液(2ml)處理，產(chǎn)物用氯仿(3×5ml)萃取。有機(jī)部分合并后蒸發(fā)。殘余物通過質(zhì)量定向HPLC純化，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(0.022g，33％)。NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)，0.88(t，3H，J＝7.5Hz)，1.63-1.74(m，2H)，3.91(t，2H，J＝7.5Hz)，4.87(s，2H)，NH未觀察到δH 14；m/z268[MH+]。
實施例24[8-氯-3-(2-環(huán)丙基乙基)-2，6-二氧代-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基]乙腈
使用8-氯-3-(2-環(huán)丙基乙基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮，按照(8-氯-2，6-二氧代-3-丙基-2，3，6，7-四氫-1H-嘌呤-1-基)乙腈(實施例23)制備。
NMRδH(400MHz，d6-DMSO)-0.06-0.00(m，2H)，0.31-0.39(m，2H)，0.64-0.74(m，1H)，1.57(q，2H，J＝7Hz)，4.04(t，2H，J＝7Hz)，4.87(s，2H)，14.68(br.s，1H)；m/z294[MH+]。
實施例258-氯-1-乙基-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤2，6-二酮
a)8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(1.5g，6.62mmol)的無水DMF(50ml)溶液中加入碳酸氫鈉(0.98g，9.25mmol)，再加入1，1，1-三氟-2-碘乙烷(1.20g，5.72mmol)，混合物在50℃和氮?dú)夥障聰嚢杓訜?小時。溶液在10小時內(nèi)冷卻至環(huán)境溫度，然后在120℃下加熱48小時。加入另外的1，1，1-三氟-2-碘乙烷(0.43g，2.05mmol)，混合物加熱至120℃，繼續(xù)持續(xù)3小時。減壓除去溶劑后，殘余物用DCM研磨，然后過濾。
使用8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(3.80g，16.8mmol)、碳酸氫鈉(2.45g，23.1mmol)和1，1，1-三氟-2-碘乙烷(4.05g，19.3mmol)在無水DMF(125ml)中重復(fù)上述反應(yīng)?；旌衔镌?20℃下加熱16小時，減壓除去溶劑后，殘余物用DCM研磨，然后過濾。
合并前兩次所得到的DCM濾液，減壓濃縮后，使用BiotageTM色譜法純化(依次用環(huán)己烷/乙酸乙酯1∶1、7∶3洗脫)，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(1.6g，23％)。m/z309[MH+]。
b)8-氯-1-乙基-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.070g，0.23mmol)的無水DMF(2ml)溶液中加入碳酸銫(0.085g，0.26mmol)，再加入1-碘乙烷(0.061g，0.39mmol)?；旌衔镌?0℃下加熱5小時，然后在環(huán)境溫度和氮?dú)夥障聰嚢?6小時。使用真空離心機(jī)減壓除去溶劑，殘余物溶解于無水THF(2.5ml)中。向混合物中加入四(三苯基膦)鈀(0)(0.030g，0.026mmol)和嗎啉(0.040g，0.45mmol)，反應(yīng)混合物用氮?dú)獬龤猓缓笤诃h(huán)境溫度下攪拌72小時?；旌衔镌诼确潞?N HCl水溶液之間分配，水層重新萃取。有機(jī)萃取物合并后，在氮?dú)饬飨抡舭l(fā)，然后使用氨基丙基SPE純化(用乙酸∶甲醇∶DCM，1∶2∶2洗脫)，得到為白色固體的標(biāo)題化合物＞95％純度(0.041g，60％)。NMRδH(400MHz，d4-MeOD)1.20(t，3H，J＝7Hz)，4.03(q，2H，J＝7Hz)，4.73(q，2H，J＝8.5Hz)，m/z297[MH+]。
實施例268-氯-1-丙基-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
使用丙基碘化物在N1上烷基化，按照類似于實施例25的方式制備。
NMRδH(400MHz，CDCl3)0.99(t，3H，J＝7.5Hz)，1.68-1.79(m，2H)，4.07(t，2H，J＝7.5Hz)，4.77(q，2H，J＝8.5Hz)，NH未觀察到δH 13；m/z311[MH+]。
實施例278-氯-1-(4，4，4-三氟丁基)-3-(2，2，2-三氟乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
使用4-溴-1，1，1-三氟丁烷在N1上烷基化，按照類似于實施例25的方式制備。
NMR；δH(400MHz，d4-MeOD)1.83-1.95(m，2H)，2.14-2.32(m，2H)，4.06(t，2H，J＝7Hz)，4.74(q，2H，J＝8.5Hz)，m/z377[M-H]-。
實施例288-溴-1-甲基-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)1-甲基-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將1-甲基-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.45g，1.63mmol)、苯基硅烷(0.25ml，2.03mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.35g，0.3mmol)溶解于含有乙酸(6ml)的DCM(10ml)中。通過抽空燒瓶，然后填入氮?dú)?x3)，用氮?dú)庵脫Q出燒瓶中的空氣，然后將反應(yīng)混合物加熱至45℃，持續(xù)4小時。溶液冷卻后，用DCM稀釋，然后用水和飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。有機(jī)層分離后，干燥并濃縮得到粗產(chǎn)物。通過SPE(二氧化硅)純化，用乙醚洗脫得到產(chǎn)物0.06g，16％。m/z237[MH+]。
