專利名稱：使用透明質酸和透明質酸酶抑制劑的組合物和方法
技術領域：
本發(fā)明通常涉及藥物組合物、裝置和方法，并且更具體地涉及與增強植入的透明質酸材料的持續(xù)時間和活性有關的組合物、裝置和方法。
相關技術的描述透明質酸(HA)是在包括滑膜關節(jié)液、眼中的玻璃體液、軟骨、血管、細胞外基質、皮膚和臍帶在內(nèi)的許多身體組織中天然存在的普遍物質。保持水分是透明質酸的最重要的生物學功能之一，僅次于向沒有直接血液供應的細胞提供營養(yǎng)物并從中除去廢物，該細胞例如是軟骨細胞，。HA與水結合的能力形成組織的結構，潤滑并緩沖諸如關節(jié)(例如膝蓋)和肌肉等身體可移動的部分，并對皮膚體積有貢獻。
透明質酸作為潤滑劑并提供結構支持的能力使其廣泛應用于多種醫(yī)療應用中，例如包括眼科學、軟組織增大(例如HA植入物用于整形和重建外科)、創(chuàng)傷照護、關節(jié)粘性補充(例如關節(jié)內(nèi)注射)、骨再生、避免粘連、藥物輸送、細胞保存、表面包被以及增濕劑。與多種其它類型的生物材料(例如膠原)相比，HA的特殊優(yōu)點是，由于HA是天然的細胞外基質的一部分，所以身體對基于HA的植入物并不產(chǎn)生免疫(變應性的)應答。
然而，當將透明質酸植入體內(nèi)時，其具有相對有限的壽命。多種降解酶可以危害體內(nèi)植入物的耐久性，所述降解酶例如是透明質酸酶。透明質酸酶通常指能夠催化動物結締組織中某些酸性粘多糖(例如透明質酸的鈉鹽和硫酸軟骨素A和C的鈉鹽)的內(nèi)部糖苷鍵斷裂的水解酶，該水解酶例如是透明質酸裂合酶和透明質酸葡糖醛酸酶。例如，透明質酸葡糖胺酶催化透明質酸中的N-乙酰葡糖胺和D-葡萄糖醛酸殘基間的隨機的β-1，4鍵的水解。它還水解軟骨素、4-硫酸軟骨素和6-硫酸軟骨素、以及硫酸軟骨素B。透明質酸葡糖醛酸酶催化HA中的葡萄糖醛酸和N-乙酰葡糖胺殘基間的β-1，3鍵的水解。透明質酸裂合酶通過消去反應催化HA的斷裂，其中N-乙酰葡糖胺和葡萄糖醛酸之間的鍵斷裂并引入雙鍵。作為植入后體內(nèi)HA的酶分解的結果，給藥后體內(nèi)HA的功能性活動是有限的。由于這樣，使用HA作為植入物的醫(yī)療操作(特別地，例如美容增強劑或組織填充劑)經(jīng)常需要有規(guī)律地重復給藥。例如，基于HA的皮膚植入物和粘性補充給藥治療必須每6至9個月重復一次。
本發(fā)明解決與透明質酸及其用于醫(yī)療應用相關的缺點，并提供其它相關的優(yōu)點。
概述簡而言之，本發(fā)明提供延長基于透明質酸的植入物的活性的組合物、裝置和方法。使用基于透明質酸的植入物以在多種醫(yī)療操作中提供結構、支持物和潤滑作用，所述醫(yī)療操作例如包括美容目的的真皮注射(以減少皺紋、瘢痕、輪廓缺陷)，關節(jié)內(nèi)注射以緩解關節(jié)疼痛，血管“塞”以在血管穿刺操作后產(chǎn)生止血作用，以及“填充劑”以治療尿失禁、大便失禁和胃食管反流。
一方面，本發(fā)明提供組合有透明質酸和抑制化合物(即抑制劑)的組合物，其中所述抑制化合物能夠抑制透明質酸酶的活性。含有這樣的化合物的HA組合物不被機體迅速分解并且可以用于提供產(chǎn)生基于透明質酸的植入物，該植入物具有體內(nèi)增長的持久性和壽命。
在本發(fā)明中描述了多種抑制化合物。在單獨的實施方案中，本文描述的每一抑制化合物能夠抑制透明質酸的降解。在某些實施方案中，抑制化合物抑制由透明質酸酶導致的酶誘導的透明質酸的降解。一方面，本發(fā)明提供包含透明質酸和金化合物的組合物，其中所述金化合物(例如有機金化合物)抑制透明質酸的降解。所述組合物還可以包含聚合物。一方面，所述金化合物是硫代蘋果酸金鹽或硫代蘋果酸金鈉。另一方面，所述金化合物是金諾芬。另一方面，所述金化合物是硫代硫酸金鈉。另一方面，本發(fā)明提供包含透明質酸和吲哚美辛或其類似物或衍生物的組合物，其中所述吲哚美辛抑制透明質酸的降解。另一方面，本發(fā)明提供包含透明質酸和含有硫酸酯的多糖的組合物，其中所述含有硫酸酯的多糖抑制透明質酸的降解。所述組合物還可以包含聚合物。所述含有硫酸酯的多糖例如可以是巖藻聚糖，例如巖藻多糖或其類似物或其衍生物；硫酸葡聚糖或其類似物或其衍生物；或肝素或其類似物或其衍生物。另一方面，本發(fā)明提供包含透明質酸和聚合物的組合物，其中所述聚合物抑制透明質酸的降解。另一方面，所述聚合物是二嵌段共聚物。一方面，所述聚合物包含具有(-O-CH(CH3)-CO-)結構的乳酸殘基。另一方面，所述聚合物包含具有(-OCH2CH2-)結構的環(huán)氧乙烷殘基。另一方面，所述聚合物包含聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)。另一方面，所述聚合物包含聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(MePEG-PLLA)(60∶40)。另一方面，所述聚合物包含聚(乳酸-co-乙醇酸)-co-聚乙二醇(PLGA-PEG)。另一方面，所述聚合物包含聚己內(nèi)酯-co-聚乙二醇(PCL-PEG)。另一方面，所述聚合物是山梨糖醇酐酯或環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷聚合物的共聚物。所述聚合物可以是聚合物的混合物。另一方面，所述聚合物是聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)和聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(MePEG-PLLA)的混合物。另一方面，HI是辛基酚乙氧基化物。另一方面，本發(fā)明提供組合有透明質酸和共溶劑型分子的組合物，其中這些劑抑制透明質酸酶的活性并且抑制HA的體內(nèi)降解。另一方面，本發(fā)明提供含有透明質酸和選自聚乙二醇、丙二醇或羧甲基纖維素(CMC)的化合物的組合物，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。另一方面，提供包含透明質酸和HI的組合物，其中所述HI是維生素C、七葉皂苷、曲尼司特、曲呫諾、長春藤皂苷元、鹽酸胍、L-精氨酸、norlignane、urolithin B、甘草素、黃芩素、異甘草素、色甘酸二鈉(DSCG)、7-硫酸白楊素、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、木犀草素、桑色素、楊梅黃素、保泰松、羥基保泰松、非諾洛芬、硫代蘋果酸金鈉、磷酸化橙皮苷、紫錐花、迷迭香酸、具有0.2至1的磺化度的磺酸酸化的β-(1，4)-乳-低聚糖(n＝2-6)；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素；以及磺酸化的化合物，例如磺酸新霉素、sulfonated planetose、硫酸對苯二酚二半乳糖苷、或硫酸-2-羥苯基單乳二糖苷；以及水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮)、7-硫酸白楊素、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、或吲哚-2-羧酸；并且所述組合物任意地含有聚合物。任一所述組合物還可以包含金化合物，其中所述金化合物(例如有機金化合物或者硫代蘋果酸金鹽或其類似物或其衍生物)抑制透明質酸的降解?？梢允褂脤嵤├?提供的透明質酸粘度測定法或實施例22提供的GPC分子量分析來鑒別抑制由透明質酸酶導致的透明質酸降解的化合物。一方面，提供組合物，其包含透明質酸以及選自硫代蘋果酸金鹽、吲哚美辛、巖藻多糖、硫酸葡聚糖、肝素、乙二醇、丙二醇、羧甲基纖維素(CMC)、或它們的類似物和衍生物的化合物，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照粘度的50％或高于50％，其中使用透明質酸粘度測定法測量粘度。另一方面，提供組合物，其包含透明質酸以及選自辛基酚乙氧基化物、山梨糖醇酐酯或環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷聚合物的共聚物的化合物，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照粘度的50％或高于50％，其中使用透明質酸粘度測定法測量粘度。另一方面，提供組合物，其包含透明質酸以及聚合物，該聚合物選自包含具有(-O-CH(CH3)-CO-)結構的乳酸殘基的聚合物、包含具有(-OCH2CH2-)結構的環(huán)氧乙烷殘基的聚合物、聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)、聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(MePEG-PLLA)(60∶40)、聚(乳酸-co-乙醇酸)-co-聚乙二醇(PLGA-PEG)、聚己內(nèi)酯-co-聚乙二醇(PCL-PEG)的聚合物，或其混合物，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照粘度的50％或高于50％，其中使用透明質酸粘度測定法測量粘度。另一方面，提供組合物，其包含透明質酸以及HI，該HI選自維生素C、七葉皂苷、曲尼司特、曲呫諾、長春藤皂苷元、鹽酸胍、L-精氨酸、norlignane、urolithin B、甘草素、黃芩素、異甘草素、色甘酸二鈉(DSCG)、7-硫酸白楊素、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、木犀草素、桑色素、楊梅黃素、保泰松、羥基保泰松、非諾洛芬、硫代蘋果酸金鈉、磷酸化橙皮苷、紫錐花、迷迭香酸、具有0.2至1的磺化度的磺酸酸化的β-(1，4)-乳-低聚糖(n＝2-6)；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素；以及磺酸化的化合物，例如磺酸新霉素、sulfonated planetose、磺酸對苯二酚二半乳糖苷、或硫酸-2-羥苯基單乳二糖苷；以及水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮)、7-硫酸白楊素、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、或吲哚-2-羧酸，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照粘度的50％或高于50％，其中使用透明質酸粘度測定法測量粘度。另一方面，提供組合物，其包含透明質酸以及選自肝素(鈉鹽)、硫代蘋果酸金鈉、羧甲基纖維素、硫酸葡聚糖、巖藻多糖以及它們的類似物和衍生物的化合物，其中所述透明質酸的分子量高于透明質酸對照分子量的約10％、或高于約25％、或高于約50％、或高于約75％、或高于約90％，其中使用GPC分子量分析測量分子量。
在某些方面，所述組合物可以包含兩種或多種HI。在其它方面，所述組合物包含一種或多種HI，其中所述一種或多種HI具有額外的治療效果。例如，所述HI還可以減少治療位點組織的炎癥(例如金療法化合物)、可以具有抗凝效應、或者可以具有抗增殖效應。
在其它方面，本發(fā)明提供由透明質酸酶抑制劑和藥物輸送介質(載體)組成的組合物以在HA植入位點提供該劑的緩釋。一方面，所述載體是聚合物。該聚合物可以是生物可降解的或非生物可降解的。一方面，所述聚合物包括碳水化合物，例如淀粉、纖維素和葡聚糖。另一方面，所述聚合物包括蛋白質，例如膠原、明膠、纖維蛋白原和白蛋白。另一方面，所述聚合物包括聚酯(例如聚(D，L-丙交酯))、聚(D，L-丙交酯-co-乙交酯)、或聚乙交酯。另一方面，所述聚合物包括聚(ε-己內(nèi)酯)、聚羥基丁酸酯、聚烷基碳酸酯、聚酐或聚原酸酯。另一方面，所述聚合物包括乙烯-醋酸乙烯共聚物(EVA)、硅橡膠、聚氨酯或丙烯酸聚合物或共聚物。另一方面，所述聚合載體包括聚乙二醇。另一方面，所述聚合載體包括4-臂巰基PEG和4-臂NHS PEG并且還可以任意地包含膠原或膠原衍生物，例如甲基化的膠原。
另一方面，提供組合物，其包含透明質酸和HI(例如肝素(鈉鹽)、硫代蘋果酸金鈉、羧甲基纖維素、硫酸葡聚糖、巖藻多糖、以及它們的類似物和衍生物)，其中所述HI被包含在微粒中。可以將微粒分散在液體、半固體或固體HA移植物中，或者液體、半固體或固體HA移植物中含有微粒，以促使HI從所述組合物中緩釋。在某些實施方案中，HA膜或網(wǎng)中含有負載HI的微粒。在其它實施方案中，將負載HI的微粒分散在液體或半固體形式的HA中。在某些實施方案中，將負載HI的微粒均勻地分散在或包括到植入物中。
另一方面，所述組合物還可以包含陶瓷，例如β-磷酸三鈣、羥磷灰石、碳酸鈣、硫酸鈣、磷酸鈣、骨以及去礦物質骨。一方面，所述組合物還可以包含骨形態(tài)生成蛋白(例如BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6或BMP-7)、生長因子(例如成纖維細胞生長因子(FGF)、轉化生長因子(TGF)或血小板衍生生長因子(PDGF))。
本文描述的任一組合物還可以包含麻醉劑(例如丙胺卡因、利多卡因或苯佐卡因)和/或可以提供無菌形式的組合物。
其它方面，本發(fā)明提供方法，其中還可以將本文所述的HA透明質酸酶抑制劑組合物用于多種臨床指征，例如包括作為整容應用中的皮膚植入物；用于關節(jié)中的黏性補充物；作為增加骨生長的醫(yī)療裝置；作為脊柱融合手術中的植入物；作為外科懸?guī)?、網(wǎng)或貼片；作為用于治療牙周病的植入物(例如作為牙科植入物)；作為皮膚移植片(例如用于人工皮膚的發(fā)生)；作為角膜罩；作為用于治療尿失禁、大便失禁或胃食管反流的組織填充劑；作為外科粘連的屏蔽物；或者作為青光眼引流裝置。一方面，本發(fā)明提供增大骨或置換磨損骨的方法，其包括在需要的位置向需要該方法的患者輸送本文所述的組合物。另一方面，本發(fā)明提供降低與術后瘢痕化相關的疼痛的方法，其包括在手術操作期間使用本文所述的組合物滲入神經(jīng)周圍的區(qū)域。另一方面，本發(fā)明提供防止手術粘連的方法，其包括向需要該方法的患者的需要位置輸送本文所述的組合物。另一方面，本發(fā)明提供修復或增大皮膚或組織的方法，其包括向需要該方法的患者的皮膚或組織內(nèi)注射本文所述的化合物。例如可以向嘴唇或面部的皮膚中注射。另一方面，本發(fā)明提供在眼部手術期間維持眼睛淚體積的方法，其包括在眼部手術期間向眼內(nèi)輸送本文所述的組合物。所述眼部手術例如可以是白內(nèi)障摘除手術、人工晶狀體植入、視網(wǎng)膜復置、晶狀體乳化手術、角膜移植或青光眼濾過手術。另一方面，本發(fā)明提供減少與骨關節(jié)炎相關的疼痛的方法，其包括向需要該方法的患者的關節(jié)中注射本文所述的組合物。另一方面，本發(fā)明提供治療胃食管返流疾病的方法，其包括向患者的下端食道括約肌附近注射本文所述的組合物。另一方面，本發(fā)明提供治療或預防尿失禁的方法，其包括將本文所述的組合物對需要該方法的患者給藥，以便治療或預防尿失禁。例如可以將所述組合物尿道周給藥或經(jīng)尿道給藥。另一方面，本發(fā)明提供治療或預防大便失禁的方法，其包括將本文所述的組合物向患者的肛門括約肌附近給藥，以便治療或預防大便失禁。
本發(fā)明提供含有填充劑的醫(yī)療植入物。所述填充劑包括透明質酸和抑制透明質酸降解的化合物(例如硫代蘋果酸金鹽、吲哚美辛、丙二醇、肝素、硫酸葡聚糖、巖藻多糖和羧甲基纖維素)?？梢越M方這些醫(yī)療植入物用于例如GERD、大便失禁和尿失禁的處置。
另一方面，提供醫(yī)療裝置，其包括醫(yī)療植入物和抑制透明質酸降解的抑制化合物。在某些實施方案中，提供醫(yī)療裝置，其包括使用包含透明質酸和抑制化合物的組合物包被的植入物。一方面，本發(fā)明提供醫(yī)療裝置，其包括醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸和金化合物的組合物包被，其中所述金化合物抑制透明質酸的降解。另一方面，本發(fā)明提供醫(yī)療裝置，其包括醫(yī)療植入物，其中使用包含透明質酸和吲哚美辛或其類似物或其衍生物的組合物包被植入物，其中所述吲哚美辛抑制透明質酸的降解。另一方面，本發(fā)明提供醫(yī)療裝置，其包括醫(yī)療植入物，其中使用包含透明質酸和含有硫酸酯的多糖的組合物包被植入物，其中所述含有硫酸酯的多糖抑制透明質酸的降解。所述含有硫酸酯的多糖例如可以是巖藻聚糖，該巖藻聚糖例如是巖藻多糖或其類似物或其衍生物；或硫酸葡聚糖或其類似物或其衍生物；或肝素或其類似物或其衍生物。另一方面，本發(fā)明提供醫(yī)療裝置，其包括醫(yī)療植入物，其中使用包含透明質酸和聚合物的組合物包被植入物，其中所述聚合物抑制透明質酸的降解。一方面，所述聚合物包含具有(-O-CH(CH3)-CO-)結構的乳酸殘基。另一方面，所述聚合物包含具有(-OCH2CH2-)結構的環(huán)氧乙烷殘基。另一方面，所述聚合物包含聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)。另一方面，所述聚合物包含聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(MePEG-PLLA)(60∶40)。另一方面，所述聚合物包含聚(乳酸-co-乙醇酸)-co-聚乙二醇(PLGA-PEG)。另一方面，所述聚合物包含聚己內(nèi)酯-co-聚乙二醇(PCL-PEG)。另一方面，所述聚合物選自山梨糖醇酐酯以及環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷聚合物的共聚物。另一方面，所述聚合物是聚合物的混合物，例如是聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)和聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(MePEG-PLLA)的混合物。另一方面，本發(fā)明提供醫(yī)療裝置，其包括醫(yī)療植入物，其中使用包含透明質酸和諸如聚乙二醇、丙二醇、辛基酚乙氧基化物或羧甲基纖維素(CMC)等化合物的組合物包被植入物，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。另一方面，包含本文所述的抑制化合物(例如透明質酸酶抑制劑)的組合物還可以包含金化合物(例如硫代蘋果酸金鹽)，其中所述金化合物抑制透明質酸的降解。
通過參考下列詳細說明和附圖本發(fā)明的上述和其它方面將變得更加清晰。
附圖的簡要說明

圖1是柱狀圖，其顯示肝素、硫代蘋果酸金鹽和吲哚美辛對酶誘導的透明質酸的降解的影響(溶液粘度，相對HA對照的％)。
圖2是柱狀圖，其顯示硫酸葡聚糖、巖藻多糖、肝素、丙二醇和吲哚美辛對酶誘導的透明質酸的降解的影響(溶液粘度，相對HA對照的％)。
圖3是柱狀圖，其顯示經(jīng)過一夜孵育后，TRITON X-100對透明質酸酶導致的HA的降解的影響。
圖4是柱狀圖，其顯示多種化合物對透明質酸酶導致的HA的降解的影響。
圖5是柱狀圖，其顯示存在肝素鈉鹽和透明質酸酶(孵育15小時后，100單位/ml)時，HA的降解。
圖6是柱狀圖，其顯示存在硫代蘋果酸金鹽和透明質酸酶(孵育15小時后，100單位/ml)時，HA的降解。
圖7是柱狀圖，其顯示存在CMC和透明質酸酶(孵育15小時后，100單位/ml)時，HA的降解。
圖8是柱狀圖，其顯示存在硫酸葡聚糖和透明質酸酶(孵育15小時后，100單位/ml)時，HA的降解。
圖9是柱狀圖，其顯示了存在巖藻多糖和透明質酸酶(孵育15小時后，100單位/ml)時，HA的降解。
詳細說明在對本發(fā)明進行說明之前，闡明后文使用的某些術語的定義有助于理解本發(fā)明。
本文使用的“透明質酸”或“HA”指本文或參考文獻中所述的所有形式的透明質酸，包括那些被處理的，或化學或物理修飾的透明質酸，以及交聯(lián)的透明質酸(例如共價交聯(lián)、離子交聯(lián)、熱交聯(lián)或物理交聯(lián))。HA是由約2500個重復的二糖單元的直鏈組成的糖胺聚糖。每一二糖單元是由與葡糖醛酸相連的N-乙酰葡糖胺殘基組成。所述分子可以具有不同長度(即不同數(shù)目的重復二糖單元和不同的鏈分枝樣式)并且可以在若干位點被修飾(通過加入或消去不同的官能團)而不偏離本公開的范圍。
本文所使用的“透明質酸酶抑制劑”或“HI”指直接或間接改變或抑制透明質酸酶或其它水解酶水解透明質酸的能力的化合物?！癏I”還指防止HA的體內(nèi)分解、減少HA的體內(nèi)分解或延長HA的體內(nèi)分解所需的時間的任何分子，而無論該分子的特定的作用機理。HI的實例包括山奈酚、硫酸-β-(1，4)-四半乳糖苷、硫酸新霉素、木犀草素、楊梅黃素、根皮素、槲皮黃素、水飛薊素、甘草素、曲尼司特、黃芩素、曲呫諾、異甘草素、色甘酸二鈉、二氫黃酮-7-硫酸鈉和5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、含金的化合物、吲哚美辛、硫酸化多糖、藥物共溶劑、非離子表面活性劑、二嵌段共聚物和羧甲基纖維素。本文詳細地描述了適合作為HI使用的多種化合物和共聚物。
本文所使用的“類似物”指結構與母體化合物類似，但在組成上又稍有不同(例如一個原子或官能團不同，加入或除去一個原子或官能團)的化合物。與原始化合物相比，類似物可以具有也可以不具有不同的化學或物理性質，并且可以具有也可以不具有改善的生物活性和/或化學活性。例如，與母體化合物相比，類似物可以是更加親水的或者它可以具有改變的反應性。類似物可以模擬母體化合物的化學和/或生物活性(即可以具有類似或相同的活性)，或者，在某些情況下，可以具有增加的或降低的活性。類似物可以是天然存在的或非天然存在的(例如重組的)原始化合物的變體。類似物的實例是突變蛋白質(即蛋白質的類似物，其中刪除、添加了至少一個氨基酸，或者使用另一氨基酸取代了至少一個氨基酸)。其它類型的類似物包括異構體(對映異構體、非對映體等等)和化合物的其它類型的手性變體，以及結構同分異構體。類似物可以是直鏈化合物的支鏈的或環(huán)狀的變體。例如，直鏈化合物可以具有支鏈或其它方式取代的類似物以給予某些期望的性質(例如改善親水性和生物利用度)。
本文所使用的“衍生物”指化合物的化學或生物修飾的形式，所述化合物與母體化合物結構類似并且(實際上和理論上)衍生自該母體化合物。通常，“衍生物”不同于“類似物”，因為母體化合物可以是產(chǎn)生“衍生物”的起始物質，而該母體化合物不一定必須被用作起始物質以產(chǎn)生“類似物”。類似物可以具有與母體化合物不同的化學或物理性質。例如，與母體化合物相比，衍生物可以更加親水或者可以具有改變的反應性。
衍生(即修飾)可以涉及分子內(nèi)的一個或多個部分的取代(例如官能團的變化)。例如，可以使用諸如氟或氯等鹵素取代氫，或者可以使用羧酸部分(-COOH)取代羥基基團(-OH)。
術語“衍生物”還指全部的溶劑化物，例如水合物或加合物(例如具有乙醇的加合物)、活性代謝物以及母體化合物的鹽?？梢灾苽涞柠}的類型取決于化合物中各部分的性質。例如，諸如羧酸基團等酸性基團可以形成堿金屬鹽或堿土金屬鹽(例如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽和鈣鹽，以及具有生理可耐受的季銨離子的鹽和具有氨的酸加合鹽和生理可耐受的有機胺，例如三乙胺、乙醇胺或三(2-羥乙基)胺)。堿性基團可以形成酸加合鹽，例如與無機酸形成酸加合鹽，所述無機酸例如是鹽酸、硫酸或磷酸，或者與有機羧酸和磺酸形成酸加合鹽，所述有機羧酸和磺酸例如是乙酸、檸檬酸、乳酸、苯甲酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、甲磺酸或對甲苯磺酸。同時含有堿性基團和酸性基團的化合物可以以兩性離子存在，例如含有羧基和堿性氮原子?？梢酝ㄟ^本領域技術人員已知的常規(guī)方法得到鹽，例如通過在溶劑或稀釋劑中將化合物與無機或有機酸或堿混合，或者通過陽離子交換或陰離子交換從其它鹽得到期望的鹽。
其它類型的衍生物包括母體化合物的結合物和前藥(即在生理條件下可以轉化為原始化合物的化學修飾的衍生物)。例如，所述前藥可以是活性劑的非活性形式。在生理條件下，可以將所述前藥轉化為化合物的活性形式。例如可以通過使用?；鶊F取代氮原子上的一個或兩個氫原子來形成前藥(?；八?，或者通過使用氨基甲酸酯基團取代氮原子上的一個或兩個氫原子來形成前藥(氨基甲酸酯前藥)?？梢栽贔leisher et al.，Advanced Drug Delivery Reviews 19(1996)115；Design of Prodrugs，H.Bundgaard(ed.)，Elsevier，1985；或H.Bundgaard，Drugs of the Future，16(1991)443中找到關于前藥的更加詳細的信息。
本文使用的“抑制”是指與對照相比，對酶(例如透明質酸酶)活性的統(tǒng)計學、生物學或臨床顯著的直接或間接的改變、降低或消除。
除非另有說明，應當將本文所述的任何濃度范圍理解為包括在所述范圍內(nèi)的任何整數(shù)及其分數(shù)的濃度，例如整數(shù)的十分之一和百分之一。此外，除非另有說明，應當將本文所述的涉及任何物理特征的任何數(shù)字范圍理解為包括所述范圍內(nèi)的任何整數(shù)，所述物理特征例如是聚合物的亞單元、尺寸和厚度。應該理解，上文和本文其它地方使用的術語“a”和“an”指“一種或多種”所列舉的組分。正如本文所使用的那樣，術語“約”的意思是特定值、范圍或結構的±15％。正如本文所使用的那樣，術語“包括(include)”和“包含(comprise)”作為同義詞使用。正如本文所使用的那樣，術語“平均值(average)”或“平均值(mean)”包括算術平均值以及任何合適的加權平均值，例如在表述聚合分子量或粒徑分布時使用的平均值。
本文參考多種參考文獻，所述參考文獻例如更加詳細地描述了某些操作或組合物(例如化合物、蛋白質等)。引入包括專利和發(fā)表文章在內(nèi)的這些參考文獻的全部內(nèi)容作為參考。還應該注意到，當參考PCT申請時，本文也引入作為其基礎或其引用的美國申請的全部內(nèi)容作為參考。
I.透明質酸透明質酸是一種可以在許多組織的細胞外基質中找到的天然物質，所述組織包括滑膜關節(jié)液、眼的玻璃體液、軟骨、血管、皮膚和臍帶。具有約120萬至150萬道爾頓(Da)的商品形式的透明質酸是從公雞冠和其它動物來源中提取的。其它的HA來源包括從細胞培養(yǎng)物/發(fā)酵過程分離出來的HA。還可以從多種商業(yè)來源得到較低分子量的HA制劑。
通常，適于本發(fā)明使用的HA產(chǎn)品有許多商業(yè)來源，即存在許多可商購的HA產(chǎn)品，并且可以向其中加入本發(fā)明的HI。實例包括用于治療骨關節(jié)炎的、用于粘性補充的、作為眼用粘彈性產(chǎn)品的、用于面部美容(真皮)的以及作為膀胱輸尿管回流植入物(填充劑)的商品化的組合物。下文將提供這些和其它產(chǎn)品更加具體的細節(jié)。
用于疼痛和骨關節(jié)炎的其它癥狀的關節(jié)內(nèi)治療的含有HA的材料包括下列材料。來自Genzyme Biosurgery(Ridgefield，NJ)的SYNVISC是來自公雞冠的含有hylan[透明質酸(hyaluronate)(透明質酸(hyaluronan))鈉的衍生物]聚合物的彈粘性流體。來自AnikaTherapeutics(Woburn，MA)的ORTHOVISC是旨在緩解疼痛并改善患有膝骨關節(jié)炎(OA)患者的關節(jié)可動性以及活動范圍的高純度的、高分子量、高粘度的可注射形式的HA。將ORTHOVISC注射入膝中以恢復滑液的彈性和粘度。HYVISC是由Anika Therapeutics開發(fā)的高分子量的可注射HA產(chǎn)品，目前用于治療賽馬的骨關節(jié)炎和跛行。其它用于治療骨關節(jié)炎并且可以與本發(fā)明的HI組合的基于HA的粘性補充產(chǎn)品包括來自Medexus，Inc.(Canada)的HYALGAN、來自Seikagaku Corp.(Japan)的SUPARTZ、來自Bioniche Life Sciences，Inc.(Canada)的SUPLASYN、來自DePuy Orthopaedics，Inc.(Warsaw，IN)的ARTHREASE以及來自Q-Med AB(Sweden)的DUROLANE。
已經(jīng)將HA的粘彈性溶液用于治療眼部疾病狀態(tài)，例如在白內(nèi)障摘除手術、眼內(nèi)晶狀體移植、視網(wǎng)膜復置、晶狀體乳化手術、角膜移植以及青光眼手術期間作為玻璃體的替代物。AMVISC和AMVISCPLUS(均來自Anika Therapeutics，Inc.)以及OCUCOAT(Bausch &Lomb)是用于在白內(nèi)障摘除、角膜移植和青光眼手術期間維持眼睛形狀并保護精密組織的高分子量的、粘彈性的并且可注射的HA溶液。基于HA的眼用粘彈性產(chǎn)品包括來自Alcon Laboratories的PROVIS、VISCOAT、DUOVISC和CELLUGEL；來自Pharmacia & Upjohn的HEALON、HEALON G和HEALON 5，來自Allergan的VITRAX；來自Bio-Technology General的BIOLON；來自Anika Therapeutics/StaarSurgical的STAARVISC；來自Anika Therapeutics/Cytosol Opthalmics的SHELLGEL以及來自Novartis的UNIVISC。
還可以將基于HA的產(chǎn)品用作填充劑。此時將該材料注射入組織中以恢復體積、提供支撐并且恢復功能-通常是“填充”環(huán)繞失禁括約肌的組織。將基于HA的填充劑用于治療尿失禁、大便失禁和胃食管反流；由無能的或損傷的括約肌導致泄漏發(fā)生的所有疾病狀態(tài)。本發(fā)明使用的基于HA的膀胱輸尿管回流(尿失禁)產(chǎn)品的有代表性的實例是來自Q-Med/Priority Healthcare的DEFLUX。
還可以使用透明質酸產(chǎn)品來防止多種手術操作后的粘連。粘連是發(fā)生在相鄰組織間的瘢痕組織的連接或橋聯(lián)，所述相鄰組織在手術期間受損。粘連瘢痕組織可以損害正常的解剖學功能并且能夠導致無數(shù)的臨床問題，包括疼痛、腸梗阻、不育以及神經(jīng)根壓迫性損害。INCERT族的生物可吸收的交聯(lián)透明質酸(HA)產(chǎn)品被設計為在手術期間放置在相鄰組織間作為屏障來抑制瘢痕組織的形成。其它的基于HA的手術粘連產(chǎn)品包括來自Genzyme Biosurgery，Inc.(Cambridge，MA)的GYNECARE INTERGEL(LifeCore)和SEPRAFILM粘連屏障。
其它HA產(chǎn)品包括用于在眼部手術期間使用的植入物以填充缺陷、預防瘢痕、提供組織支持并加速愈合。例如OSSIGEL是透明質酸(HA)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的粘性制劑，其被用于加速骨折愈合(Orquest，Inc.)。
