專利名稱：生物素化十六糖，它們的制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的合成生物素化十六糖，它們具有肝素抗凝血和抗血栓的藥理活性。
肝素催化，特別通過抗凝血酶III(AT III)催化在凝血瀑布中所涉及兩種酶的抑制作用，即因子Xa和因子IIa(或凝血酶)的抑制作用。這些低分子量肝素(HBPM)制劑含有由4-30個單糖形成的鏈，并且其性質(zhì)是對因子Xa起作用比對凝血酶起作用更有選擇性。
人們知道，因子Xa的抑制作用需要通過與抗凝血酶結(jié)合域(域-A)，將肝素與AT III固定在一起，還知道因子IIa(凝血酶)的抑制作用需要通過域-A與AT III固定在一起，以及通過不太確定的結(jié)合域(域-T)與凝血酶固定在一起。
已知相應(yīng)于肝素域-A域的合成低聚糖。例如在專利EP 84999和EP 529 715中、在公開的專利申請WO 99/36428中以及在出版物《Bioorg.Med.Chem.》(1998)，6，第1509-1516頁中描述了合成這些合成低聚糖。這些合成低聚糖具有通過AT III選擇性地抑制凝血因子Xa而對凝血酶沒有任何活性的性質(zhì)。
曾在公開的專利申請WO 98/03554和WO 99/36443中描述了能通過AT III活化抑制凝血酶和因子Xa的合成低聚糖。
這些專利申請描述了具有生物活性的新的硫酸化和烷基化多糖衍生物。它們特別地是抗凝血和抗血栓的。特別地證明，這些硫酸化和烷基化多糖按照碳水化合物主鏈所帶烷基和硫酸酯基團(tuán)的排列而可以是強(qiáng)凝血和抗血栓的。更一般地，已發(fā)現(xiàn)通過制備多糖序列，有可能精確地控制GAGs類的活性，從而得到活性非常高的產(chǎn)品，它們具有肝素的抗凝血和抗血栓藥理性質(zhì)。與肝素相比，它們的優(yōu)點是具有確定的結(jié)構(gòu)、不與血小板因子4進(jìn)行反應(yīng)，即肝素血小板減少的原因。
但是，公開專利申請WO 98/03554和WO 99/36443與專利EP 529715描述的某些產(chǎn)品的人治療用途可能顯得有點復(fù)雜，如果這些產(chǎn)品的半衰期很長更是如此。在使用上述產(chǎn)品預(yù)防或治療血栓形成方面，應(yīng)該重建或保持血液的流動性，同時還要避免引起出血。
事實上，眾所周知由于某種偶然的原因，病人在治療時可能觸發(fā)出血。病人接受抗血栓治療時，也可能需要接受外科手術(shù)治療。此外，在某些外科手術(shù)案例過程中，可能使用大劑量的抗凝血藥，以防止血液凝結(jié)，并且在外科手術(shù)結(jié)束后還需要將它們中和。因此，為了在任何時間停止抗凝血藥活性，有意義的是有可中和的抗血栓劑。但是，使用已知的肝素解毒劑或HBPM，其中包括硫酸魚精蛋白，不可能很容易地中和上述已知的合成低聚糖。
本發(fā)明涉及新的合成生物素化十六糖，其結(jié)構(gòu)與公開的專利申請WO 02/24754所描述的化合物類似。本發(fā)明的十六糖以及文件WO02/24754描述的某些化合物，通過“間隔體”—如本申請定義的式(T1)或(T2)的順序—與生物素衍生物(六氫-2-氧代-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-戊酸)共價結(jié)合，因此具有在緊急情況下能迅速地被特定解毒劑中和的優(yōu)點。這種特定的解毒劑是抗生物素蛋白(avidin)(《The MerckIndex》，第十二版，1996，M.N.920，第151-152頁)或抗生蛋白鏈菌素(streptavidin)，這兩種四聚蛋白質(zhì)的質(zhì)量分別等于約66000和60000Da，它們對生物素具有非常高的親合性。
但是令人驚奇地，似乎將生物素衍生物與十六糖鏈連接起來的“間隔體”長度以及生物素在糖單元上的位置，是影響特定解毒劑(特別地，例如抗生物素蛋白)中和效率的因素。因此，由于受控大小的“間隔體”和生物素在糖單元上的位置，本發(fā)明的十六糖化合物具有用特定解毒劑中和的能力明顯高于公開專利申請WO 02/24754所描述的那些化合物。
本發(fā)明的一個目的是下式I的生物素化十六糖 式中-T代表下式鏈T1或T2
-Biot代表基團(tuán) -R代表(C1-C6)烷氧基，特別地甲氧基，或-OSO3-基，-R1代表(C1-C6)烷氧基，特別地甲氧基，或-OSO3-基，-R2代表(C1-C6)烷氧基或-OSO3-基，-R3代表(C1-C6)烷氧基，特別地甲氧基，或-OSO3-基，或者R3構(gòu)成-O-CH2-橋，-CH2-基團(tuán)與在相同環(huán)上帶有羧基官能團(tuán)的碳原子連接起來，-Pe代表下式糖鏈 以及它們在藥物上可接受的鹽。
這些多糖部分是由未烷基化和/或部分和/或完全烷基化的單糖單元構(gòu)成的。烷基化或未烷基化單元可以沿著該鏈分散，或者相反地，它們可以分成烷基化或未烷基化糖域組。
在本說明書中，曾選擇L-艾杜糖醛酸表示為1C4構(gòu)象，D-葡萄糖醛酸表示為4C1構(gòu)象，但應(yīng)該指出，一般而言單糖單元在溶液中的構(gòu)象是變動的。
因此，L-艾杜糖醛酸可以是4C12S0或4C1構(gòu)象。
本發(fā)明包括呈其酸形式或其在藥物上可接受鹽的其中任何一種形式的十六糖。在酸形式中，-COO-和-SO3-官能團(tuán)分別呈-COOH和-SO3H形式。
本發(fā)明多糖在藥物上可接受的鹽應(yīng)該理解是，其中一個或多個COO-和/或-SO3-官能團(tuán)與在藥物上可接受的陽離子以離子方式結(jié)合的多糖。本發(fā)明的優(yōu)選的鹽是其陽離子選自堿金屬陽離子的鹽，更優(yōu)選地是其陽離子為Na+或K+的鹽。
上式I化合物還包括其中一個或多個氫或碳原子已用其放射性同位素(例如氚或14C)取代的化合物。這樣一些標(biāo)記化合物在調(diào)查、代謝或藥物動力學(xué)研究中，在生物化學(xué)試驗中作為配位體是有用的。
在本發(fā)明范圍內(nèi)，應(yīng)該理解-(C1-C6)烷氧基-O-烷基，該烷基基團(tuán)是1-6個碳原子鏈的直鏈或支鏈的飽和脂族基。作為烷基實例，可以列舉甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基。作為(C1-C6)烷氧基實例，可以列舉甲氧基、乙氧基，-“間隔體(spacer)”T下式T1或T2鏈 -生物素化衍生物 這些生物素衍生物可在市場上買到(《Pierce》目錄1999-2000，第62-81頁)。
根據(jù)其中一個優(yōu)選方面，本發(fā)明涉及通式I的生物素化十六糖，式中-R代表甲氧基或-OSO3-基，-R1代表甲氧基，-R2代表-OSO3-基，-R3代表甲氧基。
根據(jù)另一個特別優(yōu)選的方面，本發(fā)明涉及下述生物素化十六糖·甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺己?；?]-2-脫氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，鈉鹽·甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺己?；?]-2-脫氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基-糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，鈉鹽就其原理來說，本發(fā)明化合物的制備方法使用二糖或低聚糖基本合成子，該合成子根據(jù)前面文獻(xiàn)中所描述的方法進(jìn)行制備。特別參考專利或?qū)＠暾圗P 300 099、EP 529 715、EP 621 282和EP 649 854，以及C.van Boeckel和M.Petitou撰寫的文件，《Angew.Chem.Int.Ed.Engl.》，(1993)，32，第1671-1690頁。然后將這些合成子彼此偶聯(lián)起來，以得到完全被保護(hù)的本發(fā)明多糖等效物。這個保護(hù)等效物再轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的化合物。
