專利名稱：脫脂治療性疫苗及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療性疫苗及一種預(yù)防性疫苗，一種制造治療性疫苗的方法和一種制造預(yù)防性疫苗的方法，一種治療受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物，一種在治療含脂傳染性生物體所致感染的方法中使用的物質(zhì)或組合物，一種用于對(duì)人或動(dòng)物接種抵抗含脂傳染性生物體所致感染的物質(zhì)或組合物，一種在制造用于治療含脂傳染性生物體所致感染的藥物時(shí)一種物質(zhì)或組合物的用途，以及一種在制造用于作為疫苗治療或預(yù)防含脂傳染性生物體所致感染的藥物時(shí)一種物質(zhì)或組合物的用途。
背景技術(shù)：
熱帶非洲被認(rèn)為是艾滋病(HIV/AIDS)、瘧疾、絲蟲病、結(jié)核以及其它無(wú)數(shù)種慢性熱帶及寄生性傳染病的故鄉(xiāng)。出現(xiàn)的問題是，為什么這些傳染病是慢性的，以及為什么受感染的人的免疫系統(tǒng)對(duì)它們不能有效應(yīng)對(duì)。
在整個(gè)人類的歷史中，傳染性疾病已經(jīng)導(dǎo)致人類承受巨大、長(zhǎng)期的痛苦和死亡。某些感染原從開始就導(dǎo)致慢性感染。由它們所致的人類疾病包括例如結(jié)核、麻風(fēng)病、身體不同部位的真菌病、瘧疾、導(dǎo)致“河盲癥”的盤尾絲蟲和微絲蚴。病毒包括有名的人類免疫缺陷病毒(HIV)、人類T-淋巴白血病病毒(HLTV1)、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、單純皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒(CMV)、引起巴克氏淋巴瘤(Burkitt′s Lymphoma)的人皰疹I(lǐng)V型病毒(Epstein-Barr virus，EBV)以及引起淋巴瘤和其它惡性腫瘤疾病的其它病毒。
不同的動(dòng)物物種具有相同或近似的可致其慢性感染和腫瘤的微生物和病毒，例如，牛結(jié)核病、逆轉(zhuǎn)錄酶病毒例如猴免疫缺損病毒(SIV)、綿羊“搔癢癥”或雞、鼠、貓和牛的惡性腫瘤。這個(gè)列表并非人類或動(dòng)物疾病的全部。
以下，術(shù)語(yǔ)“微生物”應(yīng)理解為包括影響人類和動(dòng)物的細(xì)菌、真菌以及寄生蟲，但不包括病毒。
不受理論的限制，以下將作為理解本發(fā)明的基礎(chǔ)。大多數(shù)導(dǎo)致人類慢性感染的微生物必須從外界侵入人體。侵入機(jī)體之前，它們?nèi)吭诘厍颦h(huán)境中已經(jīng)單獨(dú)并獨(dú)立存在和進(jìn)化了數(shù)百萬(wàn)年。在從一個(gè)人傳播到另一個(gè)人的過程中，這些微生物通常不得不在獲得新宿主之前再次作為獨(dú)立個(gè)體在外界環(huán)境中至少生存一個(gè)短暫的時(shí)期。因此，它們?cè)谶M(jìn)化的某些時(shí)間點(diǎn)上要全部暴露并生存在外界環(huán)境中。
這些微生物所暴露的地球環(huán)境，在某些方面對(duì)所有形式的生命都是不利的，因?yàn)樽鳛槲覀儹h(huán)境恒久不變的一部分的陽(yáng)光會(huì)使所有暴露在其中有的生物脫水。具體地說(shuō)，陽(yáng)光對(duì)微生物不利，因?yàn)檫@種生物體中極小量的機(jī)體水分很容易脫水而流失，而這會(huì)導(dǎo)致生物體的死亡。因此，設(shè)法在陽(yáng)光下地球環(huán)境中生存下來(lái)的微生物是已經(jīng)獲得了將水分保持和留存在其內(nèi)能力的突變體。
脂質(zhì)和類脂物質(zhì)對(duì)脫水相對(duì)具有抵抗力，大多數(shù)暴露在太陽(yáng)光線或熱中的生物表面上具有脂質(zhì)物質(zhì)，以減少水分流失。因此，在地球環(huán)境中作為獨(dú)立個(gè)體生存的微生物是獲得了用于阻止或減少水分從其表面流失的脂質(zhì)覆蓋物的突變體。微生物脂質(zhì)覆蓋物的數(shù)量顯然決定其在外界環(huán)境中的生存能力。具有厚脂質(zhì)覆蓋物的微生物可以比那些具有薄脂質(zhì)覆蓋物的微生物更好地存活，大多數(shù)作為獨(dú)立個(gè)體的微生物在地球環(huán)境中生存的不同能力與其脂質(zhì)覆蓋物的厚度不同有關(guān)。例如，結(jié)核桿菌可以在塵埃中存活大約一年，其公知具有非常厚的脂質(zhì)層。這種特性可以用齊耳-納耳遜二氏(Zeihl Nilsson)染色法清楚地說(shuō)明。
防止水分從微生物流失的保護(hù)性脂質(zhì)層覆蓋，在某些方式中最終隱藏，賦予有關(guān)微生物特性、特征或唯一性的真正抗原。當(dāng)來(lái)自任何來(lái)源的真正的、可辨的抗原得以進(jìn)入機(jī)體，作為第一道防線，自然殺傷細(xì)胞通常產(chǎn)生可以立即破壞它們的細(xì)胞因子。作為第二道防線，機(jī)體的長(zhǎng)期免疫反應(yīng)(通過抗體和細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng))將決定這些真正抗原是否繼續(xù)留在體內(nèi)。
在正常的感染中，當(dāng)具有脂質(zhì)覆蓋物的微生物侵入機(jī)體時(shí)，因?yàn)殡y以接近脂質(zhì)層下的真正抗原，針對(duì)該微生物的由細(xì)胞因子做出的迅速反應(yīng)，以及長(zhǎng)期、有效的免疫反應(yīng)，不會(huì)出現(xiàn)或出現(xiàn)很少。相反，由微生物表面的脂質(zhì)層激發(fā)的免疫反應(yīng)不涉及下面的真正抗原，不會(huì)真正影響到它們。因此，微生物作為慢性感染存活在體內(nèi)。通過用脂質(zhì)層掩蓋真正抗原，微生物因此可以留存其機(jī)體水分并確保它們首先存活在外界環(huán)境中，然后逃過機(jī)體的免疫反應(yīng)，從而作為慢性或反復(fù)感染而持續(xù)。
微生物的脂質(zhì)層可以在體外以脂質(zhì)溶劑，例如氯仿或醚剝離，以暴露其真正抗原。脂質(zhì)溶劑的作用時(shí)間依賴于欲除去的脂質(zhì)層的數(shù)量和性質(zhì)。一旦暴露，微生物的真正抗原可以作為一種疫苗重新注射到未受感染的機(jī)體中。它們會(huì)引起體內(nèi)具有細(xì)胞因子的自然殺滅細(xì)胞的迅速反應(yīng)和隨后具有抗體的長(zhǎng)期免疫反應(yīng)。當(dāng)此后感染中面臨相同的微生物時(shí)，這些細(xì)胞因子和免疫反應(yīng)會(huì)穿透脂質(zhì)層，并破壞下面的真正抗原。通過這種方式，保護(hù)接種機(jī)體不會(huì)感染微生物。
試驗(yàn)表明，對(duì)用于未受感染的機(jī)體獲得完全免疫保護(hù)的預(yù)防性疫苗來(lái)說(shuō)，需要·疫苗暴露與有關(guān)微生物相關(guān)的真正抗原，并且免疫系統(tǒng)可以接近這些真正抗原；·待接種的人具有正常的免疫系統(tǒng)；以及·待接種機(jī)體的血清中沒有已有感染或有關(guān)微生物的抗體。
