專利名稱：五水合五硼酸鈉(NaB的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種制備硼鈉環(huán)狀化合物的改良方法，含所述環(huán)狀化合物的化合物，以及所述化合物在哺乳動物身上免疫調(diào)節(jié)作用的新用途。
背景技術(shù)：
一般認為I型人類免疫缺陷病毒(HIV-I)是AIDS的致病原。在美國，自1981年疾病控制中心(CDC)報告首例AIDS病例以來，已報告超過10,000例AIDS病例。這些已報告的病例中50％以上的患者已經(jīng)死亡。據(jù)估計，目前有一、二百萬美國人感染了HIV而無癥狀出現(xiàn)，其中的20～30％將在五年內(nèi)發(fā)病，到2008年將接近1,300,000例出現(xiàn)癥狀的患者，其中兒童患者約有10,000人。該疾病的病毒性特征已經(jīng)推進了HIV-1抑制劑的研究。因為具備抑制病毒復(fù)制循環(huán)的優(yōu)點，可以預(yù)計這些抑制劑可以預(yù)防疾病的進展并有可能促進患者的恢復(fù)。除了這一途徑外，由于HIV使免疫系統(tǒng)變?nèi)?，也研究了?shù)種免疫調(diào)節(jié)劑?？梢灶A(yù)測促進抗病毒免疫應(yīng)答的藥劑有助于清除病毒。
一種與逆轉(zhuǎn)錄酶抗病毒相關(guān)的強效逆轉(zhuǎn)錄病毒抑制劑蘇拉明可以在體內(nèi)和體外抑制HIV-1復(fù)制，說明抗病毒治療在HIV-1所誘導(dǎo)疾病中的有效性是明顯的。但是因藥物毒性原因而在治療6周后結(jié)束治療，并未觀察到臨床上或免疫學(xué)上的改善。更長時間(37周)的治療也未能獲得臨床上或免疫學(xué)上的改善。
另一個研究的化合物是AZT(3’-疊氮-2’，3’-雙脫氧胸苷)，它可以在明顯更低的濃度下獲得明顯比蘇拉明更好的抑制效果。AIDS患者及AIDS相關(guān)癥候群(ARC)患者接受為期6周的AZT治療后，獲得了臨床上及免疫學(xué)上的改善，在24周治療期間機會性致病的頻率減少，死亡率也下降了。AZT也稱為立妥威(Retrovir)或齊多夫定(Zidovudine)，是FDA唯一批準治療該病毒的藥物。盡管對于某些AIDS或ARC患者來說，在最長可達24周的時間內(nèi)用AZT治療是有利的，但是6個月后效果開始下降。
在急性臨床試驗中很有前途的新藥包括DDC(2’，3’-雙脫氧胞苷)、DDI(2’，3’-雙脫氧肌苷)和DDA(2’，3’-雙脫氧腺苷)。這三種藥物中DDI未顯示出毒性或毒性很低，而且獲得了臨床上或免疫學(xué)上的顯著改善。
一旦免疫系統(tǒng)開始受到破壞，抗病毒治療和免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)劑如干擾素(HuIFN-α、-β、-γ)或粒-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)的聯(lián)合治療是有效的。通常，免疫調(diào)節(jié)劑與抗病毒劑一起施用。例如，已經(jīng)證明GM-CSF可以增強HIV-1中單核細胞(monocite)生成，但與AZT聯(lián)用時可以增強AZT的全部抗病毒活性。
到目前為止，還未公開五水合五硼酸鈉(NaB5O8·5H2O)治療其他病毒性細菌性疾病的用途。
發(fā)明目的1.以快于現(xiàn)有技術(shù)的制備方法提供免疫調(diào)節(jié)劑。
2.提供快速合成增強免疫系統(tǒng)的物質(zhì)的方法。
3.提供免疫調(diào)節(jié)劑在一些病毒相關(guān)疾病包括AIDS中增強和促進免疫系統(tǒng)的用途。
4.利用本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)劑用于治療數(shù)種病毒相關(guān)的疾病。
5.提供免疫調(diào)節(jié)劑在一些細菌相關(guān)疾病中增強和促進免疫系統(tǒng)的用途。
6.利用本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)劑用于治療數(shù)種細菌相關(guān)疾病。


圖111B在氘化水中的核磁共振譜發(fā)明詳述本發(fā)明是對Dressman等在WO 91/06304、國際號PCT/US90/06331的PCT申請中所公開發(fā)明的改良，該申請涉及環(huán)狀五硼酸鹽的合成、化合物及醫(yī)療應(yīng)用。其涉及幾種衍生自五硼酸鹽的化合物及其專用于治療AIDS的用途。
上述申請主張對一種繁雜方法的權(quán)利，該方法包括八個階段而且需要40個工作日才能獲得五硼酸衍生物，用于人類免疫缺陷綜合征的治療。
本發(fā)明包括的方法獲得用于治療細菌及病毒所致疾病時增強免疫系統(tǒng)的單一產(chǎn)品所需要時間不超過5天，對于獲得相同產(chǎn)物的方法及新用途來說，本發(fā)明是對上述申請中所述發(fā)明的改良。
下文所述合成方法用于獲得五水合五硼酸鈉，以下稱PSP。該方法可在不超過五天的時間內(nèi)獲得所述化合物，而采用PCT/US90/0633專利申請的方法則至少需要40天。
本合成方法所用原料為來自U.S.Borax公司的四硼酸二鈉十水合物(disodium tetraborate decahydrate)(Borax或DTBD)和原硼酸(OBA，硼酸)，以及純化水。
四硼酸二鈉十水合物含量測定參考美國藥典XXII/NF XVII目的確定作為獲得本文所述PSP的原料的四硼酸二鈉十水合物(DTBD)純度原理用標準鹽酸將DTBD水溶液滴定到甲基紅終點。
儀器50mL滴定管帶攪拌棒的磁力攪拌器250mL燒杯精確到毫克的分析天平試劑用標準氫氧化鈉標定的鹽酸(HCl) 0.5N0.1％甲基紅指示甲醇溶液步驟1.稱取DTBD樣品約3.0g，精確至毫克。記錄重量。將此樣品加入250mL燒杯內(nèi)的50mL純化水中，用繞杯所帶攪拌棒在磁力攪拌器上攪拌10到15分鐘，得到飽和溶液。加入5滴甲基紅指示劑溶液。用標定的0.5N HCl進行滴定。在溶液的pH值保持在終點值(pH4.8)之上時盡快滴入起始的30mL滴定液。使殘留的任意DTBD鈉結(jié)晶溶解。繼續(xù)緩慢滴入滴定液，直到終點。記錄所需的0.5N HCl總體積。
2.另外稱取DTBD樣品3.0g重復(fù)第1步兩次。記錄每次的結(jié)果。原料四硼酸二鈉十水合物(Na2B4O7·10H2O，DTBD)含量測定的驗證儀器25mL KimaxRSchellbach自動滴定管，Kimble 17170F.
Mettler分析天平，型號H54Cole-Palmer攪拌器/加熱扳，型號4658試劑使用下列試劑，已標明商標及規(guī)格四硼酸二鈉十水合物，EM SuprapurRNo.6309-1，批號9118；0.5N氫氧化鈉，由1N溶液通過VWR制備，Biotech Resourcess Inc.(BTR)，批號900726010.5N鹽酸，通過BTR的2N RICAA溶液制備，批號90060601，苯二甲酸氫鉀(KHP)，Baker，分析純，標準酸量滴定法No.2958-01，批號D18084.
