專利名稱::包括兩性霉素b的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
:本發(fā)明的一個或多個實施方案包括包含兩性霉素B的組合物,制備和應(yīng)用兩性霉素B組合物的方法,和應(yīng)用兩性霉素B組合物的系統(tǒng)。
背景技術(shù):
:肺部真菌感染,如侵入性肺部絲狀真菌感染(IFPFI),是免疫損害的病人致病或致死的主要原因。個體免疫系統(tǒng)可能被一些疾病,如獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)損害,和/或在免疫抑制治療中被故意地損害。免疫抑制治療通常是給藥于進行癌癥治療的病人和/或進行移植過程的病人。免疫損害的病人對肺部和/或鼻真菌感染有高度的敏感性。嚴(yán)重免疫損害的病人,如長期患有中性粒細胞減少癥或除了其他免疫抑制劑外要求21或更多連續(xù)天數(shù)的潑尼松劑量至少為1mg/kg/天的病人,尤其對肺部和/或鼻真菌感染敏感。在免疫損害的病人中,總體上真菌感染率范圍為0.5至28%。在佛瑞德哈欽森癌癥中心(FredHutchinsonCancerCenter),尸檢患有特發(fā)性肺炎綜合征(IPS)的骨髓移植病人,其中7.3M有IFPFI。在另一個Vogeser等人的研究中,在歐洲病人中1187例連續(xù)尸檢發(fā)現(xiàn)IFPFI的4%比率,這些病人在1993年至1996年期間死于任何原因。這些歐洲病人的絕大多數(shù)曾經(jīng)接受過(1)高劑量甾族化合物藥量;(2)惡性腫瘤的治療;(3)實體器官移植;(4)某種形式的骨髓移植。在免疫損害的病人中,多數(shù)普通的肺部和/或鼻真菌感染是肺部和/或鼻曲霉病。曲霉病由曲霉真菌(Aspergillusspp.)引起的疾病,其主要通過肺侵入人體。曲霉病的發(fā)生率取決于中性粒細胞減少癥持續(xù)的時間和深度,病人的因素(如,年齡,皮質(zhì)甾類的使用,和先前的肺部和/或鼻疾病),環(huán)境污染水平,診斷的判據(jù),和明確致病原因的持久性。其他的絲狀真菌或者雙態(tài)性真菌同樣也能導(dǎo)致肺部真菌感染。這些其它的真菌通常是某地特有的或區(qū)域性的并且可包含,例如,芽生菌,播散性假絲酵母,球孢子菌(coccidioidomycosis),隱球菌,組織胞漿菌,毛霉菌,和孢子絲菌。雖然典型地不影響肺部系統(tǒng),但由假絲酵母(Candidaspp.)引起的感染占免疫損害病人全部真菌感染的50%至67。/。,其通常為全身的而且大部分經(jīng)常起因于經(jīng)由內(nèi)在設(shè)備或IV導(dǎo)管,外傷,或污染的實體器官移植等引起的感染。兩性霉素B是唯一認(rèn)可的殺真菌化合物,其目前用于治療曲霉病而且通常靜脈內(nèi)遞送。兩性霉素B是從結(jié)節(jié)鏈霉菌(Streptomycesiiodosus.)菌株中獲得的兩性的多烯大環(huán)內(nèi)酯。在商品中,兩性霉素B表現(xiàn)為無定形和結(jié)晶兩種形式。用脫氧膽酸鈉制備的兩性霉素B是最早用于銷售的胃腸外用(parental)兩性霉素B。系統(tǒng)靜脈內(nèi)治療由于其劑量依賴毒性如腎臟毒性和肝毒而受到限制,所述的毒性妨礙治療效果而且減少了兩性霉素B預(yù)防應(yīng)用的需要性。即使經(jīng)過認(rèn)可的治療,曲霉病發(fā)生率在上升而且預(yù)計會在50%以上的接受治療的感染者中導(dǎo)致死亡。.本
技術(shù)領(lǐng)域:
還需要安全有效的兩性霉素B組合物,制備和應(yīng)用上述組合物的方法,和應(yīng)用上述組合物的系統(tǒng)。例如,仍需要組合物和方法,該組合物和方法安全有效地治療發(fā)生肺部和/或鼻真菌感染的病人和/或提供預(yù)防肺部和/或鼻真菌感染的發(fā)生。
發(fā)明內(nèi)容相應(yīng)地,本發(fā)明的一個或多個實施方案包括含有兩性霉素B的組合物,制備和應(yīng)用兩性霉素B組合物的方法,和應(yīng)用兩性霉素B組合物的系統(tǒng)。本發(fā)明實施方案的其他特點和優(yōu)點將在下面的本發(fā)明說明中陳述,并且部分地將由本發(fā)明說明書而明顯或可通過本發(fā)明的實施例得知。本發(fā)明的實施方案將通過在關(guān)于這個的書面說明書和權(quán)利要求中指出的組合物和方法來實現(xiàn)和獲得。一方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括含有至少約95wt。/。兩性霉素B的粒子的組合物。該粒子具有約1.1pm至約1.9/zm的質(zhì)量中位直徑范圍。另一方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括含有至少約95wt。/。兩性霉素B的粒子的組合物。該粒子的至少約80wt。/。具有約1.1pm至約1.9/mi的幾何直徑范圍。又一方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括包含兩性霉素B的粒子的組合物。該粒子具有小于約1.9/mi的質(zhì)量中位直徑,并且所述的兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度。還有另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括有效量的兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的藥物組合物。所述的藥物組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,該兩性霉素B具有約1.1/mi至約1.9/mi的質(zhì)量中位直徑范圍。另一方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括有效量的兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的藥物組合物。所述的藥物組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,并且包含兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有約1.1pm至約1.9/xm的幾何直徑范圍。又一方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括有效量的兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的藥物組合物。所述的兩性霉素B具有約20%至約99%的結(jié)晶度范圍。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括具有至少約20%結(jié)晶度的兩性霉素B的千粉末。所述的干粉末包含具有小于約10]Lmi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子。更進一步方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括裝有藥物組合物的容器的單位劑量形式。所述的藥物組合物包含有效量的兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑。所述的藥物組合物由含有具有小于約1.9/mi的質(zhì)量中位直徑的兩性霉素B的粒子制成。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括裝有藥物組合物的容器的單位劑量形式。所述的藥物組合物包含有效量的兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑。所述的藥物組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,并且包含兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有小于約1.9/mi的幾何直徑。還有另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括裝有藥物組合物的容器的單位劑量形式。所述的藥物組合物包含有效量的兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑。所述的兩性霉素B具有約20%至約90%的結(jié)晶度范圍。又一方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括吸入器和藥物組合物的遞送系統(tǒng)。所述的藥物組合物包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的顆粒狀物。所述的顆粒狀物由含有具有小于約1.9pm的質(zhì)量中位直徑的兩性霉素B的粒子制成。更進一步方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括吸入器和藥物組合物的遞送系統(tǒng)。所述的藥物組合物包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的顆粒狀物。所述的顆粒狀物由包含兩性霉素B的粒子制成,其中包括兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有小于約1.9/rni的幾何直徑。還有另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種包括吸入器和藥物組合物的遞送系統(tǒng)。所述的藥物組合物包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的顆粒狀物,其中所述的兩性霉素8具有約20%至約99%的結(jié)晶度范圍。又一方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種表征用于制備藥物組合物的兩性霉素B的方法。所述的方法包括測定兩性霉素B組成的結(jié)晶度。所述的方法還包括在釋放兩性霉素B組合物以便和藥學(xué)可接受的賦形劑制成藥物組合物之前,保證結(jié)晶度比開始預(yù)定水平高。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種表征用于制備藥物組合物的兩性霉素B的方法。所述的方法包括測定兩性霉素B組合物的無定形度(amorphicity)。所述的方法還包括在釋放兩性霉素B組合物以便和藥學(xué)可接受的賦形劑組成藥物組合物之前,保證無定形度小于預(yù)定水平。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種制備和表征干粉末藥物組合物的方法。所述的方法包括混合兩性霉素B組合物和藥學(xué)可接受的賦形劑制成干粉末藥物組合物。所述的方法還包括測定干粉末藥物組合物的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。所述的方法進一步包括在釋放干粉末藥物組合物以便對病人給藥之前,保證空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑低于預(yù)定水平。還有另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種制備和表征干粉末藥物組合物的方法。所述的方法包括混合兩性霉素B組合物和藥學(xué)可接受的賦形劑制成干粉末藥物組合物。所述的方法還包括測定干粉末藥物組合物的均勻度。所述的方法進一步包括在釋放干粉末藥物組合物以便對病人給藥之前,保證均勻度高于預(yù)定水平。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種制備噴霧干燥粒子的方法。所述的方法包括將包含兩性霉素B的粒子混懸在液體中制成原料。所述的粒子具有小于約3/mi的質(zhì)量中位直徑。所述的方法還包括噴霧干燥所述的原料制造噴霧干燥粒子。又一方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及一種制備噴霧干燥粒子的方法。所述的方法包括將包含兩性霉素B的粒子混懸在液體中制成原料,其中兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度。所述的方法進一步包括噴霧干燥所述的原料制造噴霧干燥粒子。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥,其中組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,所述的兩性霉素B具有約1.1/mi至約1.9pm的質(zhì)量中位直徑范圍。又一方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥,其中組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,并且其中所述的包含兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有約1.1/xm至約1.9/mi的幾何直徑范圍。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約20。/0的結(jié)晶度。更進一步方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度,并且兩性霉素B具有至少約1周的肺實體組織保留半衰期,通過肺組織活組織檢查測定。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥。所述的兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度,并且兩性霉素B具有至少IO小時的肺上皮內(nèi)襯液保留半衰期,通過支氣管氣泡(bronchoralveolar)灌洗測定。還有另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入包含在0.01mg/kg至7.0mg/kg范圍的量的兩性霉素B的組合物,對有需要的病人給藥。所述的兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度,并且兩性霉素B的血漿濃度保持低于約1000ng/mL。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入包含在0.01mg/kg至7.0mg/kg范圍的量的兩性霉素B的組合物,對有需要的病人給藥。所述的兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度,并且兩性霉素B的血漿濃度低至足夠避免腎和/或肝毒性。又一方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥。所述的兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度。兩性霉素B的肺濃度在至少一部分治療時間段內(nèi)達到最小抑制濃度的至少5倍量,通過支氣管氣泡灌洗測定。兩性霉素B的血漿濃度保持小于約1000ng/ml。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥。所述的兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度。治療時間范圍為約15周至約20周。兩性霉素B的肺濃度在至少一部分治療時間段內(nèi)達到最小抑制濃度的至少5倍量,通過支氣管氣泡灌洗測定。更進一步方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入包含在約2mg至約50mg范圍的量的兩性霉素B的組合物,對有需要的病人給藥。所述的兩性霉素b具有至少約20%的結(jié)晶度。所述的給藥在小于約五分鐘的時間內(nèi)實施。另一個方面,本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法。所述的方法包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的干粉末對有需要的病人給藥。所述的兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度,并且干粉末包括具有小于約10Mm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子。本發(fā)明的實施方案在下面的發(fā)明說明書中進一步被描述,關(guān)于附注的多個非限制性附圖,其中圖1表明給藥本發(fā)明的藥物組合物后預(yù)測的肺中兩性霉素B的濃度;圖2表明給藥本發(fā)明的藥物組合物后預(yù)測的兩性霉素B的血漿濃度;圖3A-3E剖視圖簡圖,表現(xiàn)了可用于氣霧化本發(fā)明的藥物組合物的干粉末吸入器的操作過程;圖4是一個圖表,表明本發(fā)明中兩性霉素B粉末在安德森級聯(lián)碰撞器(andersoncascadeimpactor,ACI)中的沉積作用的流速依賴性關(guān)系曲線;圖5是一個圖表,表明本發(fā)明的利用Turbospin⑧DPI裝置以60L/min發(fā)射的劑量(ED)的兩性霉素B粉末的穩(wěn)定性;圖6是一個圖表,表明本發(fā)明的利用Turbospin⑧DPI裝置以28.3L/min霧化的霧化特性與兩性霉素B粉末的穩(wěn)定性的曲線;圖7是一個圖表,表明本發(fā)明的包含兩性霉素B和不同卵磷脂的藥物組合物霧化特性的曲線;圖8是一個圖表,表明本發(fā)明的包含70wt。/。兩性霉素B的藥物組合物霧化特性的曲線,所述的兩性霉素B是利用不同的被動DPI裝置以56.6L/min霧化的;圖9表明每個收集器從本發(fā)明的粉末中獲得的ED;圖10表明本發(fā)明粉末中每批平均ED;圖11表明本發(fā)明粉末的每收集器的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑(MMAD);圖12表明本發(fā)明粉末的每收集器的細粒劑量(FPD%<3.3^n);圖13表明本發(fā)明粉末的每收集器的ED(mg/囊);圖14表明本發(fā)明粉末的每收集器和每批的平均ED;圖15表明本發(fā)明粉末的每收集器的MMAD;圖16表明本發(fā)明粉末的每收集器的FPD%<3.3/mi;圖H表明本發(fā)明兩種粉末的ED(mg/囊);圖18是一個圖表,表明氣管內(nèi)給藥或靜脈內(nèi)給藥后,大鼠身體不同部位兩性霉素B的濃度;圖19是一個圖表,表明經(jīng)肺給藥14天后,狗肺中兩性霉素B平均濃度-時間分布圖20是表明本發(fā)明一種形式的有效性的Kaplan-Meier存活曲線;圖21表明通過吸入遞送,兔的肺組織中兩性霉素B的組平均濃度;圖22表明通過吸入遞送,兔的肺組織中兩性霉素B的組平均濃度;圖23是一個表明本發(fā)明一種形式的有效性的Kaplan-Meier存活曲線,及圖24是一個曲線,對比本發(fā)明兩種粉末的重量分析的和藥物特異性的粒子大小分布。詳述本發(fā)明可理解為,除非另有說明,不限于以特定的制劑組分,藥物遞送系統(tǒng),制造技術(shù),給藥步驟,或其他同類的東西等,因為這些可變化。關(guān)于這一點,除非另有說明,供參考的化合物或組合物包括所述的化合物或組分本身,以及與其他化合物或成分混合的化合物,如化合物的混合物。在進一步論述之前,下面術(shù)語的定義會幫助理解本發(fā)明的實施方案。除非另有明確說明,如在本文中所應(yīng)用的"一","一",和"一"單數(shù)形式包括多于一個的參考。因此例如,"磷脂"包括單個磷脂以及二個或多個磷脂結(jié)合或混合,除非上下文另外明確指出。在本文中所應(yīng)用的"顆粒狀物"指包含兩性霉素B和至少一種藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。所述的顆粒狀物可呈現(xiàn)不同的形狀和形式,如中空的和/或多孔的微結(jié)構(gòu)。所述的中空的和/或多孔的微結(jié)構(gòu)可表現(xiàn)為,限定,或包括空隙,孔隙,缺陷,空心,空間,間隙式的空間,孔徑,穿孔,或空穴,并且可為球形的,塌陷的,變形的,或破裂的粒子。.當(dāng)提及活性劑,該術(shù)語不僅包括特殊的分子本體,而且也包括其藥學(xué)可接受的藥理活性類似物,包括,但不限于,鹽,酯,酰胺,酰肼,N-垸基衍生物,N-?;苌铮八?,共軛物,活性代謝物,和其他這樣的衍生物,類似物,和相關(guān)化合物。因此,在本文中所應(yīng)用的術(shù)語"兩性霉素B"是指它本身或衍生物,類似物,或上面提到的相關(guān)化合物,只要這樣的兩性霉素B衍生物,類似物,或相關(guān)的化合物顯示抗真菌活性。在本文中所應(yīng)用的術(shù)語"治療"和"治療"指癥狀嚴(yán)重性和域頻率的減少,癥狀和/或潛在原因的消除,癥狀和/或潛在原因發(fā)生的可能性的消除,及損害的改善或補救。因此,本文中提供的用活性劑"治療"病人包括敏感個體的特殊狀況,疾病或病癥的預(yù)防以及臨床癥狀個體的治療。在本文中所應(yīng)用的"治療有效量"指包括治療有效量和預(yù)防有效量的量。在本文中所應(yīng)用的"治療有效量"指對達到期望的治療效果有效的量。所給活性劑的治療有效量一般會根據(jù)如被治療的病癥或疾病的類型和嚴(yán)重性和病人的年齡,性別,及體重等因素而變化。在本文中所應(yīng)用的"預(yù)防有效量"指對達到期望的預(yù)防效果有效的量。因為預(yù)防藥量在疾病開始之前對病人給藥,所以一般預(yù)防有效量小于治療有效量。在本文中所應(yīng)用的"質(zhì)量中位直徑"或"MMD"指多數(shù)粒子的中值直徑,一般處在多分散粒子總體中,即,包含一個粒徑范圍。除非另作說明,本文記錄的MMD值是通過激光衍射測定(SympatecHelos,Clausthal-Zellerfeld,Germany)。一般,粉末樣品直接加到SympatecRODOS干粉末分散設(shè)備的加料漏斗中。這可手工或通過從VIBRI振動投料元件的末端機器攪勻?qū)崿F(xiàn)。樣品經(jīng)加壓空氣(2至3巴)作用分散成初級粒子,同時真空降低(吸力)最大化達到已知的分散壓力。分散的粒子用632.Snm的激光束探測,在合適的角度,激光束貫穿分散粒子的軌跡。從粒子整體散射的激光光線被反向傅里葉透鏡裝置反射到同軸排列的光電倍增管檢測元件上。散射的光線要求5ms的時間段。粒子大小的分布用專有的算法系統(tǒng)按照散射光線的空間的/光強的分布在后臺計算。在本文中所應(yīng)用的"幾何直徑"指單個粒子的直徑,通過顯微鏡測定,除非本文另作說明。在本文中所應(yīng)用的"空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑"或"MMAD"指多數(shù)粒子或顆粒狀物的平均空氣動力學(xué)尺寸,一般處在多分散總體中。所述的"空氣動力學(xué)直徑"指具有相同沉降速度的單位密度球形的直徑,通常在空氣中,作為粉末并且因此是有效的表征氣霧化的粉末或其他分散的粒子或顆粒狀物制劑的方法,依據(jù)其沉積行為??諝鈩恿W(xué)直徑包括粒子或顆粒狀物的形狀,密度,及粒子或顆粒狀物的物理尺寸。除非另作說明,本文中所應(yīng)用的MMAD指氣霧化粉末的空氣動力學(xué)粒子或顆粒狀物尺寸分布的中值,通過級聯(lián)碰撞測定。在本文中所應(yīng)用的"結(jié)晶度"指結(jié)晶形式的兩性霉素B相對于兩性霉素B總量的百分?jǐn)?shù)。除非本文作相反的說明,本文中的結(jié)晶度是通過寬角X-射線粉末衍射測定。X-射線衍射粉末類型是用ShimadzuX-射線衍射儀模型XRD-6000測定,具有兩秒的停留時間(固定時間掃描),0.02。26的步長,3-42°20的掃描范圍,0.5。的分散狹縫,1°的散射狹縫,及0.3mm接受狹縫,在實施例1中會描述的更加詳細。在本文中所應(yīng)用的"無定形度"指無定形形式的兩性霉素B相對于兩性霉素B總量的百分?jǐn)?shù)。除非本文作相反的說明,本文中的無定形水平是通過寬角X-射線粉末衍射測定。在本文中所應(yīng)用的術(shù)語"發(fā)射劑量"或"ED"指從吸入器裝置在從粉末單元或儲罐致動或分散事件后干粉末遞送的指示。ED定義為通過吸入器遞送的劑量與標(biāo)定劑量(即,在發(fā)射前放入合適的吸入器裝置的每單位劑量粉末的質(zhì)量)的比率。所述的ED是試驗測定量,并且可用模擬病人加藥的體外裝置來測定。如本文中所應(yīng)用的,為了測定ED值,將一定劑量的干粉末(如上面定義的)放入Turbospin⑧DPI裝置(PH&T,Italy)中,在美國專利4,069,819和4,995,385中敘述,其內(nèi)容全文合并于此作為參考。起動Turbospin⑥D(zhuǎn)PI,分散粉末。得到的氣霧劑云在啟動2.5秒后從裝置中用真空(30L/min)抽出,在那里被捕獲到連接到裝置接口管的配衡玻璃纖維濾片(Gelman,47mm直徑)上。到達濾片的粉末量構(gòu)成遞送劑量。如,裝有5mg干粉末的囊放入吸入器裝置,如果粉末分散導(dǎo)致在配衡濾片上粉末4mg的回收,如上所述的,那末所述的干粉末組合物的ED為80%[=4mg(遞送劑量)/5mg(標(biāo)定劑量)]。在本文中所應(yīng)用的"被動千粉末吸入器"指一種吸入裝置,所述的裝置取決于患者的吸入力以分散和氣霧化藥物組合物,該藥物組合物以在儲存罐或單位劑量的形式裝在裝置中,并且所述的被動干粉末吸入器不包括含有提供分散和氣霧化藥物組合物的能量的設(shè)備的吸入裝置,如加壓空氣和振動或旋轉(zhuǎn)元件。在本文中所應(yīng)用的"主動干粉末吸入器"指所述的裝置不僅僅依賴于患者的吸入力以分散和氣霧化藥物組合物,該藥物組合物以在儲存罐或單位劑量的形式裝在裝置中,并且所述的主動干粉末吸入器包括含有提供分散和氣霧化藥物組合物的能量的設(shè)備的吸入裝置,如加壓氣體和振動或旋轉(zhuǎn)元件。在本文的
發(fā)明內(nèi)容中陳述了本發(fā)明若干實施方案的概述。為了簡便起見,在本文中這一概述其內(nèi)容全文并入作為參考。本發(fā)明的一個或多個實施方案涉及令人吃驚的和意想不到的發(fā)現(xiàn),即某些兩性霉素B組合物具有降低了的毒性。雖然不希望受理論的束縛,某些因素看來似乎影響兩性霉素B的毒性。這些因素包括,但不限于,兩性霉素B的結(jié)晶度,兩性霉素B粒子的尺寸,含有兩性霉素B粒子的顆粒狀物的均勻性,及含有兩性霉素B粒子的顆粒狀物的尺寸。視情況而定,這些因素的一個或多個看來似乎影響毒性。在本發(fā)明的一個或多個實施方案中,組合物包括兩性霉素B。兩性霉素B是含有七個反式共軛雙鍵和通過糖苷鍵與主環(huán)相連的3-氨基-3,6-二去氧甘露糖(海藻糖胺)部分的七烯(heptaene)大環(huán)內(nèi)酯。兩性霉素B原料藥物物質(zhì)可從丹麥的哥本哈根的Alpharma或康涅狄格州Woodbridge的Chemwerth公司獲得。在本發(fā)明的一個或多個實施方案中,組合物包括有抗真菌活性的兩性霉素B的衍生物。兩性霉素B的衍生物可是酯,酰胺,酰肼,N-烷基,和/或N-氨基?;?。如兩性霉素B的酯衍生物包括,但不限于,甲基酯,膽堿酯,和二甲基氨基丙基酯。如兩性霉素B的酰胺衍生物包括,但不限于,兩性霉素B的伯酰胺,仲酰胺和叔酰胺。兩性霉素B的酰肼衍生物包括,但不限于,N-甲基哌嗪酰肼。如兩性霉素B的N-烷基衍生物包括,但不限于,兩性霉素B甲基酯的N',N',N'-三甲基和N',N'-二甲基氨基丙基琥珀酰亞胺基(succininimidyl)衍生物。如兩性霉素B的N-氨?;苌锇?,但不限于,N-鳥氨?;?,N-二氨基丙?;?,N-賴氨基(lisil)-,N-六甲基賴氨基,和N-哌嗪-丙?;?,或N',N'-甲基-l-哌嗪-丙?;?兩性霉素B甲酯。包含兩性霉素B的組合物可包括不同量的兩性霉素B。如,兩性霉素B的量可從至少約0.01wt。/。變化,如至少約lwt%,至少約10wt%,至少約50wt%,至少約90wtQ/。,至少約95wt°/。,或至少約98wto/。。如上所述的,兩性霉素B的結(jié)晶度看起來似乎是降低毒性的一個因素。例如,當(dāng)經(jīng)肺給藥時,與更多無定形形式的兩性霉素B相比,更多結(jié)晶形式的兩性霉素B看起來似乎溶解較慢并具有較長的半衰期。雖然不希望受理論的束縛,緩慢的溶解性和較長的半衰期看起來似乎降低毒性。與之相反,雖然不希望受理論的束縛,無定形形式看起來似乎提高了可能對肺部組織有毒的可溶的聚集物。雖然不希望受理論的束縛,認(rèn)為這一原理不限于肺。期望的兩性霉素B的結(jié)晶度取決于如劑量和治療方法因素。兩性霉素B的結(jié)晶度可為至少約10%,至少約20%,至少約30%,至少約40%,至少約50%,至少約60%,至少約70%,例如至少約80%,至少約90%,至少約95%,或至少約99%。因此,兩性霉素B的結(jié)晶度可為約10%到100%,例如約20%到約99%,約50%到約99%,約70%到約99%,約70%到約98%,約80%到約98%,或約90%到約97%。結(jié)晶度可用若干已知方法中的任一種測定。例如,結(jié)晶度可用X-射線衍射,拉曼和/或紅外光譜,動態(tài)蒸汽吸著,溶液量熱法熱,或等溫微量熱法測定。如上面所述的,除非本文作相反說明,本文的結(jié)晶度應(yīng)用實施例1所述的方法利用X-射線衍射測定。在某些情況下,應(yīng)用小直徑的兩性霉素B的粒子。在一個方案中,兩性霉素B的粒子具有小于約3/xm的質(zhì)量中位直徑,如小于約2.5;mi,小于約2/mi,小于約1.9Aim,或小于約1.5pm。例如,兩性霉素B的粒子可具有從約0.5/mi到約3/mi的質(zhì)量中位直徑,如約0.5pim到約1.8jwn,約0.8ptm到約2.5]Wm,約1.1/xm到約1.9/mi,約1.2/mi到約1.8/xm,或約lpm到約2^n。在一些方案中,至少約20%的兩性霉素B粒子的尺寸小于約3/xm,如至少約50%小于約3/mi,至少約90%小于約3pm,或至少約95%小于約3/mi,um是指直徑大小。例如,粒子的60wt%,70wt%,80wt。/?;?0wt。/??删哂袕募s1.1/mi至1.9pm的質(zhì)量中位直徑。在一些方案中,兩性霉素B有高的結(jié)晶度,并且兩性霉素B粒子的尺寸小。結(jié)晶度可為上面論述中的任一值,并且粒子的尺寸可為上面論述中的任一值。例如,某一方案中,結(jié)晶度為至少約50%,并且質(zhì)量中位直徑小于約3/mi。另一方案中,結(jié)晶度為至少約70%,并且質(zhì)量中位直徑小于約2.8/mi。又一方案中,結(jié)晶度為至少約80%,并且質(zhì)量中位直徑小于約2.6/xm。還有另一方案中,結(jié)晶度為至少約90%,并且質(zhì)量中位直徑小于約2.4jmi。結(jié)晶度可以處在上面論述的水平,并且兩性霉素B粒子的尺寸可大于上面論述的尺寸。例如,結(jié)晶度可為至少約50%,并且質(zhì)量中位直徑可大于約3/mi。相反地,兩性霉素B粒子的尺寸可在上面論述的尺寸之內(nèi),并且結(jié)晶度可在上面論述的水平之外。例如,質(zhì)量中位直徑可小于約3/mi,并且結(jié)晶度可小于約50%。本發(fā)明的一個或多個實施方案的藥物組合物可包括兩性霉素B和,任選地,一種或多種其它活性成分和/或藥學(xué)可接受的賦形劑。例如,藥物組合物可包括純的兩性霉素B粒子,可包括純的兩性霉素B粒子和其它粒子,和/或可包括含有兩性霉素B和一種或多種活性成分和/或一種或多種藥學(xué)可接受的賦形劑的顆粒狀物。因此,本發(fā)明的一個或多個實施方案的藥物組合物可以,如果期望,包括兩性霉素B和一種或多種其它活性成分的組合。如其它活性成分包括,但不限于,可以通過肺或鼻途徑遞送的活性劑。