因?yàn)橛嘘P(guān)微生物的真正抗原從未暴露給免疫系統(tǒng)，人體內(nèi)沒有針對(duì)真正抗原的抗體，所以已形成的感染可能會(huì)持續(xù)或反復(fù)。在這種情況下，疫苗上所暴露的真正抗原會(huì)激發(fā)細(xì)胞因子和物質(zhì)迅速產(chǎn)生，其穿透?jìng)魅拘晕⑸锊⒃谄渲|(zhì)覆蓋物下將其殺滅。產(chǎn)生的細(xì)胞因子總量和殺滅的微生物數(shù)量取決于疫苗的使用量和可用的自然殺滅細(xì)胞的數(shù)量。此外，疫苗的真正抗原會(huì)激發(fā)首次免疫反應(yīng)，其會(huì)加強(qiáng)和消除微生物。在合適的時(shí)間間隔中將足夠數(shù)量的這種疫苗直接注射到受感染人體中，可以作為治療性疫苗使用。
然而，在所有的慢性感染中，可證實(shí)的微生物抗體通常會(huì)出現(xiàn)在受感染機(jī)體中。盡管有這些抗體，持續(xù)感染仍是它們不相關(guān)或無(wú)力的證據(jù)。此外，這種抗體可以使任何直接引入受感染機(jī)體中與微生物相關(guān)的疫苗固定不動(dòng)。在這種情況下，必須實(shí)施一種免疫療法的方式，激發(fā)新的有效免疫反應(yīng)，其可以徹底破壞并防止被相同微生物進(jìn)一步感染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種由現(xiàn)癥感染的微生物制備的新型疫苗，其通過用脂質(zhì)溶劑除去其脂質(zhì)層暴露其真正抗原而制得。利用正常免疫系統(tǒng)，其可以在受感染人體條件下體外人工繁殖，其與那些正常未受感染人的預(yù)防性接種類似。
根據(jù)本發(fā)明的方法，將取自受感染人具有正常免疫細(xì)胞的外周血白細(xì)胞洗滌至不含所有抗體。洗滌過的白細(xì)胞包含對(duì)現(xiàn)癥感染不定型并與新抗原自由反應(yīng)的正常免疫細(xì)胞。將洗滌過的細(xì)胞在體外混懸于一種介質(zhì)中，該介質(zhì)包含去除了免疫球蛋白或抗體的受感染人血清。這樣體外的情況與感染之前未受感染人體所見情況相同或相近(無(wú)抗原的臍帶血清可以代替人血清)。將疫苗加入介質(zhì)中與免疫活性細(xì)胞一起培養(yǎng)，然后將混合物重新注射到受感染的人體。重新注射的細(xì)胞及其子代在體內(nèi)會(huì)繼續(xù)其在體外的起始過程，并且，所激發(fā)的新的免疫反應(yīng)會(huì)逐漸并徹底殺滅微生物。這會(huì)意想不到地得到一種受感染人體的預(yù)防性接種，與將疫苗直接注射到未受感染人體中相似。以這種方法對(duì)已形成的感染使用疫苗就是感染的免疫療法。正常的預(yù)防性疫苗也是一種免疫療法，其在感染之前給予未受感染人體，并通過殺滅而賦予免疫，其為任何最終感染接種人體的微生物的免疫療法的一種方式。
因此，本發(fā)明可以使用疫苗預(yù)防及治療已被任何具有在體外去除了脂質(zhì)層而暴露其真正抗原的微生物所形成的感染。
病毒公認(rèn)是起源于原生細(xì)胞的核物質(zhì)。雖然它們作為獨(dú)立個(gè)體存在，病毒的生理機(jī)能和存活完全依賴于活細(xì)胞。因此，它們不像游離生存的微生物那樣暴露在陽(yáng)光的不利影響中。這些演變成人和動(dòng)物慢性感染的病毒，例如HIV和其它逆轉(zhuǎn)錄酶病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、EBV、CMW、單純皰疹病毒以及人和動(dòng)物致腫瘤病毒都為包膜病毒。病毒的包膜在它們的進(jìn)化過程中從其宿主細(xì)胞獲取，以保證其在體內(nèi)存活。
DNA病毒例如EBV、CMV以及B型肝炎病毒在離開其生長(zhǎng)的核時(shí)，從宿主細(xì)胞的核膜中獲取其包膜。RNA病毒例如逆轉(zhuǎn)錄酶病毒和C型肝炎病毒在成熟病毒最終從其生長(zhǎng)的宿主細(xì)胞中離開時(shí)，從細(xì)胞壁膜獲取其各自的包膜。因?yàn)樗鼈償y帶的包膜源于宿主細(xì)胞，所以包膜病毒被認(rèn)為是“雜交”病毒，其結(jié)合了對(duì)機(jī)體來(lái)說(shuō)是外來(lái)的病毒核心和源于宿主的包膜。由于此原因，宿主免疫系統(tǒng)將包膜病毒認(rèn)作是“部分自體”。
宿主殺滅病毒及其包膜的有效免疫反應(yīng)也會(huì)殺滅所有那些病毒包膜所源自的宿主細(xì)胞。在B型和C型肝炎的情況中，肝細(xì)胞也會(huì)被同樣殺滅。在HIV的情況中，所有的CD4+細(xì)胞會(huì)被清除。在這樣的情況下，這會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重和致命的自身免疫性疾病。為了避免連同病毒一起殺滅機(jī)體，宿主的免疫反應(yīng)因而被迫效率低下。在從宿主取得其包膜的過程中，這些病毒“有意”取得“人質(zhì)”，并以其“脅迫”機(jī)體免疫系統(tǒng)使其反應(yīng)效率低下。這些效率低下的免疫反應(yīng)確保包膜病毒作為慢性感染在體內(nèi)持續(xù)。
像其所源自的細(xì)胞膜一樣，病毒包膜包含可以很容易被脂質(zhì)溶劑例如氯仿或醚破壞的磷脂蛋白。當(dāng)包膜被破壞之后，將作為疫苗的殘留病毒抗原注射到未受感染的人體中時(shí)，會(huì)被免疫系統(tǒng)認(rèn)為是非自體并且完全異質(zhì)。激發(fā)適當(dāng)免疫反應(yīng)，其僅有效破壞與疫苗中所用病毒抗原一致的病毒核或病毒非包膜部分。任何由相同包膜病毒造成的對(duì)接種機(jī)體的后續(xù)感染將僅使其核遭到破壞，而留下其完整的包膜。空包膜在人體內(nèi)沒有生物學(xué)價(jià)值。接種人體將對(duì)有關(guān)包膜病毒免疫。通過破壞包膜病毒的包膜，殘留病毒抗原形成有力高效的用于有關(guān)病毒的疫苗。這種疫苗給予未受感染的人體后，其將通過僅破壞后續(xù)感染機(jī)體的同類包膜病毒的病毒核獲得持久的免疫力。
在由包膜病毒形成的感染中，病毒包膜上的宿主特性脅迫自然殺傷細(xì)胞并阻斷所有能有效殺滅病毒的長(zhǎng)期免疫反應(yīng)。然而，當(dāng)病毒包膜在體外被破壞，殘留抗原作為疫苗重新注射到已形成感染的人體中時(shí)，其被認(rèn)為是完全異質(zhì)并且非自體。疫苗激發(fā)快速細(xì)胞因子，其穿透容納包膜病毒的病毒包膜和細(xì)胞膜，并殺滅其中的病毒。所產(chǎn)生的細(xì)胞因子的數(shù)量取決于疫苗的使用量以及患者自然殺傷細(xì)胞的狀態(tài)和數(shù)量。當(dāng)感染消除或減少到無(wú)顯著意義的水平時(shí)，患者的長(zhǎng)效預(yù)防性接種或免疫療法如下獲得。
通過檢驗(yàn)患者的免疫系統(tǒng)正常，并且病毒已明顯消除或減少(在HIV的情況中，CD4+量約為400-500，病毒量小于50復(fù)制數(shù)/毫升)之后，從患者體內(nèi)抽取肝素血。將血中的外周血白細(xì)胞洗滌至不含所有痕量的病毒抗體。將未定型病毒的已洗滌白細(xì)胞中的免疫活性細(xì)胞混懸于介質(zhì)中，該介質(zhì)包含已除去免疫球蛋白和抗體的患者血清(無(wú)病毒抗體的臍帶血清可以代替患者的無(wú)抗體血清?；旌衔镏械难宕_保疫苗的抗原可以適當(dāng)?shù)爻尸F(xiàn)給免疫系統(tǒng)。)。將疫苗加入該混合物中，培養(yǎng)之后重新注射到患者體內(nèi)。這就是對(duì)患者的免疫療法，其類似于將預(yù)防性疫苗注射到具有正常免疫系統(tǒng)，且無(wú)感染或無(wú)病毒抗體的未受感染的人體中。