甲基紅，鈉鹽，Baker，分析純，No.R086-02，批號D14708水從Continental Water Systems Modulab裝置獲得，電阻率為18兆歐/cm以上。
步驟氫氧化鈉用3.000g苯二甲酸氫鉀等分試樣分三份(tripticate)標定，于115℃烘干一小時后儲存于干燥器內(nèi)備用。
鹽酸用標定過的0.5N NaOH的10-mL等分液三份(tripticate)標定。
除非另外單獨說明，每次含量測定使用3.000g樣品(Suprapur)進行滴定。
計算
滴定DTBD重量＝DTBD eqs.×DTBD eq.重量Eqs.＝當量值Eq＝每當量DTBD當量值＝(HCl消耗的mL數(shù))×(HCl當量濃度N)/1000 每mL 0.5N的HCl相當于95.34mg Na2B4O7.10H2O，因此等式可表示如下 對于無水DTBD，如SuprapurR， DTBD純度必須在99.0％～105.0％之間。
結(jié)果下列數(shù)據(jù)是實驗室所得真實結(jié)果，作為實施例列舉于此。
A.酸堿標定1.NaOH 0.5N，批號90072601，用3g KHP 0.5N(5X)滴定5X；2.HCl 0.5N，批號90060601，用NaOH 0.5N滴定，NaOH批號No.90072601，規(guī)定濃度為0.501N、0.500N、0.502N，平均0.501N。
B.用無水DTBD EM SuprapurR進行精確度驗證實施例6稱取接近3.000g的4份DTBD樣品，各樣品的純度用上述方法及公式計算。
樣品重量 0.5N HCl消耗mL數(shù) DTBD(g)純度(％)3.000 59.2399.513.000 59.3299.661.584 31.2799.501.580 31.2899.78平均純度99.61注因為樣品不夠，最后兩次含量測定樣品少于3.00g。
類似地，在用作本發(fā)明獲取PSP方法的原料前，不同批次的DTBD各取三份樣品測定純度，結(jié)果如表1所示。
表1.實施例7、8、9所得數(shù)據(jù)

原硼酸含量測定參考美國藥典XXII/國家藥品集XVII，p.1906目的測定生產(chǎn)PSP所用原硼酸的純度原理樣品用標準氫氧化鈉在丙三醇存在的條件下進行滴定。丙三醇與原硼酸形成絡(luò)合物從而使原硼酸溶解，從而提高了滴定終點、提高了精確度。
儀器250mL燒杯帶攪拌棒的磁力攪拌器
50mL滴定管巴斯德吸管精確到毫克的分析天平(毫克精確度)試劑1N氫氧化鈉標準溶液(NaOH 1N)丙三醇0.1N氫氧化鈉溶液(NaOH 0.1N)1％酚酞乙醇溶液作為指示劑步驟1.將50mL丙三醇與50mL去離子水用攪拌棒于置于磁力攪拌器上的250mL燒瓶內(nèi)仔細混合。加入5滴酚酞溶液作為指示劑。加入幾滴0.1N NaOH調(diào)節(jié)pH到“酚酞終點”，記下滴定所需的滴數(shù)。中和丙醇時最重要的因素是一致性，比精確度重要得多。該值對于確定的丙醇量來說是恒定的。
2.從樣品中稱取約2.0g原硼酸，精確至毫克。將此樣品加到50％丙醇水樣品中，并開始用1N NaOH滴定。加入30mL NaOH以促進原硼酸溶解。攪拌直到原硼酸完全溶解，應(yīng)不超過15分鐘。繼續(xù)滴定，直至到達酚酞終點。記下所需的標準1N NaOH量，精確到0.01mL。滴定100％純度的2.000g原硼酸需要32.35mL標準1N NaOH。
3.再加入50mL丙醇激發(fā)原硼酸的絡(luò)合物形成。加入第3步中所記錄滴數(shù)的0.1N NaOH，中和丙醇。用標準1N NaOH繼續(xù)滴定。記下所需滴定溶液的終體積，精確到0.01mL。
4.用另外的兩份2.0g樣品重復(fù)第3步到第5步。記錄所得結(jié)果。
原硼酸的純度必須在99.5％～100.5％之間。
用作原料的原硼酸含量測定驗證儀器50mL B型滴定管，Kimax
Mettler分析天平，型號H54Cole-Palmer攪拌器/加熱扳，型號4658試劑使用下列試劑，已標明商標及規(guī)格原硼酸，EM SuprapurRNo.765-1，批號No.92491.0N氫氧化鈉，由RICCA(No.7450，批號No.B071)制備，RICCA由BTR(批號01382)制備。
苯二甲酸氫鉀，Baker，分析純，標準酸量滴定法，No.2958-01，批號No.D18084酚酞，EM Science，No.PX 0525-1，批號No.9142，配成1％乙醇溶液丙三醇，Baker，分析級，No.M778-09，批號C33610水從Continental Water Systems Modulab裝置獲得，電阻率為18兆歐/cm以上。步驟氫氧化鈉用6.000g苯二甲酸氫鉀等分液在tripticate內(nèi)標定，于115℃烘干一小時后儲存于干燥器內(nèi)備用。用2.000g樣品在tripticate內(nèi)標定進行測定。
計算 滴定原硼酸重量＝原硼酸當量值×原硼酸當量重量原硼酸當量值＝(NaOH消耗的mL數(shù))×(NaOH當量濃度N)/1000Eqs.＝當量值Eq.＝每當量代入等式中計算純度 每mL 1N的NaOH相當于61.83mg原硼酸(H3BO3)，因此等式可表示如下
原硼酸的純度必須在99.5％～99.8％之間。
結(jié)果下列數(shù)據(jù)是實驗室所得真實結(jié)果，以實施例于此引入。
A.氫氧化鈉標定批號為01382的1N NaOH用于滴定6g苯二甲酸氫鉀(3X)1.007N的6等分試樣。
B.批號為9249的原硼酸其精度用EM SuprapurR驗證。
實施例1稱取接近2.000g的3份原硼酸樣品，各樣品的純度按上述方法及公式計算。
原硼酸樣品重量 ％純度2.003 100.522.003 100.522.004 100.49平均值 100.51在用作本發(fā)明獲取PSP方法的原料前，不同批次的原硼酸各取三份樣品按相同方法測定純度，結(jié)果如表2所示。
表2.一些原硼酸樣品的純度分析結(jié)果

五水合五硼酸鈉(PSP，NaB5O8·5H2O)的合成方法目的是在實驗室制備1Kg產(chǎn)品儀器帶柄的3000mL燒杯108×38mm攪拌棒，表面有鐵氟龍(Teflon)，Nalgene商標天平，Ohaus GT4000
穩(wěn)重盤(2個)2000mL玻璃量筒熱板攪拌器，Corning PC 520(2個)塑料容器，1/3-杯容積(2個)-20～150℃的溫度計Corning pH計220，帶復(fù)合電極24-cm布氏(Büchner)漏斗帶量規(guī)的真空彈4-L KitasatoWhatman 41號濾紙，24-cmWhatman 1號濾紙，24-cm5-L塑料容器，Rubbermaid塑料攪拌棒塑料刮勺水浴塑料容器帶螺旋蓋的1000-mL寬口瓶(2個)，Nalgene PMP帶螺旋蓋的125-mL窄口瓶，Nalgene玻璃纖維托盤，MFG試劑四硼酸二鈉十水合物(DTBD，borax)，U.S.Borax，NF原硼酸(OBA，硼酸)，U.S.Borax，NF純化水步驟I.容器準備A.3000-mL Pyrex燒杯貼上標簽；B.將108×38mm攪拌棒放入燒杯內(nèi)。