例如,其他活性劑可以為長效劑和/或有效抗肺和/或鼻感染的活性劑如抗病毒劑,抗真菌劑,禾口/或抗生素。如抗病毒劑包括,但不限于,阿昔洛韋,甘昔洛韋(gangcyclovir),疊氮胸苷,阿糖胞苷(cytidinearabinoside),利巴韋林,利福平(rifampacin),金剛烷胺,碘代脫氧尿嘧啶核苷,膦甲酸鈉(poscamet)和三氟尿苷。如抗真菌劑包括,但不限于,咯類(如,咪唑類,伊曲康唑,波扎康唑(pozaconazole)),米卡芬凈(micafungin),卡斯巴芬凈(caspafimgin),水楊酸,硝酸奧昔康唑,環(huán)吡酮胺,酮康唑,咪康唑,和硝酸布康唑。如抗生素包括,但不限于,青霉素和青霉素族的抗菌藥,包括但不限于青霉素-G,青霉素-V,環(huán)己西林,氨芐西林,阿莫西林(amoxicillin),環(huán)己西林,巴氨西林,海他西林,氯唑西林,雙氯西林,甲氧西林,萘夫西林,苯唑西林,阿洛西林,羧芐西林,美洛西林,哌拉西林,替卡西林,和亞胺硫霉素(imipenim);頭孢菌素和頭孢菌素族藥物,包括但不限于頭孢羥氨芐,頭孢唑林,頭孢氨芐(caphalexn),頭孢噻吩,頭孢匹林,頭孢霉定,頭孢克洛,頭孢孟多,頭孢尼西,頭孢辛(cefoxin),頭孢呋辛,頭孢雷特,頭孢替坦,頭孢他唑(cefmetazole),頭孢哌酮,頭孢噻躬,頭孢唑肟,頭孢伊唑(ceftizone),拉氧頭孢,頭孢他啶,和頭孢克肟;氨基糖苷類藥物和氨基糖苷族藥物,包括但不限于鏈霉素,新霉素,卡那霉素,慶大霉素,妥布霉素,阿米卡星,和奈替米星;大環(huán)內(nèi)酯和大環(huán)內(nèi)酯族藥物,以阿奇霉素,克拉霉素,羅紅霉素,紅霉素,林可霉素,和克林霉素舉例說明;四環(huán)素和四環(huán)素族藥物,例如,四環(huán)素,土霉素,多美環(huán)素(democlocylin),美他環(huán)素,強力霉素,和米諾環(huán)素;喹啉和類喹啉藥物,像這樣的,例如,萘啶酮酸(naladixicacid),西諾沙星,諾氟沙星,環(huán)丙沙星,氧氟沙星(ofloxidn),依諾沙星,和培氟沙星;抗生素肽,包括但不限于多粘菌素B,粘菌素,和桿菌肽(bacatracin),以及其他抗生素肽如防衛(wèi)素,馬加寧,殺菌肽,和其它,作為天然存在或者作為工程化使這些肽抵抗病原特異性蛋白酶和其它失活酶作用的效果被提供;其他抗微生物藥物,包括氯霉素,萬古霉素,利福平,甲硝唑,伏立康唑,氟康唑,乙胺丁醇,吡嗪酰胺,磺胺類藥,異煙肼,和紅霉素。當(dāng)應(yīng)用活性劑的混合物,所述的活性劑可以在混合物中提供,所述的混合物可以單一種類的藥物組合物或分別地以獨立種類的藥物組合物。進一步,藥物組合物可以和一種或多種其它的提供期望的分散穩(wěn)定性或粉末分散性的活性或生物活性劑混合?;钚詣┤鐑尚悦顾谺的量,在藥物組合物中可以變化。一般活性劑的量為占藥物組合物總量的至少約5wt%,例如至少約10wt%,至少約20wt%,至少約30wt%,至少約40wt%,至少約50wt%,至少約60wt%,至少約70wtQ/Q,或至少約80wt%。一般活性劑的量在約0.1wt。/o至100wt。/。之間變化,例如約5wt。/。至約95wt%,約10wt。/。至約90wt%,約30wt。/。至約80wt%,約40wt。/。至約70wt%,或約50wt。/。至約60wt%。如上面所述的,藥物組合物可以包括一種或多種藥學(xué)可接受的賦形劑。例如藥學(xué)可接受的賦形劑包括,但不限于,脂類,金屬離子,表面活性劑,氨基酸,糖,緩沖液,鹽,聚合物,等等,及其混合物。如脂類包括,但不限于,磷脂,糖脂,神經(jīng)節(jié)苷脂GM1,神經(jīng)鞘磷脂,磷脂酸,心磷脂;帶有聚合物鏈如聚乙二醇的脂類,殼多糖,透明質(zhì)酸,或聚乙烯吡咯烷酮;帶有磺化的單-,二-和多糖的脂類;脂肪酸如棕櫚酸,硬脂酸,及油酸;膽甾醇,膽甾醇酯,及膽甾醇半琥珀酸酯。在一個或多個實施方案中,磷脂包括飽和磷脂,如一種或多種卵磷脂。典型的?;滈L度為16:0和18:0(即,棕櫚酰和硬脂酰)。磷脂含量可以通過活性劑活性,遞送方式,和其它因素確定。天然或合成來源的磷脂可以以不同的量應(yīng)用。當(dāng)磷脂存在時,其量一般要足夠用至少單個的磷脂分子層包裹活性劑。通常磷脂含量為約5wt%到約99.9wt%,如約20wt%到約80wt%。通常,相容的磷脂包括這樣的磷脂,所述的磷脂在高于約40°C,如高于約6(TC,或高于約8(TC,具有凝膠到液態(tài)結(jié)晶的相變。引入的磷脂可以相對地為長鏈(如,C16-C22)飽和脂類。在公開的穩(wěn)定化的制劑中所用的典型磷脂包括,但不限于,磷酸甘油酯如二棕櫚酰卵磷脂,二硬脂酰卵磷脂,二花生四烯酰卵磷脂,二山崳酰卵磷脂,二磷酰甘油,短鏈卵磷脂,氫化卵磷脂,E-100-3(從LipoidKG,Ludwigshafen,Germany可得),長鏈飽和磷酯酰乙醇胺,長鏈飽和磷酯酰絲氨酸,長鏈飽和磷酯酰甘油,長鏈飽和磷酯酰肌醇,含磷酸(phosphaticacid),磷酯酰肌醇,和鞘磷脂。如金屬離子包括,但不限于,二價陽離子,包括鈣,鎂,鋅,鐵,等等。例如,當(dāng)應(yīng)用磷脂時,藥物組合物也可以包括多價陽離子,如在WO01/85136和WO01/85137專利中公布的,其內(nèi)容全文并入作為參考。一定量的多價陽離子存在可能有效增加磷脂的熔點(Tm)從而藥物組合物顯示至少約2(TC的熔點,高于它的儲存溫度(Ts),如,至少約40。C。多價陽離子與磷酯的摩爾比可以至少約0.05:1,如約0.05:1至約2.0:1或約0.25:1至約1.0:1。例如多價陽離子磷酯的摩爾比為0.50:1。當(dāng)金屬離子是鈣時,可以為氯化鈣的形式。雖然金屬離子,如鈣,經(jīng)常包含在磷脂中,但沒有要求任一種。如上所述的,藥物組合物可以包括一種或多種表面活性劑。例如,一種或多種表面活性劑可以和一種或多種與組合物固體粒子或顆粒狀物相關(guān)的表面活性劑在液相中。"相關(guān)"是指藥物組合物可引入、吸附、吸收表面活性劑、被其包被或被其形成。表面活性劑包括,但不限于,氟化的或沒有氟化的化合物,如飽和和不飽和脂類,非離子洗滌劑,非離子嵌段共聚物,離子表面活性劑,及其組合。應(yīng)強調(diào)的是,除了前面提到的表面活性劑,合適的氟化表面活性劑與此處的教導(dǎo)相容,并且可以應(yīng)用于提供期望的制劑。如非離子洗滌劑包括,但不限于,脫水山梨醇酯包括脫水山梨醇三油酸酯(司盤TM85),脫水山梨醇倍半油酸酯,脫水山梨醇單油酸酯,脫水山梨醇單月桂酸酯,聚氧乙烯(20)脫水山梨醇單月桂酸酯,及聚氧乙烯(20)脫水山梨醇單油酸酯,油基聚氧乙烯(2)醚,硬脂酰聚氧乙烯(2)醚,月桂基聚氧乙烯(4)醚,甘油酯,及蔗糖酯。禾廿用McCutcheon,sEmulsifierandDetergents(McPublishingCo.,GlenRock,NewJersey)其它合適的非離子洗滌劑能夠輕易的被識別,其內(nèi)容全文并入作為參考。如嵌段共聚物包括,但不限于,聚氧乙烯和聚氧丙烯的二嵌段和三嵌段共聚物,包括泊洛沙姆188(PluronicTMF-68),泊洛沙姆407(PluronicTMF-127),和泊洛沙姆338。如離子表面活性劑包括,但不限于,磺基琥珀酸鈉,和脂肪酸皂。如氨基酸包括,但不限于,疏水性氨基酸。已知在本領(lǐng)域氨基酸作為藥學(xué)可接受的賦形劑應(yīng)用是在國際專利WO95/3174,WO96/32096,及WO96/32149中公開的,其內(nèi)容全文并入作為參考。糖的例子包括,但不限于,單糖,二糖,和多糖。例如,單糖如右旋糖(無水的和一水合物),半乳糖,甘露醇,D-甘露糖,山梨醇,山梨糖等等;二糖如乳糖,麥芽糖,蔗糖,海藻糖,等等;三糖如棉子糖等等;及其他糖如淀粉(羥乙基淀粉),環(huán)糊精和麥芽糖糊精。緩沖液的例子包括,但不限于,tris或檸檬酸鹽。酸的例子包括,但不限于,羧酸。鹽的例子包括,但不限于,氯化鈉,羧酸鹽(如,檸檬酸鈉鹽,抗壞血酸鈉鹽,葡糖酸鎂,葡糖酸鈉,鹽酸基丁三醇(tromethaminehydrochloride),等),碳酸銨,乙酸銨,氯化銨,等等。有機固體的例子包括,但不限于,樟腦,等等。本發(fā)明一個或多個實施方案的藥物組合物可以包括生物相容的,如生物可降解聚合物,共聚物,或共混物或它們的其他組合。在這方面應(yīng)用的聚合物包括聚交酯,聚交酯-乙交酯,環(huán)糊精,聚丙烯酸酯,甲基纖維素,羧甲基纖維素,聚乙烯醇,聚酐,聚內(nèi)酰胺,聚乙烯吡咯垸酮,多糖(葡聚糖,淀粉,殼多糖,脫乙酰殼多糖,等),透明質(zhì)酸,蛋白質(zhì)(白蛋白,骨膠原,明膠,等。)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會明白,通過選擇適當(dāng)?shù)木酆衔?,組合物的遞送效率和/或分散的穩(wěn)定性會滿足活性制劑效果的最優(yōu)化。除了上面提到的藥學(xué)可接受的賦形劑,為了提高顆粒狀物的硬度,產(chǎn)率,發(fā)射劑量和沉積,半衰期和病人接受度,期望向藥物組合物中添加其他的藥學(xué)可接受的賦形劑。這些任選的藥學(xué)可接受的賦形劑包括,但不限于著色劑,矯味劑,緩沖劑,吸濕劑,抗氧化劑,及化學(xué)穩(wěn)定劑。進一步,不同的藥學(xué)可接受的賦形劑可以用以提供結(jié)構(gòu)和形式于顆粒狀物組合物(如,膠乳粒子)。在這方面,可以理解為硬化成分可以利用后生產(chǎn)方法如選擇性的溶劑提取方法去除。藥物組合物也可以包括藥學(xué)可接受的賦形劑的混合物。例如,碳水化合物和氨基酸混合物在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明一個或多個實施方案的組合物可以呈現(xiàn)多種形式,如干粉末,膠囊,片劑,重新組成的粉末,懸浮液,或包含非水相的分散劑,如發(fā)射劑(如,含氯氟烴,氫氟垸烴(hydrofluoroalkane))。干粉末的含水量可以小于約15wt%,如小于約10wt%,小于約5wt%,小于約2wt%,小于約lwt%,或小于約0.5wt%。在國際專利WO95/24183,WO96/32149,WO99/16419,WO99/16420'及WO99/16422中描述了這樣的粉末,其內(nèi)容全文并入作為參考。本發(fā)明一個或多個實施方案涉及兩性霉素B的均勻組合物,所述的兩性霉素B被引入基質(zhì)材料中,有少量的,如果有的話,未混合的兩性霉素B粒子。例如,組合物的至少約40wt%,至少約50wt%,至少約60wt%,至少約70wt%,至少約80wt%,至少約90wt%,至少約95wt%,或至少約99wt%,可以包括含有兩性霉素B和基質(zhì)材料的顆粒狀物。然而在某種情況下,為了提供一種期望的給藥兩性霉素B的藥物動力學(xué)分布曲線會想要不均勻的組合物,并且在這些情況中,會用到兩性霉素B的大粒子(如,質(zhì)量中位直徑從約3/mi到約10pm,或者更大)。均勻的組合物可以包括兩性霉素B的小粒子。具有小于約3;xm的質(zhì)量中位直徑的兩性霉素B粒子,如上面論述的,可以是分散的并且便于混合在基質(zhì)材料中的兩性霉素B的均勻組合物的生產(chǎn)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)如果兩性霉素B的質(zhì)量中位直徑大于約3/mi,結(jié)果會是包含混合在基質(zhì)材料中的兩性霉素B和包含沒有任何基質(zhì)材料的兩性霉素B的粒子的不均勻組合物。這些不均勻的組合物通常具有差的粉末流動性和分散性,結(jié)果導(dǎo)致劑量的變化。由兩性霉素B的大粒子制成的組合物也會對大鼠產(chǎn)生毒性。值得注意的是,然而,不均勻分布可以通過霧化過程來改善,該過程可以為兩性霉素B的大粒子提供均勻分布。由上面看來,在某些方案中,藥物組合物具有高均勻性,兩性霉素B有高的結(jié)晶度,并且制成組合物的兩性霉素B的尺寸小。均勻性,結(jié)晶度,和粒子尺寸可以為上面論述的那些中的任一個。例如,在一個方案中,結(jié)晶度至少約50%,并且質(zhì)量中位直徑小于約3/mi。在另一個方案中,結(jié)晶度至.少約70%,并且質(zhì)量中位直徑小于約2.8/xm。在又一個方案中,結(jié)晶度至少約80%,并且質(zhì)量中位直徑小于約2.6^m。在還有一個方案中,結(jié)晶度至少約90%,并且質(zhì)量中位直徑小于約2.4jum。然而,在某種情況下,均勻性高,并且結(jié)晶度的一個或多個及兩性霉素B超出上述論述的范圍?;蛘?,在某種情況下,均勻性低,并且結(jié)晶度的一個或多個及兩性霉素B在上述論述的范圍之內(nèi)。在一方案中,藥物組合物包括在磷脂基質(zhì)中混合的兩性霉素B。藥物組合物可包括磷脂基質(zhì),所述的磷脂基質(zhì)引入活性劑并且是中空禾口/或多孔微結(jié)構(gòu)的粒子的形式,如在上述的國際專利WO99/16419,WO99/16420,WO99/16422,WO01/85136,和WO01/85137中描述過,其內(nèi)容全文并入作為參考。在向肺遞送兩性霉素B時應(yīng)用中空和/或多孔微結(jié)構(gòu),因為在使用者的吸入期間中空和/或多孔微結(jié)構(gòu)的密度,尺寸,和空氣動力學(xué)性能促進向肺深處的運輸。而且,以磷脂為基質(zhì)的中空和/或多孔微結(jié)構(gòu)減少了顆粒狀物之間的吸引力,使藥物組合物在氣霧化過程中容易分散并且增加了藥物組合物的流動性使其易于操作。在一方案中,藥物組合物由中空和/或多孔微結(jié)構(gòu)組成,所述的微結(jié)構(gòu)的松密度小于約1.0g/cm3,小于約0.5g/cm3,小于約0.3g/cm3,小于約0.2g/cm3,或小于約0.1g/cm3。通過提供低松密度的粒子或顆粒狀物,能夠裝入單位劑量容器中的粉末的最小粉末質(zhì)量是減少的,其排除了對載體粒子的需要。也就是,本發(fā)明一個或多個實施方案的相對低密度的粉末為可以相對低劑量的藥物化合物的可重復(fù)給藥而提供。此外,因為大的載體顆粒狀物,如乳糖顆粒狀物,由于其尺寸的原因會碰撞喉管和上部氣道,所以載體粒子的排除會潛在地降低喉管的沉積和任何"卡住"效果或咳嗽。在一方案中,藥物組合物是干粉末的形式并且裝入單位劑量的容器內(nèi),該容器插入或接近氣使藥物組合物霧化的單位劑量的氣霧化儀器。該方案有助于干粉末形式在其單位劑量容器內(nèi)長期穩(wěn)定儲存。在一些例子中,本發(fā)明一個或多個實施方案的藥物組合物至少已經(jīng)穩(wěn)定儲存約2年。在一些方案中,不需制冷就可以獲得穩(wěn)定性。在另一些方案中,在低溫下,如,在2-S'C,可以用于延長穩(wěn)定儲存。在許多方案中,儲存穩(wěn)定性允許以外部粉末來源氣霧化。本文中揭示的藥物組合物可以理解為包括一種結(jié)構(gòu)的基質(zhì),所述的基質(zhì)顯示、限定或包含空隙,孔隙,缺陷,空心,空間,間隙式空間,孔徑,穿孔或空穴。穿孔微結(jié)構(gòu)的絕對形狀(相對于表面幾何形狀)一般不嚴(yán)格要求并且所有提供期望特性的構(gòu)型中的任何一個預(yù)期在本發(fā)明范圍之內(nèi)。相應(yīng)地,一些實施方案包括近似的球形。然而,也包括塌陷的,變形的或破裂的粒子。在一個方案中,兩性霉素B被引入到形成分散顆粒狀物的基質(zhì)中,并且藥物組合物包括分散顆粒狀物的多數(shù)。所述的分散顆粒狀物具有所需尺寸,所以可以有效地給藥和/或應(yīng)用在需要的地方。例如,對于氣霧化的藥物組合物,顆粒狀物具有這樣的尺寸,該尺寸允許顆粒狀物氣霧化并且在使用者吸入時遞送到使用者的呼吸道。在一些方案中,藥物組合物包括顆粒狀物,所述的顆粒狀物的質(zhì)量中位直徑小于約20/mi,如小于約10/mi,小于約7/rni,或小于約5;mi。所述的顆粒狀物的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑為約1/mi到約6pm,如約1.5/an到約5jtmi,或約2/mi到約4pm。如果顆粒狀物太大,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在大鼠體內(nèi)有毒性。如果顆粒狀物太小,較大比例的顆粒狀物會被呼出。如上所述的,在一些實施方案中,藥物組合物包括具有小的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的顆粒狀物,所述的藥物組合物有高的均勻性,兩性霉素B具有高的結(jié)晶度,并且制成藥物組合物的兩性霉素B粒子的尺寸小??諝鈩恿W(xué)質(zhì)量中位直徑,均勻度,結(jié)晶度,和兩性霉素B粒子的尺寸可以為上面論述中的任一值。例如,在一個方案中,空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑小于約20pm,藥物組合物的至少約60wt。/。包括兩性霉素B和基質(zhì)材料,結(jié)晶度至少約50%,并且質(zhì)量中位直徑小于約3/mi。在另一個方案中,空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑小于約10/mi,藥物組合物的至少約70wt。/。包括兩性霉素B和基質(zhì)材料,結(jié)晶度至少約70%,并且質(zhì)量中位直徑小于約2.8ptm。在又一個方案中,空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑小于約7/mi,藥物組合物的至少約80wt。/。包括兩性霉素B和基質(zhì)材料,結(jié)晶度至少約80%,并且質(zhì)量中位直徑小于約2.6/mi。還有另一個方案,空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑小于約7Mm,藥物組合物的至少約90wt。/。包括兩性霉素B和基質(zhì)材料,結(jié)晶度至少約90。/。,并且質(zhì)量中位直徑小于約2.4(trni。然而,在某些情況下,空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑小并且均勻性,結(jié)晶度,及兩性霉素B粒子的尺寸的一個或多個超出上面論述的范圍。類似地,在其他情況下,空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑大并且均勻性,結(jié)晶度,及兩性霉素B粒子的尺寸的一個或多個在上面論述的范圍之內(nèi)。如上所述的,吸入大鼠體內(nèi)的兩性霉素B的顆粒狀物或粒子毒性取決于多種因素。雖然不期望受理論束縛,這些因素看起來似乎包括,但不限于,兩性霉素B的結(jié)晶度,用于組成吸入的顆粒狀物或粒子的兩性霉素B粒子的尺寸,吸入顆粒狀物的均勻性,及吸入的粒子或顆粒狀物的尺寸?;|(zhì)材料可以包括疏水性的或部分疏水性的材料。例如,基質(zhì)材料可以包括脂類,如磷脂,和/或疏水性氨基酸,如亮氨酸或三-亮氨酸。磷脂基質(zhì)的例子在國際專利WO99/16419,WO99/16420,WO99/16422,WO01/85136,和WO01/85137及美國專利申請5,874,064;5,S55,913;5,985,309;禾卩6,503,480;及在2003年12月31日提出的共同未定的和共同擁有的美國專利申請10/750,934中論述,其內(nèi)容全文并入作為參考。疏水性氨基酸基質(zhì)的例子在美國專利6,372,258和6,358,530及在2001年12月21日提出的美國專利申請10/032,239中論述,其內(nèi)容全文并入作為參考。當(dāng)磷脂用作基質(zhì)材料時,藥物組合物也可以包括多價陽離子,如在國際專利WO01/85136和WO01/85137中揭示,其內(nèi)容全文并入作為參考。根據(jù)另一個實施方案,包含活性劑的組合物的釋放動力學(xué)是被控制的。根據(jù)一個或多個實施方案,本發(fā)明的組合物提供活性劑的直接釋放(immediaterelease)?;蛘撸瑸榱诉_到抗真菌劑的期望的釋放速度,本發(fā)明其他實施方案的組合物可以作為引入到基質(zhì)材料中的活性劑和未引入的活性劑的非均勻混合物的形式被供應(yīng)。根據(jù)這個實施方案,當(dāng)呼吸道給藥時抗真菌劑在直接釋放應(yīng)用中有實用性,所述的抗真菌劑是利用本發(fā)明一個或多個實施方案的基于乳化的生產(chǎn)過程配制的。(a)低密度多孔粉末的高的比表面積;(b)其中引入的藥物結(jié)晶的小的尺寸,及(C)顆粒狀物的低表面能量可以促進迅速釋放?;蛘?,為了影響活性劑的延遲釋放,期望設(shè)計顆粒狀物狀基質(zhì)。尤其想要活性劑從肺中迅速清除或持續(xù)釋放時。例如,磷脂分子的相態(tài)行為性質(zhì)受他們的化學(xué)結(jié)構(gòu)性質(zhì)和/或噴霧干燥原料中的制備方法和干燥條件和其他被利用的組合物成分影響。關(guān)于在一個小的單片的囊(SUV)或多片的囊(MLV)中增溶的活性劑的噴霧干燥,活性劑被封裝在多個雙層中并且經(jīng)過延遲的時間后被釋放。相比之下,按照本文中所討論的包括乳化液滴和分散的或溶解的活性劑的原料的噴霧干燥產(chǎn)生有較小的長程序的磷脂基質(zhì),因此便于快速釋放。雖然不受任何特殊理論的束縛,可以認(rèn)為這在某種程度上是因為活性劑從來沒有正式地裝封在磷脂中,而且因為一開始磷脂就作為單層(就脂質(zhì)體來說不是雙層)存在于乳化液滴表面。通過本發(fā)明一個或多個實施方案中的乳化為基礎(chǔ)的生產(chǎn)過程制備的噴霧干燥顆粒狀物,通常具有高的無序度。同樣,所述的噴霧干燥顆粒狀物典型地具有低的表面能量,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)噴霧干燥的DSPC顆粒狀物(用反相氣相色譜法測定)的值低至20mN/m。處理噴霧干燥磷脂顆粒狀物的小角度X射線散射儀(SAXS)對脂類進行的研究也顯示高的無序度,散射峰模糊,并且在一些情況下長度刻度只延長至一些最近的鄰刻度之外。值得注意的是,為了獲得持續(xù)的活性劑釋放,具有高的凝膠至液態(tài)結(jié)晶相變溫度的基質(zhì)本身并不足夠。為了獲得持續(xù)的釋放也要求雙層結(jié)構(gòu)具有充分的序。為了促進快速釋放可能用到高孔隙率(高表面積),和藥物和磷脂之間極小的相互作用的乳化劑系統(tǒng)。藥物組合物的制備過程也可以包括加入其它成分(如,小聚合物例如PluronicF-68;糖,鹽,水溶助長劑)以打破雙層結(jié)構(gòu)。為了獲得持續(xù)釋放,應(yīng)用到雙層形式的磷脂的引入,尤其當(dāng)活性劑裝封在里面時。在這種情況下,借助于二價抗衡離子或膽甾醇的引入,磷脂Tm的增加可以提供益處。同樣,借助于離子對(帶負電的活性齊ij+硬脂胺(steaylamine),帶正電的活性劑+磷脂酰甘油)的生成,磷脂和藥物物質(zhì)之間的相互作用的增加傾向于降低溶解速率。如果活性是兩親的,表面活性劑/表面活性劑的相互作用也可以減慢活性溶解。二價抗衡離子(如,鈣或鎂離子)添加到長鏈飽和卵磷脂中,結(jié)果在兩性離子前端的帶負電的磷脂部分和帶正電的金屬離子之間產(chǎn)生相互作用。這導(dǎo)致了水的水合取代和磷脂脂類前端和?;湹目s合。進一步,這導(dǎo)致了磷脂Tm的增加。前端水合的降低對和水接觸的噴霧干燥磷脂粒子的分散性質(zhì)的影響意義深遠。通過水相,借助分子擴散,完全氫化的卵磷脂分子非常緩慢地擴散到分散的結(jié)晶中。這個過程非常緩慢由于磷脂在水中溶解非常緩慢(對于DPPC約10—1()mOl/L)?,F(xiàn)有技術(shù)試圖克服這一現(xiàn)象,包括在磷脂存在下均勻化結(jié)晶。在這種情況下,均勻化結(jié)晶的高度剪切和曲率半徑有利于磷脂在結(jié)晶體上的涂布。相反的,當(dāng)與水相接觸時本發(fā)明一個或多個實施方案的"干"磷脂粉末能快速分散,因此涂布分散的晶體而不需要應(yīng)用高能量。例如,重構(gòu)后,噴霧干燥的DSPC/Ca混合物在氣/水界面的表面張力在測定時迅速下降至平衡常數(shù)(約20mN/m)。相反地,經(jīng)過數(shù)小時的時間DSPC脂質(zhì)體表面張力(約50mN/m)下降的非常少,并且很可能這種降低是因為水解降解產(chǎn)物如磷脂中游離脂肪酸的存在。單-末端脂肪酸比疏水性母體化合物能更快地分散到氣/水界面。因此向卵磷脂中添加鈣離子能促進結(jié)晶藥物的更快裝封并且需要更低的能量。在另一方案中,藥物組合物包括低密度顆粒狀物,該顆粒狀物通過共同噴霧干燥納米結(jié)晶和水包全氟化碳的乳劑獲得。納米結(jié)晶可以通過沉淀方法制備并且可以,如,尺寸在約45/mi到約80/mi之間變化。例如,全氟化碳的例子包括,但不限于,全氟己烷,全氟辛基溴,全氟辛基乙垸,全氟萘烷,全氟丁基乙烷。此處論述的顆粒狀物組合物優(yōu)先選擇"干"的狀態(tài)。也就是,在一個或多個實施方案中,顆粒狀物具有某一含水量,該含量允許粉末在室溫或低溫貯存過程中保持化學(xué)和物理穩(wěn)定性并且保持分散。關(guān)于這一點,原始顆粒狀物的尺寸,含量,純度,和空氣動力學(xué)顆粒狀物的尺寸分布變化很小或沒有變化。同樣地,顆粒狀物的含水量一般小于約10wt%,如小于約6wty。,小于約3wt%,或小于約lwt%。含水量,至少部分地,受組合物的支配并且受應(yīng)用的操作條件控制,如,進口溫度,進料濃度,泵的速率,和發(fā)泡劑的類型,濃度和后干燥。結(jié)合水的減少對磷脂基粉末的分散性和流動性產(chǎn)生顯著的提高,引起粉狀的肺表面活性劑或顆粒狀物組合物可能高效率遞送,該組合物包括分散在磷脂中的活性劑。提高了的分散性允許使用簡單的被動DPI裝置有效遞送這些粉末。藥物組合物的另一方案包括顆粒狀物組合物,該顆粒狀物組合物可以包括,部分或全部被涂布的并延長接觸點的保留時間或增強通過粘液的滲透的帶電物質(zhì)。例如,已知陰離子電荷有利于粘膜粘著然而陽離子電荷可以用于結(jié)合形成的顆粒狀物與帶負電的生物活性劑如遺傳物質(zhì)。電荷可以通過聚陰離子或聚陽離子物質(zhì)如聚丙烯酸,多賴氨酸,聚乳酸,和聚氨基葡糖的組合或并入而產(chǎn)生。這些單位劑量的藥物組合物可以包括容器。容器的例子包括,但不限于,囊,泡,小瓶,安瓿,或由金屬,聚合物(如,塑料,彈性體),玻璃,等等制成的容器密封系統(tǒng)。容器可以插入到氣霧化裝置中。容器可以具有合適的形狀,尺寸,和材料以容納藥物組合物并且在使用條件下提供藥物組合物。例如,膠囊或泡可以包括壁,所述的壁的組成物質(zhì)不和藥物組合物發(fā)生不良反應(yīng)。另外,壁還包括在藥物組合物被氣霧化時允許膠囊打開的物質(zhì)。在一個方案中,壁包括凝膠,羥丙基甲基纖維素(HPMC),聚乙二醇和HPMC的復(fù)合物,羥丙基纖維素,瓊脂,鋁箔,等等的一種或多種。另一個方案中,膠囊可以包括可伸縮連接的部分,如在美國專利4,247,066中論述的,其內(nèi)容全文并入作為參考。膠囊的尺寸可以選擇以便充分容納藥物組合物的劑量。尺寸通常從5號到000號且分別地外直徑從約4.91mm到約9.97mm,高度從約11.10mm到約26.14mm,并且容積從約0.13mL到約1.37mL。合適的膠囊可以從市場獲得,例如日本Nara的ShionogiQualicapsCo.,SouthCarolinaGreenwood的Capsugel。裝填后,上面的部分放置到下面的部分上制成膠囊形狀并且膠囊內(nèi)裝有粉末,如在美國專利4,846,876禾卩6,357,490,和國際專利WO00/07572中論述的,其內(nèi)容全文并入作為參考。在把上面的部分放置到下面的部分上后,膠囊可以任意包箍。在一方案中,為了使包含結(jié)晶兩性霉素B的藥物組合物在病人吸入時間內(nèi)遞送到病人的肺部,該組合物是可氣霧化的。在這種方式中,藥物組合物中的兩性霉素B直接遞送到感染部位。這優(yōu)于系統(tǒng)給藥。因為活性劑常常有腎毒性或其他毒性,一般優(yōu)先選擇最少的系統(tǒng)暴露。因此,遞送到肺部的活性劑的量優(yōu)選限于最小的藥物有效劑量。通過直接經(jīng)肺給藥活性劑,較大的量可以遞送到需要治療的部位伺時顯著減少系統(tǒng)暴露。進一步,通過主要地遞送結(jié)晶形式的兩性霉素B,感染部位的兩性霉素B的期望濃度能維持一段時間而且肺內(nèi)毒性作用發(fā)生的可能性降低。本發(fā)明一個或多個實施方案的藥物組合物缺少味道。從這方面考慮,雖然矯味劑可以任選地包含在組合物中,但是缺少味道的組合物甚至不需要矯味劑。本發(fā)明一個或多個實施方案的粒子,顆粒狀物,和組合物可以通過本領(lǐng)域內(nèi)熟練技術(shù)人員已知的和可獲得的不同方法和技術(shù)中的任一種制備。如上所述的,兩性霉素B的結(jié)晶度影響性能。熟練技術(shù)人員可以通過調(diào)整結(jié)晶條件來調(diào)整兩性霉素B的結(jié)晶度。例如,結(jié)晶度可以通過改變?nèi)軇?,兩性霉素B的濃度,pH,pH調(diào)整速率,純度水平,溫度,冷卻/加熱速率,退火時間,所用的晶粒,容積加入速率,攪拌速率,共溶劑類型/濃度,和結(jié)晶過程保留的時間而進行調(diào)整?;蛘?,結(jié)晶度可以通過重結(jié)晶來調(diào)整。重結(jié)晶技術(shù)在本領(lǐng)域內(nèi)是己知的。典型的重結(jié)晶技術(shù)在下面論述。重結(jié)晶過程中,兩性霉素B優(yōu)選避光保護。兩性霉素B可以溶解在溶劑中。溶劑的例子包括溶劑系統(tǒng),如包括甲醇,二甲基甲酰胺,和檸檬酸單水合物的一種溶劑。一旦固體基本上溶解,任選地過濾溶液。過濾后,添加溶劑如二氯甲烷到濾液中。然后在攪拌條件下加入冷水。通過調(diào)整溶液的pH,可以得到兩性霉素B的沉淀,如pH調(diào)至~7,通過加堿,如三乙醇胺。雖然不希望受理論的束縛,但沉淀速率影響結(jié)晶度。較慢的沉淀通常產(chǎn)生較高的結(jié)晶度。因此,為了得到較多的無定形兩性霉素B,可以快速加入堿,例如在攪拌條件下一次性傾入。然后分離相應(yīng)得到的無定形兩性霉素B。例如,漿料離心后傾析出上層清液,可以得到無定形兩性霉素B。所得產(chǎn)物可以洗滌,通過將濾餅重新懸浮在如冷甲醇中,接著離心和傾析。洗滌過程可以重復(fù)或可以包括附加洗滌步驟,如,使用室溫的丙酮。為了獲得較多的結(jié)晶兩性霉素B,可以緩慢加入堿,如,在攪拌條件下一滴一滴加入。然后加熱產(chǎn)生的漿料,如,在44-46。C加熱90分鐘接著冷卻,如,先在室溫冷卻30分鐘接著在2-8'C冷卻60分鐘。然后準(zhǔn)備分離結(jié)晶形式。例如,可以用真空過濾得到兩性霉素B的結(jié)晶。所得產(chǎn)物可以洗滌,如,先用40%的冷甲醇接著用室溫的丙酮。一旦兩性霉素B分離和洗滌后,可以進行干燥。例如,兩性霉素B可以真空干燥,如,產(chǎn)物在避光保護條件下在室溫真空干燥l-3天。為了促進殘留溶劑的蒸發(fā),在干燥過程中,可以任選地粉碎較大的塊狀,如通過使用抹刀。如上所述的,通常想要較小的兩性霉素B粒子的尺寸。許多情況下,塊狀形式的兩性霉素B具有大于約3.0/mi的質(zhì)量中位直徑,并且在許多情況下,大于約10/mi。相應(yīng)地,本發(fā)明一個或多個實施方案中,為了使質(zhì)量中位直徑減低到小于約3/mi,塊狀兩性霉素B在使用之前要接受尺寸減小加工。本領(lǐng)域內(nèi)合適的尺寸減小加工是已知的并且包括超臨界流體加工方法,該方法在國際專利WO95/01221,WO96/00610,和WO98/36825中論述,其內(nèi)容全文并入作為參考,低溫冷凍粉碎,濕法粉碎,超聲,高壓均化,微流體化,結(jié)晶法,和在美國專利5,858,410中論述的方法,其內(nèi)容全文并入作為參考。本發(fā)明一個或多個實施方案中,制備藥物組合物的方法包括提供作為起始物質(zhì)的兩性霉素B的粒子,其中至少約50%的兩性霉素B為結(jié)晶形。在其他方案中,至少約60%,至少約70%,至少約80%,至少約90%,至少約95%,或至少約99。/。的兩性霉素B為結(jié)晶形。