專利名稱：結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜的表面采集脫落的細(xì)胞的樣本的設(shè)備，涉及包括所述設(shè)備的套件和使用所述設(shè)備采樣結(jié)腸直腸細(xì)胞的方法。
背景技術(shù)：
散發(fā)的結(jié)腸直腸癌(CRC)是侵襲西方發(fā)達(dá)國家的人的腫瘤疾病中發(fā)生得最頻繁的和最致命的之一。它主要是侵襲年齡在50歲以上的人。
較早地診斷CRC的嚴(yán)重的障礙為在大多數(shù)情況中沒有較早地、容易地識(shí)別的臨床表現(xiàn)。僅在疾病的晚期的階段，當(dāng)較大的腫瘤已經(jīng)形成，導(dǎo)致疼痛、出血和堵塞癥狀時(shí)，能夠容易地診斷該疾病。然而，疾病的晚期也與擴(kuò)散性的或轉(zhuǎn)移性的腫瘤相關(guān)。從而，在疾病的晚期階段之前檢測(cè)結(jié)腸直腸的腫瘤將大大地增加成功的外科手術(shù)介入的可能性和總的生存率。
在沒有較早地、容易地識(shí)別的臨床表現(xiàn)的情況下，對(duì)于適合的CRC篩選方法的研究已經(jīng)持續(xù)了幾十年。不幸地，當(dāng)前還沒有結(jié)合低侵入、簡(jiǎn)單和低成本與高靈敏度和特異性的CRC篩選技術(shù)。用于CRC的兩種篩選方法為柔性的結(jié)腸鏡檢查/乙狀結(jié)腸鏡檢查和糞便潛血測(cè)試(FOBT)Rennert，G.Recent Results Cancer Res.2003；163248-253，Atkin，W.Scand.J.Gastroenterol.(Suppl.)2003；23713-16，Walsh，J.M.和Terdiman，J.P.JAMA 2003；2891288-1296。然而，全部這些方法具有重大的缺點(diǎn)。
柔性的結(jié)腸鏡檢查/乙狀結(jié)腸鏡檢查被認(rèn)為是精確的和可靠的診斷過程。然而，其侵入、成本和需要熟練的和有經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人員執(zhí)行過程使得其在日常的篩選中不實(shí)用。對(duì)于最近提出的計(jì)算機(jī)斷層結(jié)腸鏡照相(虛擬的結(jié)腸鏡檢查)也存在同樣的問題。
FOBT便宜并且簡(jiǎn)單，然而，其產(chǎn)生不能接受的高比率的假陰性和假陽性結(jié)果。盡管存在這些限制，F(xiàn)OBT目前是精選的篩選方法。
已經(jīng)研究基于腫瘤存在的直接指示器的診斷CRC的替代的方法。已經(jīng)確定的一個(gè)指示器為分析脫落的結(jié)腸細(xì)胞。結(jié)腸細(xì)胞的脫落(即，細(xì)胞從結(jié)腸黏膜的有序地有組織的上皮層自發(fā)地脫離)為人類內(nèi)臟內(nèi)的重要的細(xì)胞更新機(jī)制Eastwool，G.L.Gastroenterology 1977；41122-125。對(duì)從結(jié)腸的或直腸的洗滌物(即，通過沖洗結(jié)腸直腸黏膜)獲取的結(jié)腸細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)的分析在大約50年以前執(zhí)行Bader，G.M.和Papanicolau，G.N.Cancer 1952；5307-14。此工作示出了能夠在CRC病人體內(nèi)檢測(cè)到形態(tài)學(xué)上特殊的脫落的腫瘤的細(xì)胞。然而，獲取這些樣本的方法(侵入的結(jié)腸灌洗過程)存在與乙狀結(jié)腸鏡檢查/結(jié)腸鏡檢查相同的缺點(diǎn)，并且需要對(duì)獲取的樣本立即進(jìn)行詳細(xì)地細(xì)胞學(xué)分析。
普遍的獲取脫落的上皮細(xì)胞的樣本的途徑為將它們從人類糞便離析。人類糞便被確定為這樣的細(xì)胞的來源，因?yàn)榻Y(jié)腸上皮的脫落的細(xì)胞能夠與其它排泄物一起排泄。
大約15年以前，P.P.Nair和他的同事開始首次嘗試使用從人類糞便中離析的結(jié)腸細(xì)胞用于診斷和研究目的。他們自稱能夠使用基于密度梯度離心法Iyengar，V.等人，F(xiàn)ASEB J 1991；52856-2859，Albaugh，G.P.等人，Int.J.Cancer 1992；52347-350的離析過程從數(shù)克分散的糞便材料中回收數(shù)千個(gè)“能活的”脫落的細(xì)胞。然而，由于在諸如在糞便中發(fā)現(xiàn)的腐蝕性的厭氧的環(huán)境中存在保存得好的結(jié)腸細(xì)胞的低可能性，已經(jīng)對(duì)這些熱望的聲稱的真實(shí)性產(chǎn)生懷疑。此外，在他們1991年的參考資料中提出的形態(tài)學(xué)的證據(jù)是不足以令人相信的。P.P.Nair和他的團(tuán)體中的成員堅(jiān)持他們的途徑的有效性Nair，P.等人，J.Clin.Gastroenterol.2003；36(5Suppl.)S84-S93，但是沒有基于他們的研究的結(jié)果產(chǎn)生任何實(shí)際的進(jìn)展。
然而，盡管P.P.Nair和他的同事缺乏實(shí)際的進(jìn)展，使用人類大便用于診斷和研究的目的仍然是活躍的研究領(lǐng)域，因?yàn)樗慌c任何侵入的介入相關(guān)。許多團(tuán)體已經(jīng)著手嘗試從人類大便樣本中離析源自結(jié)腸細(xì)胞的遺傳物質(zhì)(DNA)，以便開發(fā)利用惡性腫瘤的分子的生物標(biāo)志的診斷過程。雖然直接從均質(zhì)化的糞便離析的DNA能夠被增強(qiáng)并且分析是否存在與癌相關(guān)的基因改變，但沒有用于癌的高度可靠的單分子生物標(biāo)志導(dǎo)致使用反映已知以相對(duì)高的頻率存在于惡性細(xì)胞內(nèi)的許多基因改變的多分子標(biāo)志。已經(jīng)描述了與微伴行靜脈標(biāo)志分析結(jié)合的數(shù)個(gè)提議同時(shí)檢測(cè)APC，K-ras和p53基因內(nèi)的多個(gè)變異的途徑Ahlquist，D.A.等人，Gastroenterology 2000；1191219-1227，Dong，S.M.等人，J.Natl.Cancer Inst.2001；93858-865，Rengucci，C.等人，Clin.CancerRes.2001；93858-865，Traverso，G.等人，N.Engl.J.Med.2002；346311-320。糞便DNA內(nèi)的甲基化變化也已經(jīng)被認(rèn)為是可能的診斷標(biāo)志Muller，H.M.等人，Lancet 2004；3631283-1285。雖然通過多目標(biāo)分子化驗(yàn)檢測(cè)結(jié)腸直腸腫瘤好像是可行的，但由于高成本和涉及的實(shí)驗(yàn)室過程的相對(duì)復(fù)雜，用于篩選目的的這些方法的有效性仍然是有問題的。
對(duì)于從均質(zhì)化的大便樣本內(nèi)析取的DNA內(nèi)的CRC分子標(biāo)志的搜索已經(jīng)超過了脫落的結(jié)腸細(xì)胞的最初的采集/離析的重要性。然而，很明顯，對(duì)于人類DNA析取，均質(zhì)化的大便是困難的材料。特別是，糞便內(nèi)的豐富的細(xì)菌能夠干擾結(jié)腸細(xì)胞DNA回收過程，并且在存在人類結(jié)腸的厭氧的細(xì)菌區(qū)系的情況下，發(fā)生迅速的哺乳動(dòng)物DNA損傷和降解。
基于脫落的結(jié)腸細(xì)胞離析的途徑的發(fā)展緩慢，部分原因在于對(duì)正常生理情況和疾病中的內(nèi)臟中的細(xì)胞脫落的知識(shí)的驚人的缺乏。當(dāng)前對(duì)結(jié)腸細(xì)胞脫落的觀點(diǎn)仍然受到老的并且未經(jīng)證明的假設(shè)的影響，該假設(shè)的意思是在從結(jié)腸腺管移動(dòng)到魯米那上皮時(shí)，幾乎全部分化的結(jié)腸細(xì)胞“強(qiáng)制性地”脫落(即，假設(shè)因?yàn)榻Y(jié)腸上皮的細(xì)胞增殖速率高并且全部細(xì)胞最終脫落，在糞便物中存在上百萬的結(jié)腸細(xì)胞)。然而，正在認(rèn)識(shí)到，在現(xiàn)場(chǎng)的循序漸進(jìn)式的細(xì)胞死亡或調(diào)亡至少和脫落一樣重要Hall，P.A.等人，J.Cell Sci.1994；1073569-3577，Barkla，D.H.和Gibson，P.R.Pathology 1999；31230-238，Ahlquist，D.A.等人，Hum.Pathol.2000；3151-57。從結(jié)腸黏膜移除細(xì)胞的這兩種主要機(jī)制之間的關(guān)系可以在結(jié)腸直腸瘤形成中經(jīng)歷重大的變化Ahlquist，D.A.等人(上文)。的確，現(xiàn)在已經(jīng)證實(shí)導(dǎo)致細(xì)胞調(diào)亡的正常的控制通路在惡性腫瘤中嚴(yán)重地被撤消控制Bedi，A.等人，Cancer Res.1995；551811-1816，LaCasse，E.C.等人，Oncogene 1998；173247-3259，Jass，J.R.Gastroenterology 2002；123862-876，Oren，M.Cell Death Differ.2003；10431-442，Boedefeld，W.M.2nd等人，Ann.Surg.Oncol.2003；10839-851，導(dǎo)致癌細(xì)胞調(diào)亡的可能性大大減小。同時(shí)，已知當(dāng)癌發(fā)展時(shí)瘤細(xì)胞附著力顯著地減小Yamamoto，H.等人，Cancer Res.1996；563605-3609，Haier，J.和Nicolson，G.L.Dis.Colon Rectum 2001；44876-884，Leeman，M.F.等人，J.Pathol.2003；201528-534。后面的現(xiàn)象對(duì)于轉(zhuǎn)移性的傳播更加重要，然而，在結(jié)腸直腸的瘤形成中，對(duì)調(diào)亡和細(xì)胞內(nèi)的附著力/交流的降低的結(jié)合的抑制大大增加惡性的細(xì)胞從正在生長的瘤的表面脫離的可能性。如果是這種情況，其中的一些可能能夠保持增殖能力的脫落的瘤細(xì)胞應(yīng)該和它們的正常的(非瘤的)脫落的對(duì)應(yīng)物在以下方面不同i)由于容易從瘤表面脫落，量更加大；及ii)具有強(qiáng)得多的“生存”能力，特別是由于對(duì)缺乏氧氣的更高的抵抗力Graeber，T.G.等人，Nature 1996；37988-91。一旦脫落，這些細(xì)胞進(jìn)入相對(duì)良好地充氧的“粘細(xì)胞層”，“粘細(xì)胞層”從內(nèi)臟的糞便內(nèi)容物分開結(jié)腸黏膜并且永久地與糞便流一起向遠(yuǎn)側(cè)運(yùn)動(dòng)Ahlquist，D.A.等人(上文)。