II.稱重A.用稱重的(weighing tared)容器稱取計算好用量的四硼酸二鈉十水合物(DTBD)(相當于約700.0g的100％純DTBD)。
B.用稱重的(weighing tared)容器稱取原硼酸，重量相當于約680.0g的100％純原硼酸。
III.溶液制備A.在反應(yīng)燒杯中加入約1600mL純化水。
B.在型號為4658的Cole-Palmer熱板攪拌器中使水加熱，攪拌器設(shè)定至第5加熱檔，用溫度計瓶隨時檢查溫度。
C.溫度達到57℃～59℃時，將加熱檔降到第4檔。以200RPM緩慢攪拌的同時，依次加入稱好的DTBD和OBA，即首先加入一部分DTBD然后加入一部分OBA，約各50g，然后再次加入一部分DTBD等等，重復(fù)至所有試劑全部加完，在上一部分完全溶解后再在加入下一部分，期間攪拌棒不能停止攪拌。在大約12分鐘內(nèi)將所有試劑全部加完。
D.試劑混合至完全溶解。溫度不能超過61℃。當溫度到達約55℃時將加熱檔降到第3檔可以最好地將溫度控制住。測定并記下熱溶液的pH值，該值必須為6.42。移取加熱板，再次測定pH，pH必須為6.37，置容器中冷卻，pH在6.20左右。
IV.完成制備A.在冷卻過程中當pH為6.20左右時，熱溶液用Whatman 41號濾紙通過24-cm布氏(Büchner)漏斗在5～10cm Hg真空度下過濾。移除攪拌棒并用純水洗滌。
B.將濾液與攪拌棒一起轉(zhuǎn)移到5L的塑料容器內(nèi)。溶液以150RPM轉(zhuǎn)速攪拌下待其冷卻到33～34℃，促進結(jié)晶形成?？梢允褂萌我庖阎椒ㄐ纬山Y(jié)晶，但優(yōu)選冷卻法。將容器轉(zhuǎn)移到溫度約21℃的水浴中，并保持以150RPM攪拌。溫度到達25～27℃時，保持緩慢攪拌的同時在水浴中加入冰使溫度降到10～12℃。此時將溶液冷藏。
C.將溶液于約6℃冷藏18～20小時。
D.在20～30cm Hg的負壓(真空)下用24-cm的1號Whatman濾紙收集結(jié)晶，使收集到的物質(zhì)真空干燥60～70分鐘。
E.將結(jié)晶展開到玻璃纖維托盤上，小心別破壞濾紙纖維，以避免纖維與產(chǎn)物混合，然后置于烘箱中于35℃左右放置48～72小時。定期攪拌這些物質(zhì)以促進其干燥。
F.測定并記錄所收集濾液的體積。取100mL放入塑料瓶內(nèi)進行定量分析。
G.收集干燥結(jié)晶并稱重。理論上可獲得1084g產(chǎn)物。將產(chǎn)物儲存于標記好的帶螺旋蓋聚丙烯瓶內(nèi)。
V.實驗室方法獲得PSP的實施例

工業(yè)規(guī)模上的合成按下述方法進行，每次合成100Kg所需終產(chǎn)品I.稱重a.為獲得108.4Kg(理論)產(chǎn)品，用適當容器稱取計算好所需物質(zhì)(約相當于70.0Kg的100％純四硼酸二鈉十水合物(DTBD))；b.用另一容器稱取約68.0Kg原硼酸。
II.溶液制備a.在反應(yīng)容器中加入約160.0L純化水。
b.以200RPM攪拌的同時使水加熱，定時用溫度計檢查溫度。
c.溫度達到57℃～61℃時，減弱加熱使溫度保持低于61℃。以200RPM轉(zhuǎn)速攪拌的同時，慢慢加入稱量好的DTBD和OBA，不停地攪拌直到完全溶解。
d.不要讓溫度超過61℃。測定并記下熱溶液的pH值，該值必須為6.42。
III.完成制備a.真空過濾熱溶液除去固體。
b.將濾液轉(zhuǎn)移到容器內(nèi)，使溶液以150RPM轉(zhuǎn)速攪拌的同時冷卻到約10～12℃。
c.將溶液于6℃冷藏18～20小時。
d.在20～30cm Hg真空度下收集結(jié)晶；將收集到的物質(zhì)置烘箱中于35℃靜置干燥48～72小時，定時攪拌物質(zhì)促進其干燥。
e.測定并記錄所收集濾液的體積。取100mL放入塑料瓶內(nèi)進行定量分析。
f.收集干燥結(jié)晶并稱重。理論上可獲得108.4Kg產(chǎn)物。將產(chǎn)物儲存于標記好的帶螺旋蓋聚丙烯容器內(nèi)。
用此方法獲得已包裝好的干燥結(jié)晶終產(chǎn)品所需時間少于5天，不同于Dressman et al.在WO 91/06304、公開號PCT/US90/06331的PCT申請中所述方法，后者需要近40天的時間。但是，工業(yè)上已有可在一天內(nèi)獲得干燥結(jié)晶產(chǎn)品的設(shè)備，如Tender No 93-0113-A、Spray Dryer和Mobil Minor2000。
PSP具有下列特征分子式縮寫NaB5O8·5H2O理論上NaB5O8·5H2O的組成為Na2O(10.5％)，B2O3(59.0％)及H2O(30.5％)；根據(jù)化合物所公開的分子量及其成分計算，表達為氧化鈉、三氧化二硼及水的結(jié)合體。
圖1是在氘化水中的11B核磁共振分析結(jié)果，分析在位于墨西哥的CINVESTAV(Center for Research and Advanced Studies，研究及進修中心)進行，結(jié)果顯示PSP是主要由硼酸鈉和硼酸形成的混合物。
結(jié)構(gòu) 五水合物分子量295.17熔點不會熔解。在100℃以上時脫水，以升華形式釋放降解產(chǎn)物，溫度更高時發(fā)生分解。
鑒定參數(shù)外觀精細白色結(jié)晶粉末。
含量測定含NaB5O8·5H2O 95％以上，不大于105％。該區(qū)間取決于水合程度的一些小變化。
熱重分析的含水量在28.5％～32.5％之間。
pH7.6～8.2(4％溶液)溶劑含量少于1％五水合五硼酸鈉(NaB5O8·5H2O)含量測定目的測定PSP純度。
原理硼酸鈉組合物可以氧化鈉、三氧化二硼及水當量的形式表示。PSP經(jīng)驗分子式(NaB5O8·5H2O)可以表示為Na2O，5B2O3，10H2O。NaO2含量用標準鹽酸滴定測定。B2O3含量用標準NaOH滴定測定。PSP的純度根據(jù)B2O3計算并取決于硼。
儀器400-mL燒杯9-cm表面皿(3.5英寸)磁力攪拌器/加熱板攪拌棒50-mL滴定管25-mL滴定管試劑鹽酸(HCl)0.5N氫氧化鈉(NaOH)0.5N甘露醇酚酞1％乙醇溶液指示劑甲基紅1％乙醇溶液指示劑亞甲基藍0.25％水溶液指示劑步驟1.將1.00+/-1mg PSP溶解于100mL純化水中。記下確切的重量。