起始物質(zhì)的兩性霉素B粒子可以混懸在液態(tài)的任選地包括一種或多種藥學(xué)可接受的賦性劑的原料中。然后干燥混懸的原料,如利用噴霧干燥,以制備包含結(jié)晶兩性霉素b和一種或多種藥學(xué)可接受的賦性劑的顆粒狀物。在一個方案中,在制備的包含兩性霉素b的顆粒狀物中,制備的顆粒狀物中的至少約70%的兩性霉素b為結(jié)晶形。在另一方案中,制備的顆粒狀物中的至少約80%,至少約85%,至少約90%,至少約95%,或至少約99。/。的兩性霉素b為結(jié)晶形。在一個方案中,測定兩性霉素b粒子的起始物質(zhì)的結(jié)晶度。例如,在加入到原料中之前,測定物質(zhì)的x-射線粉末衍射圖。從這些數(shù)據(jù),可以確定結(jié)晶度?;蛘?,紅外光譜,拉曼光譜,動力學(xué)蒸汽附著,溶液量熱法熱,或等溫微觀量熱法可以用于測定結(jié)晶度,這些會被本領(lǐng)域技術(shù)人員承認(rèn)。如果結(jié)晶度高于預(yù)定量,如高于一定百分比,那末起始物質(zhì)被應(yīng)用。如果結(jié)晶度低于預(yù)定量,起始物質(zhì)可能,如,廢棄或重結(jié)晶。在其他方案中,測定兩性霉素b粒子的無定形度。因此,一個方案中,制備藥物組合物的方法包括提供作為起始物質(zhì)的兩性霉素b的粒子,其中小于約50%的兩性霉素b為無定形。在其他方案中,小于約40%,小于約30%,小于約20%,小于約10%,小于約5%,或小于約1%的兩性霉素b為無定形。起始物質(zhì)的兩性霉素b粒子可以混懸在液態(tài)的任選地包括一種或多種藥學(xué)可接受的賦性劑的原料中。然后干燥混懸的原料,如利用噴霧干燥,以制備包含結(jié)晶兩性霉素b和一種或多種藥學(xué)可接受的賦性劑的顆粒狀物。在一個方案中,在制備的包含兩性霉素b的顆粒狀物中,制備的顆粒狀物中的至少約70%的兩性霉素b為結(jié)晶形。在另一方案中,制備的顆粒狀物中的至少約80%,至少約85%,至少約卯%,至少約95%,或至少約99%的兩性霉素b為結(jié)晶形??梢杂靡阎募夹g(shù)測定無定形度。例如,無定形度的測定可以利用紅外光譜,拉曼光譜,動力學(xué)蒸汽附著,差示掃描量熱法,等等。如果無定形度低于預(yù)定量之,如低于一定百分比,那末起始物質(zhì)被應(yīng)用。如果無定形度高于預(yù)定量,則起始物質(zhì)可能廢棄或重結(jié)晶。在又一個方案中,重結(jié)晶工藝可作為制備工藝的以部分被進行,代替或包括了結(jié)晶度的測定。重結(jié)晶工藝通過將兩性霉素B溶解在合適的溶劑,如乙醇或其他極性溶劑中完成,并且緩慢干燥該溶液以便生成結(jié)晶兩性霉素B或者使結(jié)晶兩性霉素B從溶液中沉淀出來。在一個方案中,超臨界流體被同時用于分散和提取結(jié)晶物質(zhì),如在國際專利WO95/01221,WO96/00610和WO99/36825中所述的,其內(nèi)容全文并入作為參考。在另一個方案中,多區(qū)域噴霧干燥工藝可以用于制備結(jié)晶兩性霉素B,如在國際WO01/00312中所述的,其內(nèi)容全文并入作為參考。另一方案包括測定制備的粒子或顆粒狀物的結(jié)晶度,所述的粒子或顆粒狀物包括結(jié)晶兩性霉素B和任選的藥學(xué)可接受的賦性劑和/或其他活性組分。如果制備的粒子或顆粒狀物的結(jié)晶度高于預(yù)定百分比,如大于約70%,大于約80%,大于約90%,大于約95%,或大于約99%,那末制備的粒子或顆粒狀物可以釋放用于對病人給藥。如果結(jié)晶度低于預(yù)定量,那末制備的粒子或顆粒狀物被廢棄或重新制備??梢岳枚喾N己知的技術(shù)制備藥物組合物。例如,組合物可以用噴霧干燥,冷凍干燥,粉碎(如,濕法粉碎,干法粉碎),等等的方法制備。在噴霧干燥中,要進行噴霧千燥的制劑或原料能夠為任一溶液,粗的混懸液,漿料,膠態(tài)分散液,或漿糊,其可以利用所選的噴霧干燥儀器霧化。在難溶解的情況時,原料可以包括上述的混懸液。或者,在原料中也可以用到稀釋的溶液和/或一種或多種溶劑。在一個或多個實施方案中,原料包括膠態(tài)系統(tǒng)如乳液,反相乳液,微乳液,多相乳液,顆粒狀物分散液,或漿料。一個方案中,兩性霉素B和基質(zhì)材料被添加到含水的原料中制備原料溶液,混懸液,或乳液。然后噴霧干燥所述的原料制備包含基質(zhì)物質(zhì)和結(jié)晶兩性霉素B的顆粒狀物。本領(lǐng)域已知的合適的噴霧干燥工藝如國際專利WO99/16419和美國專利6,077,543;6,051,256;6,001,336;5,985,248;禾Q5,976,547中論述的,其內(nèi)容全文并入作為參考。無論選擇何種組分,顆粒狀物制備的第一步典型地包括原料的制備。如果以磷脂為基質(zhì)的顆粒狀物打算用作兩性霉素B的載體,那末選擇的活性劑可以加入到一種液體如水中以制備濃混懸液。兩性霉素B的濃度和任一活性劑的濃度典型地取決于最終粉末中需要活性劑的量和應(yīng)用的遞送裝置(如,用于細粒劑量的計量劑量吸入器(MDI)或干粉末吸入器(DPI))的效率。任一附加的活性劑可以混合在單一的原料制劑中并且噴霧干燥以提供單一的包括多種活性劑的藥物組合物。相反地,單獨的活性劑可以被加入到單獨的原料中,并且分別噴霧干燥以提供具有不同組合物的多個藥物組合物。這些單獨物質(zhì)可以以任何所需比例被加入到混懸的媒介或干粉末分散室中并且置于上述的氣霧劑遞送系統(tǒng)中。多價陽離子可以和混有磷脂乳液的兩性霉素B混懸液混合,或在單獨的容器中制備的水包油乳液混合。兩性霉素B也可以在乳液中直接分散。例如,多價陽離子和磷脂可以在熱的蒸餾水(如,70°C)中均化,利用合適的高剪切機械攪拌器(如Uitra-TurraxmodelT-25攪拌器)在8000rpm混合2到5分鐘。典型地,5至25g的碳氟化合物在混合過程中一滴一滴地加入到分散的表面活性劑的溶液中。然后利用高壓攪拌器處理在水乳液中產(chǎn)生的包含多價陽離子的全氟化碳以降低顆粒狀物的尺寸。典型地,在12,000到18,000PSI條件下,乳液被分別處理五次,并且保持溫度在約5(TC到約80°C。當(dāng)多價陽離子和水包油型乳液混合時,利用發(fā)泡劑可以提高噴霧干燥的藥物組合物的分散穩(wěn)定性和分散度,所述的發(fā)泡劑在國際專利WO99/16419中論述,其內(nèi)容全文并入作為參考。這個過程制備乳液,所述的乳液任意地被引入的表面活性劑穩(wěn)定,所述的表面活性劑典型地包括分散在連續(xù)水相中的不與水混溶的發(fā)泡劑亞微小滴。發(fā)泡劑可以為氟化化合物(如,全氟己烷,全氟辛基溴,全氟辛基乙烷,全氟萘烷,全氟丁基乙烷),在噴霧干燥過程中發(fā)泡劑蒸發(fā),通常留下中空的,多孔的空氣動力學(xué)的輕質(zhì)顆粒狀物。其它合適的液體發(fā)泡劑包括非氟化的油,氯仿,F(xiàn)reoi^碳氟化合物,乙酸乙酯,醇,烴,氮氣,和二氧化碳氣體。發(fā)泡劑可以用磷脂乳化。雖然利用上述的發(fā)泡劑可以制備藥物組合物,可以知道,在某種情況下,不需要添加發(fā)泡劑并且兩性霉素B和/或藥學(xué)可接受的賦形劑及表面活性劑的水相分散體可以直接噴霧干燥。在這樣的情況下,藥物組合物可具有一定的物理化學(xué)性質(zhì)(如,高結(jié)晶度,高熔點,表面活性,等),這使得藥物組合物適合于這種技術(shù)的應(yīng)用。如需要的,輔助表面活性劑如泊洛沙姆188或司盤80可以分散到這種附加的溶液里面。而且,也可以添加藥學(xué)可接受的賦形劑如糖和淀粉。然后將原料送入噴霧千燥器里。典型地,原料被噴射到過濾的熱空氣氣流里面,使溶劑蒸發(fā)并且將干燥的產(chǎn)品遞送到收集器。用過的空氣和溶劑一起排出??梢愿牧际惺鄣挠葿iichiLtd.或NiroCorp.制造的噴霧干燥儀器用于制備藥物組合物。適于制備本發(fā)明一個或多個實施方案的干粉末的噴霧干燥方法和系統(tǒng)的例子,在美國專利6,077,543;6,051,256;6,001,336;5,985,248;和5,976,574中公開,其內(nèi)容全文并入作為參考。為了制備要求的顆粒狀物尺寸,和制得的干燥顆粒狀物的產(chǎn)率,可以調(diào)整噴霧干燥儀器的操作條件如進口和出口溫度,進料速率,氣霧化壓力,干空氣的流速,噴嘴的構(gòu)造。此處論述的合適的儀器和生產(chǎn)條件的選擇在熟練技術(shù)人員的范圍之內(nèi)并且可在恰當(dāng)?shù)膶嶒灄l件下完成。典型的設(shè)置如下空氣進口溫度在約6(TC至約17(TC之間;空氣出口溫度在約4(TC至約12(TC之間;進料速率在約3mL/min至15mL/min之間;抽出空氣的速率為約300L/min;并且霧化空氣速率在約25L/min至約50L/min之間。當(dāng)然,這些設(shè)定會隨著所用設(shè)備的類型而變化。任一事件中,這些方法及其相似方法的應(yīng)用允許空氣動力學(xué)的輕粒子的制備,所述的粒子具有合適的直徑使氣霧劑沉淀到肺中。中空的和/或多孔的微結(jié)構(gòu)可以通過噴霧干燥制備,如在國際專利WO99/16419中揭示,其內(nèi)容全文并入作為參考。噴霧干燥過程能夠形成包含顆粒狀物的藥物組合物,所述的顆粒狀物具有相對薄的多孔壁,且該壁限定大的內(nèi)部空洞。在生產(chǎn)或解聚過程中噴霧干燥制備的顆粒狀物不易于破裂,這是噴霧干燥方法優(yōu)于其它過程的方面。本發(fā)明一個或多個實施方案中應(yīng)用的藥物組合物可替換地通過凍干制備。凍干是冷凍干燥過程,在此過程中水分在冷凍后從組合物中蒸發(fā)。因為在水溶液中相對不穩(wěn)定的生物制品和藥品,不可以暴露在高溫度下進行干燥,因此通常釆用凍干工藝干燥,然后在干燥的狀態(tài)儲存,此狀態(tài)下穩(wěn)定性幾乎沒有問題。根據(jù)本發(fā)明一個或多個實施方案,這樣的技術(shù)尤其適用于藥物組合物中并入肽,蛋白質(zhì),遺傳物質(zhì),和其他天然的或合成的大分子而不損害生理活性。包括細小的泡沫狀結(jié)構(gòu)的凍干餅可以用本領(lǐng)域已知的微粉化以便提供所需尺寸的顆粒狀物。本發(fā)明一個或多個實施方案的組合物可以通過已知的技術(shù)給藥,如吸入,口服,肌肉內(nèi)給藥,靜脈內(nèi)給藥,氣管內(nèi)給藥,腹膜內(nèi)給藥,皮下給藥,及透皮給藥。例如,本發(fā)明一個或多個實施方案的藥物組合物在肺和/或鼻部真菌感染的治療上是有效的,包括輔助治療。兩性霉素B作為抗菌劑治療肺和/或鼻部真菌感染和/或防止肺和/或鼻部真菌感染的發(fā)生。兩性霉素B被認(rèn)為可以減緩敏感真菌的生長和倍增。如果兩性霉素B的濃度足夠高,也可以破壞真菌。兩性霉素B看起來好像作用于真菌的細胞膜,改變細胞膜的完整性。一個方案中,當(dāng)吸入組合物時,其彌漫進入鼻腔和/或肺的氣道中以獲得有效的兩性霉素B濃度,如在感染的分泌物和肺組織中,包括上皮內(nèi)襯液,肺泡巨噬細胞,和嗜中性粒細胞。此外,吸入給藥的組合物的劑量典型地比通過其它路徑給藥的劑量要小得多并且達到相似的抗真菌效果要求的劑量要小得多,這歸因于吸入的組合物直接到達真菌感染部位的有效靶向。本發(fā)明一個或多個實施方案中,包含兩性霉素B的藥物組合物,其中主要量的兩性霉素為結(jié)晶形,對需要它的患者經(jīng)肺給藥。例如,患者可能已經(jīng)被診斷為肺和/或鼻部真菌感染或患者被確定對肺和/或鼻部真菌感染敏感。肺和/或鼻部真菌感染的例子包括曲霉病,芽生菌病,播散性念珠菌病,球孢子菌病,隱球菌病,組織胞槳菌病,毛霉菌病,孢子絲菌病,一些由假絲酵母(Candidaspp.)引起的感染,和其它本領(lǐng)域已知的感染。因此,本發(fā)明一個或多個實施方案的藥物組合物可以用于廣泛的患者的治療和/或提供預(yù)防。在此所述的適宜于接受治療和/預(yù)防的患者可以為任一需要它的哺乳類患者,優(yōu)選的哺乳動物為人類。患者的例子包括,但不限于,兒童患者,成人患者,和老人患者。所述的患者通常有獲得真菌感染的風(fēng)險。在一個方案中,本發(fā)明一個或多個實施方案的藥物組合物用于肺和/或鼻部真菌感染的預(yù)防,如對于免疫損害的患者,例如,遭受癌癥的化療或放療的患者,器官移植接受者,遭受對免疫系統(tǒng)不良影響的疾患的患者如HIV,或其它使患者易經(jīng)受肺和/或鼻部真菌感染的疾患。藥物組合物也用于主動的肺和/或鼻部真菌感染的治療,如曲霉病(通常主要歸因于煙曲霉G45^ergz7/iwFwm^3f"50,黃色曲霉04werg"/z^yflvw51),黑色曲霉(J5^erg7'〃W51,構(gòu)巢曲霉(A/erg77/"swzWw/fl—,和土曲霉04^erg〃/w,ere"力),球孢子菌病,組織胞漿菌病,芽生菌病,和其它真菌病原。在一個方案中,包括兩性霉素B的氣霧化的藥物組合物以一種方式給藥于患者的肺和/或鼻腔,產(chǎn)生比霉菌的最小抑制濃度(MIC)大的兩性霉素B濃度。所述的MIC定義為抑制霉菌生長的最低的兩性霉素B的濃度。所述的MIC可以用精確的濃度值或濃度范圍表示。按照本發(fā)明一個或多個實施方案的給藥方式,給藥足夠量的藥物組合物以獲得兩性霉素B的靶向肺濃度,所述的濃度應(yīng)落在MIC值的范圍內(nèi)或高于特定的MIC值。另一方案中,兩性霉素B的靶向肺濃度超出了MIC值的范圍。另一方案中,兩性霉素B的靶向肺濃度超出了MIC值范圍的最小值。另一方案中,兩性霉素B的靶向肺濃度超出了MIC值的范圍并且至少為MIC值范圍的最大值的約2倍,如至少約3倍,至少約4倍,或至少約5倍。兩性霉素B的靶向肺濃度可以是靶向肺濃度范圍。在一個方案中,兩性霉素B的靶向肺濃度圍繞一個值上下波動,該值約2倍至約20倍于MIC值范圍的中間值,如約3倍至約10倍于MIC值范圍的中間值,或約5倍于MIC值范圍的中間值。在一個方案中,兩性霉素B的濃度和MIC的測定基于上皮內(nèi)襯液中的濃度。在另一個方案中,兩性霉素B的濃度和MIC的測定基于肺實體組織中的濃度。如在此用到的,除非另作說明,當(dāng)特定的MIC值被測定時,MIC值應(yīng)被看作特定的值,并且當(dāng)MIC值的范圍被測定時,MIC值應(yīng)被看作一個中間值??梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的方法測定MIC。在一個方案中,為了使靶濃度維持一段期望的時間段,給藥包含兩性霉素B的藥物組合物。例如,已經(jīng)確定,維持兩性霉素B靶濃度為至少約2倍,如至少約3倍于測定的MIC值的給藥途徑在治療和/或提供預(yù)防肺和/或鼻部真菌感染方面有效。進一步確定,通過使兩性霉素B的濃度維持在肺靶濃度至少約1周的時間,如至少約2周,或至少約3周,某些患者的肺和/或鼻部真菌感染能夠有效地治療。此外或或者,在免疫損害的患者體內(nèi),通過使兩性霉素B的濃度維持在肺耙濃度一段上述的時間,患者發(fā)生肺和/或鼻部真菌感染的可能性會減低。很多種情況下,治療的時間和/或預(yù)防的時間可能延長至多于約1個月,多于約2個月,多于約3個月(如,17周),多于約4個月,或更長。在一個方案中,給藥結(jié)晶兩性霉素B的方法有利于包含兩性霉素B的藥物組合物的肺保留特性。從這個方面,本發(fā)明一個或多個實施方案涉及以下發(fā)現(xiàn),即藥物組合物的兩性霉素B具有兩性霉素B肺保留半衰期為(1)至少約10小時,如至少約15小時或至少約20小時,在肺上皮液中,通過支氣管氣泡灌洗測定,和/或(2)至少約1周,如至少約2周,在肺組織中,通過肺組織勻漿測定。由于兩性霉素B具有長的肺保留半衰期并且在本發(fā)明一個或多個實施方案中由于低劑量可以應(yīng)用,系統(tǒng)暴露(兩性霉素B的血液/血槳濃度)保持足夠低以避免腎和/或肝毒性的狀態(tài)。例如,5mg劑量的兩性霉素B被吸入后,兩性霉素B的血液水平保持低于約1000ng/mL,如低于約750ng/mL,低于約500ng/mL,低于約250ng/mL,低于約100ng/mL,低于約80ng/mL,低于約60ng/mL,或低于約40ng/mL。關(guān)于長的保留半衰期,一旦達到兩性霉素B的肺組織靶濃度,需要有限的劑量維持兩性霉素B的肺組織濃度。例如,為了維持靶點處兩性霉素B的濃度,可每周給藥一次藥物組合物。為了維持兩性霉素B的濃度在靶濃度之內(nèi),必需的給藥劑量和頻率取決于組合物和組合物中兩性霉素B的濃度。在每一個給藥方法內(nèi),為了使肺的兩性霉素B的濃度維持在某一靶范菌內(nèi),測定劑量和頻率。在一個方案中,可以每周給藥兩性霉素B。在這個方案中,每周兩性霉素B從約2mg到約75mg,如約2mg到約50mg,約4mg到約25mg,約5mg到約20mg,和約7mg到約10mg??梢栽趩未挝胫谢蛟诙啻挝胫薪o藥。通過增加藥物組合物的給藥頻率可以減小肺兩性霉素B濃度的波動,或者通過減少藥物組合物的給藥頻率可以增加肺兩性霉素B濃度的波動。因此,本發(fā)明一個或多個實施方案的藥物組合物可以給藥從約每天三次到約每月一次,如約每天一次到約每兩周一次,約每兩天一次到約每周一次,和約每周一次。在一個方案中,對易發(fā)生免疫損害的患者預(yù)防性地給藥藥物組合物。例如,將要遭受藥物免疫抑制治療的患者,如希望骨髓移植的患者,可以用包含結(jié)晶兩性霉素B的藥物組合物進行預(yù)防性治療,以便降低在免疫損害危險期中肺和/或鼻部真菌感染發(fā)生的可能性。這個方案中,在患者發(fā)生免疫損害之前,兩性霉素B給藥產(chǎn)生充分的時間段,允許肺兩性霉素B濃度在免疫損害開始時或之前達到靶濃度。當(dāng)藥量每周給藥一次時,預(yù)防時間段可能從約l周到約20周,取決于組合物和劑量。然而,在本發(fā)明一個或多個實施方案中,達到有效預(yù)防的兩性霉素B濃度的時間可以縮短,通過在預(yù)防時間段的開始提供高劑量的兩性霉素B和/或通過在預(yù)防時間段的開始更頻繁地給藥劑量(如,負荷劑量)。這個方案中,在治療的第一個星期給藥附加劑量。例如,在第1,2,3和4天給藥劑量(或者在第一天給藥4個劑量)并且然后在此后每第七天給藥。這一早期的負荷允許更迅速達到兩性霉素B的肺靶濃度。相應(yīng)地,獲得有效預(yù)防的時間可以減少并且患者可以更迅速的開始他或她的免疫損害時間段。在某些例子中,患者在1-4天之后開始免疫損害,伴隨肺和/或鼻部真菌感染發(fā)生的可能性的顯著降低。此外或或者,在免疫抑制之前的時間段中給藥的劑量可以高于維持兩性霉素B肺靶濃度的劑量(如,負荷劑量)。例如,一個方案中,初始的劑量至少是一旦達到兩性霉素B肺靶濃度時給的穩(wěn)定狀態(tài)劑量的約兩倍。因此,在一個方案中,先給藥負荷劑量的兩性霉素B隨后給藥維持劑量的兩性霉素B。兩性霉素B的負荷劑量可以在一個范圍內(nèi)變化,例如,從約5mg到約75mg,如從約10mg到約50mg,從約15mg到約40mg,或從約20mg到約30mg,如約25mg。在一個規(guī)律的基數(shù)上給藥維持劑量,例如,每周,在負荷劑量之后。維持劑量典型從約2mg到約20mg,如從約3mg到約15mg或從約4mg到約10mg,如約5mg。當(dāng)治療已經(jīng)被診斷患有肺和/或鼻部真菌感染的患者時,也希望提供早期負荷。通過早期負荷,與沒有給藥早期負荷相比更加迅速達到兩性霉素B的肺靶濃度。因此,肺和/或鼻部真菌感染的治療可以更加快速地開始或被提供。在一個特殊的治療方法中,提供肺和/或鼻部真菌感染的預(yù)防給遭受免疫抑制治療的患者。根據(jù)這個方案,在開始階段每周患者至少約兩次吸入期間,對患者給藥至少約5mg,如從約5mg到約10mg,的氣霧化的兩性霉素B。在開始階段,氣霧化的兩性霉素B每周至少給藥約三次。在一個方案中,開始階段可以持續(xù)約一周到約三周。緊接著開始階段之后,不大頻繁地對患者給藥相同的劑量。例如氣霧化的兩性霉素B可以每兩周給藥一次,和更優(yōu)選地每周給藥一次。緊接著開始階段之后或接近開始階段的末期時,可以開始免疫損害的治療。繼續(xù)第二個階段的給藥,這樣兩性霉素B的肺靶濃度可以持續(xù)整個免疫損害的危險期間并且如果需要或者如果肺和/或鼻部真菌感染發(fā)生可以持續(xù)更長。此外或或者,開始階段的給藥劑量比第二個階段的給藥劑量大。例如,在開始階段,可以給藥約10mg到約20mg的兩性霉素B并且在第二個階段給藥較小的量,如從約5mg到約10mg。任選地,可以提供第三個劑量階段,在此階段不大頻繁地給藥劑量和/或在比第二個階段時更小的量。第三個劑量階段可以在接近免疫損害階段的末期開始,如當(dāng)免疫抑制治療結(jié)束或嚴(yán)重性降低時開始。在一個方案中,兩性霉素B的濃度維持一個時間段,該濃度高于測定的最小抑制濃度。如在2003年12月31日提出的美國專利申請10/751,342中論述,其內(nèi)容全文并入作為參考。兩性霉素B的肺靶濃度可以為上皮內(nèi)襯液中的兩性霉素B濃度,也可以為肺實體組織中的兩性霉素B濃度,并且優(yōu)選后者。在一些方案中,兩性霉素B的肺靶濃度為至少約4pg/g,如至少約9Mg/g,并且可以從約4.5/ig/g到約20pg/g,如約9jiig/g到約15pg/g。對于預(yù)防,兩性霉素B的每劑量的量可以為有效防止肺和/或鼻部真菌感染的量并且一般從約0.01mg/kg到約5.0mg/kg,如約0.4mg/kg到約4.0mg/kg,或約0.7mg/kg到約3.0mg/kg。在任一有效防止肺被真菌感染的方法中,對患者給藥藥物組合物。例證的預(yù)防方法包括給藥本文描述的抗霉菌的干粉末,經(jīng)過1至6周的時間過程每周給藥1至21次,緊接著,如果需要,之后每周給藥一次或兩次。本發(fā)明一個實施例中給藥氣霧化的主要為結(jié)晶的兩性霉素B的例子在圖1中描述,它顯示了預(yù)防用負荷。在這個方法中,已經(jīng)測定兩性霉素B的MIC值從約0.5pg/g到約4Mg/g,如區(qū)塊300所示。中間MIC值300'為約2.25Mg/g。曲線301表示依據(jù)特定給藥方法預(yù)測的兩性霉素B的肺耙濃度。就如看到的,兩性霉素B的濃度達到兩性霉素B的肺靶濃度范圍302,該范圍在MIC范圍300之上,并且至少是中間MIC值300'的兩倍。在這個方案中,兩性霉素B的肺靶濃度范圍302從4pg/g到50/xg/g,更優(yōu)選地從4.5pg/g到20pg/g。在具體方法中顯示,兩性霉素B的肺靶濃度范圍302從9/xg/g到15Mg/g,并且圍繞一個濃度值波動,該值為MIC范圍300的中點值300'的約5倍。依據(jù)本發(fā)明一個或多個實施方案,在兩性霉素B的肺靶濃度范圍內(nèi)兩性霉素B肺濃度的維持有利于有效治療和/或預(yù)防肺和/或鼻部真菌感染并且比傳統(tǒng)治療安全。圖2顯示在依據(jù)本發(fā)明一個或多個實施方案給藥兩性霉素B期間產(chǎn)生的預(yù)測的兩性霉素B血漿濃度400。如所看到的,兩性霉素B濃度顯著低于血漿兩性霉素B最小毒性濃度401,因此增加了給藥的安全性。為了治療患有肺和/或鼻部真菌感染的患者,給藥的兩性霉素B每單位劑量的量可以是有效治療感染的量。治療感染的兩性霉素B的量通常比用于預(yù)防目的的量要高,并且可以典型地從約0.01mg/kg到約7.0mg/kg,如約0.2mg/kg到約6.0mg/kg,或約0.8mg/kg到約5.0mg/kg。在典型的治療方法中,依據(jù)本發(fā)明一個或多個實施方案的抗霉菌粉末可以每天給藥約1到約8次,優(yōu)選約2次到約6次,經(jīng)過從約7到約28天的過程。在治療呼吸道霉菌的疾患中,藥物組合物被典型地給藥,劑量為真菌病原引起的MIC的約3到約10倍或更多倍。通常給患者的兩性霉素B的劑量從每天約2mg到約400mg,如從每天10mg到約200mg,取決于被治療的疾患,患者的年齡和體重,等等。雖然不希望受理論的束縛,通過提供依據(jù)本發(fā)明一個或多個實施方案的兩性霉素B,兩性霉素B的局部毒性能夠被降低,通過減小兩性霉素B的溶解速率和/或通過增加穿過肺的沉淀并且避免上部肺的局部毒性。因此,結(jié)晶兩性霉素B的給藥被認(rèn)為比大部分為無定形形式的兩性霉素B的給藥更安全。進一步,由較小的兩性霉素B的粒子制備的較小的吸入的顆粒狀物的給藥易于增加安全性。當(dāng)大劑量給藥時,安全性成為比較重要的問題。因此,對于較高的劑量,建議使用較高結(jié)晶度的兩性霉素B,較小的兩性霉素B粒子尺寸,和較小的吸入粒子或顆粒狀物尺寸。例如,對于大于50mg的劑量,熟練技術(shù)人員會想要使用一種組合物,該組合物中兩性霉素B的結(jié)晶度至少為約90%,兩性霉素B的質(zhì)量中位直徑小于約2.8/mi,并且吸入粒子或顆粒狀物具有小于約2.8/mi的MMAD。當(dāng)包含兩性霉素B的粒子或顆粒狀物對肺給藥,已經(jīng)確定期望控制固體粒子或顆粒狀物在肺中的溶解速率。當(dāng)溶解速率不希望地高時,可溶性的,超分子聚集物在肺內(nèi)局部部位形成。這些可溶性的聚集物在一些情況下對肺組織有毒性。然而,當(dāng)溶解速率足夠低時,可溶性的毒性聚集物生成的可能性也比較低。雖然不希望受理論的束縛,與在無定形形式的兩性霉素B相比,提供包含結(jié)晶兩性霉素B的固體粒子或顆粒狀物被認(rèn)為降低溶解速率。進一步,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)結(jié)晶形式的兩性霉素B的肺濃度可以維持在一個濃度,該濃度足夠高以提供肺和/或鼻部真菌感染的治療效果并且顯著降低或防止毒性可溶性聚集物的生成。因此,在一個方案中,藥物組合物以干粉末形式遞送到患者的肺部。相應(yīng)地,包含干粉末的藥物組合物可以有效地遞送到肺深處或另一個靶部位。干粉末形式的藥物組合物包括具有一種尺寸的粒子或顆粒狀物,選擇該尺寸以允許穿透到肺氣泡內(nèi)。在某些情況下,期望單次吸入遞送單位劑量,如5mg劑量,或10mg或更多的兩性霉素B到肺部。上面所述的磷脂中空和/或多孔的干燥粉末粒子允許約5mg的劑量或更多,經(jīng)常多于約10mg,并且有時多于約25mg,在單次吸入中并且以一種有利的方法被遞送?;蛘撸粋€劑量可以經(jīng)過兩次或多次吸入被遞送。例如,10mg的劑量可以通過裝載兩個單位劑量,每個為5mg被遞送,并且兩個單位劑量被分別吸入。分散劑或粉末狀藥物組合物可以利用氣霧化裝置給藥。氣霧化裝置可為噴霧器,劑量計量吸入器,液體劑量滴注裝置,或干粉末吸入器。粉末藥物組合物可以被遞送,通過國際專利WO99/16420中描述的噴霧器,通過國際專利WO99/16422中描述的劑量計量吸入器,通過國際專利WO99/16421中描述的液體劑量滴注裝置,和通過干粉末吸入器,所述的干粉末吸入器在2001年6月22日提出的美國專利申請09/888,311,在國際專利WO99/16419,在國際專利WO02/83220,在美國專利6,546,929及在2003年7月8日提出的美國專利申請10/616,448中被描述,其內(nèi)容全文并入作為參考。因此,吸入器包括裝粒子或顆粒狀物和推進劑的容器,并且其中吸入器包括與容器內(nèi)部連通的計量閥。推進劑可以為氫氟垸烴。本發(fā)明一個或多個實施方案的藥物組合物典型地提高了發(fā)射劑量效率。相應(yīng)地,藥物組合物的高劑量可以利用多種氣霧化裝置和技術(shù)被遞送。這些粉末的發(fā)射劑量(ED)可以大于約.30%,如大于約40%,大于約50%,大于約60%,或大于約70%。干粉末氣霧化儀器的例子在圖3A中示意地表示,該干粉末氣霧化儀器在氣霧化本發(fā)明一個或多個實施方案的藥物組合物100時特別有用。氣霧化儀器200包括限定室210的殼205,該室有一個或多個空氣入口215和一個或多個空氣出口220。室210是依一定的尺寸制造以便能夠接收裝有氣霧化的包含兩性霉素B的藥物組合物的囊225。穿孔機械230包括在室210內(nèi)部可運動的穿孔構(gòu)件235。接近或鄰近出口220是末端部分240,該末端部分依一定的尺寸和形狀制造以便被使用者的嘴或鼻容納,這樣使用者可以通過在末端部分240的開口245吸入,該開口245和出口220相通。干粉末氣霧化儀器200利用通過室210的空氣氣流來氣霧化囊225中的藥物組合物。例如,圖3A-3E說明了一個方案的氣霧化儀器200的操作流程,通過進口215的空氣氣流用于氣霧化藥物組合物并且氣霧化的藥物組合物流經(jīng)出口220,因此氣霧化的藥物組合物可以通過在末端部分240的開口245被遞送到使用者。圖3A表明干粉末氣霧化儀器200在它的開始狀態(tài)。囊225被放置在室210內(nèi)并且藥物組合物被裝在囊225中。為了使用氣霧化儀器200,囊225中的藥物組合物被暴露以允許被氣霧化。在圖3A-3E方案中,穿孔機械230在室210內(nèi)被推進,通過對穿孔機械230施加力250。舉例子,為了使穿孔機械230滑入殼205內(nèi),使用者按壓穿孔機械230的表面255,這樣穿孔構(gòu)件235在室210內(nèi)接觸囊225,如圖3B所示。通過不斷施加力250,穿孔構(gòu)件235被推進并且通過囊225的壁,如圖3C所示。穿孔構(gòu)件可以包括一個或多個尖端252以便有利于推進通過囊225的壁。然后穿孔機械230退回到圖3D所示的位置,留下通過囊225壁的開口260以便暴露在囊225中的藥物組合物。然后空氣或其他氣體通過進口215流入,如圖3E用箭頭265所示??諝饬魇顾幬锝M合物氣霧化。當(dāng)使用者通過末端部分240吸入270時氣霧化的藥物組合物被遞送到使用者的呼吸道。在一個方案中,空氣氣流265通過使用者的吸入270被產(chǎn)生。在另一個方案中,壓縮的空氣或其他氣體被抽到入口215中以便產(chǎn)生氣霧化空氣流265。在美國專利4,069,819和4,995,385中描述了干粉末氣霧化儀器200的特殊方案,其內(nèi)容全文并入作為參考。在這樣的裝置中,室210包括通常位于吸入方向的縱軸,并且囊225可縱向插入室210內(nèi),這樣囊的縱軸可以與室210的縱軸平行。室210是依一定的尺寸制造以便能夠以某種方式容納裝有藥物組合物的囊225,該方式允許囊在室210內(nèi)移動。進口215包括多個切線定位的縫。當(dāng)使用者通過末端片吸入時,外部的空氣被促使流過切線定位的縫。空氣流在室210內(nèi)產(chǎn)生漩渦空氣流。漩渦空氣流使囊225接觸壁并且然后以某種方式在室210內(nèi)移動,這導(dǎo)致藥物組合物推出囊225并且輸入到漩渦空氣流中。這個方案在連續(xù)氣霧化藥物組合物的高劑量方面特別有效。一個方案中,囊225在室210內(nèi)以某種方式旋轉(zhuǎn),此處囊的縱軸與室的縱軸保持在小于80度的角度,并且優(yōu)選小于45度。囊225在室210內(nèi)的運動可能由于室210的寬度小于囊225的長度引起的。在一個特定的方案中,室210包括在邊緣終止的錐形部件。漩渦空氣流在室210內(nèi)時,囊225的前端接觸并且停在壁上而且囊225的側(cè)壁接觸邊緣并且沿著邊緣滑動和/或旋轉(zhuǎn)。囊的這種運動有效地強迫大量的藥物組合物通過囊225后部的一個或多個開口260。在另一個被動干粉末吸入器方案中,干粉末氣霧化儀器200的構(gòu)造不同于圖3A-3E中顯示的。例如,接收囊225的室210是依一定的尺寸和形狀制造,這樣囊225垂直于吸入的方向,如在美國專利3,991,761中所論述的,其全文內(nèi)容并入作為參考。如在美國專利3,991,761中也論述了穿孔機械230可以穿孔囊225的兩端。在另一個方案中,室以某種方式接收囊225,其中空氣相通過囊225,如在美國專利4,388,931和5,619,985中論述的例子。在另一個方案中,藥物組合物的氣霧化可以通過加壓的通過進口的空氣流完成,如在美國專利5,458,135;5,785,049;禾口6,257,233中論述的例子,或推進劑,如在國際專利WO00/72940和美國專利4,114,615中所論述的,其內(nèi)容全文并入作為參考。干粉末吸入器的這些類型一般被歸入主動干粉末吸入器類型。此處揭示的藥物組合物也可以經(jīng)由氣霧化對病人的肺和/或鼻空氣通道給藥,如用劑量計量吸入器。這種穩(wěn)定制劑的應(yīng)用為優(yōu)越的劑量再現(xiàn)性提供了保證并且提高了肺部沉淀,如在國際專利WO99/16422中論述的,其內(nèi)容全文并入作為參考。MDI在本
技術(shù)領(lǐng)域:
是眾所皆知的并且能夠用于兩性霉素B的給藥。呼吸觸動的MDI,以及包括其他曾經(jīng),或?qū)⒁岢龅母倪M的類型的那些儀器,也可以和本發(fā)明一個或多個實施方案的藥物組合物配合。本
技術(shù)領(lǐng)域:
已知的噴霧器能夠很容易地應(yīng)用在申請的分散體的給藥方面,不需要不適當(dāng)?shù)脑囼炑芯?。呼吸觸動的噴霧器,以及包括其他曾經(jīng),或?qū)⒁岢龅母倪M的類型的那些儀器,也可以和穩(wěn)定的分散體配合,其包括在本發(fā)明一個或多個實施方案范圍中。除了上述的實施方案,本發(fā)明一個或多個方案的穩(wěn)定分散體也可以和噴霧器共同使用,所述的噴霧器在國際專利99/16420中公開,其內(nèi)容全文并入作為參考,為了提供一種氣霧化藥物,該藥物可以對需要的患者的肺和/或鼻空氣通道給藥。除了DPI,MDI和噴霧器,本發(fā)明一個或多個實施方案的穩(wěn)定化分散體可以和液體劑量吸入器或LDI技術(shù)合用,例如,所述的LDI技術(shù)在國際專利WO99/16421中論述,其內(nèi)容全文并入作為參考。液體劑量吸入器包括穩(wěn)定化分散體對肺的直接給藥。從這方面考慮,生物活性化合物的直接肺和/經(jīng)鼻給藥在治療疾病方面特別有效,尤其當(dāng)肺疾病部位的差的血管循環(huán)降低靜脈內(nèi)藥物遞送的效果時。關(guān)于LDI,穩(wěn)定化分散體優(yōu)選地和部分液體通風(fēng)或全體液體通風(fēng)合用。而且,本發(fā)明一個或多個實施方案可以進一步包括在給藥之前,給藥過程中或給藥之后向藥物微觀分散體中添加治療有益量的生理可接受的氣體(如一氧化氮或氧氣)。給藥時間特殊地短。對于獨立的膠囊(如,5mg劑量),總的給藥時間通常小于約1分鐘。兩個膠囊的劑量(如,10mg)通常用約1分鐘。五個膠囊的劑量(如,25mg)用約3.5分鐘。因此,給藥時間應(yīng)小于約5分鐘,如小于約4分鐘,小于約3分鐘,小于約2分鐘,或小于約1分鐘。參考下面的實施例可以更充分地理解前面的說明。這樣的實施例,然而,僅僅是操作本發(fā)明一個或多個實施方案的方法的代表并且不應(yīng)被認(rèn)為是本發(fā)明范圍的限制。實施例1兩性霉素B的結(jié)晶度在不同批間的變化這個實施例包括通過定量X-射線粉末衍射方法測定兩性霉素B幾個批次的結(jié)晶度百分比值。這個實施例表明兩性霉素B不同批次的結(jié)晶度范圍。儀器和材料儀器樣品容器ShimadzuX-射線衍射儀型號XRD-6000材料硅參考標(biāo)準(zhǔn),NIST(國家標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)研究所)640c氟化鋰,粒徑〈5/mi兩性霉素B結(jié)晶標(biāo)準(zhǔn),過篩〈48iiwn兩性霉素B"無定形",過篩〈48/mi賦形劑粉末(DSPC/氯化鈣,摩爾比為2:1)方法用硅參考標(biāo)準(zhǔn)完成ShimadzuX-射線衍射儀模型XRD-6000的校準(zhǔn)驗證。在校準(zhǔn)驗證過程中,散射狹縫定在1°,掃描狹縫定在1.0°,和接受狹縫定在0.15mm。一旦衍射儀被校準(zhǔn)后,關(guān)于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)和大量未知的結(jié)晶度(約60mg的樣品大小)的X-射線粉末衍射數(shù)據(jù)被獲得。為了獲得這些數(shù)據(jù)用到下面的設(shè)定停滯時間兩秒(固定時間掃描)步徑0.02°20掃描范圍3-42°20狹縫0.5。發(fā)散狹縫,1。掃描狹縫,和0.3mm接受狹縫為了測定樣品中兩性霉素B的結(jié)晶度而作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,使用內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)。內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)是LiF。結(jié)晶和寬角度X-射線無定形標(biāo)準(zhǔn)的物理混合物被制備。以后在這個實施例中,寬角度X-射線無定形標(biāo)準(zhǔn)用"無定形"來指代。然后這些物理混合物用20wt。/。的LiF摻雜。從高度結(jié)晶的兩性霉素B的幾個批次中選擇結(jié)晶標(biāo)準(zhǔn)。以X-射線粉末衍射圖的定量對比為基礎(chǔ),選擇具有最小無定形背景的材料。通過冷凍粉碎結(jié)晶材料(即兩性霉素B的相同批次用于無定形和結(jié)晶兩性霉素B的標(biāo)準(zhǔn))制定無定形標(biāo)準(zhǔn)。在物理混合物的配制之前兩個標(biāo)準(zhǔn)過篩以使小于48/mi。物理混合物在40±5%RH(20-25°C)的條件下配制。所有稱量在分離度至少0.01mg的分析天平上進行。數(shù)據(jù)分析從每一個摻雜LiF的物理混合物的衍射圖,結(jié)晶兩性霉素B衍射峰的積分強度對LiF峰的比例被計算。積分強度比例,IIR,被給出<formula>formulaseeoriginaldocumentpage93</formula>其中丄AmB,Cr和lLiF分別是結(jié)晶兩性霉素B和LiF的選擇參照峰的積分強度。為LiF選擇獨立的衍射峰(38至39.5°2。,并且為兩性霉素B選擇窄角度范圍(12.75-16.25°2"。只有一對兩性霉素B的峰被應(yīng)用,因為它消除了拉/推曲線基線的需要,并且這些峰對原始結(jié)晶度敏感。峰用Jade軟件(MDIInc.)積分,版本7.1.2。結(jié)果和討論表1表明兩性霉素B幾個批次的結(jié)晶度結(jié)果。藥物物質(zhì)方法的最大差異為約±10%結(jié)晶,并且取決于結(jié)晶度百分比。雖然不希望受理論的束縛,由于所選標(biāo)準(zhǔn)的非常不同的松密度,結(jié)果中的不確定性歸因于壓縮中的變化,該壓縮是為了填充樣品容器。通過應(yīng)用較低的樣品質(zhì)量(導(dǎo)致樣品壓縮的較少需要),可能獲得準(zhǔn)確度的提高。<table>tableseeoriginaldocumentpage94</column></row><table>實施例2噴霧干燥的兩性霉素B顆粒狀物的制備兩性霉素B顆粒狀物通過兩個步驟過程制備。在第一步中,10.52g的兩性霉素B(Alpharma,Copenhagen,Denmark),10.12g的二硬脂酰基卵磷脂(DSPC)(Genzyme,Cambridge,MA),和0.84g的氯化鈣(JTBaker,Phillipsburg,NJ)分散在1045g的熱去離子水(T二7(TC)中,用Ultra-Turrax混合器(型號T-25)以IO,OOOrpm混合2至5分鐘?;旌铣掷m(xù)到目測DSPC和兩性霉素B似乎分散為止。然后在混合過程中以約50-60mL/min的速率緩慢添加381g的全氟辛基乙烷(PFOE)。添加完成以后,乳液/藥物分散體以12,000rpm再混合至少5分鐘以上。然后粗乳液以12,000-18,000psi經(jīng)過高壓混勻儀(AvestinOttawa,Canada)3次,緊接著以20,000-23,000psi經(jīng)過兩次。得到的細乳液在第二個步驟中作為原料使用,即,在NiroMobileMinor上噴霧干燥。應(yīng)用到下面的噴霧條件整體流速=70SCFM,進口溫度=110°C,出口溫度=57°<:,進料泵=38mL/min,霧化壓力=105psig,霧化流速42SCFM。利用圓柱形分離器自由流動的淺黃色的粉末被收集。收集效率為60%。兩性霉素B顆粒狀物的幾何直徑通過激光衍射(SympatecHelos,Clausthal-Zellerfeld,Germany)確定,在那里2.44/mi的體積重量平均直徑(VMD)被發(fā)現(xiàn)。掃描電子顯微鏡(SEM)分析表明準(zhǔn)備制成小的多孔的顆粒狀物的粉末具有高的表面硬度。沒有證據(jù)顯示每個收集器的粉末在5SEM中看到未并入的兩性霉素B晶體。干顆粒狀物的差異掃描量熱分析揭示二硬脂酰基卵磷脂的Tm在粉末為78°C,這與噴霧干燥純的二硬脂酰基卵磷脂時觀察到的相似。實施例3噴霧干燥的兩性霉素B顆粒狀物的氣溶膠性質(zhì)實施例2制備得到的干的兩性霉素B顆粒狀物手工裝入井2HPMC膠囊(Shionogi,Japan)中,膠囊在室溫條件下已經(jīng)過夜給平衡到15-20%RH。約用了10mg的裝量,這個量占弁2HPMC膠囊裝量體積的約1/2。在安德森級聯(lián)碰撞儀上(ACI)重力學(xué)分析測定空氣動力學(xué)顆粒狀物尺寸的分布。顆粒狀物尺寸分布用TurbospinDPI裝置以28.3L/min(即,舒適的吸入效果)禾n56.6L/min(即,強烈的吸入效果)流速測定,所述的TurbospinDPI裝置在美國專利4,069,819和4,995,385中都有論述,其全文內(nèi)容并入作為參考。通過這個裝置抽取2升的總體積。在較高的流速,兩個ACI被平行使用,以28.3L/min的標(biāo)準(zhǔn)流速和56.6L/min的通過裝置的總流速。在兩種情形下,設(shè)置狀況表明ACI碰撞儀的盤被校準(zhǔn)。良好的氣霧化特性巳經(jīng)被觀察到,有證據(jù)表明為MMAD小于2.6并且FPF-3.3^大于72%。流速對性能的影響也用Turbospin(PH&T,Italy)DPI裝置測定(圖4),在兩個ACI內(nèi)以56.6L/min速率平行操作。在高流速時沒有觀察到沉淀分布方面的顯著差別,證明最小流速依賴性能。上面論述的實施例表明目前粉末的氣霧化性能不取決于流速,這產(chǎn)生更易重現(xiàn)的患者給藥。實施例4儲存對兩性霉素B顆粒狀物氣霧化的影響在實施例2中制備得到的干燥的兩性霉素B顆粒狀物手工裝入#2HPMC膠囊(Shionogi,Japan)中,并且膠囊在室溫條件下已經(jīng)過夜以平衡到15-20%RH。約用了10mg的裝量,這個量占#2HPMC膠囊裝量體積的約1/2。裝好的膠囊放入分別標(biāo)記的玻璃瓶中,玻璃瓶包裹在用箔分層密封的盒子中并且接著在25°C/60RH或40°C/60RH的條件下儲存。用Turbospin(PH&T,Italy)DPI裝置完成發(fā)射劑量(ED)的測定,操作流速為它的最佳樣品流速60L/min,并且所用的總體為2升,Turbospin(PH&T,Italy)DPI裝置在美國專利4,069,819和4,995,385中論述。每個儲存變化用IO個測量來確定。在安德森級聯(lián)碰撞儀上(ACI)重力學(xué)分析測定空氣動力學(xué)顆粒狀物尺寸的分布。顆粒狀物尺寸分布用TurbospinDPI裝置以28.3L/min的流速測定并且所用的總體積為2升。良好的氣霧化特性已經(jīng)被觀察到,有證據(jù)表明平均ED為93%±5.3%,MMAD=2.6jum并且FPF<3.3/tm=72%(圖5禾卩6)。經(jīng)過高溫高濕條件儲存后沒有觀察到氣霧化特性(ED,MMAD或FPF)方面的顯著變化,證明了良好的穩(wěn)定性特征。目前USP對ED特性的要求限定遞送劑量的〉90%應(yīng)在標(biāo)簽聲稱劑量的±25%之內(nèi),并且遞送劑量的小于10%超過標(biāo)簽聲稱劑量的±25%但在±35%之內(nèi)。FDA公布的最新指導(dǎo)原則提出限定要嚴(yán)格,如遞送劑量的〉90%應(yīng)在標(biāo)簽聲稱劑量的±20%之內(nèi),并且所有均在標(biāo)簽聲稱劑量的±25%之內(nèi)。統(tǒng)計學(xué)上來講,為了符合FDA提出的規(guī)范要求RSD。/。為6%。上面實施例中的結(jié)果不僅在目前指導(dǎo)原則之內(nèi),而且也在提出的指導(dǎo)原則限定之內(nèi)。相應(yīng)地,化合物有好的分散性,氣霧化特征,和穩(wěn)定性。實施例5應(yīng)用不同卵磷脂的噴霧干燥的兩性霉素B顆粒狀物應(yīng)用不同的卵磷脂(PC)作為表面活性劑,按實施例2中所述的兩步工藝流程制備包含約50wt。/o的兩性霉素B的噴霧干燥的顆粒狀物。應(yīng)用二棕櫚酰卵磷脂(DPPC)(Genzyme,Cambridge,MA),二硬脂酰卵磷脂(DSPC)(Genzyme,Cambridge,MA),禾口SPC-3(LipoidKG,Ludwigshafen,Germany)制備組合物。用其中論述的相同的儀器和操作流程條件制備送料溶液。所述的50wty。的兩性霉素B組合物如下兩性霉素B0.733gPC0.714gCaCl2PFOB去離子水60mg32g75g所得的多-顆粒狀物乳液作為第二個操作步驟的原料應(yīng)用,即在B-191MiniSpray-Drier(Biichi,F(xiàn)lawil,Switzerland)上噴霧干燥。應(yīng)用到下面標(biāo)定的噴霧條件抽吸=100%,進口溫度85'C,出口溫度=60°C,進料泵=1.9mL/min,氣霧化壓力=60-65psig,氣霧化流速=30-35cm。為了維持30-31mbar的排氣袋壓力,調(diào)整抽吸速率(69-75%)。用標(biāo)準(zhǔn)圓柱形分離器收集自由流動的淺黃色的粉末。兩性霉素B顆粒狀物的幾何直徑通過激光衍射(SympatecHelos,Clausthal-Zellerfeld,Germany)確定,在那里體積重量平均直徑(VMD)從2.65/mi到2.75/xm變化。掃描電子顯微鏡(SEM)分析表明準(zhǔn)備制成小的多孔的顆粒狀物的粉末有高的表面硬度。應(yīng)用安德森級聯(lián)碰撞儀(ACI)重力學(xué)分析測定空氣動力學(xué)顆粒狀物尺寸的分布,見圖7。顆粒狀物尺寸分布用TurbospinDPI裝置以56.6L/min流速(即,強烈的吸入效果)測定。通過這個裝置抽取2升的總體積。平行使用兩個裝置,以28.3L/min的標(biāo)準(zhǔn)流速和56.6L/min的通過裝置的總流速。在用3種類型的卵磷脂制備的兩性霉素B中發(fā)現(xiàn)相同的空氣動力學(xué)特征,即MMAD小于2.5itrni并且FPFq.3拜大于72%。上面論述的實施例表明制備兩性霉素B的組合物技術(shù)的可變性不依賴于應(yīng)用的卵磷脂的類型。實施例670wt。/。兩性霉素B噴霧干燥顆粒狀物的制備按實施例2中所述的兩步驟工藝流程制備兩性霉素顆粒狀物。用其中論述的相同的儀器和操作流程條件制備送料溶液。70wt。/。的兩性霉素B組合物如下兩性霉素B0.70gDSPC0.265gCaCl224mgPFOB12g去離子水35g所得的多-顆粒狀物乳液作為第二個操作步驟的原料應(yīng)用,即在B-191MiniSpray-Drier(Biichi,F(xiàn)lawil,Switzerland)上噴霧干燥。應(yīng)用到下面的噴霧條件抽吸=100%,進口溫度=85匸,出口溫度=60°〇,進料泵=1.9mLmin—、氣霧化壓力=60-65psi,氣霧化流速=30-35cm。為了維持30-31mbar的排氣袋壓力,調(diào)整抽吸速率(69-75%)。用標(biāo)準(zhǔn)圓柱形分離器收集自由流動的淺黃色的粉末。兩性霉素B顆粒狀物的幾何直徑通過激光衍射(SympatecHelos,Clausthal-Zellerfeld,Germany)確定,在那里2.96Mm的體積重量平均直徑(VMD)被測定。掃描電子顯微鏡(SEM)分析表明準(zhǔn)備制成小的多孔的顆粒狀物的粉末有高的表面硬度。上面論述的實施例表明目前的粉末工藝技術(shù)的可變性以利用此處敘述的多-顆粒狀物方法制備高含量的兩性霉素B。實施例7噴霧干燥的兩性霉素B顆粒狀物的氣霧化特性在實施例6中制備得到的干燥的兩性霉素B顆粒狀物手工裝入井2HMPC(Shionogi,Japan)或井3HMPC(Capsugel,Greenwood,SC)膠囊中,并且膠囊在室溫條件下已經(jīng)過夜給平衡到15-20%RH。約用了10mg的裝量,這個量占弁2HMPC膠囊裝量體積的約1/2或井3HMPC膠囊裝量體積的約5/8。用TurbospinDPI(PH&T,Italy),Eclipse(Aventis,UK),禾。Cyclohaler(Novartis,Switzerland)DPI裝置觀察氣霧化特性。Cyclohaler⑧使用#3HMPC膠囊,而Turbospin⑧和Cyclohaler⑧裝置使用尺寸為弁2HMPC的膠囊。應(yīng)用安德森級聯(lián)碰撞儀(ACI)重力學(xué)分析測定空氣動力學(xué)顆粒狀物尺寸的分布,見圖8。顆粒狀物尺寸分布在流速為56.6L/min時測定,當(dāng)用Turbospin⑧和EclipseDPI裝置測定時顯示強烈的吸入效果,并且當(dāng)用Cyclohaler⑧裝置測定時顯示舒適的吸入效果。通過這個裝置抽取2升的總體積。平行使用兩個ACI,以28.3L/min的標(biāo)準(zhǔn)流速和56.6L/min的通過裝置的總流速。在所有的裝置中發(fā)現(xiàn)相同的空氣動力學(xué)特性,有證據(jù)表明MMAD小于2.5/rni并且FPF^.3^大于71%。上面論述的實施例表明目前粉末的氣霧化特性不依賴于具有中等或低阻力設(shè)計的裝置,并且不依賴于膠囊的尺寸,這證明了測試的兩性霉素B粉末的分散性。實施例8噴霧干燥的兩性霉素B顆粒狀物的氣霧化特性這個實施例進一步測定了兩性霉素B顆粒狀物的試驗批次的氣霧化特性。下面的兩性霉素B顆粒狀物用實施例2中的工藝制備,其中兩性霉素B從Alpharma中獲得。4000T4001T圖9和IO分別表明了每收集器和每批次的發(fā)射劑量(ED)(mg/膠囊)和平均ED。為了測定ED,應(yīng)用美國專利申請10/298,177中敘述的吸入裝置,在此該專利內(nèi)容全文并入作為參考。圖11和12分別表明了每收集器的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑(MMAD)和細粒劑量(FPD%<3.3/mi)。下面的兩性霉素B顆粒狀物用實施例2中的工藝制備,其中兩性霉素B從Chemwerth中獲得。*4024T*4025T*4026T*4027T4028T4029T*4030T圖13和14分別表明了每收集器和每批次的發(fā)射劑量(ED)(mg/膠囊)和平均ED。圖15和16分別表明了每收集器的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑(MMAD)和FPD%<3.3拜。如下面更詳細地描述,利用處理的兩性霉素B制備下面的兩性霉素B顆粒狀物*N020226(來源于高結(jié)晶的API)*N020227(來源于高無定形的API)這些兩性霉素B顆粒狀物是利用實施例2中工藝流程的變化制備,其中兩性霉素B初始由Alpharma生產(chǎn)加工。在噴霧干燥之前,然而,兩性霉素B進行處理,為了得到(i)高無定形的;或(ii)高結(jié)晶的API批料(如通過X-射線粉末衍射測定)。特殊地,下面提供重新處理兩性霉素B的生產(chǎn)過程。如下面的流程圖和緊接著的說明所示,結(jié)晶形和無定形都是從相同的起始原料制備。<table>tableseeoriginaldocumentpage102</column></row><table>重新處理兩性霉素B藥物物質(zhì)(API)的生產(chǎn)過程的說明溶解和過濾在室溫攪拌條件下向1130ml的甲醇中添加約20g的兩性霉素B。在不斷攪拌下,向兩性霉素B混懸液中添加約450mL的二甲基甲酰胺,緊接著添加39g的檸檬酸單水合物。一旦所有固體基本被溶解后,通過過濾使溶液澄清。向濾液中添加約208mL的二氯甲烷。盛有產(chǎn)物的容器在重新處理過程中要避光保護。然后再向濾液中添加約450mL的冷水(2-8°C),并且攪拌溶液持續(xù)15分鐘。pH的調(diào)整和沉淀/結(jié)晶通過利用40%的三乙醇胺(~140ml)調(diào)整溶液的pH至7,得到兩性霉素B的沉淀。對于無定形,在攪拌條件下一次性傾析添加堿。然后無定形準(zhǔn)備分離,按下面所述的方法。對于結(jié)晶形,在攪拌條件下一滴一滴地添加堿,該過程持續(xù)30分鐘以上。然后加熱漿至44-46'C持續(xù)90分鐘,緊接著冷卻至室溫持續(xù)30分鐘。最后,在2-8'C冷卻漿持續(xù)60分鐘。然后準(zhǔn)備分離結(jié)晶形。結(jié)晶形的收集和洗滌結(jié)晶形的兩性霉素B用大的內(nèi)覆蓋濾紙的不銹鋼布氏漏斗通過真空過濾得到。產(chǎn)物用170mL的冷的40%甲醇(2-8°C)洗滌,接著用lOOmL的丙酮(室溫)洗滌。無定形的收集和洗滌離心漿,接著傾析上清液,得到兩性霉素B的無定形。將餅混懸在600mL的冷的40Q/o甲醇(2-8。C)中,接著離心,傾析,通過上面的操作完成產(chǎn)物的洗滌。用600mL丙酮(室溫)重復(fù)操作洗滌過程。結(jié)晶形和無定形的干燥包含洗滌的結(jié)晶兩性霉素B的濾紙放在不銹鋼制的托盤中,托盤放入真空室內(nèi)。同樣地,把洗滌的無定形的兩性霉素B從離心管中取出并且鋪展在覆蓋在不銹鋼制的托盤中的濾紙上,托盤放入真空室內(nèi)。干燥過程在室溫持續(xù)l-3天,同時產(chǎn)品避光保護。有時,為了促進殘留溶劑的蒸發(fā),在干燥過程中,使用抹刀粉碎較大的塊狀。最終的兩性霉素B產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至琥珀色玻璃瓶在2-8'C儲存。如上所述的,然后利用實施例2中的生產(chǎn)流程制備兩性霉素B顆粒狀物。圖17顯示了N020226和N020227的發(fā)射劑量(ED)(mg/膠囊)。已發(fā)現(xiàn)N020226和N020227的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑分別為2.4jtrni和2.6jum。已發(fā)現(xiàn)N020226和N020227的FPD。/。分別為55%和47%。實施例9和比較例1氣管內(nèi)給藥和靜脈內(nèi)給藥的對照該實施例包括測定兩性霉素B在血槳,肺泡液,和肺組織中的濃度,在氣管內(nèi)給藥兩性霉素B的溶液、或靜脈內(nèi)給藥一種商品兩性霉素B去氧膽酸鹽溶液之后。材料和方法該實施例中用到預(yù)先插套管的(頸靜脈插管[JVC])Sprague-Dawely大鼠(HilltopLabAnimalsInc,Scottdale,PA),這些大鼠的體重在334-366g之間。兩性霉素B通過氣管內(nèi)灌輸或靜脈內(nèi)注射給藥。研究方案如表2所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage105</column></row><table>在磷酸鹽緩沖液(PBS)中制備用于氣管內(nèi)灌輸?shù)膬尚悦顾谺的溶液,濃度為13.3mg的兩性霉素B/mL。兩性霉素B去氧膽酸鹽制劑是以50mg兩性霉素B凍干塊形式提供,該凍干塊重新組成以制備含兩性霉素B1mg/mL的溶液。研究的終點和流程包括在劑量給藥之前稱重,為了藥物濃度分析的血液采集,BAL,和組織收集以及全部驗尸觀察。血液,BAL,和肺組織樣品在給藥后12小時,1,2,4,6,8,11,和14天收集。在每一個樣品收集時間,從IT組選擇四只(4)動物,并且從IV選擇三只(3)動物,這些選出的動物被處死并且取血液,肺泡液和肺組織的樣品。通過加拿大Montreal的MDSPharma裝置分析血漿和肺泡樣品的兩性霉素B的濃度。通過MedToxLaboratories,St.Paul,Minnesota分析肺組織樣品的兩性霉素B的濃度。結(jié)果全部驗尸觀察通過氣管內(nèi)灌輸兩性霉素B的大鼠顯示肺毒性全部跡象。觀察包括肺水腫,肺出血,和肺組織斑點。BAL,肺組織,和血漿中兩性霉素B的濃度圖18表示了BAL,肺組織,和血漿中兩性霉素B的濃度,和估計的在氣管內(nèi)給藥100和靜脈內(nèi)給藥200遞送兩性霉素B后的ELF兩性霉素B的濃度。如所看到的,當(dāng)呼吸道給藥時,系統(tǒng)中顯現(xiàn)少量的兩性霉素B。相反地,靜脈內(nèi)給藥后血液中顯現(xiàn)高的兩性霉素B濃度,一直到給藥后4天。圖18也表明,氣管內(nèi)給藥IOO時肺兩性霉素B的濃度比靜脈內(nèi)給藥200時的高。在試驗進行中,氣管內(nèi)給藥肺兩性霉素B的濃度高于靜脈內(nèi)給藥肺兩性霉素B的濃度的許多倍,而氣管內(nèi)給藥兩性霉素B的血漿濃度比靜脈內(nèi)給藥兩性霉素B的血漿濃度低。結(jié)果和討論通過氣管內(nèi)液體灌輸給藥兩性霉素B的大鼠顯示毒性的全部跡象。觀察包括肺水腫,肺出血,鄰肺組織斑點。兩性霉素B不是在任何一個取自接受試驗物品的動物的血漿樣品中都可以測量,所述的動物經(jīng)氣管內(nèi)給藥。在氣管給藥兩性霉素B的動物的BAL和肺組織中發(fā)現(xiàn)可測量的濃度。IT劑量后,測量動物BAL中的藥物,測量兩天,并且4只動物中的一只在劑量后測定8天。IT劑量后,在14天測定所有動物肺組織中的藥物。在所有靜脈內(nèi)給藥兩性霉素B的動物體內(nèi),測量血漿中的藥物直到劑量之后兩天,但是動物并不是在任一個時間點上都有可測量的藥物,并且只有一個動物在劑量后12小時在BAL中有可測量的兩性霉素B的濃度??傊?1mg/kg的兩性霉素B的氣管內(nèi)遞送產(chǎn)生局部肺毒性,兩性霉素B溶液的濃度為13.3mg/mL。氣管內(nèi)給藥在劑量給藥后14天也產(chǎn)生高于定量限制的濃度。相反地,靜脈內(nèi)給藥兩性霉素B在動物肺組織中兩性霉素B的濃度低于定量限制。實施例10和比較例2氣霧化給藥和靜脈內(nèi)給藥的對照氣霧化的兩性霉素B粉末對狗經(jīng)肺給藥14天。兩性霉素B以每曰劑量遞送直到11.5mg/kg。對有意識的狗用面罩遞送兩性霉素B粉末的劑量,該面罩包括單向的排除呼出的空氣的閥門和連接中央保留室的吸入管,保留室內(nèi)裝氣霧化的粉末。配制的兩性霉素B粉末的可吸入干粉末氣霧劑是用分散的粉末通過旋轉(zhuǎn)刷蒸汽發(fā)生器制造并且遞送到中央室吸入暴露30分鐘。圖19表明給藥后狗101體內(nèi)平均肺兩性霉素B濃度-時間分布圖。如看到的,給藥后兩性霉素B在肺內(nèi)滯留數(shù)天,觀察到的兩性霉素B半衰期約為19天。相反地,靜脈內(nèi)給藥201沒有很好保留,觀察到的半衰期約為28小時。實施例11預(yù)防給藥增加存活率概述這個實施例包括測定經(jīng)吸入預(yù)防性地給藥的兩性霉素B在免疫抑制的兔模型體內(nèi)是否有效抗煙曲霉(Aspergillusfumigatus)。這個研究的一個目的是測定在煙曲霉(Aspergillusfumigatus)接種之前通過吸入的兩性霉素B單獨給藥是否能增加存活時間和/或降低整體死亡率。這個研究有三組,每組10只動物。第一組接受靜脈內(nèi)阿糖孢苷的免疫抑制方法和甲基氫化潑尼松和一種假鹽接種。第二組接受免疫抑制方法和5xlO^煙曲霉的分生孢子。第三組接受免疫抑制方法和吸入的估計1.5mg/kg的兩性霉素B的劑量,在接種5xl(^煙曲霉的分生孢子的前一天吸入兩性霉素B。兩性霉素B干粉末制劑和煙曲霉經(jīng)氣管內(nèi)的管對麻醉兔給藥。免疫抑制劑通過靜脈注射給藥。防止細菌感染的抗生素通過靜脈內(nèi)注射或在飲水中給藥。本研究中完成的評估包括死亡率和發(fā)病率,每日臨床觀察,體重,臨床病理學(xué)(血液學(xué)和臨床化學(xué)),整體尸體解剖,肺重,可見的肺損傷斑點,BAL內(nèi)的霉菌菌落形成單位(CFU)測定,血液,和肺組織樣品,及肺組織的組織病態(tài)的評估。直到計劃的研究結(jié)束在第14天存活動物的百分比如下所示第一組為60%,第二組為20%,和第三組為70%。第一組和第三組中動物的平均存活時間為13天并且兩組死亡或處死的平均天數(shù)為第14天。相反,第二組的動物的平均存活時間為IO天并且死亡或處死的平均天數(shù)為第10天。在接種煙曲霉之前給藥兩性霉素B(第3組)的動物與只給藥煙曲霉的動物(第二組)相比,Kaplan-Meier(KM)分析表明在存活方面有顯著(p<0.05)的增加。與第二組相比,第一組(對照組)動物的存活也顯著增加。當(dāng)?shù)谝唤M與第三組相比較,沒有顯著的區(qū)別。在第二組和第三組中觀察到的呼吸影響的臨床跡象,包括喘氣,喘息,或羅音。在第一組動物中沒有觀察到這些跡象。在研究的第7天開始第二組中的七只動物中顯示喘氣,喘息,或羅音。第二組所有顯示呼吸影響跡象的動物在顯示跡象的一天之內(nèi)或者死亡或者變得垂死。在第三組,觀察到五只動物喘息,喘氣,或有羅音。然而,雖然呼吸跡象的早期發(fā)生也是在第7天,但是顯示呼吸影響跡象的動物中只有兩只變得垂死。其他3只動物存活直到它們的常規(guī)尸體解剖,并且三只中的兩只(都有羅音)在第14天停止顯示呼吸影響的跡象。在所有組中觀察到體重方面的影響。到約第8天時所有組顯示體重降低。到第8天時所有組顯示約6%的體重降低。在開始的減少之后,第一組和第二組中剩余動物的體重在繼續(xù)的研究中持續(xù)穩(wěn)定。相對地,第3組中動物的平均組體重繼續(xù)降低并且到第14天時比原來的體重降低了18%,比第一組體重的平均數(shù)低10%??梢钥吹皆谒薪M測定的血液和臨床化學(xué)參數(shù)方面的影響。血液參數(shù)方面看到的主要影響為白血細胞(WBC)降低的水平,包括降低分葉核中性粒細胞(ANS)和血小板(PLC)。這些影響在所有組中都可以看到。第二組和第三組中注意到在紅血球細胞,血紅蛋白,血細胞比容,總蛋白,白蛋白,天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶,丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶,總膽紅素,直接膽紅素,膽固醇,球蛋白,和甘油三酯等水平方面附加的影響。在第二組和第三組中看到的紅血球細胞(RBC)水平,血紅蛋白(HGB),血細胞比容(HGB)的降低是貧血的特征并且與在肺中顯微鏡觀察的出血是一致的。在第二組和第三組中看到的總蛋白(TPR),白蛋白(ALB)的降低水平是持續(xù)的伴隨著天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST),丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT),總膽紅素(TBI)和直接膽紅素(DBI)及膽固醇(CHO)的降低水平,并且伴隨著肝臟的影響。升高的球蛋白(GLO)可能是對顯微鏡觀察的肺中真菌感染和/或炎癥起反應(yīng)的結(jié)果。增加的甘油三酯(TRI)水平與研究中觀察到隨著食物消耗和體重的降低看到脂肪移動是一致的。對在第14天存活的動物進行整體尸體解剖,同樣對處死的動物也進行整體尸體解剖,處死的動物在處死之前變得垂死。在尸體解剖過程中,計數(shù)每只動物肺損傷的個數(shù)。在第一組中,沒有可見的肺損傷。第二組中,適用于整體尸體解剖的八只動物中的七只(88%)有可見的肺損傷并且這些八只動物中的六只(75%)有多于20的大的可見肺損傷。在第三組中,十只動物中的八只(80%)有可見肺損傷,然而,與第二組相反,只有十只動物中的兩只(20%)有多于20的大的可見肺損傷。完成在整體尸體解剖時取的支氣管氣泡灌洗液,血液,和肺組織樣品的顯微鏡評估。從第一組的任何一個樣品中都沒有檢測到菌落形成單位(CFU)。對于第二組,從十只動物中的八只獲取用于培養(yǎng)的樣品。發(fā)現(xiàn)十只動物中的兩只死亡,沒有從這兩只動物獲取樣品。動物中的六只估計(75%)有一個或更多的對真菌呈陽性的組織。對于第三組,從十只動物中的八只獲取用于培養(yǎng)的樣品,其中的四只(44%)有一個或更多的對真菌呈陽性的組織。與第一組對比,第二組和第三組中絕對肺的重和肺重比體重增加。肺組織的組織病態(tài)的評估顯示,在評估的對照組兔子的任何一個肺組織中沒有霉菌菌絲出現(xiàn)。在評估的第二組動物的44%中出現(xiàn)霉菌菌絲并且在評估的第三組動物的50%中出現(xiàn)霉菌菌絲。顯微鏡觀察在任何一組的組織之間沒有區(qū)別。有霉菌菌絲的兔子的肺部位也有組合的次級變化,變化包括水腫,壞死,出血,肺泡巨噬細胞擴增,間質(zhì)炎癥,和/或血管周圍性炎癥。