專利名稱：：在放射和/或化學療法治療前預敏化癌癥的方法和新的細胞因子混合物的制作方法引言本發(fā)明涉及在諸如化學療法、放射療法或者免疫療法的治療性處理前預敏化癌癥的突破性方法和用在該方法中的新的細胞因子混合物。細胞因子混合物是無血清并且無絲裂原的混合物，其由相對于白介素2(IL-2)具有特定比率的細胞因子如IL-1β、TNF-α、IFN-γ和GM-CSF組成，所述混合物可有效誘導癌性細胞進入增殖細胞周期階段，從而增加它們對化學療法、放射療法和免疫療法的敏感性。一種此類新的細胞因子混合物是白細胞白介素注射液(LeukocyteInterleukinInjection，LI)或者Multikine，其可以單獨使用或者與用于治療癌癥的其他藥物組合使用，從而增加癌癥治療的成功率和癌癥患者的無病存活率。
背景技術：
：癌癥，尤其是實體瘤的當前治療主要包括外科手術，其次是放射療法和/或化學療法。Dunne-DalyCF，″Principlesofradiotherapyandradiobiology″，SeminOncolNurs.1999Nov；15(4)250-9；HensleyML等人，″AmericanSocietyofClinicalOncologyclinicalpracticeguidelinesfortheuseofchemotherapyandradiotherapyprotectants.″，JClinOnco1.1999Oct；17(10)3333-55。與這些療法結合，使用了不能區(qū)分正常細胞和癌性細胞的毒性化學治療劑，如吉西他濱、長春堿、順鉑、氟尿嘧啶、Gleevec、甲氨喋呤。這些和其他毒性化學治療劑盡管有效，但是不能增加總體患者存活。此外，盡管有化學療法和放射療法為協(xié)同組合，當前的治療通常還不能提高癌癥患者的5年存活率。甚至抗表皮生長因子受體劑、抗血管生成藥物和使用諸如利妥昔單抗、愛必妥(Erbitux)和赫賽汀(Herceptin)的免疫療法和免疫佐劑療法也不能顯著增加癌癥患者的5年存活率。此外，通過前述療法或者它們的協(xié)同組合的任一種還沒有不分癌癥類型改善癌癥患者的完全緩解或無疾病存活。研究用來提高無疾病存活率或者導致完全緩解的一種治療方式是控制癌性細胞的細胞分裂周期。具體地，周期中腫瘤細胞一般比周期外腫瘤細胞對放射和化學療法更敏感，因為在細胞周期中需要復雜的生物化學和生物分子過程，如依賴酶的DNA復制、依賴酶的磷酸化、信號級聯(lián)、轉錄活化分子復合體的結合和解離，和細胞結構元件的大分子裝置的形成和解離。通過誘導腫瘤細胞進入細胞周期階段，抑制任一種復雜的生物化學過程的抗代謝劑，如核糖核苷酸還原酶(RNA)抑制劑、二氫葉酸還原酶抑制劑或者DNA聚合酶抑制劑可以用于停止細胞周期從而阻止腫瘤增殖。然而，利用細胞周期的已知方法局限于順序應用化學治療劑同步細胞周期停滯。例如，一種已知方法用嘧啶類似物使惡性細胞停滯在細胞周期的S期，然后暴露于高濃度的抗代謝物。B.Bhutan等人，CancerRes.33888-894(1973)。應用抗代謝物后，該群體內的很少細胞或者沒有細胞可以前進超過該停滯點。WVogel等人，Hum.Genet.45193-8(1978)。其他成果包括通過改變細胞群體內細胞周期分布而控制細胞分裂周期。這些方案刺激惡性細胞從休眠期進入細胞周期，從而在敏感的DNA復制期內增加它們對抗代謝物藥物作用的敏感性。HHEuler等人，Ann.Med.Interne.(Paris)145296-302(1994)；BCLampkin等人，J.Clin.Invest.502204-14(1971)；Alama等人，AnticancerRes.10853-8(1990)。相反地，其他已知的方法抑制正常細胞進入S期，從而保護正常細胞免受趨化性藥物的傷害。用化學治療劑同步細胞周期階段的另一已知方法是REMoran等人，CancerTreat.Rep.6481-6(1980)描述的所謂的脈沖劑量化學療法。在該方法中，注入羥基脲將小鼠中的白血病腫瘤細胞阻止在細胞周期的S期。注入后，細胞被“釋放”以繼續(xù)細胞周期，其中對小鼠給予第二種治療劑(Ara-C)的“脈沖”。目的是在周期中細胞通過敏感的細胞周期S-期時使第二種治療劑的影響最大。然而，結果表明盡管在羥基脲注入后就用Ara-C治療的小鼠表現(xiàn)出提高的存活率，但是在羥基脲注入后稍后用Ara-C治療的小鼠沒有顯示出提高的存活率。顯然，簡單地同步化細胞周期與不同時作用的第二種治療劑不能改進這兩種治療劑的作用。然而，利用細胞周期的已知方法仍繼續(xù)尋求劑量、藥物代謝動力學、順序和用藥時間之間的最佳但是被動的協(xié)同?？梢灶A期，將細胞群體限制在細胞對傷害特別敏感的敏感細胞周期階段可能使細胞殺傷動力學轉向更高的效率，并通過減小暴露于毒性藥物而使副作用有更大的降低。然而，利用細胞周期停滯或者靜態(tài)同步化的實際實驗已經(jīng)讓人失望，因為已知的方法不能有效地誘導細胞進入細胞周期。相反，所有已知的方法都簡單地安排細胞周期停滯或者靜態(tài)同步化與靶細胞群體的協(xié)同組合的時間。而且，用于實現(xiàn)所述細胞周期的治療劑如嘧啶和羥基脲可導致對正常細胞的傷害。當然，另一種方法將是誘導細胞進入細胞周期階段，而不是停滯細胞周期或者同步化細胞周期。然而，如從現(xiàn)有技術預測到的，誘導細胞進入細胞周期增加了腫瘤快速生長和復發(fā)的風險。但是已知組合物在提高無疾病存活率或者導致完全緩解方面的不斷失敗提示需要以某種方式誘導惡性細胞進入細胞周期，該方式不使腫瘤增殖但是增加殘留腫瘤對用放射和/或化學療法進行的后續(xù)治療的敏感性。因此，需要誘導腫瘤細胞進入選自(細胞周期的不同階段)G1、S、G2和M的細胞周期的方法，其中該新方法可以與化學療法、免疫療法和放射療法協(xié)同應用。還需要預敏化癌癥腫瘤，以及通常也需要新的無血清且無絲裂原的細胞因子混合物，該混合物由特定比率的IL-1β比IL-2、TNF-α比IL-2、IFN-γ比IL-2和GM-CSF比IL-2所組成，所述混合物在誘導腫瘤細胞進入細胞周期階段或者預敏化癌癥中出乎意料地表現(xiàn)出比已知的組合物好得多的功效。發(fā)明概述本發(fā)明部分地基于預敏化一般的癌癥的方法和新的無血清且無絲裂原的細胞因子混合物，該混合物具有IL-1β與IL-2、TNF-α與IL-2、IFN-γ與IL-2和GM-CSF與IL-2的特定比率。因此，本發(fā)明使得能開發(fā)作為藥物或者作為佐劑的組合物，以與治療性癌癥治療如化學療法、免疫療法和放射療法結合使用。在本發(fā)明的實施方案中，公開了用無血清且無絲裂原的細胞因子混合物改善腫瘤或者免疫系統(tǒng)疾病的常規(guī)化學療法或者放射療法的方法。該方法為與放射療法或者其他細胞殺死性物理方式結合的癌癥治療提供了預敏化步驟。還考慮了用于誘導腫瘤細胞進入選自(細胞周期的不同階段)G1、S、G2和M的敏感細胞周期階段的方法。本發(fā)明不限于任何一種具體類型的癌癥并且可以包括任何類型的癌癥。特定應用包括圍繞腫瘤施用無血清且無絲裂原的細胞因子混合物，每周三次，持續(xù)兩周，每次約20IU到1600IU，或者特別地400IU或者800IU，或者以每周5次，每次約20IU到1600IU，或者400IU或者800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2國際標準86/504(WorldHealthOrganizationISInternationalStandardforHumanIL-2，86/504)給出的白介素-2的國際單位。另一實施方案包括無血清且無絲裂原的細胞因子制劑，如新穎的并且非顯而易見的濃度的白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine。該細胞因子制劑還可以是藥物組合物的一部分。在特定應用中，該新的無血清并且無絲裂原的細胞因子制劑具有細胞因子與白介素2(IL-2)的特定比率，如下IL-1β與IL-2的比率為0.4-1.5，優(yōu)選0.7+/-0.1(IL-1β/IL-2)、TNF-α與IL-2的比率為3.2-11.3，優(yōu)選9.5+/-1.8(TNF-α/IL-2)、IFN-γ與IL-2比率為1.5-10.9，優(yōu)選6.0+/-1.1(IFN-γ/IL-2)，以及GM-CSF與IL-2的比率為2.2-4.8，優(yōu)選4.0+/-0.5(GM-CSF/IL-2)。在其他特定應用中，無血清并且無絲裂原的細胞因子制劑或者藥物組合物還具有白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine中不同的細胞因子和其他小生物活性分子，其中每種小生物活性分子與IL-2的比率如下IL-3與IL-2的比率為0.38-0.68，優(yōu)選0.53+/-0.15，IL-6與IL-2的比率為37.2-53.8，優(yōu)選46+/-5.9，IL-8與IL-2的比率為261-561.5，優(yōu)選411+/-10.6，IL-1α與IL-2的比率為0.56-0.94，優(yōu)選0.75+/-0.19，IL-10與IL-2的比率為2.82-3.22，優(yōu)選3.0+/-0.18，IL-16與IL-2的比率為1.16-2.84，優(yōu)選1.84+/-0.68，G-CSF與IL-2的比率為2.16-3.78，優(yōu)選2.97+/-0.81，TNF-β與IL-2的比率為1.17-2.43，優(yōu)選1.8+/-0.63，MIP-1α與IL-2的比率為15.7-37.16，優(yōu)選22.7+/-7.0，MIP-1β與IL-2的比率為17.1-28.5，優(yōu)選22.8+/-5.7，RANTES與IL-2的比率為2.3-2.7，優(yōu)選2.5+/-0.13，EGF與IL-2的比率為0.267-0.283，優(yōu)選0.275+/-0.008，PGE2與IL-2的比率為3.63-5.42，優(yōu)選4.5+/-0.87，TxB2與IL-2的比率為23.47-25.13，優(yōu)選24.3+/-0.83。本領域經(jīng)常治療癌癥患者的技術人員知道對于此類癌癥的治療有許多不同的方案并且那些方案對特定患者的應用將依賴于多種因素的考慮，這些因素為例如，癌癥的階段、癌細胞的擴散程度，例如，它們是否轉移，和患者的身體素質。本領域技術人員常規(guī)地調節(jié)具體患者的具體治療的參數(shù)，如劑量、持續(xù)時間、施用途徑和施用的形式，并且本領域技術人員不用過度實驗就可以調節(jié)那些參數(shù)。組成了本公開一部分的附圖和表格闡明并且與說明書一起解釋本發(fā)明的原理。本領域技術人員將明白參考附圖和下面的詳細描述，本發(fā)明的其他方面將變得顯而易見。附圖簡述本專利或申請含有至少一幅彩圖。當請求并且支付了必要費用后，將由專利局提供帶有彩圖的該中請或者專利申請公布的拷貝?，F(xiàn)在將通過下面的描述和特定實施方案并借助附圖更詳細地解釋本發(fā)明。圖1代表白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine的作用方式。圖2代表白細胞白介素注射液(LI)處理對患有頭和頸的口腔鱗狀細胞癌(OSCC)的患者中腫瘤周期中細胞的百分數(shù)的影響(根據(jù)LI處理組中OSCC中Ki-67陽性細胞的免疫組織化學外觀)。數(shù)據(jù)以平均值±SEM給出(n＝25，對照，n＝11，LI-處理組)(*P＜0.05)(0＝對照，未處理組)。圖3代表增加劑量的白細胞白介素注射液(LI)處理對通過CD45標志物檢測的淋巴樣細胞在腫瘤表面(區(qū)1.0)；腫瘤中心(區(qū)2.0)和腫瘤表面界面(區(qū)3.0)處口腔鱗狀細胞癌(OSCC)中基質淋巴樣細胞的形態(tài)方面的影響.數(shù)據(jù)以平均值±SEM給出(n＝27，對照組，n＝11，LI-處理組)(*P＜0.05)。圖4代表增加劑量的白細胞白介素注射液(LI)處理對口腔鱗狀細胞癌(OSCC)中周期中細胞百分數(shù)在形態(tài)測定方面的影響。Ki-67陽性細胞已經(jīng)在基質隔室和腫瘤上皮巢中被計數(shù)。數(shù)據(jù)以平均值±SEM給出(n＝25，對照，n＝11，LI-處理組)(*P＜0.05)(0＝對照，未處理組)。圖5代表增加劑量的白細胞白介素注射液(LI)處理對通過CD45標志物檢測的淋巴樣細胞在OSCC中上皮內淋巴樣細胞的形態(tài)測定方面的影響。區(qū)1.0＝腫瘤表面；區(qū)2.0＝腫瘤中心；區(qū)3.0＝腫瘤-基質界面。數(shù)據(jù)以平均值±SEM給出(n＝27，對照組，n＝11，LI-處理組)(*P＜0.05)。圖6代表增加劑量的白細胞白介素注射液(LI)處理對口腔鱗狀細胞癌(OSCC)中白介素2受體陽性(CD-25)淋巴樣細胞的密度的影響(根據(jù)關于基質密度的形態(tài)測定法)。區(qū)1.0＝腫瘤表面；區(qū)2.0＝腫瘤中心；區(qū)3.0＝腫瘤-基質界面。