專利名稱：棉酚共結晶及其應用的制作方法
背景技術：
發(fā)明領域本發(fā)明涉及藥物化學領域。本發(fā)明特別涉及包含用作Bcl-2族蛋白抑制劑的(-)-棉酚與C1-8羧酸或C1-8磺酸的共結晶的組合物。本發(fā)明還涉及(-)-棉酚與C1-8羧酸或C1-8磺酸的共結晶在誘導細胞中細胞凋亡和使細胞對細胞凋亡誘導敏感中的應用。
相關技術侵害性的癌細胞表型為導致胞內信號傳導途徑失調的各種遺傳和外遺傳改變的結果(Ponder，Nature 411336(2001))。然而，所有癌細胞的共同特性是其衰竭以執(zhí)行細胞凋亡程序，而因正常細胞凋亡機制中的缺陷導致缺乏適當?shù)募毎蛲龀绦蚴前┌Y的標志(Lowe等，Carcinogenesis 21485(2000))。目前癌癥療法中的大部分，包括化療劑、放射和免疫療法均通過間接誘導癌細胞中的細胞凋亡起作用。于是因正常細胞凋亡機制中的缺陷而導致癌細胞不能執(zhí)行細胞凋亡程序通常與對化療、放射或免疫療法誘導的細胞凋亡產生的抗性增加有關。因細胞凋亡缺陷而導致的不同來源的人癌對目前的治療方案產生原發(fā)性或獲得性抗性是目前癌癥療法中的主要問題(Lowe等，Carcinogenesis 21485(2000)；Nicholson，Nature407810(2000))。因此，目前和未來為改善癌癥患者存活和生活質量而針對設計和研發(fā)新的分子靶-特異性抗癌療法的努力必須包括特異性靶向癌細胞對細胞凋亡產生抗性的策略。在這方面，靶向在直接抑制癌細胞中細胞凋亡中起重要作用的關鍵負調節(jié)物代表了用于新的抗癌藥物設計的非常富有希望的治療策略。
已經(jīng)鑒定了兩類細胞凋亡的重要負調節(jié)物。第一類調節(jié)物為細胞凋亡蛋白抑制劑(IAPs)(Deveraux等，Genes Dev.13239(1999)；Salvesen等，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.3401(2002))。IAP蛋白有效抑制各種細胞凋亡刺激物，包括化療劑、放射和免疫療法在癌細胞中誘導的細胞凋亡。
第二類細胞凋亡的重要負調節(jié)物為Bcl-2族蛋白(Adams等，Science 2811322(1998)；Reed，Adv.Pharmacol.41501(1997)；Reed等，J.Cell.Biochem.6023(1996))。Bcl-2為該族中的基本成員并且首先作為癌基因產物分離。Bcl-2族目前包括抗-細胞凋亡分子，諸如Bcl-2和Bcl-XL；以及促細胞凋亡分子，諸如Bax、Bak、Bid和Bad。Bcl-2和Bcl-XL在許多類型的人癌(例如乳腺、前列腺、結腸直腸、肺等)中得到超表達，包括因導致Bcl-2超表達的染色體易位(t14，18)引起的非何杰金淋巴瘤。這提示許多癌細胞類型依賴于Bcl-2和/或Bcl-XL水平升高以幸免于其它細胞紊亂，其同時定義這些細胞為癌癥或前-癌癥細胞并且使它們嘗試完成細胞凋亡途徑。此外，已經(jīng)將Bcl-2族蛋白表達增加視為是對以不同途徑在腫瘤細胞中誘導細胞死亡的癌癥治療藥物和放射產生抗性的基礎。
認為Bcl-2和Bcl-XL在腫瘤細胞遷移和侵入和由此的轉移中起作用。Amberger等，Cancer Res.58149(1998)；Wick等，REBS Lett，440419(1998)；Mohanam等，Cancer Res.534143(1993)；Pedersen等，Cancer Res.，535158(1993)。Bcl-2族蛋白看起來為腫瘤細胞提供在新的和非允許環(huán)境(例如轉移部位)中存活的機制，并且有助于臨床轉移癌擴散的器官特異性模式。Rubio，Lab Invest.81725(2001)；Femandez等，Cell Death Differ.7350(2000))。還認為抗細胞凋亡蛋白，諸如Bcl-2和/或Bcl-XL例如通過調節(jié)細胞表面整聯(lián)蛋白調節(jié)細胞-細胞相互作用。Reed，Nature 387773(1997)；Frisch等，Curr.Opin.Cell Biol.9701(1997)；Del Bufalo等，F(xiàn)ASEB J.11947(1997)。
已經(jīng)廣泛綜述了用于靶向癌癥中的Bcl-2和Bcl-XL以恢復癌細胞的敏感性并且克服癌細胞對細胞凋亡的抗性的治療策略(Adams等，Science 2811322(1998)；Reed，Adv.Pharmacol.41501(1997)；Reed等，J.Cell.Biochem.6023(1996))。目前，Bcl-2反義療法處于治療實體瘤和非實體瘤的幾個III期臨床試驗階段。
棉酚為天然存在的來源于粗棉籽油(草棉屬)的雙重雙酚化合物。棉酚作為男性避孕劑的人體試驗已經(jīng)證實了長期給予這些化合物的安全性(Wu，Drugs 38333(1989))。近來已經(jīng)證實棉酚具有抗增殖作用(Flack等，J.Clin.Endocrinol.Metab.761019(1993)；Bushunow等，J.Neuro-Oncol.4379，(1999)；Van Poznak等，Breast CancerRes.Treat.66239(2001))。近來已經(jīng)證實(-)-棉酚及其衍生物為Bcl-2和Bcl-XL的有效抑制劑并且具有強抗-癌活性(美國專利申請US2003/0008924)。
本領域中已知包含外消旋棉酚和乙酸的組合物(Sigma-AldrichCorp.，St.Louis，MO)。以前使(-)-棉酚結晶的嘗試已經(jīng)產生了X射線分析極差的結晶(Gdaniec等，″棉酚″-ComprehensiveSupramolecular Chemistry(Atwood等eds.)，Vol.6，Pergamon)或當使用外消旋棉酚乙酸在丙酮中的溶液時，產生了(-)-棉酚與丙酮的共結晶(Dowd等，J.Am.Oil Chem.Soc.761343(1999))。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及包含(-)-棉酚(通式I)與C1-8羧酸或C1-8磺酸的共結晶(″(-)-棉酚共結晶″)的組合物。這些組合物用于抑制抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白活性，誘導細胞中的細胞凋亡，并且增加細胞對細胞凋亡誘導物的敏感性。
(插入結構式)I通常公認的是癌細胞或其支持細胞不能發(fā)生細胞凋亡響應遺傳損傷或接觸細胞凋亡誘導物(諸如抗癌藥和放射)是癌癥發(fā)作和發(fā)展的主要因素。認為誘導癌細胞或其支持細胞(例如腫瘤脈管系統(tǒng)中的新血管細胞)中的細胞凋亡實際上是市售的所有有效癌癥治療藥或放療或當今實踐的普遍作用機制。細胞不能發(fā)生細胞凋亡的一個原因在于抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白表達增加和蓄積。