直到最近，在結(jié)腸直腸黏膜和內(nèi)臟的糞便內(nèi)容物之間提供分界面的粘細(xì)胞層的重要性才被理解。實(shí)驗(yàn)性的研究指示能夠容易地從老鼠糞便的表面獲取質(zhì)量良好的DNA并且將其用于更進(jìn)一步的增強(qiáng)和基因突變分析Loktionov，A.和O’Neill，I.K.Int.J.Oncol.1995；6437-445。這些較早的實(shí)驗(yàn)認(rèn)為由從人類大便表面(大便表面能夠被認(rèn)為是與糞便一起排泄的粘細(xì)胞層的一小部分)離析的結(jié)腸細(xì)胞析取的DNA能夠用于分子的分析。已經(jīng)開發(fā)出通過從冷卻的糞便的表面洗刷掉細(xì)胞并且通過免疫的磁性分離過程收集他們來從人類完整的大便樣本離析脫落的細(xì)胞的方法Loktionov，A.等人，Clin.Cancer Res.1998；4337-342。雖然在此方向的工作開始計(jì)劃為用來開發(fā)用于CRC的分子診斷化驗(yàn)，但是發(fā)現(xiàn)對(duì)來自人類大便表面的源自結(jié)腸細(xì)胞的DNA的簡(jiǎn)單的定量分析能夠用于CRC診斷和篩選，因?yàn)镃RC病人體內(nèi)的相對(duì)的DNA的量遠(yuǎn)高于健康個(gè)體。其他作者也已經(jīng)報(bào)告了更大量的在從CRC病人獲取的分散的或均質(zhì)化的大便樣本內(nèi)的脫落的細(xì)胞Dutta，S.K.等人，Gastroenterology 1995；108(Suppl.)；A463或DNAVilla，E.等人，Gastroenterology 1996；1101346-1353，然而，在那些研究中觀察到的健康人和癌癥病人之間的差異不足夠大以被認(rèn)為是診斷上有效的。相反，Loktionov等人(上文)能夠利用與從大便表面離析的細(xì)胞析取的DNA的量與大便重量有關(guān)的計(jì)算的指標(biāo)(大便DNA指標(biāo)或SDNAI)示出在CRC病人和健康個(gè)體之間的顯著差異的存在。
基于SDNAI的診斷方法在美國專利號(hào)6,187,546中描述。雖然其開始的試驗(yàn)的技術(shù)和結(jié)果明顯地突出了用于CRC篩選的非常有效的、簡(jiǎn)單的并且便宜的途徑，其具有許多阻礙其商業(yè)化和徹底地引入臨床實(shí)踐的本質(zhì)上的缺點(diǎn)(處理完整的大便的明顯的困難并且特別是過程標(biāo)準(zhǔn)化的不可能性)。還明白了使用此技術(shù)能夠從人類大便表面獲取相對(duì)小量的保存良好的細(xì)胞Bandaletova等人，APMIS 2002；110239-246。這些問題、標(biāo)準(zhǔn)化的困難至關(guān)重要，導(dǎo)致對(duì)關(guān)于使用從大便樣本離析的脫落的結(jié)腸細(xì)胞用于大規(guī)模的CRC篩選的嚴(yán)重的懷疑。
存在大量指示覆蓋人類直腸黏膜的粘細(xì)胞層特別富于保存良好的脫落的結(jié)腸細(xì)胞的證據(jù)。另外，在CRC病人體內(nèi)，此層的細(xì)胞內(nèi)容物呈現(xiàn)遠(yuǎn)高于健康個(gè)體體內(nèi)，這主要是由于大大增加的高度抵抗惡性的結(jié)腸細(xì)胞的存在。因此，在更適應(yīng)于自主的存在的CRC病人的瘤細(xì)胞中，應(yīng)該在直腸的脫落的細(xì)胞池中在數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)。數(shù)個(gè)描述遠(yuǎn)側(cè)地(例如，肛門地)培植來自移除的結(jié)腸直腸瘤的持久的脫落的細(xì)胞的最近的報(bào)告Jenner，D.C.等人，Dis.Colon Rectum 1998；411432-1434，Wind，P.等人，Dis.Colon Rectum 1998；411432-1434，Isbister，W.H.Dig.Surg.2000；1781-83，Hyman，N.和Kida，M.Dis.Colon Rectum2003；46835-836，Abbasakoor，F(xiàn).等人，Ann.R.Coll.Surg.Engl.2004；8638-39強(qiáng)有力地證實(shí)此假設(shè)。
可能通過使用檢查者的戴手套的手指進(jìn)行的常規(guī)的手指直腸檢查直接進(jìn)入直腸黏膜。然而，雖然能夠通過利用此簡(jiǎn)單的操作實(shí)現(xiàn)與直腸的粘細(xì)胞層接觸，在從直腸移除手指期間，材料的顯著的損失和同時(shí)發(fā)生的被肛管的不相關(guān)的鱗狀上皮污染是不可避免的。從手套制備的用于直腸檢查的涂片已經(jīng)示出保存良好的結(jié)腸細(xì)胞，同被鱗狀上皮的細(xì)胞高度污染相結(jié)合。
從而，非常需要在沒有在從直腸移除細(xì)胞采集表面階段材料損失和被其它組織成分嚴(yán)重污染的問題的情況下從直腸黏膜表面直接采集脫落的上皮細(xì)胞。這樣的細(xì)胞不僅能夠用于定量的細(xì)胞和DNA分析，還能夠用于探查附加的癌生物標(biāo)志(例如，蛋白質(zhì))的存在并且最終免疫組織化學(xué)地和細(xì)胞學(xué)地評(píng)估。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供了結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備，包括具有遠(yuǎn)側(cè)的插入端部、近側(cè)的端部和可關(guān)閉的內(nèi)部腔的結(jié)腸直腸插入構(gòu)件；具有外部細(xì)胞采樣表面和內(nèi)部表面的柔性的隔膜，其中，所述隔膜密封地接附到所述插入構(gòu)件的遠(yuǎn)側(cè)的插入端部并且被保持在內(nèi)部腔內(nèi)；使得，使用中，施壓內(nèi)部腔到至少第一提高的壓力導(dǎo)致隔膜從所述插入構(gòu)件的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出以與結(jié)腸直腸黏膜表面接觸，并且施壓內(nèi)部腔到第二減小的壓力導(dǎo)致隔膜反向并且返回所述插入構(gòu)件的內(nèi)部腔。
該設(shè)備通過在插入和撤回時(shí)將柔性的隔膜保持在插入構(gòu)件內(nèi)克服手指采樣的困難，使得沒有材料損失并且樣本不會(huì)被來自其它表面(例如，鱗狀上皮)的細(xì)胞污染。
通過直接采樣黏膜表面，該設(shè)備克服與完整的大便采樣有關(guān)的困難，包括工作的使人不愉快的性質(zhì)，能夠獲取的細(xì)胞的低濃度，被排泄物的高度污染(特別是細(xì)菌)，并且特別是與這樣的問題有關(guān)的方法標(biāo)準(zhǔn)化的困難，例如，大便尺寸和稠度的大的可變性。
雖然該設(shè)備為侵入的，其侵入遠(yuǎn)小于當(dāng)前用于結(jié)腸鏡檢查/乙狀結(jié)腸鏡檢查的設(shè)備，并且不需要由熟練的和受過良好訓(xùn)練的操作者操作。該設(shè)備甚至可以自己操作。減小的侵入等級(jí)和沒有并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)可能導(dǎo)致更多的病人接受。這些優(yōu)點(diǎn)又允許執(zhí)行更多采樣，并且以更低的成本。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，柔性的隔膜是可擴(kuò)展的并且由彈性的材料構(gòu)造。更優(yōu)選地，柔性的隔膜由基于腈、乳膠或橡膠的物質(zhì)構(gòu)造。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，插入構(gòu)件的可關(guān)閉的內(nèi)部腔關(guān)閉。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，細(xì)胞采樣設(shè)備還包括用于施壓內(nèi)部腔的裝置，其中，所述裝置接附到插入構(gòu)件的近側(cè)的端部。
優(yōu)選地，所述用于施壓內(nèi)部腔的裝置經(jīng)由存在于插入構(gòu)件的近側(cè)的端部處的閥(例如，自密封的閥)接附到細(xì)胞采樣設(shè)備。
應(yīng)當(dāng)理解，用于施壓內(nèi)部腔的裝置可以包括適合于將流體(例如，液體或氣體)施加到柔性的隔膜的任何裝置。優(yōu)選地，用于施壓內(nèi)部腔的裝置包括壓縮空氣源、注射器或泵(例如，球狀物)。