醫(yī)學中HA產(chǎn)品使用增長最快的領域可能是身體增大(例如面部)、皺紋的治療以及其它美容和美學應用。在美容操作中，通常將HA注射入皮下組織以填充皮膚凹陷和缺陷，以便減少線條或其它不想要的痕跡的出現(xiàn)。用于該目的的可商購的人工合成的透明質酸凝膠包括來自Genzyme Biosurgery的HYLAFORM(也被稱為HYLAN B)；RESTYLANE和PERLANE(來自Q-Med AB，Sweden)。MACROLANE(Q-Med)是正在開發(fā)中的用于隆胸的產(chǎn)品。
使用含有HA的材料的其它應用包括藥物輸送、癌癥治療以及間質性膀胱炎的治療。用于藥物輸送并且可以與HI組合的含有HA的材料的實例包括Hyaluronic Induced Targeting(HIT)(SkyePharma(UK))和NASHA凝膠(Q-Med)。局部制劑，例如來自Meditech(Australia)的SOLARESE和SOLARASE，是用于治療皮膚癌的局部凝膠?？缮藤彽挠糜谥委熼g質性膀胱炎的基于HA的材料包括CYSTISTAT(Bioniche Life Sciences，Inc.)，其為用于臨時替代膀胱上皮上糖胺聚糖(GAG)層的無菌透明質酸鈉溶液。
因此，在商業(yè)市場上容易得到用于多種臨床征候的純HA和含有HA的組合物。這些含有HA的材料是可以在本發(fā)明中用作HA來源的含有HA的材料的實例。
II.透明質酸酶抑制劑多種化合物可被用于抑制或降低體內(nèi)HA的酶降解并且適合在本發(fā)明的實踐中使用。例如，可以將化合物與HA組合以產(chǎn)生在多種臨床征候中抵抗降解并且具有延長活性的HA植入物。
微摩爾至毫摩爾濃度范圍的透明質酸酶抑制劑(HI)可被用于抑制體內(nèi)透明質酸的降解。這些化合物與透明質酸可以同時或依次輸送。例如，可以通過將透明質酸包括在給藥的制劑中而將HI與透明質酸同時向患者輸送?；蛘?，或除此以外，可以在將透明質酸給藥之后將這些HI化合物給藥。在某些方面，優(yōu)選通過這些化合物的聚合劑型的控制釋放而將靶組織連續(xù)暴露在這些化合物中。本文將詳細地描述這些組合物以及其它組合。
1.金化合物許多金化合物可以作為HA體內(nèi)分解的抑制劑并且適合用于本發(fā)明的實踐中。如本文所使用的金化合物包括配合物，其中金與一個或多個配體螯合或結合，有機金化合物，無機金化合物及其鹽，以及元素(例如金屬)金。所述化合物可以是親水的、疏水的、兩性的，并且可以溶于溶液或者可以是顆粒混懸液的形式(例如膠體金)。有時候，有機金屬化合物可以是有毒的-本領域技術人員知道如何確定使用多大的量使得這些化合物對接受治療的個體來說是無毒的。以下描述了可以與HA組合以產(chǎn)生HA-金植入物的金化合物的實例，所述植入物抵抗降解并且在多種臨床征候中具有延長的生物學活性。
a.金(I)配合物一方面，金化合物是金(I)配合物。金配合物包括與一個或多個配體螯合、結合、絡合或以其它方式連接的金(I)(例如配位配合物)。這樣的金(I)配合物的有代表性的實例包括金(I)膦化合物、金(I)膦化物或金(I)磷酸鹽硫醇鹽、二配位的金(I)鹽以及金(I)螯合物(例如參見美國專利第5,527,779號)。
金(I)膦化物以及相關的化合物具有通式R3PAuX，其中R是烷基(例如甲基、乙基、異丙基或正丁基)、芳基或雜環(huán)基，或者是它們的取代衍生物，并且X是鹵素。金(I)膦化物化合物的代表性實例例如包括三苯基膦配合物(Ph3PAuCl)和Et3PAuCl。
另一實例具有通式R3PAuX，其中X是咪唑或者X是2-噻唑啉基、硫代-2-苯并咪唑基或2-苯并噁唑基硫代部分。
金(I)膦化物化合物的其它實例包括NSC652537，NSC652539，具有AuSP和AuNP核的2-配位的三苯基膦金(I)配合物(例如參見Nomiya，K.，et al.J.Inorg.Biochem.2003；95(2-3)208-20)，含有單膦和二膦衍生物的配合物，例如氯三苯基膦-1，3-雙(二苯基膦)丙烷金(I)(例如參見Caruso，F(xiàn).J.Med.Chem.2003；46(9)1737-42)，具有含氮雜環(huán)的三苯基膦配合物，所述含氮雜環(huán)例如吡唑和咪唑(例如參見Nomiya，K.，et al.；J.Inorg.Biochem.2000 Mar；78(4)363-70)，氯(三苯基膦)金(I)(TEPAu)(Et3PAuCl)和膦酸鹽配合物(以及膦反應產(chǎn)物)，以及四((三羥甲基)膦)金(I)氯化物(例如參見Pillarsetty，N.，et al.J.Med.Chem.2003；46(7)1130-1132)。
相關化合物的實例包括具有通式(RO)3PAuX的硫氰酸金化合物以及具有通式R3PAuSCN和(RO)3PAuSCN的硫氰酸鹽金配合物，其中R是烷基(例如甲基、乙基)、芳基(例如苯基)、或雜環(huán)，并且可以是取代的或未取代的，并且X是鹵素。金(I)膦(或亞磷酸鹽)硫醇鹽包括那些具有通式R3PAuSR’的化合物，其中R是烷基(例如乙基)、烷氧基或苯基，并且R’是H、烷基、芳基或雜環(huán)，并且可以是取代的或未取代的。例如，R’可以是取代的碳水化合物部分，這樣化合物具有下列的通式結構
其中X是H、乙?；蚣柞；?；Y是O或S；并且n是1至12。
金膦化合物的實例是金諾芬(1-硫代-β-D-吡喃葡萄糖-2，3，4，6-四乙酰-S)(三乙基膦)金)，已知其具有抗炎和抗風濕的性質。
膦或亞磷酸鹽金(I)硫醇鹽的其它實例包括 并且膦或磷酸鹽金(I)配合物包括硫醇、硫代酸和硫苯酚的衍生物，并且包括那些具有通式R3PAuX的化合物，其中X是2-噻唑啉基、硫代-2-苯并咪唑基，以及2-苯并噁唑基硫代-、那些具有通式(R3PAu)2S的化合物，并且還可以使用如下所示的大環(huán)螯合物 其中X是H、烷基、芳基或雜環(huán)，并且可以是取代的或未取代的。
金螯合物的其它實例包括Weinstock et ah，J.Med.Chem.17(1)139-140，1974描述的大環(huán)金螯合物。
二配位金(I)鹽的實例包括那些具有通式[R3PAuPR3]+X-；[R2SAuSR2]+X-；[RC5H4NAuNC5H4R]+X-；和[R3PAuNC5H4R]+X-的化合物，其中R是烷基、芳基或雜環(huán)，并且可以是取代的或未取代的；并且X是鹵化物、ClO4、BF4或者本領域已知的任何一價或二價陰離子。
金(I)螯合物的有代表性的實例具有下列通式 其中R是任何合適的橋聯(lián)部分并且可以是取代的或未取代的烷基、芳基或雜環(huán)；X是O、N或SO2NR2并且R1是H、烷基、芳基或雜環(huán)并且可以是取代的或未取代的。例如R可以是C6H4，X是O并且R1是C2H5。
b.有機金化合物另一方面，金化合物是有機金化合物。本發(fā)明的組合物中可以使用包括本文描述的有機金化合物在內(nèi)的多種有機金化合物。
一方面，有機金化合物可以具有抗炎和抗風濕的性質(例如還指金療法化合物)。金療法金化合物的有代表性的實例包括金諾芬(上文所述的)、金硫代多肽以及硫代蘋果酸金鹽和硫代蘋果酸金鈉(MYOCRISIN；丁二酸、巰基-一金(1+)鈉鹽(9CI))(參見J.Reprod.Fertil.1980；60(2)461-7)，其具有下列的通式結構 ●Au(I)●x Na有機金化合物的其它實例包括硫代葡萄糖金(1-硫代-D-吡喃葡萄糖-O2，S1)金及其衍生物，例如雙(硫代葡萄糖)金(I)、雙(硫代蘋果酸鹽)金(I)和金酸鹽(1-){[3-[[2-丙烯基氨基)硫代氧甲基]亞胺基]苯甲酸鹽(2-)]-，鈉}](NSC617746鈉鹽)，以及包括吡啶衍生物、咪唑衍生物在內(nèi)的金(I)配合物，吡啶衍生物例如NSC689418和NSC689419，咪唑衍生物例如克霉唑和酮康唑(例如參見Navarro，N.，et al.Inorg.Chem.2001；40(27)6879-84)，NSC652538，以及雙核金(I)二硫代膦酸鹽配合物(例如參見Maspero，A.，et al.Inorg.Chem.2003；42(17)5311-9)。
c.金(III)配合物另一方面，金化合物是金(III)配合物。金(III)配合物的有代表性的實例包括膽酰甘氨酸鹽(cholylglycinato)配合物，例如氯雙膽酰甘氨酸金(III)(例如參見Carrasco et al，J.Inorg.Biochem.84(3-4)287-92，2001)，三和四配位基膦基硫醇鹽配合物(例如Ortner et al.，Inorg.Chem.39(13)2801-6，2000)，以及含有乙二胺、二亞乙基三胺、四氮雜環(huán)十四烷、2，2；-二吡啶、6-(1，1-二甲基芐基)-2，2′-二吡啶)、1，4，8，11-四氮雜環(huán)十四烷、鄰二氮雜菲、三吡啶配體的配合物(例如參見Messori et al.，J.Med.Chem.43(19)3541-8，2000 and Marcon et al.，Eur.J.Biochem.270(23)4655-61，2003)。
d.無機金化合物另一方面，金化合物是無機金化合物。無機金化合物的有代表性的實例包括金III和金IV氯化物(分別是AuCl3和AuCl4)以及金鹽，例如金(II)氯化物、氫氯化物、金(III)氯化物的鈉鹽以及硫代硫酸金鈉。
e.金顆粒另一方面，金是顆粒形式的。可以將具有平均大小低于約50nm的金屬金顆粒稱為“膠體金”。通常是液體混懸液形式的膠體金制劑包括金顆粒，其范圍是約0.5nm至約40nm或小于約40nm，或者約1nm至約3nm?？梢酝ㄟ^本領域技術人員已知的方法制備膠體金顆粒并且可商購得到膠體金顆粒。
金顆?？?以是官能化的或非官能化的。官能化的金顆?？梢耘c化合物結合，所述化合物例如是寡核苷酸、脂質、肽、蛋白質、酶抑制劑、抗體或其它具有合適反應性部分的化合物。
可以從Nanoprobes，Inc.(Yaphank，NY)得到多種官能化的或非官能化的金顆粒。在本發(fā)明組合物中可以使用帶正電和帶負電的NANOGOLD顆粒(1.4nm)。帶正電的NANOGOLD在其表面具有多個胺，而帶負電的NANOGOLD具有多個羧基基團。官能化的NANOGOLD顆?？梢耘c多種生物化合物結合。例如單馬來酰亞胺NANOGOLD可以用于共價標記Fab’、IgG、含有半胱氨酸的蛋白質或肽，以及其它具有巰基的分子。類似的產(chǎn)品單馬來酰亞胺十一金(也來自Nanoprobes，Inc.)具有11個金原子的核，該核的直徑僅有0.8nm并且具有一個馬來酰亞胺基團，該產(chǎn)品可以用于選擇性標記巰基(-SH)。單硫代-NHS-NANOGOLD包括與伯胺反應來與蛋白質、脂質、肽、修飾的寡核苷酸或其它含有胺的分子共價連接的硫代-N-羥基琥珀酰亞胺酯(硫代-NHS)。還可以得到基于十一金化合物的類似產(chǎn)品(單硫代-NHS-十一金)。還可以得到連接有伯胺的NANOGOLD顆粒以便用于其它交聯(lián)反應(例如與糖蛋白中的糖部分共價連接)?？梢詮腅nergyBeam Services(Agawam，MA)得到商品名為BIOSITE的陽離子金顆粒，該金顆粒是由膠體金顆粒與聚-L-賴氨酸結合而得到的。
可以使用諸如硫代蘋果酸金鹽等金化合物來抑制透明質酸的降解?？梢詫⑦@些化合物與透明質酸同時或依次輸送。例如，可以通過將金化合物包括到給藥的制劑中而將金化合物與透明質酸同時向患者輸送?；蛘?，或除此以外，可以在將透明質酸給藥之后將這些化合物給藥。在某些方面，可以優(yōu)選通過這些化合物的聚合劑型的控制釋放而將靶組織連續(xù)暴露在這些化合物中。
2.多糖一方面，透明質酸酶抑制劑可以是多糖或硫酸化的(即含有硫酸酯的)多糖或硫酸化的多糖的類似物或衍生物。多糖的有代表性的實例包括藻酸、果膠和糖胺聚糖(例如參見Biosci.Biotechnol.Biochem.1997；61(6)1030-2，J.Enzyme Inhib.Med.Chem.2002；17(3)183-6)?；撬峄衔锏拇硇詫嵗ň哂?.2至1的磺化度的磺酸酸化的β-(1，4)-乳-低聚糖(n＝2-6)、磺酸新霉素、O-磺酸化的HA(例如參見Arch.Biochem.Biophys.1999；370(2)176-82)、sulfonated planetose、硫酸對苯二酚二半乳糖苷、硫酸-2-羥苯基單乳二糖苷。硫酸化的多糖的有代表性的實例包括硫酸肝素/類肝素(例如參見Arch.Biochem.Biophys.1999；370(2)176-82；Matrix Biol.2002；21(1)31-7)、硫酸葡聚糖和巖藻聚糖(例如巖藻多糖)。
硫酸葡聚糖是易溶于水的聚陰離子，其可以與陽離子和聚陽離子相互作用。因此，硫酸葡聚糖能夠與多種膜結合，特別是與那些具有正電荷的膜結合。已經(jīng)報道了硫酸葡聚糖具有多種臨床用途。已經(jīng)顯示硫酸葡聚糖及其衍生物可以抑制癌細胞生長(Bittoun P.，Carbohydrate Research 1999(3-4)p 247-255)；具有抗凝效應(Mauray S.，1998 J Biomat.Sci.Poly ed.1998 94p 373-87)；防止在AIDS患者中發(fā)生的合胞體形成或白細胞凝塊；以及可以作為敏感的天然成分的穩(wěn)定劑(藥物賦形劑)。
肝素是一組異源的具有抗凝性質的被稱為糖胺聚糖的直鏈陰離子粘多糖。其主要活性成分是由D-葡糖醛酸和D-葡糖胺(二者均被硫酸化)組成的并以1，4-α鍵連接的糖胺聚糖，根據(jù)制備的方法和來源，其分子量約為6000-20,000。不同的肝素樣品可以在己糖胺和抗壞血殘基內(nèi)具有不同水平的N-和O-硫酸化。在許多凝血可能造成問題(例如開心臟術和透析)的血管狀況中肝素(包括其衍生物)被廣泛用作抗凝血劑。
巖藻聚糖(例如巖藻多糖)是從褐藻中提取的高分子量的硫酸化的多糖。這些化合物具有多種體內(nèi)和體外抑制作用，包括抗凝血酶、抗增殖、抗補體、抗癌以及抗中性白細胞遷移效應(Riou D et al，Anticancer Research，16(3A)1213-1218，1996；Itoh，AnticancerResearch 13(6A)2045-2052，1993；Nishiro et al，Thromb.Res.62765-773，1991；Blondin et al，Mol.Immunol.31247-253，1994；Patankaret al，J.Biol Chem.26821770-21776，1993.)。市場上將巖藻多糖作為保健食品銷售并且被提議作為美容劑或皮膚劑(例如參見JP 01031707和JP 01085905)。
可以將諸如肝素、硫酸類肝素、硫酸葡聚糖以及巖藻多糖等硫酸化的多糖用于抑制透明質酸的降解?？梢詫⑦@些化合物與透明質酸同時或依次輸送。例如，可以通過將硫酸化的多糖包括在給藥的制劑中而將硫酸化的多糖與透明質酸同時向患者輸送?；蛘撸虺艘酝?，可以在將透明質酸給藥之后將這些化合物給藥。在某些方面，可以優(yōu)選通過這些化合物的聚合劑型的控制釋放而將靶組織連續(xù)暴露在硫酸化的多糖中。
3.PLA、PLGA和其它物質的共聚物另一方面，透明質酸酶抑制劑(HI)可以是聚合材料。該聚合物可以是均聚物或共聚物(例如二嵌段或三嵌段共聚物)。一方面，所述聚合物可以是均聚物，例如聚乳酸(PLA)。另一方面，所述聚合物是二嵌段共聚物。多種二嵌段共聚物可以作為體內(nèi)HA分解抑制劑使用并且適于在本發(fā)明的實踐中使用。
可以與HA組合以產(chǎn)生HA-二嵌段共聚物植入物的二嵌段共聚物的實例包括乳酸和/或羥基乙酸和聚乙二醇的二嵌段共聚物，所述植入物抵抗降解并且在多種臨床征候中具有延長的生物活性。一方面，所述聚合物可以包括具有(-O-CH(CH3)-CO-)結構的乳酸殘基、具有(-OCH2CH2-)結構的環(huán)氧乙烷殘基、羥基乙酸(-O-CH2-CO-)殘基或者己內(nèi)酯(-O-(CH2)5-CO-)殘基。例如，所述二嵌段共聚物可以是聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)；聚(乳酸-co-乙醇酸)-co-聚乙二醇(PLGA-PEG)以及聚己內(nèi)酯-co-聚乙二醇(PCL-PEG)。一方面，所述聚合物是具有60∶40比例的甲氧基聚乙二醇和聚(L-乳酸)的共聚物(MePEG-PLLA)。在所有這些化合物中，甲氧基聚乙二醇(MePEG)可以替代PEG。一方面，所述共聚物是聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(PLA-MePEG)。
二嵌段共聚物中的單體可以在鏈中隨機排列或者可以是個體聚合物聯(lián)在一起的鏈。通常使用疏水聚合物和親水聚合物的組合來制造這樣連接的共聚物。例如，疏水性的PLA可以用于與親水性的聚乙二醇組合。所得的的兩親共聚物含有親水區(qū)和疏水區(qū)。這樣的分子經(jīng)常被用于制藥工業(yè)，因為其可以通過任意一個區(qū)與藥物分子相連以修飾其性質。兩性共聚物還可以被用作與其它聚合物的摻合劑以修飾主要聚合物的總體性質。這樣的性質可以改變二嵌段的能力以形成微團并穩(wěn)定非水溶性的藥物，或者使諸如PLGA等剛性聚合物增塑，因此它們更加生物相容并且可以更加快速地釋放包被藥物(例如參見，Liggins，R.T.，et al.，Advanced Drug Delivery Reviews(2002)54，p 191-202；Kwon G，et al.(1995)16，p 295-309；和Jackson，J.K.，et al.(2004)，Int.Journal of Pharmaceutics(in press))。
一方面，所述HI是聚環(huán)氧乙烷或聚乙二醇的共聚物。PEG和PEO的結構是相同的，并且PEG通常指分子量低于20,000的聚合物，而PEO指具有更高分子量的聚合物。大量的研究努力關注于聚乙二醇(PEG)或聚環(huán)氧乙烷(PEO)與PLA或PLGA的化合以產(chǎn)生包含PEG親水和生物相容性質以及PLGA降解性質的共聚物。根據(jù)共聚物的組成，所得的聚合物的性質可以是親水的或疏水的以及可以是不可降解的或可降解的。
在開發(fā)PLA100和聚環(huán)氧乙烷的嵌段共聚物的某些早期工作涉及共聚物中不同量的PEO，以致聚合物基質的平衡水含量可以達到高于60％(Cohn and Younes in 1988)。對于這些特殊的共聚物，乳酸部分的范圍為20至84mol％并且PEO鏈的MW約為600至6000。PLA和PEG的隨機嵌段共聚物的其它研究工作評估了這些材料的降解行為及其作為藥物輸送微粒的效用。降解速率似乎更加依賴于PEG的含量，并且在部分降解的PLA片段在從本體聚合物中釋放以前，它們有時被附著的PEG溶解。
一方面，所述共聚物包括PEG或PEO的中央嵌段以及位于任意一端的PLA鏈。可以通過由給定長度的PEG片段開始，然后聚合PLA與此同時使用PEG作為聚合反應的抑制劑來制備這些聚合物。PEG嵌段的長度以及PLA100的長度可以影響這些共聚物的吸水性和降解。Kissel的一系列論文研究了這些三嵌段物質的合成、體外降解、藥物輸送、體外生物相容性、體內(nèi)生物相容性以及降解期間PLA-PEO-PLA微粒的微環(huán)境。生物相容性研究顯示PLA-PEO-PLA聚合物顯示了非常相似的并且最小的不良組織反應。對比由PLA100-PEO-PLA100和PLA50-GA50-PEO-PLA50-GA50聚合物制備的微粒體外輸送BSA的藥物輸送研究顯示，含有PLAGA的聚合物具有相當連續(xù)的釋放，而含有PLA的聚合物的釋放具有兩個階段，該兩個階段的釋放是PLAGA微粒更加典型的特征。細胞色素C和FITC-葡聚糖從PLA50-GA50-PEO-PLA50-GA50微粒中的釋放研究也顯示了體外的連續(xù)釋放。
另一方面，所述HI包含來自ε-己內(nèi)酯的單體單元。例如，所述HI可以是ε-己內(nèi)酯與PLA或PGA的共聚物。大量的研究小組已經(jīng)研究了PLA或PGA與ε-己內(nèi)酯的共聚物。在一研究中，研究了一系列的66種不同的DL-丙交酯、乙交酯和ε-己內(nèi)酯的三元共聚物以確定流延薄膜的降解速率和其它性質(Sawhney and Hubbell)。他們發(fā)現(xiàn)2∶1∶7比例的乙交酯、丙交酯和ε-己內(nèi)酯的聚合物具有最長的降解時間，而6∶3∶1比例的聚合物降解最快。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當ε-己內(nèi)酯的含量由5wt％增加至20wt％時，丙交酯和ε-己內(nèi)酯的共聚物的物理性質從堅硬的變到橡膠狀的。含有50％ε-己內(nèi)酯的多孔共聚物被評為用于膝關節(jié)半月板組織再生的植入物。該聚合物顯示了大量降解的行為，并且在降解期間分成了主要含有L-丙交酯的晶相和主要由ε-己內(nèi)酯組成的非晶相。
另一方面，所述共聚物包含來自甘氨酸、對羥基苯甲酸和對羥基肉桂酸或天冬氨酸的單體單元。例如，所述共聚物可以是包含來自甘氨酸、對羥基苯甲酸和對羥基肉桂酸或天冬氨酸的單體單元以及PLA或PGA的共聚物。這些材料是具有不同于單獨的PLA或PGA的降解和釋放性質的生物可降解的材料。
通過簡單地將這些試劑混合于或溶于給藥的透明質酸制劑中，可以將這些二嵌段共聚物(例如聚己內(nèi)酯-co-PEG或PLA-PEG)用于抑制透明質酸的降解?；蛘?，在將透明質酸給藥后將它們給藥。
可以將上述的聚合物和共聚物(例如二嵌段共聚物)用于抑制透明質酸的降解。可以將這些化合物與透明質酸同時或依次輸送。例如，可以通過將聚合物包括在給藥的制劑中而將聚合物與透明質酸同時向患者輸送?；蛘撸虺艘酝?，可以在將透明質酸給藥之后將這些化合物給藥。在某些方面，可以優(yōu)選通過這些化合物的聚合劑型的控制釋放而將靶組織連續(xù)暴露在這些化合物中。
4.藥物賦形劑另一方面，所述HI可以是藥物賦形劑。如本文所使用的那樣，藥物賦形劑指添加劑，其用于將藥物活性化合物轉化為適于對患者給藥的劑型。
賦形劑可以用于改善藥物劑的生物利用度和生物當量。在組方劑型中使用的賦形劑包括但不限于填充劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、包被劑、溶劑、助懸劑和染料?？梢允褂眠@些賦形劑是因為它們具有高生物利用度，因此它們改善藥物的制劑性質而又不會在患者中引起任何不想要的毒性。
適于用作HI的賦形劑的實例包括羧甲基纖維素(CMC)鈉、環(huán)氧丙烷和環(huán)氧乙烷(可以從BASF Corporation，Mount Olive，NJ以商品名PLURONIC和PLURONIC R商購一系列的這些化合物)和聚乙二醇(PEG)的挑選的三嵌段聚合物。
根據(jù)應用和期望的輸送形式，使用多種物理形式的聚乙二醇。固體PEG被用作水溶性軟膏基質。在水性介質中，可以使用PEG來調(diào)節(jié)粘度和稠度。當與其它乳化劑聯(lián)合使用時，PEG可以作為乳化穩(wěn)定劑。液體PEG可以用作軟膠囊內(nèi)容物的水混溶介質。可以通過制造含有合適PEG的固體分散體來提高難溶化合物的水溶解度或分解的性質。高分子量的PEG可以提高片劑黏合劑的效力并且可以使顆粒具有塑性。當用于熱塑顆?；瘯r，將含有10至15％PEG 6000的粉末組分混合物加熱到70至75℃。該物質變?yōu)楹隣?，并且如果在冷卻同時攪拌，其形成顆粒。該技術對于諸如錠劑等需要延長崩解的劑型是有用的。已經(jīng)將PEG在薄膜包衣中用作增塑劑。對于薄膜包衣片劑，可以單獨使用固體等級并且該固體等級可以用作親水的磨光材料。在與成膜聚合物的組合中它們被廣泛用作增塑劑。在膜中存在PEG時，尤其是存在液體等級時，趨于增加其透水性，并且可以降低腸溶衣薄膜中抗低PH的保護。當微囊被壓制成片劑時，在微包被產(chǎn)品中PEG可以被用作增塑劑以避免包衣膜的破裂。PEG 6000及以上的等級可以被用作潤滑劑，特別是在可溶性片劑中。其潤滑作用不如硬脂酸鎂，并且如果在壓制過程中材料變得太熱，那么可能發(fā)生粘著。其還具有抗粘附作用，同樣需要避免過熱。
另一方面，所述藥物賦形劑是山梨糖醇酐酯(SPAN)，例如SPAN20、SPAN 40和SPAN 85(Adolor Corporation，Exton，PA)。
另一方面，所述藥物賦形劑是聚山梨酸酯化合物，例如TWEEN(ICI Americas Inc.，Bridgewater，NJ)，其通常作為水包油型乳化劑并且用于乳劑、乳膏、軟膏和栓劑基質的制備。TWEEN是山梨糖醇酐酯的聚氧乙烯衍生物。聚氧乙烯鏈的存在使得這些衍生物是親水的。當口服時，聚山梨酸酯是耐受良好的并且具有很低的毒性水平，實踐中也不引起局部的刺激。
另一方面，所述藥物賦形劑是被廣泛用作溶劑、提取劑和防腐劑的丙二醇。
可以將例如但不限于丙二醇、羧甲基纖維素、PLURONIC和SPAN等藥物賦形劑用于抑制透明質酸的降解。可以將這些化合物與透明質酸同時或依次輸送。例如，可以通過將聚合物包括在給藥的制劑中而將聚合物與透明質酸同時向患者輸送?；蛘?，或除此以外，可以在將透明質酸給藥之后將這些化合物給藥。在某些方面，可以優(yōu)選通過這些化合物的聚合劑型的控制釋放而將靶組織連續(xù)暴露在這些化合物中。
5.其它透明質酸酶抑制劑其它可以與HA組合以產(chǎn)生HA植入物的示例性化合物包括類黃酮、抗炎劑和表面活性劑，或者它們的任意組合，所述HA植入物抵抗降解并且在多種臨床征候中具有延長的活性。所列的化合物分類并不是相互排斥的-如本領域所知，化合物可以屬于多于一個的分類(例如甘草甜素(glychyrrhizin)既是類黃酮又是抗炎劑)。
一方面，所述HI可以是類黃酮。類黃酮是自然界中普遍存在的多酚化合物，根據(jù)化學結構，多酚化合物可以分為黃酮醇、黃酮、二氫黃酮、異黃酮、兒茶酸、花色素、查耳酮和新黃酮類。已知在諸如水果和蔬菜等高等植物中以及在飲料(例如茶、咖啡、啤酒、葡萄酒、果汁飲料)中發(fā)現(xiàn)了類黃酮。用作本文所述的HI的實例性類黃酮包括縮合單寧(tannin)、單寧(tannic acid)、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素、來自繡球屬的繡球酚、來自調(diào)料小茴香的姜黃色素、甘草甜素、異甘草苷、光甘草定、甘草素、鼠李甘草素(rhamnoliquirtin)、新甘草苷、甘草黃酮醇、甘草異黃酮A和B、甘草異黃酮、芒柄花黃素光甘草酚、光甘草酮(glabrone)、光甘草素、hispglabridin A、hispglabridin B、黃芩素、曲尼司特、水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮)、木犀草素、黃腐醇(xanthohumol)、異黃腐醇(isoxanthohumol)、染料木素、柚皮苷原、chalconaringenin、楊梅黃素、磷酸化橙皮苷、雞豆黃素A、桑色素、根皮素、水飛薊素、4-苯基-香豆素、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮等等。例如參見Matrix Biol.2002，21(1)31-7；BiolReprod.1997，56(6)1383-9；Experientia 1991，47(11-12)1196-200；Biochem Pharmacol.1990；40(2)397-491。
另一方面，所述HI可以是酚化合物。有代表性的酚類化合物包括二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、吲哚-2-羧酸、norlignane、鞣花單寧(ellagitannins)和urolithin B。
另一方面，所述HI可以是抗炎劑，其可以是甾族的或非甾族的。有代表性的抗炎劑包括吲哚美辛(例如參見Matrix Biol.2002；21(1)31-7)、七葉皂苷、曲呫諾、水楊酸鹽(例如參見Matrix Biol.2002；21(1)31-7)、二十碳三烯酸(例如參見J.Enzyme Inhib.Med.Chem.2002；17(3)183-6)、甘草甜素(例如參見Biol.Pharm.Bull.1997；20(9)973-7)；調(diào)節(jié)變態(tài)反應的試劑，例如色甘酸二鈉(DSCG)、曲尼司特、甘草素、異甘草素、黃芩素(例如參見Chem.Pharm.Bull.1992；40(6)1439-42；Toxicon.2003；42635-646)；聚苯乙烯磺酸鈉(N-PSS)(例如參見J.Androl.2000；21(6)862-75)；糖酸(例如參見J.Enzyme Inhib.Med.Chem.2003；18(4)377-382)；硫酸軟骨素A衍生的寡糖(ChSAO)(例如參見Biol.Reprod.2005；72(4)1061)、保泰松、羥基保泰松、γ-亞麻酸、非諾洛芬等等。
另一方面，所述HI可以是吲哚美辛。吲哚美辛是用于處理類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎和痛風的非甾族的、抗炎的、止痛的和退熱的藥劑。另一方面，所述HI可以是表面活性劑，例如十四烷基硫酸鈉(參見J.Reprod.Fertil.1983；68(2)257-63)，或者固體非離子表面活性劑辛基酚乙氧基化物，其商品名是TRITON X-100(Dow Chemical Co.，Midland MI)?？梢詫⑦胚崦佬梁蚑RITON X-100用于抑制體內(nèi)透明質酸的降解。可以將這些化合物與透明質酸同時或依次輸送。例如，可以通過將聚合物包括在給藥的制劑中而將聚合物與透明質酸同時向患者輸送?；蛘撸虺艘酝?，可以在將透明質酸給藥之后將這些化合物給藥。在某些方面，可以優(yōu)選通過這些化合物的聚合劑型的控制釋放而將靶組織連續(xù)暴露在這些化合物中。
可以與HA組合以產(chǎn)生HA植入物的其它示例性化合物包括抗壞血酸，例如維生素C或L-抗壞血酸-6-十六烷酯(J.Biol.Chem.2004，279(44)45990-97)；皂苷(例如參見J.Enzyme Inhib.Med.Chem.2002；17(3)183-6)，例如長春藤皂苷元；半胱胺；紫錐花；迷迭香酸；鹽酸胍；L-精氨酸。
III.制劑可以通過多種方法制備本發(fā)明的組合物。例如，可以將HI直接溶解于或混懸于HA溶液中，所述HI例如是硫代蘋果酸金鹽或巖藻多糖。如果化合物在HA溶液中穩(wěn)定，那么可以在單一應用的裝置中制備含有HA和該化合物的組合物。如果化合物在HA溶液中不能穩(wěn)定顯著長的時間，那么可以將組合物制成雙組分體系，其中在使用前立即混合組分。
硫酸化的多糖(例如硫酸葡聚糖、肝素和巖藻多糖以及它們的類似物或衍生物)通常是水溶性的并且可以作為溶液與透明質酸一起給藥。在某些情況下，在應用透明質酸時可以將這些材料以固體形式給藥。當輸送發(fā)生在存在暴露的手術位點時，以固體形式輸送是實際的?；蛘?，可以通過非水注射介質(載體)的混懸液注射或施用這些化合物?？梢栽谕该髻|酸給藥之前、同時、之后進行注射。