本發(fā)明預期，患有癌癥的動物接觸抑制抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白功能的治療有效量的(-)-棉酚共結晶可以徹底殺滅癌細胞或支持細胞(其持續(xù)存活依賴于Bcl-2族蛋白的過度活性的那些細胞)和/或使得這類作為群體的細胞對誘導細胞死亡活性的癌癥治療藥物或放療更為敏感。本發(fā)明預期，當將誘導依賴于抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白功能的癌細胞中的細胞凋亡作為單一療法給予時，或當以與誘導細胞死亡的其它癌癥治療藥物或放療時間相關給予以使更大比例的癌細胞或支持細胞比僅用癌癥治療藥或單獨的放療治療的動物中相應比例的細胞易于執(zhí)行細胞凋亡程序時，(-)-棉酚共結晶將滿足對治療多種癌癥類型尚未滿足的需求。
在本發(fā)明的某些實施方案中，預計使用治療有效量的本發(fā)明組合物和一系列(a course of)抗癌藥或放射的聯(lián)合療法與單獨使用上述組合物或抗癌藥/放射治療相比可以在這類動物中產生更大的腫瘤反應和臨床有益性。作為另一種方式，因為所述的組合物可降低表達抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的所有細胞的細胞凋亡閾值，所以成功執(zhí)行細胞凋亡程序響應誘導細胞凋亡的抗癌藥/放射的活性的細胞比例增加?；蛘撸A計本發(fā)明的組合物能夠以較低且由此以低毒性和更為可耐受的劑量的抗癌藥和/或放射給藥，從而產生與單獨抗癌藥和/或放射的常規(guī)劑量相同的腫瘤反應/臨床有益性。由于已知所有經(jīng)批準的抗癌藥和放療的劑量，所以本發(fā)明關注與使用已知藥物/治療和本發(fā)明組合物的各種組合的聯(lián)合療法。此外，由于本發(fā)明的組合物至少部分通過抑制抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白起作用，所以將癌細胞和支持細胞接觸治療有效量的所述組合物可以是時間上關聯(lián)的以與細胞執(zhí)行細胞凋亡程序響應抗癌藥或放療的嘗試相符。因此，在某些實施方案中，與某些時間關聯(lián)有關給予本發(fā)明的組合物可以提供尤其有效的治療實踐。
(-)-棉酚共結晶可用于治療、改善或預防響應誘導細胞凋亡的疾病，例如特征在于細胞凋亡失調的疾病，包括過度增殖性疾病，諸如癌癥。在某些實施方案中，(-)-棉酚共結晶可以用于治療、改善或預防特征在于對癌癥療法產生抗性(例如為化學抗性、放射抗性、激素抗性等)的癌癥。在額外的實施方案中，(-)-棉酚共結晶可以用于治療、改善或預防轉移癌。在其它實施方案中，(-)-棉酚共結晶可以用于治療特征在于抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白超表達的過度增殖性疾病。
本發(fā)明提供了治療動物病毒、微生物或寄生蟲感染的方法，包括給予所述的動物治療有效量的(-)-棉酚共結晶。
本發(fā)明提供了包含(-)-棉酚共結晶和藥物上可接受的載體的藥物組合物。
本發(fā)明進一步提供了制備藥物組合物的方法，包括將(-)-棉酚共結晶以誘導細胞中細胞凋亡或使細胞對細胞凋亡誘導物敏感的治療有效量與藥物上可接受的載體混合。
本發(fā)明進一步提供了藥盒，包括(-)-棉酚共結晶和用于給予動物所述組合物的說明書。所述的藥盒可以可選地含有其它治療劑，例如抗癌藥。
本發(fā)明還提供了制備(-)-棉酚共結晶的方法。例如，可以通過一種方法制備共結晶，該方法包括將(-)-棉酚溶于丙酮形成溶液，過濾該溶液，在混合的同時將C1-8羧酸或C1-8磺酸加入到溶液中，直到該溶液變渾濁，將該渾濁溶液置于室溫下，然后置于降低的溫度下以便形成共結晶，收集該共結晶，用溶劑洗滌該共結晶，并且干燥該共結晶。
附圖/圖簡述附

圖1表示(-)-棉酚乙酸共結晶的1H NMR光譜。
附圖2表示(-)-棉酚乙酸共結晶的13C NMR光譜。
附圖3表示(-)-棉酚乙酸共結晶的紅外光譜。
附圖4表示(-)-棉酚乙酸共結晶的質譜。
附圖5表示(-)-棉酚乙酸共結晶的X射線粉末衍射光譜。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及包括(-)-棉酚與C1-8羧酸或C1-8磺酸的共結晶(″(-)-棉酚共結晶″)的用作抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白抑制劑的組合物。通過抑制抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白，(-)-棉酚使細胞對細胞凋亡誘導物敏感，并且在某些情況中，其自身誘導細胞凋亡。因此，本發(fā)明涉及使細胞對細胞凋亡誘導物敏感的方法并且涉及誘導細胞中細胞凋亡的方法，包括單獨或與細胞凋亡誘導物組合給予(-)-棉酚共結晶。本發(fā)明進一步涉及治療、改善或預防動物疾病的方法，所述的疾病響應誘導細胞凋亡，該方法包括給予所述的動物(-)-棉酚共結晶和細胞凋亡誘導物。這類疾病包括那些特征在于細胞凋亡失調的疾病和那些特征在于抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白超表達的疾病。
本文所用的術語″(-)-棉酚″或″(-)-棉酚化合物/組合物″指的是棉酚的旋光組合物，其中如用旋光儀測定的，含有所述組成的活性分子逆時針方向旋轉平面偏振光(例如左旋分子)。優(yōu)選(-)-棉酚化合物具有1％-100％的對映體過量。在一個實施方案中，(-)-棉酚化合物具有至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％(-)-棉酚的對映體過量。在″(-)-棉酚化合物″的一個實例中，該化合物的比旋光([α]D)約為-350°至約-390°，約-375°至約-390°，或約-385°至約-390°。(例如，參見Dowd，Chirality，15486(2003)；Ciesielska等，Chem.Phys.Lett.35369(2992)；Freedman等，Chirality，15196(2003)；和Zhou等，Kexue Tongbao，281574(1983))。將外消旋棉酚化合物拆分成基本上純化的(+)-或(-)-棉酚的方法是已知的(例如，參見Zhou等，Kexue Tongbao，281574(1983)(其中將L-苯丙氨酸甲酯與棉酚的醛基混合而形成具有兩種非對映異構體的希夫堿，然后將兩種非對映異構體在標準二氧化硅快速色譜柱上拆分。濃縮濾液，并且通過硅膠色譜法純化殘余物，使用己烷∶EtOAc＝3∶1洗脫而得到兩種級分。對兩種級分在5N HCl∶THF(1∶5，室溫，過夜)中進行酸水解而分別再生了各個棉酚對映體。第一種具有較高Rf值的級分含有(-)-棉酚，而第二種具有較低Rf值的級分含有(+)-棉酚。在從反應混合物中除去THF后，將粗的棉酚級分從殘余物中提取入乙醚。然后通過硅膠色譜法純化棉酚級分并且用己烷∶EtOAc(3∶1比例)洗脫，得到光學純的棉酚，兩步中的產率為30-40％。這些產物的旋光色散值為對于(-)-棉酚，αD＝-352°(c＝0.65，CDCl3)；和αD＝+341°(c＝0.53，CDCl3))。