優(yōu)選地，用于施壓內(nèi)部腔的裝置包括包含能夠?qū)㈩A(yù)先限定的量的第一提高的壓力和第二減小的壓力輸送到細(xì)胞采樣設(shè)備的機(jī)械設(shè)備的壓縮空氣源。此實(shí)施例具有準(zhǔn)確地調(diào)節(jié)插入構(gòu)件內(nèi)的壓力的優(yōu)點(diǎn)，并且機(jī)械設(shè)備具有與無限數(shù)量的一次性的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備一起重復(fù)使用的優(yōu)點(diǎn)。
更優(yōu)選地，用于施壓內(nèi)部腔的裝置包括注射器。注射器的使用允許簡(jiǎn)單的操作和將固定體積的空氣泵送到柔性的隔膜內(nèi)(優(yōu)選地至少增加存在于柔性的隔膜內(nèi)的空氣的體積的十倍)。例如，在本發(fā)明的實(shí)施例中，100毫升注射器接附在插入構(gòu)件的近側(cè)的端部，所述注射器的柱塞可以初始設(shè)定在70-90毫升標(biāo)記處。因此能夠通過將柱塞推到其最大程度(例如，到0毫升刻度)施加預(yù)先限定的量的第一提高的壓力，這將填充柔性的隔膜70-90毫升空氣體積。隨后能夠通過將注射器的柱塞向后拉到其最大程度(例如，到100毫升標(biāo)記)施加預(yù)先限定的量的第二減小的壓力，這將隔膜拉到插入構(gòu)件的內(nèi)部腔內(nèi)。在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，注射器可以提供有一個(gè)或多個(gè)保持特征部(例如，卡扣位置)以標(biāo)記在使用期間的每個(gè)階段的注射器的柱塞位置(例如，一個(gè)插入前的位置，一個(gè)插入期間的位置和一個(gè)撤回后的位置)。用于施壓內(nèi)部腔的裝置為注射器的優(yōu)點(diǎn)為結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備可以適合于裝配到普通的通用的和一次性的實(shí)驗(yàn)室和醫(yī)院裝備上。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，所述柔性的隔膜的外部細(xì)胞采樣表面的表面積是可復(fù)現(xiàn)地可控制的。這允許使得固定的表面積與要采樣的結(jié)腸直腸黏膜表面接觸，由此提供與存在于結(jié)腸直腸黏膜表面上的脫落的細(xì)胞的量關(guān)聯(lián)的對(duì)脫落的細(xì)胞的能夠定量的采集。優(yōu)選地，通過用于施壓內(nèi)部腔的裝置控制表面積。這允許使得固定的表面積與要采樣的黏膜表面接觸。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，插入構(gòu)件適合與直腸進(jìn)入管接合。此實(shí)施例具有允許首先插入直腸進(jìn)入管和密閉器，諸如橄欖形密閉器(連結(jié)的直腸進(jìn)入管和密閉器通常已知為直腸鏡)，以打開直腸腔，隨后在插入本發(fā)明的采樣設(shè)備之前撤回密閉器的優(yōu)點(diǎn)。采樣設(shè)備能夠隨后與直腸進(jìn)入管一起保留在適當(dāng)?shù)奈恢贸掷m(xù)獲取樣本所需要的任何一段時(shí)間。一旦移除采樣設(shè)備，隨后把密閉器放回原處并且密閉器和直腸進(jìn)入管將被一起撤回。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，插入構(gòu)件構(gòu)造為允許自己插入。在這樣的實(shí)施例中，插入構(gòu)件與直腸進(jìn)入管一起插入并且因此消除對(duì)密閉器的需要(例如，插入構(gòu)件具有倒圓的遠(yuǎn)側(cè)的插入端部)。此實(shí)施例提供本發(fā)明的采樣設(shè)備可以自己操作的優(yōu)點(diǎn)，例如，病人將能夠容易地從他們的直腸黏膜采樣脫落的細(xì)胞。在此實(shí)施例中，預(yù)想插入構(gòu)件和直腸進(jìn)入管一起插入并且一起移除并且僅在移除后分開。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，當(dāng)被保持在所述插入構(gòu)件的內(nèi)部腔內(nèi)時(shí)，柔性的隔膜形成接收器，使得可以添加流體。本發(fā)明的此實(shí)施例將允許在已經(jīng)獲取樣本以后將試劑添加到采樣設(shè)備，不需要將樣本傳遞到另外的接收器由此從樣本損失一些材料。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，插入構(gòu)件的內(nèi)部腔提供有附著裝置。本發(fā)明的此實(shí)施例具有一旦已經(jīng)獲取樣本并且第二減小的壓力的施加已經(jīng)將柔性的隔膜拉入插入構(gòu)件的內(nèi)部腔內(nèi)時(shí)，朝向插入構(gòu)件的內(nèi)部腔的壁拉柔性的隔膜的效果。此特征具有當(dāng)用液體填充時(shí)提供穩(wěn)定的接收器的優(yōu)點(diǎn)。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，插入構(gòu)件適合與密封裝置接合以密封所述接收器。這將允許在對(duì)樣本執(zhí)行更進(jìn)一步的分析之前存儲(chǔ)并且傳送包含樣本的采樣設(shè)備。
優(yōu)選地，密封裝置為有螺紋的帽。有螺紋的帽具有密封接收器以防止樣本損失并且還允許移除以用于更進(jìn)一步的分析的優(yōu)點(diǎn)。
在細(xì)胞采樣設(shè)備包括用于施壓內(nèi)部腔的裝置的實(shí)施例中，所述裝置優(yōu)選地能夠從插入構(gòu)件分離。這具有將采樣設(shè)備轉(zhuǎn)化為小型化驗(yàn)小瓶的優(yōu)點(diǎn)，其可以與用于隨后的篩選反應(yīng)的許多其它小型化驗(yàn)小瓶一起方便地傳送和存儲(chǔ)。
在本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供了用于從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采集樣本的套件，其包括如在這里限定的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備和直腸進(jìn)入管并且選擇地包括密閉器。
直腸進(jìn)入管的使用提供為用于采樣設(shè)備的更加舒服的插入和防止采樣設(shè)備和除了要采樣的黏膜表面以外的任何表面接觸。除直腸進(jìn)入管之外，密閉器的使用可以減輕插入直腸進(jìn)入管的不適。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，該套件可以附加地包括潤滑劑，諸如凝膠潤滑劑(例如，K-Y凝膠)。這具有在插入本發(fā)明的密閉器或細(xì)胞采樣設(shè)備期間提供更強(qiáng)的舒適度的優(yōu)點(diǎn)。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，在連結(jié)的密閉器和直腸進(jìn)入管插入直腸腔以后，密閉器從直腸進(jìn)入管脫離。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，該套件還包括密封裝置，諸如有螺紋的帽，以與插入構(gòu)件接合。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，該套件還包括一種或多種試劑，諸如緩沖劑。緩沖劑的使用允許在更進(jìn)一步的分析之前準(zhǔn)備好樣本。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，緩沖劑可以存在于有螺紋的帽內(nèi)(例如，作為泡包)，使得將帽固定到插入構(gòu)件將緩沖劑釋放到接收器內(nèi)(例如，通過刺破泡包)以在更進(jìn)一步的分析之前懸浮存在于柔性的隔膜的采樣表面上的細(xì)胞。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，緩沖劑為細(xì)胞溶解緩沖劑，具有在DNA析取之前提供關(guān)鍵步驟的優(yōu)點(diǎn)。在本發(fā)明的替代地優(yōu)選的實(shí)施例中，緩沖劑為具有允許在結(jié)果的細(xì)胞樣本上進(jìn)行增強(qiáng)的細(xì)胞學(xué)的、生物化學(xué)的和免疫組織化學(xué)的分析的優(yōu)點(diǎn)的細(xì)胞保存介質(zhì)。優(yōu)選地，細(xì)胞保存介質(zhì)補(bǔ)充以一種或多種細(xì)胞培養(yǎng)組分(例如，營養(yǎng)物和抗生素)。
本領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解，任何前面描述的設(shè)備或套件適合于從人類結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的上皮組織(例如，結(jié)腸細(xì)胞)。
在本發(fā)明的第三個(gè)方面，提供了在不通過接觸其它身體表面污染樣本的情況下從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面定量地采樣脫落的細(xì)胞的方法，包括以下步驟在之前不與任何其它身體表面接觸的情況下將包括隔離的細(xì)胞采樣表面的采樣設(shè)備接近要采樣的結(jié)腸直腸黏膜表面；使得細(xì)胞采樣表面與結(jié)腸直腸黏膜表面接觸，使得從黏膜表面獲取樣本；及在隔離的細(xì)胞采樣表面或樣本不與任何其它身體表面接觸的情況下從接近黏膜表面移除采樣設(shè)備和樣本。