諸如聚乙二醇、丙二醇、SPAN、PLURONIC以及二嵌段共聚物和TRITON X-100等藥物賦形劑通常是水溶性的并且可以作為溶液與透明質酸一起給藥。在某些情況下，在應用透明質酸時可以將這些材料以固體形式給藥，例如在暴露的外科位點時?；蛘?，可以通過非水注射介質(載體)的混懸液注射或施用這些化合物?？梢栽谕该髻|酸給藥之前、同時、之后進行注射。藥物賦形劑、二嵌段共聚物以及TRITON X-100的特殊的優(yōu)點在于它們自身可以成為透明質酸的優(yōu)良的注射介質，從而透明質酸可以在這些試劑中溶解或混懸用于向合適位點的注射應用。例如基于PCL-PEG的二嵌段共聚物在室溫下是蠟狀物質并且微熱可以使其變成易于注射入身體的粘稠液體。
一方面，可以將透明質酸酶抑制劑置于載體中。載體可以作為向期望部位輸送HI組合物的介質并且可以給予該組合物其它的期望性質(例如親水性、生物利用度、粘性等等)。
載體的有代表性的實例包括聚合和非聚合載體(例如脂質體或基于維生素的載體)，它們可以是生物可降解的或非生物可降解的。生物可降解聚合物的有代表性的實例包括白蛋白、明膠、淀粉。纖維素、葡聚糖、多糖、纖維蛋白原、聚酯(例如聚(D，L-丙交酯)、聚(D，L-丙交酯-co-乙交酯)、聚(乙交酯)、聚(ε-己內(nèi)酯)，及其共聚物和混合物)、聚羥基丁酸酯、聚烷基碳酸酯、聚酐和聚原酸酯(總體參見Illum，L.，Davids，S.S.(eds.)“Polymers in controlled Drug Delivery”(控制藥物輸送中的聚合物)Wright，Bristol，1987；Arshady，J.，Controlled Release171-22(1991)；Pitt，Int.J.Pharm 59173-196(1990)；Holland et al.，J.Controlled Release 4155-0180(1986))。非生物可降解聚合物的有代表性的實例包括基于環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷的嵌段共聚物(即環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷聚合物的共聚物)，例如可以從BASF Corporation(MountOlive，NJ)得到的PLURONIC聚合物家族、EVA共聚物、硅橡膠、基于聚甲基丙烯酸酯的和基于聚丙烯酸酯的聚合物。在某些實施方案中，所述聚合物可以是聚(D，L-乳酸)低聚物和聚合物、聚(L-乳酸)低聚物和聚合物、聚羥基乙酸、乳酸和羥基乙酸的共聚物、聚己內(nèi)酯、聚戊內(nèi)酯、聚酐、己內(nèi)酯和/或乳酸的共聚物、和/或乳酸與聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇的共聚物以及它們的混合物。
聚合載體(聚合物)可以是多種形式的，例如包括棒狀設計、丸狀、板狀或膠囊狀(例如參見Goodell et al.，Am.J.Hosp.Pharm.431454-1461(1986)；Langer et al.，“Controlled release ofmacromolecules from polymers”(聚合物中大分子的控制釋放)；inBiomedical polymers，Polymeric materials and pharmaceuticals forbiomedical use(生物醫(yī)學使用的生物醫(yī)學聚合物、聚合材料和藥物)，Goldberg，E.P.，Nakagim，A.(eds.)Academic Press，pp.113-137，1980；Rhine et al.，J.Pharm.Sci 69265-270(1980)；Brown et al.，J.Pharm.Sci.721181-1185(1983)；and Bawa et al，J.Controlled Release 1259-267(1985))。可以通過包藏將這些透明質酸酶抑制劑連在聚合物基質中，這些透明質酸酶抑制劑可以通過共價鍵連接，或者被包被在微囊中。在本發(fā)明的某些實施方案中，在非膠囊制劑中提供含有透明質酸酶抑制劑的組合物，所述非膠囊制劑例如是微球(大小從納米到微米)、糊劑、凝膠、各種大小的絲狀物、膜、網(wǎng)和噴霧劑。在某些實施方案中，所述組合物是適合向患者的期望部位注射的形式。
在某些實施方案中，本發(fā)明的含有透明質酸酶抑制劑的組合物(在某些實施方案中其含有一種或多種透明質酸酶抑制劑化合物以及聚合載體)是適合預期用途的形式。在本發(fā)明的某些方面，所述組合物應該是生物相容的并且在數(shù)天至數(shù)月內(nèi)釋放一種或多種透明質酸酶抑制劑化合物。例如，本發(fā)明的一方面，提供“快速釋放”或“爆發(fā)釋放”含有透明質酸酶抑制劑的組合物，在7至10天內(nèi)釋放高于10％、20％或25％的透明質酸酶抑制劑化合物。在某些實施方案中，這樣的“快速釋放”組合物應該能夠釋放期望的透明質酸酶抑制劑化合物的透明質酸酶抑制水平。在其它實施方案中，提供“緩慢釋放”含有透明質酸酶抑制劑的組合物，在7至10天內(nèi)釋放少于5％(w/v)的透明質酸酶抑制劑化合物。此外，本發(fā)明的含有透明質酸酶抑制劑的組合物優(yōu)選應當在數(shù)月內(nèi)是穩(wěn)定的并且能夠在無菌條件下生產(chǎn)并保持。
在本公開的某些方面，根據(jù)特定的用途，含有透明質酸酶抑制劑的組合物的大小可以是在約0.050nm至約500μm之間的任何尺寸。例如，當用于美容組織增大的目的時(如下文討論)，通常優(yōu)選將含有透明質酸酶抑制劑的組合物制成平均直徑約0.1至約100μm的微球或微粒，直徑優(yōu)選約0.5至約50μm，并且最優(yōu)選約1至約25μm。或者，可以將這樣的組合物以溶液施用，其中透明質酸酶抑制劑化合物被溶解在微團中。微團的組成可以是聚合性質的。例如聚合微團可以包括MePEG和聚(D，L-丙交酯)的共聚物?；蛘撸梢詫⑦@樣的組合物以溶液施用，其中HI被包被在脂質體中(參見上文)。在某些其它方面，所述HI未被包被(例如被包含)在脂質體中。或者，可以將這樣的組合物以溶液施用，其中透明質酸酶抑制劑化合物被包被(例如被包含)在乳劑或微乳劑的油相中。
一方面，HA可以與第二載體組合，該第二載體可以是聚合物或非聚合物，其包含一種或多種HI。所述第二載體可以是多種形式的并且提供HI從組合物中的緩釋或控制釋放。
一方面，所述第二載體是微粒形式的。本文使用的“微粒”指一個或多個具有規(guī)則或不規(guī)則形狀的不連續(xù)固體顆粒。通常微粒的直徑(即跨越微粒的最遠點的距離)不超過500μm。納米顆粒的直徑通常小于約500nm。
可以由多種生物可吸收或非生物可吸收的聚合物制造微粒。本文使用的“生物可吸收的”指組合物或材料在向人或動物給藥后能夠從機體中清除?？梢酝ㄟ^一種或多種方法實現(xiàn)生物吸收，例如通過諸如腎臟、腸道、肺或皮膚等途徑的組分、其分解產(chǎn)物、或其代謝產(chǎn)物的溶解、氧化降解、水解降解、酶降解、新陳代謝、清除。生物吸收的降解機理被統(tǒng)稱為“生物降解”。
另一方面，所述微?？梢允俏⑶虻男问?。本文使用的“微球”指基本上是球形的微粒。微?？梢允乔蛐蔚摹E圓形的或具有近似球形或橢圓形的形狀，并且可以是平滑的或具有諸如裂縫或坑等破裂。通常微球的平均直徑為約500nm至約500μm。在某些實施方案中，所述微球的優(yōu)選平均直徑為至少約200nm或500nm、1μm、5μm、10μm、20μm、50μm或100μm、150μm、250μm、500μm、1000μm、2500μm或5000μm，根據(jù)期望藥物的釋放性質和應用來確定最佳尺寸。在某些實施方案中，所述微球的優(yōu)選平均直徑為不超過約200nm或500nm、1μm、5μm、10μm、20μm、50μm或100μm、150μm、250μm、500μm、1000μm、2500μm或5000μm，根據(jù)期望藥物的釋放性質和應用來確定最佳尺寸。
在某些實施方案中，由一種或多種類型的合成聚合物形成微粒。該合成聚合物可以是聚酯，其包括選自下列的一種或多種單體的殘基丙交酯、乳酸、乙交酯、羥基乙酸、ε-己內(nèi)酯、γ-己內(nèi)酯、羥基戊酸、羥基丁酸、β-丁內(nèi)酯、γ-丁內(nèi)酯、γ-戊內(nèi)酯、γ-癸內(nèi)酯、δ-癸內(nèi)酯、亞丙基碳酸酯、1，4-二噁烷-2-酮和1，5-dioxepan-2-one。聚酯還可以包括具有化學式[-OC6H4COOH]的殘基。聚酯可以包括聚(L-丙交酯)(PLLA)、或聚(DL-丙交酯)(PDLLA)、或聚(乙交酯)、或聚(DL-丙交酯-co-乙交酯)(PLGA)、聚(ε-己內(nèi)酯)、聚(δ-癸內(nèi)酯)、聚(δ-戊內(nèi)酯)、或聚(乳酸)(PLA)。在其它方面，所述聚合物可以包括聚醚，例如包含聚乙二醇(PEG)或其共聚物(例如PLA-block-PEG、或PLGA-block-PEG、或聚環(huán)氧丙烷-block-PEG)殘基的聚醚。其它方面，所述聚合物可以包括生物衍生的聚合物，例如多糖(例如殼聚糖、纖維素、藻酸鹽或者它們的衍生物)。
可以由可降解的合成聚合物制造微粒。可降解的聚合物可以包括聚酯，其中該聚酯可以包含選自下列的一種或多種單體的殘基丙交酯、乳酸、乙交酯、羥基乙酸、ε-己內(nèi)酯、γ-己內(nèi)酯、羥基戊酸、羥基丁酸、β-丁內(nèi)酯、γ-丁內(nèi)酯、γ-戊內(nèi)酯、γ-癸內(nèi)酯、δ-癸內(nèi)酯、亞丙基碳酸酯、1，4-二噁烷-2-酮或1，5-dioxepan-2-one，以及X-Y、Y-X-Y、R-(Y-X)n、R-(X-Y)n和X-Y-X形式的嵌段共聚物(其中X是聚環(huán)氧烷(例如聚乙二醇、聚丙二醇，以及聚環(huán)氧乙烷和聚環(huán)氧丙烷的嵌段共聚物(例如PLURONIC和PLURONIC R系列的聚合物)，并且Y是生物可降解的聚酯，其中所述聚酯可以包含選自下列的一種或多種單體的殘基丙交酯、乳酸、乙交酯、羥基乙酸、ε-己內(nèi)酯、γ-己內(nèi)酯、羥基戊酸、羥基丁酸、β-丁內(nèi)酯、γ-丁內(nèi)酯、γ-戊內(nèi)酯、γ-癸內(nèi)酯、δ-癸內(nèi)酯、亞丙基碳酸酯、1，4-二噁烷-2-酮或1，5-dioxepan-2-one(例如PLG-PEG-PLG)并且R是多功能引發(fā)劑)。
在其它方面，用于制備微粒的聚合物可以是非生物可降解的，例如聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯或聚二乙烯基苯。
根據(jù)用于制備微粒的HI的類型和聚合物的類型，微粒中HI的濃度范圍可以從約0.0001％至高于90％(藥物的重量/微粒的重量)。另一方面，微粒中HI的濃度可以是約0.0001％至0.00l％、0.001％至0.01％、或0.01％至0.1％、或0.1％至0.1％、或1％至10％、或10％至25％、或25％至50％、或50％至75％、或75％至85％、或高于90％(藥物的重量/微粒的重量)。
根據(jù)組合物和特定的用途，本發(fā)明范圍內(nèi)的微?？梢跃哂袕V泛的釋放特性?？梢灾苽湮⒘Ｒ蕴峁┏掷m(xù)數(shù)小時(例如1小時、2小時、4小時、8小時、12小時或24小時)至數(shù)天(例如1天、2天、3天、7天或14天)至數(shù)月(1個月、2個月、3個月、6個月或12個月)至數(shù)年(例如高達1年、2年、3年)的HI的緩釋。
可以使用初始速率、50％、90％或100％藥物釋放的時間或者通過合適的動力學模型，例如零級、一級、擴散控制(例如時間的平方根、Higuchi模型)動力學，或者通過釋放速率的不同階段的數(shù)目(例如單階段、二階段、三階段)來表征釋放譜。可以使用其爆發(fā)(初始)階段的程度來表征釋放譜。該爆發(fā)階段可能導致少量或大量的藥物釋放，因此可以將微粒定義為“低”或“高”爆發(fā)體系。例如，低爆發(fā)體系在釋放初始階段可以釋放低至負載總量的約30、20、10甚至5或1％。高爆發(fā)體系在爆發(fā)階段可以釋放藥物總量的至少約50、60、70甚至100％。爆發(fā)階段的持續(xù)時間依賴于釋放譜的總計劃持續(xù)時間。對于計劃在數(shù)小時內(nèi)釋放全部負載藥物的微粒，爆發(fā)階段可能發(fā)生數(shù)分鐘(例如1至30分鐘)。對于計劃在數(shù)天內(nèi)釋放的微粒，爆發(fā)階段可以是數(shù)小時(例如1至24小時)。對于計劃在數(shù)周內(nèi)釋放的微粒，爆發(fā)階段可以是從數(shù)小時至數(shù)天(例如12小時至7天)。描述微粒釋放特征的示例性釋放譜可以是低爆發(fā)微球，在第一個24小時內(nèi)釋放少于10％，隨后是近似的零級釋放階段并且在5天后速率逐漸降低，直至全部藥物釋放完畢。
本領域已知多種制備微粒的方法。通常使用的、可能被調(diào)整以適于向微粒中引入HI的方法包括(a)相分離，隨后在分散體系中蒸發(fā)溶劑，所述分散體系例如是o/o、w/o、o/w或w/o/w(o＝油，w＝水)，(b)使用超臨界流體，(c)凝聚，(d)熔體分散，(e)噴霧干燥，(f)噴灑凍凝，或(g)混懸涂敷。美國專利第4,652,441、5,100,669、4,438,253和5,665,428號中公開了制備微粒的方法的有代表性的實例。
在某些實施方案中，可以使用凍干法制備所述微粒，其包括將含有液體微粒的組合物凍干以便產(chǎn)生凍干的粉末。該粉末可以直接與透明質酸混合?；蛘?，在與透明質酸混合之前可以使用水或其它水介質重新溶解凍干的粉末。
還可以將本發(fā)明的含有透明質酸酶抑制劑的組合物制備為多種“糊狀”或凝膠的形式。例如，在本發(fā)明的一實施方案中，提供了HI組合物，該組合物在某一溫度下(例如溫度高于37℃，例如40℃、45℃、50℃、55℃或60℃)是液體，并且在另一溫度下是固體或半固體(例如外周體溫或任何低于37℃的溫度)。
在下文的實施例中將詳細描述向聚合載體中引入透明質酸酶抑制劑化合物的方法。
本發(fā)明的組合物除了含有透明質酸和透明質酸酶抑制劑化合物以外，還可以包含生物活性的疏水化合物。一方面，所述組合物包含透明質酸、透明質酸酶抑制劑化合物、載體(聚合物或非聚合物)以及生物活性的疏水化合物。在本發(fā)明的其它方面，提供適合包含并釋放疏水化合物的載體。在某些實施方案中，所述載體是聚合物?？梢詫⒑惺杷衔锏乃鲚d體任意地與碳水化合物、蛋白質或多肽組合。在某些實施方案中，所述載體含有或包含含有一種或多種疏水化合物的區(qū)域、袋或顆粒。例如，在本發(fā)明的一實施方案中，可以將疏水化合物引入含有疏水化合物的基質中，然后將該基質引入聚合載體中。關于這點，可以使用多種基質，例如包括碳水化合物和多糖，例如淀粉、纖維素、葡聚糖、甲基纖維素以及透明質酸，還包括蛋白質或多肽，例如白蛋白、透明質酸和明膠。在其它實施方案中，可以在疏水核中包含疏水化合物，并且該疏水核位于親水殼中。例如，如下文實施例所述，可以將吲哚美辛引入具有親水殼的疏水核中(例如聚(D，L-乳酸-PEG或MePEG聚集體)。
在本發(fā)明的某些方面，含有透明質酸酶抑制劑的組合物可以是以下形式透明質酸酶抑制劑化合物與特定應用中所使用的透明質酸共價連接。該透明質酸酶抑制劑化合物可以與透明質酸直接相連或者通過連接分子(例如聚乙二醇)與透明質酸相連。一旦該結合物被引入或施用到期望位點，那么所述透明質酸酶抑制劑化合物可以抑制透明質酸酶，與此同時仍與透明質酸相連。
透明質酸酶抑制劑可以以一定量存在于組合物中，該量可以有效抑制由透明質酸酶引起的透明質酸的降解。所述組合物中HI的量取決于HI的類型和潛能以及HA植入物的位置、期望的劑量以及多種其它因素。例如，在其它實施方案中，存在于組合物(例如流體或半固體形式的組合物)中的HI的濃度可以是約0.1mg/ml或更少、或約0.1mg/ml至0.25mg/ml、或約0.25mg/ml至0.5mg/ml、或約0.5mg/ml至1mg/ml、或約1mg/ml至5mg/ml、或約5mg/ml至10mg/ml、或約10mg/ml至25mg/ml、或約25mg/ml至100mg/ml、或約100mg/ml至250mg/ml、或約250mg/ml至350mg/ml、或約350mg/ml至500mg/ml。
對于某些HI(例如具有確定MW的化合物)，存在于組合物中的HI的量可以以摩爾濃度來表達。例如，在某些實施方案中，存在于組合物中的HI的濃度可以是約1mM或更少(例如約1μm至10μm、或約10μm至100μmm、或約100μm至1mM)、或約1mM至2.5mM、或約2.5mM至5mM、或約5mM至10mM、或約10mM至約25mM、或約25mM至50mM、或約50mM至100mM、或約100mM至250mM、或約250mM至約350mM。在其它實施方案中，存在于組合物中的HI的濃度可以低于約50％(重量比)、或低于約25％、或低于約10％，、或低于約5％、或低于約2％、或低于約1％、或低于約0.5％、或低于約0.25％、或低于約0.1％.、或低于約0.01％、或低于約0.001％、或低于約0.0001％。
對于某些類型的HA組合物(例如膜或網(wǎng)形式的材料)，HI的濃度可以以面積來表述。例如，在某些實施方案中，所述組合物可以包括約0.0001mg至約0.001mg每平方英寸材料、或0.001mg至約0.01mg每平方英寸材料、0.01mg至約0.1mg每平方英寸材料、或約0.1mg至約1mg每平方英寸材料、或約1mg至約5mg每平方英寸材料、或約5mg至約10mg每平方英寸材料、或約10mg至約20mg每平方英寸材料、或約20mg至約50mg每平方英寸材料、或約50mg至約100mg每平方英寸材料、或約100mg至約250mg每平方英寸材料。
在某些實施方案中，由HA植入物輸送的HI的總劑量可以低于0.1mg、或約0.1mg至0.5mg、或約0.5mg至1mg、或約1mg至5mg、或約5mg至10mg、或約10mg至20mg、或約20mg至100mg、或約100mg至200mg、或約200mg至350mg、或約350mg至500mg?？梢砸悦繂挝惑w積水性體液輸送的HI的量來表達總劑量。例如，在某些實施方案中，由HA植入物輸送的HI的總劑量可以是約0.01mg/ml至0.1mg/ml、或約0.1mg/ml至1mg/ml、或約1mg/ml至10mg/ml、或約10mg/ml至25mg/ml、或約25mg/ml至約100mg/ml水性體液中。
在本發(fā)明的某些實施方案中，還可以進一步修飾本文提供的組合物以便加強其效用。例如，在一實施方案中，可以向本文所述的組合物中加入輔助凝固的化合物或因子(例如凝血酶)。HA-HI組合物還可以包含神經(jīng)毒素和/或麻醉劑，所述神經(jīng)毒素例如是可以從Allergan，Inc.(Irvine，CA)商購的商品名為BOTOX的肉毒桿菌毒素，所述麻醉劑例如是利多卡因、苯佐卡因或丙胺卡因。所述麻醉劑還可以包含聚合載體，如上文所述，其可以用于輔助將麻醉劑組方入HA-HI組合物中和/或調(diào)節(jié)麻醉劑從HA-HI組合物中的釋放。可以向本發(fā)明的組合物中加入治療劑以提供額外的治療益處，所述治療劑例如是抗生素、抗感染劑(例如5-氟尿嘧啶)、抗炎劑(例如甾族的或非甾族的)、止痛劑、抗瘢痕形成(抗纖維化)劑、瘢痕形成(纖維化)劑。
此外，所述組合物還可以包括添加劑。添加劑的有代表性的實例包括溶劑、抗氧化劑(例如亞硫酸鹽和抗壞血酸)、黏合劑、孔成型劑、防腐劑(例如對羥基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯甲醇、苯乙醇、脫氫乙酸、山梨酸等)、制菌劑(例如三溴酚鉍、羥基苯甲酸甲酯、桿菌肽、羥基苯甲酸乙酯、羥基苯甲酸丙酯、紅霉素、氯甲酚、苯扎氯銨等等)以及殺菌劑(bactericidal)(也被稱為滅菌劑(bacteriacidal))?？梢约尤肴玖匣蚱渌珓┮栽鰪娝鼋M合物的可視性。所述染料或著色劑可以是永久的或暫時的(例如亞甲基藍)。染料的有代表性的實例包括那些適于食品的染料，例如被稱為F.D.和C.染料的那些染料，以及天然著色劑，例如葡萄皮提取物、甜菜紅粉末、β-胡蘿卜素、胭脂樹紅、卡紅、萎黃、辣椒粉等等。臨床使用的改善本發(fā)明組合物可視性的試劑的其它實例包括無線電不透明或X射線不透明材料，例如鉭，以及MRI對比劑。
本文所述的任何組合物均可以以無菌形式提供。在該實施方案中，可以通過工業(yè)可接受的或列于USP XXII<1211>中的多種方法實現(xiàn)滅菌，所述方法包括但不限于高壓滅菌、干熱、氣體滅菌以及過濾。優(yōu)選通過不分解HA或HI的方法完成滅菌。通常，使用非輻射的方法來實現(xiàn)滅菌，因為暴露于γ輻射中HA易于分解。還可以通過USP XXII<1211>定義的無菌操作來保持無菌。用于氣體滅菌的可接受的氣體包括環(huán)氧乙烷?？梢允褂镁哂泻线m孔徑和合適材料的濾器來實現(xiàn)過濾，所述孔徑例如0.22μm，所述材料例如是TEFLON。此外，還可以通過組合使用這些滅菌方法以及任選的無菌操作來實現(xiàn)無菌組合物。在包含直徑大于200nm的微粒的本發(fā)明的某些方面，使用非過濾的滅菌方法，因為所述顆粒不能穿過0.22μm的濾器。因為使用單一方法并不能實現(xiàn)將本發(fā)明的某些實施方案的全部組分進行滅菌，所以可以通過分步將本發(fā)明的組分進行滅菌并將滅菌的組分混合為組合物來實現(xiàn)滅菌。
IV.臨床應用1.負載HI的透明質酸整形外科植入物已經(jīng)開發(fā)出了多種用于整形手術的透明質酸植入物，該植入物作為組織填充劑并用作愈合和修復使用的支架。透明質酸是結締組織和軟骨的重要有機組分，其可以與礦物制劑、自體骨髓、骨移植物和/或生長因子(例如成纖維細胞生長因子(FGF)或骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs))組合用作組織替代物或骨修復產(chǎn)品。代表性應用包括但不限于全關節(jié)置換手術(例如人工髖、膝等)，脊柱融合手術，長骨骨折，外傷性骨缺損、空隙或缺口的修復、增大自體移植物以及在骨移植物獲取部位作為骨填充劑。例如，OSSIGEL是用于加速骨折愈合的透明質酸(HA)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的粘性制劑(Orquest，Inc.)。
美國專利第6,764,517、6,514,514、6,730,129和6,652,887號描述了用于整形外科操作的透明質酸組合物的有代表性的實例。
在本發(fā)明中，將透明質酸酶抑制劑單獨加入含有透明質酸的植入物或組合物中，或者將緩釋形式的透明質酸酶抑制加入含有透明質酸的植入物或組合物中以降低HA降解的速率并延長組合物/植入物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時的活性(例如在超過75％的患者中一致超過2周并且在超過25％的患者中超過2個月)。一方面，可以在期望的位置輸送組合物，例如在骨折的位點或骨的空隙處，以便增大骨或替代缺失的骨。可以根據(jù)需要使輸送的HI的總劑量、劑量釋放速率以及藥物從HA的釋放持續(xù)時間適合顯著延長透明質酸植入物的活性。如上所述，在某些實施方案中，可以將HI-HA組合物進一步與礦物制劑、自體骨髓、骨移植物和/或生長因子(例如成纖維細胞生長因子(FGF)、轉化生長因子(TGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)或骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs))組合用作組織替代物或骨修復產(chǎn)品。下列組合物完美地適合用于該征候。
HI可以與聚合物體系組合以提供試劑的緩釋。適于在整形外科應用中輸送與HA組合的HI劑的物質可以是由非可降解的或可降解的物質組成的。合適的可降解的物質包括但不限于由β-磷酸三鈣組成的可吸收的陶瓷(例如由Orthovita，Inc.制造的VITOSS、由E-Interpore-Cross International制造的PROOSTEON 500R)、羥磷灰石或Ca10(PO4)6OH(例如由Geistlich Biomaterials Inc.制造的BIOOSS、由Ceremed Denta Inc.制造的OSTEOGRAF)、碳酸鈣或CaCO3、硫酸鈣(例如由Wright Medical制造的OSTEOSET和ALLOMATRIX)、磷酸鈣(例如由Merck，NORIAN SRS制造的CALCIBON)、PEG交聯(lián)物質、明膠、膠原、GELFOAM、脫鈣骨基質、骨同種異體移植物(例如ALLOGRO、ORTHOBLAST、OPTEFORM、GRAFTON)、多糖、碳水化合物、蛋白質(例如白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、植物蛋白、魚蛋白等)、自體骨、脫鈣骨基質、藻酸鹽、淀粉、纖維素衍生物(HPC等)、纖維素、纖維素酯、纖維素酯的混合物或共聚物、殼聚糖、殼聚糖衍生物、聚酯-聚烯基氧化物的嵌段共聚物(例如PLGA-PEG-PLGA、MePEG-PLGA等)、可降解的聚酯、聚酐、聚正酯、聚磷酸酯、聚膦嗪以及氰基丙烯酸酯聚合物。在本發(fā)明的實踐中特別有用的可降解的聚合物包括含有PEG的可注射的制劑，例如COSEAL(AngiotechBiomaterials Corp.，Palo Alto，CA)、FOCALSEAL、SPRAYGEL、DURASEAL、或例如美國專利第5,874,500、6,051,648、6,166,130和6,312,725號中描述的包含4-臂巰基PEG(10K)、4-臂NHS PEG(10K)和甲基化膠原的組合物、含有纖維蛋白原的制劑，例如FLOSEAL或TISSEAL，REPEL或FLOWGEL，以及其它可以分泌的低分子量聚合物。
輸送用于整形外科應用的與HA組合的HI的合適可降解物質包括包含混合時形成聚甲基丙烯酸甲脂(PMMA)的PVA、PVP、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸甲酯苯乙烯(MMA-苯乙烯)的交聯(lián)組合物，或者骨水泥(例如由Stryker Howmedica制造的SIMPLEX P、由Zimmer制造的ZIMMER REGULAR和ZIMMER LOWVISCOSITY CEMENT、由Smith和Nephew制造的PALACOS、由Wright Medical制造的CMW-1和CMW-2、由DePuy制造的DEPUYENDURANCE)、合成網(wǎng)狀骨質空隙填充劑(例如CORTOSS，Orthovita)、pHEMA、聚(乙烯基PEG)、聚苯乙烯磺酸酯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸以及文獻中已知形成水凝膠的其它聚合物。其它的組合物包括上述試劑的混合物或共聚物。磷酸鈣，例如堿性磷酸鈣和羥磷灰石，可以與透明質酸酶抑制劑組合使用。
在上述實施方案的實踐中，本領域技術人員明顯可以理解潛在地，任何透明質酸酶抑制劑均可以單獨使用或組合使用。在整形外科操作中用于與HA組合的HI劑的實例包括硫酸化的多糖；藥物賦形劑；二嵌段共聚物和吲哚美辛或金化合物；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素、來自繡球花屬的繡球酚、來自調(diào)料小茴香的姜黃色素、甘草甜素、異甘草苷、光甘草定、甘草素、鼠李甘草苷、新甘草苷、甘草黃酮醇、甘草異黃酮A和B、甘草異黃酮、芒柄花黃素光甘草酚、光甘草酮、光甘草素、hispglabridin A、hispglabridin B、黃芩素、曲尼司特、水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮)、木犀草素、黃腐醇、異黃腐醇、染料木黃酮、4，5，7-三羥黃烷酮、chalconaringenin、楊梅黃素、磷酸化橙皮苷、雞豆黃素A、桑色素、根皮素、水飛薊素、4-苯基-香豆素、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮；抗炎劑，例如吲哚美辛、七葉皂苷、曲呫諾、水楊酸鹽、二十碳三烯酸、甘草甜素；調(diào)節(jié)變應性變態(tài)反應的試劑，例如色甘酸二鈉(DSCG)、曲尼司特、甘草素、異甘草素、黃芩素、聚苯乙烯磺酸鈉(N-PSS)、葡糖二酸、硫酸軟骨素A衍生的寡糖(ChSAO)、保泰松、羥基保泰松、γ-亞麻酸、非諾洛芬；酚類化合物，例如二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、吲哚-2-羧酸、norlignane、鞣花單寧和urolithin B；維生素C、L-抗壞血酸-6-十六烷酯；皂角苷，例如長春藤皂苷元；半胱胺；紫錐花；迷迭香酸；鹽酸胍；L-精氨酸；表面活性劑，例如十四烷基硫酸鈉或者辛基酚乙氧基化物。例如，與整形外科植入物的有效移植相關的許多問題涉及不希望的炎性反應。因此，由于吲哚美辛和金化合物均具有抗炎特性，所以在這些應用中這些化合物可以服務于兩種目的。
所有這些化合物均可以單獨使用或與骨形態(tài)發(fā)生蛋白和/或成骨生長因子(例如轉化生長因子、血小板衍生生長因子、成纖維細胞生長因子)以及上述提及的類似物和衍生物組合使用。骨形態(tài)發(fā)生蛋白的實例例如包括BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6(Vgr-1)、BMP-7(OP-1)、BMP-8、BMP-9、BMP-10、BMP-11、BMP-12、BMP-13、BMP-14、BMP-15和BMP-16。其中，BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6和BMP-7特別有用。例如美國專利第4,877,864、5,013,649、5,661,007、5,688,678、6,177,406、6,432,919和6,534,268號中以及Wozney，J.M.，etal.(1988)Science242(4885)；1528-1534中描述了骨形態(tài)發(fā)生蛋白。
這些化合物的合適的劑量可以是例如提供每一劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些濃度是近似的并且可以根據(jù)化合物的效能和效果需要持續(xù)的時間進行調(diào)整硫代蘋果酸金鹽10mM以及其它金化合物，吲哚美辛1mg/ml，肝素1mg/ml，硫酸化的多糖2mg/ml以及丙二醇、TRITON X-100、PEG SPAN、PLURONICL101以及羧甲基纖維素均為10mg/ml。為了獲得該濃度，在可能暴露于若干毫升水性體液的體積中可能需要每毫升必須劑量的約10倍的劑量(例如10mg吲哚美辛、20mg硫酸化的多糖、100mg丙二醇、TRITON X-100、PEG SPAN、PLURONIC或羧甲基纖維素)。因此，例如如果注射1ml HA溶液，其中該注射流體可能暴露于約2ml經(jīng)過此區(qū)域的間質液，那么推薦注射100mg的每一抑制劑以便在之后的一段時間內(nèi)確保達到每毫升10mg的劑量。所需劑量主要取決于注射體積和應用的位點以及效果需要持續(xù)的時間。在較高流體周轉的位點，可以給予更多的透明質酸酶抑制劑。此外，如果使用控制方法，從聚合劑型中釋放抑制劑，那么根據(jù)抑制劑的釋放譜、應用的位點、該區(qū)域體液的周轉以及諸如年齡和綜合健康等其它參數(shù)，本領域技術人員可以計算應用總劑量。