本文所用的術語″C1-8羧酸″指的是直鏈或支鏈、芳族或非芳族、飽和或不飽和、取代或未被取代的C1-8羧酸，包括但不限于甲酸、乙酸、丙酸、正-丁酸、叔-丁酸、正-戊酸、2-戊酸、正-己酸、2-己酸、正-庚酸、正-辛酸、丙烯酸、琥珀酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸和苯甲酸。
本文所用的術語″C1-8磺酸″指的是直鏈或支鏈、芳族或非芳族、飽和或不飽和、取代或未被取代的C1-8磺酸，包括但不限于甲磺酸、乙磺酸、正-丙磺酸、2-丙磺酸、正-丁磺酸、正-戊磺酸、正-己磺酸、正-庚磺酸、正-辛磺酸和苯磺酸。
本文所用的術語″(-)-棉酚共結晶″指的是包含(-)-棉酚與C1-8羧酸或C1-8磺酸的共結晶的組合物。
本文所用的術語″Bcl-2族蛋白″指的是Bcl-2族中的抗-細胞凋亡成員，包括但不限于Bcl-2、Bcl-XL、Mcl-1、Al/BFL-1、BOO-DIVA、Bcl-w、Bcl-6、Bcl-8和Bcl-y；和Bcl-2族中的促-細胞凋亡成員，包括但不限于Bak、Bax、Bad、tBid、Hrk、Bim、Bmf；以及其它含有受棉酚化合物調節(jié)的蛋白的Bcl-2同源結構域3(BH3)。
本文所用的術語″抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的超表達″指的是與表達基礎水平的編碼抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的mRNAs或具有基礎水平的抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的相似的相應非病理細胞相比，編碼抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的mRNAs水平升高(例如水平異常)和/或細胞中抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白水平升高。用于檢測細胞中編碼抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的mRNAs水平或抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白水平的方法包括但不限于使用抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白抗體的蛋白質印跡、免疫組織化學法和核酸擴增或直接RNA檢測法。與細胞中抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的絕對水平同樣重要的是確定它們超表達抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白，這類細胞中，抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白相對于其它促-細胞凋亡信號傳導分子(例如促-細胞凋亡Bcl-2族蛋白)的相對水平同樣也是如此。當這兩種分子達到平衡，使得并非指抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的水平時，促-細胞凋亡信號傳導分子可足以使細胞執(zhí)行細胞凋亡程序并且死亡，所述的細胞依賴于抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白才能存活。在這類細胞中，接觸抑制有效量的抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白抑制劑足以使得細胞執(zhí)行細胞凋亡程序并且死亡。因此，術語″抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的超表達″還指因促-細胞凋亡信號和抗-細胞凋亡信號的相對水平而導致細胞經(jīng)歷細胞凋亡來響應抑制有效量的抑制抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白功能的化合物。
本文所用的術語″抗癌藥″和″抗癌藥物″指的是用于治療過度增殖性疾病，諸如癌癥(例如哺乳動物中)的任意治療劑(例如化療化合物和/或分子治療化合物)、放療或外科手術。
本文所用的術語″治療有效量″指的是足以使得疾病的一種或多種癥狀得以改善，或預防疾病發(fā)展，或使得疾病退化的治療劑用量。例如，就治療癌癥而言，治療有效量優(yōu)選指的是產生如下效果的治療劑用量減緩腫瘤生長速率、減小腫瘤塊、減少轉移病灶的數(shù)量、增加至腫瘤進展的時間，或將存活時間增加至少5％，優(yōu)選至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少35％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少100％。
本文所用的術語″敏感″和″致敏″指的是通過給予第一種活性劑(例如通式1的化合物)使得動物或動物體內的細胞對第二種活性劑的生物作用更為敏感或更具反應性(例如促進或阻止細胞功能的方面，包括但不限于細胞生長、增殖、侵入、血管發(fā)生或細胞凋亡)。可以將第一種活性劑對靶細胞的致敏作用測定為在給予第二種活性劑并給予或不給第一種活性劑時觀察到的指定生物作用(例如促進或阻止細胞功能的方面，包括但不限于細胞生長、增殖、侵入、血管發(fā)生或細胞凋亡)的差異。致敏細胞的反應相對于沒有第一種活性劑存在下的反應可以增加至少10％，至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少100％，至少150％，至少200％，至少350％，至少300％，至少350％，至少400％，至少450％或至少500％。
本文所用的術語″細胞凋亡失調″指的是細胞通過細胞凋亡發(fā)生細胞死亡的能力上的任何異常(例如遺傳缺陷)。細胞凋亡失調與各種病癥有關或由其誘導，包括例如自身免疫病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、移植物抗宿主病、重癥肌無力或斯耶格倫綜合癥)、慢性炎癥疾病(例如銀屑病、哮喘或克羅恩病)、過度增殖性疾病(例如腫瘤、B細胞淋巴瘤或T細胞淋巴瘤)、病毒感染(例如皰疹、乳頭狀瘤或HIV)和其它疾病，諸如骨關節(jié)炎和動脈粥樣硬化。應注意當失調由病毒感染誘導或與之相關時，病毒感染在失調發(fā)生或觀察到失調時可能檢測到，也可能無法檢測到。即病毒誘導的失調甚至可能在病毒感染癥狀消失后發(fā)生。
本文所用的術語″過度增殖性疾病″指的是動物體內增殖細胞的局部群體不受通常正常生長限制的任意病癥。過度增殖性疾病包括腫瘤、贅生物、淋巴瘤等。如果贅生物不發(fā)生侵入或轉移，那么認為贅生物為良性的，而如果它出現(xiàn)上述情況之一，那么認為贅生物是惡性的?！遛D移性″細胞指的是細胞可以侵入和破壞附近的身體結構。超常增生為細胞增殖的形式，包括組織或器官中細胞數(shù)量的增加，而結構或功能沒有顯著改變。組織變形為細胞生長受控的形式，其中一種類型的完全分化的細胞取代了另一種類型的分化的細胞。