b)8-溴-1-甲基-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將1-甲基-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.06g，0.25mmol)溶解于DMF(2ml)中，加入N-溴代琥珀酰亞胺(0.045g，0.25mmol)?；旌衔飻嚢?8小時后，濃縮，粗產(chǎn)物通過氨基丙基SPE(5g)洗脫純化，先用甲醇再用5％乙酸/甲醇洗脫產(chǎn)物。產(chǎn)物進(jìn)一步通過質(zhì)量定向自動化制備(mass directed autoprep)純化，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(0.01g，12％)。NMRδH(400MHz，d6-DMSO)0.86(t，3H，J＝7Hz)，1.21-1.35(m，4H)，1.59-1.68(m，2H)，3.22(s，3H)，3.91(t，2H，J＝7.5Hz)，14.39(br.s，1H)；m/z315，317[MH+]。
實施例298-氯-1-甲基-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)8-氯-1-甲基-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(3.9g，13.3mmol)的DMF(35ml)溶液中加入碳酸銫，混合物攪拌10分鐘，然后加入碘甲烷(0.91ml，14.6mmol)，混合物攪拌18小時。反應(yīng)在乙酸乙酯和2N HCl溶液之間分配，有機(jī)層分離后，干燥(MgSO4)并濃縮。在二氧化硅SPE上色譜處理，用環(huán)己烷/乙酸乙酯(5％-20％)洗脫，得到為油狀物的產(chǎn)物2.78g，68％。m/z311[MH+]。
b)8-氯-1-甲基-3-戊基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將四(三苯基膦)鈀(1.0，0.90mmol)置于抽空后再充滿氮?dú)?x3)的燒瓶中。加入8-氯-1-甲基-3-戊基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(2.78g，8.96mmol)在50ml THF中的溶液，燒瓶抽空不止一次，然后引入氮?dú)狻＜尤隓MSO(4.5ml)和嗎啉(7.8ml，89.6mmol)，溶液攪拌5小時。溶液在乙酸乙酯和2N HCl溶液之間分配，有機(jī)部分用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。粗產(chǎn)物通過氨基丙基SPE純化，先用甲醇再用含有0-15％乙酸的甲醇洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物1.12g，46％。NMRδH(400MHz，d6-DMSO)0.86(t，3H，J＝7Hz)，1.21-1.35(m，4H)，1.59-1.68(m，2H)，3.22(s，3H)，3.91(t，2H，J＝7.5Hz)，NH not observed；m/z271[MH+]。
實施例303-丁基-8-氯-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6
使用3-丁基-8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮作為原料，按照類似于實施例29的方式制備。
NMRδH(400MHz，d6-DMSO)0.88(t，3H，J＝7Hz)，1.25-1.35(m，2H)，1.6-1.66(m，2H)，3.22(s，3H)，3.91(t，2H，J＝7.5Hz)，14.46(br s，1H)；m/z 257[MH+]。
實施例314-(8-氯-1-甲基-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)丁腈
向8-氯-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(70mg，0.292mmol)和Na2CO3(37mg，0.35mmol)在DMF(3ml)中的混合物中加入4-溴丁腈(0.035ml，0.35mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，然后在輕度真空下除氣并引入氮?dú)狻Ｈ缓笠来渭尤隤d(PPh3)4(50mg，0.044mmol)和嗎啉(0.254ml，2.92mmol)。在室溫下攪拌2小時后，進(jìn)一步加入現(xiàn)制的Pd(PPh3)4(50mg，0.044mmol)，繼續(xù)攪拌過夜。反應(yīng)混合物在乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)之間分配，同時加入少量2M HCl以幫助分離。有機(jī)層分離后，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。殘余物溶于(taken up)MeOH中，通過氨基-丙基SPE(5g)，依次用MeOH、3-5％AcOH/MeOH洗脫。產(chǎn)物部分濃縮得到標(biāo)題化合物39.7mg(51％)；NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)1.91-2.00(m，2H)，2.55(t，2H，J＝7Hz)，3.22(s，3H)，4.03(t，2H，J＝7Hz)，14.49(br.s，1H)；m/z268.1[MH+]。