此方法擁有從黏膜表面直接采樣脫落的細(xì)胞的關(guān)鍵步驟，并且確保不會(huì)因?yàn)榧?xì)胞采樣隔膜與其它身體表面接觸污染樣本。通過隔離采樣表面避免污染，其中，隔離可以限定為在使得采樣表面接觸結(jié)腸直腸黏膜表面之前或在從結(jié)腸直腸黏膜表面采集細(xì)胞以后隔絕或分開采樣表面。
在本發(fā)明的第四個(gè)方面，提供了從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞的方法，包括以下步驟在柔性的隔膜的外部細(xì)胞采樣表面不會(huì)在之前與任何其它身體表面接觸的情況下將根據(jù)本發(fā)明的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備插入直腸腔并且將所述設(shè)備接近結(jié)腸直腸黏膜表面；施壓內(nèi)部腔到至少第一提高的壓力，使得柔性的隔膜從采樣設(shè)備的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出；用所述隔膜的外部細(xì)胞采樣表面接觸結(jié)腸直腸黏膜表面，使得從結(jié)腸直腸黏膜表面獲取脫落的細(xì)胞的樣本；將第二減小的壓力施加到內(nèi)部腔，使得柔性的隔膜反向并且存在于所述隔膜的細(xì)胞采樣表面上的樣本返回細(xì)胞采樣設(shè)備的內(nèi)部腔；及在隔膜或樣本不與任何其它身體表面接觸的情況下從接近直腸結(jié)腸黏膜表面移除細(xì)胞采樣設(shè)備并且從直腸腔撤回所述設(shè)備。
應(yīng)當(dāng)理解，細(xì)胞采樣設(shè)備可以附加地需要單獨(dú)的或與密閉器一起的直腸進(jìn)入管。
從而，在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，該方法附加地包括以下步驟將連結(jié)的根據(jù)本發(fā)明的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備和直腸進(jìn)入管插入直腸腔；并且從直腸進(jìn)入管移除所述采樣設(shè)備和樣本。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，該方法附加地包括以下步驟將連結(jié)的直腸進(jìn)入管和密閉器插入直腸腔；在插入采樣設(shè)備之前從直腸進(jìn)入管撤回密閉器；移除采樣設(shè)備和樣本；經(jīng)由直腸進(jìn)入管把密閉器放回原處；及從直腸腔撤回連結(jié)的直腸進(jìn)入管和密閉器。
在本發(fā)明的第五個(gè)方面，提供了從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞的方法，包括以下步驟經(jīng)由肛管將直腸進(jìn)入管和密閉器插入直腸腔；從直腸進(jìn)入管撤回密閉器；在采樣設(shè)備的柔性的隔膜不與任何其它身體表面接觸的情況下經(jīng)由直腸進(jìn)入管將根據(jù)本發(fā)明的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備插入直腸腔；施壓內(nèi)部腔到至少第一提高的壓力，使得柔性的隔膜從采樣設(shè)備的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出；用所述隔膜的外部細(xì)胞采樣表面接觸結(jié)腸直腸黏膜表面；從結(jié)腸直腸黏膜表面獲取脫落的細(xì)胞的樣本；將第二減小的壓力施加到內(nèi)部腔，使得柔性的隔膜反向并且存在于所述隔膜的細(xì)胞采樣表面上的樣本返回細(xì)胞采樣設(shè)備的內(nèi)部腔；在采樣設(shè)備的柔性的隔膜不接觸任何身體表面的情況下經(jīng)由直腸進(jìn)入管從直腸腔撤回細(xì)胞采樣設(shè)備；經(jīng)由直腸進(jìn)入管將密閉器放回原處；及經(jīng)由肛管從直腸撤回直腸進(jìn)入管和密閉器。
應(yīng)當(dāng)理解，在直腸進(jìn)入管保持插入直腸腔的同時(shí)，可以將另一個(gè)本發(fā)明的細(xì)胞采樣設(shè)備引入直腸腔。例如，可以引入包括細(xì)胞溶解緩沖劑的第一細(xì)胞采樣設(shè)備以允許對(duì)任何采樣的細(xì)胞進(jìn)行DNA析取和分析(例如，定量)。此后，可以引入包括細(xì)胞保存介質(zhì)的第二細(xì)胞采樣設(shè)備以允許對(duì)任何采樣的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞學(xué)的、生物化學(xué)的和免疫組織化學(xué)的分析。
在本發(fā)明的替代的方面，提供了用于從定位在對(duì)象的直腸腔內(nèi)的黏膜表面采集樣本的采樣設(shè)備，包括在遠(yuǎn)側(cè)的端部具有打開腔并且在近側(cè)的端部具有可關(guān)閉的腔的大致圓柱形的主體；保持在大致圓柱形的主體內(nèi)并且形成分開打開的遠(yuǎn)側(cè)的腔和可關(guān)閉的近側(cè)的腔的密封件的柔性的隔膜；該隔膜的兩個(gè)表面為近側(cè)的表面和遠(yuǎn)側(cè)的表面；及用于充氣和放氣的裝置，其中當(dāng)關(guān)閉時(shí)，用于充氣的裝置能夠增加可關(guān)閉的近側(cè)的腔的內(nèi)部流體壓力，導(dǎo)致隔膜從大致圓柱形的主體的遠(yuǎn)側(cè)的端部外翻，直到隔膜的遠(yuǎn)側(cè)的表面接觸要采樣的黏膜表面；及在隔膜的遠(yuǎn)側(cè)的表面已經(jīng)接觸要采樣的黏膜表面以后，用于放氣的裝置能夠降低關(guān)閉的近側(cè)的腔的流體壓力，導(dǎo)致隔膜反向，使得隔膜被保持在大致圓柱形的主體內(nèi)。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，放氣裝置為閥。本發(fā)明的此實(shí)施例特別適合與彈性的隔膜一起使用，其中可關(guān)閉的近側(cè)的腔內(nèi)的內(nèi)部壓力大于腔外部的壓力。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，放氣裝置包括連接到閥的注射器。
在本發(fā)明的第二個(gè)替代的方面，提供了從定位在人類對(duì)象的直腸腔內(nèi)的黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞的方法，包括以下步驟在之前采樣隔膜不與任何其它身體表面接觸的情況下將根據(jù)本發(fā)明的采樣設(shè)備接近黏膜表面；增加關(guān)閉的近側(cè)的腔的內(nèi)部壓力，使得柔性的隔膜從采樣設(shè)備的遠(yuǎn)側(cè)的端部外翻；用隔膜的遠(yuǎn)側(cè)的表面接觸黏膜表面，使得從黏膜表面獲取脫落的細(xì)胞的樣本；降低關(guān)閉的近側(cè)的腔的內(nèi)部壓力，使得柔性的隔膜反向，并且其和樣本被保持在打開的遠(yuǎn)側(cè)的腔內(nèi)；及在隔膜或樣本不與任何其它身體表面接觸的情況下從接近黏膜表面移除設(shè)備和樣本。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，該方法包括以下步驟將壓縮空氣源接附到閥，并且通過打開閥增加關(guān)閉的近側(cè)的腔的內(nèi)部壓力；或?qū)⒆⑸淦鹘痈降介y并且通過插入柱塞增加關(guān)閉的近側(cè)的腔的內(nèi)部壓力。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，該方法包括以下步驟通過打開閥降低關(guān)閉的近側(cè)的腔的內(nèi)部壓力；或通過撤回柱塞降低關(guān)閉的近側(cè)的腔的內(nèi)部壓力。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，該方法包括以下步驟將細(xì)胞溶解緩沖劑或細(xì)胞保存介質(zhì)添加到采樣設(shè)備的打開的遠(yuǎn)側(cè)的腔；及密封采樣設(shè)備的打開的遠(yuǎn)側(cè)的腔。
在本發(fā)明的第三個(gè)替代的方面，提供了從定位在人類對(duì)象的直腸腔內(nèi)的黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞的方法，包括以下步驟經(jīng)由肛管將直腸進(jìn)入管和密閉器插入直腸腔；從直腸進(jìn)入管撤回密閉器；在采樣設(shè)備的柔性的隔膜不與任何其它身體表面接觸的情況下經(jīng)由直腸進(jìn)入管將根據(jù)本發(fā)明的采樣設(shè)備插入直腸腔；將采樣設(shè)備連接到用于充氣的裝置；增加關(guān)閉的近側(cè)的腔的內(nèi)部壓力，使得柔性的隔膜從采樣設(shè)備的遠(yuǎn)側(cè)的端部外翻；用采樣表面的固定的表面積接觸直腸黏膜；從直腸黏膜的表面獲取脫落的細(xì)胞的樣本；降低關(guān)閉的近側(cè)的腔的內(nèi)部壓力，使得柔性的隔膜反向，并且其和樣本被保持在打開的遠(yuǎn)側(cè)的腔內(nèi)；在采樣設(shè)備的柔性的隔膜不接觸任何身體表面的情況下經(jīng)由直腸進(jìn)入管將采樣設(shè)備從直腸腔撤回；經(jīng)由直腸進(jìn)入管將密閉器放回原處；經(jīng)由肛管將直腸進(jìn)入管和密閉器從直腸腔撤回；將細(xì)胞溶解緩沖劑或細(xì)胞保存介質(zhì)添加到打開的遠(yuǎn)側(cè)的腔；及密封采樣設(shè)備的打開的遠(yuǎn)側(cè)的腔。
在本發(fā)明的第四個(gè)替代的方面，提供了篩選和診斷結(jié)腸直腸癌的方法，包括任何上面陳列的方法，并且還包括回收從采樣設(shè)備采集的樣本并且對(duì)樣本執(zhí)行分析。