活化的淋巴樣細胞的病理性生長通常導致自身免疫病或慢性炎癥病癥。本文所用的術語″自身免疫病″指的是生物體產生識別生物體自身分子、細胞或組織的抗體或免疫細胞的任何疾病。自身免疫病的非限制性實例包括自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、貝格爾病或IgA腎病、口炎性腹瀉、慢性疲勞綜合征、克羅恩病、皮肌炎、纖維肌痛、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、橋本甲狀腺炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜、扁平苔癬、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、銀屑病、風濕熱、風濕性關節(jié)炎、硬皮病、斯耶格倫綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、1型糖尿病、潰瘍性結腸炎、白癜風等。
本文所用的術語″腫瘤性疾病″指的是良性(非-癌性)或惡性(癌性)的細胞的任何異常生長。
本文所用的術語″抗腫瘤藥″指的是阻止靶向的(例如惡性)贅生物增殖、生長或擴散的任意化合物。
本文所用的術語″預防(prevent)″、″預防(preventing)″和″預防(prevention)″指的是減少動物體內病理細胞(例如過度增殖性或贅生性細胞)的出現(xiàn)。預防可以是完全的，例如在受試者體內病理細胞總體上不存在。預防還可以是部分的，使得受試者體內出現(xiàn)的病理細胞少于在不使用本發(fā)明時出現(xiàn)的病理細胞。
本文所用的術語″協(xié)同作用″指的是當共同給予(例如同時或依次)(-)-棉酚共結晶和第二種活性劑時獲得大于分別給予(-)-棉酚共結晶和第二種活性劑時的累加作用的作用。這種協(xié)同作用使得(-)-棉酚共結晶和/或第二種活性劑的給藥劑量較低或提供相同劑量下更大的功效。獲得的協(xié)同作用可以大于分別給藥時(-)-棉酚共結晶化合物和第二種活性劑的累加作用至少10％，至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少100％，至少125％，至少150％，至少175％，至少200％，至少250％，至少300％，至少350％，至少400％或至少500％。例如，就治療癌癥而言，協(xié)同作用可以是腫瘤生長速率的降低、腫瘤塊的減小、轉移病灶數(shù)量的減少、達到腫瘤發(fā)展的時間增加或存活時間增加。共同給予(-)-棉酚共結晶和抗癌藥可以使得較低劑量的(-)-棉酚共結晶和/或抗癌藥的應用成為可能，從而使得癌癥得到有效治療，同時避免了任何對受試者的實質性毒性。
本文所用的術語″約″包括所引數(shù)字的+/-10％。因此，″約0.5″指的是0.45-0.55。
本發(fā)明抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的抑制劑為包括(-)-棉酚與C1-8羧酸或C1-8磺酸的共結晶(″(-)-棉酚共結晶″)的組合物。預計(-)-棉酚共結晶比單獨的(-)-棉酚更為穩(wěn)定。本領域技術人員可以理解化合物穩(wěn)定性在藥物組合物制備、貯存、運送和/或操作中的重要性。預計本發(fā)明的組合物比前述包括(-)-棉酚的組合物更為穩(wěn)定。能夠使(-)-棉酚保持穩(wěn)定的任意C1-8羧酸或C1-8磺酸可以用于本發(fā)明。(-)-棉酚共結晶中(-)-棉酚與羧酸或磺酸的摩爾比為約10∶1-約1∶10，優(yōu)選約2∶1-約1∶2，更優(yōu)選約1∶1。在某些實施方案中，(-)-棉酚共結晶中(-)-棉酚與羧酸或磺酸的摩爾比可以約為10∶1，9∶1，8∶1，7∶1，6∶1，5∶1，4∶1，3∶1，2∶1，1.5∶1，1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶3，1∶4，1∶5，1∶6，1∶7，1∶8，1∶9或1∶10。
在本發(fā)明的一個實施方案中，C1-8羧酸為乙酸。在另一個實施方案中，(-)-棉酚共結晶包括約1∶1摩爾比的(-)-棉酚和乙酸。在優(yōu)選的實施方案中，(-)-棉酚和乙酸1∶1的共結晶為黃色或淺黃色針狀結晶。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述共結晶的特征在于1H NMR光譜在δ2.11(s，3H)處的乙酸的一個甲基信號與在δ2.18(s，6H)處的棉酚的兩個甲基信號的整合。
可以使用本領域技術人員公知的和如實施例中所披露的方法制備本發(fā)明的組合物。在一個實施方案中，通過下列步驟制備共結晶將(-)-棉酚溶于丙酮而形成溶液，過濾該溶液，在混合的同時將C1-8羧酸或C1-8磺酸加入到溶液中，直到該溶液變渾濁，將該渾濁溶液置于室溫下，然后置于降低的溫度下以形成共結晶，收集該共結晶，用溶劑洗滌該共結晶，并且干燥該共結晶。在一個實施方案中，通過恒定攪拌混合該溶液。降低的溫度為低于約20℃，優(yōu)選約0-15℃，更優(yōu)選約4℃。共結晶形成的時間可以在1小時-1天；優(yōu)選該時間約為1-4小時?？梢酝ㄟ^任意合適的方式，包括過濾收集共結晶。洗滌共結晶的溶劑可以為任意合適的溶劑，例如己烷、戊烷、苯、甲苯或石油醚。可以在室溫下、優(yōu)選在避光容器中干燥洗滌的共結晶。還可以在真空干燥器中、優(yōu)選在升溫(例如約30-60℃，更優(yōu)選約40℃)下將共結晶干燥約6-72小時，優(yōu)選約12-48小時。
已經(jīng)證實(-)-棉酚在BH3結合溝上結合Bcl-2和BCl-XL并且具有顯著的抗癌活性(美國專利申請US 2003/0008924)。本發(fā)明的一個重要方面在于(-)-棉酚共結晶以與棉酚相同的方式結合并且抑制抗-細胞凋亡Bcl-2蛋白。然而，預計(-)-棉酚共結晶比(-)-棉酚更為穩(wěn)定。此外，(-)-棉酚為比外消旋棉酚更為有效的抑制劑。因此，包括(-)-棉酚共結晶的組合物可以用于誘導細胞凋亡并且強化響應細胞凋亡誘導信號的細胞凋亡的誘導。預期這些組合物使細胞對細胞凋亡誘導物敏感，包括對這類誘導物產生耐受性的細胞。本發(fā)明的組合物可以用于誘導任何可以通過誘導細胞凋亡治療、改善或預防的疾病中的細胞凋亡。因此，本發(fā)明提供了用于靶向特征為超表達抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的動物的組合物和方法。在這些實施方案中的某些中，細胞(例如癌細胞)與非病理樣品(例如非-癌細胞)相比表現(xiàn)出一種或多種抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的表達水平升高。在其它實施方案中，細胞通過執(zhí)行細胞凋亡程序和響應給予抑制有效量的(-)-棉酚共結晶的死亡操作上表現(xiàn)出抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白的表達水平升高，所述的響應至少部分因在這類細胞中依賴于抗-細胞凋亡Bcl-2族蛋白功能才能存活而產生。