實施例328-氯-1-甲基-3-(4，4，4-三氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.048g，0.2mmol)的THF(1ml)溶液用碳酸銫(0.78g，0.24mmol)和4-溴-1，1，1-三氟丁烷(0.044g，0.25mmol)處理?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌1小時，然后在50℃下加熱4小時，隨后冷卻?；旌衔锿ㄟ^交替向混合物施加真空和氮?dú)鈮簛沓龤猓缓笥脝徇?0.17ml，2mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.023g，0.02mmol)處理，2小時后，混合物小心地用2M鹽酸水溶液(2ml)處理，產(chǎn)物用氯仿(2×4ml)萃取。合并的有機(jī)層蒸發(fā)后，產(chǎn)物通過反相質(zhì)量定向HPLC純化，得到標(biāo)題化合物6.2mg(10％)；NMR；δH(400MHz，d6-DMSO)；1.84-1.92(m，2H)，2.28-2.35(m，2H)，3.22(s，3H)，3.99-4.03(m，2H)14.31(br.s，1H)；m/z311.2[MH+]。
實施例333-丁基-8-氯-1-乙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)3-丁基-7-(苯基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
在40℃下，將7-芐基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(17.14g，70.8mmol)[Synthetic Communications，20(16)，2459-2467，1990]和碳酸鉀(11.43g，82.8mmol)懸浮于DMF(400ml)中。攪拌30分鐘后，加入丁基碘化物(8.76mL，77.0mmol)，混合物在40℃下攪拌過夜。加入50％乙酸水溶液(60ml)，溶液減壓濃縮。殘余物懸浮于水(500ml)中，產(chǎn)物用氯仿萃取。有機(jī)層合并后濃縮，產(chǎn)物用快速色譜法分離出來，用1％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，得到產(chǎn)物(9.49g，45％)；1H NMR(400MHz；CDCl3)δ0.95(3H，t)，1.34-1.41(2H，m)，1.70-1.78(2H，m)，4.05(2H，t)，5.46(2H，s)，7.31-7.40(5H，m)，7.56(1H，s)，8.21(1H，br.s)；m/z299[MH+]。
b)3-丁基-1-乙基-7-(苯基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將3-丁基-7-(苯基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.429g，1.24mmol)和碳酸鉀(0.256g，1.85mmol)懸浮于DMF(8ml)中，加入碘乙烷(0.113mL，1.42mmol)。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌過夜。反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干后，殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。有機(jī)層用水洗滌，再用鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得到標(biāo)題化合物；1H NMR(400MHz；CDCl3)δ0.96(3H，t)，1.25(3H，t)，1.36-1.45(2H，m)，1.72-1.76(2H，m)，4.05-4.13(4H，m)，5.50(2H，s)，7.32-7.40(5H，m)，7.52(1H，s)；m/z327[MH+]。
c)3-丁基-1-乙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將3-丁基-1-乙基-7-(苯基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(0.353g，1.08mmol)溶解于乙酸(30ml)中，加入20％氫氧化鈀-碳(0.238g)，混合物在氫氣氛(50psi)下振搖過夜。催化劑通過Celite過濾除去，用乙酸洗滌。濾液減壓濃縮得到標(biāo)題化合物(0.227g，89％)；1H NMR(400MHz；CDCl3)δ0.97(3H，t)，1.28(3H，t)，1.38-1.47(2H，m)，1.74-1.82(2H，m)，4.12-4.17(4H，m)，7.80(1H，s)；m/z 237[MH+]。
d)3-丁基-8-氯-1-乙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將3-丁基-1-乙基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(100mg，0.42mmol)和NCS(56mg，0.42mmol)懸浮于MeCN(5ml)中，在120℃下微波輻射加熱。反應(yīng)混合物減壓濃縮后，通過使用HPLC分離標(biāo)題化合物。[用于純化的HPLC條件23分鐘運(yùn)行時間。溶劑0.1％TFA的MeCN溶液和0.1％TFA的水溶液。MeCN在15分鐘內(nèi)由5％線性地升至95％。保持在95％持續(xù)2分鐘。然后在1分鐘內(nèi)線性地降至5％，在5％平衡5分鐘后進(jìn)行下一次注射。]；1HNMR(400MHz；CDCl3)δ0.97(3H，t)，1.31(3H，t)，1.38-1.45(2H，m)，1.72-1.80(2H，m)，4.09-4.20(4H，m)，13.40(1H，br.s)；m/z 271[MH+]。