數(shù)據(jù)以平均值±SEM給出(n＝27，對照組，n＝11，LI-處理組)(*P＜0.05)。圖7代表增加劑量的白細胞白介素注射液(LI)處理對口腔鱗狀細胞癌(OSCC)中白介素2受體陽性(CD-25)淋巴樣細胞的密度的影響(根據(jù)關于上皮內密度的形態(tài)測定法)。區(qū)1.0＝腫瘤表面；區(qū)2.0＝腫瘤中心；區(qū)3.0＝腫瘤-基質界面。數(shù)據(jù)以平均值±SEM給出(n＝27，對照組，n＝11，LI+處理組)(*P＜0.05)。圖8代表口腔鱗狀細胞癌的對照病例對該試驗中對照組(病例10)內T細胞的密度、CD3-陽性細胞的免疫定位的影響(最初放大倍數(shù)×400)。圖9代表口腔鱗狀細胞癌的白細胞白介素注射液(LI)處理對LI處理的CD3-陽性T細胞的密度、CD3-陽性細胞的免疫定位的影響(病例31，最初放大倍數(shù)×400)。圖10代表增加劑量的白細胞白介素注射液(LI)處理對口腔鱗狀細胞癌(OSCC)中CD3陽性細胞密度的影響(根據(jù)關于基質密度的形態(tài)測定法)。區(qū)1.0＝腫瘤表面；區(qū)2.0＝腫瘤中心；區(qū)3.0＝腫瘤-基質界面。數(shù)據(jù)以平均值±SEM給出(n＝27，對照組，n＝25，LI-處理組)(*P＜0.05)。圖11代表增加劑量的白細胞白介素注射液(LI)處理對口腔鱗狀細胞癌(OSCC)中CD3陽性細胞密度的影響(根據(jù)關于上皮內密度的形態(tài)測定法)。區(qū)1.0＝腫瘤表面；區(qū)2.0＝腫瘤中心；區(qū)3.0＝腫瘤-基質界面。數(shù)據(jù)以平均值±SEM給出(n＝27，對照組，n＝25，LI-處理組)(*P＜0.05)。本發(fā)明和優(yōu)選實施方案的詳細描述本發(fā)明涉及預敏化癌癥的一般方法和由特定比率的IL-1β比IL-2、TNF-α比IL-2、IFN-γ比IL-2和GM-CSF比IL-2組成的新的無血清且無絲裂原的細胞因子混合物。一種此類新的細胞因子混合物是白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine，其已被證明具有免疫調節(jié)能力。癌癥患者中免疫抑制的臨床重要性出乎意料地影響了治療性處理和尤其是腫瘤細胞進入細胞周期階段之前預敏化癌癥的方法。通過細胞因子如IL-2、IFN-α-γ或者IL-12的注入完成頭頸癌患者的免疫恢復。Whiteside，″Immunobiologyandimmunotherapyofheadandneckcancer″，CurrOncolRep2001；346-55。在頭頸癌中，基于白介素的細胞因子療法導致免疫增強。CortesinaG等人，″Interleukin-2iniectedaroundtumor-draininglymphnodesinheadandneckcancer″，HeadNeck1991；13125-31；DeStefani等人，″Treatmentoforalcavityandoropharynxsquamouscellcarcinomawithperilymphaticinterleukin-2clinicalandpathologiccorrelations″，JImmunother1996；19125-33；Valente等人，″InfiltratingleukocytepopulationsandT-lymphocytesubsetsinheadandnecksquamouscellcarcinomasfrompatientsreceivingperilymphaticinjectionsofrecombinantinterleukin2″，ModPathol1990；3702-8；WhitesideTL等人，″Evidenceforlocalandsystemicactivationofimmunecellsbyperitumoralinjectionsofinterleukin2inpatientswithadvancedsquamouscellcarcinomaoftheheadandneck″，CancerRes1990；535654-62；Barrera等人，″Combinationimmunotherapyofsquamouscellcarcinomaoftheheadandneck″，ArchOtolaryngolHeadNeckSurg2000；126345-51；Verastegui等人，″Anaturalcytokinemixture(IRX-2)andinterferencewithimmunesuppressioninduceimmunemobilizationandregressionofheadandneckcancer″，IntJImmunopharmacol1997；19619-27；Hadden等人，″Interleukinsandcontrasuppressioninduceimmuneregressionofheadandneckcancer″，ArchOtolaryngolHeadNeckSurg1994；120395-403。例如，如通過細胞毒性淋巴細胞[CTL]和遲發(fā)型超敏[DTH]應答所測量的，人(r)hIL-2成功地用于改善頭頸癌患者的免疫功能。T細胞的減弱的應答通過T細胞受體(TCR)、其關鍵信號傳遞組分、ζ鏈和zap-70的表達的降低、不產(chǎn)生IL-2和T細胞的增強的凋亡來證明。WhitesideTL.，″Immunobiologyandimmunotherapyofheadandneckcancer″，CurrOncolRep2001；346-55。研究頭頸癌中受損的T細胞功能的原因的研究表明Fas-FasL系統(tǒng)、TGF-β和PGE2以高水平表達。然而，體內施用rIL-2增加了CD25+細胞以及自然殺傷(NK)細胞、人白細胞抗原(HLA)-DR+淋巴細胞和T細胞的密度。在另一系列研究中，當在淋巴管周圍或者腫瘤周圍施用細胞因子混合物時，已經(jīng)觀察到陽性臨床應答。然而，這些研究都沒有將增強的免疫應答和確定的繼續(xù)治療如手術、放射療法和/或化學療法關聯(lián)起來。本技術Multikine或者白細胞白介素注射液(LI)是從人外周血單核細胞(包括T細胞、B細胞和巨噬細胞)產(chǎn)生的無血清、無絲裂原、無抗生素的制劑。在白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine中有三個“家族”的細胞因子，它們一起賦予白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine獨特的生物學活性。它們包括直接細胞毒性/細胞抑制和殺病毒/病毒抑制細胞因子，如TNF-α，和IFN-γ、淋巴增殖性細胞因子，如IL-1，和IL-2和趨化細胞因子，如IL-6、IL-8和MIP-1α。此外，組成白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine的不同細胞因子和小生物分子都來自包括T細胞、B細胞和巨噬細胞在內的人外周血單核細胞的凝集素(例如，PHA)體外刺激。在菲可帕克梯度上的離心從供體全血分離白細胞(包括T細胞、B細胞和巨噬細胞)，一系列洗滌(用生理學緩沖的介質)有助于分離淋巴細胞以及除去血紅細胞、細胞碎屑和來自供體全血的分離的白細胞組分的其他不想要的細胞組分。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine含有不同的細胞因子，每種細胞因子相對于白介素2(IL-2)以如下特定比率存在IL-1β與IL-2的比率為0.4-1.5，優(yōu)選0.7+/-0.1(IL-1β/IL-2)；TNF-α與IL-2的比率為3.2-11.3，優(yōu)選9.5+/-1.8(TNF-α/IL-2)；IFN-γ與IL-2比率為1.5-10.9，優(yōu)選6.0+/-1.1(IFN-γ/IL-2)；以及GM-CSF與IL-2的比率為2.2-4.8，優(yōu)選4.0+/-0.5(GM-CSF/IL-2)。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine中不同細胞因子的剩余者和其他小生物活性分子也存在于每種制劑內，小生物活性分子與IL-2的比率如下IL-3與IL-2的比率為0.38-0.68，優(yōu)選0.53+/-0.15；IL-6與IL-2的比率為37.2-53.8，優(yōu)選46+/-5.9；IL-8與IL-2的比率為261-561.5，優(yōu)選411+/-10.6；IL-1α與IL-2的比率為0.56-0.94，優(yōu)選0.75+/-0.19；IL-10與IL-2的比率為2.82-3.22，優(yōu)選3.0+/-0.18；IL-16與IL-2的比率為1.16-2.84，優(yōu)選1.84+/-0.68；G-CSF與IL-2的比率為2.16-3.78，優(yōu)選2.97+/-0.81；TNF-β與IL-2的比率為1.17-2.43，優(yōu)選1.8+/-0.63；MIP-1α與IL-2的比率為15.7-37.16，優(yōu)選22.7+/-7.0；MIP-1β與IL-2的比率為17.1-28.5，優(yōu)選22.8+/-5.7；RANTES與IL-2的比率為2.3-2.7，優(yōu)選2.5+/-0.13；EGF與IL-2的比率為0.267-0.283，優(yōu)選0.275+/-0.008；PGE2與IL-2的比率為3.63-5.42，優(yōu)選4.5+/-0.87；TxB2與IL-2的比率為23.47-25.13，優(yōu)選24.3+/-0.83。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine用表征方案進行測試并且不含有下面的細胞因子和其他小生物活性分子IL-4、IL-7、和IL-15、TfR、sICAM、PDGF-AB、IFN-α、EPO、LTC4、TGF-β2、堿性FGF、血管生成素、sE-選擇蛋白、SCF、和LIF。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine僅含有痕量(僅高于測定法的檢測水平)的IL-12和LTB4。在生產(chǎn)方法中，通過分級梯度離心從人供者“血沉棕黃層”分離單核細胞并用PHA培養(yǎng)以增強培養(yǎng)的供者白細胞的產(chǎn)生和分泌IL-2和其他細胞因子，如美國專利5,093,479、4,390,623、4,388,309、4,406,830、4,661,447、4,681,844和4,464,355所公開的，將它們引入本文作為參考。隨后，培養(yǎng)上清液被無菌收集、澄清并接受商業(yè)化病毒排除過程。然后將上清液進一步通過超濾和微濾濃縮約10倍。此時，加入人血清白蛋白(Inj.USP)，將濃縮物緩沖到生理pH并按照標簽要求達到目標IL-2濃度(例如400IU/mL)。將濃縮物進行再次微濾(0.22微米級濾器)并無菌分配到無菌血清型小瓶中并標上其IL-2含量。通過細胞毒性T淋巴樣細胞系(CTLL-2)對放射性標記的胸苷摻入測量產(chǎn)物效能。最終的注射劑進一步通過ELISA測試5種標志細胞因子IL-2、IL-Iβ、GM-CSF、IFN-γ和TNF-α的存在。在含有2.2ml藥物、標簽說明為IL-2(400IU/ml)的硼硅玻璃無菌小瓶中冷凍提供用于腫瘤周圍、腫瘤內、淋巴管周圍或者皮下施用的白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine。對白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine進行同一性、無菌性、細菌內毒素、pH和總蛋白質濃度質量控制測試。檢查每瓶的微粒污染和外觀。制劑的總蛋白質含量為約3mg/mL(或者+/-1mg/mL)，其中提供的物質無菌無熱原。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine指定的過期日期是藥物在-20℃下保存時從生產(chǎn)日期開始24個月。定義IL-2-白介素2(IL-2)CD4+輔助T淋巴細胞合成的15.5kD的糖蛋白(正式地稱作T細胞生長因子)。IL-2對產(chǎn)生它的CD4+T淋巴細胞和免疫系統(tǒng)的其他細胞(包括B淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞、NK[自然殺傷細胞]細胞和其他的)具有自分泌效應。IL-1β-白介素1β(IL-1β)活化的單核吞噬細胞合成的17kD細胞因子，其以游離形式存在于循環(huán)系統(tǒng)中并且介導炎癥應答。它作用于CD4+T淋巴細胞以幫助促進它們的增殖，并且作為生長和分化因子作用于B淋巴細胞。它還誘導單核吞噬細胞的IL-6合成。