2.負載HI的透明質酸脊柱外科植入物背痛在美國是造成健康護理支出的第一大原因并且每年花費500億美元(全世界1000億美元)。在美國有超過1200萬人患有某種形式的椎間盤退變性疾病(DDD)并且他們中有10％(120萬)需要手術以矯正他們的問題。
在健康個體中，脊柱是由被椎間盤分離的脊柱骨板組成的，椎間盤形成堅固的關節(jié)并在運動期間吸收脊柱壓縮。椎間盤由被稱為髓核的內(nèi)部膠體樣物質組成，所述髓核由被稱為纖維化環(huán)的堅硬的纖維軟骨包圍。髓核是由包埋在葡糖胺聚糖和水的膠狀基質中的膠原纖維和結締組織細胞(類似成纖維細胞和軟骨細胞)組成的。纖維化環(huán)由大量錨定在椎骨體中的纖維軟骨的同心環(huán)組成。當纖維化環(huán)中的撕裂形成局部薄弱的區(qū)域時，會出現(xiàn)最為常見的DDD的誘因，所述局部薄弱區(qū)域使髓核和纖維化環(huán)的膨出、疝出或隔離進入脊椎管和/或脊柱孔。膨出的或疝出的椎間盤經(jīng)常擠壓神經(jīng)組織，例如脊髓纖維或脊髓神經(jīng)根纖維。損傷的椎間盤對脊髓或神經(jīng)根的壓力導致神經(jīng)元功能障礙(麻木、弱化、麻刺感)、跛痛、腸或膀胱紊亂并且經(jīng)常能夠造成長期殘疾。雖然許多DDD的誘因會自然解決，但是仍有大量的患者需要外科介入，該外科介入的形式為最低限度地侵入操作、顯微椎間盤切除、椎間盤的大手術切除、脊柱融合(使用多種技術和裝置進行的相鄰脊錐骨板的融合)和/或人工椎間盤植入。
釋放脊神經(jīng)上壓力的開放性手術通常涉及切除破裂的腰推間盤(以及部分圍繞脊神經(jīng)根的骨-也被稱為椎板切除術)。在全身麻醉下將患者置于改變的跪位。在背部中線處切口并將組織切開以便暴露合適的間隙；切開黃韌帶并且在某些情況下，除去部分骨薄板以便獲得足夠的視野。小心地拉出神經(jīng)根以暴露環(huán)中的疝出的碎片和缺損。通常，由環(huán)的撕裂處進入椎間盤腔并且使用垂體鑷將髓核的松散碎片除去。也小心地除去隔離在椎間盤空間中或椎間盤空間外的任何其它椎間盤碎片并且徹底清洗椎間盤空間以除去任何殘留的碎片。如果硬腦脊膜出現(xiàn)撕裂，那么使用縫線來縫合硬腦脊膜，經(jīng)常使用纖維蛋白膠來加強該縫線。然后使用吸收性縫線來縫合組織。
顯微腰椎間盤切除(顯微椎間盤切除術)可以作為門診患者操作進行并且其作為疝出椎間盤介入的選擇在很大程度上代替了椎板切除術。從受影響的椎間盤上面的棘突至該受影響的椎間盤下面的棘突之間切開1英寸的切口。使用手術顯微鏡，將組織切開至黃韌帶并且從薄板中除去骨直至可以清晰地識別神經(jīng)根。小心地拉回神經(jīng)根并使環(huán)中的裂縫在放大倍率下可視。使用顯微椎間盤鑷子除去環(huán)裂縫中的椎間盤碎片并除去任何隔離的椎間盤碎片。與使用椎板切除術一樣，清洗椎間盤空間以除去任何椎間盤碎片，修復任何硬腦脊膜裂縫并使用吸收性縫線縫合組織。應該注意到，還可以使用前側的(腹部的)方法來進行開放的和內(nèi)窺鏡的腰椎間盤切除。頸和胸椎間盤切除與腰部的操作類似并且也可以使用背側的方法(使用椎板切除術)或者使用具有融合切口的前側椎間盤切除術。
不幸的是，在大量患者中，圍繞神經(jīng)根的組織中的術后瘢痕化對神經(jīng)施加了壓力，造成刺激，并導致疼痛復發(fā)和其它神經(jīng)學癥狀。為了降低該并發(fā)癥的發(fā)生率，許多外科醫(yī)生使用由透明質酸組成的植入物滲入神經(jīng)周圍的區(qū)域。HA防止周圍的組織與神經(jīng)接觸并且防止瘢痕組織形成并且最終壓迫脊神經(jīng)。然而，HA在數(shù)天的時間內(nèi)被機體迅速吸收-經(jīng)常是在愈合完成之前并且允許瘢痕組織在神經(jīng)周圍形成。
在本發(fā)明中，將透明質酸酶抑制劑單獨加入含有透明質酸的植入物或組合物中，或者將緩釋形式的透明質酸酶抑制劑加入含有透明質酸的植入物或組合物中以降低HA降解的速率并且延長組合物/植入物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時(例如在超過75％的患者中一致超過2周并且在超過25％的患者中超過2個月)?？梢愿鶕?jù)需要使輸送的HI的總劑量、劑量釋放速率以及藥物從HA的釋放持續(xù)時間適合顯著延長透明質酸植入物的活性。這將使該屏障在體內(nèi)更長時間地發(fā)揮功能并降低在神經(jīng)根附近形成瘢痕組織的可能性。HI-HA植入物可以降低脊柱手術失敗的發(fā)生率，避免疼痛復發(fā)和其它神經(jīng)學癥狀，并減少重復外科介入以除去瘢痕組織的需要。
適于與HI組合在脊柱手術中使用的商品化的HA產(chǎn)品的實例包括RESTYLANE、HYLAFORM、PERLANE、SYNVISC、SEPRAFILM、SEPRACOAT、INTERGEL和LUBRICOAT。
美國專利第6,719,797、5,258,043和4,904,260號中描述了在脊柱手術操作中使用的透明質酸組合物的有代表性的實例。
HI還可以與聚合物體系組合以提供試劑的緩釋。用于本發(fā)明目的的適于輸送HI劑的物質可以由非可降解的或可降解的物質組成；然而，優(yōu)選可降解的物質。合適的可降解的物質包括但不限于PEG交聯(lián)物質，明膠，膠原，GELFOAM，骨同種異體移植物(例如ALLOGRO、ORTHOBLAST、OPTEFORM、GRAFTON)，多糖，碳水化合物，蛋白質(例如白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、植物蛋白、魚蛋白等)，自體骨，脫鈣骨基質，藻酸鹽，淀粉，纖維素衍生物(HPC等)，纖維素，纖維素酯，纖維素酯的混合物或共聚物，殼聚糖，殼聚糖衍生物，聚酯-聚烯基氧化物的嵌段共聚物(例如PLGA-PEG-PLGA、MePEG-PLGA等)，可降解的聚酯，聚酐，聚正酯，聚磷酸酯，聚膦嗪，氰基丙烯酸酯聚合物，含有PEG的可注射的制劑，例如COSEAL、FOCALSEAL、SPRAYGEL、DURASEAL，或美國專利第5,874,500、6,051,648、6,166,130和6,312,725號中描述的包含4-臂巰基PEG(10K)、4-臂NHS PEG(10K)和甲基化膠原的組合物，含有纖維蛋白原的制劑，例如FLOSEAL或TISSEAL，REPEL或FLOWGEL，以及其它可以分泌的低分子量聚合物。
在上述實施方案的實踐中，本領域技術人員明顯可以理解潛在地，任何透明質酸酶抑制劑均可以單獨使用或組合使用。在脊柱手術操作中用于與HA組合的HI劑的實例包括肝素、硫代蘋果酸金鹽、硫酸葡聚糖、巖藻多糖、丙二醇；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素、來自繡球花屬的繡球酚、來自調(diào)料小茴香的姜黃色素、甘草甜素、異甘草苷、光甘草定、甘草素、鼠李甘草苷、新甘草苷、甘草黃酮醇、甘草異黃酮A和B、甘草異黃酮、芒柄花黃素光甘草酚、光甘草酮、光甘草素、hispglabridin A、hispglabridin B、黃芩素、曲尼司特、水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、木犀草素、黃腐醇、異黃腐醇、染料木黃酮、4，5，7-三羥黃烷酮、chalconaringenin、楊梅黃素、磷酸化橙皮苷、雞豆黃素A、桑色素、根皮素、水飛薊素、4-苯基-香豆素、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮；抗炎劑，例如吲哚美辛、七葉皂苷、曲呫諾、水楊酸鹽、二十碳三烯酸、甘草甜素；調(diào)節(jié)變態(tài)反應的試劑，例如色甘酸二鈉(DSCG)、曲尼司特、甘草素、異甘草素、黃芩素、聚苯乙烯磺酸鈉(N-PSS)、糖酸、硫酸軟骨素A衍生的寡糖(ChSAO)、保泰松、羥基保泰松、γ-亞麻酸、非諾洛芬；酚類化合物，例如二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、吲哚-2-羧酸、norlignane、鞣花單寧和urolithin B；維生素C、L-抗壞血酸-6-十六烷酯；皂角苷，例如長春藤皂苷元；半胱胺；紫錐花；迷迭香酸；鹽酸胍；L-精氨酸；表面活性劑，例如十四烷基硫酸鈉或者辛基酚乙氧基化物；以及上述物質的類似物和衍生物。
這些化合物的合適的劑量可以是例如提供每一劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些濃度是近似的并且可以根據(jù)化合物的效能、效果需要持續(xù)的時間以及依賴解剖位置的透明質酸降解的預期速率進行調(diào)整硫代蘋果酸金鹽10mM，吲哚美辛1mg/ml，肝素1mg/ml，硫酸化的多糖2mg/ml，以及丙二醇、TRITON X-100、PEG、SPAN、PLURONIC L101和羧甲基纖維素均為10mg/ml。為了獲得該濃度，在可能暴露于若干毫升水性體液的體積中可能需要每毫升必須劑量的約10倍的劑量(例如總重10mg吲哚美辛、20mg硫酸化的多糖、100mg丙二醇、TRITON、PEG、SPAN、PLURONIC或羧甲基纖維素)。因此，例如如果注射1ml HA溶液，其中該注射流體可能暴露于擴散經(jīng)過該區(qū)域的約2ml的間質液，那么建議注射100mg的每一抑制劑以便在一段時間后確保達到每毫升10mg的劑量。劑量需求主要取決于注射體積和應用的位點。在高流體周轉的位點，可以給予更多的透明質酸酶抑制劑。此外，如果使用控制方法從聚合劑型中釋放抑制劑，那么根據(jù)抑制劑的釋放譜、應用的位點、該區(qū)域的體液周轉以及諸如年齡和綜合健康等其它參數(shù)，本領域技術人員可以計算應用總劑量。
3.負載HI的透明質酸手術粘連屏障手術粘連的形成是一個復雜的過程，其中通常是分開的身體組織生長或結疤在一起。粘連是發(fā)生在相鄰組織間的瘢痕組織的連接或橋聯(lián)，所述相鄰組織在手術期間被損傷。由于組織干燥、局部缺血、熱損傷、感染或異物的存在而造成的手術創(chuàng)傷長期以來被認為是組織粘連形成的刺激因素。機械性損傷包括腸壓傷(Choate et al.，Arch.Surg.88249-254，1964)和腸壁外層的剝落或擦去(Gustavsson et al.，ActaChir.Scand.109327-333，1955)。隔離與腸環(huán)相連的主要血管會誘導可以造成粘連的局部缺血(James et al.，J.Path.Bact.90279-287，1965)。可以向區(qū)域中引入并引起粘連的異物包括滑石(Green et al.，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.133544-550，1970)、紗布海綿(Lehman and Boys，Ann.Surg 111427-435，1940)、毒性化學品(Chancy，Arch.Surg.2501151-1153，1950)、細菌(Moin et al.，Am.J.Med.Sci.250675-679，1965)、糞便(Jackson，Surgery 44507-518，1958)。結果是，外科粘連是失敗的手術治療的主要因素并且是腸梗阻和不育的主要因素。其它粘連相關的并發(fā)癥包括慢性骨盆痛、尿道阻塞和排泄功能障礙。據(jù)估計，在60％至90％接受大的婦科和腹部手術的患者中發(fā)生術后粘連并且估計治療腹部粘連的年度費用超過20億美元。
通常，粘連形成是炎性反應，其中因子被釋放，提高了血管滲透性并且導致纖維蛋白原流入和纖維蛋白沉積。纖維蛋白沉積形成橋聯(lián)被手術或疾病(例如炎性腸病、Crohn病)損傷的相鄰組織或器官的基質。在正常情況下，器官間的大多數(shù)纖維蛋白基質在愈合過程中降解。然而，當纖維蛋白基質未降解時，成纖維細胞積聚、與基質相連、沉積膠原并誘導血管發(fā)生。結果是形成了將正常情況下應該分離的器官或組織連接在一起的纖維瘢痕組織的永久性帶。如果在術后4至5天內(nèi)可以避免這一連串的事件，那么可以降低粘連的形成。
已經(jīng)開發(fā)出了在多種手術操作后防止或降低粘連的基于透明質酸的產(chǎn)品。透明質酸(通常是透明質酸鈉)膜、凝膠或噴霧劑可以形成隔離相鄰組織的臨時性生物可吸收的屏障(即在兩個組織之間物理存在屏障來防止它們直接相互接觸并在愈合過程中結疤)。不幸的是，在安放后的約24至48小時，膜被水化并開始被吸收。雖然這適于某些手術操作，但是在其它操作中(或者在低抵抗力患者中，例如愈合更加緩慢的糖尿病患者)，該活性持續(xù)時間并不充足并且在愈合完成之前屏障被吸收-將患者置于更容易形成粘連的境地中。
在本發(fā)明中，將透明質酸酶抑制劑單獨加入含有透明質酸的手術粘連膜、凝膠或噴霧劑中，或者將緩釋形式的透明質酸酶抑制加入含有透明質酸的手術粘連薄膜、凝膠或噴霧劑中以降低HA降解的速率并且延長組合物/植入物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時(例如在超過90％的患者中一致超過2天并且在超過50％的患者中超過7天)。一方面，在手術操作期間將含有HI的制劑輸送至期望的位置，例如靶組織或器官的表面，以便防止粘連的形成。這些代表期望位置的表面的實例包括但不限于包括輸卵管、卵巢和子宮在內(nèi)的生殖道的內(nèi)表面，包圍腱的指(趾)中，脊柱，腹腔的內(nèi)部肌肉表面和包括例如小腸和大腸、胃在內(nèi)的消化道的外表面，以及諸如腎臟、脾臟和肝臟等附屬器官的表面。
可以根據(jù)需要使輸送的HI的總劑量、劑量釋放速率以及藥物從HA的釋放持續(xù)時間適合顯著延長透明質酸植入物的活性。這將使屏障在體內(nèi)更長時間地發(fā)揮功能并降低在相鄰器官或組織間形成瘢痕組織的可能性。HI-HA植入物可以降低可能在腹部和婦科手術后形成的粘連的發(fā)生率和/或嚴重性。粘連的減少可以避免疼痛發(fā)生、腸梗阻和不育，并減少重復進行外科介入以除去瘢痕組織的需要。
使用本文提供的試劑、組合物和方法可以治療或預防多種手術粘連和手術并發(fā)癥。粘連的形成或不期望的瘢痕組織的蓄積/包裹使得多種手術復雜化。如上所述，手術粘連可以潛在地使任何腹腔或盆腔的開放或內(nèi)窺鏡手術操作在視覺上復雜化。手術植入物的包裹還使得乳房重建手術、關節(jié)置換手術、疝修復手術、人工血管移植手術以及神經(jīng)手術復雜化。在每種情況中，植入物被纖維結締組織被膜包裹，該被膜危害或損害手術植入物(例如乳房植入物、人工關節(jié)、手術網(wǎng)、血管移植物、硬腦脊膜補片、心包)的功能。慢性炎癥和結疤也發(fā)生在矯正慢性鼻竇炎或消除慢性炎癥的其它區(qū)域(例如異物、感染(真菌、分枝桿菌))的手術中。也可在處理這些手術的疾病狀態(tài)中使用HI-HA植入物。
可以與HI組合用于腹部、胃腸、冠狀、外周神經(jīng)和腱、整形外科、婦科和其它手術的合適的商品化HA產(chǎn)品的實例包括來自LifecoreBiomedical的RESTYLANE、HYLAFORM、PERLANE、SYNVISC和LUBRICOAT、INTERGEL以及來自Genzyme Biosurgery，Inc的SEPRAFILM、SEPRAGEL和SEPRACOAT粘連屏障。其它的HA產(chǎn)品包括植入物，例如來自Anika Therapeutics的OSSIGEL交聯(lián)HA產(chǎn)品，例如ATRISOL、INCERT家族的生物可吸收的交聯(lián)透明質酸(HA)產(chǎn)品以及HA衍生物，例如來自Genzyme Biosurgery的HYALGEL-R。
美國專利第6,723,709、6,531,147和6,464,970號中描述了用于防止手術粘連的透明質酸組合物的有代表性的實例。
HI可以與聚合物體系組合以提供試劑的緩釋。適于輸送用于本發(fā)明目的的HI劑的物質可以由非可降解的或可降解的物質組成；然而，優(yōu)選可降解的物質。合適的可降解的物質包括但不限于PEG交聯(lián)物質，明膠，膠原，GELFOAM，骨同種異體移植物(例如ALLOGRO、ORTHOBLAST、OPTEFORM、GRAFTON)，多糖，碳水化合物，蛋白質(例如白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、植物蛋白、魚蛋白等)，自體骨，脫鈣骨基質，藻酸鹽，淀粉，纖維素衍生物(例如HPC)，纖維素，纖維素酯，纖維素酯的混合物或共聚物，殼聚糖，殼聚糖衍生物，聚酯-聚烯基氧化物的嵌段共聚物(例如PLGA-PEG-PLGA、MePEG-PLGA等)，可降解的聚酯，聚酐，聚正酯，聚磷酸酯，聚膦嗪，氰基丙烯酸酯聚合物，含有PEG的可注射的制劑，例如COSEAL、FOCALSEAL、SPRAYGEL、DURASEAL，或美國專利第5,874,500、6,051,648、6,166,130和6,312,725號中描述的包含4-臂巰基PEG(10K)、4-臂NHS PEG(10K)和甲基化膠原的組合物，含有纖維蛋白原的制劑，例如FLOSEAL或TISSEAL，REPEL或FLOWGEL，以及其它可以分泌的低分子量聚合物。
含有HI-HA的手術粘連屏障可以用于包括腹部手術、婦科和盆腔手術、脊柱手術、心臟手術、腱和外周神經(jīng)手術以及竇手術在內(nèi)的多種手術操作中。將HI-HA組合物給藥的優(yōu)選方法包括在手術時將所述組合物作為“凝膠”、“混懸液”、“溶液”、“糊劑”、“薄膜”或“包裹物”(例如能夠包裹機體通道、器官或組織表面的全部或其一部分的薄膜、網(wǎng)或膜)向腸系膜表面直接應用或者使用內(nèi)窺鏡、超聲、CT、MRI或熒光鏡引導將所述組合物給藥；使用HI組合物“包被”HA手術植入物；在手術位點放置HI洗脫的聚合植入物。在內(nèi)窺鏡操作期間，通過內(nèi)窺鏡輸送端口可以向手術期間操作的腹部和盆腔器官的腸系膜應用“噴霧劑”形式的HI-HA制劑。
在上述實施方案的實踐中，本領域技術人員明顯可以理解潛在地，任何透明質酸酶抑制劑均可以單獨使用或組合使用。在避免手術粘連中用于與HA組合的HI劑的實例包括硫代蘋果酸金鹽、硫酸葡聚糖、巖藻多糖、丙二醇；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素、來自繡球花屬的繡球酚、來自調(diào)料小茴香的姜黃色素、甘草甜素、異甘草苷、光甘草定、甘草素、鼠李甘草苷、新甘草苷、甘草黃酮醇、甘草異黃酮A和B、甘草異黃酮、芒柄花黃素光甘草酚、光甘草酮、光甘草素、hispglabridin A、hispglabridin B、黃芩素、曲尼司特、水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、木犀草素、黃腐醇、異黃腐醇、染料木黃酮、4，5，7-三羥黃烷酮、chalconaringenin、楊梅黃素、磷酸化橙皮苷、雞豆黃素A、桑色素、根皮素、水飛薊素、4-苯基-香豆素、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮；抗炎劑，例如吲哚美辛、七葉皂苷、曲呫諾、水楊酸鹽、二十碳三烯酸、甘草甜素；調(diào)節(jié)變態(tài)反應的試劑，例如色甘酸二鈉(DSCG)、曲尼司特、甘草素、異甘草素、黃芩素、聚苯乙烯磺酸鈉(N-PSS)、糖酸、硫酸軟骨素A衍生的寡糖(ChSAO)、保泰松、羥基保泰松、γ-亞麻酸、非諾洛芬；酚類化合物，例如二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、吲哚-2-羧酸、norlignane、鞣花單寧和urolithin B；維生素C、L-抗壞血酸-6-十六烷酯；皂角苷，例如長春藤皂苷元；半胱胺；紫錐花；迷迭香酸；鹽酸胍；L-精氨酸；表面活性劑，例如十四烷基硫酸鈉或者辛基酚乙氧基化物；以及上述物質的類似物和衍生物。
這些化合物的合適劑量可以是例如提供每一劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些濃度是近似的并且可以根據(jù)化合物的效能和效果需要持續(xù)的時間進行調(diào)整硫代蘋果酸金鹽10mM，吲哚美辛1mg/ml，肝素1mg/ml，硫酸葡聚糖2mg/ml以及丙二醇、TRITON X-100、PEG、SPAN、PLURONIC L101和羧甲基纖維素均為10mg/ml。為了獲得該濃度，在可能暴露于若干毫升水性體液的體積中可能需要每毫升必須劑量的約10倍的劑量(例如總重量10mg的吲哚美辛、20mg硫酸化的多糖、100mg丙二醇、TRITON、PEG、SPAN、PLURONIC或羧甲基纖維素)。因此，例如如果注射1ml HA溶液，其中該注射流體可能暴露于擴散經(jīng)過該區(qū)域的約2ml間質液，那么建議注射100mg的每一抑制劑以便在之后的一段時間內(nèi)確保達到每毫升10mg的劑量。所需劑量主要取決于注射體積和應用的位點。在較高流體周轉的位點，可以給予更多的透明質酸酶抑制劑。此外，如果使用控制方法從聚合劑型中釋放抑制劑，那么根據(jù)抑制劑的釋放譜、應用的位點、該區(qū)域的體液周轉以及諸如年齡和綜合健康等其它參數(shù)，本領域技術人員可以計算應用總劑量。
4.負載HI的透明質酸美容植入物已經(jīng)開發(fā)出了用于軟組織增大以矯正面部瘢痕、減少面部線條以及增厚唇部的多種可注射透明質酸產(chǎn)品。特別地，這樣的植入物被指出用于治療多種外形缺陷，包括(但不限于)矯正痤瘡瘢痕，疾病或創(chuàng)傷導致的萎縮，眉間皺眉線條，鼻唇褶，或者繼發(fā)于鼻成形術、皮膚移植物或其它手術的缺陷以及其它軟組織缺陷?？缮藤彽挠糜谏鲜瞿康牡闹圃斓暮铣赏该髻|酸凝膠包括來自Genzyme Corporation的RESTYLANE、PERLANE和HYLAFORM(也被稱為HYLAN B)?？梢耘cHI組合用于美容注射的商品HA產(chǎn)品的其它實例包括來自MeijiSeika Kaisha，Ltd.(Japan)的ACHYAL、來自L.E.A.Derm(France)的JUVEDERM、來自Laboratoires O.R.GE V.MacDermol(France)的MACDERMOL以及來自Rofil Medical International(Holland)的ROFILAN Hylan Gel。
不幸的是，經(jīng)常需要重復“修飾”操作，因為植入物被宿主結締組織細胞和炎癥細胞占據(jù)，所述細胞產(chǎn)生能夠隨著時間流逝降解HA植入物的透明質酸酶和其它酶。單獨的或緩釋制劑形式的含有透明質酸酶抑制劑(HI)的可注射的透明質酸能夠導致植入物耐久性增加并且減少隨后重復注射的次數(shù)。雖然任何上述透明質酸酶抑制劑都可能適合被包括到真皮HA注射中，但是特別優(yōu)選下列的透明質酸酶抑制劑硫代蘋果酸金鹽、吲哚美辛、丙二醇、硫酸葡聚糖、巖藻多糖、長春藤皂苷元、類黃酮類、調(diào)節(jié)變態(tài)反應的試劑、酚類化合物以及羧甲基纖維素。
無論所使用的制劑如何，可以按照下列方法進行負載HI的HA注射給藥。使用含有HI-HA植入物物質的并且?guī)в屑毧潭柔橆^(30或32刻度的)的載藥注射器。將患者置于桌背稍微傾斜的坐位。使用局部利多卡因和/或丙胺卡因進行麻醉。將針頭以一定角度插入皮膚并伸入淺層真皮組織。擠出足夠量的植入物物質以修復軟組織輪廓缺陷。在負載HI的RESTYLANE的情況下，需要過度矯正(注射多于最終需要的物質)，因為在注射后的數(shù)小時內(nèi)一些注射物質會消散。通常使用負載HI的PERLANE矯正較深線條并將其注射入真皮的較深處。
美國專利第5,633,001、5,256,140和6,703,041號中描述了用于美容手術的透明質酸組合物的有代表性的實例。
HI可以與聚合物體系組合以提供試劑的緩釋。適于輸送用于本發(fā)明目的的HI劑的物質可以是由非可降解的或可降解的物質組成；然而，優(yōu)選可降解的物質。合適的可降解的物質包括但不限于PEG交聯(lián)物質，明膠，膠原，GELFOAM，多糖，碳水化合物，蛋白質(例如白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、植物蛋白、魚蛋白等)，藻酸鹽，淀粉，纖維素衍生物(HPC等)，纖維素，纖維素酯，纖維素酯的混合物或共聚物，殼聚糖，殼聚糖衍生物，聚酯-聚烯基氧化物的嵌段共聚物(例如PLGA-PEG-PLGA、MePEG-PLGA等)，可降解的聚酯，聚酐，聚正酯，聚磷酸酯，聚膦嗪，氰基丙烯酸酯聚合物，含有PEG的可注射的制劑，例如COSEAL、FOCALSEAL、SPRAYGEL、DURASEAL，或美國專利第5,874,500、6,051,648、6,166,130和6,312,725號中描述的包含季戊四醇聚乙二醇醚四巰基(4-臂巰基PEG)、季戊四醇聚乙二醇醚四琥珀酸亞胺基戊二酸酯(4-臂NHS PEG)和甲基化膠原的組合物，含有纖維蛋白原的制劑，例如FLOSEAL或TISSEAL，REPEL或FLOWGEL，以及其它可以分泌的低分子量聚合物。
HA-HI組合物還可以包含麻醉劑，例如利多卡因、苯佐卡因或丙胺卡因和/或神經(jīng)毒素，例如肉毒桿菌毒素。
在上述實施方案的實踐中，本領域技術人員明顯可以理解潛在地，任何透明質酸酶抑制劑均可以被單獨使用或組合使用。在美容注射操作中用于與HA組合的HI劑的實例包括硫代蘋果酸金鹽、吲哚美辛、丙二醇、羧甲基纖維素、硫酸葡聚糖、巖藻多糖和肝素，以及上述物質的類似物和衍生物。
這些化合物的合適劑量可以是例如提供每一劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些濃度是近似的并且可以根據(jù)化合物的效能和效果需要持續(xù)的時間進行調(diào)整硫代蘋果酸金鹽10mM，吲哚美辛1mg/ml，肝素1mg/ml，硫酸化的多糖2mg/ml，以及丙二醇、TRITON X-100、PEG、SPAN、PLURONIC L101和羧甲基纖維素均為10mg/ml。為了獲得該濃度，在可能暴露于若干毫升水性體液的體積中可能需要每毫升必須劑量的約10倍的劑量(例如總重10mg的吲哚美辛、20mg硫酸化的多糖、100mg丙二醇、TRITON、PEG、SPAN、PLURONIC或羧甲基纖維素)。因此，例如如果注射1ml HA溶液，其中該注射流體可能暴露于擴散經(jīng)過該區(qū)域的約2ml間質液，那么建議注射100mg的每一抑制劑以便在之后的一段時間內(nèi)確保達到每毫升10mg的劑量。劑量需求主要取決于注射體積和應用的位點。在較高流體周轉的位點，可以給予更多的透明質酸酶抑制劑。此外，如果使用控制方法從聚合劑型中釋放抑制劑，那么根據(jù)抑制劑的釋放譜、應用的位點、該區(qū)域的體液周轉以及諸如年齡和綜合健康等其它參數(shù)，本領域技術人員可以計算應用總劑量。
5.負載HI的HA眼用植入物HA的粘彈性溶液已經(jīng)被用作組織潤滑劑并且在眼內(nèi)的手術中還被用來維持眼淚的體積(例如在白內(nèi)障摘除手術、人工晶狀體移植、視網(wǎng)膜復置、晶狀體乳化手術、角膜移植以及青光眼過濾手術中作為玻璃體的替代物)。AMVISC、AMVISC PLUS和OCUCOAT(Bausch &Lomb)是高分子量的粘彈性可注射HA溶液，用于在白內(nèi)障摘除、角膜移植和青光眼手術中維持眼睛形狀并保護精密組織?；贖A的眼用粘彈性產(chǎn)品包括來自Alcon Laboratories的PROVIS、VISCOAT、DUOVISC和CELLUGEL；來自Pharmacia & Upjohn的HEALON、HEALON G和HEALON 5；來自Allergan的VITRAX；來自Bio-Technology General的BIOLON；來自Anika Therapeutics/StaarSurgical的STAARVISC；來自Anika Therapeutics/Cytosol Opthalmics的SHELLGEL以及來自Novartis的UNIVISC。
美國專利第5,728,405、6,635,267、6,465,588以及6,242,480、6,620,927、5,728,405、6,635,267、6,465,588和6,242,480號中描述了用于眼部手術的透明質酸組合物的有代表性的實例。
根據(jù)本發(fā)明，向HA眼部植入物中負載不同量的HI可以用于準確控制眼部植入物的溶解速率。在本發(fā)明中，將HI加入到含有HA的植入物中，或者緩釋形式的組合物中以降低透明質酸降解的速率并且延長組合物/植入物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時(例如在超過75％的患者中一致超過1個月)。可以根據(jù)需要使輸送的總劑量、劑量釋放速率以及藥物從基質的釋放持續(xù)時間適合于顯著延長膠原植入物的活性。
HI可以與聚合物體系組合以提供試劑的緩釋。適于輸送用于本發(fā)明目的的HI劑的物質可以由非可降解的或可降解的物質組成；然而，優(yōu)選可降解的物質。合適的可降解的物質包括但不限于PEG交聯(lián)物質，明膠，膠原，GELFOAM，多糖，碳水化合物，蛋白質(例如白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、植物蛋白、魚蛋白等)，藻酸鹽，淀粉，纖維素衍生物(HPC等)，纖維素，纖維素酯，纖維素酯的混合物或共聚物，殼聚糖，殼聚糖衍生物，聚酯-聚烯基氧化物的嵌段共聚物(例如PLGA-PEG-PLGA、MePEG-PLGA等)，可降解的聚酯，聚酐，聚正酯，聚磷酸酯，聚膦嗪，氰基丙烯酸酯聚合物，含有PEG的可注射的制劑，例如COSEAL、FOCALSEAL、SPRAYGEL、DURASEAL，或美國專利第5,874,500、6,051,648、6,166,130和6,312,725號中描述的包含4-臂巰基PEG(10K)、4-臂NHS PEG(10K)和甲基化膠原的組合物，含有纖維蛋白原的制劑，例如FLOSEAL或TISSEAL，REPEL或FLOWGEL，以及其它可以分泌的低分子量聚合物。