實施例348-氯-3-(4-甲基戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由1-溴-4-甲基戊烷(81mg)出發(fā) 由MeOH重結(jié)晶 收率34.8mg(29％)，NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 0.83(d，6H，J＝8Hz)，1.12-1.22(m，2H)，1.55(七重峰，1H，J＝8Hz)，1.58-1.68(m，2H)，3.83(t，2H，J＝7.5Hz)，11.20(s，1H)；m/z271[MH+]。
實施例356-(8-氯-2，6-二氧代-1，2，6，7-四氫-3H-嘌呤-3-基)-2，2-二甲基己腈
由6-溴-2，2-二甲基己腈(100mg)出發(fā) 由MeOH重結(jié)晶 收率48.5mg(35％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 1.27(s，6H)，1.35-1.44(m，2H)，1.54-1.59(m，2H)，1.63-1.72(m，2H)，3.88(t，2H，J＝7Hz)，11.24(s，1H)；m/z310[MH+]。
實施例368-氯-3-(6-甲基庚基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由1-溴-6-甲基庚烷(95mg)出發(fā) 由MeOH重結(jié)晶 收率36mg(27％)，NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 0.83(d，6H，J＝7.5Hz)，1.10-1.17(m，2H)，1.20-1.34(m，4H)，1.48(七重峰，1H，J＝7.5Hz)，1.58-1.68(m，2H)，3.84(t，2H，J＝8Hz)，11.22(s，1H)；m/z299[MH+]。
實施例378-氯-3-辛基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(100mg，0.44mmol)與碳酸鈉(52mg，0.49mmol)在無水DMF(3ml)中攪拌20分鐘，然后加入1-碘辛烷(118mg，0.49mmol)，混合物在氮?dú)夥蘸?0℃下攪拌65小時。冷卻至室溫后，混合物通過抽空容器和重新填入氮?dú)鈹?shù)次來徹底除氣。加入四(三苯基膦)鈀(0)(102mg，0.09mmol)，混合物再次除氣，然后加入嗎啉(0.385ml，4.4mmol)，繼續(xù)攪拌6.5小時。加入2M HCl和EtOAc，過濾兩相體系。產(chǎn)物主要包含在過濾后的固體中，將其由THF-乙腈重結(jié)晶，再由MeOH重結(jié)晶，過濾后得到純的標(biāo)題化合物。
收率48mg(36％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 0.84(t，3H，J＝7Hz)，1.18-1.30(m，10H)，1.57-1.66(m，2H)，3.84(t，2H，J＝7.5Hz)，11.22(s，1H)；m/z299[MH+]。
實施例388-氯-3-癸基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由1-溴癸烷(108mg)出發(fā)，按照實施例37的方法制備。通過由MeOH重結(jié)晶，再質(zhì)量定向自動化制備進(jìn)行進(jìn)一步的純化。
收率2mg(1.4％)；NMR；(400MHz，d4-甲醇)δH 0.89(t，3H，J＝7Hz)，1.26-1.38(m，14H)，1.68-1.76(m，2H)，3.97(t，2H，J＝7.5Hz)；m/z327[MH+]。
實施例398-氯-3-(環(huán)己基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-酮
由(溴甲基)環(huán)己烷(87mg)出發(fā)，除了在80℃下額外加熱18小時外，按照類似于實施例37的方式制備。
由MeOH重結(jié)晶。
收率31mg(25％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 0.90-1.02(m，2H)，1.08-1.20(m，3H)，1.53-1.69(m，5H)，1.77-1.87(m，1H)，3.70(d，2H，J＝7.5Hz)，11.21(s，1H)；m/z283[MH+]。
實施例40-46的一般方法 向8-氯-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(100mg，0.442mmol)的無水THF(3ml)溶液中加入醇(0.442mmol)?；旌衔镌?℃下攪拌，同時加入偶氮二羧酸二芐基酯(280mg，94％純度，0.88mmol)的無水THF(2ml)溶液，接著在5分鐘內(nèi)逐滴加入三苯基膦(232mg，0.88mmol)的無水THF溶液。在0℃下持續(xù)30分鐘后，在室溫下繼續(xù)攪拌18小時。混合物通過抽空和用氮?dú)庠偬畛浞磻?yīng)器數(shù)次來除氣，然后加入四(三苯基膦)鈀(0)(102mg，0.088mmol)，再加入嗎啉(0.385ml，4.42mmol)，繼續(xù)攪拌4.5小時。加入EtOAc和2M HCl，混合物過濾后除去黃色沉淀析出的固體。分離濾液，有機(jī)相濃縮后重新溶解于含有THF和MeOH的混合物中。將上述溶液通過氨基丙基SPE，依次用THF-MeOH(1∶1)、MeOH以及5％AcOH的DCM-MeOH(1∶1)溶液洗脫。所得到的產(chǎn)物部分濃縮后，由MeOH重結(jié)晶得到純標(biāo)題化合物。