在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，分析從DNA定量、DNA析取繼之以其定量和可選的分子分析、細(xì)胞學(xué)/細(xì)胞化學(xué)試驗(yàn)和生物化學(xué)測(cè)試中選擇。應(yīng)該注意，通過任何這些方法的篩選的準(zhǔn)確性將通過提供從被采樣的結(jié)腸直腸黏膜表面取得的具有低污染等級(jí)和高濃度的細(xì)胞的樣本得到改進(jìn)。


接下來將參考附圖僅作為示例描述本發(fā)明，其中圖1示出了本發(fā)明的細(xì)胞采樣設(shè)備的截面圖。
圖2示出了本發(fā)明的細(xì)胞采樣設(shè)備的略圖，其中用于施壓的裝置包括注射器。
圖3示出了本發(fā)明的細(xì)胞采樣設(shè)備的略圖，其中用于施壓的裝置包括壓縮空氣源。
圖4示出了從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞所需要的部件。
圖5示出了使用圖1-4所示設(shè)備中的任何設(shè)備從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞的方法的示例。
圖6示出了可以跟隨圖5所示方法的步驟的示例。
具體實(shí)施例方式
細(xì)胞采樣實(shí)施例描述圖1所示細(xì)胞采樣設(shè)備設(shè)計(jì)為用于插入直腸腔。該設(shè)備包括大致圓柱形的插入構(gòu)件1，插入構(gòu)件1具有內(nèi)部腔3，內(nèi)部腔3在遠(yuǎn)側(cè)的插入端部2通過柔性的和有回彈力的隔膜4關(guān)閉，隔膜4在遠(yuǎn)側(cè)的端部2處密封地接附到構(gòu)件1。在圖1所示位置中，隔膜4被保持在腔3內(nèi)，并且適合在通過裝置7(在圖2中更加詳細(xì)地示出)施壓腔3時(shí)從腔3發(fā)出。隔膜4具有細(xì)胞采樣表面5，在圖1所示的靜止位置，細(xì)胞采樣表面5為內(nèi)表面，但是當(dāng)隔膜發(fā)出時(shí)，細(xì)胞采樣表面5為外表面，并且相反的表面6在靜止位置為外表面，但是當(dāng)隔膜發(fā)出時(shí)變成內(nèi)表面。隔膜由基于腈、乳膠或橡膠的物質(zhì)構(gòu)成。在近側(cè)的端部34，通過自密封的閥18關(guān)閉腔3，施壓裝置7適合接附到自密封的閥18。
圖2示出了用于施壓內(nèi)部腔的裝置7為集成的注射器的本發(fā)明的實(shí)施例，圖2還示意性地示出了從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞所必需的步驟(圖2A-2D)。
圖2A示出了插入直腸腔之前的細(xì)胞采樣設(shè)備。注射器7大致如圖1所示地接附到插入構(gòu)件1。注射器具有沿注射器7的筒32密封地滑動(dòng)以改變注射器7的內(nèi)部腔室33內(nèi)的體積的柱塞23。注射器7的柱塞23設(shè)定為使得70毫升空氣存在于注射器7的腔室33內(nèi)。
圖2B示出了一旦插入直腸腔的細(xì)胞采樣設(shè)備。注射器的柱塞23已經(jīng)被完全地壓下，導(dǎo)致柔性的隔膜4充氣到70毫升體積。充氣的柔性的隔膜4隨后與人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面接觸，使得任何脫落的細(xì)胞被傳遞到柔性的隔膜4的外表面上。
圖2C示出了一旦脫落的細(xì)胞已經(jīng)被采樣并且在從直腸腔移除之前的細(xì)胞采樣設(shè)備。注射器7的柱塞23縮回，使得80毫升空氣存在于注射器7的腔室內(nèi)。因此，這在腔室內(nèi)產(chǎn)生減小的壓力，導(dǎo)致柔性的隔膜4被拉回插入構(gòu)件1的內(nèi)部腔內(nèi)并且牢固地附著到插入構(gòu)件1的側(cè)壁。減小的壓力的量可以通過兩個(gè)卡扣配合保持特征部24(圖2C中僅示出了其中一個(gè))的存在預(yù)先定量。卡扣配合特征部24為定位到注射器7的筒32上的孔內(nèi)的存在于注射器7的柱塞23上的臂。卡扣配合特征部24的目的為防止從注射器7撤回柱塞23。
圖2D示出了從直腸腔移除以后并且在細(xì)胞分析之前的細(xì)胞采樣設(shè)備。插入構(gòu)件1的遠(yuǎn)側(cè)的插入端部提供有適合接收20毫米直徑的有螺紋的螺帽8的螺紋。帽8可以具有包含緩沖劑的泡包，使得在將帽8旋到插入構(gòu)件1時(shí)，將緩沖劑釋放到由放氣的柔性的隔膜4形成的接收器內(nèi)。在帽8已經(jīng)被旋到插入構(gòu)件1以后，注射器7可以從插入構(gòu)件1分離以允許將插入構(gòu)件1轉(zhuǎn)化為小型的試驗(yàn)小瓶，其與多個(gè)其它小瓶一起包裝并且發(fā)送到用于細(xì)胞分析的實(shí)驗(yàn)室。
圖3示出了用于施壓內(nèi)部腔的裝置7為壓縮空氣源的本發(fā)明的實(shí)施例。此圖示意性地示出了機(jī)械設(shè)備9，機(jī)械設(shè)備9為通過電動(dòng)馬達(dá)(沒有示出)操作的泵，在觸發(fā)器14觸發(fā)時(shí)，機(jī)械設(shè)備9能夠輸送重復(fù)的劑量的第一提高的壓力和隨后的第二減小的壓力。機(jī)械設(shè)備9能夠通過與插入構(gòu)件1上的定位突出部17合作的存在于機(jī)械設(shè)備9上的棘爪配合定位器16接附到大致如圖1和2所述的插入構(gòu)件1。自密封閥18存在于插入構(gòu)件1上以確保在從機(jī)械設(shè)備9斷開時(shí)維持插入構(gòu)件1內(nèi)的壓力。插入構(gòu)件1包括設(shè)計(jì)為與直腸鏡接合的葉片19并且在遠(yuǎn)側(cè)的插入端部具有螺紋20以便接收具有包含緩沖劑的泡包21的有螺紋的帽8。機(jī)械設(shè)備9意圖為用電池供電并且可以通過電源通過充電插座12充電。機(jī)械設(shè)備9包括空氣進(jìn)氣過濾器25、涂橡膠的手柄13并且還具有通斷開關(guān)15和指示設(shè)備9何時(shí)準(zhǔn)備好和第一和第二壓力施加周期何時(shí)完成的發(fā)光二極管10和11。
使用中，使用者通過涂橡膠的手槍型手柄把手13握住機(jī)械設(shè)備9并且將機(jī)械設(shè)備9接附到插入構(gòu)件1。隨后將插入構(gòu)件插入直腸腔，其中插入構(gòu)件1使用葉片19與直腸鏡接合，這使得能夠改進(jìn)穿透的一致性。使用者通過壓觸發(fā)器14施加第一提高的壓力，導(dǎo)致將空氣通過空氣進(jìn)氣過濾器25抽入機(jī)械設(shè)備9，其隨后被壓縮并且導(dǎo)致柔性的隔膜從插入構(gòu)件1的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出以與結(jié)腸直腸黏膜表面接觸。使用者隨后通過第二次壓觸發(fā)器14施加第二減小的壓力，導(dǎo)致柔性的隔膜返回插入構(gòu)件1的內(nèi)部腔。一旦細(xì)胞采樣完成，插入構(gòu)件1從直腸鏡脫離并且機(jī)械設(shè)備9從插入構(gòu)件1脫離并且通過自密封閥18維持插入構(gòu)件1內(nèi)的壓力?？梢噪S后將具有包含緩沖劑的泡包21的有螺紋的帽8旋到插入構(gòu)件1上的螺紋20，導(dǎo)致緩沖劑被釋放到通過放氣的柔性的隔膜形成的接收器內(nèi)。隨后可以通過接附到后來的插入構(gòu)件1重復(fù)使用機(jī)械設(shè)備9。
接觸印刷(touch-print)細(xì)胞采樣技術(shù)所需要的部件從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞所需要的部件在圖4中呈現(xiàn)。
i)進(jìn)入直腸黏膜能夠通過使用直腸進(jìn)入管29實(shí)現(xiàn)，直腸進(jìn)入管29能夠?yàn)閷?duì)用于直腸檢查的現(xiàn)有的器械(例如，直腸鏡22)的修改。直腸進(jìn)入管29包括裝備有密閉器30的剛性管(具有手柄)，密閉器30提供橄欖形端部和連續(xù)的表面以促進(jìn)將直腸進(jìn)入管29通過肛管引入直腸。
ii)圖4所示的細(xì)胞采樣設(shè)備1大致如圖1所示并且具有與肛門進(jìn)入管的內(nèi)部直徑相容的外部直徑，即，在15-20毫米的范圍內(nèi)。
iii)壓縮空氣源7用來提供用于施壓內(nèi)部腔的裝置。用于施壓的裝置7可以包括注射器(如圖2所述)、空氣泵(如圖3所述)或壓縮空氣的小型容器(小型鋼瓶)。能夠通過使用固定的空氣體積(簡(jiǎn)單的注射器解決方案)或通過達(dá)到固定的空氣壓力等級(jí)(為此目的需要精確閥)限制/控制細(xì)胞采樣設(shè)備內(nèi)部的空氣壓力。
iv)具有特定的緩沖劑35(不同的緩沖劑用于不同的目的，諸如DNA或RNA析取或用于更進(jìn)一步的分析的細(xì)胞離析/分離)的瓶或管。
v)用于細(xì)胞采樣設(shè)備的密封的蓋8(如果執(zhí)行立即DNA或RNA析取，細(xì)胞/蛋白質(zhì)溶解反應(yīng)需要，如果不是立即使用，例如從手術(shù)室/門診部傳送到實(shí)驗(yàn)室，細(xì)胞離析過程并且特別是材料的存儲(chǔ)/傳送需要)。
過程需要的部件可以開發(fā)為用作一次性的套件，包括全部列出的部件，除了可以重復(fù)使用的壓縮空氣源。
接觸印刷細(xì)胞采樣技術(shù)(直腸操作)描述圖5示出了使用圖1-4所示的任何設(shè)備從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞的接觸印刷細(xì)胞采樣技術(shù)的示例。此過程簡(jiǎn)單并且操作者執(zhí)行該過程不需要對(duì)直腸病學(xué)或內(nèi)窺鏡檢查法的專門的培訓(xùn)。此過程可以由任何合格的醫(yī)療專業(yè)人員(GP、護(hù)士等等)在當(dāng)?shù)氐氖中g(shù)室或病人家里執(zhí)行，或者此過程甚至可以由病人自己操作。