在上述實施方案的實踐中，本領域技術人員明顯可以理解潛在地，任何透明質酸酶抑制劑均可以單獨使用或組合使用。在眼部操作中用于與HA組合的HI劑的實例包括硫代蘋果酸金鹽、丙二醇、硫酸葡聚糖、巖藻多糖、肝素；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素、來自繡球花屬的繡球酚、來自調(diào)料小茴香的姜黃色素、甘草甜素、異甘草苷、光甘草定、甘草素、鼠李甘草苷、新甘草苷、甘草黃酮醇、甘草異黃酮A和B、甘草異黃酮、芒柄花黃素光甘草酚、光甘草酮、光甘草素、hispglabridin A、hispglabridin B、黃芩素、曲尼司特、水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、木犀草素、黃腐醇、異黃腐醇、染料木黃酮、4，5，7-三羥黃烷酮、chalconaringenin、楊梅黃素、磷酸化橙皮苷、雞豆黃素A、桑色素、根皮素、水飛薊素、4-苯基-香豆素、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮；抗炎劑，例如吲哚美辛、七葉皂苷、曲呫諾、水楊酸鹽、二十碳三烯酸、甘草甜素；調(diào)節(jié)變態(tài)反應的試劑，例如色甘酸二鈉(DSCG)、曲尼司特、甘草素、異甘草素、黃芩素、聚苯乙烯磺酸鈉(N-PSS)、糖酸、硫酸軟骨素A衍生的寡糖(ChSAO)、保泰松、羥基保泰松、γ-亞麻酸、非諾洛芬；酚類化合物，例如二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、吲哚-2-羧酸、norlignane、鞣花單寧和urolithin B；維生素C、L-抗壞血酸-6-十六烷酯；皂角苷，例如長春藤皂苷元；半胱胺；紫錐花；迷迭香酸；鹽酸胍；L-精氨酸；表面活性劑，例如十四烷基硫酸鈉或者辛基酚乙氧基化物；以及上述物質的類似物和衍生物。
這些化合物的合適劑量可以是例如提供每一劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些濃度是近似的并且可以根據(jù)化合物的效能和效果需要持續(xù)的時間進行調(diào)整硫代蘋果酸金鹽10mM，吲哚美辛1mg/ml，肝素1mg/ml，硫酸化的多糖2mg/ml以及丙二醇、TRITON X-100、PEG、SPAN、PLURONIC L101和羧甲基纖維素均為10mg/ml。為了獲得該濃度，在可能暴露于若干毫升水性體液的體積中可能需要每毫升必須劑量的約10倍的劑量(例如總重10mg的吲哚美辛、20mg硫酸化的多糖、100mg丙二醇、TRITON、PEG、SPAN、PLURONIC或羧甲基纖維素)。因此，例如如果注射1ml HA溶液，其中該注射流體可能暴露于擴散經(jīng)過該區(qū)域的約2ml間質液，那么建議注射100mg的每一抑制劑以便在之后的一段時間內(nèi)確保達到每毫升10mg的劑量。劑量需求主要取決于注射體積和應用的位點。在較高流體周轉的位點，可以給予更多的透明質酸酶抑制劑。此外，如果使用控制方法從聚合劑型中釋放抑制劑，那么根據(jù)抑制劑的釋放譜、應用的位點、該區(qū)域的體液周轉以及諸如年齡和綜合健康等其它參數(shù)，本領域技術人員可以計算應用總劑量。
6.用于關節(jié)內(nèi)注射的負載HI的透明質酸骨關節(jié)炎(OA)是影響數(shù)百萬美國人的疼痛退變性關節(jié)疾病狀態(tài)。雖然并不知道OA的準確誘因，但是可能的誘因包括損傷、年齡、先天體質以及肥胖。透明質酸是關節(jié)滑液中的正常成分，在正?；顒?休息、步行)期間潤滑關節(jié)表面并幫助避免機械性損傷，在高碰撞活動(例如跑、跳)中減少對關節(jié)的撞擊。在患有OA的患者中，滑液的彈性和粘性以及滑液的透明質酸濃度降低。相信這促進了關節(jié)內(nèi)關節(jié)軟骨的損壞。關節(jié)內(nèi)給藥的HA(通常是透明質酸鈉)在注射后的一段時間內(nèi)穿透關節(jié)軟骨表面、滑液組織以及關節(jié)囊。通過向關節(jié)中注射透明質酸(被稱為粘性補充)，有可能部分恢復滑液的正常環(huán)境、減少疼痛并潛在地預防進一步的損傷和殘疾。
通常將含有HA的物質以關節(jié)內(nèi)注射給藥(作為單次治療或重復治療周期的療程)來治療患者膝部的疼痛骨關節(jié)炎，使用保守治療該患者得不到充分的疼痛緩解。偶爾也向諸如髖(使用熒光透視注射)、踝、肩和肘關節(jié)等其它關節(jié)注射HA以緩解這些特定關節(jié)中的疾病癥狀。根據(jù)特定的商業(yè)產(chǎn)品，每周向關節(jié)中注射一次HA物質并連續(xù)5至6周。當有效時，患者報告他們在6個月或更長時間內(nèi)癥狀緩解-此時可以重復該循環(huán)以延長治療活性。雖然在某些患者中具有持續(xù)效果，但是注射的HA在數(shù)天內(nèi)被機體從關節(jié)中迅速清除(除去)。可以預期通過抑制HA的分解來延長HA在關節(jié)中的停留時間以提高其效能并增加癥狀緩解的持續(xù)時間。
一方面，本發(fā)明的組合物可以用于處理動物(例如馬)中的骨關節(jié)炎。
在本發(fā)明中，將HI加入到關節(jié)內(nèi)含有HA的植入物或組合物中以降低HA降解的速率并且延長組合物/植入物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時(例如許多患者中一致超過6個月并且在某些患者中超過1年)?？梢愿鶕?jù)需要使輸送的HI的總劑量、劑量釋放速率以及藥物從基質的釋放持續(xù)時間適合于顯著延長透明質酸植入物的活性。
許多可商購的含有HA的物質可以與HI組合，包括，例如SYNVISC是含有hylan((透明質酸鈉的衍生物)來自雞冠)的粘彈性流體；ORTHOVISC，高度純化的、高分子量、高粘度的可注射形式的HA，HYALGAN(來自Fidia/Sanofi-Synthelabo)以及HPS和SUPARTZ(來自Seikagaku/Smith & Nephew)。應該注意到，一些HA產(chǎn)品(尤其是Boehringer Ingelheim Vetmedica，St.Joseph，MO的HYVISC)用于獸醫(yī)的應用(通常是治療馬的骨關節(jié)炎和跛行)。
美國專利第6,654,120、6,645,945和6,635,287號中描述了用于粘性補充的透明質酸組合物的有代表性的實例。
HI可以與聚合物體系組合以提供試劑的緩釋。適于輸送在OA處理中與HA組合的HI劑的物質可以由非可降解的或可降解的物質組成；然而，優(yōu)選可降解的物質。合適的可降解的物質包括但不限于PEG交聯(lián)物質，明膠，膠原，GELFOAM，多糖，碳水化合物，蛋白質(例如白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、植物蛋白、魚蛋白等)，藻酸鹽，淀粉，纖維素衍生物(HPC等等)，纖維素，纖維素酯，纖維素酯的混合物或共聚物，殼聚糖，殼聚糖衍生物，聚酯-聚烯基氧化物的嵌段共聚物(例如PLGA-PEG-PLGA、MePEG-PLGA等等)，可降解的聚酯，聚酐，聚正酯，聚磷酸酯，聚膦嗪，氰基丙烯酸酯聚合物。用于本發(fā)明實踐的特別有用的可降解聚合物包括含有PEG的可注射的制劑，例如COSEAL、FOCALSEAL、SPRAYGEL、DURASEAL，或美國專利第5,874,500、6,051,648、6,166,130和6,312,725號中描述的包含4-臂巰基PEG(10K)、4-臂NHS PEG(10K)和甲基化膠原的組合物，含有纖維蛋白原的制劑，例如FLOSEAL或TISSEAL，REPEL或FLOWGEL，以及其它可以分泌的低分子量聚合物。其它組合物包括上述試劑的混合物和共聚物。
在上述實施方案的實踐中，本領域技術人員明顯可以理解潛在地，任何透明質酸酶抑制劑均可以單獨使用或組合使用。在處理骨關節(jié)炎中用于與HA組合的HI劑的實例包括硫代蘋果酸金鹽、丙二醇、硫酸葡聚糖、巖藻多糖、肝素；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素、來自繡球花屬的繡球酚、來自調(diào)料小茴香的姜黃色素、甘草甜素、異甘草苷、光甘草定、甘草素、鼠李甘草苷、新甘草苷、甘草黃酮醇、甘草異黃酮A和B、甘草異黃酮、芒柄花黃素光甘草酚、光甘草酮、光甘草素、hispglabridin A、hispglabridin B、黃芩素、曲尼司特、水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、木犀草素、黃腐醇、異黃腐醇、染料木黃酮、4，5，7-三羥黃烷酮、chalconaringenin、楊梅黃素、磷酸橙皮苷、雞豆黃素A、桑色素、根皮素、水飛薊素、4-苯基-香豆素、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮；抗炎劑，例如吲哚美辛、七葉皂苷、曲呫諾、水楊酸鹽、二十碳三烯酸、甘草甜素；調(diào)節(jié)變態(tài)反應的試劑，例如色甘酸二鈉(DSCG)、曲尼司特、甘草素、異甘草素、黃芩素、聚苯乙烯磺酸鈉(N-PSS)、糖酸、硫酸軟骨素A衍生的寡糖(ChSAO)、保泰松、羥基保泰松、γ-亞麻酸、非諾洛芬；酚類化合物，例如二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、吲哚-2-羧酸、norlignane、鞣花單寧和urolithin B；維生素C、L-抗壞血酸-6-十六烷酯；皂角苷，例如長春藤皂苷元；半胱胺；紫錐花；迷迭香酸；鹽酸胍；L-精氨酸；表面活性劑，例如十四烷基硫酸鈉或者辛基酚乙氧基化物；以及上述物質的類似物和衍生物。
這些化合物的合適的劑量可以是例如提供每一劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些濃度是近似的并且可以根據(jù)化合物的效能和效果需要持續(xù)的時間進行調(diào)整硫代蘋果酸金鹽10mM，吲哚美辛1mg/ml，肝素1mg/ml，硫酸化的多糖2mg/ml以及丙二醇、TRITON X-100、PEG、SPAN、PLURONIC L101和羧甲基纖維素均為10mg/ml。為了獲得該濃度，在可能暴露于若干毫升水性體液的體積中可能需要每毫升必須劑量的約10倍的劑量(例如總重10mg的吲哚美辛、20mg硫酸化的多糖、100mg丙二醇、TRITON、PEG、SPAN、PLURONIC或羧甲基纖維素)。因此，例如如果注射1ml HA溶液，其中該注射流體可以暴露于擴散經(jīng)過該區(qū)域的約2ml間質液，那么建議注射100mg的每一抑制劑以便在之后的一段時間內(nèi)確保達到每毫升10mg的劑量。劑量需求主要取決于注射體積和應用的位點。在較高流體周轉的位點，可以給予更多的透明質酸酶抑制劑。此外，如果使用控制方法從聚合劑型中釋放抑制劑，那么根據(jù)抑制劑的釋放譜、應用的位點、該區(qū)域的體液周轉以及諸如年齡和綜合健康等其它參數(shù)，本領域技術人員可以計算應用總劑量。
7.用于GERD的負載HI的透明質酸填充劑基于HA的可注射劑用于處理胃食管返流疾病(GERD)。當食道下端括約肌(胃和食管之間的肌肉)不能防止胃內(nèi)容物回流至食管時，就會發(fā)生GERD。胃酸和酶對食管的上皮層具有嚴重的腐蝕性并且能夠造成腐蝕、潰瘍、瘢痕和食管狹窄。反復向食管中回流會造成不可逆轉的損傷并且還使患者易于患上特定形式的食管癌。向食道下端括約肌(LES)附近注射HA填充劑能夠恢復組織的結構并減少向食管的回流。通常通過在內(nèi)窺鏡觀察下直接注射來將HA填充劑給藥。事實上發(fā)生在全部基于HA的操作中，主要問題是植入物的降解，這限制了治療的壽命。當透明質酸喪失了其結構完整性并且不能再維持LES時，需要使用HA的再注射(或注射另一生物材料，例如膠原)或者括約肌的開放手術強化的重復介入。用于治療GERD的基于HA的填充劑的有代表性的實例是來自Q-Med/Priority Healthcare的DEFLUX。美國專利第6,736,823、6,736,854、6,316,011號描述了用于GERD手術的透明質酸組合物的有代表性的實例。
在本發(fā)明中，將HI單獨加入含有HA的植入物或組合物中，或者將緩釋形式的HI加入含有HA的植入物或組合物中以降低HA降解的速率并且延長組合物/植入物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時(例如在超過75％的患者中一致超過6個月并且在超過35％的患者中超過1年)?？梢愿鶕?jù)需要使輸送的HI的總劑量、劑量釋放速率以及藥物從基質的釋放持續(xù)時間適合于顯著延長透明質酸植入物的活性。
HI可以與聚合物體系組合以提供試劑的緩釋。適于在處理GERD中輸送與HA組合的HI劑的物質可以由非可降解的或可降解的物質組成。合適的可降解的物質包括但不限于PEG交聯(lián)物質、明膠、膠原、GELFOAM、多糖、碳水化合物、蛋白質(例如白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、植物蛋白、魚蛋白等)、藻酸鹽、淀粉、纖維素衍生物(例如HPC)、纖維素、纖維素酯、纖維素酯的混合物或共聚物、殼聚糖、殼聚糖衍生物、聚酯-聚烯基氧化物的嵌段共聚物(例如PLGA-PEG-PLGA、MePEG-PLGA等等)、可降解的聚酯、聚酐、聚正酯、聚磷酸酯、聚膦嗪以及氰基丙烯酸酯聚合物。在本發(fā)明的實踐中特別有用的可降解聚合物包括含有PEG的可注射的制劑，例如COSEAL、FOCALSEAL、SPRAYGEL、DURASEAL、或美國專利第5,874,500、6,051,648、6,166,130和6,312,725號中描述的包含4-臂巰基PEG(10K)、4-臂NHSPEG(10K)和甲基化膠原的組合物、含有纖維蛋白原的制劑，例如FLOSEAL或TISSEAL，REPEL或FLOWGEL，以及其它可以分泌的低分子量聚合物。
適于輸送用于處理GERD的與HA組合的HI的非可降解物質包括包含混合時形成聚甲基丙烯酸甲脂(PMMA)的PVA、PVP、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸甲酯苯乙烯(MMA-苯乙烯)的交聯(lián)組合物，或者骨水泥(例如由Stryker Howmedica制造的SIMPLEX P、由Zimmer制造的ZIMMER REGULAR和ZIMMER LOWVISCOSITY CEMENT、由Smith和Nephew制造的PALACOS、由Wright Medical制造的CMW-1和CMW-2、由DePuy制造的DEPUYENDURANCE)、合成的網(wǎng)狀骨空隙填充劑(例如CORTOSS，Orthovita，Inc.)、pHEMA、聚(乙烯基PEG)、聚苯乙烯磺酸酯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸以及文獻中已知形成水凝膠的其它聚合物。其它組合物包括上述試劑的混合物或共聚物。
在上述實施方案的實踐中，本領域技術人員明顯可以理解潛在地，任何透明質酸酶抑制劑均可以單獨使用或組合使用。在處理GERD中用于與HA組合的HI劑的實例包括硫代蘋果酸金鹽、丙二醇、肝素、硫酸葡聚糖、巖藻多糖、羧甲基纖維素；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素、來自繡球花屬的繡球酚、來自調(diào)料小茴香的姜黃色素、甘草甜素、異甘草苷、光甘草定、甘草素、鼠李甘草苷、新甘草苷、甘草黃酮醇、甘草異黃酮A和B、甘草異黃酮、芒柄花黃素光甘草酚、光甘草酮、光甘草素、hispglabridin A、hispglabridin B、黃芩素、曲尼司特、水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、木犀草素、黃腐醇、異黃腐醇、染料木黃酮、4，5，7-三羥黃烷酮、chalconaringenin、楊梅黃素、磷酸化橙皮苷、雞豆黃素A、桑色素、根皮素、水飛薊素、4-苯基-香豆素、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮；抗炎劑，例如吲哚美辛、七葉皂苷、曲呫諾、水楊酸鹽、二十碳三烯酸、甘草甜素；調(diào)節(jié)變態(tài)反應的試劑，例如色甘酸二鈉(DSCG)、曲尼司特、甘草素、異甘草素、黃芩素、聚苯乙烯磺酸鈉(N-PSS)、糖酸、硫酸軟骨素A衍生的寡糖(ChSAO)、保泰松、羥基保泰松、γ-亞麻酸、非諾洛芬；酚類化合物，例如二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、吲哚-2-羧酸、norlignane、鞣花單寧和urolithin B；維生素C、L-抗壞血酸-6-十六烷酯；皂角苷，例如長春藤皂苷元；半胱胺；紫錐花；迷迭香酸；鹽酸胍；L-精氨酸；表面活性劑，例如十四烷基硫酸鈉或者辛基酚乙氧基化物；以及上述物質的類似物和衍生物。下列組合物特別適合在該征候中使用。
這些化合物的合適的劑量可以例如提供每一劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些濃度是近似的并且可以根據(jù)化合物的效能和效果需要持續(xù)的時間進行調(diào)整硫代蘋果酸金鹽10mM，吲哚美辛1mg/ml，肝素1mg/ml，硫酸化的多糖2mg/ml以及丙二醇、TRITON X-100、PEG、SPAN、PLURONIC L101和羧甲基纖維素均為10mg/ml。為了獲得該濃度，在可能暴露于若干毫升水性體液的體積中可能需要每毫升必須劑量的約10倍的劑量(例如總重10mg的吲哚美辛、20mg硫酸化的多糖、100mg丙二醇、TRITON、PEG、SPAN、PLURONIC或羧甲基纖維素)。因此，例如如果注射1ml HA溶液，其中該注射流體可能暴露于擴散經(jīng)過該區(qū)域的約2ml間質液，那么建議注射100mg的每一抑制劑以便在之后的一段時間內(nèi)確保達到每毫升10mg的劑量。劑量需求主要取決于注射體積和應用的位點。在較高流體周轉的位點，可以給予更多的透明質酸酶抑制劑。此外，如果使用控制方法從聚合劑型中釋放抑制劑，那么根據(jù)抑制劑的釋放譜、應用的位點、該區(qū)域的體液周轉以及諸如年齡和綜合健康等其它參數(shù)，本領域技術人員可以計算應用總劑量。
8.用于尿失禁的負載HI的透明質酸填充劑在治療尿失禁中經(jīng)常使用可注射的透明質酸。下述的實施方案詳述了負載透明質酸酶抑制劑的HA產(chǎn)品組合物以及在治療該常規(guī)醫(yī)學疾病狀態(tài)中使用這些組合物的方法。
簡而言之，失禁，即尿的無意流失是常見的醫(yī)學疾病狀態(tài)，在一生的某個時間點，尿失禁影響20％的女性和1-2％的男性。最常見的失禁形式是壓迫性失禁，即對引起腹腔內(nèi)壓力增加的活動(例如噴嚏、咳嗽或用力)響應而造成的無意漏尿。當膀胱內(nèi)壓(膀胱中的壓力)超過尿道中的壓力時，在沒有逼肌(膀胱肌肉)收縮時迫使尿從膀胱進入尿道，從而發(fā)生尿失禁。若干疾病狀態(tài)被認為導致壓迫性失禁，包括(1)膀胱頸的下降和內(nèi)部尿道括約肌滑出腹部。
(2)由于創(chuàng)傷、手術、分娩或惡性腫瘤導致的內(nèi)部尿道括約肌衰竭。
矯正措施主要瞄準于通過手術或非手術方法支持腹腔中的最接近尿道和膀胱頸。第二種方法涉及使用用于增加尿道壓力并減輕壓迫性尿失禁的尿道填充劑(包括HA)。
雖然在處理壓迫性尿失禁中成功使用了尿道周的和經(jīng)尿道的HA注射，但是因為HA植入物的有限的耐久性，大多數(shù)情況需要超過一次的治療。使用負載HI的HA注射可以維持植入物的活性并且降低對隨后尿道周和經(jīng)尿道的注射的需求和頻率。
若干可商購的基于HA的產(chǎn)品可以用于處理壓迫性失禁?；贖A的膀胱輸尿管回流(尿失禁)的產(chǎn)品的有代表性的實例是來自Q-Med/Priority Healthcare的DEFLUX。不幸的是，HA在數(shù)周內(nèi)開始降解并且在數(shù)月內(nèi)完全降解。雖然治療后顯示尿失禁改善的患者的百分比起始時為58-100％，然而，HA的吸收導致大多數(shù)患者在上述時間間隔內(nèi)需要重復操作。在本發(fā)明中，將HI單獨加入基于HA的可注射劑中，或者將緩釋形式的HI加入基于HA的可注射劑中以降低HA降解的速率并且延長組合物/植入物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時(即在多數(shù)患者中一致超過1年)。
美國專利第6,605,294、6,699,471和6,423,332號描述了用于尿失禁的透明質酸組合物的有代表性的實例。
在本發(fā)明中，將HI單獨加入含有HA的植入物或組合物中，或者將緩釋形式的HI加入含有HA的植入物或組合物中以降低HA降解的速率并且延長組合物/植入物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時(例如在超過75％的患者中一致超過6個月并且在超過35％的患者中超過1年)?？梢愿鶕?jù)需要使輸送的HI的總劑量、劑量釋放速率以及藥物從基質的釋放持續(xù)時間適合于顯著延長透明質酸植入物的活性。
HI可以與聚合物體系組合以提供試劑的緩釋。適于在處理尿失禁中輸送與HA組合的HI劑的物質可以由非可降解的或可降解的物質組成。合適的可降解的物質包括但不限于PEG交聯(lián)物質、明膠、膠原、GELFOAM、多糖、碳水化合物、蛋白質(例如白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、植物蛋白、魚蛋白等)、藻酸鹽、淀粉、纖維素衍生物(HPC等)、纖維素、纖維素酯、纖維素酯的混合物或共聚物、殼聚糖、殼聚糖衍生物、聚酯-聚烯基氧化物的嵌段共聚物(例如PLGA-PEG-PLGA、MePEG-PLGA等)、可降解的聚酯、聚酐、聚正酯、聚磷酸酯、聚膦嗪以及氰基丙烯酸酯聚合物。在本發(fā)明的實踐中特別有用的可降解聚合物包括含有PEG的可注射制劑，例如COSEAL、FOCALSEAL、SPRAYGEL、DURASEAL、或美國專利第5,874,500、6,051,648、6,166,130和6,312,725號中描述的包含4-臂巰基PEG(10K)、4-臂NHSPEG(10K)和甲基化膠原的組合物、含有纖維蛋白原的制劑，例如FLOSEAL或TISSEAL，REPEL或FLOWGEL，以及其它可以分泌的低分子量聚合物。
適于輸送用于處理尿失禁的與HA組合的HI的非可降解物質包括包含混合時形成聚甲基丙烯酸甲脂(PMMA)的PVA、PVP、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸甲酯苯乙烯(MMA-苯乙烯)的交聯(lián)組合物，或者骨水泥(例如由Stryker Howmedica制造的SIMPLEX P、由Zimmer制造的ZIMMER REGULAR和ZIMMER LOWVISCOSITY CEMENT、由Smith and Nephew制造的PALACOS、由Wright Medical制造的CMW-1和CMW-2、由DePuy制造的DEPUYENDURANCE)、合成的網(wǎng)狀骨空隙填充劑(例如CORTOSSTM，Orthovita)、pHEMA、聚(乙烯基PEG)、聚苯乙烯磺酸酯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸以及文獻中已知形成水凝膠的其它聚合物。其它組合物包括上述劑的混合物或共聚物。
a.經(jīng)尿道技術無論所使用的制劑如何，負載HI的HA的經(jīng)尿道注射給藥可以按照下列方法進行。使用含有若干毫升植入物物質的并且?guī)в屑毧潭柔橆^(帶有穩(wěn)定插管的23刻度的經(jīng)尿道針頭)的一次性載藥注射器。將患者置于切石術位置并將10ml的2％利多卡因注射入尿道進行麻醉。對于女性，使用膀胱鏡觀察膀胱頸。通過膀胱鏡的注射口，在4點鐘的位置以銳角在遠離膀胱頸1-1.5cm處插入針，直至剛剛在膀胱黏膜以下的平面。然后使用膀胱鏡使針沿著尿道長軸前進，直至恰好到達膀胱頸粘膜以下。緩慢向該位點注射負載HI的HA。然后在8點鐘的位置重復操作?？梢韵蛑踩胛锛尤雭喖谆{或其它非毒性染色劑以輔助注射的可視化。
b.尿道周注射負載HI的HA注射的尿道周注射也可被用于治療失禁。使用含有若干毫升植入物物質的并且?guī)в屑毧潭柔橆^(尿道周針頭)的一次性載藥注射器。將患者置于切石術位置并將10ml的2％利多卡因注射入尿道進行麻醉，并使用膀胱鏡觀察膀胱頸(對于男性，可以通過恥骨上膀胱鏡方法觀察尿道)。將針經(jīng)陰道或經(jīng)恥骨上插入緊鄰尿道的且與尿道平行的區(qū)域。當針到達膀胱頸附近的合適位置時(如上所述通過膀胱鏡可見)，緩慢向該位點注射負載HI的HA。可以向植入物加入亞甲基藍或其它非毒性染色劑以輔助注射的可視化。
在上述實施方案的實踐中，本領域技術人員明顯可以理解潛在地，任何透明質酸酶抑制劑均可以單獨使用或組合使用。在處理尿失禁中用于與HA組合的HI劑的實例包括硫代蘋果酸金鹽、丙二醇、硫酸葡聚糖、巖藻多糖、羧甲基纖維素；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素、來自繡球花屬的繡球酚、來自調(diào)料小茴香的姜黃色素、甘草甜素、異甘草苷、光甘草定、甘草素、鼠李甘草苷、新甘草苷、甘草黃酮醇、甘草異黃酮A和B、甘草異黃酮、芒柄花黃素光甘草酚、光甘草酮、光甘草素、hispglabridin A、hispglabridin B、黃芩素、曲尼司特、水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、木犀草素、黃腐醇、異黃腐醇、染料木黃酮、4，5，7-三羥黃烷酮、chalconaringenin、楊梅黃素、磷酸化橙皮苷、雞豆黃素A、桑色素、根皮素、水飛薊素、4-苯基-香豆素、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮；抗炎劑，例如吲哚美辛、七葉皂苷、曲呫諾、水楊酸鹽、二十碳三烯酸、甘草甜素；調(diào)節(jié)變態(tài)反應的試劑，例如色甘酸二鈉(DSCG)、曲尼司特、甘草素、異甘草素、黃芩素、聚苯乙烯磺酸鈉(N-PSS)、糖酸、硫酸軟骨素A衍生的寡糖(ChSAO)、保泰松、羥基保泰松、γ-亞麻酸、非諾洛芬；酚類化合物，例如二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、吲哚-2-羧酸、norlignane、鞣花單寧和urolithin B；維生素C、L-抗壞血酸-6-十六烷酯；皂角苷，例如長春藤皂苷元；半胱胺；紫錐花；迷迭香酸；鹽酸胍；L-精氨酸；表面活性劑，例如十四烷基硫酸鈉或者辛基酚乙氧基化物；以及上述物質的類似物和衍生物。下列組合物特別適合在該征候中使用。
這些化合物的合適劑量可以是例如提供每一劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些濃度是近似的并且可以根據(jù)化合物的效能和效果需要持續(xù)的時間進行調(diào)整硫代蘋果酸金鹽10mM，吲哚美辛1mg/ml，肝素1mg/ml，硫酸化的多糖2mg/ml以及丙二醇、TRITON X-100、PEG、SPAN、PLURONIC L101和羧甲基纖維素均為10mg/ml。為了獲得該濃度，在可能暴露于若干毫升水性體液的體積中可能需要每毫升必須劑量的約10倍的劑量(例如總重10mg的吲哚美辛、20mg硫酸化的多糖、100mg丙二醇、TRITON、PEG、SPAN、PLURONIC或羧甲基纖維素)。因此，例如如果注射1ml HA溶液，其中該注射流體可能暴露于擴散經(jīng)過該區(qū)域的約2ml間質液，那么建議注射100mg的每一抑制劑以便在之后的一段時間內(nèi)確保達到每毫升10mg的劑量。劑量需求主要取決于注射體積和應用的位點。在較高流體周轉的位點，可以給予更多的透明質酸酶抑制劑。此外，如果使用控制方法從聚合劑型中釋放抑制劑，那么根據(jù)抑制劑的釋放譜、應用的位點、該區(qū)域的體液周轉以及諸如年齡和綜合健康等其它參數(shù)，本領域技術人員可以計算應用總劑量。
9.用于大便失禁的負載HI的HA填充劑基于HA的可注射劑還可以用于大便失禁的局部處理。大便失禁是常見的和社交不能的疾病狀態(tài)，其影響高達11％的北美成年人。多種因素能夠引起屁或糞便失禁，但是在女性中更加常見，女性在分娩時肛門括約肌可以受損(尤其是患有三級陰道撕裂、需要鑷子、分娩大嬰兒和/或陰道分娩時滯產(chǎn)的那些女性)。雖然大便失禁的病因學經(jīng)常是多因素的，但是誘因包括括約肌損傷(產(chǎn)科、外科、事故)、肛門直腸疾病(痔瘡、直腸脫垂、炎性腸病、瘺、腫瘤、結腸切除、糞便嵌塞、腹瀉)、先天的(脊柱裂、腦脊膜突出、Hirshsprung疾病)、特發(fā)的或行為的(排便抵抗、癡呆、智力遲鈍)。被動的大便失禁(即患者沒有察覺的情況下發(fā)生)主要是由于肛門內(nèi)括約肌的功能障礙，而主動的大便失禁(不能自主地禁止排便)通常是由于肛門外括約肌的功能障礙。
矯正手段是最初進行保守治療或直接消除潛在的誘因(如果比較明顯)。在大多數(shù)患者中，無法識別出確定的因素并且通常嘗試肛門內(nèi)括約肌或肛門外括約肌的手術修復。不幸的是，這些患者中超過50％并沒有達到長期的成功結果并且需要另一種形式的治療。手術失敗的那些患者、不希望進行手術的患者以及由于醫(yī)學原因不能進行手術的患者是進行可注射括約肌增大的候選者。在該操作中，將填充劑，例如HA注射入內(nèi)括約肌或外括約肌周圍的區(qū)域以增加括約肌的壓力并減少大便失禁。
雖然肛門周圍括約肌HA注射已經(jīng)成功用于處理大便失禁，但是由于HA植入物有限的耐久性，大多數(shù)情況需要多于一次的治療。使用負載HI的HA注射可以維持植入物的活性并且降低對肛周注射的需要及其頻率。若干可商購的基于HA的產(chǎn)品可以用于處理大便失禁。多種基于HA的填充劑可以用于治療大便失禁，包括可注射的填充劑。也可以用于大便失禁的基于HA的膀胱輸尿管回流產(chǎn)品的有代表性的實例是來自Q-Med/Priority Healthcare的DEFLUX，其是由透明質酸溶液中的交聯(lián)葡聚糖顆粒組成的。
美國專利第6,129,761和5,490,984號描述了用于大便失禁的透明質酸組合物的有代表性的實例。
不幸的是，HA在數(shù)周內(nèi)開始降解并且在數(shù)月內(nèi)完全降解。雖然治療后顯示其失禁改善的患者的百分比很高，然而，HA的吸收導致大多數(shù)患者需要重復所述操作。在本發(fā)明中，將HI單獨加入基于HA的可注射劑中，或者將緩釋形式的HI加入基于HA的可注射劑中以降低植入物降解的速率并且延長植入物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時(例如在多數(shù)患者中一致超過1年)?？梢愿鶕?jù)需要使輸送的HI的總劑量、劑量釋放速率以及藥物從基質的釋放持續(xù)時間適合于顯著延長透明質酸植入物的活性。
HI可以與聚合物體系組合以提供試劑的緩釋。適于輸送用于處理大便失禁的與HA組合的HI劑的物質可以由非可降解的或可降解的物質組成。合適的可降解的物質包括但不限于PEG交聯(lián)物質、明膠、膠原、GELFOAM、多糖、碳水化合物、蛋白質(例如白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、植物蛋白、魚蛋白等)、藻酸鹽、淀粉、纖維素衍生物(HPC等)、纖維素、纖維素酯、纖維素酯的混合物或共聚物、殼聚糖、殼聚糖衍生物、聚酯-聚烯基氧化物的嵌段共聚物(例如PLGA-PEG-PLGA、MePEG-PLGA等)、可降解的聚酯、聚酐、聚正酯、聚磷酸酯、聚膦嗪以及氰基丙烯酸酯聚合物。在本發(fā)明的實踐中特別有用的可降解的聚合物包括含有PEG的可注射制劑，例如COSEAL、FOCALSEAL、SPRAYGEL、DURASEAL、或美國專利第5,874,500、6,051,648、6,166,130和6,312,725號中描述的包含4-臂巰基PEG(10K)、4-臂NHSPEG(10K)和甲基化膠原的組合物、含有纖維蛋白原的制劑，例如FLOSEAL或TISSEAL，REPEL或FLOWGEL，以及其它可以分泌的低分子量聚合物。