實施例40(+/-)-8-氯-3-(3-甲基戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由(+/-)-3-甲基-1-戊醇45mg出發(fā) 收率20.2mg(17％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 0.83(t，3H，J＝7.5Hz)，0.90(d，3H，J＝6.5Hz)，1.12-1.21(m，1H)，1.30-1.48(m，3H)，1.58-1.68(m，1H)，3.87(t，2H，J＝7.5Hz)，11.21(s，1H)；m/z271[MH+]。
實施例418-氯-3-(2-環(huán)戊基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由2-環(huán)戊基乙醇50mg出發(fā) 收率24.6mg(20％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 1.04-1.15(m，2H)，1.40-1.67(m，6H)，1.70-1.82(m，3H)，3.86(t，2H，J＝7.5Hz)，11.22(s，1H)；m/z283[MH+]。
實施例428-氯-3-(環(huán)丙基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由環(huán)丙基甲醇32mg出發(fā) 收率22.3mg(21％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 0.34-0.40(m，2H)，0.40-0.48(m，2H)，1.17-1.27(m，1H)，3.74(d，2H，J＝7.5Hz)，11.23(s，1H)；m/z241[MH+]。
實施例43(+/-)-8-氯-3-(2-甲基丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由(+/-)-2-甲基-1-丁醇39mg出發(fā) 收率12mg(9.5％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 0.81(d，3H，J＝7Hz)，0.86(t，3H，J＝7.5Hz)，1.06-1.17(m，1H)，1.30-1.41(m，1H)，1.90-2.00(m，1H)，3.68(dd，1H，J＝13.5和8Hz)，3.75(dd，1H，J＝13.5和7.5Hz)，11.22(s，1H)；m/z257[MH+]。
實施例44(+/-)-8-氯-3-(2-甲基戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由(+/-)-2-甲基-1-戊醇45mg出發(fā) 收率22.4mg(19％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 0.81(d，3H，J＝7Hz)，0.84(t，3H，J＝7.5Hz)，1.05-1.16(m，1H)，1.16-1.43(m，3H)，1.98-2.09(m，1H)，3.67(dd，1H，J＝13.5和8Hz)，3.74(dd，1H，J＝13.5和7Hz)，11.22(s，1H)；m/z271[MH+]。
實施例458-氯-3-(環(huán)丁基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由環(huán)丁基甲醇38mg出發(fā) 收率30.5mg(27％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 1.73-1.85(m，4H)，1.86-1.97(m，2H)，2.66-2.79(m，1H)，3.90(d，2H，J＝7.5Hz)，11.22(s，1H)；m/z255[MH+]。
實施例468-氯-3-(環(huán)戊基甲基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由環(huán)戊基甲醇44mg出發(fā) 收率15mg(13％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 1.20-1.32(m，2H)，1.42-1.54(m，2H)，1.54-1.66(m，4H)，2.32-2.45(m，1H)，3.79(d，2H，J＝8Hz)，11.22(s，1H)；m/z269[MH+]。
實施例478-氯-3-(3-環(huán)丙基丙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由3-環(huán)丙基-1-丙醇(P.J.Wagner，J.Amer.Chem.Soc.，1981，103，3837-3841)(44mg)出發(fā) 收率27.7mg(23％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH-0.03-+0.03(m，2H)，0.34-0.40(m，2H)，0.65-0.75(m，1H)，1.15-1.23(m，2H)，1.66-1.76(m，2H)，3.87(t，2H，J＝7Hz)，11.15(s，1H)；m/z269[MH+]。
它施例488-氯-3-(2-環(huán)丁基乙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