2.加入5滴甲基紅，從25-mL滴定管加入0.5N的HCl使溶液酸化，直到溶液變紅。加入過量的0.3～0.4mL HCl，記下終體積。
3.煮沸3分鐘，除去CO2，冷卻，將體積調(diào)整到150mL。
4.加入一滴亞甲基藍，用0.5N的NaOH滴定過量的HCl。記下體積。
5.加入Na2O的中性滴定液，約15g甘露醇，5滴酚酞，并用0.5N的NaOH滴定到終點，記下體積(見備注)。
6.如果溶液顏色褪色，加入小量甘露醇(2～3g)，繼續(xù)滴定。
7.重復(fù)第6步，直至顏色的改變不再發(fā)生變化。
8.估計酸和堿的百分比。
％Na2O＝0.5N HCl凈體積(mL)×1.550％B2O3＝0.5N NaOH凈體積(mL)×1.741備注當甘露醇加入中性化溶液時，其顏色會從綠色變?yōu)樽仙?。此顏色是由于甘露?硼酸所形成復(fù)合物的酸度所致，絕不能與酚酞變化的紫色混淆。溶液中的氫氧化鈉使紫色變成綠色，當溶液對酚酞來說呈堿性時，溶液又變?yōu)樽仙?。所有硼酸轉(zhuǎn)化成偏硼酸鈉時即到達滴定終點。
2H3BO3+2NaOH+4H2O＝Na2B2O4.8H2O五水合五硼酸鈉(NaB5O8·5H2O)含量測定的驗證儀器在實驗室進行驗證及含量測定時使用下列材料并在本文中用作實施例。
Cole-Palmer攪拌器/加熱板，型號4658(2個，用于攪拌滴定混合物)Corning攪拌器/加熱板，型號6795-520(用于煮沸受試液)25-mL KimaxRSchellbach自動滴定管，Kimble 17170F用于分配0.5N的HCl50-mL KimaxRSchellbach自動滴定管，用氧化鈣保護的Kimble 17170F用于分配0.05N的NaOH。
pH-計，型號220，帶半微量復(fù)合電極，No.476540Mettler分析天平，型號H54試劑甘露醇，EM Science，USP級，No.MX0216原硼酸，EM SuprapurR，No.756-1，批號9249無水四硼酸二鈉，EM SuprapurR，No.6309-1，批號91180.5N NaOH，由VWR公司制備成溶液，批號為90060602及90072601 BTR0.5N HCl，RICCA制備的溶液，批號90060601 BTR苯二甲酸氫鉀，Baker，析純，標準酸量法，No.2958-01，批號D18084.
酚酞，EM Science，No.PX 0525-1批號9142亞甲基藍，Baker，分析純，No.Q475-03，D03728甲基紅，鈉鹽，Baker，分析純，No.R086-02，批號D14708水從Continental Water Systems Modulab裝置獲得，電阻率為18兆歐/cm以上。
步驟驗證含量測定精密度時依次重復(fù)測定5次；滴定前樣品于50℃干燥約24～36小時。
驗證含量測定精密度時Science SuprapurREM級的原硼酸和四硼酸二鈉儲存于干燥器內(nèi)備用。
進行靈敏度及特異性試驗時，在測定前制備干粉混合物立即滴定，不進行測定五水合五硼酸鈉時的額外處理。
如無特別說明，樣品重量均為1.000±0.0001g，計算時均記為1.000g。
先嘗試了用1g苯二甲酸鉀(KHP)等分液標定氫氧化鈉，但發(fā)現(xiàn)KHP用量更大時得到最佳結(jié)果(3g用0.5N NaOH、6g用1N NaOH標定)，使終體積與在未知測定液中所用的體積相近。KHP于約115℃的溫度下烘干1小時，然后儲存于干燥器中備用。
計算三氧化二硼含量 樣品中的B2O3重量通過樣品中的B2O3當量數(shù)×B2O3當量重量而得。
樣品中的B2O3當量＝(NaOH體積)×(NaOH規(guī)定濃度)
氧化鈉含量除下列公式外，計算公式同B2O3 結(jié)果酸堿標定1.NaOH 0.5N，批號90072601，用3g KHP 0.5N滴定5X；2.HCl 0.5N，批號90060601，用NaOH 0.5N滴定3X，NaOH批號No.90072601，結(jié)果為0.501N、0.500N、0.502N，平均0.501N。
3.NaOH 0.5N，批號900609602，用批號為90060601的0.5N HCl滴定6X，結(jié)果為0.501N、0.501N、0.501N、0.501N、0.501N、0.501N，平均0.501NPSP純度
PSP純度＝樣品中％B2O3×1.695PSP的用途第一種方法是尋找與青霉素類似但不含不需要的效應(yīng)如過敏的抗生素，因而在制備藥物第一階段時使用了不同的真菌菌株(非常龐大而復(fù)雜的過程，經(jīng)過許多試驗和研究后現(xiàn)在已縮短到僅僅幾天時間)；動物試驗后確定人類使用的劑量及安全區(qū)間；在不同動物種屬(小鼠、大鼠、狗、猴等)上進行毒性試驗后，允許其用于健康人群，之后再用于患病人群主要是細菌性疾病中表現(xiàn)出優(yōu)異的結(jié)果而且在任意水平均無有害副作用，如血液、腎、肝臟或其他任意器官。徹底改變此藥物用途的是如本說明報告所述該藥物用于2歲兒童病毒病因?qū)W腦膜腦炎，使我們注意到該藥物用于其他不同病毒病因?qū)W疾病的優(yōu)異結(jié)果。
德克薩斯州休斯頓(Houston，Texas)微生物專家對抗菌活性進行了體外評估。該試驗中，用PSP試驗藥物的水溶液來飽和凍干的紙盤，然后鋪到預(yù)先種用受試微生物的瓊脂表面上，測試了40μg/mL、400μg/ml、4mg/mL、40mg/mL及400mg/mL五個PSP稀釋液，對照品為400mg/mL NaCl。測試了14種細菌，所有受試菌均在體外對400mg/mL PSP敏感(表3)。
表3.細菌對PSP的敏感度

gd＝發(fā)育良好；nd＝未發(fā)育與帶盤號的菌株的圖與抵制色圈毫米數(shù)對應(yīng)盤標題下的數(shù)字代表下列稀釋液PSP1＝4mg/mL；2＝40mg/mL；3＝400mg/mL；4＝40μg/mL；5＝400μg/mLNaCl6＝400mg/mL(control)結(jié)果表明PSP可用作抗生素。
體外試驗后，我們在小鼠、大鼠、猴及狗身上做了體內(nèi)試驗，結(jié)果用于設(shè)定用于人類的劑量。
動物體內(nèi)毒性試驗小鼠急性及亞急性毒性試驗為測定單劑量毒性并找出最大耐受劑量(MTD)，小鼠靜脈給予1000mgBPCS/kg的日劑量。所有動物到第14天均正常，尸體檢剖未發(fā)現(xiàn)重要的損傷。小鼠平均體重未下降，但有一只小鼠在第7天和第14天之間體重下降了3.6g。該動物的體重下降被認為是不正確的，因為其體重在第0天和第7天之間是增加的，而且尸檢未發(fā)現(xiàn)重要組織改變的臨床體征。這些結(jié)果表明在這些試驗條件下PSP對小鼠毒性低。由于小鼠在1000mg BPCS/kg下仍保持健康，該劑量認為是小鼠的最大耐受劑量(MTD)。MDT用導(dǎo)管口服或腹腔內(nèi)注射，連續(xù)20天。PSP加入飲水中，以1.2或3mg PSP/mL服用，連續(xù)20天。該試驗的毒性癥狀是接受PSP 20天治療的動物體重下降。計算每組的平均體重，只有用3mg/ML PSP飲水劑量治療的這一組在體重增加方面大于ribarvin對照組。