在某些實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法用于治療動物(例如哺乳動物受試者，包括，但不限于人和獸類動物)患病的細胞、組織、器官或病理情況和/或疾病狀態(tài)。在這方面，使用本發(fā)明的方法和組合物易于治療或預防各種疾病和病理情況。這些疾病和病癥的非限制性典型實例包括但不限于癌癥，諸如乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤、皮膚癌、胰腺癌、結腸癌、黑素瘤、惡性黑素瘤、卵巢癌、腦癌、原發(fā)性腦癌、頭頸癌、神經(jīng)膠質瘤、成膠質細胞瘤、肝癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭或頸癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、小細胞肺癌、維爾姆斯腫瘤、宮頸癌、睪丸癌、膀胱癌、胰腺癌、胃癌、結腸癌、前列腺癌、泌尿生殖器癌、甲狀腺癌、食道癌、骨髓瘤、多發(fā)性骨髓瘤、腎上腺癌、腎細胞癌、子宮內膜癌、腎上腺皮質癌、惡性胰腺胰島素瘤、惡性類癌瘤、絨毛膜癌、蕈樣霉菌病、惡性血鈣過多、宮頸超常增生、白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性髓細胞性白血病、慢性粒細胞性白血病、急性粒細胞性白血病、毛細胞性白血病、成神經(jīng)細胞瘤、橫紋肌肉瘤、卡波西肉瘤、真性紅細胞增多、特發(fā)性血小板增多癥、何杰金病、非何杰金淋巴瘤、軟組織肉瘤、骨肉瘤、原發(fā)性巨球蛋白血癥和視網(wǎng)膜成神經(jīng)細胞瘤等；T和B細胞介導的自身免疫病、炎性疾病、感染、過度增殖性疾病、AIDS、變性疾病、血管疾病等。在某些實施方案中，所治療的癌細胞為轉移性的。在其它實施方案中，所治療的癌細胞對抗癌藥產生耐藥性。
在某些實施方案中，適合于用本發(fā)明組合物和方法治療的感染包括但不限于由病毒、細菌、真菌、寄生蟲、支原體、阮病毒導致的感染。
本發(fā)明的某些實施方案提供了給予有效量的(-)-棉酚共結晶和至少一種額外的治療劑(包括但不限于化療劑、抗腫瘤藥、抗微生物劑、抗病毒藥、抗真菌藥和抗炎藥)和/或治療技術(例如外科手術和/或放療)的方法。在某些實施方案中，(-)-棉酚共結晶與一種或多種治療劑的組合比單獨的每種化合物的給藥具有更大的作用。在其它實施方案中，預計(-)-棉酚共結晶與一種或多種治療劑的組合與單獨的每種化合物的給藥相比可以產生協(xié)同作用(即大于累加作用)。
預期許多合適的抗癌藥用于本發(fā)明方法。實際上，本發(fā)明預期但不限于許多抗癌藥的給藥，諸如誘導細胞凋亡的活性劑；多核苷酸(例如反義物、核酶、siRNA)；多肽類(例如酶和抗體)；生物模擬物(例如棉酚或BH3模擬物)；與Bcl-2族蛋白、諸如Bax結合的活性劑(例如寡聚物或復合物)；生物堿類；烷化劑；抗腫瘤抗生素；抗代謝物；激素；鉑化合物；單克隆或多克隆抗體(例如與抗癌藥、毒素、防衛(wèi)素綴合的抗體)、毒素；放射性核素；生物學反應修飾劑(例如干擾素(例如IFN-α)和白細胞介素(例如IL-2))；過繼免疫治療劑；造血生長因子；誘導腫瘤細胞分化的活性劑(例如全反式視黃酸)；基因療法試劑(例如反義療法試劑和核苷酸)；腫瘤疫苗；血管發(fā)生抑制劑；蛋白體抑制劑；NF-KB調節(jié)劑；抗-CDK化合物；HDAC抑制劑等。適合于與所披露的化合物共同給藥的化療化合物和抗癌療法的大量其它實例為本領域技術人員所公知。
在優(yōu)選的實施方案中，抗癌藥包括誘導或刺激細胞凋亡的活性劑。誘導細胞凋亡的活性劑包括，但不限于放射(例如X-射線、γ射線、UV)；激酶抑制劑(例如表皮生長因子受體(EGFR)激酶抑制劑、血管生長因子受體(VGFR)激酶抑制劑、成纖維細胞生長因子受體(FGFR)激酶抑制劑、血小板衍生的生長因子受體(PDGFR)激酶抑制劑和Bcr-Abl激酶抑制劑(諸如GLEEVEC))；反義分子；抗體(例如HERCEPTIN、RITUXAN、ZEVALIN、BEXXAR和AVASTIN)；抗雌激素藥(例如雷洛昔芬和他莫昔芬)；抗雄激素藥(例如氟他胺、比卡魯胺、非那雄胺、氨魯米特、酮康唑和皮質類固醇)；環(huán)加氧酶2(COX-2)抑制劑(例如塞來考昔、美洛昔康、NS-398和非類固醇抗炎藥)；抗炎藥(例如保泰松、DECADRON、DELTASONE、地塞米松、dexamethasone intensol、DEXONE、HEXADROL、羥氯喹、METICORTEN、ORADEXON、ORASONE、羥布宗、PEDIAPRED、保泰松、PLAQUENIL、潑尼松龍、潑尼松、PRELONE和TANDEARIL)；和癌癥化療藥(例如伊立替康(CAMPTOSAR)、CPT-11、氟達拉濱(FLUDARA)、達卡巴嗪、地塞米松、米托蒽醌、MYLOTARG、VP-16、順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、5-FU、多柔比星、吉西他濱、bortezomib、gefitinib、貝伐單抗、TAXOTERE或TAXOL)；細胞信號傳導分子；神經(jīng)酰胺類和細胞因子；十字孢堿等。
在其它實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法提供了(-)-棉酚共結晶和至少一種抗過度增殖藥或抗腫瘤藥；例如選自烷化劑、抗代謝物和天然產物(例如草藥和其它植物和/或動物來源的化合物)。
適用于本發(fā)明組合物和方法的烷化劑包括但不限于1)氮芥(例如雙氯乙基甲胺、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、美法侖(L-沙可來新)；和苯丁酸氮芥)；2)氮丙啶類和甲基蜜胺類(例如六甲蜜胺和塞替派)；3)磺酸烷基酯類(例如白消安)；4)亞硝基脲類(例如卡莫司汀(BCNU)；環(huán)己亞硝脲(CCNU)；司莫司汀(甲基-CCNU)；和鏈佐星(鏈唑霉素))；和5)三氮烯類(例如達卡巴嗪(二甲基-三氮烯-咪唑羧酰胺)。
在某些實施方案中，適用于本發(fā)明組合物和方法的抗代謝物包括但不限于1)葉酸類似物(例如甲氨蝶呤(methotrexate)(甲氨蝶呤(amethopterin)))；2)嘧啶類似物(例如氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶脫氧核苷(floxuridine)(氟尿嘧啶脫氧核苷(fluorode-oxyuridine))和阿糖胞苷(cytarabine)(阿糖胞苷(cytosine arabinoside)))；和3)嘌呤類似物(例如巰嘌呤(6-巰嘌呤)、硫鳥嘌呤(6-硫鳥嘌呤)；和噴司他丁(2′-脫氧考福霉素(coformycin)))。
在其它實施方案中，適用于本發(fā)明組合物和方法的化療藥包括但不限于1)長春花生物堿(例如長春堿、長春新堿)；2)表鬼臼毒素(例如依托泊苷和替尼泊苷)；3)抗生素(例如更生霉素(放線菌素D)、柔紅霉素(道諾霉素；柔紅霉素)、多柔比星、博來霉素、普卡霉素(光輝霉素)和絲裂霉素(絲裂霉素C))；4)酶(例如L-天冬酰胺酶)；5)生物學反應修飾劑(例如干擾素-α)；6)鉑配位配合物(例如順鉑和卡鉑)；7)蒽二酮類(例如米托蒽醌)；8)取代的脲類(例如羥基脲)；9)丙卡巴肼衍生物(例如丙卡巴肼(N-丙卡巴肼))；10)腎上腺皮質抑制劑(例如米托坦(o，p′-DDD)和氨魯米特)；11)腎上腺皮質類固醇(例如潑尼松)；12)黃體酮(例如己酸羥孕酮、醋酸甲羥孕酮和醋酸甲地孕酮)；13)雌激素(例如己烯雌酚和乙炔雌二醇)；14)抗雌激素藥(例如他莫昔芬)；15)雄激素(例如丙酸睪丸酮和氟甲睪酮)；16)抗雄激素藥(例如氟他胺)；和17)促性腺激素釋放激素類似物(例如亮丙瑞林)。