TNF-α-腫瘤壞死因子α(TNF-α)受刺激的單核細胞、巨噬細胞、B淋巴細胞、T淋巴細胞和NK細胞等合成的157個氨基酸(aa)殘基蛋白質，以三聚體形式存在于循環(huán)系統(tǒng)中。TNF介導直接抗腫瘤作用，導致腫瘤細胞裂解，促進白細胞募集，誘導血管發(fā)生并促進成纖維細胞增殖。IFN-γ-γ干擾素(IFN-γ)活化的T淋巴細胞和NK細胞合成的21-24-kD糖蛋白同型二聚體，是單核細胞的強烈活化劑，增加單核細胞破壞細胞內微生物和腫瘤細胞的能力。它具有直接的抗病毒和抗增殖活性，并且導致許多細胞類型表達II型MHC(主要組織相容性復合體)細胞表面分子復合體，以及增加I類MHC的表達。GM-CSF-粒細胞巨噬細胞-集落刺激因子(GM-CSF)在循環(huán)中作為單體被發(fā)現(xiàn)的127aa蛋白質，由巨噬細胞和T淋巴細胞、成纖維細胞和內皮細胞產(chǎn)生。它是造血細胞的生長因子，并且刺激骨髓單核細胞譜系的生長和分化。IL-3-白介素-3(IL-3)活化的CD4+T輔助細胞合成的20-kD淋巴因子，其通過促進一些造血細胞的增殖和促進T淋巴細胞的增殖和分化而作為集落刺激因子。IL-6-白介素-6(IL-6)活化的T淋巴細胞、單核巨噬細胞、內皮細胞和成纖維細胞產(chǎn)生的26-kD細胞因子。它作用于許多細胞并且在使得活化的B淋巴細胞分化成分泌抗體的漿細胞中有特殊功能，并且誘導肝細胞形成急性期蛋白質(參與炎癥反應)以及血纖維蛋白原。IL-8-白介素-8(IL-8)巨噬細胞和內皮細胞產(chǎn)生的8-kD蛋白質。它是嗜中性粒細胞和T淋巴細胞的強烈的趨化因子，并且促進嗜中性粒細胞附著到內皮細胞。IL-1α-白介素1α(IL-1α)從33-kD前體分子切除的17-kD細胞因子(像IL-1β)，由活化的單核吞噬細胞合成，很少在循環(huán)中以游離形式被發(fā)現(xiàn)，并且作為膜結合的物質。它幫助IL-1β介導炎癥反應。IL-10-白介素-10(IL-10)CD4+和CD8+淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞和活化的B淋巴細胞和角質化細胞產(chǎn)生的18-kD多肽。它抑制巨噬細胞尤其向TH-1型細胞呈遞抗原的能力，并分泌IL-6和TNF。IL-16-白介素-16(IL-16)CD8+T淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、肥大細胞、和呼吸上皮細胞產(chǎn)生的14-kD四聚體蛋白。它對于CD4+T淋巴細胞和單核細胞具有強力的化學引誘性質。G-CSF-單核細胞集落刺激因子(G-CSF)巨噬細胞、內皮細胞、成纖維細胞和基質細胞產(chǎn)生的22-25kD同型二聚體糖蛋白。它增加骨髓中的粒細胞祖細胞，并且維持血液嗜中性粒細胞的增加。它還增強嗜中性粒細胞顯示出增強的超氧化物產(chǎn)生，超氧化物被認為在微生物感染的細胞和腫瘤細胞的破壞中是重要的。TNF-β-腫瘤壞死因子β(TNF-β)活化的淋巴細胞產(chǎn)生的25-kD蛋白質。它可以殺死培養(yǎng)的腫瘤細胞，并刺激成纖維細胞增殖。此外，它模擬TNF-α的多數(shù)其他作用。MIP-1α-巨噬細胞炎性蛋白-1(MIP-1α)巨噬細胞和其他細胞產(chǎn)生的66-aa單體蛋白質。它是單核細胞、T淋巴細胞和嗜酸性粒細胞的化學引誘劑。RANTES-T淋巴細胞產(chǎn)生的8kD蛋白質，是單核細胞、T淋巴細胞和嗜酸性粒細胞的化學引誘劑，并且促進炎癥。EGF-表皮生長因子(EGF)53-aa殘基的三硫酸化的多肽。EGF是酪氨酸激酶家族成員，具有多種功能，包括刺激促有絲分裂應答和幫助傷口愈合。PGE2-前列腺素E2(PGE2)PGE2屬于通過環(huán)加氧酶酶促反應從花生四烯酸衍生的生物活性脂類的家族。它由活化的單核細胞釋放并且阻斷淋巴細胞和巨噬細胞上MHCII類表達。TxB2-血栓烷B2(TxB2)TxB2是通過異構化前列腺素和通過血栓烷合成酶內過氧化PGH2從不飽和脂肪酸衍生的生物活性化合物的成員。TxB2在血栓栓塞性疾病和過敏性反應中具有生理作用。CD25+細胞-CD25是單鏈糖蛋白，通常稱作白介素-2-受體(IL-2R)的α鏈或者Tac-抗原，其具有55kDa的分子量并且存在于活化的T細胞和B細胞和活化的巨噬細胞上。它作為IL2的受體。CD25抗原與IL-2R的β鏈一起形成IL-2的高親和性受體復合體。CTLL-2(細胞系)-從C57B1/6小鼠得到的小鼠細胞毒性T淋巴細胞的細胞系。該T細胞系依賴于外源IL-2生長和增殖。Fas-FasL-Fas/Fas配體系統(tǒng)。Fas抗原，一種介導細胞凋亡的細胞表面跨膜蛋白質，和嗜中性粒細胞上互補的Fas活化的細胞因子的組合，將細胞凋亡信號轉導到細胞中。Fas是屬于腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族的I型膜蛋白，F(xiàn)asL是TNF家族的成員。FAS配體是31kDa(千道爾頓)的膜結合的蛋白質(278個氨基酸)。Fas-Fas配體系統(tǒng)在包括自體反應性淋巴樣細胞的清除在內的許多生物過程中起重要作用。Fas配體主要在活化的T淋巴細胞中表達并且是細胞毒性T淋巴細胞和自然殺傷細胞的主要效應分子。HLA-DR+淋巴細胞-含有人白細胞抗原(HLA)-DR抗原的淋巴細胞，HLA-DR抗原是由在位于6號染色體上的白細胞基因座中發(fā)現(xiàn)的glue序列確定的一組多態(tài)性糖蛋白，所述基因座是人中主要組織相容性基因座。IU(國際單位)-通過與特定重量和濃度的國際參照標準相比，如與人IL-2的WHO首次國際標準86/504相比，生物制劑的效價的測量單位。國際單位是所公布的報導生物活性單位的唯一公認的和標準化的方法，并且是國際共同研究努力的結果。U(對生物活性的測量單位)-多種稱為“單位”的速記法，其作為參照出自每個實驗室，為進行工作的實驗室所特有的。每個“單位”在一個實驗室與另一個實驗室之間是不同的，并且不在全世界上公認為標準，如國際單位(IU)。單核浸潤-單核細胞、漿細胞和淋巴細胞存在于它們“通?！辈淮嬖诘慕M織中；或者這些細胞以大數(shù)目或者豐度成簇存在于它們通常僅以小數(shù)目存在的地方。TCRζ鏈-T細胞受體ζ鏈。ζ亞基是TCR復合體的一部分并且靶向TCR細胞表面受體與其配體(抗原)的相互作用。延伸到細胞質(胞質溶膠)的ζ亞基當T細胞活化時在它的酪氨酸殘基磷酸化并且在TCR連接后參與信號轉導。TIL(腫瘤浸潤淋巴細胞)-從它們浸潤的腫瘤中分離的T淋巴細胞。腫瘤浸潤淋巴細胞有很小的或者沒有細胞毒性。TIL主要包括CD4+CD8+T細胞，并且可以通過在IL-2存在下培養(yǎng)在體外擴增。這些細胞通過IL-2的處理活化并且經(jīng)常對它們所分離自的腫瘤比對正常淋巴因子活化的細胞更具攻擊性。TIL的細胞毒性活性可以通過IFN-γ增強。可以通過TGF-β在體內阻斷TIL的抗腫瘤活性。ZAP70-與TCRζ鏈結合的70kDζ相關蛋白質，其是胞質溶膠中存在的酪氨酸激酶。ZAP70被認為ζ參與保持T淋巴細胞受體信號，介導信號轉導，其最終產(chǎn)生IL-2。ZAP70基因在T細胞和自然殺傷細胞中表達并且定位于人類染色體2q12。ζ(Zeta)鏈-見TCRζ鏈-ζ鏈基因位于人的1號染色體。該蛋白質的細胞外結構域長為9個氨基酸，而跨膜結構域含有帶負電荷的天冬氨酸殘基，細胞質結構域長為113個氨基酸。細胞質尾含有在CD3鏈的細胞質尾中發(fā)現(xiàn)的3個抗原識別基序。ζ鏈還結合其他受體，如NK細胞的Fc(片段，結晶的)-γ受體。USP-美國藥典專著。P-“p＜0.01”數(shù)理統(tǒng)計學中的一個術語，表示在預置條件下一種事件發(fā)生的概率水平。ANOVA(方差分析)-如在統(tǒng)計學和數(shù)學教科書，例如，″HandbookofStatisticalMethodsforEngineersandScientists″，HarrisonM.Wadsworth，Jr.，Ed.，McGrawHill1990，和″StatisticalOperationsAnalysisofHealthResearchData″，RobertP.HirschandRichardK.Riegelman，Eds.BlackwellScienceInc.，1996中描述的單因子分析。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine的作用方式和表征白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine是在本文描述的設定條件下產(chǎn)生的天然來源的和天然發(fā)生的人細胞因子混合物，為具有生物活性、最小毒性和免疫調節(jié)性混合物。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine可以用作抗癌和抗病毒治療或者作為新輔助療法，對于癌癥、感染性疾病和其他應答免疫調節(jié)的疾病狀態(tài)有廣譜應用。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine可以通過本領域已知的方法制備。Mizel等人，″PurificationtoApparentHomogeneityofMurineInterleukin1″，JImmunol.126834(1981)；Togawa等人，″CharacterizationofLymphocyte-ActivatingFactor(LAP)ProducedbyHumanMononuclearCellsBiochemicalRelationshipofHighandLowMolecularWeightFormsofLAF″，JImmunol.1222112(1979)；Lachman等人，″PurificationofHumanInterleukin1″，Chem.Abstr.94137539t(1981)ofJ.Supramolec.Struct.13457(1980)；Lachman等人，″PartialPurificationofHumanLymphocyteActivatingFactor″，Chem.Abstr.93165824e(1980)ofPrep.Biochem.10387(1980)；Mizel等人，″CharacterizationofLymphocyteActivatingFactorObtainedfromtheMurineMicrophageCellLineP388D1″，Chem.Abstr.9393346a(1980)，ofBiochem.Charact.Lymphokines，Proc.Int.LymphokineWorkshop2nd(1979)pp.411-418；Economou等人，″Purification，PhysicochemicalCharacterizationandaBiologicalRoleofLymphocyteActivatingFactor(LAF)″，Chem.Abstr.9393347b(1980)ofBiochem.Charact.Lymphokines，Proc.Int.LymphokineWorkshop，2nd(1979)pp.419-421；Simon等人，″TheRoleofSubcellularFactorsinPulmonaryImmuneFunctionPhysicochemicalCharacterizationofTwoDistinctSpeciesofLymphocyte-ActivatingFactorProducedbyRabbitAlveolarMacrophages″，J.Immunol.1261534(1981)。動物研究也表明“混合的白介素”在體外具有免疫調節(jié)和免疫刺激活性(Hadden等人，″MixedInterleukinsandThymosinFractionVSynergisticallyInduceTLymphocyteDevelopmentinHydrocortisone-TreatedAgedMice″，Cell.Immunol.144228-236(1992))。不被本發(fā)明的任何理論束縛，一種可能的假設是“混合的白介素”如白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine的局部/區(qū)域注射克服了局部免疫抑制。隨后，發(fā)生對腫瘤抗原的耐受性的打破并且允許發(fā)生有效的局部抗腫瘤免疫應答。已證實在腫瘤區(qū)域中局部滴注白介素或者向腫瘤中實際轉染白介素基因顯著增強了抗腫瘤免疫應答，導致腫瘤消退，如Golumbek等人，″TreatmentofEstablishedRenalCancerbyTumorCellsEngineeredtoSecreteInterleukin-4″，Science254713-716(1991)報導。然而，這些研究都沒有發(fā)現(xiàn)誘導惡性細胞進入細胞周期階段而不導致腫瘤的積極增殖的非常意外的效果。