在3mg PSP/ML水的劑量下，治療組的體重比與ribarvin對照組增加了41.1％。所有治療組的體重均增加了71％以上。
大鼠急性毒性試驗用大鼠進行單劑量毒性試驗。劑量區(qū)間在100mg PSP/kg和4000mgPSP/kg之間，用導(dǎo)管口服。劑量為4000mg/kg時，雄性大鼠體重下降了11％。雌性組未發(fā)現(xiàn)體重下降。選擇4000mg/kg作為連續(xù)給藥的日劑量。兩個連續(xù)4000mg/kg劑量后，無一動物存活下來。劑量調(diào)整到1000mg/kg，用另一組大鼠(雌雄各3只)試驗，給藥3天。在這三天內(nèi)未觀察到異常癥狀。然后將劑量增加到2000mg/kg。2000mg/kg連續(xù)給藥4天后所有大鼠均死亡。結(jié)果表明PSP的大鼠MTD約為1000mg/kg，與小鼠MTD一致。
猴急性及亞急性毒性試驗也用猴進行急性及亞急性毒性試驗。分對照組及試驗組，受試動物服用的劑量為500mg PSP/kg和250mg PSP/kg。兩種劑量的動物均在每次服藥后表現(xiàn)出毒性反應(yīng)，其特征是嘔吐及/或食欲減退。將猴的MTD定為100mg/kg，連續(xù)給藥14天。治療結(jié)束后立即對所有動物進行尸檢。未發(fā)現(xiàn)重要的損傷。
結(jié)論急性及亞急性試驗表明PSP具有下列MTD
小鼠的MTD為1000mg PSP/Kg體重大鼠的MTD約為1000mg PSP/Kg體重猴的MTD為100mg PSP/Kg體重基于這些結(jié)果，可以認為在人類使用10～20mg/Kg的劑量是安全的。
硼酸并不被認為是急性毒藥。大量硼酸攝入或吸收入血液后，毒性可在24～72小時內(nèi)表現(xiàn)出來。硼酸鹽經(jīng)尿排泄，在開始的24小時內(nèi)有75％會排泄掉。
經(jīng)過兩年的試驗包括用含PSP食物飼養(yǎng)大鼠和狗，未觀察到體內(nèi)有硼蓄積的癥狀。日常飲食中含0.31％的PSP沒有副作用。
藥理學(xué)研究體內(nèi)勞舍爾小鼠病毒(Rauscher MuLV)系統(tǒng)Rauscher MuLV病毒感染的小鼠在感染后七天可觀察到脾腫大。脾重擴增的原因及程度視所接受的劑量而定，并且可以被直接或間接干擾病毒復(fù)制的物質(zhì)加以改變。
小鼠用Rauscher MuLV接種，并通過導(dǎo)管以1.2或3mg/mL飲水的方式服用PSP，劑量為250、500或1000mg/Kg/天，或者以250、500或1000mg/Kg/天的劑量靜脈內(nèi)給藥。未接受治療的動物受到感染后通常發(fā)生脾腫大。結(jié)果表明，與未接受治療的受感染動物相比，飲水中的3mg/mL PSP課題使脾體積縮小72％，rivabirin則使脾體積縮小74％。
體外藥理學(xué)性質(zhì)進行毒性試驗來評估PSP對“新生”T細胞及老H9細胞的影響。將PSP稀釋液加入兩種細胞培養(yǎng)物中，結(jié)果表明333μg/mL和1000μg/mL的PSP具有細胞毒性。細胞發(fā)展受到影響，外觀細胞病變增多了。
用于確定PSP藥理學(xué)性質(zhì)的體外方法顯示其具有抗細菌活性但不顯示抗病毒或殺病毒活性。已經(jīng)證明PSP通過縮小脾腫大的體積來保護受Rauscher MuLV的小鼠。由于體外無抗病毒或殺病毒活性，PSP可能的機制之一是免疫調(diào)節(jié)。
人類體內(nèi)試驗上述研究使我們可以確認10～20mg/Kg體重的劑量，我們用廣泛的細菌及病毒性疾病測試了這一劑量區(qū)間，例如喉-氣管支氣管炎、帶狀皰疹、乙型肝炎、水痘、敗血癥，等等。
喉-氣管支氣管炎體重為7Kg、營養(yǎng)正常的七月齡男性兒童，帶喉-氣管支氣管炎癥狀。一般狀況差，煩躁不安、哭鬧、紫疳(+)，席維曼-安德森計分(SilvermanAndersen)為7分(鼻搧、肋間凹陷、呻吟、劍突凹陷、toracoabdominal失調(diào))，呈多灶性，及食欲減退(hiporexic)。
每12小時口服50mg PSP，相當于15mg/kg/天。一小時內(nèi)開始恢復(fù)，不需住院；48小時后癥狀消失。該兒童再接受了一周治療。
帶狀皰疹男性患者，54歲，胸部右側(cè)疼痛一周，肋骨區(qū)沿神經(jīng)路線出現(xiàn)非常疼痛的水泡，以前用激素及鎮(zhèn)痛藥治療過但無改善。每12小時口服50mg PSP，同時每72小時服用鎮(zhèn)痛藥及復(fù)合物B(IM)。開始治療24小時后，已經(jīng)有明顯改善，開始治療一周后，患者已經(jīng)沒有癥狀了。該患者再接受3周的治療，每天500mg。
乙型肝炎7歲女孩，開始時一般狀況發(fā)生輕微改變，輕度黃疸、乏力、食欲減退(hyporexia)、低燒、acoholia、膽汁尿，右側(cè)季肋部輕度疼痛，不明顯的肝腫大，實驗室檢查發(fā)現(xiàn)肝功能改變，總膽紅素、ALT、AST及堿性磷酸酶升高。
每日口服100mg PSP，共服用一個月。在治療的最初幾天內(nèi)所觀察到的癥狀逐步好轉(zhuǎn)，10天內(nèi)癥狀即消失，一個月后實驗室檢查結(jié)果顯示正常。
水痘
3歲女孩，特征性發(fā)疹，幾乎全身遍布丘疹、水泡及膿皰，一般狀況發(fā)生輕度改變，輕度虛弱、乏力，低燒及食欲減退(hyporexia)。
發(fā)病三天后開始治療，每天(24小時)100mg PSP，病理癥狀消失。72小時后該患者除了一些皮膚損傷外沒有其他癥狀，皮膚損傷也在兩天后消失了。
敗血癥患敗血癥的26歲女性患者。住院前48小時有剖腹產(chǎn)手術(shù)，一般狀況很差，40℃高燒，低血壓，心動過速，手術(shù)傷口及陰道有帶膿血樣滲出液。開始每8小時靜脈注射150mg PSP，每24小時與青霉素、慶大霉素經(jīng)全身給藥途徑連續(xù)點滴1.5g靜脈輸液。24小時后感染體征開始消失，72小時后已經(jīng)無癥狀，第五天出院，無并發(fā)癥。