適于輸送用于處理大便失禁的與HA組合的HI的非可降解物質包括包含混合時形成聚甲基丙烯酸甲脂(PMMA)的PVA、PVP、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸甲酯苯乙烯(MMA-苯乙烯)的交聯(lián)組合物，或者骨水泥(例如由Stryker Howmedica制造的SIMPLEX P、由Zimmer制造的ZIMMER REGULAR和ZIMMER LOWVISCOSITY CEMENT、由Smith and Nephew制造的PALACOS、由Wright Medical制造的CMW-1和CMW-2、由DePuy制造的DEPUYENDURANCE)、合成的網(wǎng)狀骨空隙填充劑(例如CORTOSS，Orthovita)、pHEMA、聚(乙烯基PEG)、聚苯乙烯磺酸酯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸以及文獻中已知形成水凝膠的其它聚合物。其它組合物包括上述試劑的混合物或共聚物。
使用下列方法進行負載HI的HA的肛周括約肌注射。使用含有若干毫升植入物物質的并且?guī)в屑毧潭柔橆^的一次性載藥注射器。根據(jù)所選的注射區(qū)域，將10ml的2％利多卡因注射入會陰部皮膚或直腸粘膜。將針穿過皮膚或直腸粘膜進入包圍肛門括約肌的粘膜下層平面。當針到達合適的位置時，向位點緩慢注射負載HI的HA(通常在肛皮線處或剛剛在肛皮線之上在周圍、穿過括約肌、進入但遠離肛門邊緣注射3次)直至在肛管周圍形成對稱?？梢韵蛑踩胛锛尤雭喖谆{或其它非毒性染色劑以輔助注射的可視化。
在上述實施方案的實踐中，本領域技術人員明顯可以理解潛在地，任何透明質酸酶抑制劑均可以單獨使用或組合使用。在處理大便失禁中用于與HA組合的HI劑的實例包括硫代蘋果酸金鹽、羧甲基纖維素、硫酸葡聚糖、巖藻多糖、丙二醇；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素、來自繡球花屬的繡球酚、來自調(diào)料小茴香的姜黃色素、甘草甜素、異甘草苷、光甘草定、甘草素、鼠李甘草苷、新甘草苷、甘草黃酮醇、甘草異黃酮A和B、甘草異黃酮、芒柄花黃素光甘草酚、光甘草酮、光甘草素、hispglabridin A、hispglabridin B、黃芩素、曲尼司特、水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、木犀草素、黃腐醇、異黃腐醇、染料木黃酮、4，5，7-三羥黃烷酮、chalconaringenin、楊梅黃素、磷酸化橙皮苷、雞豆黃素A、桑色素、根皮素、水飛薊素、4-苯基-香豆素、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮；抗炎劑，例如吲哚美辛、七葉皂苷、曲呫諾、水楊酸鹽、二十碳三烯酸、甘草甜素；調(diào)節(jié)變態(tài)反應的試劑，例如色甘酸二鈉(DSCG)、曲尼司特、甘草素、異甘草素、黃芩素、聚苯乙烯磺酸鈉(N-PSS)、糖酸、硫酸軟骨素A衍生的寡糖(ChSAO)、保泰松、羥基保泰松、γ-亞麻酸、非諾洛芬；酚類化合物，例如二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、吲哚-2-羧酸、norlignane、鞣花單寧和urolithin B；維生素C、L-抗壞血酸-6-十六烷酯；皂角苷，例如長春藤皂苷元；半胱胺；紫錐花；迷迭香酸；鹽酸胍；L-精氨酸；表面活性劑，例如十四烷基硫酸鈉或者辛基酚乙氧基化物；以及上述物質的類似物和衍生物。下列組合物特別適合在該征候中使用。
這些化合物的合適劑量可以是例如提供每一劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些濃度是近似的并且可以根據(jù)化合物的效能和效果需要持續(xù)的時間進行調(diào)整吲哚美辛1mg/ml，肝素1mg/ml，硫酸化的多糖2mg/ml以及丙二醇、TRITON X-100、PEG、SPAN、PLURONIC L101和羧甲基纖維素均為10mg/ml。為了獲得該濃度，在可能暴露于若干毫升水性體液的體積中可能需要每毫升必須劑量的約10倍的劑量(例如總重10mg的吲哚美辛，20mg硫酸化的多糖、100mg丙二醇、TRITON、PEG、SPAN、PLURONIC或羧甲基纖維素)。因此，例如如果注射1ml HA溶液，其中該注射流體可能暴露于擴散經(jīng)過該區(qū)域的約2ml間質液，那么建議注射100mg的每一抑制劑以便在之后的一段時間內(nèi)確保達到每毫升10mg的劑量。劑量需求主要取決于注射體積和應用的位點。在較高流體周轉的位點，可以給予更多的透明質酸酶抑制劑。此外，如果使用控制方法從聚合劑型中釋放抑制劑，那么根據(jù)抑制劑的釋放譜、應用的位點、該區(qū)域的體液周轉以及諸如年齡和綜合健康等其它參數(shù)，本領域技術人員可以計算應用總劑量。
一方面，所述HI是金化合物，例如金諾芬、硫代蘋果酸金鹽和硫代蘋果酸金鈉、或硫代硫酸金鈉。這些化合物的劑量可以是例如提供每一劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些劑的濃度可以等于或高于實施例中約10mM的濃度。為了獲得該濃度，在可能暴露于少量毫升水性體液的區(qū)域中可能需要每毫升必須劑量的約10倍的劑量(例如總濃度為10mM的硫代蘋果酸金鹽)。因此，例如如果注射1ml HA溶液，其中該注射流體可能暴露于擴散經(jīng)過該區(qū)域的約2ml間質液，那么建議注射100mg的每一抑制劑以便在之后的一段時間內(nèi)確保達到每毫升10mg的劑量。劑量需求主要取決于注射體積和應用的位點。在較高流體周轉的位點，可以給予更多的透明質酸酶抑制劑。此外，如果使用控制方法從聚合劑型中釋放抑制劑，那么根據(jù)抑制劑的釋放譜、應用的位點、該區(qū)域的體液周轉以及諸如年齡和綜合健康等其它參數(shù)，本領域技術人員可以計算應用總劑量。
10.用于醫(yī)療裝置的負載HI的HA涂層HA可以用作醫(yī)療裝置的涂層以增強生物相容性和/或裝置表面的光滑性?？梢詫A直接涂覆在醫(yī)療裝置的表面或者先在醫(yī)療裝置的表面涂敷，然后再進一步修飾以增強HA在裝置表面的粘附性和/或保持。對HA的修飾可以包括交聯(lián)?？梢酝ㄟ^使用化學交聯(lián)、離子交聯(lián)、物理交聯(lián)或輻射誘導的交聯(lián)來完成交聯(lián)。HA涂層還可以包括透明質酸酶抑制劑，以便降低透明質酸酶誘導的HA的降解。這些HA-HI組合物可以被用于涂覆任何類型的醫(yī)療裝置，包括但不限于支架、導管、諸如起搏器導聯(lián)等電導聯(lián)、眼植入物、人工晶狀體、隱形眼鏡、分流器、旁路移植物、支架移植物、縫線以及骨固定裝置。
HI可以與聚合物體系組合以提供試劑的緩釋。適于輸送與HA組合的HI劑的物質可以由非可降解的或可降解的物質組成。合適的可降解的物質包括但不限于PEG交聯(lián)物質、明膠、膠原、GELFOAM、多糖、碳水化合物、蛋白質(例如白蛋白、酪蛋白、乳清蛋白、植物蛋白、魚蛋白等)、藻酸鹽、淀粉、纖維素衍生物(HPC等)、纖維素、纖維素酯、纖維素酯的混合物或共聚物、殼聚糖、殼聚糖衍生物、聚酯-聚烯基氧化物的嵌段共聚物(例如PLGA-PEG-PLGA、MePEG-PLGA等等)、可降解的聚酯、聚酐、聚正酯、聚磷酸酯、聚膦嗪以及氰基丙烯酸酯聚合物。在本發(fā)明的實踐中特別有用的可降解聚合物包括含有PEG的可注射的制劑，例如COSEAL、FOCALSEAL、SPRAYGEL、DURASEAL、或美國專利第5,874,500、6,051,648、6,166,130和6,312,725號中描述的包含4-臂巰基PEG(10K)、4-臂NHS PEG(10K)和甲基化膠原的組合物、含有纖維蛋白原的制劑，例如FLOSEAL或TISSEAL，REPEL或FLOWGEL，以及其它可以分泌的低分子量聚合物。適于輸送與HA組合的HI的可降解物質包括包含混合時形成聚甲基丙烯酸甲脂(PMMA)的PVA、PVP、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸甲酯苯乙烯(MMA-苯乙烯)的交聯(lián)組合物，或者骨水泥(例如由Stryker Howmedica制造的SIMPLEX P、由Zimmer制造的ZIMMER REGULAR和ZIMMER LOW VISCOSITY CEMENT、由Smith and Nephew制造的PALACOS、由Wright Medical制造的CMW-1和CMW-2、由DePuy制造的DEPUY ENDURANCE)、合成網(wǎng)狀骨空隙填充劑(例如CORTOSS，Orthovita)、pHEMA、聚(乙烯基PEG)、聚苯乙烯磺酸酯、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸以及文獻中已知形成水凝膠的其它聚合物。其它組合物包括上述試劑的混合物或共聚物。
在上述實施方案的實踐中，本領域技術人員明顯可以理解潛在地，任何透明質酸酶抑制劑均可以單獨使用或組合使用。在醫(yī)療裝置涂層中用于與HA組合的HI劑的實例包括硫代蘋果酸金鹽、肝素、巖藻多糖、硫酸葡聚糖、丙二醇、羧甲基纖維素；類黃酮類，例如縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素、芹菜素、來自繡球花屬的繡球酚、來自調(diào)料小茴香的姜黃色素、甘草甜素、異甘草苷、光甘草定、甘草素、鼠李甘草苷、新甘草苷、甘草黃酮醇、甘草異黃酮A和B、甘草異黃酮、芒柄花黃素光甘草酚、光甘草酮、光甘草素、hispglabridin A、hispglabridin B、黃芩素、曲尼司特、水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、木犀草素、黃腐醇、異黃腐醇、染料木黃酮、4，5，7-三羥黃烷酮、chalconaringenin、楊梅黃素、磷酸化橙皮苷、雞豆黃素A、桑色素、根皮素、水飛薊素、4-苯基-香豆素、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮；抗炎劑，例如吲哚美辛、七葉皂苷、曲呫諾、水楊酸鹽、二十碳三烯酸、甘草甜素；調(diào)節(jié)變態(tài)反應的試劑，例如色甘酸二鈉(DSCG)、曲尼司特、甘草素、異甘草素、黃芩素、聚苯乙烯磺酸鈉(N-PSS)、糖酸、硫酸軟骨素A衍生的寡糖(ChSAO)、保泰松、羥基保泰松、γ-亞麻酸、非諾洛芬；酚類化合物，例如二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、吲哚-2-羧酸、norlignane、鞣花單寧和urolithin B；維生素C、L-抗壞血酸-6-十六烷酯；皂角苷，例如長春藤皂苷元；半胱胺；紫錐花；迷迭香酸；鹽酸胍；L-精氨酸；表面活性劑，例如十四烷基硫酸鈉或者辛基酚乙氧基化物；以及上述物質的類似物和衍生物。
這些化合物的合適劑量可以是例如提供每一試劑的穩(wěn)定濃度以得到對透明質酸酶的延長的抑制效果。這些試劑的濃度可以是微摩爾至毫摩爾范圍的并且可以根據(jù)化合物的效能以及所需要的效果的持續(xù)時間來調(diào)整這些試劑的濃度。
本領域的技術人員可以十分明顯地理解，任何前述的HI劑、其衍生物和類似物均可以被用于對以上組合物進行變化而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。還應該理解，在含有或不含有聚合物載體時，均可以在透明質酸植入物中使用HI并且改變載體并不偏離本發(fā)明的范圍。可以將HI劑的組合用于形成持久的HA植入物而不偏離本發(fā)明的精神和范圍也是明顯的。
實施例實施例1使用透明質酸粘度測定分析來評價透明質酸降解的抑制使用粘度測定分析(透明質酸粘度測定分析)來確定不同化合物對透明質酸酶引起的透明質酸(HA)降解的影響(例如參見，“RheologicalStudy on Mixtures of Different Molecular Weight Hyaluronates，”(不同分子量的透明質酸鹽的混合物的流變學研究)Berriaud，N.，et al.，Int.J.Biol.Macromol.(1994)；16(3)p.137-142和“Determination ofExtracellular Matrix Degradation by Free Radicals using ViscosityMeasurement of Hyaluronan，”(使用透明質烷的粘度測定來確定由自由基引起的細胞外基質的降解)Deguine V.，et al.，Clinica Chimica Acta(1997)；262(1-2)p.147-52)。樣品經(jīng)過粘度計的時間與樣品中HA的粘度成比例，其中樣品中HA的粘度與HA的分子量成比例。因為酶(透明質酸酶)分解HA，所以聚合物的分子量降低，溶液的粘度下降，因而溶液更加迅速地通過粘度計。所以較短的通過時間表明較低分子量的HA(即透明質酸酶引起較多的HA分解)，而較長的通過時間表明較高分子量的HA(即透明質酸酶引起較少的HA分解)。
如下制備0.07％HA溶液在閃爍瓶中混合15ml HA和20μl pH5.5的磷酸鹽緩沖液(1M)。將酶抑制劑(MePEG2000-PLLA(60∶40)二嵌段共聚物、肝素、硫代蘋果酸金鹽和吲哚美辛)稱重并加入至每一閃爍瓶中以得到表1所示的最終濃度。在37℃下使溶液溶解一夜。檢測pH并將其調(diào)整至6.0。通過測量通過Ubbelohde PC1粘度計的時間來分析溶液的粘度。向每一閃爍瓶中加入50μl的透明質酸酶(620μl水中含有4.2mg)(最終濃度約為6單位/ml)并振蕩孵育一夜。孵育一夜后記錄每一溶液的粘度計讀數(shù)。表1和圖1給出了結果(注意除了HA對照以外的全部樣品中均加入了透明質酸酶)。數(shù)據(jù)表明，肝素、硫代蘋果酸金鹽、吲哚美辛和二嵌段共聚物抑制透明質酸酶的活性，因為透明質酸溶液的粘度保持高于酶對照的粘度。
表1樣品 HA溶液的粘度 樣品通過粘度計(HA對照的％) 的時間(分鐘)HA對照 100 2.6HA/酶20 0.53HA/酶/肝素(1mg/ml) 95 2.46HA/酶/硫代蘋果酸金 65 1.68鹽(10mM)HA/酶/吲哚美辛(1091 2.36
mg/ml)HA/二嵌段聚合物100 1.93(45mg/ml)HA/酶/二嵌段聚合物 89.6 1.73(45mg/ml)實施例2透明質酸降解的抑制利用實施例1所述的操作，使用粘度測定法來確定硫酸化的多糖(硫酸葡聚糖、巖藻多糖和肝素)、丙二醇和吲哚美辛對透明質酸酶引起的HA降解的影響。表2和圖2給出了結果。數(shù)據(jù)表明，肝素、吲哚美辛、丙二醇、硫酸葡聚糖和巖藻多糖抑制透明質酸酶的作用，因為透明質酸溶液的粘度保持高于酶對照的粘度。
表2樣品HA的降解(相對于對照t＝0的粘度％)HA對照 82酶對照 2酶對照 2硫酸葡聚糖(2mg/ml) 87巖藻多糖(2mg/ml)92肝素(2mg/ml)86丙二醇(10mg/ml) 65吲哚美辛(1mg/ml)73實施例3TRITON X-100對透明質酸降解的抑制使用實施例1所述的方法來分析TRITON X-100對抑制透明質酸酶引起的HA降解的影響。表3和圖3給出了用樣品通過粘度計的時間來表示的結果。數(shù)據(jù)表明，TRITON X-100抑制透明質酸酶的作用，因為透明質酸溶液的粘度保持高于酶對照的粘度。
表3樣品樣品通過粘度計的時間(分鐘)HA對照 5.2HA/酶 0.46TRITON X-100(1mg/ml)5.83TRITON X-100(1mg/ml)/酶 2.33TRITON X-100(3.3mg/ml) 5.6TRITON X-100(3.3mg/ml)/酶 3.33TRITON X-100(10mg/ml) 5.46TRITON X-100(10mg/ml)/酶4.33實施例4不同化合物對透明質酸酶引起的HA降解的影響使用實施例1所述的方法來分析硫酸葡聚糖、TWEEN 40、SPAN80、PEG 3350、丙二醇、PLURONIC F127、PLURONIC L101和羧甲基纖維素(CMC)對酶引起的HA降解的影響。表4和圖4給出了結果。數(shù)據(jù)表明，試劑硫酸葡聚糖、SPAN 80、PEG、丙二醇、PLURONIC L101和羧甲基纖維素(CMC)抑制透明質酸酶的作用，因為透明質酸溶液的粘度保持高于酶對照的粘度。令人吃驚的是，另兩種表面活性劑TWEEN 40和PLURONIC F127沒有相同程度地抑制所述酶。
表4樣品樣品通過粘度計的時間(分鐘)HA對照 5.2HA/酶 0.46
硫酸葡聚糖(10mg/ml) 8.5硫酸葡聚糖(10mg/ml)/酶 8TWEEN 40(10mg/ml) 3.88TWEEN 40(10mg/ml)/酶0.33SPAN 80(10mg/ml)5.5SPAN 80(10mg/ml)/酶 4.36PEG 3350(10mg/ml) 6PEG 3350(10mg/ml)/酶2.16丙二醇(10mg/ml) 5.85丙二醇(10mg/ml)/酶 5PLURONIC L101(10mg/ml) 6.3PLURONIC L101(10mg/ml)/酶 1.93PLURONIC F127(10mg/ml) 5.5PLURONIC F127(10mg/ml)/酶 0.12CMC(10mg/ml)14.23CMC(10mg/ml)/酶 12.33實施例5透明質酸酶抑制劑的劑量響應效應制備了含有或不含有不同透明質酸抑制劑的透明質酸制劑。為了測試這些抑制劑的劑量響應效應，制備含有不同濃度抑制劑的透明質酸制劑，所述濃度范圍例如是0.1mg/mL至20mg/mL?？梢愿鶕?jù)抑制劑的效能調(diào)節(jié)抑制劑的濃度?？梢员粶y試的抑制劑的實例是硫酸葡聚糖、PLURONIC F127、CMC、TWEEN 40、丙二醇、巖藻多糖、吲哚美辛、肝素和硫代蘋果酸金鈉。根據(jù)標準技術將制劑滅菌。獲得無胸腺小鼠并且準備進行對照透明質酸制劑或者負載有抑制劑的制劑的皮下注射。注射制劑的量可以是0.1mL至0.5mL。記錄制劑的重量并且皮下推注的指定量典型地在動物后部背部上的脊柱任意一側上形成凝膠囊。對于每一注射的動物，注射的位置應該相同。在一周至數(shù)月的不同時間內(nèi)，處死動物并在注射位點打開皮膚，移除剩余的制劑并稱重。制劑的重量與抑制劑的劑量以及在動物中的持續(xù)時間有關，從而確定抑制劑對透明質酸制劑分解的影響。抑制劑類型和延長了相對于對照的透明質酸制劑保持完整的時間的劑量范圍，表明對降低透明質酸降解有所改善。可以通過在向動物注射前向制劑中加入透明質酸酶以便更好地控制透明質酸的分解速率使該實驗變化。
實施例6通過噴霧干燥制備負載吲哚美辛的微球將3.6g聚(D，L-丙交酯-co-乙交酯)[PLGA](85∶15，AbsorbablePolymers International)溶于200ml二氯甲烷中。向聚合物溶液中加入400mg吲哚美辛并且使用Buchi臺式噴霧干燥器對所得溶液進行噴霧干燥。噴霧干燥器的參數(shù)如下入口溫度50℃，出口溫度＜39℃，吸氣器100％，流速700l/hr。室溫下在真空中將收集到的微球干燥一夜以得到大小范圍小于約10微米(通常是約0.5至2微米)的均勻的球狀顆粒。
實施例7通過水包油的方法制備負載吲哚美辛的微球(＜10微米)將800mg PLG(85∶15，Absorbable Polymers International)溶于20ml二氯甲烷中。向溶解的聚合物溶液中加入160mg吲哚美辛。將100ml新鮮制備的10％聚乙烯醇(PVA)溶液加入至600ml的燒杯中。以2000rpm的速率攪拌PVA溶液30分鐘。向PVA溶液中滴加聚合物/二氯甲烷溶液同時使用Fisher DYNA-MIX攪拌器以2000rpm的速率攪拌。加入完成后再攪拌溶液3小時。將微球溶液轉移至若干50mL的帶有刻度的一次性聚丙烯尖底離心管中并在2600rpm的速率下離心分離10分鐘。傾瀉出水層并使用去離子水將微球再次混懸。離心分離、傾瀉以及再次混懸的步驟重復3次。將混合的洗滌的微球轉移至一個離心管中，在丙酮/干冰浴中冷凍，然后凍干。凍干步驟之后在真空中將微球進一步干燥約24小時。
實施例8通過水包油型乳劑的方法制備含有吲哚美辛的微球(50-100微米)通過實施例7中相同的操作，使用1％PVA溶液和500rpm的攪拌速率制備平均大小約為50-100微米的微球。
實施例9通過水包油包水的方法制備負載肝素的微球將肝素(20至40mg)加入至750μL去離子水中并且渦旋振蕩2分鐘。將200mg PLGA(85∶15，Absorbable Polymers International)溶于7ml二氯甲烷中。向二氯甲烷溶液中加入該水性藥物溶液并使用POLYTRON勻漿器(4檔速率)將混合物乳化20秒。將此溶液加入50ml5％PVA溶液中并使用POLYTRON勻漿器(2檔速率)乳化10秒。然后在100ml 1％PVA溶液中稀釋所得到的復乳劑，電磁攪拌該體系3小時以便使二氯甲烷蒸發(fā)。將微球溶液轉移至若干50mL的帶有刻度的一次性聚丙烯尖底離心管中并在2600rpm的速率下離心分離10分鐘。傾瀉出水層并使用去離子水將微球再次混懸。離心分離、傾瀉以及再次混懸的步驟重復3次。將混合的洗滌的微球轉移至一個離心管中，在丙酮/干冰浴中冷凍，然后凍干。凍干步驟之后在真空中將微球進一步干燥約24小時。
實施例10通過水包油包水的方法制備負載硫酸葡聚糖的微球將硫酸葡聚糖(20mg)加入至750μL去離子水中并渦旋振蕩2分鐘。將200mg PDLLA(Absorbable Polymers International)溶于7ml二氯甲烷中。向二氯甲烷溶液中加入該水性HI溶液并使用POLYTRON勻漿器(4檔速率)將混合物乳化20秒。向50ml 5％PVA溶液中加入該溶液并使用Polytron勻漿器(2檔速率)乳化10秒。然后在100ml 1％PVA溶液中稀釋所得到的復乳劑，電磁攪拌該體系3小時以便使二氯甲烷蒸發(fā)。將微球溶液轉移至若干50mL的帶有刻度的一次性聚丙烯尖底離心管中并在2600rpm的速率下離心分離10分鐘。傾瀉出水層并使用去離子水將微球再次混懸。離心分離、傾瀉以及再次混懸的步驟重復3次。將混合的洗滌的微球轉移至一個離心管中，在丙酮/干冰浴中冷凍，然后凍干。凍干步驟之后在真空中將微球進一步干燥約24小時。
實施例11負載巖藻多糖的微球將200mg PLGA(85∶15，Absorbable Polymers International)溶于7ml二氯甲烷中。將2g巖藻多糖置于低溫研磨管中并使用6850Freezer/Mill(AST Scientific)進行低溫研磨。向聚合物溶液中加入40mg研磨的巖藻多糖。使用POLYTRON勻漿器(型號PT6100)將該溶液均勻化。將100ml新鮮制備的5％聚乙烯醇(PVA)溶液加入至600ml的燒杯中。以2000rpm的速率攪拌PVA溶液30分鐘。向PVA溶液中滴加聚合物/二氯甲烷溶液同時使用Fisher DYNA-MIX攪拌器以2000rpm的速率攪拌。加入完成后再攪拌溶液3小時。將微球溶液轉移至若干50mL的帶有刻度的一次性聚丙烯尖底離心管中并在2600rpm的速率下離心分離10分鐘。傾瀉出水層并使用去離子水將微球再次混懸。離心分離、傾瀉以及再次混懸的步驟重復3次。將混合的洗滌的微球轉移至一個離心管中，在丙酮/干冰浴中冷凍，然后凍干。凍干步驟之后在真空中將微球進一步干燥約24小時。
實施例12通過水包油包水的方法制備負載硫代蘋果酸金鹽的微球將水合硫代蘋果酸金鈉[Aldrich，cat157201](20至40mg)加入至750μL去離子水中并渦旋振蕩2分鐘。將200mg PLGA(85∶15，Absorbable Polymers International)溶于7ml二氯甲烷。向二氯甲烷溶液中加入該水性藥物溶液并使用POLYTRON勻漿器(4檔速率)將混合物乳化20秒。向50ml 5％PVA溶液中加入該溶液并使用POLYTRON勻漿器(2檔速率)乳化10秒。然后在100ml 1％PVA溶液中稀釋所得到的復乳劑，電磁攪拌該體系3小時以便使二氯甲烷蒸發(fā)。將微球溶液轉移至若干50mL的帶有刻度的一次性聚丙烯尖底離心管中并在2600rpm的速率下離心分離10分鐘。傾瀉出水層并使用去離子水將微球再次混懸。離心分離、傾瀉以及再次混懸的步驟重復3次。將混合的洗滌的微球轉移至一個離心管中，在丙酮/干冰浴中冷凍，然后凍干。凍干步驟之后在真空中將微球進一步干燥約24小時。
實施例13通過噴霧干燥制備負載巖藻多糖的微球將3.6g聚(D，L-丙交酯-co-乙交酯)[PLGA](85∶15，AbsorbablePolymers International)溶于200ml二氯甲烷中。將2g巖藻多糖置于冷凍研磨管中并使用6850Freezer/Mill(AST Scientific)進行低溫研磨。向聚合物溶液中加入400mg研磨的巖藻多糖。使用POLYTRON勻漿器(型號PT6100)將溶液均勻化。使用Buchi臺式噴霧干燥器對所得溶液進行噴霧干燥并攪拌聚合物溶液以確保巖藻多糖不沉淀。使用的噴霧干燥器的參數(shù)如下入口溫度50℃，出口溫度＜39℃，吸氣器100％，流速700l/hr。室溫下在真空中將收集到的微球干燥一夜，以得到大小范圍小于約10微米(通常是約0.5至2微米)的均勻的球狀顆粒。
實施例14負載HI的SYNVISC分別將20mg如實施例6-13制備的負載HI的微球稱重裝入3mL帶有端帽的3mL注射器中。將活塞放入注射器并將注射器倒置。移去端帽并將活塞推至0.1ml刻度處。蓋上端帽。使用雙注射器連接器將含有SYNVISC的2mL注射器與含有微球的注射器連接。然后將SYNVISC從一個注射器中轉移至另一個注射器中并再次轉移回到原來的注射器中，重復至少20次。一旦SYNVISC/微球混合物位于起始的注射器中，將注射器從雙注射器連接器上拆下，并且該制劑是準備好可以使用的。
實施例15
使用負載HI的透明質酸矯形植入物來預防椎間盤手術或椎板切除術后的瘢痕化的方法包含透明質酸抑制劑的透明質酸植入物被用于椎間盤或椎板切除術手術中以避免在脊神經(jīng)根周圍形成瘢痕并避免壓迫脊神經(jīng)根，從而減少手術后的疼痛和其它神經(jīng)學癥狀。在該征候中，作為降低被包圍的脊神經(jīng)壓力的手術操作的一部分，將含有透明質酸酶抑制劑的含有透明質酸的組合物注射入脊神經(jīng)根周圍的組織中。
如下制備透明質酸-透明質酸酶抑制劑物質1.如下準備含有2ml透明質酸(例如SYNVISC；HYLAN G-F 20(Genzyme Biosurgery，Ridgefield，NJ)-應該注意到，也可以使用其它來源的HA，例如RESTYLANE、HYLAFORM、PERLANE、SEPRAFILM、SEPRACOAT、INTERGEL和LUBRICOAT)的2.25ml玻璃注射器以含有透明質酸酶抑制劑a.使用硫代蘋果酸金鹽作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例7中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的硫代蘋果酸金鹽濃度(即將總共10mg包含在微球中的硫代蘋果酸金鹽引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的硫代蘋果酸金鹽是臨床有益的，但是10mg是優(yōu)選的劑量。
b.使用吲哚美辛作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例5、6和7中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的吲哚美辛濃度(即將總共2mg包含在微球中的吲哚美辛引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.2mg至約20mg范圍的吲哚美辛是臨床有益的，但是2mg是優(yōu)選的劑量。
c.使用丙二醇作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6至13中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的丙二醇濃度(即將總共20mg包含在微球中的丙二醇引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的丙二醇是臨床有益的，但是20mg是優(yōu)選的劑量。
d.使用硫酸葡聚糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例10中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的硫酸葡聚糖濃度(即將總共20mg包含在微球中的硫酸葡聚糖引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的硫酸葡聚糖是臨床有益的，但是20mg是優(yōu)選的劑量。
e.使用巖藻多糖為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例11和13中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的巖藻多糖濃度(即將總共10mg包含在微球中的巖藻多糖引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的巖藻多糖是臨床有益的，但是10mg是優(yōu)選的劑量。
f.使用肝素作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例9中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的肝素濃度(即將總共2mg包含在微球中的肝素引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的肝素是臨床有益的，但是2mg是優(yōu)選的劑量。
2.將SYNVISC/微球透明質酸抑制劑材料滅菌并且使用下述方法對患者給藥。在整個手術操作中必須采用嚴格的無菌給藥技術。
減輕脊神經(jīng)上壓力的開放性手術通常涉及切除破裂的腰推間盤(以及部分圍繞脊神經(jīng)根的骨-也被稱為椎板切除術)。在全身麻醉下將患者置于改變的跪位。在背部中線處進行切口并將組織切開以便暴露合適的空隙；切開黃韌帶并且在某些情況下，除去部分骨薄板以便得到足夠的視野。小心地拉出神經(jīng)根以暴露環(huán)中的疝出的碎片和缺損。通常，由環(huán)中的撕裂處進入椎間盤腔并且使用垂體鑷將髓核的碎片除去。也小心地除去隔離在椎間盤空間中或椎間盤空間外的任何其它碎片并且徹底清洗椎間盤空間以除去任何殘留的碎片。如果在硬腦脊膜中出現(xiàn)裂縫，那么使用經(jīng)常用纖維蛋白膠進行增強的縫線來縫合硬腦脊膜。然后使用吸收性縫線來縫合組織。