重新注射的混合物將在體內(nèi)繼續(xù)體外的起始過程，被免疫療法激發(fā)的新免疫反應(yīng)從機(jī)體中消除所有病毒殘留，并防止未來(lái)任何由相同包膜病毒造成的再感染。因而可以通過破壞給定包膜病毒的包膜制備一種疫苗，其可以用于預(yù)防或治療由相同包膜病毒造成的感染。
所生物體內(nèi)的免疫反應(yīng)利用特定補(bǔ)體的一種或另一種形式。即使免疫反應(yīng)效率很低時(shí)，像由微生物及包膜病毒造成的大多數(shù)慢性感染，也同樣使用補(bǔ)體。此時(shí)，特定的微生物或病毒補(bǔ)體耗盡造成的補(bǔ)給短缺，無(wú)法消除慢性感染。
始于體外的免疫療法激發(fā)患者新的有效免疫反應(yīng)也需要補(bǔ)體。這種對(duì)補(bǔ)體的新需求只會(huì)使已有的慢性短缺加重并使患者的臨床狀況惡化。因此，有必要使患者的病毒載量或微生物以其它方式實(shí)質(zhì)上減少，以使之后產(chǎn)生的補(bǔ)體可以用于完成新的由上述體外開始的免疫療法所激發(fā)的有效免疫反應(yīng)。
一種用于減少如上所述微生物病毒載量的方法，開始首先給予患者簡(jiǎn)單直接注射適當(dāng)大劑量除去了病毒包膜而暴露真正抗原的疫苗。這發(fā)生在新系統(tǒng)仍正常時(shí)。其對(duì)患者并不真正接種，但激發(fā)自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生能殺滅大量病毒或微生物的細(xì)胞因子。這樣疫苗就與藥品類似。如果在合適的時(shí)間間隔里重復(fù)，這種殺滅可以顯著減少病毒載量或微生物和其對(duì)補(bǔ)體的需要，使其達(dá)到無(wú)顯著意義的水平。此后體內(nèi)產(chǎn)生或游離的補(bǔ)體可用于后續(xù)始于體外的免疫療法，其激發(fā)體內(nèi)有效的免疫反應(yīng)。該后一步驟僅在有證據(jù)表明患者體內(nèi)微生物病毒載量不能造成明顯的補(bǔ)體需求時(shí)才實(shí)施。
當(dāng)免疫系統(tǒng)削弱時(shí)，對(duì)已給予疫苗患者的洗滌過的患者白細(xì)胞和疫苗進(jìn)行一段時(shí)間的培養(yǎng)會(huì)提供細(xì)胞因子，其在注射到患者體內(nèi)時(shí)會(huì)激發(fā)病毒數(shù)量或微生物下降。此步驟可以在一個(gè)月內(nèi)重復(fù)2或3次。
另一種確保始于體外的免疫療法在正在慢性感染的患者體內(nèi)有效的快速方法為，通過對(duì)患者輸入新鮮血液提供額外的補(bǔ)體。在新免疫反應(yīng)開始出現(xiàn)時(shí)，通常在緊接免疫療法之后的10-14天，輸血是最有用的。輸血應(yīng)反復(fù)進(jìn)行，直到病毒或微生物完全清除。
具體實(shí)施例方式
因此，根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供一種制造疫苗的方法，該方法包括步驟
以含脂溶劑提取生物體液，該生物體液從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物獲取，該生物體液包含含脂傳染性生物體和提取物，提取產(chǎn)生水相和含脂有機(jī)相，該水相包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體，以及分離水相。
脂質(zhì)提取溶劑可以為氯仿或醚。
生物體液可以為全血、血漿、胸膜液、腦脊髓液、培養(yǎng)液或其它局部體液。含脂傳染性生物體可以為病毒、細(xì)菌、例如結(jié)核或麻風(fēng)菌、原生動(dòng)物、真菌或細(xì)胞壁中包含脂質(zhì)或類脂物質(zhì)的一類霉菌。具體地說(shuō)，其可以為包膜病毒，例如免疫缺陷病毒如人類免疫缺陷病毒或HIV?？商鎿Q的地，其可以為包膜病毒，例如B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、人皰疹I(lǐng)V型病毒、單純皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、人類T-淋巴白血病病毒(HTLV1)、癌癥病毒及其它任何類似的包膜病毒。
包含含脂傳染性生物體的生物體液的提取工藝可以采用混合、旋流、渦流、旋轉(zhuǎn)或其它所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟悉的合適工藝。提取時(shí)間應(yīng)足夠長(zhǎng)，以使氯仿溶解所有、或?qū)嵸|(zhì)上所有傳染性生物體中所含的脂質(zhì)，并且因提取工藝而不同。例如，在旋流混合的情況中，例如為HIV的情況，旋流可以進(jìn)行30-60分鐘的時(shí)間，典型地為30分鐘。
該方法還可以包括濃縮水相生成包含傳染性生物體的濃縮物，或者，通過例如冷凍干燥法或所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟悉的技術(shù)分離實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體的步驟。
通過這種方式生成的疫苗可以作為自體疫苗用于生物體液所提自的人體?？商鎿Q地，該方法可以包括分離和培養(yǎng)來(lái)自居住在特定地理區(qū)域、受到感染的人的傳染性生物體的附加步驟。在該方式中，疫苗可以用于預(yù)防(作為真正疫苗)或用于治療來(lái)自該地理區(qū)域的人。本發(fā)明的這一方面在例如HIV在不同地理區(qū)域有不同形式的病毒的情況下十分重要。
該方法可以包括稀釋生物體液或稀釋水提物的步驟，其目的為獲取每ml約100-200個(gè)病毒粒子的抗原疫苗。
在提取步驟中所用的氯仿與生物體液的比例(體積∶體積)可以為3∶1至5∶1。最好為約3∶1。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種制造第一治療性疫苗的方法。該方法包括步驟以脂質(zhì)提取溶劑提取從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物中獲取的生物體液，該生物體液包含含脂傳染性生物體，提取產(chǎn)生水相和含脂相，該水相包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體，將水相從含脂相中分開，將白細(xì)胞部分從人或動(dòng)物血中分離，控制分離使白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上不含血漿、游離含脂傳染性生物體或含脂傳染性生物體的游離抗體，以及將至少部分水相與至少部分白細(xì)胞部分結(jié)合生成疫苗。
應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，白細(xì)胞部分的一部分會(huì)包含受感染細(xì)胞。