在嚴(yán)重度或普遍性變化的出現(xiàn)是相似的。獲得的組織片段的顯微鏡的評估能夠證實約一半被評估的動物的真菌感染。在第二組或第三組中,組織或霉菌菌絲之間沒有顯微鏡觀察的區(qū)別??傊谒劳雎蕯?shù)據(jù)以及支持的臨床觀察,微生物數(shù)據(jù),和肺損傷的基礎(chǔ)上,在用于本研究的免疫抑制的兔模型內(nèi)兩性霉素B提供預(yù)防性的抗煙曲霉致死亡的效果。研究設(shè)計在這個實驗中,有三個研究組,每組10只動物。第一組接受靜脈內(nèi)阿糖孢苷的免疫抑制方法和甲基氫化潑尼松和一種假鹽接種。第二組接受免疫抑制方法和5xl0煙曲霉的分生孢子。第三組接受免疫抑制方法并且在接種5"07煙曲霉的分生孢子的前一天接受估計1.5mg/kg的兩性霉素B肺劑量。整個設(shè)計在下面的表3中給出。<table>tableseeoriginaldocumentpage111</column></row><table>接種稀釋液(0.9%氯化鈉溶液的0.025%的吐溫20溶液)在第一天用于治療的兩性霉素B哺乳動物試驗系統(tǒng)和動物飼養(yǎng)在研究開始時應(yīng)用雙導(dǎo)管插入的新西蘭白SPF兔,導(dǎo)管有導(dǎo)管入口(VAP),并且兔稱重在2.5至4.0kg之間。兔用計算機控制的體重分層程序被隨機分配成治療組。每組的數(shù)量/性別每組10/雌性;3組免疫抑制和中性粒細胞減少癥兔體內(nèi)的免疫抑制條件模仿人類患者的條件,如下表4所示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage111</column></row><table>iV:靜脈內(nèi)sid二每日一次劑量bid二每日兩次劑量qod-每隔一天小的動物氣霧化遞送系統(tǒng)的體外遞送效率測定通過吸入(IH)路徑用氣管內(nèi)管道對麻醉的兔遞送干粉末兩性霉素B,氣管內(nèi)管道連接到小的動物氣霧化遞送系統(tǒng),該系統(tǒng)包括連接到小的動物通風(fēng)裝置的氣霧化遞送裝置,氣霧化遞送裝置如在美國專利6,257,233中公開,其內(nèi)容全文并入作為參考。在這個方面,來源于泡罩容器的粉末從吸入器被推入室內(nèi)。小的動物通風(fēng)裝置推動分散的粉末進入氣管內(nèi)管道。通過測定在過濾器上收集的粉末的重量分析物質(zhì)測量對動物的遞送效率,過濾器連接在氣管內(nèi)管道的末端。在過濾器上收集的質(zhì)量規(guī)范化到實際的泡罩容器填充重量。遞送效率用于計算體內(nèi)試驗的估計劑量(mg)。治療組下面的表5概述了治療方法。<table>tableseeoriginaldocumentpage112</column></row><table>圖20顯示了中性粒細胞減少癥的兔的Kaplan-Meier存活曲線。兔為免疫抑制的并且主動暴露給煙曲霉600,這些兔只有50%存活9天以上。相對地,兔為免疫抑制的并且主動暴露給煙曲霉,并且給藥兩性霉素B601,這些兔全部存活9天以上。曲線602顯示了僅僅免疫抑制的兔的對照組。在更長的時期,小于25%的未治療的暴露的兔600存活14天以上,而約70%的治療的并且暴露的兔602存活14天以上。實施例12兔通過吸入遞送的兩性霉素B的藥物動力學(xué)這個實施例包括在通過吸入途徑給藥單次的兩性霉素B粉末后,測量兩性霉素B在兔的血漿,支氣管氣泡灌洗(BAL)液,和肺組織中的濃度。這個實施例僅僅描述在肺組織和血漿中獲得的結(jié)果。材料和方法利用實施例2中描述的過程,兩性霉素B(AmB)配制成含有50wty?;钚猿煞值目晌敕勰?。制劑的批次號碼為N020042。試驗粉末手工裝入泡罩容器內(nèi)并且在340。F密封并且接觸時間為1.0秒,每個泡罩容器填充重量為約1.5mg。通過吸入(IH)路徑用氣管內(nèi)管道對麻醉的兔遞送試驗物質(zhì),氣管內(nèi)管道連接到小的動物氣霧化遞送系統(tǒng),該系統(tǒng)包括連接到小的動物通風(fēng)裝置的氣霧化遞送裝置,氣霧化遞送裝置如在美國專利6,257,233中公開,其內(nèi)容全文并入作為參考。試驗吸入在獨立的吸入暴露中給藥。這個研究包括兩個組,每組有48只兔。通過吸入,第一組和第二組分別接受靶劑量為0.25mg/kg和1.5mg/kg的兩性霉素B。給藥后,在下面的每一個時間點處死四只動物0.16,0.3,1,1.3,2,3,4,5,14,21,28,和45天。收集血漿和肺組織并且用LC/MS分析兩性霉素B的含量。血漿中的檢測的測量限制(LOQ)為5ng/ml并且在肺組織中為20ng/ml。結(jié)果和討論這個實施例的一個目的是,在通過吸入兩性霉素B粉末的單獨給藥后,測量兩性霉素B在兔的血漿,BAL液,和肺組織中的濃度。檢驗了兩個靶肺劑量,兩個靶肺劑量為0.25和1.5mg/kg。這個實施例僅僅描述在肺組織和血漿中獲得的結(jié)果。血漿中的檢測的測量限制(LOQ)為5ng/ml。所有動物的兩性霉素B的血漿濃度,在所有的時間點,和在兩個實驗劑量都低于LOQ。因此,在兩性霉素B的IH給藥后,有很少的系統(tǒng)暴露。然而,兩性霉素B的IH給藥導(dǎo)致在肺內(nèi)藥物高的和持久的濃度。藥物濃度可以快速達到。通過第一個4小時的樣品時間獲得4.2和24.2Mg/g的組平均濃度。在給藥0.25和1.5mg/kg的劑量后,在32和24小時分別觀察到第一組和第二組的Tmax。組平均Cmax值為8.0和46.6/xg/g,對應(yīng)的劑量分別為0.25和1.5mg/kg。Cmax值與劑量成正比。IH給藥后,藥物濃度維持?jǐn)?shù)周。如圖21和22所示,兩性霉素B的組平均濃度在最后樣品時間仍舊升高,即,給藥后45天。當(dāng)給藥劑量為0.25mg/kg時,兩性霉素B從肺消除的半衰期(tI/2)為292小時,當(dāng)給藥劑量為1.5mg/kg時,半衰期為254小時。這個實施例的結(jié)果證明了對兔IH給藥兩性霉素B,導(dǎo)致血衆(zhòng)中兩性霉素B的濃度一致低于LOQ(<5ng/ml)。這些結(jié)果進一步在肺組織中獲得高的和持久的兩性霉素B濃度。實施例13在兔中的用于預(yù)防的吸入兩性霉素B的效率這個實施例包括(1)確定上皮內(nèi)襯液(ELF)或肺實質(zhì)中兩性霉素B(AmB)的濃度是否與保護抗煙曲霉致病非常相關(guān);和(2)確定有效預(yù)防劑量。材料和方法應(yīng)用實施例14中批次號碼為N020042的兩性霉素B的可吸入粉末。試驗粉末手工裝入泡罩容器內(nèi)并且在340°F密封并且接觸時間為l.O秒,每泡罩容器的約裝量為約1.5mg。通過吸入(IH)路徑用氣管內(nèi)管道對麻醉的兔遞送試驗物質(zhì),氣管內(nèi)管道連接到小的動物氣霧化遞送系統(tǒng),該系統(tǒng)包括連接到小的動物通風(fēng)裝置的氣霧化遞送裝置,氣霧化遞送裝置如在美國專利6,257,233中公開,其內(nèi)容全文并入作為參考。試驗吸入在獨立的吸入暴露中給藥。在研究開始時應(yīng)用雙導(dǎo)管插入的新西蘭白SPF兔,導(dǎo)管的導(dǎo)管入口導(dǎo)入股靜脈,并且兔的重量在約2.5至4,0kg之間,兔從CovanceResearProducts,DenverPA獲得。煙曲霉,NIH菌株4215,從美國TypeCultureCollection(ATCC)獲得。在Sabouraud葡萄糖長頸瓶上制備煙曲霉的接種物。用含0.9%氯化鈉的溶液配制的0.025%的吐溫20溶液收獲分生孢子,轉(zhuǎn)移至錐形管內(nèi),洗滌,并且計數(shù)。用相同的溶液調(diào)整濃度至300juL含5xl(T分生孢子。攻擊組的動物接種相同的體積。在麻醉的兔身上操作接種。應(yīng)用氣管內(nèi)管道對兔插管并且然后用結(jié)核菌素注射氣管內(nèi)管給藥分生孢子,結(jié)核菌素注射管通過氣管內(nèi)管道連接到插導(dǎo)管。本研究包括6組,每組包括10只兔子。這些組在下面的表6中描述。所有組為免疫抑制并且用防止細菌感染的抗生素治療。在下面的表7中詳細說明了免疫抑制和抗菌保護的方法。第一組既不用煙曲霉攻擊也不用兩性霉素B治療。第二組用煙曲霉攻擊但不用兩性霉素B治療。第三組用0.5mg兩性霉素B/kg在用煙曲霉攻擊的前12天治療。第四組用0.15mg兩性霉素B/kg在煙曲霉變化的前一天治療。第五組用0.5mg兩性霉素B/kg在煙曲霉攻擊的前一天治療。第六組用1.5mg兩性霉素B/kg在煙曲霉攻擊的前一天治療。<table>tableseeoriginaldocumentpage116</column></row><table>A:飲水的mg/升B:研究天數(shù)=接種煙曲霉的天數(shù)結(jié)果圖23表明了存活數(shù)據(jù)。第一組為免疫抑制,但是既不用兩性霉素B治療也不用煙曲霉攻擊。除了一只兔外這組其他所有的兔存活至這個研究結(jié)束,在第14天的存活率為90%。第二組為免疫抑制,不用兩性霉素B治療但是用煙曲霉攻擊。這個組所有的兔都死亡,存活率為0%。平均存活時間為6天。第三組為免疫抑制,在第-12天用1.5mg兩性霉素B/kg治療,并且用煙曲霉攻擊。這個組所有的兔都死亡,存活率為0%。平均存活時間為10天。第四組為免疫抑制,在第-1天用0.15mg兩性霉素B/kg治療,并且用煙曲霉攻擊。這個組有九只兔死亡,存活率為10%。平均存活時間為9天。第五組為免疫抑制,在第-1天用0.5mg兩性霉素B/kg治療,并且用煙曲霉攻擊。這個組中九只兔死亡,存活率為10%。平均存活時間為10.5天。第六組為免疫抑制,在第-l天用1.5mg兩性霉素B/kg治療,并且用煙曲霉攻擊。這個組有九只兔死亡,存活率為10%。平均存活時間為10天。用Logrank試驗進行的第2組與第3組,第2組與第4組,第2組與第5組,及第2組與第6組的雙統(tǒng)計學(xué)比較顯示,吸入的兩性霉素B具有顯著(PO.001)的抗煙曲霉攻擊的保護。應(yīng)用相同的實驗劑量,第3組,第4組,第5組,和第6組的雙統(tǒng)計學(xué)比較在從不同的治療中得到的存活曲線方面沒有顯示任何區(qū)別。結(jié)果和討論這個實施例測驗了吸入的兩性霉素B對接種了煙曲霉的孢子的兔的保護效果。第二組接種煙曲霉但未治療,該組與任何治療組的存活曲線的比較顯示,用吸入的兩性霉素B進行的治療在免疫抑制的兔體內(nèi)有保護作用。這在所有實驗劑量(0.15,0.5,禾ni.5mg/kg)上都是成立的。當(dāng)兔在煙曲霉攻擊前治療1或12天時,這也是成立的。實施例14大鼠一個月吸入毒性研究這個實施例包括在吸入給藥后測量大鼠體內(nèi)兩性霉素B的粉末制劑的毒性,和在約一個月的恢復(fù)期間之后,評估任何效果的可逆性。這個實施例包括尋找呼吸道內(nèi)的局部誘導(dǎo)的毒性和系統(tǒng)毒性。包含50wt。/。活性成分的兩性霉素B粉末利用實施例2中描述的工藝制備。得到的粉末具有的特性在下表8中顯示。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage118</column></row><table>大鼠(198M和198F)被分配為6個劑量組并且按下面表9中顯示的治療。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage119</column></row><table>*包括約50wt。/。兩性霉素B的干粉末制劑恢復(fù)動物在給藥后保持約一個月的恢復(fù)階段動物410M過早地在第一天死亡并且被701M替代。下面用事先的檢眼鏡檢查,動物345F,436F,和541F分別被711F,712F,禾Q713F替代。用僅暴露嘴技術(shù)對動物給藥60分鐘,有5次,每周一次?;謴?fù)動物在給藥后保持約一個月的恢復(fù)階段。完成了下面的研究臨床觀察,體重,食物消耗,眼科學(xué),血液學(xué),臨床化學(xué),尿分析,組織病理學(xué),和毒性動力學(xué)。載體制劑氣霧劑的全組平均暴露室濃度為2.35mg/L。第3組,第4組和第5組第一天的兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度為0.06,0.39,禾卩0.91mg/L,后來天的濃度分別為0.02,0.06,禾P0.16mg/L。第一天,第3組,第4組和第5組的單獨兩性霉素B的全組平均暴露室濃度(分析測定)為0.0290,0.152,和0.389mg/L,后來天的單獨兩性霉素B的全組平均暴露室濃度分別為0.00847,0.0214,和0.0519mg/L。第六組的兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度為2.22mg/L或單獨兩性霉素B的全組平均暴露室濃度為0.694mg/L。載體制劑的全組(混合性別)平均估計達到的劑量為73.56mg/kg/劑量。第3組,第4組和第5組第一天的兩性霉素B制劑的全組(混合性別)平均估計達到的劑量為1.89,12.27,和28.45mg/kg/劑量,后來天的分別為0.528,1.74,和4.87mg/kg/劑量。第一天,第3組,第4組和第5組的單獨兩性霉素B的全組(混合性別)平均估計達到的劑量為0.914,4.78,和12.36mg/kg/劑量,后來天的單獨兩性霉素B的全組平均估計達到的劑量分別為0.256,0.646,和1.58mg/kg/劑量。第六組的兩性霉素B制劑的全組平均估計達到的劑量為68.24mg/kg/劑量或單獨兩性霉素B的全組平均估計達到的劑量為21.64mg/kg/劑量。粒子尺寸分布數(shù)據(jù)顯示64.7%的載體氣霧劑粒子小于3.5/xm,并且空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑(MMAD)(士幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD))為1.61/mi(3.244),第一天,第3組81.2%的兩性霉素B制劑顆粒狀物,第4組60.6%的兩性霉素B制劑顆粒狀物,和第5組70.7%的兩性霉素B制劑顆粒狀物小于3.5Mm,以后天的第3組,第4組,和第5組分別68.2%,59.0%,和83.6。/。的兩性霉素B制劑顆粒狀物小于3.5/xm,并且第3組,第4組,和第5組第一天的MMAD和(GSD)分別為1.35/mi(2,382),1.46pim(4.508),禾卩1.43(2.560),后來天的MMAD和(GSD)分別為1.42pm(3.572),1.89/mi(2.710),禾卩0.81pm(4.329)。對于單獨的兩性霉素B(分析測定),第一天,第3組68.1%的顆粒狀物,第4組58.1%的顆粒狀物,和第5組68.6%的顆粒狀物小于3.5/mi,以后天的第3組,第4組,和第5組分別66.2%,55.6%,和71.1。/0的顆粒狀物小于3.5Mm,并且第3組,第4組,和第5組第一天的MMAD和GSD分別為1.69/xm(2.755),1.71/mi(3.351),禾卩1.55pm(2.652),后來天的MMAD和GSD分別為1.47pm(3.599),2.29(2.525),禾口1.06拜(6.077)。粒子尺寸數(shù)據(jù)顯示第6組57.8%的兩性霉素B制劑顆粒狀物小于3.5/mi,并且MMAD(士GSD)為2.11pm(3.089)。對于單獨的兩性霉素B(分析測定),54.3。/。的顆粒狀物小于3.5/mi,并且MMAD(士GSD)為2.29拜(2.966)。實驗的顆粒狀物考慮適合呼吸的顆粒狀物。在體重,食物消耗,眼科學(xué),血液學(xué),臨床化學(xué),或器官重量方面沒有不利的影響。在研究中有181例死亡,其中大多數(shù)和象征著呼吸損傷的臨床跡象有關(guān),呼吸損傷的臨床跡象包括喘息,噼啪聲,和喘氣呼吸,是在所有兩性霉素B治療組的動物中觀察到。一例死亡過早地發(fā)生,因此不認(rèn)為這例死亡和治療有關(guān)。和兩性霉素B給藥相關(guān)的肺中尸體解剖研究結(jié)果包括塊狀物,粘附,不正常的內(nèi)含物,增大的面積/焦點,淺色焦點,實變,還有暗色焦點,和暗色,變色的或多孔肺。在第六組(高劑量)的兩個動物的氣管或支氣管中注意到不正常的內(nèi)含物。緊接著約一個月的恢復(fù)階段,第三組(低劑量)一只雌性動物中發(fā)現(xiàn)肺粘附。通過顯微鏡觀察,在給藥兩性霉素B的動物肺內(nèi)的發(fā)現(xiàn)包括肺炎,胸膜炎,葉段不張,支氣管/細支氣管內(nèi)腔滲出液,支氣管粘膜增生,增加的炎性細胞浸潤,肺泡發(fā)炎,和嗜曙紅細胞浸潤,除此之外還有機能性充血/出血。在主要研究中,在第3組至第6組的IIO只動物中的17只中,發(fā)現(xiàn)肺炎/胸膜炎,不張或肺泡發(fā)炎。在肺中發(fā)現(xiàn),尸體解剖和組織學(xué)之間有關(guān)聯(lián),特別是在粘附和胸膜炎之間;并且在塊狀物,實變,增大的面積/焦點,或不正常的內(nèi)含物和肺炎之間。次于肺炎,其他發(fā)現(xiàn)包括脾和肝中伴隨發(fā)炎的壞死,胸骨和股骨內(nèi)增加的粒細胞生成,淋巴結(jié)樣組織萎縮,周圍肝細胞空泡形成和腎上腺皮質(zhì)細胞彌漫性增生。在兩性霉素B治療組之間,這些發(fā)現(xiàn)的發(fā)生率或嚴(yán)重性方面沒有顯著的區(qū)別。接著約一個月的恢復(fù)階段,在給藥兩性霉素B的一些動物中仍舊呈現(xiàn)極微的或輕微的支氣管粘膜增生。動物344的肺中有慢性發(fā)炎和胸膜炎,344為恢復(fù)研究中第3組和第4組18只動物中的一只。炎癥特征為淋巴細胞集中和著色巨噬細胞的聚集。毒性動力學(xué)分析揭示最大血漿濃度一般隨著劑量而增加,并且一般在給藥中止的4小時之內(nèi)達到。在空氣或載體對照樣品中檢測不到兩性霉素B的可量化水平??傊瑑H僅嘴部給藥兩性霉素B,兩性霉素B的劑量達到21.64nig/kg/劑量,產(chǎn)生象征著呼吸損傷的臨床跡象和所有兩性霉素B治療組許多動物的過早死亡,包括第5組和第6組的所有動物。在所有劑量,兩性霉素B的吸入給藥與氣管粘膜增生有關(guān),與腔滲出液和/或彌漫性炎癥細胞浸潤有關(guān);并且在肺內(nèi)兩性霉素B的吸入給藥與肺炎,胸膜炎,葉段不張,支氣管/細支氣管內(nèi)腔滲出液,支氣管粘膜增生及增加的炎性細胞浸潤,肺泡發(fā)炎和嗜曙紅細胞浸潤有關(guān),除此之外還與機能性充血/出血有關(guān)。約一個月的恢復(fù)階段后,氣管粘膜增生和肺的發(fā)炎的發(fā)生率和嚴(yán)重性方面有下降。實施例15每曰或每周給藥干粉末對大鼠的毒理學(xué)研究這個實施例包括測定大鼠體內(nèi)兩性霉素B兩個不同干粉末批次的毒性,在吸入給藥兩個不同的劑量方法之后。獲得的信息用于為隨后的毒性研究選擇劑量水平和/或劑量方法。包含50wt。/。活性成分的兩性霉素B粉末利用實施例2中描述的工藝制備。得到的粉末具有的特性在下表10中顯示。此外,如圖24所示,應(yīng)用吸入裝置,通過藥物-特性氣霧劑粒子尺寸對重量粒子尺寸分析測量,粉末是不均勻的,吸入裝置在美國專利申請10/298,177中陳述,其內(nèi)容全文并入作為參考。<table>tableseeoriginaldocumentpage123</column></row><table>NA-不可獲得90只雄性大鼠被分配為IO個劑量組并且治療,如下表ll所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage124</column></row><table>*=包含50wt。/。兩性霉素B的干粉末制劑A-用兩性霉素B批次4001T給藥B-用兩性霉素B批次4019T給藥N/A^不可應(yīng)用的動物72(第9組)在給藥開始之前被動物91替代用僅暴露嘴技術(shù)對動物給藥,按上表11每天給藥一次,每次1小時。完成了下面的研究臨床觀察,體重,血液學(xué),臨床化學(xué),器官重量,組織病理學(xué),毒性動力學(xué),和生物分析化學(xué)。第1組和第6組的載體制劑氣霧劑的全組平均暴露濃度分別為2.23和2.11mg/L。第2組,第4組,第7組,和第9組第一天的兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度分別為1.01,0.88,1.01,和0.88mg/L,并且這四組以后天的兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度分別為0.18,0.17,0.17,禾口0.18mg/L。第3組,第5組,第8組,和第IO組兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度分別為2.25,2.33,2.51,禾口2.41mg/L。第2組,第4組,第7組,和第9組第一天的單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均暴露室濃度分別為0.353,0.306,0.353,和0.306mg/L,并且這四組以后天的單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均暴露室濃度分別為0.0684,0.0598,0.0615,和0.0783mg/L。第3組,第5組,第8組,和第10組單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均暴露室濃度分別為0.856,0.927,0.963,和0.987mg/L。第1組和第6組載體制劑的全組平均估計達到劑量分別為72.79和66.34mg/kg/天。第2組,第4組,第7組,和第9組第一天的兩性霉素B制劑的全組平均估計達到劑量分別為33.44,29.14,33.44,和28.95mg/kg,并且這四組以后天的兩性霉素B制劑的全組平均估計達到劑量分別為2.25,5.55,5.22,和5.49mg/kg。第3組,第5組,第S組,和第10組兩性霉素B制劑的全組平均估計達到劑量分別為74.85,75.00,77.18,禾Q77.41mg/kg/劑量。第2組,第4組,第7組,和第9組第一天的單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均估計達到劑量分別為11.69,10.13,11.69,和10.07mg/kg,并且這四組以后天的單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均估計達到劑量分別為2.25,1.96,1.89,禾B2.38mg/kg。第3組,第5組,第8組,和第10組單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均估計達到劑量分別為24.45,29.97,29.91,和30.60。粒子分布數(shù)據(jù)顯示第1組69.7%的載體氣霧劑粒子和第6組77.6%載體氣霧劑粒子小于3.5/mi,并且這兩組的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑(MMAD)(土幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD))分別為1.38jam(2.880)和1.43Mm(2.881)。第一天,第2組63.0y。的兩性霉素B制劑顆粒狀物,第4組69.2%的兩性霉素B制劑顆粒狀物,第7組63.0%的兩性霉素B制劑顆粒狀物,和第9組69.2%的兩性霉素B制劑顆粒狀物小于3.5/mi,伴隨著這些組第一天的MMAD(GSD)分別為1.36ptm(4.603),1.54拜(2.502),1.36ptm(4.603),和1.54拜(2.502)。以后的天,第2組,第4組,第7組,和第9組分別77.2%,69.8%,71.3%,和61.3%的兩性霉素B制劑顆粒狀物小于3.5pm,伴隨著這些組的MMAD(GSD)分別為0.79pm(4.541),1.75/rni(2.455),1.56]Um(3.618),和2.16jam(3.228)。第3組,第5組,第8組,和第10組分別69.2%,63.4%,64.7%,和61.8。/。的兩性霉素B制劑顆粒狀物小于3.5pm,伴隨著這些組的MMAD(GSD)分別為0.95/mi(4.344),1.44/mi(4.312),1.10/mi(4.759),和1.52pm(4.233)。對于單獨的兩性霉素B(分析測定),第一天,第2組,第4組,第7組,和第9組分別56.4%,61.9%,56.4%,和61.9%的氣霧化粒子小于3.5/mi,伴隨著這些組的MMAD(GSD)分別為1.58/wn(3.563),1.71ptm(3.309),1.58/xm(3.563),和1.71pm(3.309)。以后的天,第2組,第4組,第7組,和第9組分別66.8%,57.4%,62.0%,和63.0%的氣霧化粒子小于3.5/mi,伴隨著這些組的MMAD(GSD)分別為1.09,(4.181),1.95jum(3.386),1.42/xm(3.372),和1.83/xm(3.075)。對于第3組,第5組,第8組,和第10組,分別61.9%,57.6%,63.8%和61.5。/。的單獨的兩性霉素B(分析測定)小于3.5/mi,伴隨著這些組MMAD(GSD)分別為1.30/rni(4.208),1.77/rni(3.782),1.20拜(4.608),和1.58jwn(4.097)。與兩性霉素B的吸入相關(guān)的尸體解剖研究的結(jié)果包括肺中暗色焦點,暗色,變紅或多孔肺,氣管內(nèi)不正常的內(nèi)含物和擴大的支氣管的和頸淋巴結(jié)。另外,過早殺死的動物中注意到腫脹的胃和腸。組織學(xué)評估揭示了在大多數(shù)的用兩性霉素B兩個批次治療的動物中有彌漫性粘膜增生,通過吸入在兩個給藥方法給藥兩性霉素B兩個批次。與第一個給藥方法(在第l,2,和3天吸入給藥兩性霉素B)相比,第二個給藥方法(在第1,8,和15天吸入給藥兩性霉素B)的粘膜增生的嚴(yán)重性增加。在批次4001T(A)和批次4019T(B)之間,這個研究結(jié)果的發(fā)生率和嚴(yán)重性方面沒有顯著的差異。通過吸入給藥兩性霉素B,預(yù)料在氣管內(nèi)有粘膜下炎癥細胞浸潤和腔滲出液。這些研究結(jié)果通常在動物的氣管內(nèi)看到,這些動物用第二個給藥方法(在第l,8,和15天吸入給藥兩性霉素B)治療。在第一個給藥方法組,這些研究結(jié)果的發(fā)生率比較低,并且缺乏清楚的劑量-響應(yīng)關(guān)系,認(rèn)為這些情況歸因于這個方法(在第l,2,和3天吸入給藥兩性霉素B,在第4天處死動物)的短的持續(xù)時間。在肺中顯示支氣管內(nèi)腔滲出液,支氣管肺炎,和支氣管周的/細支氣管周的發(fā)炎或炎癥細胞浸潤,并且也是給藥兩性霉素B的預(yù)料的研究結(jié)果。在有支氣管肺炎的動物中,也有支氣管滲出液出現(xiàn),并且認(rèn)為支氣管肺炎由于次級感染引起的,次級感染由較大的氣道插頭產(chǎn)生。第一給藥方法組中肺的支氣管腔滲出液的較低發(fā)認(rèn)為由于該方法的短持續(xù)時間。與低劑量組相比,在高劑量組,肺的研究結(jié)果的發(fā)生通常比較高。毒性動力學(xué)分析揭示血漿濃度隨著劑量而增加。在載體對照樣品中檢測不到兩性霉素B的可量化水平??傊?,僅嘴給藥的方式給藥兩性霉素B(單獨),兩性霉素B的劑量達到30.60mg/kg/劑量,產(chǎn)生象征著呼吸損傷和/或發(fā)炎的臨床跡象和3只動物的過早死亡。在所有劑量的兩性霉素B的吸入給藥與肺內(nèi)的氣管彌漫性粘膜增生,粘膜下炎癥細胞浸潤,氣管和支氣管內(nèi)腔滲出液,支氣管肺炎以及支氣管周的/細支氣管周的發(fā)炎或炎癥細胞浸潤有關(guān)。對于第二個給藥方法(在第1,8,和15天吸入給藥兩性霉素B),這些研究結(jié)果的嚴(yán)重性是增加的。肺的研究結(jié)果與肺重量的明顯的劑量-相關(guān)增加有關(guān)聯(lián),這對于用第二個方法的動物來說,更加顯著。這個增加在用兩性霉素B批次4001T治療的動物中是非常顯著的。實施例16每天或每周給藥在大鼠體內(nèi)兩種千粉末的毒性這個實施例包括測定在大鼠體內(nèi)兩性霉素B兩種不同批次的干粉末的毒性,在用兩個不同的給藥方法吸入給藥之后。包含50wt。/c活性成分的兩性霉素B粉末利用實施例8中描述的工藝制備。得到的粉末具有的特性在下表12中顯示。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage128</column></row><table>NA-不可獲得120只雄性大鼠被分配為IO個劑量組并且治療,如下表13所示:<table>tableseeoriginaldocumentpage129</column></row><table>*=包含50wt。/。兩性霉素B的干粉末制劑A二用兩性霉素B批次N020226(高結(jié)晶度)給藥B-用兩性霉素B批次N020227(高無定形度)給藥N/A:不可獲得的備用的動物標(biāo)號121-126按照上表13用僅暴露嘴給藥技術(shù)對動物給藥,每天一次,每次一小時。完成了下面的研究臨床觀察,體重,測量呼吸過程,血液學(xué),臨床化學(xué),組織病理學(xué),毒性動力學(xué),和生物分析化學(xué)。第i組和第6組第一天載體制劑的全組平均暴露室濃度為0.91mg/L并且以后天的載體制劑的全組平均暴露室濃度分別為0.22和0.17mg/L。第2組,第4組,第7組,和第9組第一天的兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度分別為0.31,0.36,0.31,禾B0.36mg/L,并且這四組以后天的兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度分別為0.056,0.078,0.073,和0.088mg/L,并且第3組,第5組,第8組,和第10組第一天兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度分別為1.04,0.94,1.04,和0.94mg/L,并且這四組以后天的兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度分別為0.18,0.21,0.18,禾n0.19mg/L。第2組,第4組,第7組,和第9組第一天的單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均暴露室濃度分別為0.125,0.124,0.125,和0.124mg/L,并且這四組以后天的單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均暴露室濃度分別為0.0166,0.0249,0.0277,和0.0278mg/L,并且第3組,第5組,第8組,和第IO組單獨兩性霉素B(分析測定)第一天的全組平均暴露室濃度分別為0.455,0.330,0.455,和0.330mg/L,并且這四組以后天的單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均暴露室濃度分別為0.0686,0.0717,0.0724,和0.0687mg/L。第i組和第6組第一天載體制劑的全組平均估計達到劑量分別為29.29和29.40mg/kg并且這兩組以后天的載體制劑的全組平均估計達到劑量分別為6.87和4.98mg/kg。第2組,第4組,第7組,和第9組第一天的兩性霉素B制劑的全組平均估計達到劑量分別為10.03,11.63,9.93,禾卩11.65mg/kg,并且這四組以后天的兩性霉素B制劑的全組平均估計達到劑量分別為1.80,2.50,2.19,和2.66mg/kg,并且第3組,第5組,第S組,和第IO組第一天兩性霉素B制劑的全組平均估計達到劑量分別為33.48,30.54,33.83,和30.58mg/kg,并且這四組以后天的兩性霉素B制劑的全組平均估計達到劑量分別為5.75,6.76,5.47,禾卩5.81mg/kg。