作為相對于開放性手術的另一選擇，顯微椎間盤切除(顯微椎間盤切除術)可以作為門診患者操作進行并且作為疝出椎間盤的介入選擇在很大程度上代替了椎板切除術。從受影響的椎間盤之上的棘突至該受影響的椎間盤之下的棘突之間切開1英寸的切口。使用手術顯微鏡，將組織切開至黃韌帶并且從薄板中除去骨直至可以清晰地識別神經(jīng)根。小心地拉回神經(jīng)根并且使環(huán)中的裂縫在放大下可見。使用微椎間盤鑷子通過環(huán)中的裂縫除去椎間盤碎片并且除去任何隔離的椎間盤碎片。與使用椎板切除術一樣，清洗椎間盤空間以除去任何椎間盤碎片，修復任何硬腦脊膜裂縫并且使用吸收性縫線縫合組織。應該注意到，可以使用前側的(腹部的)方法來進行開放的和內(nèi)窺鏡的腰椎間盤切除。頸和胸椎間盤切除與腰部的操作類似并且可以使用背側的方法(使用椎板切除術)或者使用具有融合切口的前側椎間盤切除術。
不幸的是，無論如何進行手術操作，在大量患者中，圍繞神經(jīng)根的組織中的術后瘢痕化對神經(jīng)施加了壓力，造成了刺激，并導致疼痛復發(fā)和其它神經(jīng)學癥狀。為了降低該并發(fā)癥的發(fā)生率，在開放性手術或顯微椎間盤切除術中，使用HA/微球透明質酸酶抑制劑植入物(上述的)滲入神經(jīng)周圍的區(qū)域。HA-透明質酸酶抑制劑(HI)植入物防止鄰近組織與神經(jīng)接觸并且防止瘢痕組織在脊神經(jīng)上形成并最終擠壓脊神經(jīng)周圍。所述HA-HI植入物可以降低脊柱手術失敗的發(fā)生率，防止疼痛復發(fā)和其它神經(jīng)學癥狀，并減少進行重復外科介入以除去瘢痕組織的需要。
實施例16使用負載HI的透明質酸手術粘連屏障來抑制手術粘連的方法將含有HI的透明質酸制劑輸送至靶組織或器官的表面；尤其是在腹部或婦科手術操作過程中以防止粘連形成。將緩釋形式的HI加入至含有透明質酸的手術粘連屏障(例如薄膜、凝膠或噴霧劑)中，以降低HA的降解速率并且延長組合物/植入物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時。
粘連可以作為任何手術操作的一部分發(fā)生，但是被認為是腹部手術后腸梗阻的主要誘因并且是婦科手術后疼痛和不育的主要誘因。雖然事實上器官可以是粘連的位點，但是女性生殖道(特別是輸卵管)和腸(小腸和大腸)尤其易于形成粘連。
為了在內(nèi)窺鏡和開放性手術操作中防止粘連，按照以下方法制備透明質酸-透明質酸酶抑制劑粘連屏障材料1.對于內(nèi)窺鏡操作，如下制備2ml流體透明質酸(SEPRAGEL；化學修飾的透明質酸鈉/羧甲基纖維素，來自Genzyme Biosurgery(Ridgefield，NJ)的可吸收的粘連屏障-應該注意到，也可以使用其它來源的HA，例如RESTYLANE、HYLAFORM、PERLANE、SEPRACOAT、INTERGEL和LUBRICOA)以含有透明質酸酶抑制劑a.使用硫代蘋果酸金鹽作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例12中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的硫代蘋果酸金鹽濃度(即將總共10mg包含在微球中的硫代蘋果酸金鹽引入至2ml的SEPRAGEL中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的硫代蘋果酸金鹽是臨床有益的，但是約10mg是優(yōu)選的劑量。
b.使用吲哚美辛作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6、7和8中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的吲哚美辛濃度(即將總共2mg包含在微球中的吲哚美辛引入至2ml的SEPRAGEL中)。應該理解，約0.2mg至約20mg范圍的吲哚美辛是臨床有益的，但是約2mg是優(yōu)選的劑量。
c.使用丙二醇作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6至13中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的丙二醇濃度(即將總共20mg包含在微球中的丙二醇引入至2ml的SEPRAGEL中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的丙二醇是臨床有益的，但是約20mg是優(yōu)選的劑量。
d.使用硫酸葡聚糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例5中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的硫酸葡聚糖濃度(即將總共20mg包含在微球中的硫酸葡聚糖引入至2ml的SEPRAGEL中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的硫酸葡聚糖是臨床有益的，但是約20mg是優(yōu)選的劑量。
e.使用巖藻多糖為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6和8中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的巖藻多糖濃度(即將總共10mg包含在微球中的巖藻多糖引入至2ml的SEPRAGEL中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的巖藻多糖是臨床有益的，但是約10mg是優(yōu)選的劑量。
f.使用肝素作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例4中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的肝素濃度(即將總共2mg包含在微球中的肝素引入至2ml的SEPRAGEL中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的肝素是臨床有益的，但是約2mg是優(yōu)選的劑量。
2.對于開放性手術操作，可以使用含有透明質酸酶抑制劑的HA薄膜并且可以按照如下方法制備制備3″×5″或5″×6″的透明質酸薄膜(SEPRAFILM；化學修飾的透明質酸鈉/羧甲基纖維素，來自Genzyme Biosurgery，Ridgefield，NJ的可吸收的粘連屏障-應該注意到，也可以使用其它來源的HA薄膜，例如INTERCEED)以含有透明質酸酶抑制劑a.使用硫代蘋果酸金鹽作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例12中所描述的聚合物微球中)以便得到每平方英寸透明質酸薄膜中含有0.5mg硫代蘋果酸金鹽的濃度(即將總共7.5mg包含在微球中的硫代蘋果酸金鹽引入至3″×5″的SEPRAFILM片中或將總共15mg包含在微球中的硫代蘋果酸金鹽引入至5″×6″的SEPRAFILM片中)。應該理解，每平方英寸透明質酸薄膜中含有約0.01mg至約5mg的硫代蘋果酸金鹽是臨床有益的，但是約0.5mg/sq.in是優(yōu)選的劑量。
b.使用吲哚美辛作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例5、6和7中所描述的聚合物微球中)以便得到每平方英寸透明質酸薄膜中含有1mg吲哚美辛的濃度(即將總共15mg包含在微球中的吲哚美辛引入至3″×5″的SEPRAFILM片中或將總共30mg包含在微球中的吲哚美辛引入至5″×6″的SEPRAFILM片中)。應該理解，每平方英寸透明質酸薄膜中含有約0.01mg至約5mg的吲哚美辛是臨床有益的，但是約1mg/sq.in是優(yōu)選的劑量。
c.使用丙二醇作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6至13中所描述的聚合物微球中)以便得到每平方英寸透明質酸薄膜中含有1mg丙二醇的濃度(即將總共15mg包含在微球中的丙二醇引入至3″×5″的SEPRAFILM片中或將總共30mg包含在微球中的丙二醇引入至5″×6″的SEPRAFILM片中)。應該理解，每平方英寸透明質酸薄膜中含有約0.01mg至約20mg的丙二醇是臨床有益的，但是約1mg/sq.in是優(yōu)選的劑量。
d.使用硫酸葡聚糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例10中所描述的聚合物微球中)以便得到每平方英寸透明質酸薄膜中含有1mg硫酸葡聚糖的濃度(即將總共15mg包含在微球中的硫酸葡聚糖引入至3″×5″的SEPRAFILM片中或將總共30mg包含在微球中的硫酸葡聚糖引入至5″×6″的SEPRAFILM片中)。應該理解，每平方英寸透明質酸薄膜中含有約0.01mg至約20mg的硫酸葡聚糖是臨床有益的，但是約1mg/sq.in是優(yōu)選的劑量。
e.使用巖藻多糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例11和13中所描述的聚合物微球中)以便得到每平方英寸透明質酸薄膜中含有0.5mg巖藻多糖的濃度(即將總共7.5mg包含在微球中的巖藻多糖引入至3″×5″的SEPRAFILM片中或將總共15mg包含在微球中的巖藻多糖引入至5″×6″的SEPRAFILM片中)。應該理解，每平方英寸透明質酸薄膜中含有約0.005mg至約10mg的巖藻多糖是臨床有益的，但是約0.5mg/sq.in是優(yōu)選的劑量。
f.使用肝素作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例9中所描述的聚合物微球中)以便得到每平方英寸透明質酸薄膜中含有0.1mg肝素的濃度(即將總共1.5mg包含在微球中的肝素引入至3″×5″的SEPRAFILM片中或將總共3.0mg包含在微球中的肝素引入至5″×6″的SEPRAFILM片中)。應該理解，每平方英寸透明質酸薄膜中含有約0.001mg至約5mg的肝素是臨床有益的，但是約0.1mg/sq.in是優(yōu)選的劑量。
3.將HA/微球透明質酸酶抑制劑材料滅菌并使用下述方法對患者給藥。在整個手術操作中必須采用嚴格的無菌給藥技術。
因為潛在可應用的合適手術操作的數(shù)量很大，所以描述一般的腹腔鏡治療和剖腹術。對手術期間切開、清洗或處理的腹部腸系膜和盆腔內(nèi)器官應用負載HI的粘連屏障(如上述的凝膠或薄膜)。對于內(nèi)窺鏡操作，優(yōu)選通過內(nèi)窺鏡的側孔輸送可噴霧型制劑(例如液體或凝膠)。對于開放性手術操作，對損傷的腹膜內(nèi)組織應用HI-HA片。無論如何，手術區(qū)域應該盡可能的干燥并且應該徹底吸出過量的流體。
對于HI-HA薄膜，使用干燥儀器和/或手套輕輕地將膜剪切成期望的尺寸和形狀。通過產(chǎn)品中支架的開放末端暴露1-2cm的膜。如果需要，通過輕輕地彎曲膜/支架或將膜/支架彎成拱形來輔助其進入盆腹腔。使用時避免與組織表面接觸，直至直接應用到位點上。如果發(fā)生接觸，那么可以適度的使用標準沖洗液輕輕地將膜從非預期的組織表面移去。通過使用干燥的手套或裝置輕輕地將膜向下按壓，從而使暴露的屏障首先粘附在組織或器官上的期望位置，然后移去支架。充分擴大屏障使其超過切口和與之相關的手術創(chuàng)傷的邊緣以便實現(xiàn)足夠的覆蓋。如果需要，使用標準沖洗液輕輕地潤濕屏障以輔助其在組織或器官的輪廓周圍覆蓋。使單個屏障之間有足夠的重疊以確保創(chuàng)傷組織表面的完全、連續(xù)的覆蓋。應該使用外科醫(yī)生的標準技術來合攏盆腹腔。
向透明質酸粘連屏障中加入透明質酸酶抑制劑使得屏障在體內(nèi)更長時間地起作用并且降低在相鄰器官或組織之間形成瘢痕組織的可能性。HI-HA植入物可以降低腹部和婦科手術后可能形成的粘連的發(fā)生率和/或嚴重性。粘連監(jiān)守可以避免疼痛、腸梗阻和不育的發(fā)生，并且減少進行重復手術介入以除去瘢痕組織的需要。應該注意到，可以將含有HI-HA的手術粘連屏障用于多種手術操作，包括腹部手術、婦科和盆腔手術、脊柱手術、心臟手術、腱和外周神經(jīng)手術、以及竇手術。
實施例17使用負載HI的透明質酸植入物來增大軟組織缺損的方法HA-HI植入物被用于中度至深度真皮移植以矯正中度至重度面部皺紋和褶。含有透明質酸酶抑制劑(HI)的可注射透明質酸組合物可以造成延長的耐久性(即降低HA的降解速率)并且延長組合物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時，減少隨后重復注射的次數(shù)。
如下制備用于真皮注射的透明質酸-透明質酸酶抑制劑材料1.準備含有0.5ml或1.0ml植入物材料(可以從Q-Med AB，Sweden得到的，穩(wěn)定并混懸于pH＝7的生理緩沖液中并且濃度為20mg/ml的RESTYLANE透明質酸凝膠材料)的載藥玻璃注射器以含有透明質酸酶抑制劑并將該載藥玻璃注射器安裝上無菌細刻度針頭(30G ×1/2″)。應該注意到，也可以使用其它來源的HA，例如HYLAFORM(Genzyme Corporation)、PERLANE、SEPRAGEL和INTERGEL。如下將透明質酸酶引入該HA可注射劑中a.使用硫代蘋果酸金鹽作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例12中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的硫代蘋果酸金鹽濃度(即將總共5mg包含在微球中的硫代蘋果酸金鹽引入至1ml的RESTYLANE中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的硫代蘋果酸金鹽是臨床有益的，但是約5mg是優(yōu)選的劑量。
b.使用吲哚美辛作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6、7和8中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的吲哚美辛濃度(即將總共1mg包含在微球中的吲哚美辛引入至1ml的RESTYLANE中)。應該理解，約0.2mg至約20mg范圍的吲哚美辛是臨床有益的，但是約1mg是優(yōu)選的劑量。
c.使用丙二醇作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6至13中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的丙二醇濃度(即將總共10mg包含在微球中的丙二醇引入至1ml的RESTYLANE中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的丙二醇是臨床有益的，但是約10mg是優(yōu)選的劑量。
d.使用硫酸葡聚糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例10中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的硫酸葡聚糖濃度(即將總共10mg包含在微球中的硫酸葡聚糖引入至1ml的RESTYLANE中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的硫酸葡聚糖是臨床有益的，但是約10mg是優(yōu)選的劑量。
e.使用巖藻多糖為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例11和13中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的巖藻多糖濃度(即將總共5mg包含在微球中的巖藻多糖引入至1ml的RESTYLANE中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的巖藻多糖是臨床有益的，但是約5mg是優(yōu)選的劑量。
f.使用肝素作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例9中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的肝素濃度(即將總共1mg包含在微球中的肝素引入至1ml的RESTYLANE中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的肝素是臨床有益的，但是約1mg是優(yōu)選的劑量。
3.將RESTYLANE/微球透明質酸酶抑制劑材料滅菌并使用下述方法對患者給藥。在整個手術操作中必須采用嚴格的無菌給藥技術。
將患者置于桌背稍微傾斜的坐位。評價患者所需的疼痛處理。如果需要，使用局部的利多卡因和/或丙胺卡因進行麻醉。使用酒精或其它合適的消毒溶液來清理需要治療的區(qū)域。
通過細刻度針頭(30g或32g)將RESTYLANE-HI植入物給藥。對于每一次治療，每一治療位點的通常用量低于2mL。在注射前，小心地擠壓注射器的活塞桿直至可以在針頭的尖部觀察到小液滴。以與皺紋或褶相平行約30°角插入針頭。針頭的斜面應該朝上并且應該將所述材料注射入真皮的中部。對真皮中部安置，針頭輪廓應該是可見的但不應該可以看其顏色。如果RESTYLANE-HI注射的太深或者到肌肉內(nèi)，那么作用的持續(xù)時間將會變短。如果RESTYLANE-HI注射的太淺，那么會導致可見的小塊和/或淡灰色的退色。
均勻按壓活塞桿而應用RESTYLANE-HI植入物，同時緩慢向后拉動針頭。在注射終了時皺紋應該被提起并消除。重要的是，應該在即將將針頭拉出皮膚之前停止注射以避免材料泄漏或終止在皮膚中過淺。
重要的是，僅僅矯正100％的期望的體積作用而并不過度矯正。對于皮膚輪廓缺陷，如果可以將缺陷手工拉伸至將其消除的位置，那么可以得到最佳的結果。矯正的程度和持續(xù)時間取決于需要治療的缺陷的性質、植入物位點的組織應力、植入物在組織中的深度以及注射技術。明顯的硬化的缺陷是難以矯正的。
關于注射深度的注射技術以及給藥量是可以變化的。已經(jīng)成功應用了線性縫合技術、連續(xù)穿刺注射或上述二者的組合。
當注射完成后，應該輕輕地按摩治療位點，使得其與周圍組織的輪廓相符。如果發(fā)生了過度矯正，那么用力按摩手指之間的區(qū)域或者頂著下面的表面骨頭用力按摩以便得到最佳的結果。
如果觀察到了所謂的“漂白”，即表面皮膚發(fā)白，那么應該立即停止注射并且按摩該區(qū)域直至其變回正常的顏色。
如果皺紋需要進一步治療，那么在若干皮膚位點處重復同樣的操作，直至得到滿意的結果?？赡苄枰褂肦ESTYLANE-HI植入物進行額外的治療以實現(xiàn)期望的矯正。對于患有局部腫脹的患者，有時難于在治療時評價矯正程度。在這些情況下，在治療1至2周后最好邀請患者復診。
如果治療后治療區(qū)域立即腫脹，那么可以短時間冰敷該位點。患者可能具有輕度至中度的注射位點反應，通常在數(shù)天內(nèi)即可消退。
可以與HI組合用于整容注射的其它合適的商品HA產(chǎn)品的實例包括來自Meiji Seika Kaisha，Ltd.(Japan)的ACHYAL、來自L.E.A.Derm(France)的JUVEDERM、來自Laboratoires O.R.GE V.MacDermol(France)的MACDERMOL以及來自Rofil Medical International(Holland)的ROFILAN Hylan Gel。HA-HI組合物還可以包含麻醉劑，例如利多卡因、苯佐卡因或丙胺卡因和/或神經(jīng)毒素，所述神經(jīng)毒素例如是肉毒桿菌毒素。
實施例18在眼部手術中使用負載HI的透明質酸的方法在眼部手術中，含有透明質酸酶抑制劑的透明質酸溶液與人工晶狀體的插入?yún)f(xié)同使用。
通過混合透明質酸酶抑制劑和透明質酸來制備負載HI的粘彈性物質。多種HA眼部產(chǎn)品可以與透明質酸酶抑制劑組合。例如，AMVISC、AMVISC PLUS和OCUCOAT(Bausch & Lomb)是在白內(nèi)障摘除、角膜移植和青光眼手術中用于維持眼睛形狀并且保護精密組織的高分子量的粘彈性可注射HA溶液?；贖A的眼用粘彈性產(chǎn)品包括來自Alcon Laboratories的PROVIS、VISCOAT、DUOVISC和CELLUGEL；來自Pharmacia & Upjohn的HEALON、HEALON G和HEALON 5；來自Allergan的VITRAX；來自Bio-Technology General的BIOLON；來自Anika Therapeutics/Staar Surgical的STAARVISC；來自Anika Therapeutics/Cytosol Opthalmics的SHELLGEL以及來自Novartis的UNIVISC。
雖然任何上述HA產(chǎn)品均是潛在可以使用的，在以下實施例中，使用下列方法將HEALON GV(來自Advanced Medical Optics)與透明質酸酶抑制劑組合1.準備含有HEALON GV(Advanced Medical Optics；每mlHEALON GV含有14mg透明質酸鈉7000)的一次性0.85ml或0.55ml玻璃注射器以含有透明質酸酶抑制劑a.使用硫代蘋果酸金鹽作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例12中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的硫代蘋果酸金鹽濃度(即將總共4.25mg包含在微球中的硫代蘋果酸金鹽引入至0.85ml的HEALON GV中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的硫代蘋果酸金鹽是臨床有益的，但是約4.25mg是優(yōu)選的劑量。
b.使用吲哚美辛作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6、7和8中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的吲哚美辛濃度(即將總共0.85mg包含在微球中的吲哚美辛引入至0.85ml的HEALON GV中)。應該理解，約0.05mg至約20mg范圍的吲哚美辛是臨床有益的，但是約0.85mg是優(yōu)選的劑量。
c.使用丙二醇作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6至13中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的丙二醇濃度(即將總共8.5mg包含在微球中的丙二醇引入至0.85ml的HEALON GV中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的丙二醇是臨床有益的，但是約8.5mg是優(yōu)選的劑量。
d.使用硫酸葡聚糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例10中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的硫酸葡聚糖濃度(即將總共8.5mg包含在微球中的硫酸葡聚糖引入至0.85ml的HEALON GV中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的硫酸葡聚糖是臨床有益的，但是約8.5mg是優(yōu)選的劑量。
e.使用巖藻多糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例11和13中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的巖藻多糖濃度(即將總共4.25mg包含在微球中的巖藻多糖引入至0.85ml的HEALON GV中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的巖藻多糖是臨床有益的，但是約4.25mg是優(yōu)選的劑量。
f.使用肝素作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例9中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的肝素濃度(即將總共0.85mg包含在微球中的肝素引入至0.85ml的HEALON GV中)。應該理解，約0.05mg至約100mg范圍的肝素是臨床有益的，但是約0.85mg是優(yōu)選的劑量。
2.將HEALON GV/微球透明質酸酶抑制劑材料滅菌并使用下述方法對患者給藥。在整個手術操作中必須采用嚴格的無菌給藥技術。
HA的粘彈性溶液已經(jīng)被用作組織潤滑劑并且還在眼內(nèi)的手術中維持眼淚的體積(例如在白內(nèi)障摘除手術、人工晶狀體移植、視網(wǎng)膜復置、晶狀體乳化手術、角膜移植以及青光眼過濾手術中作為玻璃體的替代物)。通常，通過配有27刻度套管的注射器向玻璃體腔中緩慢引入足夠量的HI-HEALON。通過引導該注射，為了安全切除和牽引的釋放，HI-HEALON可被用于將膜(例如視網(wǎng)膜前膜)從視網(wǎng)膜隔開。HEALON還可以用于調(diào)動組織至期望的位置，例如輕輕地推回脫落的視網(wǎng)膜或者展開視網(wǎng)膜瓣，并且輔助維持視網(wǎng)膜離開鞏膜以便復置。
實施例19使用負載HI的透明質酸植入物處理骨關節(jié)炎的方法向關節(jié)內(nèi)輸送含有透明質酸酶抑制劑的透明質酸組合物以進行骨關節(jié)炎的癥狀處理(減少疼痛、僵硬、腫脹)。HI的存在控制透明質酸的降解速率并且延長組合物的體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時(例如在許多患者中一致超過6個月并且在某些患者中超過1年)。
可以通過將透明質酸酶抑制劑和透明質酸組合來制備負載HI的關節(jié)內(nèi)透明質酸。多種HA關節(jié)內(nèi)產(chǎn)品可以與透明質酸酶抑制劑組合。許多可商購的含有HA的物質適合于與HI組合，包括SYNVISC、ORTHOVISC、HYALGAN(來自Fidia/Sanofi-Synthelabo)以及HPS和SUPARTZ。應該注意到，某些HA產(chǎn)品(尤其是Boehringer IngelheimVetmedica，St.Joseph，MO的HYVISC)用于獸醫(yī)的應用(通常是治療馬的骨關節(jié)炎和跛行)。
雖然任何上述HA產(chǎn)品均是潛在可以使用的，在以下實施例中，使用以下方法將SYNVISC與透明質酸酶抑制劑組合1.準備含有2ml透明質酸(SYNVISC；來自Genzyme Biosurgery的Hylan G-F 20，或者其它來源的HA，例如DUROLANE)的2.25ml玻璃注射器以包含透明質酸酶抑制劑a.使用硫代蘋果酸金鹽作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例12中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的硫代蘋果酸金鹽濃度(即將總共10mg包含在微球中的硫代蘋果酸金鹽引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的硫代蘋果酸金鹽是臨床有益的，但是約10mg是優(yōu)選的劑量。
b.使用吲哚美辛作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6、7和8中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的吲哚美辛濃度(即將總共2mg包含在微球中的吲哚美辛引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.2mg至約20mg范圍的吲哚美辛是臨床有益的，但是約2mg是優(yōu)選的劑量。
c.使用丙二醇作作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6至13中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的丙二醇濃度(即將總共20mg包含在微球中的丙二醇引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的丙二醇是臨床有益的，但是約20mg優(yōu)選的劑量。
d.使用硫酸葡聚糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例10中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的硫酸葡聚糖濃度(即將總共20mg包含在微球中的硫酸葡聚糖引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的硫酸葡聚糖是臨床有益的，但是約20mg是優(yōu)選的劑量。
e.使用巖藻多糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例11和13中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的巖藻多糖濃度(即將總共10mg包含在微球中的巖藻多糖引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的巖藻多糖是臨床有益的，但是約10mg是優(yōu)選的劑量。
f.使用肝素作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例9中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的肝素濃度(即將總共2mg包含在微球中的肝素引入至2ml的SYNVISC中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的肝素是臨床有益的，但是約2mg是優(yōu)選的劑量。
2.將SYNVISC/微球透明質酸酶抑制劑材料滅菌并使用下述方法對患者給藥。在整個手術操作中必須采用嚴格的無菌給藥技術。
將含有透明質酸酶抑制劑的透明質酸組合物注射入關節(jié)腔以處理膝關節(jié)的骨關節(jié)炎。注射前使用酒精或其它合適的消毒溶液擦拭注射位點。在注射HA-HI植入物之前除去滑液或滲液。必須使用不同的注射器來除去滑液和注射負載HI的SYNVISC。然而，應該使用相同的針頭。使用嚴格的無菌操作，通過18至22刻度針頭將HA-HI植入物注射入膝關節(jié)。為了確保嚴密的密封并避免給藥時泄漏，牢固地固定針頭，同時拿穩(wěn)luer hub注射器。當安裝針頭以及除去針套時，不應過緊或過度扭轉，因為這可能使注射器的尖端破裂。當使用SYNVISC-HI治療時，不要向膝內(nèi)關節(jié)內(nèi)注射麻醉劑或任何其它藥物。這可能稀釋植入物材料并影響其安全性和有效性。