上述制備的第一治療性疫苗用于從其獲取生物體液和白細(xì)胞部分的患者。然而，本發(fā)明該實(shí)施例的發(fā)展例中，取自特定地理區(qū)域的受感染人的白細(xì)胞可能如上所述與疫苗結(jié)合生成第二治療性疫苗，該疫苗從取自該同一地理區(qū)域另一個(gè)受感染人的分離培養(yǎng)的病毒制備而成。
因此，本發(fā)明擴(kuò)展到一種制造第二治療性疫苗的方法。該方法包括步驟分離并培養(yǎng)來(lái)自生物體液的傳染性生物體，該生物體液從至少一個(gè)受含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物獲取，以生成包含培養(yǎng)的含脂傳染性生物體的組合物，以脂質(zhì)提取溶劑提取含脂傳染性生物體的水溶液，提取產(chǎn)生水相和含脂相，水相包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的生物體，將水相從含脂相中分開，將白細(xì)胞部分從另一個(gè)被含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物的血中分離，控制分離使白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上不含血漿、游離含脂傳染性生物體或含脂傳染性生物體的游離抗體，以及將至少部分水相與至少部分白細(xì)胞部分結(jié)合生成第二治療性疫苗。
脂質(zhì)提取溶劑可以是任何合適的溶劑，可以是氯化的碳?xì)浠衔锢缏确??？商鎿Q地，其可以是碳?xì)浠衔锘蛎?。具體地說(shuō)，值得注意的是，氯仿適合用于本發(fā)明的方法，即使申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/IB01/01099的專利清楚地表明氯仿會(huì)使很多血漿蛋白質(zhì)變性，不適用于后續(xù)將給回到動(dòng)物或人類的液體中。
白細(xì)胞部分可以這樣得到從人或動(dòng)物抽取血液樣本，通過沉降從血漿中分離血紅細(xì)胞，通過例如離心從血漿中分離白細(xì)胞，以及洗滌白細(xì)胞使其不含殘留血漿以及帶有生理鹽水的抗體。
第二治療性疫苗用于從其取得白細(xì)胞部分的患者。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，從提取培養(yǎng)的含脂傳染性生物體產(chǎn)生的水相可以作為預(yù)防性疫苗直接用于正常未受感染的人，其生活在生物體液所取自的人或動(dòng)物所生活、以及含脂傳染性生物體流行的地理區(qū)域。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種疫苗，其通過一種方法制備，該方法包括步驟以氯仿提取從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物中獲取的生物體液，該生物體液包含含脂傳染性生物體，提取產(chǎn)生水相和含脂相，水相包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體，以及分離水相。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種第一治療性疫苗，其通過一種方法制備，該方法包括以脂質(zhì)提取溶劑提取從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物中獲取的生物體液，該生物體液包含含脂傳染性生物體，提取產(chǎn)生水相和含脂相，水相包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體，將水相從含脂相中分開，將白細(xì)胞部分從人或動(dòng)物血中分離，控制分離使白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上不含血漿、游離含脂傳染性生物體和含脂傳染性生物體的游離抗體，以及將至少部分水相與至少部分白細(xì)胞部分結(jié)合生成疫苗。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種第二治療性疫苗，其通過一種方法制備，該方法包括分離并培養(yǎng)來(lái)自生物體液的傳染性生物體，該生物體液從一個(gè)受含脂傳染性生物體感染的第一人或第一動(dòng)物獲取，以生成包含培養(yǎng)的含脂傳染性生物體的組合物，以脂質(zhì)提取溶劑提取含脂傳染性生物體的水溶液，提取產(chǎn)生水相和含脂相，水相包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的生物體，將水相從含脂相中分開，將白細(xì)胞部分從受到含脂傳染性生物體感染的第二人或第二動(dòng)物的血中分離，控制分離操作，使白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上不含血漿、游離含脂傳染性生物體或含脂傳染性生物體的游離抗體，以及將至少部分水相與至少部分白細(xì)胞部分結(jié)合生成第二治療性疫苗。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種治療受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物的方法，該方法包括步驟以氯仿提取生物體液，該生物體液從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物獲取，該生物體液包含含脂傳染性生物體和提取物，提取產(chǎn)生包含實(shí)質(zhì)上已去除脂質(zhì)的傳染性生物體的水相和含脂有機(jī)相，分離水相，以及將有效量的水相給予人或動(dòng)物。
該方法還可以包括上述濃縮水相生成濃縮物，或相反，分離實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體的步驟，并將所得物質(zhì)，可選擇地，與藥劑學(xué)上可接受的輔料或載體一起給予人或動(dòng)物。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種治療受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物的方法，該方法包括步驟以脂質(zhì)提取溶劑提取從人或動(dòng)物中獲取的生物體液，該生物體液包含含脂傳染性生物體，提取產(chǎn)生包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體的水相和含脂相，