前面提到的其中一個基本合成子含有特別被保護(hù)的官能團(tuán)，該官能團(tuán)能允許接下來加入生物素或生物素衍生物，例如呈疊氮基團(tuán)形式的潛在胺官能團(tuán)或呈N-苯二甲酰亞氨基形式的保護(hù)官能團(tuán)。
在上述的偶聯(lián)反應(yīng)中，在異頭碳上活化“供體”二糖或低聚糖，與含有游離羥基的“受體”二糖或低聚糖進(jìn)行反應(yīng)。
本發(fā)明涉及式I化合物的制備方法，其特征在于-在第一步中，得到期望式I十六糖的完全被保護(hù)的等效物，它含有被保護(hù)的五糖前體，特別帶有適當(dāng)被保護(hù)的胺官能團(tuán)，以便在后面加入生物素或生物素衍生物。該保護(hù)五糖前體本身通過多糖域Pe的保護(hù)前體延長；-在第二步中，使這些帶負(fù)電荷的基團(tuán)加入和/或解掩蔽；-在第三步中，使胺官能團(tuán)去保護(hù)，然后加入生物素或生物素衍生物。
根據(jù)這些描述的方法，特別在公開專利申請WO 98/03554和WO99/36443以及該文獻(xiàn)(前面引用的)中描述的方法，合成接枝生物素或生物素衍生物的五糖。
糖苷鍵供體低聚糖與糖苷鍵受體低聚糖偶聯(lián)，得到其尺寸等于兩個反應(yīng)物種尺寸之和的另一種低聚糖時，按照本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的反應(yīng)，采用低聚糖類(G.J.Boons，《四面體》(Tetrahedron)，(1996)，52，第1095-1121頁，WO 98/03554和WO 99/36443)或一種低聚糖的合成方法，合成得到Pe的前體多糖部分。重復(fù)這個順序直到得到式I化合物。根據(jù)本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的規(guī)則，希望最終化合物的電荷性質(zhì)和分布決定了在合成各個步驟中使用化學(xué)實體的性質(zhì)。例如可參考C.van Boeckel和M.Petitou，《Angew.Chem.Int.Ed.Engl.》，(1993)，32，第1671-1690頁，或參考H.Paulsen，“選擇性化學(xué)合成復(fù)合低聚糖的進(jìn)展”，《Angew.Chem.Int.Ed.Engl.》，(1982)，21，第155-173頁。
采用下述系列反應(yīng)，使用完全被保護(hù)的多糖前體，得到本發(fā)明的化合物-將這些醇官能團(tuán)轉(zhuǎn)化成O-磺基團(tuán)，再除去在主鏈制備過程中使用的保護(hù)基團(tuán)，使這些羧酸去保護(hù)，然后
-然后加入這些磺基基團(tuán)，-使能夠加入生物素或生物素衍生物的胺官能團(tuán)去保護(hù)，-通過通常的氨基/酸偶聯(lián)反應(yīng)加入生物素衍生物。
采用低聚糖合成技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的各種策略，可以自然地制備本發(fā)明的化合物。
前面描述的方法是本發(fā)明的優(yōu)選方法。但是，采用例如在《單糖，其化學(xué)和在天然產(chǎn)物中的作用》(Monosaccharides，Their chemistryand their roles in natural products)，P.M.Collins和R.J.Ferrier，J.Wiley & Sons，(1995)，和在iG.J.Boons，《四面體》，(1996)，52，第1095-1121頁中所述糖化學(xué)的其它熟知方法，可以制備式I化合物。
因此，使用在C.van Boeckel，M.Petitou，《Angew.Chem.Int.Ed.Engl.》，(1993)，32，第1671-1690頁出版物中所描述方式的二糖合成子可以得到這些五糖Pe。
式I化合物制備方法中使用的保護(hù)基團(tuán)是糖化學(xué)中普遍使用的保護(hù)基團(tuán)，例如在《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》(Protective Groups inOrganic Synthesis)(1981)，T.W.Greene，John Wiley & Sons，New York中描述的保護(hù)基團(tuán)。
這些保護(hù)基團(tuán)例如有利地選自乙?；?、鹵甲基、苯甲酰基、乙酰丙酸基(levulinyl)、芐基、取代芐基，任選地取代三苯甲基、四氫吡喃基、烯丙基、戊烯基、叔丁基二甲基甲硅烷基(tBDMS)或三甲基甲硅烷基乙基。
這些活化基團(tuán)是例如根據(jù)G.J.Boons，《四面體》，(1996)，52，第1095-1121頁在糖化學(xué)中通常使用的活化基團(tuán)。例如，這些活化基團(tuán)選自亞胺酯、硫苷、戊烯基苷、黃原酸鹽、亞磷酸鹽或鹵化物。
至于生物素衍生物與低聚糖的連接方式和生物素衍生物的性質(zhì)，化學(xué)文獻(xiàn)提供了有可能通過本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的幾組保護(hù)基團(tuán)能夠使用的其它可能性。優(yōu)選地應(yīng)使用胺官能團(tuán)、硫醇官能團(tuán)、羧酸官能團(tuán)或醛官能團(tuán)，該官能團(tuán)應(yīng)與含有活化酯、馬來酰亞胺、碘乙?；虿奉惙磻?yīng)基團(tuán)的生物素衍生物進(jìn)行反應(yīng)，這個反應(yīng)可按照文獻(xiàn)(Savage等人，《親和素-生物素化學(xué)手冊》(Avidin-BiotinChemistryA Handbook)；(1992)，Pierce Chemical Company)所描述的條件進(jìn)行。
上述方法能夠得到呈鹽形式的本發(fā)明化合物。為了得到這些相應(yīng)的酸，讓呈鹽形式的本發(fā)明化合物與酸型陽離子交換樹脂進(jìn)行接觸。
然后，呈酸形式的本發(fā)明化合物可以用堿進(jìn)行中和，得到期望的鹽。為了制備式I化合物的鹽，可以使用任何的無機(jī)或有機(jī)堿，得到在藥物上可接受的鹽與式I化合物。作為堿，優(yōu)選地使用氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣和氫氧化鎂。式I化合物的鈉鹽和鈣鹽是優(yōu)選的鹽。
本發(fā)明的化合物是生物化學(xué)和藥理學(xué)研究的主題。
1.抗-因子IIa活性和抗-因子Xa活性的測定如Herbert等人，《Thromb Haemost.》，(2001)，85(5)，第852-60頁所描述的，借助于其抗-因子IIa活性和抗-因子Xa活性測定本發(fā)明化合物的循環(huán)活性。本發(fā)明的化合物通過鼠的靜脈內(nèi)(IV)或皮下(SC)途徑給藥。IV注射抗生物素蛋白導(dǎo)致大大降低本發(fā)明化合物的循環(huán)濃度(70％以上)。