由2-環(huán)丁基乙醇(P.Vergnon，Eur.J.Med.Chem.，1975，10，65-71)(44mg)出發(fā) 收率21.5mg(18％)；NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH1.53-1.64(m，2H)，1.68-1.85(m，4H)，1.93-2.03(m，2H)，2.19-2.30(m，1H)，3.78(t，2H，J＝7Hz)，11.20(s，1H)；m/z 269[MH+]。
實施例498-氯-3-(4-氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)8-氯-3-(4-氟丁基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
在裝備有攪拌器的1.5ml微波瓶中，向8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(200mg，0.88mmol，1eq)的無水DMSO(1ml)溶液中加入碳酸氫鈉(113mg，1.07mmol，1.2eq)，再加入1-溴-4-氟丁烷(114μl，165mg，1.06mmol，1.2eq)。小瓶密封后，用微波攪拌加熱，保持溫度為120℃，持續(xù)25分鐘，最大功率輸出為300W。所得到的暗褐色溶液用甲醇(1ml)稀釋，通過質(zhì)量定向自動化制備性HPLC純化，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(159mg，60％)。m/z301.3[MH+]。
8-氯-3-(4-氟丁基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮 向8-氯-3-(4-氟丁基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(100mg，0.33mmol，1eq)的無水DCM(2ml)懸浮液中加入四(三苯基膦)鈀(0)(38mg，0.033mmol，10％bw)，再加入乙酸(115μl，121mg，2.01mmol，6eq)和苯基硅烷(410μl，360mg，3.33mmol，10eq)。所得到的淺黃色溶液在環(huán)境溫度下攪拌16小時，得到暗紫色溶液。在氮?dú)饬飨鲁ト軇┖?，殘余物加熱溶解于DMSO/甲醇溶液(3ml，2∶1)中。使凝膠狀混合物冷卻至環(huán)境溫度，過濾后通過質(zhì)量定向自動化制備性HPLC純化，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(35mg，43％)。m/z 261.2[MH+]NMR(400MHz，MeOD)，δH4.45(2H，dt，J＝47和6Hz)，4.03(2H，t，J＝7Hz)，1.90-1.65(4H，m)。
下述化合物按照類似的方式制備，同時適當(dāng)?shù)赝ㄟ^制備性或質(zhì)量定向自動化制備性HPLC純化 實施例508-氯-3-(3-氟丙基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
NMR(400MHz，MeOD)，δH 4.51(2H，dt，J＝47和6Hz)，4.11(2H，t，J＝7Hz)，2.18-2.03(2H，m)。m/z 247[MH+]。
實施例518-氯-3-(5-氟戊基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
NMR(400MHz，MeOD)，δH 4.41(2H，dt，J＝48和6Hz)，3.99(2H，t，J＝8Hz)，1.84-1.63(4H，m)，1.52-1.40(2H，m)。m/z273.29[MH-]。
實施例523-(3-丁烯-1-基)-8-氯-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
將8-氯-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(100mg，0.44mmol)與碳酸鈉(52mg，0.49mmol)在無水DMF(3ml)中攪拌45分鐘，然后加入4-溴-1-丁烯(66mg，0.49mmol)，混合物在氮?dú)夥蘸?0℃下攪拌65小時。冷卻至室溫后，混合物通過抽空容器再填充氮?dú)鈹?shù)次來徹底除氣。加入四(三苯基膦)鈀(0)(102mg，0.09mmol)，混合物再次除氣，然后加入嗎啉(0.385ml，4.4mmol)，繼續(xù)攪拌6.5小時。加入2M HCl和EtOAc，過濾兩相體系除去沉淀析出的黃色固體。濾液的有機(jī)相分離后蒸發(fā)。將殘余物溫?zé)崛芙庥赥HF-MeOH(1∶1)中，裝填在氨基丙基SPE(5g)上，依次用THF-MeOH(1∶1)、MeOH和5％AcOH的MeOH-DCM(1∶1)溶液洗脫。產(chǎn)物部分進(jìn)一步通過質(zhì)量定向自動化制備純化，得到標(biāo)題化合物。
收率27.5mg(26％)，NMR；(400MHz，d6-DMSO)δH 2.40(dt，2H，J＝7和6Hz)，3.93(t，2H，J＝7Hz)，4.97-5.07(m，2H)，5.74-5.85(m，1H)，11.22(s，1H)；m/z 241[MH+]。
實施例538-氯-3-(6-氟己基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
NMR(400MHz，MeOD)，δH 4.40(2H，dt，48和6Hz)，3.98(2H，t，8Hz)，1.80-1.60(4H，m)，1.52-1.35(4H，m)。m/z 287[MH-]。
實施例548-氯-3-乙基-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