常用于癌癥療法環(huán)境(context)中的任意溶瘤細胞藥應用于本發(fā)明的組合物和方法中。例如，美國食品與藥品監(jiān)督管理局保存有批準應用于美國的溶瘤細胞藥的處方集(formulary)。U.S.F.D.A.的國際對應機構保存有類似的處方集。表1中提供了批準在美國使用的典型的抗腫瘤藥。本領域技術人員可以理解有關全部美國批準的化療藥所需的″產品標簽″描述了典型的活性劑的批準的適應癥、給藥信息、毒性數(shù)據(jù)等。
表1
用于與本發(fā)明化合物給藥的優(yōu)選常用抗癌藥包括但不限于阿霉素、5-氟尿嘧啶、依托泊苷、喜樹堿、放線菌素D、絲裂霉素C、順鉑、多西他賽、吉西他濱、卡鉑、奧沙利鉑、bortezomib、gefitinib和貝伐單抗?？梢灾苽溥@些活性劑并且將其單獨、在聯(lián)用的治療組合物中、在藥盒中使用或與免疫治療劑聯(lián)用等。
為了更為詳細的描述抗癌藥和其它治療劑，本領域技術人員參考了大量指導性手冊，包括但不限于Physician′s Desk Reference和Goodman和Gilman的″Pharmaceutical Basis of Therapeutics″第9版，Eds.Hardman等，1996。
本發(fā)明提供了用于給予(-)-棉酚共結晶與放療的方法。本發(fā)明并不限于用于給動物遞送治療劑量的放射的類型、用量或遞送和給藥系統(tǒng)。例如，動物可以接受光子放療、粒子束放療、放射性同位素療法(例如與單克隆抗體的放射性綴合物)、其它類型的放療及其組合。在某些實施方案中，使用線性加速器將放射遞送給動物。在其它實施方案中，使用γ刀遞送放射。
放射源可以在動物體外或體內。外部放射治療是最常用的并且涉及使用例如線性加速器將高能輻射束通過皮膚定向于腫瘤部位。盡管射線束可以局限于腫瘤部位，但是它幾乎不可能避免正常健康組織的暴露。然而，外部放射通?？梢员换颊吆芎媚褪?。內部射療法包括將射線發(fā)射源，諸如珠、金屬線、丸粒、膠囊、顆粒等植入體內的腫瘤部位或接近腫瘤部位，包括使用特異性靶向癌細胞的遞送系統(tǒng)(例如使用附著在與癌細胞結合配體上的顆粒)?？梢栽谥委熀髮⑦@類植入物取出，或將其以非活性狀態(tài)保留在體內。內部放射療法的類型包括但不限于近距離放射療法、間質照射、腔內照射、放射免疫療法等。
動物可以任選地接受放射致敏劑(例如雙唑泰栓、米索硝唑、動脈內Budr、靜脈內碘去氧尿苷(IudR)、硝基咪唑、5-取代的-4-硝基咪唑類、2H-異吲哚二酮類、[[(2-溴乙基)-氨基]甲基]-硝基-1H-咪唑-1-乙醇、硝基苯胺衍生物、DNA-親和性低氧選擇性細胞毒素、鹵化DNA配體、1，2，4苯并三嗪氧化物、2-硝基咪唑衍生物、含氟硝基吡咯衍生物、苯甲酰胺、煙酰胺、吖啶-嵌入劑、5-硫代四唑衍生物、3-硝基-1，2，4-三唑、4，5-二硝基咪唑衍生物、羥基化texaphrins、順鉑、絲裂霉素、tiripazamine、亞硝脲、巰嘌呤、氨甲蝶呤、氟尿嘧啶、博來霉素、長春新堿、卡鉑、表柔比星、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長春地辛、依托泊苷、紫杉醇、熱(過高熱)等)、輻射防護劑(例如巰乙胺、氨基烷基二氫硫代磷酸酯、氨磷汀(WR 2721)、IL-1、IL-6等)。放射致敏劑促進腫瘤細胞的殺傷。輻射防護劑保護健康組織免受放射有害作用。
可以對患者給予任意類型的放射，只要該放射劑量是患者可耐受的并沒有不可接受的不良副作用。放療的合適類型包括例如電離(電磁)放療(例如X-射線或γ線)或粒子束放療(例如高線能量放射)。將電離放射定義為包括具有產生電離，即得電子或失電子的足夠能量的粒子或光子的放射(例如，如US 5,770,581中所述，將該文獻的全部內容引入本文作為參考)。放射的作用至少可以部分受到臨床醫(yī)師控制。針對最大靶細胞暴露并且降低毒性優(yōu)選分次給予放射劑量。
對動物給予的總放射劑量優(yōu)選約為.01戈瑞(Gy)-約100Gy。更優(yōu)選在治療過程中給予約10Gy-約65Gy(例如約15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy或60Gy)。盡管在某些實施方案中，可以在1天的過程中給予完全放射劑量，但是理想的情況是將總劑量分次在幾天內給予。理想的情況是，在至少約3天，例如至少5、7、10、14、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52或56天(約1-8周)過程中給予放療。因此，每日放射劑量約為1-5Gy(例如約1Gy、1.5Gy、1.8Gy、2Gy、2.5Gy、2.8Gy、3Gy、3.2Gy、3.5Gy、3.8Gy、4Gy、4.2Gy或4.5Gy)，優(yōu)選1-2Gy(例如1.5-2Gy)。每日放射劑量應足以誘導靶向的細胞破壞。如果延長期限，優(yōu)選非每天給予放射，由此使動物休息并且實現(xiàn)療法的效果。例如，理想的是在每周的治療中，連續(xù)5天給予放射并且在2天不給予，由此使每周有2天休息。然而，可以1天/周，2天/周，3天/周，4天/周，5天/周，6天/周或全部7天/周給予放射，這取決于動物的反應性和任何可能的副作用。可以在治療期中任意時間開始放療。優(yōu)選在第1周或第2周中開始放射，并且在剩余的治療期間給予放射。例如，在包括6周的治療期的第1-6周或2-6周中給予放射，例如用于治療實體瘤?；蛘?，在包括5周的治療期的第1-5周或2-5周中給予放射。不過，本發(fā)明并不限于這些可仿效的放療給藥方案。
抗微生物治療劑也可以用作本發(fā)明中的治療劑。可以使用能夠殺傷、抑制微生物，或使微生物減毒的任何活性劑以及預期具有這類活性的任意活性劑。抗微生物劑包括但不限于天然和合成抗生素、抗體、抑制蛋白(例如防衛(wèi)素)、反義核酸、膜破裂劑等，可以將它們單獨使用或聯(lián)用。實際上，可以使用任意類型的抗生素，包括但不限于抗菌藥、抗病毒藥、抗真菌藥等。
在本發(fā)明的某些實施方案中，可以在下列條件中的一種或多種下對動物給予(-)-棉酚共結晶和一種或多種治療劑或抗癌藥以不同的周期；以不同的期限；以不同的濃度；通過不同的給藥途徑等。在某些實施方案中，在治療劑或抗癌藥之前，例如在給予治療劑或抗癌藥之前0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小時、1、2、3、4、5或6天、1、2、3或4周給予(-)-棉酚共結晶。在某些實施方案中，在治療劑或抗癌藥之后，例如在給予抗癌藥之后0.5、1、2、3、4、5、10、12或18小時、1、2、3、4、5或6天、1、2、3或4周給予(-)-棉酚共結晶。在某些實施方案中，同時，但以不同的時間表給予(-)-棉酚共結晶和治療劑或抗癌藥，例如，每日給予(-)-棉酚共結晶，而每周1次、每2周1次、每3周1次或每4周1次給予治療劑或抗癌藥。在其它實施方案中，每周1次給予(-)-棉酚共結晶，而每天、每周1次、每2周1次、每3周1次或每4周1次給予治療劑或抗癌藥。