例如，在IV注射100nmol/kg后實施例1化合物的循環(huán)濃度降低88％(通過抗-因子Xa活性測定的降低)，IV給藥抗生物素蛋白(10mg/kg/625nmol/kg)后2分鐘降低91％(通過抗-因子IIa活性測定的降低)。
實施例2的化合物的循環(huán)濃度在IV注射100nmol/kg后降低76％(通過抗-因子Xa活性測定的降低)，IV給藥抗生物素蛋白(10mg/kg/625nmol/kg)后5分鐘降低89％(通過抗-因子IIa活性測定的降低)。
SC給藥實施例1和2的化合物時，觀察到這兩種活性的相當(dāng)?shù)囊种谱饔?.總抗血栓活性測量與用抗生物素蛋白中和如Herbert等人，《血液》(Blood)，(1998)，91，第4197-4205頁所描述的，采用靜脈血栓模型研究了本發(fā)明化合物的總抗血栓活性及其中和，這個模型由注射組織因子，接著鼠的腔靜脈血流停滯構(gòu)成。
a)總抗血栓活性測量本發(fā)明的化合物是強(qiáng)血栓形成抑制劑(IC50值小于50nM)。
例如，實施例1和2表明，在其IV給藥后采用模型的IC50值分別是3和9.9nM。
例如，通過IV注射3mg/kg/208nmol/kg抗生物素蛋白，由于實施例1化合物(濃度30nmol/kg)而抑制血栓重量回到對照水平。
b)抗生物素蛋白的中和鼠的流血試驗通過鼠的流血試驗評定本發(fā)明化合物的效果(Herbert等人，《血液》，(1998)，91，第4197-4205頁)。在這些動物模型中，這些化合物具有高抗凝血活性，從而增加了流血時間。該抗生物素蛋白中和了本發(fā)明化合物對流血的作用。
例如，通過IV給藥抗生物素蛋白(3mg/kg；208nmol/kg)，30nmol/kg實施例1的化合物誘發(fā)鼠的流血時間回到對照水平。
例如，通過IV給藥抗生物素蛋白(10mg/kg；625nmol/kg)，100nmol/kg實施例2的化合物誘發(fā)鼠的流血時間回到對照水平。
因此，本發(fā)明還有一個目的是使用抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素的方法，其特征在于它能夠中和本發(fā)明的多糖。抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素可以用于制備中和本發(fā)明多糖的藥物。
由于其生物化學(xué)和藥物活性，本發(fā)明的低聚糖構(gòu)成了非常有意義的藥物。它們的毒性與這種用途完全相容。它們還非常穩(wěn)定，因此特別適合構(gòu)成藥物特殊產(chǎn)品的活性組分。
它們可以用于特別當(dāng)心血管和腦血管系統(tǒng)障礙，如與動脈粥樣硬化和糖尿病有關(guān)的血栓栓塞，像不穩(wěn)定型心絞痛、中風(fēng)、血管成形術(shù)后再狹窄、血栓和動脈內(nèi)膜切除術(shù)、血管內(nèi)假體插入；或與溶栓后的再血栓形成、梗塞、缺血性癡呆、外周動脈病、血液透析、心房纖維性顫動相關(guān)的血栓塞障礙時，或使用主動脈-冠狀搭橋的血管假體時出現(xiàn)凝血系統(tǒng)穩(wěn)定性改變所造成的各種病理學(xué)。此外，這些產(chǎn)品還可用于治療或預(yù)防靜脈源血栓塞病癥，例如肺栓塞。它們可用于預(yù)防或治療所觀察到的血栓性并發(fā)癥，例如在外科手術(shù)后，由細(xì)菌、病毒或酶活化劑誘發(fā)的腫瘤生長或凝血失常。在插入假體而使用它們的情況下，本發(fā)明化合物能覆蓋假體，因此使它們變得可血相容的。特別地，它們可以固定在血管內(nèi)假體(支架)上。在這種情況中，如EP 649 854所描述的，它們可以任選地通過在非還原或還原端部加入適當(dāng)?shù)谋圻M(jìn)行化學(xué)改性。
使用多孔氣囊(ballonnets poreux)進(jìn)行動脈內(nèi)膜切除術(shù)時，本發(fā)明的化合物還可以用作輔藥(adjuvants)。
本發(fā)明化合物可以用于制備治療上述疾病的藥品。
因此，根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明的目的是藥物組合物，它含有作為活性組分的本發(fā)明的合成多糖或一種它們在藥物上可接受的鹽，任選地與一種或多種惰性或合適賦形劑并用。
所述的賦形劑根據(jù)期望的藥物劑型和給藥方式進(jìn)行選擇口服、舌下、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、經(jīng)皮、經(jīng)粘膜、局部或直腸。
該活性組分還可呈與環(huán)糊精的配合物劑型，環(huán)糊精例如是α、β或γ-環(huán)糊精、2-羥丙基-β-環(huán)糊精或甲基-β-環(huán)糊精。
通過含有該活性組分的氣囊或通過往血管內(nèi)加入血管內(nèi)擴(kuò)充藥，也可以釋放其活性組分。因而不影響該活性組分的藥理效率。
在每個劑量單位中，該活性組分的量適合于設(shè)想的日劑量，以便獲得期望的預(yù)防或治療效果。每個劑量單位可以含有0.1-100mg，優(yōu)選地0.5-50mg活性組分。采用靜脈內(nèi)推注或滴注，使用1-1000mg劑量的抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素可以中和這些抗凝血化合物劑量。
本發(fā)明的化合物還可以與一種或多種用于期望治療的其他活性組分并用，這些組分例如是抗血栓藥、抗凝血藥、抗血小板聚集藥，例如像雙嘧達(dá)莫、阿司匹林、噻氯匹定、氯吡格雷或糖蛋白IIb/IIIa復(fù)合拮抗劑。
下述方法、制劑和流程圖說明了用于得到本發(fā)明多糖的各種中間體的合成。下述十六糖合成實施例說明但不限制本發(fā)明。
使用下述縮寫B(tài)n芐基；Bz苯甲?；?；Lev乙酰丙酸基(lévulinyl)；Et乙基；Ph苯基；Me甲基；Ac乙?；?；SEt硫代乙基；MPp-甲氧基苯基；生物素六氫-2-氧代-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-戊酸；
ESI電噴霧電離；CCM薄層色譜法；PF熔點；[αD]＝旋光性；C＝濃度Rf＝在CCM上測定的相對于移動溶劑前沿的保留時間。
在下文中，作為說明將詳細(xì)描述本發(fā)明化合物的制備與合成實施例。
制備流程

圖1-第4號單糖的合成 制備11，6-脫水(anhydro)-2-疊氮基-2-脫氧-4-O-p-甲氧基苯基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.2)的制備采用與Brill和Tirefort，《四面體通信》(Tetrahedron Lett.)(1998)，39，第787-790頁所描述的類似方法，合成化合物1，62，3-二脫水-4-O-p-甲氧基苯基-β-D-吡喃甘露糖，No.1，(4.39g，17.5mmol)?；衔颪o.1溶于130ml N，N-二甲基甲酰胺/水混合物[4/1(v/v)]中，然后添加疊氮化鈉(22.8g，350mmol)。該反應(yīng)介質(zhì)在120℃加熱6小時。用硅藻土過濾后，濾液用乙酸乙酯稀釋，然后用水洗滌。該有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾，然后真空濃縮。該殘留物在乙酸乙酯/環(huán)己烷混合物(20ml/7ml)中進(jìn)行再結(jié)晶，得到4.46g晶體狀化合物No.2。