出乎意料地，手術前施用白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine導致細胞周期階段中腫瘤細胞數(shù)增加而不增加腫瘤更快生長和更快復發(fā)的風險(如從現(xiàn)有技術預測的)。誘導腫瘤細胞進入細胞周期的能力似乎是白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine特有的并且可能是由于該試驗的藥物中存在的不同細胞因子的協(xié)同作用和這些細胞因子對宿主的免疫系統(tǒng)和宿主細胞的差別作用。關于手術前用白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理的患者的復發(fā)率的數(shù)據(jù)表明在用白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理后24個月沒有顯示出癌癥的復發(fā)。值得注意的是，一小群8名順序處理的患者在24個月的隨訪期內沒有一名復發(fā)患者。形成鮮明對比的是，文獻教導在手術后18-24個月內，類似患者的復發(fā)率為約50％。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine?jīng)]有誘導存在于腫瘤的淋巴樣細胞的活躍增殖。對應地，白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理后，基質Ki-67+細胞減少而Ki-67+癌細胞的頻率增加。從而，白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理誘導周期中腫瘤細胞數(shù)增加，導致殘留腫瘤對放射和/或化學療法繼續(xù)治療的敏感性增加。盡管用天然和重組細胞因子進行的其他研究在癌癥療法的治療中顯示出功效，但是那些研究沒有教導誘導進入細胞周期或者將白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine與化學療法、免疫療法和放射療法協(xié)同組合的新方法。例如，使用天然的人和重組IL-2和其他細胞因子進行的研究以及在局部區(qū)域療法中表明在多個部位免疫增強和抗癌活性。具體地，IL-2在胸膜腔、肝和膀胱中顯示出活性，而IFN-α在卵巢中顯示出活性，IFN-β在腦中顯示出活性，如Yasumoto等人，″Inductionoflymphokine-activatedlillercellsbyintrapleuralinstillationsofrecombinantinterleukin-2inpatientswith，malignantpleurisyduetolungcancer″，CancerRes1987；472184-7；Mavilgit等人，″Splenicversushepaticarteryinfusionofinterleukin-2inpatientswithlivermetastases″，JClinOncol1990；8319-24；Pizza等人，″Tumorregressionafterintralesionalinjectionofinterleulin-2(IL-2)inbladdercancer.Preliminaryreport″，IntJCancer1984；34359-67；Berek等人，″Intraperitonealrecombinantα-interferonfor″salvage″immunotherapyinstageIIIepithelialovariancanceragynecologiconcologygroupstudy″，CancerRes1985；454447-53；和Fettel等人，″Intratumoradministrationofbeta-interferoninrecurrentmalignantgliomas-AphaseIclinicalandlaboratorystudy″，Cancer1990；6578-83報導。甚至，已經(jīng)證明IFN-γ在皮膚中顯示出活性，而TNF-α在外生殖器中顯示出活性，而多種細胞因子的混合物在頭和頸中顯示出活性，如Edwards等人，″Theeffectofintralesionalinterferongammaonbasalcellcarcinomas″，JAmAcadDermatol1990；22496-500；Irie等人，″Acaseofvulvacancerrespondingtotherecombinanthumantumornecrosisfactor(PT-950)localinjectiontherapy″，GanNoRinsho1988；34946-50；以及Pulley等人，″Intravenous，intralesionalandendolymphaticadministrationoflymphokinesinhumancancer″，LymphRes1986；5S157-63。此外，對在頸靜脈淋巴管外周或頸靜脈淋巴管外周和下顎下進行手術之前施用10天重組IL-2的研究顯示了不定的壞死和淋巴細胞浸潤，如Valente等人，″InfiltrationleukocytepolulationsandT-lymphocytesubsetsinheadandnecksquamouscellcarcinomasfrompatientsreceivingperilymphaticinjectionsofrecombinantinterleukin-2″，ModPathol1990；3702-8以及DeStefani等人，″Treatmentoforalcavityandoropharynxsquamouscellcarcinomawithperilymphaticinterleukin-2clinicalandpathologiccorrelations″，JImmunother1996；19125-33報導。此外，對切除的腫瘤進行顯微鏡檢查表明淋巴細胞浸潤的增加與IL-2的臨床觀察相關，如Saito等人，″Immunohistologyoftumortissueinlocaladministrationofrecombinantinterleukin-2inheadandneckcancer″，NipJibiGakkaiKaiho1989；921271-6報導。然而，盡管在20名頭頸癌患者中在公認的高劑量的重組IL-2(800,000U四周[U＝單位])下有兩例減輕，上面的研究都沒有在切除的腫瘤的總體尺寸上顯示出改變，如Sainto等人，“ClinicalevaluationoflocaladministrationofrIL-2inheadandneckcancer”，NipJibiGallaiKaiho.1989；921271-6所報道。此外，前述研究受到患者數(shù)目少的限制并且受到缺少與對照組進行病理學比較的阻礙。Vlock等人，″PhaseIbtrialoftheeffectofperitumoralandintranodalinjectionsofinterleukin-2inpatientwithadvancedsquamouscellcarcinomaoftheheadandneckanEasternCooperativeOncologyGrouptrial″，Immunother1994；15134-139；Musiani等人，″Effectoflowdosesofinterleukin-2injectedperilymphaticallyandperitumorallyinpatientswithadvlmcedprimaryheadandnecksquamouscellcarcinoma″，JBioiResModi1989；8571-578。盡管DeStefani等人最近對202名OSCC患者進行的隨機化的多中心III期研究表明在手術前向同側(ipsylateral)頸部淋巴結鏈淋巴管周圍施用低劑量(5000U/天[U＝單位])重組人IL-2導致無疾病存活率的顯著(p＜0.01)增加，其又導致更長的總存活率(p＜0.03)，但是DeStefani等人沒有評價該治療方案在細胞周期中的作用和它對放射和化學療法的改善的影響。DeStefani等人，″ImprovedSurvivalWithPerilymphaticInterleukin2inPatientsWithResectableSquamousCellCarcinomaoftheOralCavityandOropharynx″，Cancer2002；9590-97。此外，盡管教導5000U/天，但是不能參考DeStefani等人對所施用的生物制品的“高”和“低”劑量的教導，對本發(fā)明和DeStefani等人的進行比較，因為其所施用的藥物效價是沒有定義的U(單位)。相比而言，本發(fā)明驗證并完成了完全USP分析方法驗證程序，以用IU(國際單位)確定白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine的生物活性。本領域技術人員應理解通過免疫組織化學Ki-67標志物或者其他等同方法如通過使用PCNA標志物、p53標志物測量的腫瘤細胞增殖可以用作預后參數(shù)，deVicente等人，″ExpressionofcyclinD1andKi-67insquamouscellcarcinomaoftheoralcavityclinicopathologicalandprognosticsignificance″，OralOncol2002；38301-8；Bettendorf等人，″PrognosticrelevanceofKi-67antigenexpressionin329casesoforalsquamouscellcarcinoma″，ORLJOtorhinolaryngeolRelatSpec2002；64200-5。流式細胞術或者常規(guī)染色方法和顯微術的使用與臨床、組織病理學以及腫瘤分期和分類(TNM、腫瘤、結節(jié)、轉移)與其他方法結合用來指示疾病過程的侵襲性。Kerdpon等人，″Expressionofp53inoralmucosalhyperplasia，dysplasiaandsquamouscellcarcinoma″，OralDisease1997；386-92。Ki67細胞增殖標志物分化并且僅對于細胞周期階段中的細胞是特異的。G1是第一生長階段；S是第二階段，其標志是細胞啟動DNA合成，其中細胞DNA復制，G2是DNA復制后的第二生長階段，其中細胞大小加倍。M是細胞周期的最后階段，在該階段發(fā)生有絲分裂，其中細胞從最初的親本細胞分裂成子細胞。每個所得的細胞含有最初親本細胞DNA的完整拷貝。對細胞周期中的細胞特異的Ki67不能在處于G0中的細胞中發(fā)現(xiàn)，G0是細胞的休眠期。在G0中，細胞不經(jīng)歷細胞復制、增殖或者DNA復制。值得注意的是，細胞周期的階段現(xiàn)象是包括腫瘤細胞在內的所有活的真核細胞共有的性質。為了檢測細胞增殖，在腫瘤切除后確定殘留的腫瘤細胞巢中Ki-67的存在。Raybaud等人，″NuclearDNAcontent，anadjuncttop53andKi-67asamarkerofresistancetoradiationtherapyinoralcavityandpharyngealsquamouscellcarcinoma″，IntJ.OralMaxillofacSurg2000；2936-41；Koelbl等人，″p53andKi-67aspredictivemarkersforradiosensitiveityinsquamouscellcarcinomaoftheoralcavity？Animmunohistochemicalandclinicopathologicstudy″，IntJRadiatOncolBiolPhys2001；49147-54。通常，可以在經(jīng)歷細胞周期G1、S、G2和M的細胞中但是不在“休眠”的腫瘤細胞(G0)中發(fā)現(xiàn)Ki-67。鑒于周期中腫瘤細胞是放射和化療敏感的，則周期外腫瘤細胞總體上是放射和化療耐受的。在殘留腫瘤的手術切割前用白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理的頭頸癌患者的腫瘤通過免疫組織病理學進行研究和分析。Timár等人，″TheeffectofLeukocyteInterleukin，Injectionontheperi-andintratumoralsubpopulationofmononuclearcellsandontumorepithelia-Apossiblenewapproachtoaugmentingsensitivitytoradiationandchemotherapyinoralcancer.Amulti-centerPhaseI/IIclinicaltrial″，TheLaryngoscope113，December2003。