腦膜腦炎兩歲男孩因一般狀況非常差而住院，未發(fā)燒，神經(jīng)系統(tǒng)癥狀腦膜刺激資料，頸強直，克尼希(Kernig)試驗(+)，布呂克(Brudzinsky)試驗(+)，(Babinsky)癥狀(+)，泛發(fā)性反射亢進，擴張性肌肉緊張-陣攣性驚厥，人事不省然后陷入昏迷狀態(tài)；診斷經(jīng)脊髓液分析診斷為病毒性腦膜腦炎。開始每12小時用150mg PSP靜脈注射(20mg/kg/天)，患者開始從無意識狀態(tài)恢復(fù)，一般癥狀開始消失，開始治療5天病人出院，神經(jīng)病變的唯一后遺癥是VI頭顱神經(jīng)對麻痹，該后遺癥出院后三個月復(fù)原。在家里時，第一周每12小時肌肉注射100mg劑量的PSP，之后每24小時注射相同劑量繼續(xù)2周?；颊呶磮蟾嫒我馄渌暮罄^問題，過著正常的生活。
丙型肝炎32歲男性患者，診斷為丙型肝炎。癥狀肝腫大，一般狀況中度改變，衰弱乏力，頭痛，肌痛，無黃疸，發(fā)低燒，食欲減退(hyporexia)。開始每天服用500mg PSP(15mg/kg/天)，共15個月；整個病變完全復(fù)原了，包括實驗室檢查正常(ALT、AST及堿性磷酸酶等)。目前病人無癥狀表現(xiàn)，體重恢復(fù)，并未顯示出任意癥狀。
上述結(jié)果鼓勵我們在病毒疾病領(lǐng)域試驗該藥物，因此我們用AIDS患者測試了此藥物，得到如下結(jié)果我們決定組織臨床試驗來評估PSP對AIDS的治療效果。
PSP是水溶性的，因此可直接用于獲得所需濃度的藥物而不需獲得酸式鹽來服用。
PSP可用于與藥學(xué)可接受載體配方組成藥物組合物，可形成數(shù)種藥劑形式如片劑、膠囊、錠劑、滴劑溶液、糖漿劑、小體(ovules)、栓劑、凝膠、洗劑及安瓿劑，經(jīng)由口、鼻、眼、耳、局部、腔內(nèi)、陰道、直腸、皮膚、毛細血管、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下服用或經(jīng)由其他任意合適的途徑服用并被身體吸收。
臨床試驗臨床試驗的目的如下1.確定改變疾病進程所需藥物課題。
2.確定此劑量的風險性。
3.控制客觀及主觀的條件，以及4.確定PSP的益處及療效。
這些研究包括抗體研究、病毒抗原控制研究及包括淋巴細胞表型在內(nèi)的全血細胞計數(shù)。
第一個研究有18例患者。試驗開始時所有受試者均呈HIV-1抗體陽性，Walter Reed(WR)分級為WR2到WR6，如表4所示。18例患者中有9例為WR2和WR3(無可檢測免疫學(xué)損傷)，2例為WR5，其余5例為WR6。
在5個月的時期里，患者口服藥物，每天2～3次，每天總劑量為500～2500mg，視治療開始時CD4數(shù)量而定。五個月之后中止治療，受試者會有隨訪時行常規(guī)實驗室及臨床檢查。研究仍在進行中。
開始治療后在所有HIV感染個體中均觀察到了PSP治療明顯良好的反應(yīng)。所有患者均發(fā)生了下列一種或多種副作用體重下降、出汗、抑郁、手掌及腳皮膚脫落，腹瀉或便秘，及頭痛。在同一時期內(nèi)許多病人也觀察到了總淋巴細胞數(shù)下降，尤其是CD4和CD8。治療第8周到第12周，觀察到癥狀中斷，總淋巴細胞數(shù)尤其是CD8顯著上升(超過未感染人類正常上限)。還觀察到類似的T細胞記HLA-DRA模式。由于分析前細胞老化的關(guān)系，未能確定T細胞活化第二標記(IL-2)。
治療結(jié)束5個月后，18例患者中有14例健康狀況良好。在3例患者在開始治療的21周內(nèi)死亡，其中有兩例死于晚期卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma，KS)，另一例死于晚期營養(yǎng)不良?；加猩窠?jīng)癥狀(治療前繼發(fā)性AIDS癡呆)的第4例患者在2～3月時反應(yīng)良好，但之后他的神經(jīng)癥狀又回來了。該患者在治療后仍用PSP(500mg/天)維持5個月，最終在治療開始一年后死亡。
表4.WALTER REED(WR)分期歸類

(*)口腔monillasis或口腔念珠菌病P＝丟失，無應(yīng)答C＝伴有口腔monillasis應(yīng)答不好的4例患者治療開始時其CD4少于40(絕對值)，正常CD4計數(shù)大于或等于400。盡管這4例患者未對治療產(chǎn)生應(yīng)答，其生活質(zhì)量至少改善了4個月，同時在這最初的幾個月里食欲得到改善、癥狀得到了緩解。KS損傷應(yīng)答良好，在治療的第2～8周期間保持干燥。然后該應(yīng)答只是暫時性的，兩例患KS的患者在死亡之前這些損傷變得更具侵蝕性。
對于健康狀況良好的12例患者來說，PSP治療中止5個月后觀察到兩個應(yīng)答模式的兩個特征。其中七例病毒檢測呈陰性，CD4細胞顯著上升(從統(tǒng)計學(xué)來看，這些上升在1％病例中隨機發(fā)生)。這些患者在治療開始后9個期間體重保持不變或體重增加。其余5例患者雖然病毒檢測仍呈陽性，CD4細胞下降或不變，但看上去健康狀況良好。另外，對于這16例存活的患者來說，ELISA商用試劑盒測試的抗HIV抗體活性在這9個月內(nèi)上升了2～12倍。
所有病毒陽性的患者仍處于控制之下以確定檢查是否變?yōu)殛幮?體內(nèi)再也檢測不到病毒)并確定CD4上升的時間。
臨床試驗結(jié)論似乎PSP在每天2500mg的劑量時可以改變疾病進程。但是一些病人觀察到了強烈的副作用。開始時CD4細胞少于40的4例患者沒有對治療產(chǎn)生有利的應(yīng)答。其中一例患者治療期間沒有表現(xiàn)出癥狀，在治療結(jié)束后的5個月內(nèi)看起來健康狀況良好。治療停止后18例患者中有14例仍存活了40周。治療期間CD4顯著細胞上升的7例患者在治療后的時間里仍然呈病毒及p24抗原陰性，他們的CD4細胞在治療后仍維持于正常滴度。其余4例應(yīng)答良好的患者治療后CD4細胞減少，最近他們開始第二次PSP治療。將仔細觀察這些病人。值得一提的是這4例患者仍保持p24陽性。一例接受PSP治療前曾用AZT治療的患者，在治療后的40周隨訪里未見任何變化；而另一位患者發(fā)生卡氏肺囊蟲(Pneumocystis carinii，PCP)肺部感染，對sulphametoxasol部分應(yīng)答，后因此感染而死亡。兩例患者均用PSP進行第二次治療。第一個試驗的一個顯著結(jié)果是未表現(xiàn)癥狀的患者在治療中止后的5個月里無癥狀表現(xiàn)，相反，AZT治療中止后會立即惡化。第一個臨床試驗需要進一步研究以確定治療有效的更低劑量來改變疾病進程。
這些試驗的觀察結(jié)果提示每天2500mg的劑量會使一些患者產(chǎn)生副作用，如嚴重的皮疹，抑郁，腹瀉，以及導(dǎo)致體重平均下降3.1Kg的胃部問題。也觀察到開始治療的6～8周大部分患者淋巴細胞滴度下降，主要是CD4和CD8細胞。例如，一例患者開始治療8周后CD4從269減少到66。所獲得的這些體內(nèi)和體外結(jié)果提示PSP的作用機制為免疫調(diào)節(jié)。在臨床試驗中我們觀察到CD4和CD8下降后通常會有CD8刺激然后是CD4刺激。實際上，此作用機制正在研究中。這些臨床觀察結(jié)果鼓勵我們進行其他臨床試驗。我們計了病歷表并用Epi-infor第3版加以實現(xiàn)。Epi-info是由位于美國喬治亞州亞特蘭大的疾病控制中心設(shè)計的統(tǒng)計軟件，用于此類臨床試驗。