圖5A示意性地示出了人類直腸28、肛管26和結(jié)腸直腸粘細(xì)胞層27的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)的截面。應(yīng)該注意，細(xì)胞采樣設(shè)備與肛管的鱗狀上皮的任何接觸能夠?qū)е虏牧蠐p失和樣本被肛管的鱗狀上皮污染。
過程從將在適當(dāng)?shù)奈恢镁哂忻荛]器30的直腸鏡狀的直腸進(jìn)入管29引入直腸28(圖5B)開始。適當(dāng)?shù)臐櫥瑒┛梢杂糜谝脒^程以促進(jìn)引入過程并且減小可能由過程的此初始階段導(dǎo)致的病人的不適。
一旦已經(jīng)引入直腸進(jìn)入管29(圖5C)并且移除密閉器30，實(shí)現(xiàn)直接進(jìn)入直腸黏膜并且粘細(xì)胞層27打開。
將插入構(gòu)件1引入直腸進(jìn)入管29，使得插入構(gòu)件的上邊緣正好定位在直腸進(jìn)入管的邊緣上方(圖5D)。
施加第一提高的壓力充氣柔性的采集隔膜，以便使得隔膜接觸直腸粘細(xì)胞層27，以提供接觸印刷細(xì)胞采樣(圖5E)。設(shè)備留在此位置大約10-15秒以實(shí)現(xiàn)粘細(xì)胞層的脫落的細(xì)胞和源自細(xì)胞的材料更好地附著到采集隔膜。
圖5F示出了施加第二減小的壓力放氣柔性的隔膜并且導(dǎo)致其與外部細(xì)胞采集表面上的采集的材料31一起返回其初始位置。
插入構(gòu)件1從直腸進(jìn)入管29移除并且用于更進(jìn)一步的操作和分析。密閉器30(能夠使用新的重新加潤滑劑的密閉器30)被重新安裝到直腸進(jìn)入管29內(nèi)，并且管29從直腸28移除(圖5G)。整個(gè)過程(直腸操作)應(yīng)該占用不超過數(shù)分鐘。
采集的細(xì)胞處理圖6示出了可以跟隨上面對(duì)于圖5A-5G示出的方法的步驟的示例，這些步驟應(yīng)該在細(xì)胞采集以后立即完成以避免細(xì)胞采集隔膜變干。步驟(a)示出了在細(xì)胞采集以后脫落的細(xì)胞31在柔性的細(xì)胞采集隔膜上的細(xì)胞采樣設(shè)備1。細(xì)胞采樣設(shè)備的頂部隔室填充有溶解或懸浮脫落的細(xì)胞的固定的體積的特定的緩沖劑35(步驟(b))。不同的細(xì)胞溶解緩沖劑或細(xì)胞保存介質(zhì)能夠用于DNA或RNA析取過程，特殊的緩沖劑/介質(zhì)用于需要細(xì)胞離析的應(yīng)用。通過用有固定螺紋的帽8密封地關(guān)閉細(xì)胞采樣設(shè)備(步驟(c))，細(xì)胞采樣設(shè)備準(zhǔn)備好用于樣本傳送或存儲(chǔ)，但是應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)有螺紋的帽具有包含緩沖劑的泡包時(shí)，能夠省略步驟(b)。該設(shè)備能夠隨后被存儲(chǔ)或傳送用于篩選/診斷和/或研究目的的更進(jìn)一步的下游過程(步驟(d))。
樣本分析應(yīng)該強(qiáng)調(diào)，與其它現(xiàn)有途徑相比，本技術(shù)提供高得多的標(biāo)準(zhǔn)化程度。具有標(biāo)準(zhǔn)的空氣壓力/體積、標(biāo)準(zhǔn)的充氣的采集隔膜的面積(與直腸粘細(xì)胞層接觸的面積可能變化，但是與其它獲取脫落的細(xì)胞的方式例如基于大便的技術(shù)相比，此變化可以忽略)的標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)備的使用和在細(xì)胞采樣過程以后添加的標(biāo)準(zhǔn)的量的緩沖劑產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞數(shù)量或源自細(xì)胞的物質(zhì)(例如，DNA)的量的比較的分析非常有利的條件。
(a)為了結(jié)腸直腸癌篩選對(duì)樣本的分析結(jié)腸直腸癌篩選意味著大范圍地基于人群(限定的年齡)評(píng)估未出現(xiàn)不適的個(gè)體以顯露疾病的無癥狀的(在多數(shù)情況中為早期)病例，對(duì)這些病例的及時(shí)治療能夠減小由這些病癥導(dǎo)致的死亡率。該方法的一個(gè)必要條件為其同時(shí)適用于數(shù)以千計(jì)/數(shù)以百萬計(jì)的人。
i)假設(shè)與無腫瘤的個(gè)體相比，有在結(jié)腸直腸癌病人的直腸粘細(xì)胞層內(nèi)的結(jié)腸細(xì)胞和源自結(jié)腸細(xì)胞的DNA的量顯著較高的強(qiáng)的指示，很可能直接采樣脫落的結(jié)腸細(xì)胞和源自結(jié)腸細(xì)胞的材料的技術(shù)能夠提供基于對(duì)從細(xì)胞析取的DNA的量的直接定量的對(duì)于結(jié)腸直腸癌的簡(jiǎn)單的篩選測(cè)試。對(duì)于此途徑，緊接細(xì)胞采樣之后使用的初始緩沖劑應(yīng)該為用于選擇的DNA析取過程的細(xì)胞溶解緩沖劑。緩沖劑的添加應(yīng)該提供有效的細(xì)胞溶解和在傳送到專用的實(shí)驗(yàn)室期間和(可能地)一些存儲(chǔ)時(shí)期期間對(duì)包含DNA的材料的保存。DNA析取方法的選擇應(yīng)該基于其對(duì)高吞吐量分析的適用性，即，其應(yīng)該與多通道液體處理機(jī)器人系統(tǒng)相容。限定測(cè)試結(jié)果的“陽性”、“陰性”和“不確定”的DNA數(shù)量的準(zhǔn)確值應(yīng)該在臨床試驗(yàn)中確定。
ii)DNA析取的相似的初始步驟能夠適用于分析結(jié)腸直腸癌的分子標(biāo)志。與當(dāng)前利用的從大便樣本析取DNA的技術(shù)相比，通過接觸印刷過程采樣的細(xì)胞可以提供質(zhì)量好得多的DNA。能夠在不精確定量其量的情況下進(jìn)行對(duì)此DNA的PCR增強(qiáng)。在結(jié)腸直腸癌篩選中，多目標(biāo)分子分析被認(rèn)為是一種選擇，然而與直接定量分析相比，其更耗時(shí)間并且更加昂貴。同時(shí)在對(duì)數(shù)量上“陽性”或“不確定”的情況的更進(jìn)一步的診斷分析中，析取的用于直接定量的DNA無疑能夠用于PCR增強(qiáng)。
iii)在需要從其它類型的細(xì)胞中特定地離析結(jié)腸細(xì)胞的情況中，能夠應(yīng)用分離方法(例如，免疫的磁性的或密度梯度分離)來獲得用于分析的更高純度的結(jié)腸細(xì)胞群體。為此，能夠施加一些包含抗生素(一些細(xì)菌存在于采集的材料內(nèi)不可能避免)和粘液溶解試劑的細(xì)胞保存介質(zhì)。離析的結(jié)腸細(xì)胞能夠隨后用于不同類型的分析，諸如DNA析取和定量、DNA析取繼之以PCR增強(qiáng)、癌分子的和生物化學(xué)的標(biāo)志分析、細(xì)胞學(xué)的/細(xì)胞化學(xué)的評(píng)估、和直接細(xì)胞計(jì)數(shù)(由于低速度和高成本，在篩選方面有問題)。
(b)結(jié)腸直腸癌診斷測(cè)試的診斷的用途集中在呈現(xiàn)一些特定癥狀或已經(jīng)確定為遭受某種病癥的個(gè)體。病人的目標(biāo)群體遠(yuǎn)小于對(duì)于篩選目的預(yù)期的目標(biāo)群體。
i)直接DNA定量能夠應(yīng)用于呈現(xiàn)指示可能的結(jié)腸直腸病癥的癥狀的個(gè)體。
ii)DNA析取繼之以PCR增強(qiáng)和分子分析能夠用于初始診斷的確認(rèn)和高級(jí)的診斷過程(對(duì)于癌侵略性的評(píng)估、用于轉(zhuǎn)移性的瘤的化學(xué)療法的敏感性和預(yù)測(cè)等等)。
iii)細(xì)胞離析能夠用于更進(jìn)一步的分子的/生物化學(xué)的分析和細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)(具有特定的形態(tài)學(xué)特征的瘤細(xì)胞)在CRC病人體內(nèi)的脫落的結(jié)腸細(xì)胞中能夠被容易地發(fā)現(xiàn)。
權(quán)利要求書(按照條約第19條的修改)1.一種結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備，其包括具有遠(yuǎn)側(cè)的插入端部、近側(cè)的端部和可關(guān)閉的內(nèi)部腔的結(jié)腸直腸插入構(gòu)件；存在于插入構(gòu)件的近側(cè)的端部處的自密封的閥；具有外部細(xì)胞采樣表面和內(nèi)部表面的柔性的隔膜，其中，所述隔膜密封地接附到所述插入構(gòu)件的遠(yuǎn)側(cè)的插入端部并且被保持在內(nèi)部腔內(nèi)；使得，使用中，通過自密封的閥施壓內(nèi)部腔到至少第一提高的壓力導(dǎo)致隔膜從所述插入構(gòu)件的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出以與結(jié)腸直腸黏膜表面接觸，并且通過自密封的閥施壓內(nèi)部腔到第二減小的壓力導(dǎo)致隔膜反向并且返回所述插入構(gòu)件的內(nèi)部腔。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的設(shè)備，其中，柔性的隔膜為彈性的并且由基于腈、乳膠或橡膠的物質(zhì)構(gòu)成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件的可關(guān)閉的內(nèi)部腔關(guān)閉。