研究以盲法進行并且由三名獨立的有資格的病理學家進行，這些病理學家對于該處理和處理的或者對照患者群體都不知情。臨床研究分析了一組54名口腔鱗狀上皮細胞癌患者(H&NC)作為I-II期臨床試驗的一部分。對這些患者進行了治療方案、腫瘤和臨床應答的安全性的研究，并研究單核浸潤的組成和細胞周期速率。用白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine預敏化癌癥的治療方案是基于為頭頸癌患者開發(fā)的治療方法而設計的，該方法被證明以統(tǒng)計學顯著方式顯著增加腫瘤細胞周期化，目的是使得這些腫瘤細胞對用放射和/或化學療法的繼續(xù)治療更敏感。所述治療包括在可見或者可觸及的腫瘤塊的周圍邊緣皮內施用白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine。在腫瘤塊的周圍邊緣圍繞腫瘤施用日劑量為約20IU至1600IUIL-2的白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine，兩周療程內進行10次皮下每日注射。另一療程為40IU至800IU。另一個范圍是35IU至75IU。所建議的治療的另一個特定的非限制性實例預期以55IUIL-2的日劑量施用白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine，通常在2周內共10次皮下日注射。患者表1和表2中提供了關于白細胞白介素注射液(LI)處理的和對照患者組的信息。包括54名患者，對照組中27名患者，處理組中27名患者。表1白細胞白介素、注射對照組患者信息F.mouth＝口底表2白細胞白介素注射液(LI)處理組的患者信息HD高累積劑量的白細胞白介素注射液(8000IU，按照IL-2當量)，MD＝中等劑量(4800IU)ID＝低劑量(2400IU)用白細胞白介素(LI)或者Multikine對癌癥的治療方案本發(fā)明考慮的用白細胞白介素(L1)或者Multikine預敏化癌癥的治療方案的另一實施方案是基于為頭頸癌患者開發(fā)的治療方法而設計，該方法被證明以統(tǒng)計學顯著方式顯著增加腫瘤細胞周期化，目的是使得這些腫瘤細胞對用放射和/或化學療法的繼續(xù)治療更敏感。所述治療包括在下頜下頸部淋巴結鏈區(qū)域中皮下施用白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine。以約20IU至I600IUIL-2的日劑量10次皮下/真皮下每日注射白細胞白介素(LI)或者Multikine的兩周療程在腫瘤塊周圍邊緣圍繞腫瘤施用1/2，在腫瘤塊同側(ipsylateral)的下頜下淋巴鏈施用1/2。另一療程為40IU至800IU。再一個范圍是35IU至75IU。所建議的治療的再一個特定的非限制性實例考慮在兩周的療程中以55IUIL-2的日劑量施用白細胞白介素(LI)或者Multikine，通常共10次皮下每日注射。處理組的27名患者在劑量升級研究中接受圍繞腫瘤施用白細胞白介素(LI)或者Multikine。以下面的方式進行白細胞白介素(LI)或者Multikine施用對于每個測試的劑量組，以下面的劑量在兩周期限(每周3次)內圍繞腫瘤注射日劑量低劑量，每天400IU(IL-2的國際單位)[IL-2當量](8名患者)，中等劑量，每天800IU(IL-2當量)(12名患者)，和高劑量，每周5次，每天800IU(IL-2當量)(7名患者)。所有白細胞白介素(LI)或者Multikine注射液都在真皮內施用于可見的/可觸及的腫瘤塊的外周邊緣。在最初施用白細胞白介素(LI)或者Multikine后21天到28天之間進行旨在切除殘留腫瘤塊的外科手術。局部/區(qū)域放射療法在傷口愈合后在手術后不同的時間在手術后患者中開始，并且取決于個體患者從手術介入的恢復。放射療法通常在手術后2到4天開始。單次靜脈內輸注環(huán)磷酰胺300mg/m2在白細胞白介素(LI)或者Multikine施用之前，環(huán)磷酰胺輸注在第一次Multikine施用前3天。吲哚美辛(25mg)由患者自己口服施用(隨著食物)，每日三次，在環(huán)磷酰胺施用后3天開始，直到手術前24小時。硫酸鋅(50mg)和多種維生素補充物每天一次自助施用，在環(huán)磷酰胺施用后3天開始，直到手術前24小時。這些藥物對腫瘤細胞周期都沒有影響并且以這些藥物的正常癌癥治療劑量的1/5-1/3以下的劑量施用。白細胞白介素由ChesapeakeBiologicalLaboratories，Inc.，Baltimore，MD裝填和提供，對于CEL-SCICorporation，其在密封的硼硅玻璃血清型小瓶中以冷凍方式提供，含有2.2mL400IU/mL(IL-2當量)，用于腫瘤周圍、腫瘤內、淋巴管周圍或者皮下施用。該制劑的總蛋白質含量為約3mg/mL(或者+/-1mg/mL)。提供的物質無菌和無熱原。試驗藥指定的過期日期為當保存在-20℃時從生產(chǎn)日期開始24個月。環(huán)磷酰胺USP(Bristol-Myers-Squibb，Morton，UK)以無菌粉劑提供，用于在靜脈內輸注前重構，每100mg環(huán)磷酰胺含有45g氯化鈉、75mg甘露醇，或者約82mg碳酸氫鈉。吲哚美辛USP(Sanofi-Synthelabo，Paris，F(xiàn)rance)以25mg片劑提供用于隨著食物自助口服施用。硫酸鋅(50mg)(R.P.SchererCorporation，Clearwater，F(xiàn)L)和非處方藥多種維生素由診所為每名患者提供用于自助施用。病理學研究由DepartmentofTumorProgression，NationalInstituteofOncology，Budapest，Hungary(J.T.)進行。由一個病理學方案指導本研究和描述了手術切除的樣品的制備和固定和總體的、宏觀和顯微鏡檢查，以及病理學和免疫組織化學步驟。樣品最初由每個參加的研究所的病理學部門收集和處理，如病理學方案中詳述。然后將樣品運輸?shù)街行牟±韺W研究室以接收、進一步處理和進行病理學評估。對口腔病變的診斷是基于所懷疑的病變的探查切除活組織檢查，選擇分類為T2-3N0-2M0的癌用于以如前述的LI或者Multikine處理方案進行免疫療法。在LI或者Multikine處理期結束后和手術前，評估臨床應答，并且根據(jù)腫瘤應答將患者排定用于腫瘤切除(手術除去殘留腫瘤)、小切除活組織檢查，或者對于完全臨床應答，不進行活組織檢查。因此，兩種形式的LI或者Multikine處理后病理學樣品可用于免疫組織化學或者病理學分析1)完整腫瘤和2)腫瘤活組織檢查樣品。后一種由于它們的小尺寸而限制了這些樣品的病理學分析程度。組織學分析將切除的組織置于含有鹽水緩沖的甲醛的之前加有標簽的容器中，過夜固定后將組織用石蠟包埋并制備5μm玻片用于H&E染色和免疫組織化學分析。對H&E染色的切片進行組織學分析和美國癌癥聯(lián)合委員會(AmericanJointCommitteeonCancer)分級。對三種不同的腫瘤區(qū)域進行組織病理學分析表面(區(qū)1.0)、中心(區(qū)2.0)和腫瘤基質界面(區(qū)3.0)。從H&E玻片評估壞死腫瘤細胞的發(fā)生。通過兩種方法確定頭頸癌腫瘤中上皮組分相對于基質的百分數(shù)首先，結締組織根據(jù)Mallory染色(毛狀體染色)和通過ImagePro分析軟件(MediaCibernetics，SilverSpring，MD)對玻片測量癌細胞巢(腫瘤上皮)的面積。其次，用DAKo(Glostrup，Denmark)的標記癌細胞的泛-細胞角蛋白(pan-cytokeratine)抗體(A1A3+CK19)標記含有切除的組織的載玻片來通過免疫組織化學檢測細胞角蛋白，將載玻片在顯微鏡下檢查并用ImagePro分析軟件分析。確定癌細胞的增殖分數(shù)將石蠟切片用識別Ki-67抗原(DAKO)的小鼠單克隆抗體標記以闡明周期中的細胞群體的比例。在所選視野的三個分開區(qū)域中以×20的最初放大倍數(shù)計數(shù)周期中腫瘤細胞的頻率。此外，還采用與上皮內腫瘤細胞相同的標準確定周期中基質細胞。每個區(qū)域評估了至少3×100個腫瘤細胞。單核細胞浸潤的表征通過對腫瘤樣品的石蠟切片免疫組織化學分析確定腫瘤細胞巢附近存在的單核細胞。將切片脫蠟并用微波處理以恢復抗原性。僅使用以前證明對石蠟切片染色有一致性的商業(yè)抗體。用抗髓過氧化物酶抗體(小鼠單克隆抗體，DAKO)標記嗜中性粒細胞，用小鼠單克隆抗-CD34抗體(DAKO)標記造血干細胞。通過CD68抗原的表達(小鼠單克隆抗-CD68，DAKO)鑒定巨噬細胞群體，通過纖毛標志物的表達(小鼠抗-纖毛，Immunotech，Paris，F(xiàn)rance)鑒定樹突細胞。通過LCA抗原表達(小鼠單克隆抗-CD45，DAKO)鑒定淋巴樣細胞。通過小鼠單克隆抗-CD20標記B細胞群體并通過大鼠多克隆抗-CD3抗體(都來自DAKO)鑒定T細胞.通過CD8的表達(通過小鼠單克隆抗-CD8，DAKO)來鑒定細胞毒性T細胞，用CD57抗原(小鼠單克隆抗-CD57抗體，Novocastra，NewcastleonTyne，UK)鑒定NK細胞。通過使用針對IL-2R的小鼠單克隆抗體CD25(Novocastra)鑒定腫瘤上皮和基質內的表達白介素-2受體(IL-2R)的細胞。在所有情況中，合適的同種型對照抗體用作陰性對照。所有免疫組織化學標記都用DAKOLSAB-2試劑盒進行，用生物素化的抗-小鼠/抗-兔免疫球蛋白G接頭和鏈霉抗生物素蛋白-辣根過氧化物酶來揭示特異結合的抗體。所用的發(fā)色團是氨基-乙基咔唑(AEC)(紅色)標記。將切片用蘇木精復染以顯示細胞核。熱點考慮基于類似于微血管密度的測量的“熱點”技術確定單核細胞的密度。在每個研究的腫瘤區(qū)域，測量最高腫瘤浸潤單核細胞密度區(qū)中浸潤細胞的密度，從而使組織中細胞浸潤的極端不均一性降到最小。病理學研究設計來自LI或者Multikine處理的和對照(非LI處理的)組的腫瘤活組織檢查樣品用H&E染色，通過腫瘤的顯微鏡下的外觀來評估。進行CD3、CD8、纖毛和CD25標記，只要樣品的大小允許進行所有四種標記步驟。在對照組和LI處理組中(其中進行完整腫瘤去除)，整個腫瘤組織可用于分析；因此，使用完整的分析程序。使用40倍的最初放大倍數(shù)來選擇玻片用于觀察，在玻片的所選區(qū)域的病理學分析中使用100倍的最初放大倍數(shù)。由三名獨立的病理學家對每名患者的腫瘤切片進行組織學評估。在病理學家之間不一致的地方達成了兩方同意的決定。由三名相同的病理學家進行形態(tài)測定，他們對臨床背景的知識和每個病例(LI-處理的病例或者對照病例)的處理結果都不知情。統(tǒng)計學分析通過ANOVA單因子分析來分析數(shù)據(jù)，＜0.05(α＝0.05)的p值被認為是統(tǒng)計學上顯著的。結果組織學評估OSCC的對照組由如通過Broder的分類法確定的不同的角質化等級(BRI-BR3)的扁平細胞癌組成。Odell等人，″TheProgosticValueofIndividualHistologicGradingParametersinSmallLingualSquamousCellCarcinomas；TheImportanceofthePatternofInvasion″，Cancer74789(1994)。LI處理組與對照組在腫瘤類型方面無差異，如表III和IV中所示。這進一步通過細胞角蛋白免疫染色模式來證明，揭示了在兩個腫瘤組中CK-19或者pan-CK的高度異質性表達。表3組織學，對照組SCC＝鱗狀細胞癌BR＝Broder等級(角質化)Size＝最大寬度×最大深度(mm)Superfic表面的(僅在空氣-腫瘤界面)Unicell.僅單細胞壞死；Microfocal壞死僅存在于顯微病灶中；Field匯合區(qū)表4組織學和病理學；白細胞白介素注射液處理組B＝僅切除活組織檢查SCC＝鱗狀細胞癌BR＝Broder等級(角質化)Size＝最大寬度×最大深度(mm)Superfic表面的(僅在空氣-腫瘤界面)Unicell.僅單細胞壞死；Microfocal壞死僅存在于顯微病灶中；Field匯合區(qū)HD＝高累積劑量的白細胞白介素注射液(8000IU，按照IL-2當量)MD＝中等劑量(4800IU)LD＝低劑量(2400IU)腫瘤基質盡管存在Hadden等人，″Interleukinsandcontrasuppressioninduceimmuneregressionofheadandneckcancer″，ArchOtolaryngolHeadNeck.Surg120395(1994)；Verastegui等人，″Anaturalcytokinemixture(IRX-2)andinterferencewithimmunesuppressioninduceimmunemobilizationandregressionofheadandneckcancer″，IntJImmunopharmac19619(1997)；和Barrera等人，″CombinationImmunotherapyofsquamouscellcarcinomaoftheheadandneck″，Arch.