第2組,第4組,第7組,和第9組第一天的單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均估計達到劑量分別為4.04,4.01,4.00,和4.01mg/kg,并且這四組以后天的單獨兩性霉素B(分析測定)的全組平均估計達到劑量分別為0.53,0.79,0.83,和0.84mg/kg,并且第3組,第5組,第8組,和第10組第一天單獨兩性霉素B(分析測定)第一天的全組平均估計達到劑量分別為14.65,10.72,14.80,和10.74mg/kg,并且這四組以后天的分別為2.19,2.31,2.20,和2.21mg/kg。粒子尺寸分布數(shù)據(jù)顯示第1組和第6組第一天70.8%的載體氣霧劑粒子小于3.5Mm,并且以后天的第1組77.1%的載體氣霧劑粒子和第6組75.6%載體氣霧劑粒子小于3.5/mi,伴隨著第一天空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑(MMAD)(士幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD》為1.56pm(2.832),并且伴隨著以后天這兩組的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑(MMAD)(士幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD))分別為0.84/mi(3.446)和1.24]imi(2.948)。第一天,第2組,第4組,第7組,和第9組分別65.1%,75.7%,65.1%,和75.7%的兩性霉素B制劑氣霧劑粒子小于3.5/rni,伴隨著這些組第一天的MMAD和(GSD)分別為1.77/mi(3.787),2.06拜(2.805),1,77拜(3.787),和2.06/rni(2.805),并且以后的天,第2組,第4組,第7組,和第9組分別52.2%,79.4%,65.8%,禾H75.2%的兩性霉素B制劑氣霧劑粒子小于3.5jum,伴隨著這些組后來天的MMAD和(GSD)分別為2.88/mi(2.269),1.81/xm(2.540),1.97—2.719),和2.14脾(2.2S8)。第一天,第3組,第5組,第8組,和第10組分另U72.0%,78.9%,72.0%,和78.9°/0的兩性霉素B制劑顆粒狀物小于3.5;mi,伴隨著這些組第一天的MMAD和(GSD)分別為2.07,(2.368),1.87/rni(2.464)'2.07/xm(2.368),和1.87/xm(2.464),并且第3組,第5組,第8組,和第10組后來天分別68.6%,76.0%,72.4%,和77.5。/。的兩性霉素B制劑顆粒狀物小于3.5Mm,伴隨著這些組后來天的MMAD和(GSD)分別為1.67/xm(3.466),1.77拜(2.378),1.42jitm(2.965),和1.40,(2.911)。對于單獨的兩性霉素B(分析測定),第一天,第2組,第4組,第7組,和第9組分別70.4%,72.6%,70.4%,和72.6%的顆粒狀物小于3.5jum,伴隨著這些組第一天的MMAD和(GSD)分別為1.80/mi(2.563),2.06jum(2.702),1.80拜(2.563),和2.06拜(2,702)。以后的天,第2組,第4組,第7組,和第9組分別68.0%,75.3。/。,77.3%,和63.0%的顆粒狀物小于3.5/mi,伴隨著這些組以后天的MMAD(GSD)分另寸為2.05/xm(2.230),2.01/rni(2.752),1.99]iim(2.005),和2.60/mi(2.463)。第一天,第3組,第5組,第8組,和第10組,分別55.4%,69.9%,68.0%和69.6%的顆粒狀物小于3.5/xm,伴隨著這些組第一天的MMAD和(GSD)分別為2.74/mi(2.116),2.03itmi(2.788),2.05pm(2.230),禾Q2.03jLtm(2.788),并且以后的天,第3組,第5組,第8組,和第10組,分別67.9%,63.6%,67.8%和63.3%的顆粒狀物小于3.5Mm,伴隨著這些以后天的MMAD和(GSD)分別為1.81/rni(2.428),1.94拜(3.310),1.92(2.402),和2.04拜(3.236)。毒性動力學(xué)分析揭示兩性霉素B的血漿濃度一般隨著劑量增加。在載體對照樣品中檢測不到兩性霉素B的可量化水平。沒有顯著的尸體解剖研究結(jié)果與兩性霉素B的吸入相關(guān)。組織學(xué)評估揭示了在用兩個給藥方法的兩性霉素B兩個批次干粉末治療的許多動物中有彌漫性粘膜增生。與兩性霉素BN020226(高結(jié)晶體)相比,兩性霉素BN020227(高無定形)的肥大的發(fā)生率和嚴(yán)重性增加。當(dāng)與第一個給藥方法(在第1,2,和3天)相比時,第二個給藥方法(在第1,8,和15天)時,發(fā)現(xiàn)肥大的發(fā)生率和嚴(yán)重性看上去有小幅度的增加。當(dāng)吸入兩性霉素B時,也預(yù)期到彌漫性氣管炎癥。與兩性霉素BN020226(高結(jié)晶體)相比,兩性霉素BN020227(高無定形)的損害的發(fā)生率和嚴(yán)重性是增加的。與第一個給藥方法(每日的)相比時,第二個給藥方法(每周的)時,發(fā)現(xiàn)損害的發(fā)生率是降低的。只在用兩性霉素BN020227(高無定形)治療的動物中發(fā)現(xiàn)氣管和支氣管腔滲出液??傊?,僅僅嘴給藥兩性霉素B(單獨),兩性霉素B的劑量達到14.80mg/kg/劑量,產(chǎn)生象征著呼吸損傷的臨床跡象。兩性霉素B干粉末制劑BN020226(高結(jié)晶體)和BN020227(高無定形)的吸入,在第l,2,和3天或第1,8,15天,與氣管和支氣管粘膜增生,氣管發(fā)炎,支氣管粘膜炎癥細胞浸潤及氣管和支氣管腔滲出液有關(guān)。與兩性霉素BN020226(高結(jié)晶體)相比,用兩性霉素BN020227(高無定形)時,發(fā)生率和嚴(yán)重性的研究結(jié)果是增加的。與第一個給藥方法(在第1,2,和3天)相比,在第二個給藥方法(在第1,8,和15天)時,雖然氣管發(fā)炎的嚴(yán)重性和發(fā)生率是降低的,但是在肥大的發(fā)生率和嚴(yán)重性方面有小幅度的增加。在兩者之中的任一給藥方法,用兩性霉素BN020227(高無定形)治療的高劑量和低劑量組之間,幾乎無差別。用兩性霉素BN020226(高結(jié)晶體)治療的組,對于兩個給藥方法,低劑量組的結(jié)果比較不嚴(yán)重,并且發(fā)生率降低。實施例17每天和每周給藥兩種干粉末在犬體內(nèi)的毒性這個實施例包括測定兩性霉素B兩個不同批次干粉末在比格爾犬體內(nèi)的毒性,在通過吸入途徑每周給藥之后。包含50wt。/?;钚猿煞值膬尚悦顾谺粉末利用實施例8中描述的工藝制備。得到的粉末具有的特性在下表14中顯示。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage134</column></row><table>NA:不可獲得四只雄性和4只雌性比格爾犬被分配為4個劑量組并且治療,如下表15所示。表15<table>tableseeoriginaldocumentpage134</column></row><table>*=包含50wty。兩性霉素B的干粉末制劑^用兩性霉素B批次N020226(高結(jié)晶度)給藥b-用兩性霉素B批次N020227(高無定形度)給藥動物按上表15用密閉接合的面罩(與嘴管相聯(lián))系統(tǒng)給藥,每天一次,每次30分鐘。完成了下面的研究臨床觀察,體重,食物消耗,血液學(xué),臨床化學(xué),呼吸過程測量(潮流氣量,呼吸速率,每分鐘呼吸體積),組織病理學(xué),毒性動力學(xué),和生物分析化學(xué)。第一天載體制劑的全組平均暴露室濃度為1.34mg/L并且后來的全組平均暴露室濃度為0.31mg/L。第一天,第2組,第3組,和第4組的兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度分別為0.73,1.80,和1.58mg/L,并且后來這些組的兩性霉素B制劑的全組平均暴露室濃度分別為0.13,0.33,和0.33mg/L。第2組,第3組,和第4組第一天的單獨的兩性霉素B(分析測量)的全組平均暴露室濃度分別為0.236,0.521,和0.796mg/L并且后來這些組的單獨的兩性霉素B(分析測量)的全組平均暴露室濃度分別為0.0427,0.120,和0.154mg/L。第一天載體制劑的全組平均(性別混合)估計達到的劑量水平為29.3mg/kg并且后來的全組平均(性別混合)估計達到的劑量水平為6.9mg/kg。第一天,第2組,第3組,和第4組的兩性霉素B制劑的全組平均(性別混合)估計達到的劑量水平分別為16.3,45.1,和33.0mg/kg并且后來這些組的兩性霉素B制劑的全組平均(性別混合)估計達到的劑量水平分別為2.9,8.1,禾卩6.7mg/kg。第一天,第2組,第3組,和第4組單獨的兩性霉素B(分析測量)制劑的全組平均(性別混合)估計達到的劑量水平分別為5.3,13.0,和16.0mg/kg并且后來這些組的單獨的兩性霉素B制劑的全組平均(性別混合)估計達到的劑量水平分別為0.96,3.0,和3.2mg/kg。粒子尺寸分布數(shù)據(jù)顯示,第一天81.1%的載體氣霧劑粒子小于5/mi并且后來78.9%的載體氣霧劑粒子小于5/rni,伴隨著第一天0.84/mi(4.553)的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑(MMAD)(±幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD))和后來1.41/xm(3.104)的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑(MMAD)(士幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD))。第一天,第2組,第3組,和第4組分另ij69.0y。,83.1%,和43.3y。的兩性霉素B制劑顆粒狀物小于5/mi,并且后來這些組分別85.9%,67.6%,和57.3%的兩性霉素B制劑顆粒狀物小于5/mi,伴隨著第一天這些組的分別1.96/xm(2.406),1.17/xm(2.725),禾口3.26/xm(2.789)的MMAD和(GSD),和后來這些組的分別0.69/mi(4.623),1.62拜(3.317),和2.85/mi(2.692)的MMAD和(GSD)。第一天,第2組,第3組,和第4組分別57.7%,73.6%,和46.2%的單獨的兩性霉素B(分析測量)顆粒狀物小于5/mi,并且后來這些組分別72.6%,63.6%,和62.8。/。的單獨的兩性霉素B分析測量)顆粒狀物小于5/mi,伴隨著第一天這些組的分別2.20pm(2.644),1.79/mi(2.378),和3.32(2.482)的MMAD和(GSD),和后來這些組的分別1.96jam(2.507),2.00/mi(2.526),和2.48,(2.168)的MMAD和(GSD)。在體重,血液學(xué),臨床化學(xué),食物消耗或呼吸過程測量常數(shù)方面沒有觀察到顯著的變化。所有尸體解剖的研究結(jié)果象征著在這個生長時期的犬體內(nèi)自然地發(fā)生的背景研究結(jié)果。沒有尸體解剖研究結(jié)果由兩性霉素B的給藥引起的。所有組織病理學(xué)的研究結(jié)果象征著在這個生長時期的犬體內(nèi)自然地發(fā)生的背景研究結(jié)果。沒有組織病理學(xué)研究結(jié)果由兩性霉素B的給藥引起的。毒性動力學(xué)分析表明在所有治療動物(除了第4組動物4M)的血漿中檢測到兩性霉素B的可量化水平。在所有劑量治療組中檢測的水平相當(dāng)。在載體對照樣品中檢測不到兩性霉素B的可量化水平??傊?,通過吸入對比格爾犬給藥兩性霉素B制劑(或分析測量的兩性霉素B)),每周給藥一次,劑量達到8.2(3.2)mg/kg,在所有給藥劑量的組中(包括載體對照),吸入給藥與流涎癥有關(guān)。在第2組和第4組個別的動物體內(nèi)也觀察到包括變紅的齒齦的非主要的臨床跡象,同時在第2組的一只動物體內(nèi)也觀察到變紅的耳朵。對于第3組的一只動物,注意到嘔吐的和反胃的食物。在體重,食物消耗,血液學(xué),臨床化學(xué),或呼吸過程測量曲線方面沒有觀察到變化。沒有尸體解剖或組織病理學(xué)研究結(jié)果由兩性霉素B的給藥引起的。粒子尺寸分布測量揭示,與兩性霉素B批次N020226(高結(jié)晶體)相比,在高劑量水平時兩性霉素B批次N020227(高無定形)有顯著地比較大的粒子尺寸。實施例18大鼠體內(nèi)14天的吸入毒性研究這個實施例包括14天的兩性霉素B制劑的毒理學(xué)研究,兩性霉素B利用實施例2中的方法制備。用僅僅暴露嘴技術(shù)對八十只大鼠給藥,在0mg/kg(空氣對照或只有載體),2.5mg/kg,10mg/kg或25mg/kg的靶劑量每天給藥60分鐘,至少給藥14天?;謴?fù)的動物在給藥后保留14天的恢復(fù)階段。在研究的第l天和第14天,在給藥之前,給藥后2小時,和給藥后4小時從指定的僅僅給藥載體的動物和高劑量組動物(25mg/kg)獲得用于毒性動力學(xué)分析的血液樣品。在14天的恢復(fù)階段過程中,在恢復(fù)的第7天和第14天,從雄性動物也獲得用于毒性動力學(xué)分析的血液樣品,并且由于雌性動物的體重比較低,只在恢復(fù)的第14天從雌性動物獲得用于毒性動力學(xué)分析的血液樣品。在14天的治療階段(第15天)的結(jié)束或14天的恢復(fù)階段的結(jié)束(第29天)時,所有研究的動物遭受詳細的尸體解剖過程。在尸體解剖過程中,從每一個動物身上得到用于毒性動力學(xué)分析的肺組織樣品。血漿中兩性霉素B的濃度利用液相色譜-質(zhì)譜分光光度計串聯(lián)(LC-MS/MS)的方法(較低的定量限度[LLQ:HOng/mL)測定,并且肺組織中兩性霉素B的濃度利用高效液相色譜(HPLC)和可見光檢測器(LLQ=4/xg/g)測定。兩性霉素B在所有取樣動物的血漿和肺組織中檢測到,取樣的動物接受了兩性霉素B粉末。對于兩種性別的動物,血漿或肺中依賴于劑量的濃度-時間量變曲線是相似的。給藥14天后,兩性霉素B在血漿中沒有明顯的蓄積,并且通過發(fā)表的靜脈(IV)給藥后兩性霉素B的消除半衰期可以預(yù)料兩性霉素B在血漿中是降低的。血漿C^x值為給藥類似IV劑量的脂質(zhì)體兩性霉素B時發(fā)現(xiàn)的血漿Cmax的1/1000或1/3000。肺濃度隨著劑量的增加而增加,但是不成比例。在給藥結(jié)束時平均肺濃度比那些報道的肺中兩性霉素B的濃度高10至30倍,這些報道的肺濃度是在靜脈給藥類似劑量的兩性霉素B脂質(zhì)體后的濃度。在這個實施例中,肺組織暴露顯著地比以前長期靜脈給藥后報道的大。在恢復(fù)期間,肺組織濃度按比率降低,這個比率暗示了分別在1.1和12.4mg/kg劑量水平時,兩性霉素B消除半衰期的值為22和34天,與報道的肺中兩性霉素B相似,在IV和吸入給藥兩性霉素B脂質(zhì)體后。實施例19大體內(nèi)14天的吸入毒性研究這個實施例包括評定連續(xù)14天吸入給藥后兩性霉素B制劑在犬體內(nèi)的肺和系統(tǒng)毒性,該兩性霉素B制劑利用實施例2中的方法制備,和經(jīng)過14天的恢復(fù)階段后高劑量時28只犬(14M,14F)體內(nèi)任何效果的可反轉(zhuǎn)性。用密閉的面罩系統(tǒng)在1.4,5.6,禾Q11.5mg/kg的劑量給藥活性藥物,每天給藥30分鐘。在研究的第一天和第14天,在暴露之前,暴露后2,4,8,12,和24小時從指定的給藥載體的動物和高劑量組動物獲得用于毒性動力學(xué)分析的血液樣品并且在14天的恢復(fù)階段過程中的每一天,也從上述的動物獲得用于毒性動力學(xué)分析的血液樣品。用于主要研究的動物在第15天,恢復(fù)的動物在第29天被處死并且進行尸體解剖,在尸體解剖過程中得到每個動物的用于毒性動力學(xué)分析的右前葉。血漿中兩性霉素B的濃度利用液相色譜-質(zhì)譜分光光度計串聯(lián)(LC-MS/MS)的方法(較低的定量限度[LLQ]40ng/mL)測定,并且肺組織中兩性霉素B的濃度利用高效液相色譜(HPLC)和可見光檢測器(LLQ=4/xg/g)測定。給藥14天后,兩性霉素B在血漿中蓄積,并且通過本實施例觀察得的血漿消除半衰期值預(yù)料兩性霉素B在血漿中是降低的。接受11.5mg/kg兩性霉素B的犬的平均血漿Cn^值是報道的接受靜脈給藥兩性霉素去氧膽酸鹽的犬的平均血漿Cn^值的1/25,并且是在相同時期接受每天IV給藥兩性霉素B脂質(zhì)體的犬的平均血衆(zhòng)Cmax的1/1000。兩性霉素B肺濃度隨著劑量的增加而增加,但是不成比例。在暴露時期結(jié)束時平均兩性霉素B肺濃度比那些報道的平均兩性霉素B肺濃度嵩22至40倍,那些報道的平均兩性霉素B肺濃度是在IV給藥兩性霉素B去氧膽酸鹽或兩性霉素B脂質(zhì)體后的平均肺濃度。在這個對犬的研究中,肺組織暴露顯著地比以前報道的長期IV給藥后大。在恢復(fù)期間,肺組織濃度按比率降低,這個比率暗示了表觀的18.8天的消除半衰期,與報道的通過IV和吸入對大鼠給藥兩性霉素B脂質(zhì)體后的消除半衰期相似。實施例20藥物產(chǎn)物穩(wěn)定性研究對兩性霉素B粉末的穩(wěn)定性進行評價,如下表16所示。在所有情況下,粉末都裝在HPMC膠囊中。膠囊放在25ccHDPE瓶中。每個瓶子放在雙層袋中并且干燥劑放入外袋中。<table>tableseeoriginaldocumentpage140</column></row><table>這個穩(wěn)定性觀察的摘要和結(jié)論在下面提供。外觀在所有試驗點和所有狀態(tài),三批全部符合外觀標(biāo)準(zhǔn)。5wt。/。的兩性霉素B:對于批次10017,開始時的結(jié)果是每mg粉末含兩性霉素B0.053mg。在18個月以后,在兩個貯藏條件下,結(jié)果從每mg粉末含兩性霉素B0.049至0.053mg。50wt。/。的兩性霉素B:對于批次10029,開始時的結(jié)果是每mg粉末含兩性霉素B0.507mg。在18個月以后,在兩個貯藏條件下,結(jié)果從每mg粉末含兩性霉素B0.469至0.508mg。對于批次10247,開始時的結(jié)果是每mg粉末含兩性霉素B0.470mg。在2-8。C貯藏9個月以后,結(jié)果從每mg粉末含兩性霉素B0.448至0.446mg。在25°C/60%RH的貯藏條件下,在l月,3月,和6月的結(jié)果分別為每mg粉末含兩性霉素B0.441,0.399,和0.385mg。水分開始時,三個批次的結(jié)果在3-5wt%之間變化。在正常和加速貯藏條件下貯藏后,含水量在3-6wt。/。之間變化。發(fā)射劑量開始時,所有批次的平均ED在89-94%(8.9mg/膠囊至10.0mg/膠囊)之間變化。在正常和加速貯藏條件下貯藏后,結(jié)果在88-96%(8.8mg/膠囊至10.2mg/膠囊)之間變化。全氟碳化合物殘留(PFOB)在裝入膠囊之前,在大量粉末上完成PFOB的檢測。所有檢驗批次的大量粉末的結(jié)果O.lwt%。在12月時間點上檢測批次10017和10029的PFOB,兩批的水平<0.05-0.1wt%。需氧計數(shù)和特定病原在開始的試驗點,對所有批次進行了微生物限制試驗。在25°C/60%RH的忙藏條件下,貯藏12個月后,對批次10017和10029進行了微生物限制試驗,并且結(jié)果符合驗收標(biāo)準(zhǔn)。純度所有批次開始時標(biāo)準(zhǔn)化范圍的主要峰純度在93.6-96.4%之間變化。在正常和加速貯藏條件下貯藏后,主要峰純度在94.0-96.5%之間變化。氣霧劑粒子尺寸MMAD:開始時批次的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑(MMAD)結(jié)果在2.7-3.0/mi之間變化。在正常和加速貯藏條件下貯藏后,MMAD在2.6-3.1/mi之間變化。結(jié)論文中顯示的穩(wěn)定性結(jié)果證明在包裝并在2-8'C貯藏時,5wt。/。的兩性霉素B粉末(10mg)和50wt%的兩性霉素B粉末(10mg)是穩(wěn)定的并且顯示可接受的產(chǎn)物特性,產(chǎn)物特性包括外觀,兩性霉素B含量,純度,含水量,微生物特性,和氣霧劑特性。實施例21在高濕條件暴露后的特性這個實施例包括明確合適的時間段,合適的時間段是指在70%RH的條件下,膠囊在袋外的時間,并且膠囊仍舊符合發(fā)射劑量驗收標(biāo)準(zhǔn)(ED。/。25。/。并且mg)。檢查了兩種制劑5wt%的兩性霉素B粉末(批次X1429)和50wt。/。的兩性霉素B粉末(批次N020242)。制劑裝在放在袋中的膠囊內(nèi)。為了測量ED,應(yīng)用吸入器裝置,該裝置在美國專利申請10/298,177中描述,其內(nèi)容全文并入作為參考。該裝置在25°C/70%RH的條件下平衡。在啟動之前,膠囊以特定的間隔暴露在25°C/70%RH的條件下。在IO個時間點測量ED,每個制劑共測10個ED啟動,如下表17所表17<table>tableseeoriginaldocumentpage142</column></row><table>批次N020242的結(jié)果在下表18中顯示。表18ED(Q/oRSD)=8.66mg(4)ED范圍=8.28-9.43mg%ED(o/oRSD)=85%(4)%ED范圍=81-93%<table>tableseeoriginaldocumentpage143</column></row><table>批次X1429的結(jié)果在下表19中顯示。表19ED(%RSD)=9.16(2)ED范圍-8.88-9.35mg%ED(o/oRSD)=89%(2)%ED范圍=86-91%<table>tableseeoriginaldocumentpage144</column></row><table>上面的數(shù)據(jù)表明ED特性和增加的高濕度的暴露之間沒有相關(guān)。在高濕環(huán)境中,平均ED特性降低,但是仍舊符合驗收標(biāo)準(zhǔn)。批次N020242(50wt。/。的兩性霉素B制劑)的平均ED特性符合驗收標(biāo)準(zhǔn),但是不是所有單一的ED25。/。和2.5mg。選擇的實施例的摘要選擇的實施例的摘要在下表20所示。表20<table>tableseeoriginaldocumentpage145</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage146</column></row><table>表20(繼續(xù))<table>tableseeoriginaldocumentpage147</column></row><table>表20(繼續(xù))<table>tableseeoriginaldocumentpage148</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage149</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage150</column></row><table>雖然本發(fā)明的數(shù)個實施例已經(jīng)盡量描述的很詳細,并且考慮到一定的優(yōu)先的方案,其他方案也是可能的,并且顯示的方案的改變,變更和等效的對本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來說顯而易見,在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員閱讀說明書和研究繪圖之后。例如,在氣霧劑裝置中相關(guān)元件相對位置可以改變,并且彈性部件可以被更加剛性的或其他可移動的部件替代,以模仿彈性部件的作用。而且,通道不需要必須為大致上線性,如附圖中所示,但是例如可以為曲線型或角型。同樣,本文方案的各種特征可以多種方法混合,提供本發(fā)明附加的實施方案。進一步,為了描述清楚應(yīng)用了一定的術(shù)語,并非限制本發(fā)明。因此,呈送的與這個公開相關(guān)的任何權(quán)利要求不應(yīng)該限于本文優(yōu)先方案的描述,并且應(yīng)該包括所有這樣的改變,變更和等效,因為改變,變更和等效落入本發(fā)明的實質(zhì)和范圍。權(quán)利要求1.組合物,其包括包括至少約95wt%兩性霉素B的粒子,其中所述的粒子具有約1.1μm至約1.9μm的質(zhì)量中位直徑。2.如權(quán)利要求1所述的組合物,其中所述的質(zhì)量中位直徑為約1.2jwm至約1.8/un。3.如權(quán)利要求1所述的組合物,其中所述的粒子的至少約80wt%具有約1.1/mi至約1.9Mm的幾何直徑。4.如權(quán)利要求1所述的組合物,其中所述的粒子的至少約卯wt%具有約1.1pm至約1.9jum的幾何直徑。5.如權(quán)利要求l所述的組合物,其中所述的兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度。6.如權(quán)利要求l所述的組合物,其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。7.如權(quán)利要求l所述的組合物,其中所述的兩性霉素B具有至少約90%的結(jié)晶度。8.如權(quán)利要求1所述的組合物,其中所述的兩性霉素B具有約50%至約99%的結(jié)晶度。9.組合物,其包括包括至少約95wt。/。兩性霉素B的粒子,其中所述的粒子的至少約80wt。/。具有約1.1]um至約1.9/xm的幾何直徑。10.如權(quán)利要求9所述的組合物,其中所述的粒子的至少約90wty。具有約1.1/mi至約1.9jtmi的幾何直徑。11.如權(quán)利要求9所述的組合物,至約1.9pm的質(zhì)量中位直徑。12.如權(quán)利要求9所述的組合物,少約20%的結(jié)晶度。13.如權(quán)利要求9所述的組合物,少約70%的結(jié)晶度。14.如權(quán)利要求9所述的組合物,少約90%的結(jié)晶度。15.如權(quán)利要求9所述的組合物,50%至約99%的結(jié)晶度。其中所述的粒子具有約1.1/mi其中所述的兩性霉素B具有至其中所述的兩性霉素B具有至其中所述的兩性霉素B具有至其中所述的兩性霉素B具有約16.組合物,其包括包括兩性霉素B的粒子,其中所述的粒子具有小于約1.9]um的質(zhì)量中位直徑,及其中所述的兩性霉素B具有至少約20%的結(jié)晶度。17.如權(quán)利要求16所述的組合物,其中所述的質(zhì)量中位直徑為約0.5jtmi至約1.8pm。18.如權(quán)利要求16所述的組合物,其中所述的粒子的至少約80wt。/。具有小于約3/mi的幾何直徑。19.如權(quán)利要求16所述的組合物,wt。/。具有小于約3/mi的幾何直徑。20.如權(quán)利要求16所述的組合物,少約70%的結(jié)晶度。21.如權(quán)利要求16所述的組合物,少約90%的結(jié)晶度。22.如權(quán)利要求16所述的組合物,的結(jié)晶度為約50%至約99%。權(quán)利要求書第3/42頁其中所述的粒子的至少約90其中所述的兩性霉素B具有至其中所述的兩性霉素B具有至其中所述的粒子中兩性霉素B23.藥物組合物,其包括有效量的兩性霉素B,及藥學(xué)可接受的賦形劑,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子組成,該粒子的質(zhì)量中位直徑為約1.1至約1.9jum。24.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子制成,該粒子的質(zhì)量中位直徑為約1.2pm至約1.8jLtm。25.如權(quán)利要求23所述的組合物,其中所述的粒子的至少約80wty。具有約1.1Mm至約1.9/mi的幾何直徑。26.如權(quán)利要求23所述的組合物,其中所述的粒子的至少約卯wt。/。具有約1.1ptm至約1.9pm的幾何直徑。27.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的兩性霉素B具有至少約50%的結(jié)晶度。28.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。29.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的兩性霉素B具有至少約80%的結(jié)晶度。30.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括粒子。31.如權(quán)利要求30所述的藥物組合物,其中所述的粒子具有約1ptm至約6/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。32.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。33.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括具有小于約10/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,并且其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。34.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。35.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。36.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括金屬離子。37.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂和金屬離子。38.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括中空的和/或多孔的粒子。39.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括包含兩性霉素B的粒子,所述兩性霉素B處在由藥學(xué)可接受的賦形劑制成的基質(zhì)中。40.如權(quán)利要求39所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。41.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括干粉末。42.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物進一步包括推進劑。43.如權(quán)利要求42所述的藥物組合物,其中所述的推進劑包括至少一種氫氟烷烴。44.如權(quán)利要求23所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括具有約lpmi至約6Mm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在由藥學(xué)可接受的賦形劑制成的基質(zhì)中,并且其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。45.藥物組合物,其包括有效量的兩性霉素B,及藥學(xué)可接受的賦形劑,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子制成,并且其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有約1.1/mi至約1.9Mm的幾何直徑。46.如權(quán)利要求45所述的組合物,其中所述的粒子的至少約90wt。/。具有約1.1/mi至約1.9/mi的幾何直徑。47.