PF144℃制備21，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-4-O-p-甲氧基苯基-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.3)的制備往化合物No.2(4.08g，13.9mmol)和碘甲烷(1.1ml，15.3mmol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(40ml)中的冷(0℃)混合物里，在氬氣氛下以小量添加氫化鈉(1.04g)。該混合物在室溫下攪拌20小時。用甲醇破壞過量的氫化鈉。蒸去N，N-二甲基甲酰胺后，該殘留物溶于二氯甲烷。該有機(jī)相用水進(jìn)行洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，然后真空濃縮。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化[甲苯/乙酸乙酯，12/1(v/v)]，得到3.57g白色固體狀化合物No.3。
PF68℃制備31，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.4)的制備往硝酸鈰銨(86g，156.2mmol)在390ml乙腈/水混合物[9/1(v/v)]中的溶液里，滴加化合物No.3(8.0g，26.03mmol)在130ml乙腈/水混合物[9/1(v/v)]中的溶液。該混合物在室溫下攪拌40分鐘，然后用乙酸乙酯稀釋。該反應(yīng)混合物用無水硫酸鈉干燥，過濾，然后濃縮。把濾液放在硅膠上能夠部分地除去硝酸鈰銨殘留物。為了純化該化合物，先進(jìn)行乙酰化反應(yīng)，接著進(jìn)行脫乙酰反應(yīng)。該殘留物溶于二氯甲烷(90ml)中，然后相繼地添加三乙胺(5.3ml)、二甲基氨基吡啶(280mg)，最終添加乙酸酐(3.2ml)。16小時后，該反應(yīng)介質(zhì)用二氯甲烷稀釋(250ml)。該有機(jī)相用10％硫酸氫鉀溶液、水、10％碳酸氫鈉溶液、然后水洗滌。該有機(jī)相再用無水硫酸鈉干燥，過濾，然后進(jìn)行真空濃縮。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化[甲苯/乙酸乙酯，10/1(v/v)]，得到4.9g固體狀產(chǎn)物。該固體溶于80ml二氯甲烷/甲醇混合物[1/1(v/v)]中，然后添加甲醇鈉(544mg)。該混合物攪拌35分鐘，然后用Dowex50WX4 H+樹脂中和，過濾，然后進(jìn)行真空濃縮。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化[甲苯/乙酸乙酯，3/2(v/v)]，得到3.9g化合物No.4。D＝-27°(C＝1.06，在二氯甲烷中)。
流程圖2-五糖No.11的合成
制備4(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.6)的制備以與公開專利申請WO 99/36443所描述的制備1類似方法得到的硫苷化合物No.5(9.00g，9.04mmol)、制備3中得到的化合物No.4(1.65g，8.22mmol)與4分子篩粉末(9.05g)在甲苯(180ml)中的混合物，在氬氣氛下攪拌1小時。然后該混合物冷卻到-20℃。往該反應(yīng)混合物中滴加N-碘代丁二酰亞胺(2.14g，9.5mmol)和三氟甲烷磺酸(96μl，1.09mmol)在47ml二氯甲烷/二烷混合物[1/1(v/v)]中的溶液。10分鐘后，該反應(yīng)混合物用硅藻土過濾，用二氯甲烷(1000ml)稀釋，然后相繼地用1M硫代硫酸鈉溶液、10％碳酸氫鈉溶液和水洗滌。該反應(yīng)混合物再用無水硫酸鈉干燥，然后進(jìn)行真空濃縮。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化[甲苯/乙酸乙酯，5/1(v/v)]，得到9.20g三糖No.6。D＝+44°(C＝1.30，在二氯甲烷中)。
制備5(4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.7)的制備往化合物No.6(9.2g，8.11mmol)在二烷(81ml)中的溶液里，添加叔丁醇鉀(1.82g，16.2mmol)。該混合物攪拌3小時，然后用Dowex50WX4H+樹脂中和，過濾，再進(jìn)行真空濃縮。硅膠柱色譜法純化后[二氯甲烷/甲醇，8/1(v/v)]，分離出5.46g泡沫狀的化合物No.7。
硅膠CCM，二氯甲烷/甲醇[9/1(v/v)]Rf＝0.35[α]D＝+38°(C＝0.84，在二氯甲烷中)。
制備6(4，6-O-亞芐基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.8)的制備往化合物No.7(5.05g，8.23mmol)和碘甲烷(3.8ml，61.7mmol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(150ml)中的冷(0℃)混合物里，在氬氣氛下以小量添加氫化鈉(1.73g，72.0mmol)。該混合物在室溫下攪拌20小時。用甲醇(8ml)破壞過量的氫化鈉，然后把該反應(yīng)混合物倒入冰水(400ml)中。用乙酸乙酯提取后，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌，用無水硫酸鈉干燥，然后進(jìn)行真空濃縮。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化[二氯甲烷/丙酮，先7/1，然后5/1(v/v)]，得到4.8g化合物No.8。D＝+49°(C＝1.02，在二氯甲烷中)。
硅膠CCM，二氯甲烷/丙酮[5/1(v/v)]Rf＝0.45制備7(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.9)的制備化合物No.8(5.3g，7.75mmol)溶于60％乙酸(233ml)中，然后在80℃下攪拌1小時30分鐘。該混合物進(jìn)行濃縮，并與甲苯進(jìn)行共蒸發(fā)。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化[甲苯/乙醇，4/1(v/v)]，得到5.09g化合物No.9。D＝+57°(C＝1.06，在二氯甲烷中)。
硅膠CCM，甲苯/乙醇[4/1(v/v)]Rf＝0.36制備8(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.10)的制備往化合物No.9(5.09g，8.55mmol)在二氯甲烷(85ml)中的溶液里，添加1-芐氧基-1H-苯并三唑(2.86g，11.97mmol)和三乙胺(1.80ml)。該混合物在室溫下攪拌20小時，然后用二氯甲烷稀釋。有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，再用水洗滌。然后該有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，再進(jìn)行真空濃縮。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化(甲苯/乙醇，15/2(v/v)]，得到4.85g化合物No.10。D＝+43°(C＝1.06，在二氯甲烷中)。