(2000)的以前報導，但是還是不能證明癌細胞巢的“片段化”。然而，在對照組中27名中的8名和LI處理組中17中的6名患者中鑒定了富含基質的腫瘤。用Mallory毛狀體染色對癌細胞巢和腫瘤基質的特異標記有助于區(qū)別這些區(qū)域。使用形態(tài)測定法測定對照和LI處理組中上皮巢的百分數(shù)。該分析沒有揭示顯著差異，從而提示LI處理不影響腫瘤-基質比。壞死和增殖還評估了使用組織學分析顯示在表3和表4中的LI處理對腫瘤壞死的影響和LI處理對癌細胞增殖的影響(圖2)，以及通過Ki-67標志物檢測的周期中細胞的特定鑒定。組織學分析鑒定了在LI處理組和對照組中區(qū)域壞死或者微型病灶、表面或者單細胞壞死，如表5所示。OSCC中任何類型的壞死的不存在在來自所研究的不同LI處理組(57％-63％)的所有腫瘤中都相似，如表5所示。大于1％腫瘤體積的范圍內測量的區(qū)域壞死在表3和4的多種腫瘤組中也是相似的。表5白細胞白介素注射液處理對口腔鱗狀細胞癌中壞死的存在的影響通過Ki-67表達檢測周期中細胞鑒定的宿主細胞的癌細胞和基質細胞，如單核細胞、成纖維細胞、內皮細胞在圖2中顯示(100倍放大倍數(shù))。對Ki-67陽性癌細胞密度的形態(tài)測定分析表明除了所使用的最高LI劑量之外，LI處理誘導周期中腫瘤細胞顯著增加(P＜0.05)，如圖4所示。另一方面，主要在腫瘤的基質區(qū)中發(fā)現(xiàn)的周期中宿主細胞的發(fā)生率隨著LI劑量的增加而降低(圖4)，并且對于最低和最高劑量，證明效果是顯著的(P＜0.05)。這些發(fā)現(xiàn)支持如下結論用白細胞白介素注射液(LI)處理或者Multikine處理導致癌細胞進入細胞周期階段，但是不導致宿主免疫細胞或者基質細胞進入周期。因此，本發(fā)明預期白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理基于Ki-67抗原的表達誘導高比例的腫瘤細胞群體進入細胞周期。關于在手術前用白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理然后通過放射療法處理或者觀察等待的患者的復發(fā)率數(shù)據(jù)沒有顯示出白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理后24個月時復發(fā)率的增加。一小組8個順序的白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理的患者在24個月的隨訪期內沒有一個復發(fā)患者。相比，文獻認定這些患者的復發(fā)率在手術后18-24個月時為約50％。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理沒有表現(xiàn)出誘導存在腫瘤的淋巴樣細胞的活躍增殖，并且對應的基質Ki-67+細胞減少，而Ki-67+癌細胞的頻率在白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine處理后增加。從而，LI或者Multikine處理增加了周期中腫瘤細胞數(shù)，導致殘留腫瘤對接下來用放射和/或化學療法的治療的敏感性增加。單核細胞浸潤在基質隔室和定義為上皮內浸潤的癌細胞巢中評估單核細胞浸潤。使用常規(guī)H&E染色，從對照和LI處理組切除的腫瘤之間沒有鑒定到明確的差異。對照組在這方面也是高度異質性的。具體地，一些腫瘤的特征是密集白細胞浸潤，而其他腫瘤特征是漿細胞浸潤。還有其他的特征是淋巴樣細胞浸潤。測量上皮內和腫瘤基質內通過CD68標記鑒定的巨噬細胞的密度。巨噬細胞的上皮內密度與基質的相當。與LI處理的腫瘤相似，在對照腫瘤中也具有相對高密度的上皮內巨噬細胞。還通過形態(tài)測定法測定OSCC中髓過氧化物酶陽性嗜中性粒細胞白細胞的密度。這些研究表明LI處理后，在基質和上皮內嗜中性粒細胞密度沒有統(tǒng)計學顯著差異。在OSCC的三個區(qū)域上進行形態(tài)測定測量。腫瘤表面定義為區(qū)域1.0。腫瘤中心定義為區(qū)域2.0。通常稱作侵入邊的腫瘤-基質界面定義為區(qū)域3.0。對于這些區(qū)域，沒有觀察到巨噬細胞或者結締組織比的顯著差異。然而，為了表征OSCC中淋巴浸潤，不管樣品之間的實際相似性或者差異，研究了這三個區(qū)域之間的區(qū)別。白細胞白介素注射液處理對口腔鱗狀細胞癌中樹突細胞的影響通過CD1a標志物鑒定樹突細胞，其揭示在腫瘤周圍正常上皮內富含浸潤物。該富集浸潤物模式在癌細胞巢中明確地減少。在對照或者LI處理組中腫瘤基質中鑒定的樹突細胞沒有顯著差異。在癌癥病例中，上皮內樹突細胞浸潤是異質性的，與處理組無關。白細胞白介素注射液處理對口腔鱗狀細胞癌中淋巴樣細胞浸潤的影響通過OSCC的不同區(qū)域內白細胞共同抗原(ICA，CD45)的表達鑒定淋巴樣細胞，表明在腫瘤基質內存在的淋巴細胞比癌細胞巢中明顯更稠密，比例為約1∶10。相對于淋巴樣浸潤物，在任意處理組中OSCC的從表面到侵入邊的不同區(qū)域之間沒有觀察到顯著的位置差異。如圖3所示，除了研究的最低劑量之外，LI處理在基質淋巴樣浸潤物中誘導增加的傾向不是統(tǒng)計學顯著的。然而，僅僅最低劑量的LI處理誘導上皮內CD45細胞顯著(P＜0.05)增加，如圖5所示。最高劑量的11個降低了CD45陽性細胞的上皮內密度，盡管改變不是統(tǒng)計學顯著的。白細胞白介素注射液處理對口腔鱗狀細胞癌中白介素-2受體α陽性(CD25陽性)淋巴樣細胞的影響發(fā)現(xiàn)約10％的基質或者上皮內淋巴樣細胞在OSCC樣品中表達IL-2Ra。在LI處理的OSCC病例的不同區(qū)域內CD25陽性淋巴樣細胞的發(fā)生率沒有顯著差異。用LI處理僅在最低LI劑量下增加了基質(除了區(qū)1表面外)和上皮內CD25陽性淋巴樣細胞的發(fā)生率(P＜0.05)，如圖6和7所示。白細胞白介素注射液處理對口腔鱗狀細胞癌中B細胞密度的影響在所有LI處理組中，通過CD20標志物鑒定的B細胞僅在腫瘤基質中發(fā)現(xiàn)。在對照病例中不同區(qū)中B細胞的密度沒有差異。LI處理誘導B細胞從表面區(qū)再分布到侵入邊。然而，趨勢不是統(tǒng)計學顯著的。白細胞白介素注射液處理對口腔鱗狀細胞癌中T細胞的影響通過CD3標志物鑒定OSCC中單核細胞浸潤物的T細胞亞群。T細胞的上皮內密度低于對照組腫瘤中T細胞的基質密度的5％，如圖8所示(400倍放大倍數(shù))。然而，在不同對照患者中，CD3-陽性T細胞的數(shù)目和百分比存在很大差異。如圖9所示，LI處理組中CD3-陽性T細胞更占優(yōu)勢(400倍放大倍數(shù))。在LI處理的腫瘤中，CD3-陽性T細胞的基質密度在多數(shù)腫瘤區(qū)中降低30％到40％，并且研究了LI劑量，如圖10所示。然而，由于個體差異，差異不是統(tǒng)計學顯著的，如圖10所示。與腫瘤基質中的發(fā)現(xiàn)相比，LI處理誘導上皮內T細胞密度顯著增加(P＜0.05)，沒有顯著依賴于LI處理的劑量，如圖11所示。在對照組中，在OSCC的基質中發(fā)現(xiàn)的約50％的T細胞可認為是細胞毒性T細胞，其特征是CD8標志物。類似于CD3-陽性細胞，LI處理誘導OSCC基質中CD8-陽性細胞的發(fā)生率降低，通常降低30％-40％。但是差異不是統(tǒng)計學顯著的。在無處理的對照OSCC病例中，在上皮內發(fā)現(xiàn)約10％的基質細胞毒性T細胞。盡管在多種劑量、主要在兩種較低劑量下LI處理誘導上皮內CD8細胞的一定增加，但是該增加依賴于腫瘤中的不同區(qū)和所研究的個體病例并且不是統(tǒng)計學顯著的。自然殺傷細胞的檢測本研究中浸潤口腔癌的NK細胞沒有在整個患者組中被檢測到。在OSCC中沒有檢測到NK細胞不是由于免疫反應的技術失敗，因為在與所研究的腫瘤組織相鄰的區(qū)域中成功地檢測到神經(jīng)細胞和退化肌細胞中的N-CAM(CD57)。檢測口腔鱗狀細胞癌中CD34-陽性造血干細胞以前的報導表明OSCC腫瘤可以在它們的基質中含有CD34-陽性干細胞。Schmidt等人，″MechanismsofimmunesuppressioninpatientswithheadandneckcancerpresenceofCD34+cellswhichsuppressimmunefunctionswithincancersthatsecretegranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor″，CHnCancerRes195(1999)；Young等人，″Mechanismsofimmunesuppressioninpatientswithheadandneckcancerinfluenceontheimmuneinfiltrateofthecancer″，IntJCancer67333(1996)。然而，在對54個石蠟包埋的樣品的當前研究中沒有檢測到CD34-陽性單核細胞。這不是由于技術失敗所造成，因為在研究的所有OSCC病例中容易地檢測到腫瘤微脈管系統(tǒng)中CD34-陽性內皮細胞。討論從當前對54名OSCC患者的病理學研究得到的數(shù)據(jù)表明OSCC是免疫原性腫瘤并且LI處理誘導向腫瘤的淋巴細胞性浸潤。如同在其他癌癥類型中，在從不同患者得到的腫瘤樣品之間關于OSCC的單核浸潤物的組成存在個體差異，提示有必要進行單獨分析以確定細胞浸潤物的哪些組分在OSCC的疾病診斷或者治療性應答中起重要作用。淋巴細胞白介素(LI)處理對OSCC的單核細胞浸潤物的組成具有特定影響。沒有看到對基質、上皮內巨噬細胞、嗜中性粒細胞白細胞或者抗原呈遞細胞如CD1a陽性細胞的影響。另一方面，在對照和LI處理組中，腫瘤周圍正常上皮含有最高密度的樹突細胞。不被本發(fā)明的任何一種理論束縛，這提示OSCC可以分泌直接在腫瘤部位干擾或者抑制抗原呈遞細胞活性的因子。因為患有惡性黑素瘤的患者具有相似的樹突細胞分布，所以，這可以是OSCC的一般現(xiàn)象而不是處理特異的。用LI以本文提供的劑量處理對OSCC的該特征沒有影響。用最低劑量的白細胞白介素注射液(LI)處理誘導淋巴樣細胞在OSCC的癌細胞巢中顯著積累，而對基質密度沒有顯著影響。此外，以400UI/天，每周三次的LI處理增加了腫瘤基質內和上皮內表達CD25的淋巴樣細胞的密度?？赡艽嬖贚I制劑中天然IL-2的相對高局部濃度的反饋抑制回路。對淋巴樣細胞的B細胞群體的分析表明基質B細胞沒有受到LI處理的顯著影響并且B細胞不存在于上皮內。對作為LI治療靶標的T細胞子集的分析沒有產(chǎn)生結論性結果。盡管LI對OSCC的處理誘導了CD3-陽性和CD8-陽性T細胞的基質密度的降低趨勢，但是獨立于LI劑量，對于CD3陽性細胞觀察到LI處理后上皮內密度的顯著增加(P＜0.05)。不被本發(fā)明的任何具體理論束縛，注意到另一T細胞子集如CD4-陽性T細胞可能受到LI處理的影響。白細胞白介素注射液(LI)處理對OSC的一些特征如細胞角蛋白的表達和Broder等級沒有影響。在LI處理后，腫瘤-基質比率也沒有改變。在對照無處理組和LI處理組之間，LI處理周期和殘留腫瘤的手術切除結束時癌細胞巢的壞死宏觀或微觀形式的發(fā)生率沒有差異?；贙i-67抗原的表達，LI處理誘導高比例的腫瘤細胞群體進入細胞周期。LI誘導OSCC腫瘤細胞進入細胞周期是由于該試驗藥物(其包括LI-1β、IL-2、TNF-α、IFN-γ和GM-CSF)中存在的不同細胞因子的協(xié)同作用和這些細胞因子對宿主的免疫系統(tǒng)和腫瘤的差別影響。來自一個研究中心的一小組8名順序LI處理的患者在24個月所隨訪期沒有一名患者復發(fā)。因為周期中腫瘤細胞的增加代表了更快生長和更快復發(fā)腫瘤的風險，所以對照(無LI處理)組相比，研究了在LI處理患者中的復發(fā)率。關于手術前用LI處理的患者(其繼續(xù)用放射療法治療或者觀察等待)中復發(fā)率的初步數(shù)據(jù)沒有顯示出治療方案后24個月時復發(fā)率的增加。由DeStefani等人進行的對202名OSCC患者的最近的隨機化多中心III期研究表明手術前10天向同側頸淋巴結鏈中圍繞淋巴管施用低劑量(5000LI/天)重組人IL-2顯著增加了無疾病存活(P＜0.01)，其又導致更長的總體存活率(P＜0.03)。但是，LI處理的主要靶標群體是CD3-陽性T細胞。因此，LI處理誘導基質浸潤性T細胞向腫瘤上皮內的轉移，其對于抗腫瘤作用和破壞是重要的.用LI處理沒有顯示出誘導存在腫瘤的淋巴樣細胞的活躍增殖。相應地，基質Ki-67陽性細胞減少，而LI處理后Ki-67陽性癌細胞的頻率增加。從而，LI處理似乎誘導定型的抗腫瘤T細胞向癌細胞巢遷移并增加了周期中腫瘤細胞數(shù)，導致增加了殘留腫瘤對用放射療法、化學療法或者它們兩者的隨后治療的易感性。