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物由包含兩性霉素b的粒子制成,該粒子具有約1.2/xm至約1.8jum的質(zhì)量中位直徑。48.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的兩性霉素B具有至少約50%的結(jié)晶度。49.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。50.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的兩性霉素B具有至少約80%的結(jié)晶度。51.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括粒子。52.如權(quán)利要求51所述的藥物組合物,其中所述的粒子具有約1pm至約6/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。53.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。54.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括具有小于約io/rni的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,并且其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。55.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。56.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。57.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括金屬離子。58.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂和金屬離子。59.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括中空的和/或多孔的粒子。60.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在由藥學(xué)可接受的賦形劑制成的基質(zhì)中。61.如權(quán)利要求60所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。62.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括干粉末。63.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物進一步包括推進劑。64.如權(quán)利要求63所述的藥物組合物,其中所述的推進劑包括至少一種氫氟垸烴。.65.如權(quán)利要求45所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括具有約l/xm至約6/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。66.藥物組合物,其包括有效量的兩性霉素B,及藥學(xué)可接受的賦形劑,其中所述的兩性霉素B具有約20%至約9.9%的結(jié)晶度。67.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的兩性霉素B具有約70%至約98%的結(jié)晶度。68.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物由具有小于約3/im的質(zhì)量中位直徑的包含兩性霉素B的粒子制成。69.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物由具有小于約2/xm的質(zhì)量中位直徑的包含兩性霉素B的粒子制成。70.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子制成,并且其中該粒子的至少約80Wt。/。具有小于約3Mm的幾何直徑。71.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,并且其中該粒子的至少約90wt。/。具有小于約3^m的幾何直徑。72.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括粒子。73.如權(quán)利要求72所述的藥物組合物,其中所述的粒子具有小于約10/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。74.如權(quán)利要求72所述的藥物組合物,其中所述的粒子具有約1/mi至約6pm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。75.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。76.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。77.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。78.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括金屬離子。79.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂和金屬離子。80.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括中空的和/或多孔的粒子。81.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中。82.如權(quán)利要求81所述的藥物組合物,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。83.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括干粉末。84.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物進一步包括推進劑。85.如權(quán)利要求84所述的藥物組合物,其中所述的推進劑包括至少一種氫氟垸烴。86.如權(quán)利要求66所述的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包括具有約lpm至約6/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,并且其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中,并且其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。87.干粉末,其包括具有至少約20%的結(jié)晶度的兩性霉素B,其中所述的干粉末包括具有小于約10pon的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子。88.如權(quán)利要求87所述的干粉末,其中所述的兩性霉素B具有約70%至約90%的結(jié)晶度。89.如權(quán)利要求87所述的干粉末,其中所述的干粉末包括具有約1/mi至約6/an的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子。90.如權(quán)利要求87所述的干粉末,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子組成,該兩性霉素B具有小于約3pm的質(zhì)量中位直徑。91.如權(quán)利要求87所述的干粉末,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子組成,并且其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有小于約3/mi的幾何直徑。92.如權(quán)利要求87所述的干粉末,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。93.如權(quán)利要求87所述的干粉末,其進一步包括藥學(xué)上可接受的賦形劑。94.如權(quán)利要求93所述的干粉末,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。95.如權(quán)利要求93所述的干粉末,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。96.如權(quán)利要求93所述的干粉末,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括金屬離子。97.如權(quán)利要求93所述的干粉末,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂和金屬離子。98.如權(quán)利要求87所述的干粉末,其中所述的干粉末包括中空的和/或多孔的粒子。99.如權(quán)利要求87所述的干粉末,其中所述的干粉末包括包含兩性霉素b的粒子,該兩性霉素b處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中。100.單位劑量形式,其包括-裝有藥物組合物的容器,該藥物組合物包括-有效量的兩性霉素B,及藥學(xué)可接受的賦形劑,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子制成,該粒子具有小于約1.9Mm的質(zhì)量中位直徑。101.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的容器包括膠囊。102.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子組成,該粒子具有約0.5/xm至約1.8)wn的質(zhì)量中位直徑。103.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約80%具有小于約1.9;mi的幾何直徑。104.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約卯%具有小于約1.9Mm的幾何直徑。105.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的兩性霉素B具有至少約50%的結(jié)晶度。106.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括粒子。107.如權(quán)利要求106所述的單位劑量形式,其中所述的粒子具有小于約10/xm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。108.如權(quán)利要求106所述的單位劑量形式,其中所述的粒子具有約1/rni至約6/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。109.如權(quán)利要求IOO所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。110.如權(quán)利要求IOO所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括具有小于約10/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,并且其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。111.如權(quán)利要求IOO所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。112.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。113.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括金屬離子。114.如權(quán)利要求IOO所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂和金屬離子。115.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括中空的和/或多孔的粒子。116.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中。117.如權(quán)利要求100所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括具有約1/m!至約6/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中,并且其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。118.單位劑量形式,其包括裝有藥物組合物的容器,該藥物組合物包括有效量的兩性霉素B,及藥學(xué)可接受的賦形劑,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子制成,并且其中粒子的至少約80wt。/。包括兩性霉素B,該粒子具有小于約1.9/xm的幾何直徑。119.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的容器包括膠囊。120.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子組成,該粒子具有約0.5/rni至約1.8/mi的質(zhì)量中位直徑。121.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約卯%具有小于約1.9pm的幾何直徑。122.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約95%具有小于約1.9pm的幾何直徑。123.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的兩性霉素B具有至少約50%的結(jié)晶度。124.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括粒子。125.如權(quán)利要求124所述的單位劑量形式,其中所述的粒子具有小于約10/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。126.如權(quán)利要求124所述的單位劑量形式,其中所述的粒子具有約1/mi至約6/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。127.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物的至少約80。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。128.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括具有小于約10/rni的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,并且其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。129.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。130.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。131.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括金屬離子。132.如權(quán)利要求IIS所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂和金屬離子。133.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括中空的和/或多孔的粒子。134.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中。135.如權(quán)利要求134所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。136.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括干粉末。137.如權(quán)利要求118所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括具有約1pm至約6Mm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中,并且其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。138.單位劑量形式,其包括裝有藥物組合物的容器,該藥物組合物包括兩性霉素B;及藥學(xué)可接受的賦形劑,其中兩性霉素B具有約20%至約99%的結(jié)晶度。139.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的兩性霉素B具有約70%至約98%的結(jié)晶度。140.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子組成,該粒子具有小于約3/mi的質(zhì)量中位直徑。141.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物由包括兩性霉素B的粒子組成,并且其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約80%具有小于約3pm的幾何直徑。142.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括粒子。143.如權(quán)利要求142所述的單位劑量形式,其中所述的粒子具有小于約10/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。144.如權(quán)利要求142所述的單位劑量形式,其中所述的粒子具有約1/mi至約6/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。145.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。146.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。147.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。148.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括金屬離子。149.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂和金屬離子。150.如權(quán)利要求13S所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括中空的和/或多孔的粒子。151.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中。152.如權(quán)利要求151所述的單位劑量形式,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。153.如權(quán)利要求138所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括干粉末。154.如權(quán)利要求13S所述的單位劑量形式,其中所述的藥物組合物包括具有約1/mi至約6/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,并且其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中,并且其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。155.遞送系統(tǒng),其包括吸入器;及包含粒子的藥物組合物,包括兩性霉素B,和藥學(xué)可接受的賦形劑,其中所述的粒子由包含兩性霉素B的粒子制成,該粒子具有小于約1.9/mi的質(zhì)量中位直徑。156.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的吸入器包括干粉末吸入器。157.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的吸入器包括含有所述的粒子和推進劑的容器,并且其中所述的吸入器包括與所述的容器內(nèi)部相通的計量閥。158.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的吸入器包括噴霧器,并且其中所述的粒子懸浮在液體中。159.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子由包括兩性霉素B的粒子組成,該粒子具有約0.5pm至約1.8pm的質(zhì)量中位直徑。160.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有小于約1.9/mi的幾何直徑。161.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的兩性霉素B具有至少約50%的結(jié)晶度。162.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的兩性霉素B具有約70%至約99%的結(jié)晶度。163.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有小于約10/zm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。164.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有約1ptm至約6jwn的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。165.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。166.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有小于約10ym的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑,并且其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。167.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。168.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。169.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子包括兩性霉素B,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中。170.如權(quán)利要求155所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有約1/xm至約6pm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑,其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中,并且其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。171.遞送系統(tǒng),其包括吸入器;和包括粒子的藥物組合物,包括兩性霉素B,及藥學(xué)可接受的賦形劑,其中粒子由包括兩性霉素B的粒子制成,并且其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有小于約1.9pim的幾何直徑。172.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的吸入器包括干粉末吸入器。173.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的吸入器包括含有所述的粒子和推進劑的容器,并且其中所述的吸入器包括與所述的容器內(nèi)部相通的計量閥。174.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的吸入器包括噴霧器,并且其中所述的粒子懸浮在液體中。175.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子由包括兩性霉素B的粒子組成,該粒子具有約0.5/mi至約1.8/mi的質(zhì)量中位直徑。176.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有小于約1.9Mm的幾何直徑。177.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的兩性霉素B具有至少約50%的結(jié)晶度。178.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的兩性霉素B具有約70%至約99%的結(jié)晶度。179.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有小于約10/xm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。180.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有約lpm至約6/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。181.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的藥物組合物的至少約SOwt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。182.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有小于約10Mm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑,并且其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。183.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。184.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。185.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子包括在基質(zhì)中的兩性霉素B,該基質(zhì)包含藥學(xué)可接受的賦形劑。186.如權(quán)利要求171所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有約1ium至約6/xm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑,并且其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B處在包括藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中,并且其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。187.遞送系統(tǒng),其包括吸入器;和包括粒子的藥物組合物,包括具有約20。/。至約99。/。結(jié)晶度的兩性霉素B,及藥學(xué)可接受的賦形劑。188.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的吸入器包括干粉末吸入器。189.如權(quán)利要求1S7所述的遞送系統(tǒng),其中所述的吸入器包括含有所述的粒子和推進劑的容器,并且其中所述的吸入器包括與所述的容器內(nèi)部相通的計量閥。190.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的吸入器包括噴霧器,并且其中所述的粒子懸浮在液體中。191.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的兩性霉素B具有約70%至約98%的結(jié)晶度。192.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子由包括兩性霉素B的粒子制成,該粒子具有小于約3/im的質(zhì)量中位直徑。193.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子由包括兩性霉素B的粒子制成,所述的粒子具有小于約2fmi的質(zhì)量中位直徑。194.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子由包括兩性霉素B的粒子制成,其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約SOy。具有小于約3/mi的幾何直徑。195.如權(quán)利要求1S7所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有小于約10gm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。196.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有約1/mi至約6/tm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。197.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的藥物組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。198.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有小于約10pm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑,并且其中所述的粒子由包括兩性霉素b的粒子組成,該粒子具有小于約3pm的質(zhì)量中位直徑。199.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。200.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。201.