硅膠CCM，甲苯/乙醇[15/2(v/v)]Rf＝0.31制備9(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲?；?β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.11)的制備根據(jù)制備4所描述的操作方式，讓化合物No.10(4.38g，6.26mmol)與化合物No.5(“除去糖基的供體”)(11.85g，11.9mmol)進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得到8.39g化合物No.11，化合物5是采用與公開專利申請WO 99/36443所描述制備1的類似方法得到的。D＝+61°(C＝1.06，在二氯甲烷中)。
流程圖3-五糖No.15的合成
制備10(4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.12)的制備根據(jù)與制備5所描述的相同操作方式，將制備9得到的化合物No.11(8.36g，5.12mmol)轉(zhuǎn)化成化合物No.12。采用硅膠柱色譜法純化后，得到玻璃狀的化合物No.12(4.92g)。
硅膠CCM，二氯甲烷/甲醇[10/1(v/v)]Rf＝0.41制備11(4，6-O-亞芐基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.13)的制備根據(jù)與制備6所描述的相同操作方式，將化合物No.12(4.57g，4.54mmol)轉(zhuǎn)化成化合物No.13。該粗制產(chǎn)物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，得到4.94g化合物No.13。D＝+68°(C＝0.93，在二氯甲烷中)。
硅膠CCM，甲苯/乙醇[8/1(v/v)]Rf＝0.39制備12(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.14)的制備根據(jù)與制備7所描述的相同操作方式，將化合物No.13(4.89g，4.48mmol)轉(zhuǎn)化成化合物No.14。該粗制產(chǎn)物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，得到4.30g化合物No.14。D＝+80°(C＝1.05，在二氯甲烷中)。
硅膠CCM，甲苯/乙醇[4/1(v/v)]Rf＝0.31制備13(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.15)的制備根據(jù)與制備8所描述的相同操作方式，將化合物No.14(4.26g，4.25mmol)轉(zhuǎn)化成化合物No.15。該粗制產(chǎn)物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，得到4.33g化合物No.15。D＝+59°(C＝1.0，在二氯甲烷中)。
硅膠CCM，甲苯/丙酮[4/3(v/v)]Rf＝0.38
流程圖4-七糖No.20的合成
制備14(2，3-二-O-苯甲?；?4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲?；?β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.16)的制備根據(jù)制備4所描述的操作方式，讓采用公開專利申請WO 99/36443所描述的類似方式得到的硫苷No.5(4.90g，4.93mmol)，與制備No.13描述的化合物No.15(4.55g，4.11mmol)進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)。提取后得到的殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，得到8.07g化合物No.16。D＝+71°(C＝0.99，在二氯甲烷中)。
制備15(4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.17)的制備根據(jù)制備5所描述的操作方式，將化合物No.16轉(zhuǎn)化成化合物No.17。
硅膠CCM，二氯甲烷/甲醇[8/1(v/v)]Rf＝0.45制備16(4，6-O-亞芐基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]2-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.18)的制備根據(jù)制備6所描述的操作方式，將化合物No.17轉(zhuǎn)化成化合物No.18。
硅膠CCM，甲苯/丙酮[5/4(v/v)]Rf＝0.40制備17(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]2-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.19)的制備根據(jù)制備7所描述的操作方式，將化合物No.18轉(zhuǎn)化成化合物No.19。
硅膠CCM，二氯甲烷/甲醇[10/1(v/v)]Rf＝0.41制備18(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]2-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.20)的制備根據(jù)制備8所描述的操作方式，將化合物No.19轉(zhuǎn)化成化合物No.20。
硅膠CCM，環(huán)己烷/丙酮[1/1(v/v)]Rf＝0.36
流程圖5-九糖No.25的合成
制備19(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲?；?β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)]2-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.21)的制備根據(jù)制備4所描述的操作方式，讓公開專利申請WO 99/36443所描述的制備1的類似方式得到的硫苷糖No.5(3.91g，3.93mmol)，與制備18得到的化合物No.20(4.97g，3.27mmol)進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)。該粗制產(chǎn)物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，得到8.06g化合物No.21。D＝+77°(C＝0.92，在二氯甲烷中)制備20(4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)]2-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.22)的制備根據(jù)制備5所描述的操作方式，將化合物No.21轉(zhuǎn)化成化合物No.22。
硅膠CCM，二氯甲烷/甲醇[9/1(v/v)]Rf＝0.34制備21(4，6-O-亞芐基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)]3-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.23)的制備根據(jù)制備6所描述的操作方式，將化合物No.22轉(zhuǎn)化成化合物No.23。