藥物安全性、試驗性功效和組合物在190名HIV和HIV/HPV感染的患者中測試了白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine，沒有與LI或者Multikine施用相關的嚴重不利事件，如Harris等人，″Immunologicapproachestothetreatmentofprostatecancer″，SeminOncol.1999Aug；26(4)439-7；Timar等人，″TheeffectofLeukocyteInterleukin，Injectiononthepen-andintratumoralsubpopulationofmononuclearcellsandontumorepithelia-Apossiblenewapproachtoaugmentingsensitivitytoradiationandchemotherapyinoralcancer.Amulti-centerPhaseVRclinicaltrial″，TheLaryngoscope[113December2003]；Brown等人，″APhaseIOpen-LabelStudyofLeukocyteInterleukin，InjectioninHIV-Iinfectedindividualspreliminaryevidenceforimproveddelayed-typehypersensitivityresponsestorecallantigens″，AntiviralTherapy5(supplement)18，2000；Taylor等人，″ImmunotherapywithLeukocyteInterleukin，Injectionforhumanpapillomavirus(HPV)inducedcervicaldysplasiainHIVpatients″，AnnualMeetingoftheInternationalSocietyforInterferonandCytokineResearch，Cleveland，OH，October2001；`Taylor等人，″ImmunotherapywithLeukocyteInterleukin，Injectionforhumanpapillomavirus(HPV)inducedcervicaldysplasiainHIVpatients″，33rdSGOConference，Miami，F(xiàn)L，March2002所報導的。Multikine還顯示出在小鼠、大鼠、豚鼠和狗中進行的動物毒理學研究中是安全的。此外，還測試并闡明了Multikine在頭頸癌和宮頸非典型增生中的試驗性功效。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine可以還與一種或多種藥學上可接受的載體或者佐劑一起用作免疫調節(jié)組合物的組分，無論是預防性還是治療性的。當被提供用于預防時，在任何感染或者疾病的跡象之前提供免疫調節(jié)組合物。盡管白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine可以以純的或者基本上純的形式施用，但也可使用藥物組合物、劑型或者制劑。用于臨床和人類的本發(fā)明制劑包含如上述的白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine以及一種或多種藥學上可接受的載體，以及任選的其他治療成分，特別是治療性免疫佐劑。載體必須在與制劑的其他成分相容的意義上是“可接受的”并且對其受體是無毒的。通常，將活性成分與液體載體或細分的固態(tài)載體或者兩者均勻并緊密地結合，然后如果必要，將產(chǎn)物形成所希望的劑型來制備制劑。本文所用的術語“藥學上可接受的載體”指任何載體、稀釋劑、賦形劑、懸浮劑、潤滑劑、佐劑、介質、遞送系統(tǒng)、乳化劑、崩解劑、吸收劑、防腐劑、表面活性劑、著色劑、香料或者增甜劑。制劑可以以單位劑型方便地存在并且可以通過藥學領域熟知的任何方法制備。適于靜脈內、肌內、皮內或者腹膜內、經(jīng)鼻等施用的制劑方便地包含活性成分的無菌水溶液，溶液優(yōu)選與受體的血液等滲。本發(fā)明的化合物還可以經(jīng)口、腸胃外、通過吸入噴霧、局部、直腸、口含、陰道或者通過植入的貯庫制劑以含有常規(guī)的無毒性藥學上可接受的載體、佐劑和運載體的劑型施用。本文所用的術語腸胃外包括皮下、靜脈內、肌內、腹膜內、鞘內、室內、胸骨內和顱內注射或者輸注技術?？梢酝ㄟ^將固體活性成分溶于含有生理上可接受的物質如氯化鈉(例如，0.1-2.0M)、甘氨酸等等并且具有與生理條件相容的緩沖pH的水中以產(chǎn)生水溶液并使得溶液無菌來制備此類制劑。這些制劑可以存在于單位或者多劑量容器，如密封的安瓿或者小瓶中。本發(fā)明的化合物還可以以無菌注射制劑的形式施用，例如，作為無菌可注射水性或者油性混懸劑施用?？梢杂煤线m的分散或者濕潤劑和懸浮劑，根據(jù)本領域已知的技術配制這些混懸劑。無菌注射制劑還可以是無菌的腸胃外可接受的稀釋劑或者溶劑中的無菌可注射溶液劑或者混懸劑，例如，作為1，3-丁二醇中的溶液?？梢允褂玫目山邮艿妮d體和溶劑為水、林格液和等滲氯化鈉溶液等。此外，無菌的不揮發(fā)油方便地用作溶劑或者懸浮介質。為此，可以使用任何溫和的不揮發(fā)油，包括合成的甘油一酯和甘油二酯。脂肪酸，如油酸和其甘油酯衍生物，包括橄欖油和蓖麻油，特別是它們的聚氧乙基化形式可以用于制備注射劑。這些油溶液或者懸浮液還可以含有長鏈醇稀釋劑或者分散劑。本發(fā)明的化合物還可以局部施用，特別當所治療的疾病涉及局部應用容易接近的區(qū)域或者器官時，包括眼睛、皮膚或者下腸道的疾病?？扇菀椎貫檫@些區(qū)域的每一種地制備合適的局部制劑。對于眼睛的局部應用，或者眼科使用，可以將化合物配制為等滲的、pH調節(jié)的無菌鹽水中的微粒化懸浮液，或者優(yōu)選地，配制為等滲的、pH調節(jié)的無菌鹽水中的溶液，使用或不使用如苯扎氯銨的防腐劑。備選地，眼科使用的白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine可以配制在軟膏劑如凡士林中。對于皮膚的局部應用，化合物可被配制在合適的軟膏劑中，該軟膏劑含有懸浮或者溶解在例如具有一種或多種下面物質的混合物中的化合物礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水。備選地，化合物可被配制在合適的洗劑或者乳膏中，該洗劑或者乳膏含有懸浮或者溶解在例如具有一種或多種下面物質的混合物中的活性化合物礦物油、脫水山梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蠟、十六醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。可以與載體材料組合以產(chǎn)生單一劑型的活性成分的量將取決于所治療的宿主和具體施用方式而變。一些因素包括所用的特定化合物的活性、患者的年齡、體重、一般健康、性別、飲食；施用時間、排泄速率、藥物組合和所治療的具體疾病的嚴重性和施用形式。制藥方法也可以用于控制作用持續(xù)時間。通過使用聚合物復合或者吸收所述肽，可以得到控釋制劑。通過選擇合適的大分子(例如，聚酯、聚氨基酸、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯-醋酸乙烯酯、甲基纖維素、羧甲基纖維素、或者硫酸魚精蛋白)和大分子濃度以及結合方法以便控制釋放來進行受控遞送。例如，白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine可以結合進疏水聚合物基質以在數(shù)天內控釋。此類控釋膜是本領域公知的。特別優(yōu)選經(jīng)皮遞送系統(tǒng)。可以用于本發(fā)明的通常用于本目的的聚合物的其他實例包括不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯共聚物和可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，其可以在外部或者內部使用。一些水凝膠，如聚(甲基丙烯酸羥乙酯)或者聚(乙烯醇)也可以使用，但是具有比其他聚合物釋放系統(tǒng)如上面提到的那些系統(tǒng)較短的釋放周期。備選地，可以不將這些活性劑結合進聚合物顆粒，而是可以將這些物質捕獲在例如通過凝聚技術或者通過界面聚合作用制備的微囊劑中，例如，分別為羥基甲基纖維素或者明膠微囊劑和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊劑，或者膠體藥物遞送系統(tǒng)，如脂質體、白蛋白微球、微乳劑、納米顆粒和納米囊劑或大乳劑中。為了對中樞神經(jīng)系統(tǒng)靶標治療上有效，白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine當在外周施用時也應該容易穿透血腦屏障。不能穿透血腦屏障的化合物可以通過室內途徑或者適于施用于腦的其他合適的遞送系統(tǒng)有效施用。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine還可以單獨以試劑盒的形式或者以上述的藥物組合物的形式提供。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine的施用可以通過常規(guī)方法進行。例如，白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine可以在合適的稀釋劑如鹽水或者水，或者完全或者不完全佐劑中使用。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine可以以適于免疫系統(tǒng)刺激的任何合適途徑施用，所述途徑為注入靜脈內、腹膜內、肌內、皮下、經(jīng)鼻、口、直腸、陰道等等。如上面提到的，白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine可以用于預防或者治療目的。當被預防性地提供時，在由于疾病引起的任何癥狀的跡象之前或者癥狀之前提供白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine。當被治療性地提供時，白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine在疾病發(fā)作時(或者之后)或者在疾病的任何癥狀出現(xiàn)時提供。白細胞白介素注射液(LI)或者Multikine的治療性施用起緩解該疾病和改善常規(guī)的治療結果的作用。由此描述了本發(fā)明，顯然本發(fā)明可以在許多方面做出修改。不應認為此類修改背離本發(fā)明的精神范圍并且所有此類修改旨在包括在所附權利要求的范圍內。權利要求1.在治療性處理前預敏化癌的方法，其包括步驟對癌施用治療有效量的無血清且無絲裂原的細胞因予混合物。2.權利要求1的方法，其中所述治療性處理選自化學療法、免疫療法和放射療法。3.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次約20IU至1600IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。4.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次約40IU至800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。5.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次約35IU到75IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。6.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次55IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。7.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次400IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人1L-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。8.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。9.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用五次，持續(xù)兩周，每次800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。