將水相從含脂相中分開，將白細(xì)胞部分從人或動(dòng)物血中分離，控制分離使白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上不含血漿、游離含脂傳染性生物體或含脂傳染性生物體的游離抗體，將至少部分水相與至少部分白細(xì)胞部分結(jié)合生成一種組合物，以及將有效治療量的該組合物給予人或動(dòng)物。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種治療受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物的方法，該方法包括步驟分離并培養(yǎng)來(lái)自生物體液的傳染性生物體，該生物體液從一個(gè)受含脂傳染性生物體感染的第一人或第一動(dòng)物獲取，以生成包含培養(yǎng)的含脂傳染性生物體的組合物，以脂質(zhì)提取溶劑提取含脂傳染性生物體的水溶液，提取產(chǎn)生包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的生物體的水相和含脂相，將水相從含脂相中分開，將白細(xì)胞部分從被含脂傳染性生物體感染的第二人或第二動(dòng)物的血中分離，控制分離使白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上不含血漿、游離含脂傳染性生物體或含脂傳染性生物體的游離抗體，將至少部分水相與至少部分白細(xì)胞部分結(jié)合生成一種組合物，以及將有效治療量的該組合物給予人或動(dòng)物。
上述方法可以包括對(duì)人或動(dòng)物輸入新鮮血液，以增加血液中補(bǔ)體或類補(bǔ)體蛋白的步驟。補(bǔ)體系統(tǒng)由一組血清蛋白組成，其在防御性免疫反應(yīng)中充當(dāng)主要角色(微生物學(xué)，第2版，Prescott，Harley及Klein著)，而且輸血增加免疫系統(tǒng)嚴(yán)重受損的人或動(dòng)物的蛋白質(zhì)水平。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種第三治療性疫苗，其包括在體外暴露到疫苗的白細(xì)胞，該疫苗由實(shí)質(zhì)上除去了脂質(zhì)部分的含脂傳染性生物體生成，暴露實(shí)質(zhì)上在沒有游離含脂傳染性生物體存在，而有不含游離含脂傳染性生物體抗體血清的介質(zhì)存在時(shí)發(fā)生。
白細(xì)胞典型地在37℃暴露約4個(gè)小時(shí)。
血清蛋白提供可以使治療性疫苗在體內(nèi)發(fā)揮作用的調(diào)理素。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種預(yù)防性疫苗，其通過一種方法制備，該方法包括步驟培養(yǎng)由受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物獲取的生物體液，以脂質(zhì)提取溶劑提取含有含脂傳染性生物體的培養(yǎng)物，提取產(chǎn)生包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體水相和含脂相，以及分離水相。
本發(fā)明提供一種物質(zhì)或組合物，用于一種治療含脂傳染性生物體所致感染的方法，該物質(zhì)或組合物包含如前所述的疫苗或第一或第二或第三治療性疫苗。
本發(fā)明還提供一種物質(zhì)或組合物，用于對(duì)人或動(dòng)物接種，抵抗含脂傳染性生物體所致的感染，該物質(zhì)或組合物包含如前所述的分離并培養(yǎng)的傳染性生物體。
傳染性生物體可以包括實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)包膜的HIV、Aghbs、Acv、EBV、單純皰疹以及腫瘤病毒。
本發(fā)明還提供一種物質(zhì)或組合物，用于預(yù)防含脂傳染性生物體所致的感染，該物質(zhì)或組合物包含如前所述的預(yù)防性疫苗。
本發(fā)明還提供一種物質(zhì)或組合物在制造用于治療含脂傳染性生物體所致感染的藥品中的用途，該物質(zhì)或組合物包含如前所述的疫苗或治療性疫苗。
本發(fā)明還提供一種物質(zhì)或組合物在制造作為疫苗用于預(yù)防含脂傳染性生物體所致感染的藥品中的用途，該物質(zhì)或組合物包含如前所述分離并培養(yǎng)的傳染性生物體。
本發(fā)明還提供一種物質(zhì)或組合物在制造用于預(yù)防含脂傳染性生物體所致感染的藥品中的用途，該物質(zhì)或組合物包含如前所述的預(yù)防性疫苗。
本發(fā)明參照以下實(shí)施例、表格和附錄，通過舉例的方式進(jìn)行說(shuō)明。
實(shí)施例1
疫苗將取自HIV病毒陽(yáng)性人的新鮮空腹血(5ml)(每ml含10000至20000個(gè)病毒粒子)連同500單位肝素抽入注射器中，室溫下放置30分鐘。該血漿與氯仿(5ml)同置已消毒的具旋蓋玻璃試管中。以旋渦混勻器混合該混合物5分鐘，然后在室溫下再放置25分鐘。加入生理鹽水(9ml)，并將混合物以旋渦混勻器混合該混合物5分鐘，然后在室溫下再放置10分鐘。將所得混合物轉(zhuǎn)移到已消毒的玻璃離心試管中，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。將浮在表面的水層轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基直徑為10cm的已消毒玻璃培養(yǎng)皿中，置排風(fēng)罩中放置30分鐘。所得10ml疫苗形成10個(gè)劑量，每ml疫苗含抗原1000-2000個(gè)病毒粒子。第一疫苗以單劑量在-200℃下儲(chǔ)存。
實(shí)施例2疫苗在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，將取自患者的每ml含10000至20000個(gè)病毒粒子的新鮮空腹血(5ml)連同500單位肝素抽入注射器中。該血漿(1ml)與氯仿(5ml)同置已消毒的具旋蓋玻璃試管中，以旋渦混勻器徹底混勻該混合物10-15分鐘。然后在室溫(20-25℃)下放置45分鐘。將生理鹽水(9ml)加入該混合物并以旋渦混勻器混合該混合物5分鐘，然后在室溫下放置10分鐘。將所得混合物轉(zhuǎn)移到已消毒的玻璃離心試管中，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。將表面層轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基直徑為10cm的已消毒玻璃培養(yǎng)皿中，置排風(fēng)罩中放置30分鐘。將表面層(1ml)以生理鹽水(9ml)稀釋，得到1/100的稀釋液。該最終稀釋液(1ml)所含抗原為每ml疫苗含抗原1000-2000個(gè)病毒粒子，以單劑量在-200℃下儲(chǔ)存。
實(shí)施例3自體疫苗對(duì)病毒數(shù)量的影響(見表1，附錄1)自體疫苗按照實(shí)施例1的方法制備，包含的抗原為有關(guān)患者體內(nèi)病毒量的1/100。將自體疫苗(1ml)直接皮下注射給患者。除了7號(hào)患者之外，這明顯的使患者病毒數(shù)量產(chǎn)生下降。在1號(hào)和2號(hào)患者中，自體疫苗間隔4天2次注射，病毒數(shù)量明顯地分別下降91％和75％。
在另一個(gè)患者中(附錄1(b))，將1ml自體疫苗作為5個(gè)樣品分別在2001年4月17日、2001年4月21日、2001年6月21日、2001年8月21日和2001年10月21日進(jìn)行5次簡(jiǎn)單皮下注射。病毒數(shù)量從2001年4月16日的29566(4.5log10)下降到15個(gè)月之后2002年7月2日的低于50(1.5log10)，而且HIV血清反應(yīng)已經(jīng)難以分辨。但是，在2002年12月17日病毒數(shù)量升高到65(1.8log10)。這提示直接注射自體疫苗會(huì)導(dǎo)致病毒數(shù)量下降到血清反應(yīng)難以分辨的點(diǎn)，但是無(wú)自體疫苗時(shí)病毒復(fù)制就重新啟動(dòng)。