可以通過將誘導細胞中細胞凋亡或使細胞對細胞凋亡誘導物敏感的治療有效量的(-)-棉酚共結晶與藥物上可接受的載體合并生產藥物組合物。本發(fā)明的新藥物組合物包括完整的(-)-棉酚共結晶。在某些實施方案中，這些藥物組合物包括(-)-棉酚共結晶與共結晶在其中基本上不溶的液體(例如水)混合而形成混懸液。
本發(fā)明范圍內的組合物包括所有的組合物，其中本發(fā)明的組合物以有效實現(xiàn)其指定目的的用量被包含。盡管個體需要不同，但是每種成分的有效量的最佳范圍的確定屬于本領域技術人員能力的范圍。一般來說，對于響應誘導細胞凋亡的疾病，可以每天口服給予哺乳動物、例如人0.0025-50mg/kg接受治療的哺乳動物體重的組合物或等量的其藥物上可接受的鹽。優(yōu)選口服給予約0.01-約10mg/kg以便治療、改善或預防這類疾病。就肌內注射而言，劑量一般約為口服劑量的一半。例如，合適的肌內劑量約為0.0025-約25mg/kg，并且最優(yōu)選約0.01-約5mg/kg。
單位口服劑量可以包括約0.01-約200mg、優(yōu)選約0.1-約100mg組合物?？梢砸愿髯院屑s0.1-約100mg、便利的是0.25-50mg組合物的1片或多片片劑或1?；蚨嗔Ｄz囊每天1次或多次給予單位劑量。
在局部用制劑中，組合物的存在濃度約為0.01-100mg/g載體。在優(yōu)選的實施方案中，組合物的存在濃度約為0.07-1.0mg/ml，更優(yōu)選約0.1-0.5mg/ml，最優(yōu)選約0.4mg/ml。
除作為原料藥(raw chemical)給予(-)-棉酚共結晶外，還可以將本發(fā)明的組合物作為含有合適的藥物上可接受的載體的藥物制劑的組成部分給予，所述的載體包括有利于將組合物加工成可以在藥物上使用的制劑的賦形劑和助劑。優(yōu)選制劑、特別是那些可以通過口服或局部給藥并且可以用于優(yōu)選給藥類型的制劑，諸如片劑、錠劑、緩釋錠劑和膠囊、口腔清洗劑和漱口劑、凝膠、液體混懸液、潤發(fā)劑、發(fā)膠、香波且還有可以通過直腸給藥的制劑，諸如栓劑以及適合于通過注射、局部或口服給藥的適宜的溶液含有約0.01-99％、優(yōu)選約0.25-75％的活性化合物，還含有賦形劑。
可以將本發(fā)明的藥物組合物給予可能體驗本發(fā)明化合物有益作用的任意動物。在這類動物中排在最前列的是哺乳動物，例如人，不過本發(fā)明并不限于此。其它動物包括獸類動物(牛、綿羊、豬、馬、狗、貓等)。
可以通過實現(xiàn)其指定目的的任意方式給予組合物及其藥物組合物。例如，可以通過非腸道、皮下、靜脈內、肌內、腹膜內、透皮、頰、鞘內、顱內、鼻內或局部途徑進行給藥?；蛘撸蛲瑫r，可以通過口服途徑進行給藥。給藥劑量取決于接受者的年齡、健康和體重、同時治療的類型(如果有的話)、治療頻率和所需作用的性質。
可以按照自身已知的方式，例如通過常規(guī)的混合、制粒、制錠、溶解或凍干法制備本發(fā)明的藥物制劑。因此，可以通過下列步驟獲得口服應用的藥物制劑將活性化合物與固體賦形劑混合，任選地研磨所得混合物，并且如果需要或必要，在加入合適的助劑后加工顆?；旌衔锏玫狡净蝈V芯。
特別地，合適的賦形劑為填充劑，諸如糖類，例如乳糖或蔗糖；甘露糖醇或山梨糖醇；纖維素制品；和/或磷酸鈣，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣；以及粘合劑，諸如淀粉糊(例如使用玉米淀粉、小麥淀粉、稻米淀粉、馬鈴薯淀粉)、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可以加入崩解劑，諸如上述淀粉，且還有羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽，諸如藻酸鈉。助劑首先為流動調節(jié)劑和潤滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸或其鹽，諸如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，和/或聚乙二醇。如果需要，可以給錠芯包耐胃液的合適的包衣層。為了這一目的，可以使用濃糖溶液，它可以任選地含有阿拉伯樹膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液和合適的有機溶劑或溶劑混合物。為了生產耐胃液的包衣層，使用合適的纖維素制品、諸如鄰苯二甲酸乙酰纖維素或鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素的溶液。例如，為了鑒定或表征活性化合物劑量的組合，可以向片劑或錠劑包衣層中加入染料(dye stuff)或色素。
可以口服使用的其它藥物制劑包括由明膠制成的推入配合式膠囊和由明膠和增塑劑、諸如甘油或山梨醇制成的密封軟膠囊。推入配合式膠囊可以含有顆粒形式的活性化合物，所述的顆粒中可以混合有填充劑、諸如乳糖；粘合劑、諸如淀粉；和/或潤滑劑、諸如滑石粉或硬脂酸鎂；和任選的穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，優(yōu)選將活性化合物溶于或懸浮于合適的液體中，諸如脂肪油或液體石蠟。此外，可以加入穩(wěn)定劑。
可以通過直腸使用的可能的藥物制劑包括例如，由一種或多種活性化合物與栓劑基質的組合組成的栓劑。合適的栓劑基質為例如天然或合成甘油三酯類或鏈烷烴類。此外，還能夠使用由活性化合物與基質的組合組成的直腸用明膠膠囊?？赡艿幕|材料包括例如液體甘油三酯類、聚乙二醇類或鏈烷烴類。
用于非腸道給藥的合適的制劑包括水溶性形式的活性化合物的水溶液，例如水溶性鹽和堿性溶液。此外，可以給予作為合適的油注射混懸液的活性化合物的混懸液。合適的親脂性溶劑或媒介物包括脂肪油，例如芝麻油；或合成脂肪酸酯類，例如油酸乙酯或甘油三酯類或聚乙二醇-400。含水注射混懸液可以含有增加該混懸液粘度的物質，包括例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖。該混懸液中還可以任選地含有穩(wěn)定劑。
優(yōu)選通過選擇合適的載體將本發(fā)明的局部用組合物配制成油、霜劑、洗劑、軟膏劑等。合適的載體包括植物油或礦物油、白凡士林(白軟石蠟)、支鏈脂肪或油、動物脂肪和高分子量醇(大于C12)。優(yōu)選的載體為那些活性組分于其中可溶的載體。如果需要，還可以包括乳化劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑和抗氧化劑以及賦予(impart)顏色或香味的試劑。另外，還可以在這些局部用制劑中使用透皮滲透增強劑。這類增強劑的實例可以在美國專利US3,989,816和US4,444,762中找到。
優(yōu)選由礦物油、自乳化蜂蠟和水的混合物配制霜劑，在該混合物中混合有溶于少量油、諸如杏仁油的活性組分。這類霜劑的典型實例為包括約40份水、約20份蜂蠟、約40份礦物油和約1份杏仁油的霜劑。