10.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物的一半被圍繞腫瘤施用在腫瘤塊的外周邊緣，且所述混合物的另一半被施用在腫瘤塊同側的下頜下淋巴管鏈，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次約20IU至1600IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。11.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物的一半被圍繞腫瘤施用在腫瘤塊的外周邊緣，且所述混合物的另一半被施用在腫瘤塊同側的下頜下淋巴管鏈，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次約40IU至800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。12.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物的一半被圍繞腫瘤施用在腫瘤塊的外周邊緣，且所述混合物的另一半被施用在腫瘤塊同側的下頜下淋巴管鏈，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次400IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。13.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物的一半被圍繞腫瘤施用在腫瘤塊的外周邊緣，且所述混合物的另一半被施用在腫瘤塊同側的下頜下淋巴管鏈，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。14.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物的一半被圍繞腫瘤施用在腫瘤塊的外周邊緣，且所述混合物的另一半被施用在腫瘤塊同側的下頜下淋巴管鏈，每周施用五次，持續(xù)兩周，每次800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。15.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞淋巴管施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次約20IU至1600IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。16.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞淋巴管施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次約40IU至800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。17.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞淋巴管施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次400IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。18.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞淋巴管施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。19.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞淋巴管施用，每周施用五次，持續(xù)兩周，每次800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。20.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物包含選自IL-1β、TNF-α、IFN-γ和GM-CSF的細胞因子，它們與白介素-2(IL-2)的特定比率如下IL-1β與IL-2的比率為0.4-1.5；TNF-α與IL-2的比率為3.2-10.9；IFN-γ與IL-2比率為1.5-10.9；以及GM-CSF與IL-2的比率為2.2-4.8。21.權利要求20的方法，其中所述細胞因子的特定比率如下IL-1β與IL-2的比率為0.6-0.8；TNF-α與IL-2的比率為7.7-11.3；IFN-γ與IL-2比率為4.9-7.1；以及GM-CSF與IL-2的比率為3.5-4.5。22.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物是Multikine。23.權利要求1的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物是白細胞白介素注射液(LI)。24.誘導腫瘤細胞進入選自G1、S、G2和M的細胞周期的方法，其包括步驟對癌細胞施用治療有效量的無血清且無絲裂原的細胞因子混合物。25.權利要求24的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次約20IU至1600IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。26.權利要求24的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次約40IU至800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。27.權利要求24的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次約35IU至75IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。28.權利要求24的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次55IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。29.權利要求24的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次400IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。30.權利要求24的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用三次，持續(xù)兩周，每次800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。31.權利要求24的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物被圍繞腫瘤施用，每周施用五次，持續(xù)兩周，每次800IU，其中IU代表世界衛(wèi)生組織首次關于人IL-2的國際標準86/504給出的白介素-2的國際單位。32.權利要求24的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物包含選自IL-1β、TNF-α、IFN-γ和GM-CSF的細胞因子，它們與白介素-2(IL-2)的特定比率如下IL-1β與IL-2的比率為0.4-1.5；TNF-α與IL-2的比率為3.2-10.9；IFN-γ與IL-2比率為1.5-10.9；以及GM-CSF與IL-2的比率為2.2-4.8。33.權利要求32的方法，其中所述細胞因子的特定比率如下IL-1β與IL-2的比率為0.6-0.8；TNF-α與IL-2的比率為7.7-11.3；IFN-γ與IL-2比率為4.9-7.1；以及GM-CSF與IL-2的比率為3.5-4.5。34.權利要求24的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物是Multikine。35.權利要求24的方法，其中所述無血清且無絲裂原的細胞因子混合物是白細胞白介素注射液。36.無血清且無絲裂原的細胞因子混合物，其包含選自IL-1β、TNF-α、IFN-γ和GM-CSF的細胞因子，它們與白介素-2(1L-2)的特定比率如下IL-1β與IL-2的比率為0.4-1.5；TNF-α與IL-2的比率為3.2-10.9；IFN-γ與IL-2比率為1.5-10.9；以及GM-CSF與IL-2的比率為2.2-4.8。37.權利要求36的無血清且無絲裂原的細胞因子混合物，其中所述細胞因子的特定比率如下IL-1β與IL-2的比率為0.6-0.8；TNF-α與IL-2的比率為7.7-11.3；IFN-γ與1L-2比率為4.9-7.1；以及GM-CSF與IL-2的比率為3.5-4.5。38.用于治療癌癥的藥物組合物，其包含選自IL-1β、TNF-α、IFN-γ和GM-CSF的細胞因子并任選地結合藥學上可接受的賦形劑、載體或者添加劑，所述細胞因子與白介素-2(IL-2)的特定比率如下IL-1β與IL-2的比率為0.4-1.5；TNF-α與IL-2的比率為3.2-10.9；IFN-γ與IL-2比率為1.5-10.9；和GM-CSF與IL-2的比率為2.2-4.8。39.權利要求38的藥物組合物，其中所述細胞因子的特定比率如下IL-1β與IL-2的比率為0.6-0.8；TNF-α與IL-2的比率為7.7-11.3；IFN-γ與IL-2比率為4.9-7.1；和GM-CSF與IL-2的比率為3.5-4.5。40.權利要求39的藥物組合物，還包含IL-3，其與IL-2的比率為0.38-0.68，優(yōu)選0.53+/-0.15。41.權利要求39的藥物組合物，其還包含IL-6，其與IL-2的比率為37.2-53.8，優(yōu)選46+/-5.9。42.權利要求39的藥物組合物，其還包含IL-8，其與IL-2的比率為261-561.5，優(yōu)選411+/-10.6。43.權利要求39的藥物組合物，其還包含IL-1α，其與IL-2的比率為0.56-0.94，優(yōu)選0.75+/-0.19。44.權利要求39的藥物組合物，其還包含IL-10，其與IL-2的比率為2.82-3.22，優(yōu)選3.0+/-0.18。45.權利要求39的藥物組合物，其還包含IL-16，其與IL-2的比率為1.16-2.84，優(yōu)選1.84+/-0.68。46.權利要求39的藥物組合物，其還包含G-CSF，其與IL-2的比率為2.16-3.78，優(yōu)選2.97+/-0.81。47.權利要求39的藥物組合物，其還包含TNF-β，其與IL-2的比率為1.17-2.43，優(yōu)選1.8+/-0.63。48.權利要求39的藥物組合物，其還包含MIP-1α，其與IL-2的比率為15.7-37.16，優(yōu)選22.7+/-7.0。49.權利要求39的藥物組合物，其還包含MIP-1β，其與IL-2的比率為17.1-28.5，優(yōu)選22.8+/-5.7。50.權利要求39的藥物組合物，其還包含RANTES，其與IL-2的比率為2.3-2.7，優(yōu)選2.5+/-0.13。51.權利要求39的藥物組合物，其還包含EGF，其與1L-2的比率為0.267-0.283，優(yōu)選0.275+/-0.008。52.權利要求39的藥物組合物，其還包含PGE2，其與IL-2的比率為3.63-5.42，優(yōu)選4.5+/-0.87。53.權利要求39的藥物組合物，其還包含TxB2，其與IL-2的比率為23.47-25.13，優(yōu)選24.3+/-0.83。全文摘要本發(fā)明涉及在治療性處理如化學療法、放射療法或者免疫療法前用于預敏化癌癥的突破性方法和用于該方法中的新的細胞因子混合物。細胞因子混合物是無血清且無絲裂原的混合物，其由相對于白介素2(IL－2)具有特定比率的細胞因子如IL－1β、TNF－α、IFN－γ和GM－CSF組成，所述混合物可有效誘導癌性細胞進入增殖細胞周期階段，從而增加它們對化學療法、放射療法和免疫療法的敏感性。一種此類新的細胞因子混合物是白細胞白介素注射液(LeukocyteInterleukinInjection，LI)或者Multikine，其可以單獨使用或者與用于治療癌癥的其他藥物組合使用，從而增加癌癥治療的成功率和癌癥患者的無病存活率。文檔編號A61K38/20GK101014354SQ200580029169公開日2007年8月8日申請日期2005年6月28日優(yōu)先權日2004年6月29日發(fā)明者E·塔洛爾申請人:塞爾-賽公司