實(shí)施例4具有洗滌過的外周血白細(xì)胞的自體疫苗的影響(見附錄2)自體疫苗按照實(shí)施例1的方法制備，并稀釋100倍。將血液樣品連同1000單位肝素一起抽入注射器中。將該樣品轉(zhuǎn)移到具有直徑為1cm培養(yǎng)基的已消毒的具旋蓋長(zhǎng)試管中，-37℃下垂直放置30分鐘。吸取紅細(xì)胞沉淀上方富含白細(xì)胞的血漿，在臺(tái)式離心機(jī)(Jouan C312型)中2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘。棄去浮在上方的血漿，將生理鹽水(5ml)加入白細(xì)胞沉淀，混合器中旋渦振蕩1分鐘后，再次2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘。
棄去上浮物，將新鮮的生理鹽水(5ml)加入沉淀。該洗滌白細(xì)胞的步驟重復(fù)2次以上，以從細(xì)胞沉淀中除去所有痕量的抗體。然后將自體疫苗(1ml)加入洗滌過的白細(xì)胞中，立即將混合物皮下注射給有關(guān)患者。在如下表2中所示日期重復(fù)該程序。患者CD4有顯著增加，而所有患者病毒數(shù)量有明顯下降，34位患者中9位降到50以下。
實(shí)施例5治療性疫苗和免疫療法洗滌過的外周血白細(xì)胞如實(shí)施例4制備。將根據(jù)實(shí)施例1的方法制備的自體疫苗(1ml)加入細(xì)胞沉淀，該細(xì)胞沉淀接著還加入具有10％人類臍帶血清的RPMI(GIBCO)(5ml)培養(yǎng)介質(zhì)，該臍帶血清代替已除去免疫球蛋白的患者血清，不含HIV及其它病毒的抗體。該混合物在37℃下培養(yǎng)4小時(shí)。將治療性疫苗直接皮下重新注射到患者前臂，該患者為血液樣品抽取及自體疫苗制備的來(lái)源。整個(gè)程序在5天和30天時(shí)作為加強(qiáng)劑重復(fù)進(jìn)行。
首次免疫療法后約10-14天，少數(shù)患者中出現(xiàn)輕微困倦、身體疼痛及輕微發(fā)燒形式的輕微免疫反應(yīng)。這些癥狀通過退熱和抗過敏藥，例如阿司匹林和地塞米松控制。
如果這些癥狀一直持續(xù)，其通常通過輸入新鮮血液終止，其提供額外的補(bǔ)體用于治療性疫苗和免疫療法所激發(fā)的免疫反應(yīng)。CD4+和病毒數(shù)量每3-4個(gè)月重復(fù)一次，直到病毒數(shù)量低于檢測(cè)水平。連續(xù)3年每年監(jiān)控一次。在少數(shù)病例中，患者的血清反應(yīng)陽(yáng)性狀態(tài)數(shù)個(gè)周期之后變成HIV血清反應(yīng)陰性。
對(duì)5個(gè)患者按實(shí)施例5治療的結(jié)果表示在下表1中。

時(shí)間指治療后再次測(cè)定CD4和病毒載量之前的月數(shù)。病毒粒子低于50時(shí)無(wú)法計(jì)數(shù)。
第六位患者在1992年十月發(fā)現(xiàn)，并根據(jù)實(shí)施例5進(jìn)行治療，未測(cè)定其CD4+和病毒載量，三年后報(bào)告血清反應(yīng)陰性。上述4號(hào)和5號(hào)病例以及第六位患者的血清反應(yīng)陰性結(jié)果確證了HIV已完全從患者體內(nèi)清除。
HIV為何不能通過免疫系統(tǒng)從體內(nèi)清除，公認(rèn)的原因是其為具有包膜的包膜病毒，該包膜在成熟病毒離開受到感染的細(xì)胞時(shí)從CD4+膜取得。關(guān)于此假設(shè)的全面討論發(fā)表在《醫(yī)學(xué)假說(shuō)申請(qǐng)者》(Applicant in MedicalHypotheses，(1994)42，81-88)和《醫(yī)學(xué)假說(shuō)》Medical Hypotheses(1997)48，517-521)上，其引用于此作為參考。因?yàn)镠IV的包膜源自CD4+膜，所以免疫系統(tǒng)將病毒認(rèn)定為“部分自體”。有效的免疫反應(yīng)，其忽略包膜的存在而殺滅具有包膜的病毒，也會(huì)殺滅所有的病毒包膜來(lái)源CD4+細(xì)胞。HIV以含脂包膜的形式有效取得“人質(zhì)”，并以其“脅迫”宿主免疫系統(tǒng)使其反應(yīng)效率低下。
有效的預(yù)防性疫苗為預(yù)防性免疫療法，必須符合三個(gè)要求。這些要求為，首先，該疫苗必須激發(fā)殺滅病毒的免疫反應(yīng)，第二，人體免疫系統(tǒng)必須正常，第三，待接種的人沒有對(duì)病毒的已有抗體。為了有效，用于治療已發(fā)生的HIV感染的免疫療法的治療性疫苗還必須在受到HIV感染的人體內(nèi)產(chǎn)生預(yù)防性免疫療法。也就是說(shuō)，HIV疫苗應(yīng)在受到感染的人體內(nèi)激發(fā)殺滅病毒的免疫反應(yīng)，該人應(yīng)該具有正常免疫能力，HIV抗體不應(yīng)出現(xiàn)在受到感染的待接種人的免疫系統(tǒng)部分。在HIV感染初期，以及之后可接受的時(shí)間里，人體具有正常免疫系統(tǒng)，其內(nèi)具有數(shù)個(gè)免疫單元。這些可以成功處理任何特定時(shí)間里侵襲機(jī)體的不同感染或抗原。有關(guān)于此的證據(jù)為，在HIV感染之后的最初幾年中，侵襲機(jī)體的感染原被免疫系統(tǒng)成功控制。
如果出現(xiàn)在外周血白細(xì)胞中的未定型HIV的免疫單元之一在體外經(jīng)過洗滌，使其不含HIV抗體及感染原并與有效的HIV抗體結(jié)合，該免疫單元就會(huì)將疫苗認(rèn)定為“非自體”及外來(lái)抗原，因?yàn)槲闯霈F(xiàn)病毒包膜。意識(shí)到“非自體”外來(lái)抗原的有效免疫反應(yīng)會(huì)在體外啟動(dòng)。當(dāng)混合物重新注射到受到感染的人體，已接種的免疫細(xì)胞及其子代會(huì)繼續(xù)在體內(nèi)該過程并僅殺滅人體內(nèi)的HIV核。假如補(bǔ)體足夠，這最終會(huì)從機(jī)體中消除病毒，就像未受到感染的正常人接種所發(fā)生的一樣。本發(fā)明的一個(gè)本質(zhì)特點(diǎn)是，人體包含在其外周血白細(xì)胞中的免疫系統(tǒng)的一部分在重新注射到人體中之前，可以在體外不含HIV抗體和含脂感染原的介質(zhì)中接種。
附錄1一個(gè)劑量的自體疫苗后3-4周的病毒數(shù)變化。

*接受2個(gè)劑量的疫苗自體疫苗4周后病毒數(shù)附錄1BD.B.M/男51歲19/4/01 -HIV血清反應(yīng)14/4/01 -病毒數(shù)29,566(4.5log10)17/4/01 -T3 1181-T4 877-T8 344-T4/T8 2.2(CPC N°13502)1ml血漿/白細(xì)胞@40℃24小時(shí)氯仿11/2小時(shí)+9ml mlN/S15分鐘離心。上層漂浮物1/100＝疫苗17/4/01-1ml疫苗s/c.