可以通過將活性組分在植物油、諸如杏仁油中的混懸液與溫熱的軟石蠟混合并且使該混合物冷卻來配制軟膏劑。這類軟膏劑的典型實例為包括按重量計約30％杏仁油和約70％白軟石蠟的軟膏劑。
可以通過制備活性組分在合適的高分子量醇、諸如丙二醇或聚乙二醇中的混懸液便利地制備洗劑。
下列實施例用于解釋本發(fā)明的方法和組合物，但不限于它們。臨床療法中通常遇到并且對本領域技術人員而言顯而易見的條件和參數(shù)種類的其它合適的變型和修改屬于本發(fā)明的實質和范圍。
實施例1(-)-棉酚乙酸共結晶的制備所有化學品和試劑均購自Aldrich Chemical Co.或LancasterSynthesis Inc.并且無需進一步純化即可使用。將(-)-棉酚(1g)溶于丙酮(6ml)并且過濾。將乙酸加入到恒定攪拌的濾液中，直到溶液變渾濁。將該混合物保持在室溫下2小時并然后在4℃下保持2小時。通過在減壓下使用布氏漏斗過濾收集共結晶并且用少量己烷洗滌。首先將純的(-)-棉酚乙酸在避光容器中干燥并且在40℃下的真空干燥器中進一步干燥24小時。
實施例2(-)-棉酚乙酸共結晶的表征(-)-棉酚乙酸共結晶為黃色或淡黃色并且為針形。該共結晶易溶于丙酮和乙醚，微溶于氯仿和乙醇，并且難溶于石油。該共結晶不溶于水。使用Mel-Temp儀測定該共結晶未校準的熔點為178-180℃。
在Bruker 300儀上記錄所述共結晶的1H和13C核磁共振(NMR)光譜(附圖1和2)。將樣品溶于合適的氘化溶劑(CDCl3)。將質予化學位移記錄為相對于用作內標的四甲基硅烷(0.00ppm)的每百萬中的份數(shù)(δ)。將13C NMR光譜的化學位移記錄為相對于氘化氯仿(CDCl3，77.0ppm)的δ。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ15.21(s，2H)，11.16(s，2H)，7.80(s，2H)，6.45(s，2H)，5.79(s，2H)，4.08-3.80(m，2H)，2.18(s，6H)，2.11(s，3H)，1.58(d，J＝6.8Hz，12H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ199.4，176.8，156.0，150.5，143.4，134.1，133.7，129.7，118.1，115.9，114.6，111.8，27.9，20.7，20.3，20.2。基于1H NMR光譜，測定所述的共結晶為(-)-棉酚與乙酸按1∶1摩爾比的復合物。
在Perkin-Elmer FT-IR光譜儀上記錄共結晶的紅外光譜(附圖3)。IR(KBr)3421，2959，2929，1710，1611，1577，1440，1379，1339，1269，1176，1052，841，772cm-1。
在Micromass AutoSpec Ultima扇形磁場質譜儀上進行共結晶的電噴霧質譜(附圖4)測定。MS m/z 541(M+Na)+。
在Scintag X射線粉末衍射計上記錄共結晶的X射線粉末衍射圖譜(附圖5)?；谠搱D譜，測定所述的共結晶為(-)-棉酚與乙酸按1∶1摩爾比的復合物。
由于完整地描述了本發(fā)明，所以本領域技術人員可以理解，可以在不影響本發(fā)明范圍或其任意實施方案的情況下，可在較寬和等同的條件、表述(formulation)和其它參數(shù)范圍內實施本發(fā)明。將本文中引述的所有專利、專利申請和出版物的全部內容完整地引入本文作為參考。
權利要求
1.組合物，包含(-)-棉酚與C1-8羧酸或C1-8磺酸的共結晶。
2.權利要求1所述的組合物，其中所述的C1-8羧酸選自甲酸、乙酸、丙酸、正-丁酸、叔-丁酸、正-戊酸、2-戊酸、正-己酸、2-己酸、正-庚酸、正-辛酸、丙烯酸、琥珀酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸和苯甲酸組成的組。
3.權利要求2所述的組合物，其中所述的C1-8羧酸或C1-8磺酸為乙酸。
4.權利要求1所述的組合物，其中所述的C1-8磺酸選自甲磺酸、乙磺酸、正-丙磺酸、2-丙磺酸、正-丁磺酸、正-戊磺酸、正-己磺酸、正-庚磺酸、正-辛磺酸和苯磺酸。
5.權利要求1所述的組合物，其中所述的(-)-棉酚和所述的C1-8羧酸或C1-8磺酸在該組合物中存在的摩爾比在約10∶1-約1∶10的范圍。
6.權利要求5所述的組合物，其中所述的(-)-棉酚和所述的C1-8羧酸或C1-8磺酸在該組合物中存在的摩爾比約為1∶1。
7.權利要求6所述的組合物，包含1∶1摩爾比的(-)-棉酚和乙酸。
8.權利要求7所述的組合物，其特征在于在1H NMR光譜δ2.11(s，3H)處的乙酸的一個甲基信號與在δ2.18(s，6H)處的棉酚的兩個甲基信號的整合。
9.制備包含(-)-棉酚與C1-8羧酸或C1-8磺酸的共結晶的組合物的方法，所述的方法包括將(-)-棉酚溶于丙酮而形成溶液，過濾該溶液，在混合的同時將C1-8羧酸或C1-8磺酸加入到溶液中，直到該溶液變渾濁，將該渾濁溶液置于室溫下，然后置于降低的溫度下以便形成共結晶，收集該共結晶，用溶劑洗滌該共結晶，并且干燥該共結晶。
10.權利要求9所述的方法，其中所述的C1-8羧酸或C1-8磺酸為乙酸。
11.藥物組合物，包含權利要求1所述的組合物和藥物上可接受的載體。
12.制備藥物組合物的方法，包括將權利要求1所述的組合物與藥物上可接受的載體混合。
13.治療動物過度增殖性疾病或癌癥的方法，包括給予所述動物治療有效量的權利要求1所述的組合物。
14.權利要求13所述的方法，進一步包括給予所述動物細胞凋亡誘導物。
15.權利要求13所述的方法，其中所述的細胞凋亡誘導物為化療劑。
16.權利要求13所述的方法，其中所述的細胞凋亡誘導物為放射。
17.權利要求13所述的方法，其中在所述的細胞凋亡誘導物之前給予所述的組合物。
18.權利要求13所述的方法，其中將所述的組合物與所述的細胞凋亡誘導物同時給予。
19.權利要求13所述的方法，其中在所述的細胞凋亡誘導物之后給予所述的組合物。
20.治療動物病毒、微生物或寄生蟲感染的方法，包括給予所述的動物治療有效量的權利要求1所述的組合物。
21.治療、改善或預防對誘導動物中細胞凋亡有反應的疾病的方法，包括給予所述的動物治療有效量的權利要求1所述的組合物。
22.權利要求21所述的方法，進一步包括給予所述的動物細胞凋亡誘導物。
23.藥盒，包含權利要求1的組合物和用于給予動物所述組合物的說明書。
24.權利要求23所述的藥盒，其中所述的組合物為包含藥物上可接受的載體的藥物組合物形式。
25.權利要求23所述的藥盒，進一步包括細胞凋亡誘導物。
26.權利要求25所述的藥盒，其中所述的細胞凋亡誘導物為化療劑。
27.權利要求23所述的藥盒，其中所述的說明書用于將所述的組合物給藥至患有過度增殖性疾病的動物。
28.權利要求27所述的藥盒，其中所述的過度增殖性疾病為癌癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含用作Bcl－2族蛋白抑制劑的(－)－棉酚與C
文檔編號A61K31/11GK1960719SQ200580012648
公開日2007年5月9日 申請日期2005年3月24日 優(yōu)先權日2004年3月25日
發(fā)明者S·王, J·陳 申請人:密執(zhí)安州立大學董事會