4.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其還包括用于施壓內(nèi)部腔的裝置，其中，所述裝置接附到存在于插入構(gòu)件的近側(cè)的端部處的自密封的閥。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的設(shè)備，其中，所述用于施壓內(nèi)部腔的裝置包括壓縮空氣源或注射器。
6.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，所述柔性的隔膜的外部細(xì)胞采樣表面的表面積是可復(fù)現(xiàn)地可控制的。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的設(shè)備，其中，所述表面積通過用于施壓內(nèi)部腔的裝置控制。
8.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件適合與直腸進(jìn)入管接合。
9.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件構(gòu)造為允許自己插入。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件在遠(yuǎn)側(cè)的插入端部為倒圓的。
11.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，當(dāng)被保持在所述插入構(gòu)件的內(nèi)部腔內(nèi)時(shí)，柔性的隔膜形成接收器，使得可以添加流體。
12.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件的內(nèi)部腔提供有附著裝置。
13.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件的遠(yuǎn)側(cè)的插入端部附加地包括密封裝置。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的設(shè)備，其中，密封裝置包括有螺紋的帽。
15.根據(jù)權(quán)利要求4到14中的任何權(quán)利要求的設(shè)備，其中，所述用于施壓內(nèi)部腔的裝置可以從插入構(gòu)件脫離。
16.一種用于從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采集樣本的套件，其包括根據(jù)權(quán)利要求1到15中的任何權(quán)利要求的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備，和直腸進(jìn)入管并且選擇地包括密閉器。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的套件，其附加地包括諸如凝膠潤滑劑的潤滑劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或權(quán)利要求17的套件，其附加地包括諸如有螺紋的帽的密封裝置以與插入構(gòu)件接合。
19.根據(jù)權(quán)利要求16到18中的任何權(quán)利要求的套件，其附加地包括諸如細(xì)胞溶解緩沖劑或細(xì)胞保存介質(zhì)的一種或多種試劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的套件，其中，所述一種或多種試劑以泡包存在于有螺紋的帽內(nèi)。
21.一種在不通過接觸其它身體表面污染樣本的情況下從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面定量地采樣脫落的細(xì)胞的方法，其包括以下步驟在之前不與任何其它身體表面接觸的情況下將包括隔離的細(xì)胞采樣表面的采樣設(shè)備接近要采樣的結(jié)腸直腸黏膜表面；使細(xì)胞采樣表面接觸結(jié)腸直腸黏膜表面，使得從黏膜表面獲取樣本；及在隔離的細(xì)胞采樣表面或樣本不與任何其它身體表面接觸的情況下從接近黏膜表面移除采樣設(shè)備和樣本。
22.一種從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞的方法，其包括以下步驟將根據(jù)權(quán)利要求1到15中的任何權(quán)利要求的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備插入直腸腔并且在柔性的隔膜的外部細(xì)胞采樣表面之前不與任何其它身體表面接觸的情況下將所述設(shè)備接近結(jié)腸直腸黏膜表面；施壓內(nèi)部腔到至少第一提高的壓力，使得柔性的隔膜從采樣設(shè)備的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出；用所述隔膜的外部細(xì)胞采樣表面接觸結(jié)腸直腸黏膜表面，使得從結(jié)腸直腸黏膜表面獲取脫落的細(xì)胞的樣本；施加第二減小的壓力到內(nèi)部腔，使得柔性的隔膜反向并且存在于所述隔膜的細(xì)胞采樣表面上的樣本返回細(xì)胞采樣設(shè)備的內(nèi)部腔；及在隔膜或樣本不與任何其它身體表面接觸的情況下從接近結(jié)腸直腸黏膜表面移除細(xì)胞采樣設(shè)備并且從直腸腔撤回所述設(shè)備。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其附加地包括以下步驟將連結(jié)的根據(jù)權(quán)利要求1到15中的任何權(quán)利要求的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備和直腸進(jìn)入管插入直腸腔；及從直腸進(jìn)入管移除所述采樣設(shè)備和樣本。
24.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其附加地包括以下步驟將連結(jié)的直腸進(jìn)入管和密閉器插入直腸腔；在插入根據(jù)權(quán)利要求1到15中的任何權(quán)利要求的采樣設(shè)備之前從直腸進(jìn)入管撤回密閉器；移除采樣設(shè)備和樣本；經(jīng)由直腸進(jìn)入管將密閉器放回原處；及從直腸腔撤回連結(jié)的直腸進(jìn)入管和密閉器。
25.一種從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞的方法，其包括以下步驟經(jīng)由肛管將直腸進(jìn)入管和密閉器插入直腸腔；從直腸進(jìn)入管撤回密閉器；在采樣設(shè)備的柔性的隔膜不與任何其它身體表面接觸的情況下經(jīng)由直腸進(jìn)入管將根據(jù)權(quán)利要求1到15中的任何權(quán)利要求的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備插入直腸腔；施壓內(nèi)部腔到至少第一提高的壓力，使得柔性的隔膜從采樣設(shè)備的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出；用所述隔膜的外部細(xì)胞采樣表面接觸結(jié)腸直腸黏膜表面；從結(jié)腸直腸黏膜表面獲取脫落的細(xì)胞的樣本；施加第二減小的壓力到內(nèi)部腔，使得柔性的隔膜反向并且存在于所述隔膜的細(xì)胞采樣表面上的樣本返回細(xì)胞采樣設(shè)備的內(nèi)部腔；在采樣設(shè)備的柔性的隔膜不接觸任何身體表面的情況下經(jīng)由直腸進(jìn)入管從直腸腔撤回細(xì)胞采樣設(shè)備；經(jīng)由直腸進(jìn)入管將密閉器放回原處；及經(jīng)由肛管從直腸撤回直腸進(jìn)入管和密閉器。
26.一種對(duì)于結(jié)腸直腸癌的篩選和診斷方法，其包括根據(jù)權(quán)利要求21到25的任何權(quán)利要求的任何采樣方法，并且還包括回收從采樣設(shè)備采集的樣本并且在樣本上執(zhí)行診斷分析。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中，所述分析從DNA定量、DNA析取繼之以其定量和可選的分子分析、細(xì)胞學(xué)的/細(xì)胞化學(xué)的試驗(yàn)和生物化學(xué)測(cè)試選擇。
權(quán)利要求
1.一種結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備，其包括具有遠(yuǎn)側(cè)的插入端部、近側(cè)的端部和可關(guān)閉的內(nèi)部腔的結(jié)腸直腸插入構(gòu)件；具有外部細(xì)胞采樣表面和內(nèi)部表面的柔性的隔膜，其中，所述隔膜密封地接附到所述插入構(gòu)件的遠(yuǎn)側(cè)的插入端部并且被保持在內(nèi)部腔內(nèi)；使得，使用中，施壓內(nèi)部腔到至少第一提高的壓力導(dǎo)致隔膜從所述插入構(gòu)件的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出以與結(jié)腸直腸黏膜表面接觸，并且施壓內(nèi)部腔到第二減小的壓力導(dǎo)致隔膜反向并且返回所述插入構(gòu)件的內(nèi)部腔。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的設(shè)備，其中，柔性的隔膜為彈性的并且由基于腈、乳膠或橡膠的物質(zhì)構(gòu)成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件的可關(guān)閉的內(nèi)部腔關(guān)閉。