a)8-氯-3-({[2-(甲氧基)乙基]氧基}甲基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(6g，26.5mmol)的無水DMF(30ml)溶液中加入碳酸鈉(3.09g，29.15mmol)。在室溫下攪拌10分鐘后，加入甲氧基乙氧基甲基氯化物(3.03ml，26.5mmol)，繼續(xù)在氮?dú)夥蘸褪覝叵聰嚢?6小時。反應(yīng)混合物真空濃縮后，將殘余物溶解于EtOAc(100ml)中，用鹽水(100ml)洗滌，將含水萃取物用DCM(100ml)萃取，干燥有機(jī)萃取物(MgSO4)、合并后真空濃縮。殘余物用EtOAc研磨后，濾出固體。濾液濃縮得到淺褐色油狀物，將其吸附在二氧化硅上，通過SPE(Si，50g)純化，用梯度1∶1 EtOAc/環(huán)己烷-EtOAc洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(2g，24％)，m/z 315.2[MH+]。
b)8-氯-1-甲基-3-({[2-(甲氧基)乙基]氧基}甲基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-3-({[2-(甲氧基)乙基]氧基}甲基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(2g，6.37mmol)的無水DMF(15ml)溶液中加入碳酸鈉(0.743g，7mmol)。在室溫下攪拌10分鐘后，加入甲基碘化物(0.44ml，7mmol)，繼續(xù)在氮?dú)夥蘸褪覝叵聰嚢?8小時。反應(yīng)混合物真空濃縮后，殘余物溶解于EtOAc(100ml)中，用鹽水(100ml)洗滌。干燥有機(jī)萃取物(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)得到為黃褐色油狀物的標(biāo)題化合物(85％純度)(2.98g，定量)，m/z 329.2[MH+]。
c)8-氯-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-1-甲基-3-({[2-(甲氧基)乙基]氧基}甲基)-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(2.9g，6.37mmol)在二烷(20ml)和水(20ml)的溶液中加入5M HCl水溶液(20ml)。所得到的混合物在100℃和氮?dú)夥障录訜?8小時。反應(yīng)混合物隨后真空濃縮，殘余物溶解于EtOAc(100ml)中，用水洗滌。干燥有機(jī)萃取物(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)。通過SPE(Si，20g)純化，用2∶3 EtOAc/環(huán)己烷洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(1.04g，68％)。m/z 241.1[MH+]。
d)8-氯-3-乙基-1-甲基-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮
向8-氯-1-甲基-7-(2-丙烯-1-基)-3，7-二氫-1H-嘌呤-2，6-二酮(100mg，0.42mmol)的無水DMF(3ml)溶液中加入碳酸鈉(58mg，0.54mmol)，攪拌10分鐘后，加入乙基碘化物(0.043ml，0.54mmol)，反應(yīng)混合物在室溫和氮?dú)夥障聰嚢?0小時。隨后加入Pd(PPh3)4(73mg，0.063mmol)，反應(yīng)器抽空后用氮?dú)鉀_洗(x3)，加入嗎啉(0.37ml，4.3mmol)并在室溫和氮?dú)夥障吕^續(xù)攪拌4小時。反應(yīng)混合物用EtOAc(25ml)稀釋，用2M HCl水溶液(25ml)洗滌。干燥有機(jī)萃取物(MgSO4)、過濾并蒸發(fā)。通過將化合物裝填在氨基丙基SPE(5g)上純化，用MeOH洗滌后，產(chǎn)物用5％AcOH/MeOH洗脫，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(67mg，70％)。NMR；dH(400MHz，d6-DMSO)1.20(t，3H，J＝7Hz)，3.22(s，3H)，3.97(q，2H，J＝7Hz)，14.46(1H，br s)；m/z 227.2[M-H]-。
在此將本說明書中所引用的全部出版物，包括但并不限于各種專利和專利申請引入作為參考，就好像每篇獨(dú)立出版物中的全部內(nèi)容被具體和獨(dú)立引入作為參考一樣。
權(quán)利要求
1.選自式(I)化合物及其生理學(xué)功能的衍生物中的實體，
其中
R1選自氫以及可任選被一個或多個選自CN和CF3中的基團(tuán)取代的C1-4烷基；
R2選自未被取代的C3-10烷基、被一個或多個選自氟和CN中的基團(tuán)取代的C1-10烷基、C5鏈烯基、直鏈C4鏈烯基、以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基；
和R3選自鹵素和CN；
條件是
(i)當(dāng)R3表示Cl，且R1表示乙基時，R2不是丙基；
(ii)當(dāng)R3表示Br，且R1表示丙基時，R2不是丙基；
(iii)當(dāng)R3表示Cl或Br，且R1表示丁基時，R2不是丁基；以及
(iv)當(dāng)R1表示C1-4烷基、CH2CN或(CH2)3CF3時，R2不是支鏈烷基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中
R1選自氫、C1-4烷基、CH2CN以及(CH2)3CF3；
R2選自未被取代的C3-10烷基、(CH2)1-5CN、具有一個或多個氟取代基的C2-5烷基、C5鏈烯基以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基；
和R3選自鹵素和CN；
條件是
(i)當(dāng)R3表示Cl，且R1表示乙基時，R2不是丙基；
(ii)當(dāng)R3表示Cl或Br，且R1表示丁基時，R2不是丁基；以及