21/4/01-1ml疫苗s/c.
21/6/01-每2個(gè)月給予4個(gè)劑量疫苗21/8/0121/10/01.
13/12/01 -T3 1496-T4 1007-T8 453-T4/T8 2.4-病毒數(shù)＜50(1.7log10)-血清反應(yīng)模糊(CPC22,443)17/12/02 -T3 1664-T4 1091-T8 539-T4/T8 2.0-病毒數(shù)65(1.8log10)
附錄2具有已洗滌外周血白細(xì)胞的自體疫苗

權(quán)利要求書(按照條約第19條的修改)根據(jù)19條(1)所做的聲明在國(guó)際檢索單位2006年3月2日郵寄的書面意見中，認(rèn)為權(quán)利要求1-5、7以及13-29按照PCT條約33條(2)缺乏新穎性，已被“有效HIF疫苗及其免疫療法初步報(bào)告”(D1)所公開。此外，認(rèn)為權(quán)利要求6以及8-12按照PCT條約33條(3)對(duì)D1是顯而易見的，缺乏創(chuàng)造性。
附件為修改替換頁(yè)33和34頁(yè)。
D1(實(shí)際上，所有的對(duì)比文件)沒有提供關(guān)于將水液部分(疫苗)從脂質(zhì)部分(包膜)中分離的細(xì)節(jié)。而且，公知技術(shù)實(shí)質(zhì)上沒有講解、暗示或者匯報(bào)明顯使用整個(gè)病原體，而是說(shuō)明了使用病原體片斷，例如病毒的一部分而非整個(gè)病毒。
具體地說(shuō)，獨(dú)立權(quán)利要求1已做了修改，其清楚地指明使用脂質(zhì)提取溶劑提取生物液體，通過將上述脂質(zhì)溶劑加入上述生物液體并將上述破壞包膜組分和上述生物液體機(jī)械結(jié)合，從而影響脂蛋白的破壞。
權(quán)利要求7也做了修改，將“提取”改變?yōu)橐粰C(jī)械結(jié)合—更清楚地將本發(fā)明與公知技術(shù)進(jìn)行區(qū)分。
以下簽名的發(fā)明人認(rèn)為引用的已有技術(shù)不影響本發(fā)明的專利性。
對(duì)權(quán)利要求的修改權(quán)利要求1修改如下1.一種制造疫苗的方法，其特征是包含步驟從受到含脂傳染性有機(jī)體感染的人或動(dòng)物獲取包含含脂傳染性有機(jī)體的生物液體；以含脂溶劑提取上述生物液體，其通過將上述脂質(zhì)溶劑加入上述生物液體并將上述破壞包膜組分和上述生物液體機(jī)械結(jié)合，從而影響脂蛋白的破壞，上述提取操作產(chǎn)生水相和含脂有機(jī)相，上述水相包含上述傳染性有機(jī)體，以及分離上述水相。
權(quán)利要求7修改如下7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是機(jī)械結(jié)合步驟通過任一選自包含混合、旋流、渦流以及旋轉(zhuǎn)的組合的工藝完成。
替換頁(yè)權(quán)利要求1.一種制造疫苗的方法，其特征是包含步驟從受到含脂傳染性有機(jī)體感染的人或動(dòng)物獲取包含含脂傳染性有機(jī)體的生物液體；以含脂溶劑提取上述生物液體，其通過將上述脂質(zhì)溶劑加入上述生物液體并將上述破壞包膜組分和上述生物液體機(jī)械結(jié)合，從而影響脂蛋白的破壞，上述提取操作產(chǎn)生水相和含脂有機(jī)相，上述水相包含上述傳染性有機(jī)體，以及分離上述水相。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是上述生物液體選自包含全血、血漿、胸膜液、腦脊髓液、培養(yǎng)液以及局部體液的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是上述含脂傳染性有機(jī)體選自包含病毒、細(xì)菌、原生動(dòng)物、真菌或細(xì)胞壁中包含脂質(zhì)或類脂物質(zhì)的一類霉菌的組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是上述傳染性有機(jī)體為包膜病毒。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征是上述包膜病毒選自包含人類免疫缺陷病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、人皰疹I(lǐng)V型病毒、單純皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、人類T-淋巴白血病病毒以及癌癥病毒的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是上述傳染性有機(jī)體為細(xì)菌，選自包含結(jié)核菌和麻風(fēng)病菌的組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是[提取]機(jī)械結(jié)合步驟通過任一選自包含混合、旋流、渦流以及旋轉(zhuǎn)的組合的工藝完成。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是包括濃縮上述水相生成包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性有機(jī)體濃縮物的步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是包括通過冷凍干燥法濃縮水相的步驟。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是包括稀釋上述生物液體和稀釋上述水提物的步驟，其目的為獲取每ml約100-200個(gè)病毒粒子的抗原。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是上述脂質(zhì)提取溶劑為氯仿，其中提取步驟所用的氯仿與生物液體的比例(體積∶體積)可以為約3∶1至約5∶1。
權(quán)利要求
1.一種制造疫苗的方法，其特征是包含步驟從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物獲取包含含脂傳染性生物體的生物體液；以含脂溶劑提取上述生物體液，上述提取產(chǎn)生水相和含脂有機(jī)相，上述水相包含上述傳染性生物體，以及分離上述水相。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是上述生物體液選自包含全血、血漿、胸膜液、腦脊髓液、培養(yǎng)液以及局部體液的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是上述含脂傳染性生物體選自包含病毒、細(xì)菌、原生動(dòng)物、真菌或細(xì)胞壁中包含脂質(zhì)或類脂物質(zhì)的一類霉菌的組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是上述傳染性生物體為包膜病毒。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征是上述包膜病毒選自包含人類免疫缺陷病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、人皰疹I(lǐng)V型病毒、單純皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、人類T-淋巴白血病病毒以及癌癥病毒的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是上述傳染性生物體為細(xì)菌，選自包含結(jié)核菌和麻風(fēng)病菌的組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是提取步驟通過任一選自包含混合、旋流、渦流以及旋轉(zhuǎn)的組合的工藝完成。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是包括濃縮上述水相生成包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體濃縮物的步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是包括通過冷凍干燥法濃縮水相的步驟。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是包括稀釋上述生物體液和稀釋上述水提物的步驟，其目的為獲取每ml約100-200個(gè)病毒粒子的抗原。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是上述脂質(zhì)提取溶劑為氯仿，其中提取步驟所用的氯仿與生物體液的比例(體積∶體積)為約3∶1至約5∶1。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是上述脂質(zhì)提取溶劑為氯仿，其中提取步驟所用的氯仿與生物體液的比例(體積∶體積)為約3∶1。