4.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其還包括用于施壓內(nèi)部腔的裝置，其中，所述裝置接附到插入構(gòu)件的近側(cè)的端部。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的設(shè)備，其中，所述用于施壓內(nèi)部腔的裝置接附到存在于插入構(gòu)件的近側(cè)的端部處的諸如自密封的閥的閥。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或權(quán)利要求5的設(shè)備，其中，所述用于施壓內(nèi)部腔的裝置包括壓縮空氣源或注射器。
7.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，所述柔性的隔膜的外部細(xì)胞采樣表面的表面積是可復(fù)現(xiàn)地可控制的。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的設(shè)備，其中，所述表面積通過用于施壓內(nèi)部腔的裝置控制。
9.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件適合與直腸進(jìn)入管接合。
10.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件構(gòu)造為允許自己插入。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件在遠(yuǎn)側(cè)的插入端部為倒圓的。
12.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，當(dāng)被保持在所述插入構(gòu)件的內(nèi)部腔內(nèi)時(shí)，柔性的隔膜形成接收器，使得可以添加流體。
13.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件的內(nèi)部腔提供有附著裝置。
14.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的設(shè)備，其中，插入構(gòu)件適合與諸如有螺紋的帽的密封裝置接合以密封所述接收器。
15.根據(jù)權(quán)利要求4到14中的任何權(quán)利要求的設(shè)備，其中，所述用于施壓內(nèi)部腔的裝置可以從插入構(gòu)件脫離。
16.一種用于從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采集樣本的套件，其包括根據(jù)權(quán)利要求1到15中的任何權(quán)利要求的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備，和直腸進(jìn)入管并且選擇地包括密閉器。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的套件，其附加地包括諸如凝膠潤滑劑的潤滑劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或權(quán)利要求17的套件，其附加地包括諸如有螺紋的帽的密封裝置以與插入構(gòu)件接合。
19.根據(jù)權(quán)利要求16到18中的任何權(quán)利要求的套件，其附加地包括諸如細(xì)胞溶解緩沖劑或細(xì)胞保存介質(zhì)的一種或多種試劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的套件，其中，所述一種或多種試劑以泡包存在于有螺紋的帽內(nèi)。
21.一種在不通過接觸其它身體表面污染樣本的情況下從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面定量地采樣脫落的細(xì)胞的方法，其包括以下步驟在之前不與任何其它身體表面接觸的情況下將包括隔離的細(xì)胞采樣表面的采樣設(shè)備接近要采樣的結(jié)腸直腸黏膜表面；使細(xì)胞采樣表面接觸結(jié)腸直腸黏膜表面，使得從黏膜表面獲取樣本；及在隔離的細(xì)胞采樣表面或樣本不與任何其它身體表面接觸的情況下從接近黏膜表面移除采樣設(shè)備和樣本。
22.一種從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞的方法，包括以下步驟將根據(jù)權(quán)利要求1到15中的任何權(quán)利要求的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備插入直腸腔并且在柔性的隔膜的外部細(xì)胞采樣表面之前不與任何其它身體表面接觸的情況下將所述設(shè)備接近結(jié)腸直腸黏膜表面；施壓內(nèi)部腔到至少第一提高的壓力，使得柔性的隔膜從采樣設(shè)備的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出；用所述隔膜的外部細(xì)胞采樣表面接觸結(jié)腸直腸黏膜表面，使得從結(jié)腸直腸黏膜表面獲取脫落的細(xì)胞的樣本；施加第二減小的壓力到內(nèi)部腔，使得柔性的隔膜反向并且存在于所述隔膜的細(xì)胞采樣表面上的樣本返回細(xì)胞采樣設(shè)備的內(nèi)部腔；及在隔膜或樣本不與任何其它身體表面接觸的情況下從接近結(jié)腸直腸黏膜表面移除細(xì)胞采樣設(shè)備并且從直腸腔撤回所述設(shè)備。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其附加地包括以下步驟將連結(jié)的根據(jù)權(quán)利要求1到15中的任何權(quán)利要求的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備和直腸進(jìn)入管插入直腸腔；及從直腸進(jìn)入管移除所述采樣設(shè)備和樣本。
24.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其附加地包括以下步驟將連結(jié)的直腸進(jìn)入管和密閉器插入直腸腔；在插入根據(jù)權(quán)利要求1到15中的任何權(quán)利要求的采樣設(shè)備之前從直腸進(jìn)入管撤回密閉器；移除采樣設(shè)備和樣本；經(jīng)由直腸進(jìn)入管將密閉器放回原處；及從直腸腔撤回連結(jié)的直腸進(jìn)入管和密閉器。
25.一種從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采樣脫落的細(xì)胞的方法，其包括以下步驟經(jīng)由肛管將直腸進(jìn)入管和密閉器插入直腸腔；從直腸進(jìn)入管撤回密閉器；在采樣設(shè)備的柔性的隔膜不與任何其它身體表面接觸的情況下經(jīng)由直腸進(jìn)入管將根據(jù)權(quán)利要求1到15中的任何權(quán)利要求的結(jié)腸直腸細(xì)胞采樣設(shè)備插入直腸腔；施壓內(nèi)部腔到至少第一提高的壓力，使得柔性的隔膜從采樣設(shè)備的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出；用所述隔膜的外部細(xì)胞采樣表面接觸結(jié)腸直腸黏膜表面；從結(jié)腸直腸黏膜表面獲取脫落的細(xì)胞的樣本；施加第二減小的壓力到內(nèi)部腔，使得柔性的隔膜反向并且存在于所述隔膜的細(xì)胞采樣表面上的樣本返回細(xì)胞采樣設(shè)備的內(nèi)部腔；在采樣設(shè)備的柔性的隔膜不接觸任何身體表面的情況下經(jīng)由直腸進(jìn)入管從直腸腔撤回細(xì)胞采樣設(shè)備；經(jīng)由直腸進(jìn)入管將密閉器放回原處；及經(jīng)由肛管從直腸撤回直腸進(jìn)入管和密閉器。
26.一種對(duì)于結(jié)腸直腸癌的篩選和診斷方法，其包括根據(jù)權(quán)利要求21到25的任何權(quán)利要求的任何采樣方法，并且還包括回收來自采樣設(shè)備的采集的樣本并且在樣本上執(zhí)行診斷分析。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中，所述分析從DNA定量、DNA析取繼之以其定量和可選的分子分析、細(xì)胞學(xué)的/細(xì)胞化學(xué)的試驗(yàn)和生物化學(xué)測(cè)試選擇。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于從人類對(duì)象的結(jié)腸直腸黏膜表面采集脫落的細(xì)胞的樣本的設(shè)備，該設(shè)備包括具有遠(yuǎn)側(cè)的插入端部(2)、近側(cè)的端部(34)和可關(guān)閉的內(nèi)部腔(3)的插入構(gòu)件(1)，具有外部細(xì)胞采樣表面(5)和內(nèi)部表面的柔性的隔膜，其中，所述隔膜密封地接附到所述插入構(gòu)件的遠(yuǎn)側(cè)的插入端部并且被保持在內(nèi)部腔內(nèi)，使得，使用中，施壓內(nèi)部腔到至少第一提高的壓力導(dǎo)致隔膜從所述插入構(gòu)件的遠(yuǎn)側(cè)的端部發(fā)出以與結(jié)腸直腸黏膜表面接觸，并且施壓內(nèi)部腔到第二減小的壓力導(dǎo)致隔膜反向并且返回所述插入構(gòu)件的內(nèi)部腔。還描述了包括所述設(shè)備的套件和使用所述設(shè)備采樣結(jié)腸直腸細(xì)胞的方法。
文檔編號(hào)A61B10/00GK1997316SQ200580023091
公開日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2005年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月7日
發(fā)明者A·洛克蒂奧諾夫, T·班達(dá)爾托瓦, A·H·勒維林, C·G·費(fèi)雷特, R·C·G·利伍德, H·G·G·利伍德 申請(qǐng)人:科隆尼克斯有限公司