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子包括在基質(zhì)中的兩性霉素B的粒子,該基質(zhì)包含藥學(xué)可接受的賦形劑。202.如權(quán)利要求187所述的遞送系統(tǒng),其中所述的粒子具有約1pon至約6^n的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑,并且其中所述的藥物組合物的至少約S0wt。/。包括包含兩性霉素B的粒子,該兩性霉素B在包含藥學(xué)可接受的賦形劑的基質(zhì)中,并且其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括至少一種磷脂。203.表征用于制備藥物組合物的兩性霉素B的方法,其包括測定兩性霉素B組成的結(jié)晶度;及在釋放所述的兩性霉素B組成用于和藥學(xué)可接受的賦形劑組成藥物組合物之前,保證所述的結(jié)晶度比第一預(yù)定水平高。204.如權(quán)利要求203所述的方法,其中測定結(jié)晶度包括在所述的兩性霉素B組成的至少一部分進行X-射線粉末衍射。205.如權(quán)利要求203所述的方法,其中測定結(jié)晶度包括在所述的兩性霉素B組成的至少一部分進行紅外光譜。206.如權(quán)利要求203所述的方法,其中測定結(jié)晶度包括在所述的兩性霉素B組成的至少一部分進行動態(tài)蒸汽吸附。207.如權(quán)利要求203所述的方法,其中所述的第一預(yù)定水平為至少約50%。208.如權(quán)利要求203所述的方法,其中所述的第一預(yù)定水平為至少約70%。209.如權(quán)利要求203所述的方法,其中所述的第一預(yù)定水平為至少約卯%。210.如權(quán)利要求203所述的方法,其進一步包括如果所述的結(jié)晶度等于或低于所述的第一預(yù)定水平,對所述的兩性霉素B組成重結(jié)晶。211.如權(quán)利要求203所述的方法,其進一步包括如果所述的結(jié)晶度等于或低于所述的第一預(yù)定水平,廢棄所述的兩性霉素B組成。212.如權(quán)利要求203所述的方法,其進一步包括組合所述的兩性霉素B組成和藥學(xué)可接受的賦形劑以組成藥物組合物。213.如權(quán)利要求212所述的方法,其中組合所述的兩性霉素B組成和所述的藥學(xué)可接受的賦形劑以組成藥物組合物包括噴霧干燥。214.如權(quán)利要求212所述的方法,其進一步包括測定所述的藥物組合物的結(jié)晶度。215.如權(quán)利要求214所述的方法,其進一步包括,如果所述的結(jié)晶度高于第二預(yù)定水平,則釋放所述的藥物組合物用于對病人給藥。216.如權(quán)利要求215所述的方法,其中所述的第二預(yù)定水平為至少約50%。217.表征用于制備藥物組合物的兩性霉素B的方法,其包括測定兩性霉素B組成的無定形度;及在釋放所述的兩性霉素B組成用于和藥學(xué)可接受的賦形劑組成藥物組合物之前,保證所述的無定形度小于預(yù)定水平。218.如權(quán)利要求217所述的方法,其中測定無定形度包括在所述的兩性霉素B組成的至少一部分進行X-射線粉末衍射。219.如權(quán)利要求217所述的方法,其中測定無定形度包括在所述的兩性霉素B組成的至少一部分進行紅外光譜。220.如權(quán)利要求217所述的方法,其中測定無定形度包括在所述的兩性霉素B組成的至少一部分進行動態(tài)蒸汽吸附。221.如權(quán)利要求217所述的方法,其中所述的第一預(yù)定水平低于約50%。222.如權(quán)利要求217所述的方法,其中所述的第一預(yù)定水平低于約30%。223.如權(quán)利要求217所述的方法,其中所述的第一預(yù)定水平低于約10%。224.如權(quán)利要求217所述的方法,其中組合所述的兩性霉素B組成和所述的藥學(xué)可接受的賦形劑以組成藥物組合物包括噴霧干燥。225.如權(quán)利要求217所述的方法,其進一步包括測定所述的藥物組合物的無定形度。226.如權(quán)利要求225所述的方法,其進一步包括,如果所述的無定形度高于第二預(yù)定水平,則釋放所述的藥物組合物對病人給藥。227.如權(quán)利要求226所述的方法,其中所述的第二預(yù)定水平低于約50%。228.制備和表征干粉末藥物組合物的方法,其包括組合兩性霉素B組成和藥學(xué)可接受的賦形劑以組成干粉末藥物組合物;測定所述的干粉末藥物組合物的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑;及在釋放所述的干粉末藥物組合物用于對病人給藥之前,保證空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑低于預(yù)定水平。229.如權(quán)利要求228所述的方法,其中空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑由級聯(lián)碰撞測定。230.如權(quán)利要求228所述的方法,其中所述的預(yù)定水平低于約10/xm。231.如權(quán)利要求228所述的方法,其中所述的預(yù)定水平低于約5232.制備和表征干粉末藥物組合物的方法,其包括組合兩性霉素B組成和藥學(xué)可接受的賦形劑以制成所述的干粉末藥物組合物;測定所述的干粉末藥物組合物的均勻度;及在釋放所述的干粉末藥物組合物用于對病人給藥之前,保證所述的均勻度高于預(yù)定水平。233.如權(quán)利要求232所述的方法,其中測定均勻度包括測定含有粒子的干粉末藥物組合物的重量百分比,該粒子包括兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑。234.如權(quán)利要求232所述的方法,其中如果所述的重量百分比在高于至少80wt。/。以上的水平之上,則所述的千粉末藥物組合物釋放給藥。235.如權(quán)利要求232所述的方法,其中如果所述的重量百分比在高于至少90wt。/。之上的水平之上,則所述的干粉末藥物組合物釋放給藥。236.制備噴霧干燥粒子的方法,其包括將包含兩性霉素B的粒子混懸在液體中制成原料,其中所述的粒子具有小于約3pm的質(zhì)量中位直徑;及噴霧干燥所述的原料以制造所述的噴霧干燥粒子。237.如權(quán)利要求236所述的方法,其中所述的包括兩性霉素B的粒子具有在約l/rni至約2/mi之間的質(zhì)量中位直徑值。238.如權(quán)利要求236所述的方法,其中所述的包括兩性霉素B的粒子具有至少約50%的結(jié)晶度。239.如權(quán)利要求236所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子具有小于約10^n的質(zhì)量中位直徑。240.如權(quán)利要求236所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子的至少約80wt。/。包括兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑。241.如權(quán)利要求236所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子具有小于約10/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑,并且其中所述的包括兩性霉素B的粒子具有至少約50%的結(jié)晶度。242.如權(quán)利要求236所述的方法,其中所述的原料進一步包括藥學(xué)可接受的賦形劑。243.如權(quán)利要求236所述的方法,其中噴霧干燥所述的原料進一步包括噴霧干燥含有藥學(xué)可接受的賦形劑的附加原料。244.如權(quán)利要求236所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子進一步包括藥學(xué)可接受的賦形劑。245.如權(quán)利要求236所述的方法,其進一步包括收集所述的噴霧干燥粒子。246.如權(quán)利要求236所述的方法,其進一步包括向所述的原料中添加乳化劑。247.如權(quán)利要求246所述的方法,其中所述的乳化劑包括卵磷脂。248.如權(quán)利要求247所述的方法,其中所述的卵磷脂包括二硬脂酰卵磷脂。249.如權(quán)利要求236所述的方法,其進一步包括向所述的原料中添加發(fā)泡劑。250.如權(quán)利要求236所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子包括在磷脂基質(zhì)中的兩性霉素B。251.如權(quán)利要求236所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子為中空的和/或多孔的粒子。252.如權(quán)利要求251所述的方法,其中所述的原料進一步包括疏水性氨基酸。253.制備噴霧干燥粒子的方法,其包括將包含兩性霉素B的粒子混懸在液體中制成原料,其中所述的兩性霉素8具有至少約20%的結(jié)晶度;及噴霧干燥所述的原料以制造所述的噴霧干燥粒子。254.如權(quán)利要求253所述的方法,其中所述的兩性霉素B具有至少約50%的結(jié)晶度。255.如權(quán)利要求253所述的方法,其中所述的包括兩性霉素B的粒子具有小于約3/mi的質(zhì)量中位直徑。256.如權(quán)利要求253所述的方法,其中所述的包括兩性霉素B的粒子的至少約80wtc/。具有小于約3pm的幾何直徑。257.如權(quán)利要求253所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子具有小于約10jxm的質(zhì)量中位直徑。258.如權(quán)利要求253所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子的至少約80wt。/。包括兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑。259.如權(quán)利要求253所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子具有小于約10pm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑,并且其中所述的包括兩性霉素B的粒子具有至少約50%的結(jié)晶度。260.如權(quán)利要求253所述的方法,其中所述的原料進一步包括藥學(xué)可接受的賦形劑。261.如權(quán)利要求253所述的方法,其中噴霧干燥所述的原料進一步包括噴霧干燥含有藥學(xué)可接受的賦形劑的附加原料。262.如權(quán)利要求253所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子進一步包括藥學(xué)可接受的賦形劑。263.如權(quán)利要求253所述的方法,其進一步包括收集所述的噴霧干燥粒子。264.如權(quán)利要求253所述的方法,其進一步包括向所述的原料中添加乳化劑。265.如權(quán)利要求264所述的方法,其中所述的乳化劑包括卵磷脂。266.如權(quán)利要求265所述的方法,其中所述的卵磷脂包括二硬脂酰卵磷脂。267.如權(quán)利要求253所述的方法,其進一步包括向所述的原料中添加發(fā)泡劑。268.如權(quán)利要求253所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子包括在磷脂基質(zhì)中的兩性霉素B。269.如權(quán)利要求253所述的方法,其中所述的噴霧干燥粒子為中空的和/或多孔的粒子。270.如權(quán)利要求269所述的方法,其中所述的原料進一步包括疏水性氨基酸。271.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥,其中所述的組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,該粒子具有約1.1/mi至約1.9/mi的質(zhì)量中位直徑。272.如權(quán)利要求271所述的方法,其中給藥足夠量的所述的組合物以維持至少約4周的靶肺兩性霉素B濃度,該濃度是測定的最小抑制濃度的至少約5倍。273.如權(quán)利要求272所述的方法,其中所述的最小抑制濃度是肺上皮內(nèi)襯內(nèi)的最小抑制濃度。274.如權(quán)利要求272所述的方法,其中所述的最小抑制濃度是肺實體組織內(nèi)的最小抑制濃度。275.如權(quán)利要求272所述的方法,其中所述的靶肺兩性霉素B濃度維持至少約8周。276.如權(quán)利要求272所述的方法,其中所述的耙肺兩性霉素B濃度為至少約4pg/g。277.如權(quán)利要求272所述的方法,其中所述的靶肺兩性霉素B的濃度為約4.5pg/g至約20pg/g,并且其中所述的給藥包括周期性地釋放所述的藥物組合物以維持所述的肺兩性霉素B的濃度在所述的靶兩性霉素B肺濃度范圍之內(nèi)。278.如權(quán)利要求272所述的方法,其中所述的給藥包括在給藥第1周期間釋放所述的組合物的1個劑量。279.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的給藥包括在給藥第1周期間釋放所述的藥物組合物的至少2個劑量。280.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的給藥包括第一給藥周期和第二給藥周期,并且其中與所述的第二給藥周期相比,在所述的第一周期期間更加頻繁或以更高劑量給藥所述的組合物。281.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的包含兩性霉素B的粒子具有約1.2jum至約1.8/mi的質(zhì)量中位直徑。282.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的包含兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有小于約1.9ptm的幾何直徑。283.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的兩性霉素B具有至少約50%的結(jié)晶度。284.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的組合物包括粒子。285,如權(quán)利要求284所述的方法,其中所述的粒子具有小于約10/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。286.如權(quán)利要求284所述的方法,其中所述的粒子具有約1/xm至約6/nn之間的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。287.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。288.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的組合物包含具有小于約10/mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,并且其中所述的兩性霉素B具有至少約50%的結(jié)晶度。289.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的組合物包括實質(zhì)上由兩性霉素B組成的粒子。290.如權(quán)利要求289所述的方法,其中所述的組合物進一步包括含有藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。291.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的組合物包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。292.如權(quán)利要求291所述的方法,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。293.如權(quán)利要求291所述的方法,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。294.如權(quán)利要求291所述的方法,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括金屬離子。295.如權(quán)利要求291所述的方法,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂和金屬離子。296.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的組合物包括中空的和/或多孔的粒子。297.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的組合物包括在基質(zhì)物質(zhì)中的結(jié)晶兩性霉素B的粒子。298.如權(quán)利要求297所述的方法,其中所述的基質(zhì)物質(zhì)包括至少一種磷脂。299.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的給藥包括利用干粉末吸入器遞送干粉末狀的組合物。300.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的組合物包括推進劑,并且其中所述的給藥包括通過打開閥門使所述的組合物氣霧化以釋放所述的組合物。301.如權(quán)利要求300所述的方法,其中所述的推進劑包括至少一種氫氟烷烴。302.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的方法包括治療真菌感染。303.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的方法包括提供預(yù)防真菌感染。304.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的真菌感染包括肺部真菌感染。305.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的真菌感染包括鼻部真菌感染。306.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的給藥包括經(jīng)肺給藥。307.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的給藥包括經(jīng)鼻給藥。308.如權(quán)利要求271所述的方法,其中所述的方法包括提供對肺真菌感染的預(yù)防,其中所述的給藥包括經(jīng)肺給藥,其中給藥足夠量的所述的組合物以維持至少約8周的肺靶兩性霉素B濃度,該濃度是測定的最小抑制濃度的至少約5倍,其中所述的組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,該粒子具有約0.5pim至約1.8ptm的質(zhì)量中位直徑,其中所述的兩性霉素B具有至少約50%的結(jié)晶度,其中所述的組合物包含具有約1/mi至約6pm之間的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,及其中所述的組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和磷脂的粒子。309.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥,其中所述的組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,并且其中所述的包含兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有約1.1/mi至約1.9pm之間的幾何直徑。310.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約20。/。的結(jié)晶度。311.如權(quán)利要求310所述的方法,其中給藥足夠量的所述的組合物以維持至少約4周的肺靶兩性霉素B濃度,該濃度是測定的最小抑制濃度的至少約5倍。312.如權(quán)利要求311所述的方法,其中所述的最小抑制濃度是肺上皮內(nèi)襯的最小抑制濃度。313.如權(quán)利要求311所述的方法,其中所述的最小抑制濃度是肺實體組織的最小抑制濃度。314.如權(quán)利要求311所述的方法,其中所述的肺靶兩性霉素B濃度維持至少約8周。315.如權(quán)利要求311所述的方法,其中所述的肺靶兩性霉素B濃度為至少約4嗎/g。316.如權(quán)利要求311所述的方法,其中所述的肺靶兩性霉素B的濃度為約4.5嗎/g至約20嗎/g,并且其中所述的給藥包括周期性地釋放所述的藥物組合物以維持所述的肺兩性霉素B濃度在所述的靶兩性霉素B肺濃度范圍之內(nèi)。317.如權(quán)利要求311所述的方法,其中所述的給藥包括在給藥第1周期間釋放所述的組合物的1個劑量。318.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的給藥包括在給藥第1周期間釋放所述的藥物組合物的至少2個劑量。319.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的給藥包括第一給藥周期和第二給藥周期,并且其中與所述的第二給藥周期相比,在所述的第一周期期間以更加頻繁或更高劑量給藥所述的組合物。320.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,該粒子具有小于約3pm的質(zhì)量中位直徑。321.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,并且其中所述的包含兩性霉素B的粒子的至少約80wt。/。具有小于約3/mi的幾何直徑。322.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。323.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的組合物包括粒子。324.如權(quán)利要求323所述的方法,其中所述的粒子具有小于約10pm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。325.如權(quán)利要求323所述的方法,其中所述的粒子具有約1/rni至約6pm之間的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑。326.如權(quán)利要求323所述的方法,其中所述的組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。327.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的組合物包含具有小于約10pm的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,并且其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度。328.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的組合物包括實質(zhì)上由兩性霉素B組成的粒子。329.如權(quán)利要求328所述的方法,其中所述的組合物進一步包括含有藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。330.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的組合物包括含有兩性霉素B和藥學(xué)可接受的賦形劑的粒子。331.如權(quán)利要求330所述的方法,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括選自碳水化合物,脂類,氨基酸,緩沖劑和鹽中的至少一種。332.如權(quán)利要求330所述的方法,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂。333.如權(quán)利要求330所述的方法,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括金屬離子。334.如權(quán)利要求330所述的方法,其中所述的藥學(xué)可接受的賦形劑包括磷脂和金屬離子。335.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的組合物包括中空的和/或多孔的粒子。336.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的組合物包括含有在基質(zhì)物質(zhì)中的結(jié)晶兩性霉素B的粒子。337.如權(quán)利要求336所述的方法,其中所述的基質(zhì)物質(zhì)包括至少一種磷脂。338.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的給藥包括利用干粉末吸入器遞送干粉末狀的組合物。339.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的組合物包括推進劑,并且其中所述的給藥包括通過打開閥門使所述的組合物氣霧化以釋放所述的組合物。340.如權(quán)利要求339所述的方法,其中所述的推進劑包括至少一種氫氟烷烴。341.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的方法包括治療真菌感染。342.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的方法包括提供預(yù)防真菌感染。343.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的真菌感染包括肺部真菌感染。344.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的真菌感染包括鼻部真菌感染。345.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的給藥包括經(jīng)肺給藥。346.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的給藥包括經(jīng)鼻給藥。347.如權(quán)利要求310所述的方法,其中所述的方法包括提供預(yù)防真菌感染,其中所述的給藥包括經(jīng)肺給藥,其中給藥足夠量的所述的組合物以維持至少約8周的肺靶兩性霉素B濃度,該濃度是測定的最小抑制濃度的至少約5倍,其中所述的組合物由包含兩性霉素B的粒子制成,該粒子具有小于約3Mm的質(zhì)量中位直徑,其中所述的兩性霉素B具有至少約70%的結(jié)晶度,其中所述的組合物包含具有約1pm至6Mm之間的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子,及其中所述的組合物的至少約80wt。/。包括含有兩性霉素B和磷脂的粒子。348.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約20。/。的結(jié)晶度,及其中所述的兩性霉素B具有至少約1周的肺實體組織保留半衰期,通過肺組織活組織檢查測定。349.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約20y。的結(jié)晶度,及其中所述的兩性霉素B具有至少約IO小時的肺上皮內(nèi)襯液保留半衰期,通過支氣管氣泡灌洗測定。350.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括通過吸入包含約0.01mg/kg至7.0mg/kg的量的兩性霉素B的組合物,對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約20。/。的結(jié)晶度,及其中兩性霉素B的血漿濃度保持低于約1000ng/mL。351.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括-通過吸入包含約0.01mg/kg至7.0mg/kg的量的兩性霉素B的組合物,對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約20C/。的結(jié)晶度;及其中兩性霉素B的血漿濃度保持足夠低以避免腎和/或肝毒性。352.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括通過吸入包含兩性霉素B的組合物對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約20。/。的結(jié)晶度,及其中兩性霉素B的肺濃度在至少部分治療時間段內(nèi)達到最小抑制濃度的至少5倍量,通過支氣管氣泡灌洗測定,及其中兩性霉素B的血漿濃度保持低于約1000ng/ml。353.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括通過吸入包含兩性霉素B的組合物,對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約20。/。的結(jié)晶度,及其中治療時間為約15周至約20周,及其中肺兩性霉素B濃度在至少部分治療時間段內(nèi)達到最小抑制濃度的至少5倍量,通過支氣管氣泡灌洗測定。354.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括通過吸入包含約2mg/kg至約50mg/kg的量的兩性霉素B的組合物,對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約2()e/c)的結(jié)晶度,及其中所述的給藥在小于約5分鐘的時間內(nèi)實施。355.治療和/或提供預(yù)防真菌感染的方法,其包括通過吸入有效量的包含兩性霉素B的干粉末,對有需要的病人給藥,其中所述的兩性霉素B具有至少約2()Q/。的結(jié)晶度,和其中所述的干粉末包括具有小于約10;mi的空氣動力學(xué)質(zhì)量中位直徑的粒子。全文摘要本發(fā)明提供包含顆粒的組合物,所述顆粒包含至少95wt%的兩性霉素B,其中顆粒具有大約1.1μm到大約1.9μm范圍的質(zhì)量中位直徑。另一種組合物也包含粒子,所述粒子包含至少大約95wt%的兩性霉素B,其中至少粒子的大約80wt%具有大約1.1到大約1.9μm范圍的幾何直徑。還有另一種包含粒子的組合物,所述粒子包含兩性霉素B,其中所述的粒子具有小于大約1.9μm的質(zhì)量中位直徑,并且其中所述的兩性霉素B具有至少大約20%的結(jié)晶度水平。單位劑量形式,輸送系統(tǒng),和方法可包括類似的組合物。文檔編號A61K9/16GK101442989SQ200580025978公開日2009年5月27日申請日期2005年6月21日優(yōu)先權(quán)日2004年6月21日發(fā)明者丹弗斯·米勒,克里斯托弗爾·弗雷特斯,凱斯·華士考,戴維德·萊徹卡-巴萊斯特洛斯,托馬斯·E·特雷雷,斯瑞尼維斯·帕拉科達特,特瑞薩·斯溫尼,特里克茜·唐,理查德·馬爾科姆森,艾蘭·R·科格勒,薩瑪·杜德都,薩瓦杰納·德維威蒂,麥克·A·埃爾德恩申請人:耐科塔醫(yī)藥公司