13.一種制造治療性疫苗的方法，其特征是包括步驟從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物獲取包含含脂傳染性生物體的生物體液；以含脂溶劑提取上述生物體液，上述提取產(chǎn)生水相和含脂有機(jī)相，上述水相包含上述實(shí)質(zhì)上已除去上述含脂傳染性生物體的脂質(zhì)的上述傳染性生物體；將水相從含脂相中分開；將白細(xì)胞部分從上述人或動(dòng)物血中分離，控制上述分離操作使上述白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上不含血漿、游離含脂傳染性生物體或上述含脂傳染性生物體的游離抗體；以及將至少部分上述水相與至少部分上述白細(xì)胞部分結(jié)合生成治療性疫苗。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征是上述脂質(zhì)提取溶劑選自包含氯化碳?xì)浠衔?、碳?xì)浠衔锛懊训慕M合。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征是上述脂質(zhì)提取溶劑為氯仿。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征是上述白細(xì)胞部分通過從上述人或上述動(dòng)物抽取血液樣品，從血漿中分離血細(xì)胞，從血漿中分離白細(xì)胞以及將白細(xì)胞洗滌至不含殘留血漿和抗體。
17.一種按照以下步驟制造治療性疫苗的方法從一個(gè)受含脂傳染性生物體感染的第一人或第一動(dòng)物獲取包含含脂傳染性生物體的生物體液；分離并培養(yǎng)來(lái)自上述生物體液的傳染性生物體，以生成包含培養(yǎng)的含脂傳染性生物體的組合物；以脂質(zhì)提取溶劑提取上述含脂傳染性生物體的水溶液，提取產(chǎn)生水相和含脂相，上述水相包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的生物體；將水相從含脂相中分開；將白細(xì)胞部分從受到與上述第一人或上述第一動(dòng)物相同的含脂傳染性生物體感染的第二人或第二動(dòng)物的血中分離，控制分離操作，使上述白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上不含血漿、游離含脂傳染性生物體或含脂傳染性生物體的游離抗體；以及將至少部分上述水相與至少部分上述白細(xì)胞部分結(jié)合生成治療性疫苗。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其特征是上述脂質(zhì)提取溶劑選自包含氯化碳?xì)浠衔?、碳?xì)浠衔锛懊训慕M合。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其特征是上述脂質(zhì)提取溶劑為氯仿。
20.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其特征是上述白細(xì)胞部分通過從上述第二人或上述第二動(dòng)物抽取血液樣品，從血漿中分離血細(xì)胞，從血漿中分離白細(xì)胞以及將白細(xì)胞洗滌至不含殘留血漿和抗體。
21.一種疫苗，其特征是通過以下步驟制備從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物獲取包含含脂傳染性生物體的生物體液；提取上述生物體液，上述提取產(chǎn)生水相和含脂有機(jī)相，上述水相包含上述實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的上述傳染性生物體；以及分離上述水相。
22.一種物質(zhì)或組合物在制造用于治療含脂傳染性生物體所致感染的藥品中的用途，該物質(zhì)或組合物包含如權(quán)利要求21所述的疫苗或治療性疫苗。
23.一種治療性疫苗，通過一種方法制備，其特征是包括步驟從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物獲取包含含脂傳染性生物體的生物體液；以含脂溶劑提取上述生物體液，上述提取步驟產(chǎn)生水相和含脂有機(jī)相，上述水相包含上述實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的上述傳染性生物體；將水相從含脂相中分開；將白細(xì)胞部分從上述人或上述動(dòng)物血中分離，控制上述分離步驟使上述白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上不含血漿、游離含脂傳染性生物體以及上述含脂傳染性生物體的游離抗體；以及將至少部分上述水相與至少部分上述白細(xì)胞部分結(jié)合生成疫苗。
24.一種治療性疫苗，通過一種方法制備，其特征是包括步驟從一個(gè)受含脂傳染性生物體感染的第一人或第一動(dòng)物獲取包含含脂傳染性生物體的生物體液；分離并培養(yǎng)上述傳染性生物體，以生成包含培養(yǎng)的含脂傳染性生物體的組合物；用脂質(zhì)提取溶劑提取上述含脂傳染性生物體的水溶液，提取產(chǎn)生水相和含脂相，上述水相包括上述實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的生物體；將上述水相從上述含脂相中分開；將白細(xì)胞部分從受到上述含脂傳染性生物體感染的第二人或第二動(dòng)物的血中分離，控制上述分離步驟，使上述白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上不含血漿、游離含脂傳染性生物體或含脂傳染性生物體的游離抗體；以及將至少部分上述水相與至少部分上述白細(xì)胞部分結(jié)合生成治療性疫苗。
25.一種治療性疫苗，其包括在體外暴露到疫苗的白細(xì)胞，該疫苗由實(shí)質(zhì)上除去了脂質(zhì)部分的含脂傳染性生物體生成，暴露實(shí)質(zhì)上在沒有游離含脂傳染性生物體存在，而有不含游離含脂傳染性生物體抗體血清的介質(zhì)存在時(shí)發(fā)生。
26.一種預(yù)防性疫苗，通過一種方法制備，其特征是包括步驟從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物獲取生物體液；培養(yǎng)上述生物體液；以脂質(zhì)提取溶劑提取含有含脂傳染性生物體的培養(yǎng)物，提取步驟產(chǎn)生水相和含脂相，上述水相包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體；以及分離上述水相。
27.一種物質(zhì)或組合物，用于預(yù)防含脂傳染性生物體所致的感染，該物質(zhì)或組合物包含如權(quán)利要求26所述的預(yù)防性疫苗。
28.一種物質(zhì)或組合物在制造用于預(yù)防含脂傳染性生物體所致感染的藥品中的用途，該物質(zhì)或組合物包含如權(quán)利要求26所述的預(yù)防性疫苗。
29.一種物質(zhì)或組合物，用于一種治療含脂傳染性生物體所致感染的方法，該物質(zhì)或組合物包含通過如權(quán)利要求1所述方法制備的疫苗或治療性疫苗。
全文摘要
一種治療性疫苗，通過一種方法制備，該方法包括下列步驟以脂質(zhì)提取溶劑提取從受到含脂傳染性生物體感染的人或動(dòng)物中獲取的生物體液，該生物體液包含含脂傳染性生物體，提取產(chǎn)生水相和含脂相，上述水相包含實(shí)質(zhì)上已除去脂質(zhì)的傳染性生物體，將水相從含脂相中分開。將白細(xì)胞部分從人或動(dòng)物血中分離，控制分離使白細(xì)胞部分實(shí)質(zhì)上無(wú)血漿、游離含脂傳染性生物體和含脂傳染性生物體的游離抗體，將至少部分水相與至少部分白細(xì)胞部分結(jié)合生成疫苗。
文檔編號(hào)A61K39/12GK1972711SQ200580019241
公開日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2005年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月12日
發(fā)明者維克托·阿諾瑪·恩古 申請(qǐng)人:維克托·阿諾瑪·恩古