硅膠CCM，環(huán)己烷/丙酮[1/1(v/v)]Rf＝0.44制備22(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)]3-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.24)的制備根據(jù)制備7所描述的操作方式，將化合物No.23轉(zhuǎn)化成化合物No.24。
硅膠CCM，二氯甲烷/甲醇[10/1(v/v)]Rf＝0.43制備23(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)]3-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.25)的制備根據(jù)制備8所描述的操作方式，將化合物No.24轉(zhuǎn)化成化合物No.25。
硅膠CCM，二氯甲烷/甲醇[10/1(v/v)]R＝0.64
流程圖6-十二糖No.30的合成
制備24(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.27)的制備采用公開專利申請WO 99/36443制備36所描述的類似方法制備的硫苷化合物No.26(10.1g，10.4mmol)、制備23得到的受體化合物No.25(5.02g，2.61mmol)，與4分子篩粉末(14.5g)在甲苯(220ml)中的混合物，在氬氣氛下攪拌1小時。該反應(yīng)混合物冷卻到0℃，然后加入N-碘代丁二酰亞胺(2.58g)和三氟甲烷磺酸(366μl)在57ml二氯甲烷/二烷混合物[1/1(v/v)]中的溶液。40分鐘后，該混合物用硅藻土過濾，用甲苯稀釋，然后相繼地用1M硫代硫酸鈉溶液、10％碳酸氫鈉溶液和水洗滌。該反應(yīng)混合物再用無水硫酸鈉干燥，過濾，然后進(jìn)行真空濃縮。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化[二氯甲烷/乙酸乙酯/乙醇，先17/1/1，然后14/1/1(v/v/v)]，得到5.87g化合物No.27。
硅膠CCM，二氯甲烷/乙酸乙酯/乙醇[8/0.5/0.5(v/v/v)]；[甲苯/丙酮(1/1(v/v)]Rf＝0.41制備25(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-1，6-二-O-乙?；?2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-D-吡喃型葡萄糖(No.28)的制備化合物No.27(4.06g，1.44mmol)在乙酸酐(13.6ml)和三氟乙酸(1.2ml)混合物中的溶液進(jìn)行攪拌6小時。濃縮后，該混合物與甲苯(5×25ml)共蒸發(fā)。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化[環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇，3/1/1(v/v/v)]，得到2.930g化合物No.28。
硅膠CCM，甲苯/丙酮[1/1(v/v)]Rf＝0.44
制備26(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-6-O-乙酰基-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-D-吡喃型葡萄糖(No.29)的制備化合物No.28(2.72g，0.928mmol)和芐胺(3.9ml，35.2mmol)在四氫呋喃中的溶液在室溫下進(jìn)行攪拌16小時。該反應(yīng)混合物用乙酸乙酯進(jìn)行稀釋，用1M鹽酸、再用水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，然后進(jìn)行真空濃縮。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化[環(huán)己烷/丙酮，4/5(v/v)]，得到2.21g化合物No.29。
硅膠CCM，環(huán)己烷/丙酮[4/5(v/v)]Rf＝0.42制備27(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-6-O-乙?；?2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-D-吡喃型葡萄糖三氯亞氨逐乙酸酯(No.30)的制備往化合物No.29(0.313g，108μmol)在二氯甲烷(3ml)中的溶液里，添加三氯乙腈(54.6μl，541μmol)和碳酸銫(56.4mg，173μmol)。攪拌1小時30分鐘后，該混合物進(jìn)行過濾，然后濃縮。該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，使用含有0.1％三乙胺的環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇混合物[2/0.5/0.5(v/v/v)]洗脫，得到245mg化合物No.30。
硅膠CCM，環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇[5/1.5/1.5(v/v/v)]Rf＝0.41
流程圖7-四糖No.34的合成
制備28甲基(4-O-乙酰丙酸基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(3，6-二-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.32)的制備采用與公開專利申請WO 99/36443所描述制備31的類似方法制備的化合物No.31(4.50g，3.02mmol)，在72ml乙酸乙酯/叔丁醇混合物[1/1(v/v)]中的溶液，在10％披鈀炭(9.0g)的存在下在氫氣壓(4bar)下處理6小時。過濾與濃縮后，得到的化合物No.32未經(jīng)純化直接加到下述步驟中。
制備29甲基(4-O-乙酰丙酸基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-2，6-二-O-乙?；?3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.33)的制備在0℃，往化合物No.32(1.09g，1.13mmol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中的溶液里，添加碳酸氫鉀(1.13g)，再添加碘甲烷(1.4ml)。在室溫下攪拌16小時后，該反應(yīng)介質(zhì)冷卻到0℃。然后相繼地添加二甲基氨基吡啶(44mg)，乙酸酐(2.4ml)。該混合物攪拌16小時。中和過量的乙酸酐后，該混合物用乙酸乙酯稀釋。有機(jī)相相繼地用10％硫酸氫鉀溶液、水和飽和碳酸氫鈉溶液、再用水洗滌。然后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，然后蒸發(fā)至干。再在通常的條件(二氯甲烷中的乙酸酐、二甲基氨基吡啶、三乙胺)下，將得到的殘留物進(jìn)行乙?；?。處理后，該殘留物采用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化[環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇，12/2.5/2.5(v/v/v)]，得到0.910g化合物No.33。