第二組的研究方案有些改動。改動包括將最高藥物劑量從每天2500mg降到每天1500mg，在治療前后進行一系列皮膚測試，以及增加臨床實驗室檢查。臨床試驗包括19例HIV-1陽性患者，其中17例為WR4～WR6，其余兩例為WR3。所有WR4～WR6的患者均免疫受損，即他們對皮膚反應(yīng)測試抗原系列只有部分應(yīng)答或無應(yīng)答，皮膚反應(yīng)測試是細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的一種直接測量方法。
每一例患者口服PSP治療4個月，劑量為每天500～1500mg。治療后第七周開始觀察到副作用。在這些研究中，副作用類似，但沒有第一個研究中觀察到的副作用那樣重。舉例來說，由于劑量低一些，在這一組中觀察到的體重下降要輕一些(平均下降0.5Kg，而第一個試驗中平均下降3.1Kg)。第二組的臨床觀察結(jié)果在研究期間每兩周記錄一次。治療開始前及開始治療前12周的觀察記錄顯示，所有患者在開始試驗時均有癥狀，14例患者有3種或更多的癥狀。治療12周后，13例患者得到改善，同時沒有主觀的抱怨，未發(fā)現(xiàn)有多于3種癥狀的患者。確實觀察到諸如夜色汗、體重下降、惡心、嘔吐、上腹部痛、HSV(單純性皰疹病毒)之類的問題在治療的開始幾周內(nèi)就消失了。
特別引起關(guān)注的是關(guān)于一例伴有KS的患者的報告。這例患者在篩選后及第一次采血后剛好在開始用PSP治療前檢測到了KS。該患者開始時采用PSP和硫酸長春新堿(vincristine sulphate)聯(lián)合治療。治療12周后，KS損傷沒有增大或是沒有得到病理學(xué)確認，仍在5個月內(nèi)保持陰性。實驗室發(fā)現(xiàn)及/或醫(yī)療觀察確認了臨床改善。腺腫大及monillasis在12周內(nèi)也解決了。從開始研究到研究接近結(jié)束期間，淋巴結(jié)病的頻率減少了，類似的monilliasis的頻率也從12降到1。
與第一個臨床試驗的這一組相反，與試驗開始時相比，試驗期間及結(jié)束時CD4及CD8計數(shù)沒有顯著變化。另一方面，經(jīng)HLA-DR及IL-2標記檢測淋巴T細胞活性具有統(tǒng)計學(xué)意義上的顯著提高。兩種類型的細胞均在治療開始3周后下降。之后兩種表型(HLA-DR和IL-2)的細胞滴度上升并達到明顯超過正常值的水平。
在治療開始前及治療開始后5個月，所有參與第二個研究的患者均進行一系列的皮膚測試。19例患者中有9例在5個月治療期間對這些皮膚測試的一種或多種抗原呈陽性反應(yīng)，提示對一種或多種以前遭遇過的感染性疾病的細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答恢復(fù)了。
第二個臨床試驗中有3例患者死了。開始時他們的CD4滴度分別為30、10和10。第一例患者發(fā)生PCP，對甲氧芐啶(trimetoprim)及sulphametoxazole治療肺部感染產(chǎn)生應(yīng)答，但很快因不明原死亡。第二例患者發(fā)生老年癡呆癥、伴有解脫(emancipation)和消耗(consumption)的營養(yǎng)不良。第三例患者發(fā)生腦弓形體病。前面2例患者在治療第12周時死亡，第三例患者在治療結(jié)束后第25周死亡。
第二個臨床試驗中包括兩例HIV抗體陰性的成年受試者作為對照。每一例患者分別每天服用PSP膠囊兩次(每天1000mg)，共6～8周。在治療的6周內(nèi)，第一例正常對照在第2周發(fā)現(xiàn)輕度的胃部不適，體重因個人家族原因而下降了約3Kg。第二例正常對照受試者用PSP治療8周，無副作用。根據(jù)這些有限的觀察結(jié)果，PSP看起來對正常成年人不產(chǎn)生毒性或毒性非常低。
第二個臨床試驗的總結(jié)基于對第二個臨床試驗中患者應(yīng)答的預(yù)估計，PSP看起來對HIV-1陽性及ARC(AIDS相關(guān)癥候群)或AIDS(WR4、WR5及WR6)發(fā)生臨床進展的無癥狀個體是有效、安全的?？雌饋碓谥委?2周后體片及癥狀消失。16例存活的患者中有9例繼續(xù)用PSP治療4個月，其余7例患者每天服用一粒500mg的膠囊兩個月。每天服用500～1500mg的患者其癥狀從主觀上及客觀上均得到控制，提示副作用極小。
AIDS患者用高劑量(2500mg/天)PSP治療的病毒及免疫應(yīng)答的實際構(gòu)思如下1.PSP治療開始時，攜帶HLA-DR標記的CD8及T細胞上升到超過正常滴度，在治療結(jié)束后恢復(fù)得到正常滴度。
2.與CD4滴度上升一致，未明顯存在(病毒陰性)病毒的患者抗-HIV抗體活性升高。以前已經(jīng)報道了CD4細胞可以抑制病毒復(fù)制。
第二個臨床試驗中降低劑量(最高1500mg/天)后，觀察到的淋巴細胞表型主要變化是活化T細胞群，HLA-DR或IL-2。大部分報告顯示隨著疾病的發(fā)展，HLA-DR細胞的數(shù)目下降。提示淋巴T細胞活化作為PSP在WR4、WR5及WR6患者中的治療應(yīng)答可作為特異性免疫調(diào)節(jié)的標記。期望可以隨后進行有關(guān)這些細胞群的試驗。
值得一提的是第二個臨床試驗中WR3的兩例患者治療18周后CD4及CD8細胞升高了。這兩例患者T細胞活化的變化不同。似乎淋巴細胞群對PSP治療的應(yīng)答可能更多地取決于疾病的階段而不是藥物的劑量。
需要重點注意的是一例患者的KS損傷經(jīng)PSP和長春新堿聯(lián)合治療后痊愈了，因此值得研究其他聯(lián)合治療方式。
PSP治療感染性疾病的好處包括沒有顯著的毒副作用，對其他藥物不應(yīng)答的感染有效，以及可以治療慢性病毒感染患者，如HIV及病毒感染疾病，例如麻疹、水痘、帶狀皰疹、乙型肝炎、病毒性腦膜腦炎、丙型肝炎、流行性感冒、喉氣管炎、咽炎、支氣管炎、細支氣管炎、肺炎、普通感冒、病毒病因?qū)W胃腸道疾病、單純性皰疹及帶狀皰疹、腮腺炎、天花、淋巴肉芽腫、巨細胞病毒病、登革熱、普通腦炎、狂犬病、脊髓灰質(zhì)炎和埃博拉出血熱。
TD4及TD8濃度在起始階段和結(jié)束階段的差別提示PSP具有免疫調(diào)節(jié)作用，即它可以調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，幫助生物自我復(fù)原，找到平衡并重新建立起健康的狀況。