(iii)當(dāng)R1表示C1-4烷基、CH2CN或(CH2)3CF3時，R2不是支鏈烷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1選自氫和甲基。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項的化合物，其中R2選自未被取代的C4-6正烷基、(CH2)1-3CN、具有一個或多個氟取代基的C3-4烷基以及C5鏈烯基。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項的化合物，其中R3表示鹵素。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項的化合物，其中R3選自氯和溴。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項的化合物，其中R3表示氯。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項的化合物，其用于人藥或獸藥。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項的化合物，其用于治療脂類代謝障礙包括血脂障礙和高脂蛋白血癥和/或炎性疾病或病癥。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項的化合物，其用于治療糖尿病血脂障礙，混合血脂障礙，心力衰竭，血膽脂醇過多癥，心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥，II型糖尿病，I型糖尿病，胰島素耐受性，高脂血癥，神經(jīng)性厭食癥，肥胖癥，冠狀動脈疾病，血栓癥，心絞痛，慢性腎衰竭，周圍血管疾病或者中風(fēng)。
11.選自式(II)化合物及其生理學(xué)功能的衍生物中的實體，
其中
R1選自氫以及可任選被一個或多個選自CN和CF3中的基團(tuán)取代的C1-4烷基；
R2選自未被取代的C2-10烷基、被一個或多個選自氟和CN中的基團(tuán)取代的C1-10烷基、C5鏈烯基、直鏈C4鏈烯基、以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基；
和R3選自鹵素和CN；
其用于制備治療糖尿病血脂障礙，混合血脂障礙，心力衰竭，血膽脂醇過多癥，心血管疾病包括動脈粥樣硬化、動脈硬化、和高甘油三酯血癥，II型糖尿病，I型糖尿病，胰島素耐受性，高脂血癥，神經(jīng)性厭食癥，肥胖癥，冠狀動脈疾病，血栓癥，心絞痛，慢性腎衰竭或者中風(fēng)的藥物。
12.治療具有由HM74A受體激活不足所引起的病癥或者受益于激活HM74A受體的病癥的人或動物對象的方法，所述方法包括向所述人或動物對象給藥有效量的選自式(II)化合物及其生理學(xué)功能的衍生物中的實體，
其中
R1選自氫以及可任選被一個或多個選自CN和CF3中的基團(tuán)取代的C1-4烷基；
R2選自未被取代的C2-10烷基、被一個或多個選自氟和CN中的基團(tuán)取代的C1-10烷基、C5鏈烯基、直鏈C4鏈烯基、以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基；
和R3選自鹵素和CN。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述人或動物對象患有脂類代謝障礙包括血脂障礙或高脂蛋白血癥或者炎性疾病或病癥。
14.藥物制劑，其含有根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項的化合物和一種或多種生理學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或載體。
15.以單獨(dú)或組合的藥物制劑形式用于一起或單獨(dú)、依次或同時給藥的組合，所述組合包括根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項的化合物以及其它治療活性劑。
16.藥物制劑，其含有
(i)根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項的化合物；
(ii)一種或多種選自斯特汀、貝特類、膽汁酸結(jié)合樹脂和煙酸中的活性成分；以及
(iii)一種或多種生理學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑或載體。
17.制備其中R3是鹵素的根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項的化合物的方法，所述方法包括以任意的順序進(jìn)行
(i)在N7保護(hù)的黃嘌呤的N1或N3上烷基化，或者在N1和N3上二烷基化；
(ii)在C8上鹵化；以及
(iii)脫保護(hù)基；
條件是在烷基化之后進(jìn)行脫保護(hù)基。
全文摘要
本發(fā)明提供了具有式(II)的為黃嘌呤衍生物的治療活性化合物，制備所述衍生物的方法，含有所述活性化合物的藥物制劑以及所述化合物在治療、特別是在治療由HM74A受體激活不足所引起的疾病或者受益于激活該受體的疾病中的用途，其中R1選自氫以及可任選被一個或多個選自CN和CF3中的基團(tuán)取代的C1-4烷基，R2選自未被取代的C2-10烷基、被一個或多個選自氟和CN中的基團(tuán)取代的C1-10烷基、C5鏈烯基、直鏈C4鏈烯基、以及被環(huán)烷基取代的C1-4烷基，和R3選自鹵素和CN。
文檔編號A61K31/522GK101103030SQ200580011433
公開日2008年1月9日 申請日期2005年2月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月14日
發(fā)明者伊凡·L·平托, 沙扎德·S·拉曼, 內(nèi)維爾·H·尼科爾森 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司