硅膠CCM，甲苯/丙酮[2/1(v/v)]Rf＝0.49制備30甲基(甲基2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(甲基2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，6-二-O-乙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.34)的制備化合物No.33(0.884g，0.793mmol)溶于160ml甲苯/乙醇混合物[1/1(v/v)]中。添加乙酸肼(0.365mg)。在室溫下攪拌5小時后，該反應(yīng)介質(zhì)濃縮至干。把殘留物溶于二氯甲烷中。有機(jī)相相繼地用2％碳酸氫鈉溶液和水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)至干。硅膠柱色譜法純化[甲苯/丙酮5/3(v/v)]后，得到0.696g化合物No.34。
硅膠CCM，甲苯/丙酮[2/1(v/v)]Rf＝0.37
流程圖8-十六糖No.42和No.43的合成
制備31甲基(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(6-O-乙?；?2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-2，6-二-O-乙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.36)的制備將制備27中得到的亞氨酸酯化合物No.30(170mg，56μmol)和制備30得到的化合物No.34(114mg，112μmol)溶于2.5ml二氯甲烷/二乙基醚混合物[1/2(v/v)]中。添加4分子篩粉末后，該混合物冷卻到-20℃，然后添加0.1M三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯在二氯甲烷(84μl)中的溶液。40分鐘后，添加固體碳酸氫鈉中和該混合物。過濾與濃縮后，殘留物用SephadexLH60凝膠色譜法進(jìn)行純化，接著進(jìn)行硅膠柱色譜法純化[二乙醚/乙醇(17/2v/v)]，得到123mg化合物No.36。
質(zhì)量“ESI”法，正模式化學(xué)質(zhì)量＝3890.87；實驗質(zhì)量3890.46±0.68u.m.a.
硅膠CCM，二乙醚/乙醇[17/2(v/v)]Rf＝0.40制備32甲基(2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲?；?2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(6-O-乙酰基-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(甲基2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(甲基2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.37)的制備將根據(jù)制備27得到的亞氨酸酯化合物No.30(95mg，0.031mmol)和公開專利申請WO 02/24754制備42得到的化合物No.35(65.4mg，0.062mmol)溶于1.5ml二氯甲烷/二乙醚混合物[1/2(v/v)]中。添加4分子篩粉末后，該混合物冷卻到-20℃，然后添加0.1M三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯在二氯甲烷(47μl)中的溶液。40分鐘后，添加固體碳酸氫鈉中和該混合物。過濾與濃縮后，該殘留物采用SephadexLH60凝膠色譜法(進(jìn)行2次色譜純化)進(jìn)行純化，得到68mg化合物No.37。
質(zhì)量“ESI”法，正模式化學(xué)質(zhì)量＝3918.88；實驗質(zhì)量3919.35±0.71u.m.a.
硅膠CCM，環(huán)己烷/乙酸乙酯/乙醇[3/1/1(v/v/v)]Rf＝0.53制備33甲基(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.38)的制備在-5℃，往制備31中得到的化合物No.36(111mg)在四氫呋喃(4.6ml)中的溶液里，添加30％過氧化氫(3.9ml)。攪拌5分鐘后，滴加0.7M氫氧化鋰水溶液(1.8ml)。該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌1小時，然后在0℃攪拌4小時，最后在室溫下攪拌16小時。把該反應(yīng)混合物加到用水洗脫的細(xì)粒SephadexG-25(5×100cm)柱上。這些含有期望化合物的餾分合并，濃縮并加到DowexAG 50WX4H+樹脂(1.9ml)柱上。在0℃收集該化合物，濃縮得到72.1mg化合物No.38。
硅膠CCM，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水[16/12/2.6/7(v/v/v/v)]Rf＝0.60。
制備34甲基(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.39)的制備在-5℃，往化合物No.37(60mg)在四氫呋喃(5.5ml)中的溶液里，添加30％過氧化氫(2.2ml)。攪拌5分鐘后，滴加0.7M氫氧化鋰水溶液(1ml)。該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌1小時，然后在0℃下攪拌4小時，最后在室溫下攪拌16小時。用1M鹽酸溶液中和該混合物。把這種溶液加到用水洗脫的細(xì)粒SephadexG-25(5×100cm)柱上。含有期望化合物的餾分合并，濃縮，放到DowexAG 50 WX4 H+樹脂柱上。在0℃收集該化合物，濃縮得到37.5mg化合物No.39。
硅膠CCM，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水[16/12/2.6/7(v/v/v/v)]Rf＝0.36。
制備35甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，鈉鹽(No.40)的制備制備33得到的化合物No.38僅在使用前與N，N-二甲基甲酰胺(3×2ml)一起進(jìn)行共蒸餾。往化合物No.38(70.3mg，22.8μmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2ml)中的溶液里，添加三氧化硫-三乙胺配合物(351mg)。在避光下，該混合物在55℃攪拌16小時。該混合物冷卻到0℃后滴加到碳酸氫鈉水溶液中。在室溫下攪拌16小時，然后濃縮至干。把溶于水的殘留物加到用0.2M氯化鈉洗脫的細(xì)粒SephadexG-25柱上。含有該產(chǎn)物的餾分進(jìn)行濃縮，再使用用水洗脫的相同柱進(jìn)行脫鹽。凍干后，得到103mg化合物No.40。
質(zhì)量“ESI”法，負(fù)模式化學(xué)質(zhì)量＝4864.82；實驗質(zhì)量4862.90±0.21u.m.a.