我們相信，因為PSP毒性低、作用機制獨特，以及與其他細胞抗病毒活性聯(lián)用的可能用途，PSP在AIDS及其他細胞和病毒性疾病治療領(lǐng)域占有獨特和較高的競爭位置。
權(quán)利要求
1.一種獲得五水合五硼酸鈉的改良合成方法，其特征在于該合成方法包括下列步驟a)在一適當?shù)娜萜髦?，?9～61℃的溫度下邊攪拌邊依次逐漸地加入反應(yīng)物并溫和溶解；b)攪拌所得溶液；c)使反應(yīng)發(fā)生，直至溶液澄清；d)過濾溶液；e)生成結(jié)晶；f)將形成的結(jié)晶與濾液分離；g)冷藏終產(chǎn)物；h)干燥結(jié)晶；i)包裝產(chǎn)物
2.如權(quán)利要求1所述獲得五水合五硼酸鈉的改良方法，其特征在于，反應(yīng)物為四硼酸鈉十水合物(十水合四硼酸鈉)(disodiumtetraboratedecahydrate)，其重量以100％純度計算。
3.如權(quán)利要求2所述獲得五水合五硼酸鈉的改良方法，其特征在于，合成一千克終產(chǎn)物需要680.0g原硼酸及約700.0g四硼酸二鈉十水合物，二者純度均為100％；這些反應(yīng)物溶解于約59～61℃的約1600mL純水中。
4.如權(quán)利要求3所述獲得五水合五硼酸鈉的改良方法，其特征在于，在200RPM轉(zhuǎn)速攪拌下將反應(yīng)物一點一點地依次加入水中。
5.如權(quán)利要求1所述獲得五水合五硼酸鈉的改良方法，其特征在于，所述溫度不超過61℃。
6.如權(quán)利要求1所述獲得五水合五硼酸鈉的改良方法，其特征在于，一旦反應(yīng)物完全溶解即停止加熱，并加以過濾以除去任意殘留的固體。
7.如權(quán)利要求1所述獲得五水合五硼酸鈉的改良方法，其特征在于，在200RPM轉(zhuǎn)速攪拌下將溶液溫度調(diào)至21℃、生成結(jié)晶，可采用任意方法生成結(jié)晶，但優(yōu)選冷卻法。
8.如權(quán)利要求7所述獲得五水合五硼酸鈉的改良方法，其特征在于，在150RPM轉(zhuǎn)速下，緩慢攪拌使溶液溫度下降到10～12℃。
9.如權(quán)利要求7所述獲得五水合五硼酸鈉的改良方法，其特征在于，將含溶液及結(jié)晶的容器在6℃保持18～20小時。
10.如權(quán)利要求9所述獲得五水合五硼酸鈉的改良方法，其特征在于，將結(jié)晶取出并干燥。
11.如權(quán)利要求1所述獲得五水合五硼酸鈉的改良方法，其特征在于，包裝步驟在帶螺旋蓋的塑料容器內(nèi)進行。
12.如權(quán)利要求1～11所述改良合成方法所得產(chǎn)物。
13.如權(quán)利要求12所述產(chǎn)物，即五水合五硼酸鈉(NaB5O8·5H2O)。
14.藥物組合物，其特征在于，五水合五硼酸鈉是唯一的活性成份且含有至少一種藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
15.如權(quán)利要求14所述的藥物組合物，其特征在于，其藥劑形式可以是片劑、膠囊、錠劑、滴劑溶液、糖漿劑、小體(ovules)、栓劑、凝膠、洗劑及安瓿劑，經(jīng)由口、鼻、眼、耳、局部、腔內(nèi)、陰道、直腸、皮膚、毛細血管、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下服用或經(jīng)由其他任意合適的途徑服用并被身體吸收。
16.如權(quán)利要求15所述藥物組合物，其特征在于，優(yōu)選藥劑形式為膠囊。
17.藥物組合物，其特征在于含有五水合五硼酸鈉作為活性化合物及至少一種或更多種活性化合物，還含有至少一種藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑。
18.由第1～11項權(quán)利要求所述方法得到的五水合五硼酸鈉制備藥物產(chǎn)品用于治療細菌所致疾病的用途。
19.由第1～11項權(quán)利要求所述方法得到的五水合五硼酸鈉制備藥物產(chǎn)品用于治療病毒所致疾病的用途。
20.由第1～11項權(quán)利要求所述方法得到的五水合五硼酸鈉如第18項權(quán)利要求所述的用途，其中所述致病細菌包括肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、金色鏈球菌(Streptococcus aureus)、淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrhoeae)、腦膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitides)、銅綠色假單胞菌(Pseudomona aeruginosa)、志賀氏痢疾桿菌(Shigelladysenteriae)、弗氏志賀氏菌(Shigella flexneri)、傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi)、大腸桿菌(Escherichia coli)、普通變形桿菌(Proteus vulgaris)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、豬布魯氏桿菌(Brucella suis)、葡萄球菌(Staphylococcus)、克雷伯氏菌屬(Klebsiela)、麻風分枝桿菌(Mycobacterium leprae)和結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)。
21.由第1～11項權(quán)利要求所述方法得到的五水合五硼酸鈉如第19項權(quán)利要求所述的用途，其中所述疾病包括慢性病毒感染如HIV感染以及急性病毒感染，例如麻疹、水痘、帶狀皰疹、乙型肝炎、病毒性腦膜腦炎、丙型肝炎、流行性感冒、喉氣管炎、咽炎、支氣管炎、細支氣管炎、肺炎、普通感冒、病毒病因?qū)W胃腸道疾病、單純性皰疹及帶狀皰疹、腮腺炎、天花、淋巴肉芽腫、巨細胞病毒病、登革熱、普通腦炎、狂犬病、脊髓灰質(zhì)炎和埃博拉出血熱。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種合成五水合五硼酸鈉(NaB
文檔編號A61K33/22GK101035549SQ200580034362
公開日2007年9月12日 申請日期2005年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月2日
發(fā)明者朱安·帕伯羅·伽爾文·佩雷茲 申請人:朱安·帕伯羅·伽爾文·佩雷茲