制備36甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-疊氮基-2-脫氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，鈉鹽(No.41)的制備根據(jù)制備35中所描述的操作方式，將制備34得到的化合物No.39(33mg，0.017mmol)轉(zhuǎn)化成化合物No.41。濃縮后，得到40mg化合物No.41。
質(zhì)量“ESI”法，負(fù)模式化學(xué)質(zhì)量＝4952.83；實驗質(zhì)量4950.19±0.55u.m.a.
制備37甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-amino-2-脫氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，鈉鹽(No.42)的制備制備35得到的化合物No.40(93.8mg)在叔丁醇(1.2ml)與水(1.8ml)混合物中的溶液，在氫壓力(5bar)與10％披鈀炭(28mg)存在下，在40℃處理4小時。過濾(MilliporeLSWP 5μm過濾器)后，該溶液濃縮至干，得到93mg化合物No.42。
制備38甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-氨基-2-脫氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，鈉鹽(No.43)的制備根據(jù)制備37所描述的操作方式，將制備36得到的化合物No.41(40.8mg)轉(zhuǎn)化成化合物No.43。濃縮后，得到42.3mg化合物No.43。
質(zhì)量“ESI”法，負(fù)模式化學(xué)質(zhì)量＝4926.84；實驗質(zhì)量4924.07±0.36u.m.a.
實施例1 實施例2
實施例1甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺基己酰基)]-2-脫氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，鈉鹽的制備根據(jù)制備37得到的化合物No.42(20mg，4.13μmol)溶于0.5％碳酸氫鈉水溶液(1.7ml)中。往該溶液里滴加磺基丁二酰亞胺6-(生物素酰胺基)己酸酯(23mg，41.3μmol)在0.5％碳酸氫鈉溶液(100μL)中溶液。在室溫下攪拌16小時后，添加1M氫氧化鈉水溶液，然后攪拌1小時。把該反應(yīng)混合物加到用0.2M氯化鈉水溶液洗脫的細(xì)粒SephadexG-25(5×100cm)柱上。含有產(chǎn)物的餾分進(jìn)行濃縮，再用用水洗脫的相同柱進(jìn)行脫鹽。凍干后，得到21.2mg實施例1的化合物。
質(zhì)量“ESI”法，負(fù)模式；單一同位素質(zhì)量＝5174.38；化學(xué)質(zhì)量＝5178.28；實驗質(zhì)量＝5177.69±0.52u.m.a.
實施例2甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺基己?；?]-2-脫氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，鈉鹽的制備根據(jù)實施例1所描述的操作方式，將根據(jù)制備38得到的化合物No.43(19.1mg)轉(zhuǎn)化成化合物No.45。凍干后，得到18.1mg實施例2的化合物。
質(zhì)量“ESI”法，負(fù)模式；單一同位素質(zhì)量＝5262.31；化學(xué)質(zhì)量＝5266.30；實驗質(zhì)量5263.93±0.38u.m.a.
權(quán)利要求
1.下式I的生物素化十六糖以及它們在藥物上可接受的鹽 式中-T代表下式鏈T1或T2 -Biot代表下述基團(tuán) -R代表(C1-C6)烷氧基，特別地甲氧基，或-OSO3-基，-R1代表(C1-C6)烷氧基，特別地甲氧基，或-OSO3-基，-R2代表(C1-C6)烷氧基或-OSO3-基，-R3代表(C1-C6)烷氧基，特別地甲氧基，或-OSO3-基，或R3構(gòu)成-O-CH2-橋，-CH2-基團(tuán)與在相同環(huán)上帶有羧基官能團(tuán)的碳原子連接起來，-Pe代表下式的糖鏈
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的式I生物素化十六糖，式中-R代表甲氧基或-OSO3-基，-R1代表甲氧基，-R2代表-OSO3-基，-R3代表甲氧基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的生物素化十六糖，它選自·甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺己?；?]-2-脫氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，鈉鹽·甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺己?；?]-2-脫氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，鈉鹽。
4.藥物組合物，其含有作為活性組分的根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項權(quán)利要求所述的十六糖，任選地與一種或多種惰性或適當(dāng)?shù)馁x形劑并用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物在下述疾病中的用途當(dāng)心血管和腦血管系統(tǒng)障礙，如與動脈粥樣硬化和糖尿病有關(guān)的血栓栓塞，像不穩(wěn)定型心絞痛、中風(fēng)、血管成形術(shù)后再狹窄、動脈內(nèi)膜切除術(shù)、血管內(nèi)假體插入；或與溶栓后的血栓再形成、梗塞、缺血性癡呆、外周動脈病、血液透析、心房纖維性顫動相關(guān)的血栓塞障礙時，或使用主動脈-冠狀動脈分流術(shù)的血管假體時出現(xiàn)凝血系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性改變所造成的各種病理學(xué)，用于治療或預(yù)防靜脈源血栓塞病癥，例如肺栓塞，用于預(yù)防或治療在外科手術(shù)后，由細(xì)菌、病毒或酶活化劑誘發(fā)的腫瘤生長或凝血失常后所觀察到的血栓性并發(fā)癥。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項權(quán)利要求所述的生物素化十六糖在覆蓋假體中的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項權(quán)利要求所述的生物素化十六糖在用多孔氣囊進(jìn)行的動脈內(nèi)膜切除術(shù)中作為輔藥的用途。
8.使用抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素的方法，其特征在于它能夠中和根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項權(quán)利要求所述的生物素化十六糖。
9.抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素在制備藥品中的用途，該藥品用于中和根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項權(quán)利要求所述的生物素化十六糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的式(I)的生物素化十六糖，式中Biot是生物素衍生物；R、R
文檔編號A61F2/958GK101039963SQ200580034445
公開日2007年9月19日 申請日期2005年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月9日
發(fā)明者P·迪肖索伊, J·P·赫勞爾特, J·M·埃爾貝, M·佩蒂圖, P·薩維 申請人:賽諾菲-安萬特