含有HI-SYNVISC的注射器為一次性的。在注射器從包裝中取出后，要立即使用注射器中的物質。將全部2ml僅注射入一個膝中。如果治療是兩側的，那么對于每一膝部必須使用單獨的注射器。丟棄任何未使用的材料。每周一次(相隔一周)通過關節(jié)內(nèi)注射將HA-HI植入物給藥，一共進行三次注射來治療膝部疼痛骨關節(jié)炎。
本領域技術人員顯而易見，使用類似的方法可以對其它關節(jié)(例如肩、髖、踝、腕等)以及其它物種(馬、狗、貓等)給予所述材料。
實施例20使用負載HI的透明質酸填充劑處理尿失禁的方法使用負載HI的HA填充劑進行尿道周和經(jīng)尿道的注射可以用于治療尿失禁。負載HI的HA注射可以降低植入物降解的速率并且延長其體內(nèi)活性至超過單獨使用HA時(即在多數(shù)患者中一致超過1年)，以便維持植入物的活性并且降低對隨后尿道周和經(jīng)尿道注射的需要和頻率。
DEFLUX在是非動物性穩(wěn)定的透明質酸載體凝膠(NASHA，17mg/ml)中的聚糖酐微球的無菌高粘度凝膠(50mg/ml)，其構成生物相容的和生物可降解的植入物。聚糖酐微球的大小為80-250微米，平均大小約為130微米。NASHA主要用作載體，使聚糖酐微球位于植入物位點。DEFLUX(Q-Med/Priority Healthcare)以含有1ml的一次性單次使用的無菌注射器提供，并且適于以如下方法與透明質酸酶抑制劑組合1.如下準備含有1ml DEFLUX的注射器以包含透明質酸酶抑制劑a.使用硫代蘋果酸金鹽作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例12中所描述的聚合物微球中或者引入聚糖酐微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的硫代蘋果酸金鹽濃度(即將總共5mg包含在微球中的硫代蘋果酸金鹽引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的硫代蘋果酸金鹽是臨床有益的，但是約5mg是優(yōu)選的劑量。
b.使用吲哚美辛作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6、7和8中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的吲哚美辛濃度(即將總共1mg包含在微球中的吲哚美辛引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.2mg至約20mg范圍的吲哚美辛是臨床有益的，但是約1mg是優(yōu)選的劑量。
c.使用丙二醇作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6至13中所描述的聚合物微球中或者引入聚糖酐微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的丙二醇濃度(即將總共10mg包含在微球中的丙二醇引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的丙二醇是臨床有益的，但是約10mg是優(yōu)選的劑量。
d.使用硫酸葡聚糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例10中所描述的聚合物微球中或者引入聚糖酐微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的硫酸葡聚糖濃度(即將總共10mg包含在微球中的硫酸葡聚糖引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的硫酸葡聚糖是臨床有益的，但是約10mg是優(yōu)選的劑量。
e.使用巖藻多糖為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例11和13中所描述的聚合物微球中或者引入聚糖酐微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的巖藻多糖濃度(即將總共5mg包含在微球中的巖藻多糖引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的巖藻多糖是臨床有益的，但是約5mg是優(yōu)選的劑量。
f.使用肝素作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例9中所描述的聚合物微球中或者引入聚糖酐微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的肝素濃度(即將總共1mg包含在微球中的肝素引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的肝素是臨床有益的，但是約1mg是優(yōu)選的劑量。
2.將DEFLUX/微球透明質酸酶抑制劑材料滅菌并且使用下述方法對患者給藥。
負載HI的DEFLUX組合物的經(jīng)尿道注射可以按照下列方法進行。使用含有1毫升植入物材料的并且?guī)в屑毧潭柔橆^(帶有穩(wěn)定插管的23刻度的經(jīng)尿道注射針頭)的一次使用的載藥注射器。將患者置于切石術臥位置并將10ml的2％利多卡因注射入尿道進行麻醉。對于女性，使用膀胱鏡觀察膀胱頸。通過膀胱鏡的注射口，在4點鐘的位置以銳角在距離膀胱頸1-1.5cm處插入針，直至剛到膀胱粘膜平面以下。然后使用膀胱鏡使針沿著尿道長軸前進，直至到達膀胱頸粘膜以下。緩慢向該位點注射負載HI的DEFLUX。然后在8點鐘的位置重復操作?？梢韵蛑踩胛锛尤雭喖谆{或其它非毒性染色劑以輔助注射的可視化。
負載HI的DEFLUX組合物的尿道周注射可以按照下列方法進行。使用含有1毫升植入物物質的并且?guī)в屑毧潭柔橆^(尿道周注射針頭)的一次使用的載藥注射器。將患者置于切石術位置并將10ml的2％利多卡因注射入尿道進行麻醉，并使用膀胱鏡觀察膀胱頸(對于男性，可以通過恥骨上膀胱鏡方法觀察尿道)。將針經(jīng)陰道或經(jīng)恥骨弓上插入尿道的緊鄰及側面區(qū)域。當針到達膀胱頸附近的合適位置時(如上所述膀胱鏡可見)，緩慢向該位點注射負載HI的HA?？梢韵蛑踩胛锛尤雭喖谆{或其它非毒性染色劑以輔助注射的可視化。
實施例21使用負載HI的透明質酸填充劑處理大便失禁的方法大便失禁是常見的和社交不能的疾病狀態(tài)，其影響高達11％的北美成年人。多種因素可以引起屁或糞便的失禁，但是女性中更加常見，其肛門括約肌可以在分娩中受損(尤其是患有三級陰道撕裂、需要鑷子、分娩大嬰兒和/或陰道分娩時滯產(chǎn)的那些女性)。雖然大便失禁的病因學經(jīng)常是多因素的，但是誘因包括括約肌損傷(產(chǎn)科、外科、事故)、肛門直腸疾病(痔瘡、直腸脫垂、炎性腸病、瘺、腫瘤、結腸切除、糞便嵌塞、腹瀉)、先天的(脊柱裂、腦脊膜突出、Hirshsprung疾病)、特發(fā)性的或行為的(排便抵抗、癡呆、智力遲鈍)。被動的大便失禁(即患者沒有察覺的情況下發(fā)生)主要是由于肛門內(nèi)括約肌的功能障礙，而主動的大便失禁(不能自主抑制排便)通常是由于肛門外括約肌的功能障礙?？梢詫⒇撦dHI的HA組合物注射入內(nèi)括約肌或外括約肌周圍的區(qū)域以增加括約肌的壓力并減少大便失禁。使用負載HI的HA注射可以維持植入物的活性并且降低對肛周注射的需要和頻率。
DEFLUX是在非動物性的穩(wěn)定透明質酸載體凝膠(NASHA，17mg/ml)中的聚糖酐微球的無菌高粘度凝膠(50mg/ml)，其構成生物相容的和生物可降解的植入物。聚糖酐微球的大小為80-250微米，平均大小約為130微米。NASHA主要用作載體，使聚糖酐微球位于植入物位點。DEFLUX(Q-Med/Priority Healthcare)以含有1ml的一次性單次使用的無菌注射器提供，并且適于以如下方法與透明質酸酶抑制劑組合1.如下準備DEFLUX的1ml注射器以包含透明質酸酶抑制劑a.使用硫代蘋果酸金鹽作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例12中所描述的聚合物微球中或者引入聚糖酐微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的硫代蘋果酸金鹽濃度(即將總共5mg包含在微球中的硫代蘋果酸金鹽引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的硫代蘋果酸金鹽是臨床有益的，但是5mg是優(yōu)選的劑量。
b.使用吲哚美辛作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6、7和8中所描述的聚合物微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的吲哚美辛濃度(即將總共1mg包含在微球中的吲哚美辛引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.2mg至約20mg范圍的吲哚美辛是臨床有益的，但是1mg是優(yōu)選的劑量。
c.使用丙二醇作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例6至13中所描述的聚合物微球中或者引入聚糖酐微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的丙二醇濃度(即將總共10mg包含在微球中的丙二醇引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的丙二醇是臨床有益的，但是10mg是優(yōu)選的劑量。
d.使用硫酸葡聚糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例10中所描述的聚合物微球中或者引入聚糖酐微球中)以便在透明質酸中得到10mg/ml的硫酸葡聚糖濃度(即將總共10mg包含在微球中的硫酸葡聚糖引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.5mg至約200mg范圍的硫酸葡聚糖是臨床有益的，但是10mg是優(yōu)選的劑量。
e.使用巖藻多糖作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例11和13中所描述的聚合物微球中或者引入聚糖酐微球中)以便在透明質酸中得到5mg/ml的巖藻多糖濃度(即將總共5mg包含在微球中的巖藻多糖引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的巖藻多糖是臨床有益的，但是5mg是優(yōu)選的劑量。
f.使用肝素作為透明質酸酶抑制劑，將該試劑引入緩釋輸送系統(tǒng)(例如實施例9中所描述的聚合物微球中或者引入聚糖酐微球中)以便在透明質酸中得到1mg/ml的肝素濃度(即將總共1mg包含在微球中的肝素引入至1ml的DEFLUX中)。應該理解，約0.2mg至約100mg范圍的肝素是臨床有益的，但是1mg是優(yōu)選的劑量。
2.將DEFLUX/微球透明質酸酶抑制劑材料滅菌并使用下述方法對患者給藥。
使用下列方法在內(nèi)窺鏡觀察下通過直接注射將HI-DEFLUX植入物給藥。使用含有1毫升植入物材料的并且?guī)в屑毧潭柔橆^的一次使用的載藥注射器。根據(jù)所選的注射區(qū)域，將約10ml的2％利多卡因注射入會陰部皮膚或直腸粘膜。將針穿過皮膚或直腸粘膜插入包圍肛門括約肌的粘膜下平面。當針達到合適的位置時，向位點緩慢注射負載HI的HA(通常在周圍、穿過括約肌、進入但遠離肛門邊緣處分3次注射并且在肛皮線處或恰好在肛皮線上方處注射)直至在肛管周圍形成對稱。可以向植入物加入亞甲基藍或其它非毒性染色劑以輔助注射的可視化。
實施例22透明質酸的降解GPC分子量分析使用凝膠滲透色譜(GPC)分析(GPC分子量分析)來確定不同化合物對透明質酸隨時間降解的影響(用透明質酸酶切割導致的透明質酸分子量的降低來表示)。
方法分析中使用的GPC系統(tǒng)是BREEZE計算機化的GPC裝置(WatersCorporation，Milford，MA)，該裝置配有折射率檢測和串連的ULTRAHYDROGEL 1000和ULTRAHYDROGEL 2000(WatersCorporation)柱。使用水作為流動相，其速率為每分鐘1ml。注射體積是50μl，運行時間是25分鐘。
使用分子量為11,000至2百萬道爾頓的多糖標準(PolymerLaboratories；Church Stretton，UK)來準備以分子量的對數(shù)為函數(shù)的駐留時間的線性校準曲線。
將具有分子量為2百萬至3百50萬道爾頓的透明質酸(透明質酸鈉，Lifecore，Chaska MN)在水中稀釋至濃度為0.5％w/v。在水中將透明質酸酶(Sigma Chemical Co.St Louis，MO)稀釋至每毫升1000單位并加入合適的體積以實現(xiàn)期望的最終濃度。在所有的實驗中在15小時的孵育期間使用每毫升100單位的透明質酸酶。在濃度為每毫升100單位下，酶在5小時內(nèi)將分子量由2百50萬降低至100,000道爾頓。在每一實驗中，將水中的濃度為0.1％w/v的HA(含有和不含有100單位/ml酶)用作對照。
結果測試了下列化合物以確定其對由透明質酸酶引起的透明質酸降解的作用肝素(鈉鹽)、硫代蘋果酸金鹽、羧甲基纖維素、硫酸葡聚糖、巖藻多糖。要么直接將抑制劑加入至樣品溶液中，要么將抑制劑的小體積濃縮溶液加入至樣品溶液中。5個測試化合物中的每一個均抑制由透明質酸酶引起的透明質酸的降解。
測試了濃度為1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml和0.1mg/ml的肝素(鈉鹽，Sigma Chemical Co.)。在每一測試濃度，肝素均抑制了透明質酸的降解。即使在低至0.1mg/ml的濃度時，HA的分子量由約3百40萬降低至約2百40萬(表5，圖5)，這表明抑制了約70％的降解。
表5樣品AMW(HA值的％)HA對照 100HA/酶對照2.5肝素1mg/ml 87肝素0.5mg/ml 96肝素0.25mg/ml96肝素0.1mg/ml 71濃度為10mM、5mM、2.5mM和1mM的硫代蘋果酸金鹽(鈉鹽，Sigma Chemical Co.)抑制了超過50％的HA的降解(表6，圖6)。
表6樣品BMW(HA值的％)HA對照 100HA/酶對照5硫代蘋果酸金鹽10mM 62硫代蘋果酸金鹽5mM51硫代蘋果酸金鹽2.5mM 59硫代蘋果酸金鹽1mM51濃度為0.05至1mg/ml的羧甲基纖維素(Fisher Scientific)抑制了由透明質酸酶引起的降解。孵育后透明質酸的分子量仍然接近2百25萬的原始值(表7，圖7)。
表7樣品C MW(HA值的％)HA對照100HA/酶對照 3CMC 1mg/ml71CMC 0.5mg/ml 100
CMC 0.1mg/ml 92CMC 0.05mg/ml 100濃度為0.05至1mg/ml的硫酸葡聚糖(Sigma Chemical Co.)抑制了透明質酸的降解(表8，圖8)。
表8樣品D MW(HA值的％)HA對照25HA/酶對照 4葡聚糖1mg/ml 94葡聚糖0.8mg/ml93葡聚糖0.1mg/ml100葡聚糖0.05mg/ml 86濃度為0.5至5mg/ml的巖藻多糖(Sigma Chemical Co.)抑制了透明質酸的降解(表9，圖9)。
表9樣品E MW(HA值的％)HA對照100HA/酶對照 2巖藻多糖4.98mg/ml 100巖藻多糖2.65mg/ml 83巖藻多糖1.16mg/ml 100巖藻多糖0.05mg/ml 100由上可見，應該理解，雖然為了說明的目的本文描述了本發(fā)明的特定實施方案，但是可以進行各種修改而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。因此，本發(fā)明只受所附權利要求的限制。
權利要求
1.組合物，其包含透明質酸、金化合物、以及聚合物，其中所述金化合物抑制透明質酸的降解。
2.如權利要求1所述的組合物，其中所述化合物抑制酶誘導的透明質酸的降解。
3.如權利要求2所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
4.如權利要求1所述的組合物，其中所述金化合物是有機金化合物。
5.如權利要求1所述的組合物，其中所述金化合物是硫代蘋果酸金鹽或其類似物或衍生物。
6.組合物，其包含透明質酸、含有硫酸酯的多糖、以及聚合物，其中所述含有硫酸酯的多糖抑制透明質酸的降解。
7.如權利要求6所述的組合物，其中所述含有硫酸酯的多糖抑制酶誘導的透明質酸的降解。
8.如權利要求7所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
9.如權利要求6所述的組合物，其中所述含有硫酸酯的多糖是巖藻聚糖。
10.如權利要求9所述的組合物，其中所述巖藻聚糖是巖藻多糖或其類似物或衍生物。
11.如權利要求6所述的組合物，其中所述含有硫酸酯的多糖是硫酸葡聚糖或其類似物或衍生物。
12.如權利要求6所述的組合物，其中所述含有硫酸酯的多糖是肝素或其類似物或衍生物。
13.組合物，其包含透明質酸、和吲哚美辛或其類似物或衍生物，其中所述吲哚美辛抑制透明質酸的降解。
14.如權利要求13所述的組合物，其中所述吲哚美辛抑制酶誘導的透明質酸的降解。
15.如權利要求14所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
16.組合物，其包含透明質酸和聚合物，其中所述聚合物抑制透明質酸的降解。
17.如權利要求16所述的組合物，其中所述聚合物抑制酶誘導的透明質酸的降解。
18.如權利要求17所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
19.如權利要求16所述的組合物，其中所述聚合物包含具有(-O-CH(CH3)-CO-)結構的乳酸殘基。
20.如權利要求16所述的組合物，其中所述聚合物包含具有(-OCH2CH2-)結構的環(huán)氧乙烷殘基。
21.如權利要求16所述的組合物，其中所述聚合物包含聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)。
22.如權利要求16所述的組合物，其中所述聚合物包含聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(MePEG-PLLA)(60∶40)。
23.如權利要求16所述的組合物，其中所述聚合物包含聚(乳酸-co-乙醇酸)-co-聚乙二醇(PLGA-PEG)。
24.如權利要求16所述的組合物，其中所述聚合物包含聚己內(nèi)酯-co-聚乙二醇(PCL-PEG)。
25.如權利要求16所述的組合物，其中所述聚合物是聚合物的混合物。
26.如權利要求16所述的組合物，其中所述聚合物是聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)和聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(MePEG-PLLA)的混合物。
27.如權利要求16所述的組合物，其中還包含金化合物。
28.組合物，其包含透明質酸和化合物，所述化合物選自山梨糖醇酐酯及環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷聚合物的共聚物，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
29.如權利要求28所述的組合物，其中所述化合物抑制酶誘導的透明質酸的降解。
30.如權利要求29所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
31.組合物，其包含透明質酸和化合物，所述化合物選自聚乙二醇、丙二醇、辛基酚乙氧基化物和羧甲基纖維素(CMC)，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
32.如權利要求31所述的組合物，其中所述化合物抑制酶誘導的透明質酸的降解。
33.如權利要求32所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
34.組合物，其包含透明質酸和化合物，所述化合物選自山萘酚、硫酸酸化的β-(1，4)-四半乳糖苷、硫酸新霉素、楊梅黃素、根皮素、槲皮黃素、水飛薊素、甘草素、曲尼司特、黃芩素、曲呫諾、異甘草素、色甘酸二鈉、二氫黃酮-7-硫酸鈉和5-羥基黃酮-7-硫酸鈉，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
35.如權利要求34所述的組合物，其中所述化合物抑制酶誘導的透明質酸的降解。
36.如權利要求35所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
37.組合物，其包含透明質酸和化合物，所述化合物選自維生素C、七葉皂苷、曲尼司特、曲呫諾、長春藤皂苷元、鹽酸胍、L-精氨酸、norlignane、urolithin B、甘草素、黃芩素、異甘草素、色甘酸二鈉(DSCG)、7-硫酸白楊素、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、木犀草素、桑色素、楊梅黃素、非諾洛芬、硫代蘋果酸金鈉、磷酸化橙皮苷、紫錐花、迷迭香酸、具有0.2至1的磺化度的磺酸酸化的β-(1，4)-乳-低聚糖(n＝2-6)，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
38.如權利要求37所述的組合物，其中所述化合物抑制酶誘導的透明質酸的降解。
39.如權利要求38所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
40.組合物，其包含透明質酸和化合物，所述化合物選自縮合單寧、單寧酸、山萘酚和槲皮黃素，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
41.如權利要求40所述的組合物，其中所述化合物抑制酶誘導的透明質酸的降解。
42.如權利要求41所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
43.組合物，其包含透明質酸和化合物，所述化合物選自磺酸新霉素、sulfonated planetose、硫酸對苯二酚二半乳糖苷和硫酸-2-羥苯基單乳二糖苷，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
44.如權利要求43所述的組合物，其中所述化合物抑制酶誘導的透明質酸的降解。
45.如權利要求44所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
46.組合物，其包含透明質酸和化合物，所述化合物選自水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮)、7-硫酸白楊素、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸和吲哚-2-羧酸，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
47.如權利要求46所述的組合物，其中所述化合物抑制酶誘導的透明質酸的降解。
48.如權利要求47所述的組合物，其中所述酶是透明質酸酶。
49.如權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物，其還包含載體。
50.如權利要求49所述的組合物，其中所述載體是聚合物。
51.如權利要求50所述的組合物，其中所述聚合物是生物可降解的。
52.如權利要求50所述的組合物，其中所述聚合物是非生物可降解的。
53.如權利要求50所述的組合物，其中所述聚合物包含碳水化合物，所述碳水化合物選自淀粉、纖維素和葡聚糖。
54.如權利要求50所述的組合物，其中所述聚合物包含蛋白質，所述蛋白質選自膠原、明膠、纖維蛋白原和白蛋白。
55.如權利要求50所述的組合物，其中所述聚合物包含聚酯。
56.如權利要求55所述的組合物，其中所述聚合物是聚(D，L-丙交酯)、聚(D，L-丙交酯-co-乙交酯)或聚乙交酯。
57.如權利要求50所述的組合物，其中所述聚合物包含選自聚(ε-己內(nèi)酯)、聚羥基丁酸酯、聚烷基碳酸酯、聚酐和聚原酸酯的物質。
58.如權利要求50所述的組合物，其中所述聚合物包含選自乙烯-醋酸乙烯酯共聚物(EVA)、硅橡膠、聚氨酯、和丙烯酸聚合物或共聚物的物質。
59.如權利要求50所述的組合物，其中所述聚合物包含聚乙二醇。
60.如權利要求50所述的組合物，其中所述聚合物包含4-臂巰基PEG和4-臂NHS PEG。
61.如權利要求60所述的組合物，其中所述聚合物還包含膠原或膠原衍生物。
62.如權利要求61所述的組合物，其中所述膠原衍生物是甲基化的膠原。
63.如權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物，其還包含麻醉劑。
64.如權利要求63所述的組合物，其中所述麻醉劑是丙胺卡因、利多卡因或苯佐卡因。
65.如權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物，其中所述組合物是無菌的。
66.如權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物，其還包含陶瓷材料，其中所述陶瓷材料選自β-磷酸三鈣、羥磷灰石、碳酸鈣、硫酸鈣、磷酸鈣、骨和去礦物質骨。
67.如權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物，其還包含骨形態(tài)發(fā)生蛋白或生長因子。
68.如權利要求67所述的組合物，其中所述骨形態(tài)發(fā)生蛋白是BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6或BMP-7。
69.如權利要求67所述的組合物，其中所述生長因子是成纖維細胞生長因子(FGF)、轉化生長因子(TGF)或血小板衍生生長因子(PDGF)。
70.增大骨或置換磨損骨的方法，其包括向需要這類處理的患者的目標位置輸送權利要求67所述的組合物。
71.降低與術后瘢痕化相關的疼痛的方法，其包括在手術操作期間使權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物滲入神經(jīng)周圍的區(qū)域。
72.防止手術粘連的方法，其包括向需要這類處理的患者的目標位置輸送權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物。
73.修復或增大皮膚或組織的方法，其包括向需要這類處理的患者的皮膚或組織內(nèi)注射權利要求1至48中任一權利要求所述的化合物。
74.如權利要求73所述的方法，其中所述注射是向唇內(nèi)注射。
75.如權利要求73所述的方法，其中所述注射是向面部的皮膚內(nèi)注射。
76.眼部手術期間維持眼淚體積的方法，其包括在眼部手術期間向眼內(nèi)輸送權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物。
77.如權利要求76所述的方法，其中所述眼部手術是是白內(nèi)障摘除手術、人工晶狀體植入、視網(wǎng)膜復置、晶狀體乳化手術、角膜移植或青光眼濾過手術。
78.降低與骨關節(jié)炎相關的疼痛的方法，其包括向需要這類處理的患者的關節(jié)中注射權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物。
79.治療胃食管返流疾病的方法，其包括向患者的食道下端括約肌附近注射權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物。
80.治療或預防尿失禁的方法，其包括將權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物對需要所述治療或預防的患者給藥，以便治療或預防所述尿失禁。
81.如權利要求80所述的方法，其中將所述組合物尿道周給藥。
82.如權利要求80所述的方法，其中將所述組合物經(jīng)尿道給藥。
83.治療或預防大便失禁的方法，其包括將權利要求1至48中任一權利要求所述的組合物向患者的肛門括約肌附近給藥，以便治療或預防所述大便失禁。
84.醫(yī)療植入物，其包含填充劑，其中所述填充劑包含透明質酸和抑制所述透明質酸降解的化合物。
85.如權利要求84所述的醫(yī)療植入物，組方為處理GERD的形式。
86.如權利要求84所述的醫(yī)療植入物，組方為處理大便失禁的形式。
87.如權利要求84所述的醫(yī)療植入物，組方為處理尿失禁的形式。
88.如權利要求84所述的植入物，其中所述化合物選自硫代蘋果酸金鹽、吲哚美辛、丙二醇、肝素、硫酸葡聚糖、巖藻多糖和羧甲基纖維素。
89.如權利要求84所述的植入物，其中所述化合物選自山萘酚、硫酸酸化的β-(1，4)-四半乳糖苷、硫酸新霉素、木犀草素、楊梅黃素、根皮素、槲皮黃素、水飛薊素、甘草素、曲尼司特、黃芩素、曲呫諾、異甘草素、色甘酸二鈉、二氫黃酮-7-硫酸鈉和5-羥基黃酮-7-硫酸鈉。
90.醫(yī)療裝置，其包含其醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸和金化合物的組合物所包被，其中所述金化合物抑制透明質酸的降解。
91.如權利要求90所述的醫(yī)療裝置，其中所述金化合物是有機金化合物。
92.如權利要求90所述的醫(yī)療裝置，其中所述金化合物是硫代蘋果酸金鹽或其類似物或衍生物。
93.醫(yī)療裝置，其包含其醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸、和吲哚美辛或其類似物或衍生物的組合物所包被，其中所述吲哚美辛抑制透明質酸的降解。
94.醫(yī)療裝置，其包含其醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸和含有硫酸酯的多糖的組合物所包被，其中所述含有硫酸酯的多糖抑制透明質酸的降解。
95.如權利要求94所述的醫(yī)療裝置，其中所述含有硫酸酯的多糖是巖藻聚糖。
96.如權利要求94所述的醫(yī)療裝置，其中所述巖藻聚糖是巖藻多糖或其類似物或衍生物。
97.如權利要求94所述的醫(yī)療裝置，其中所述含有硫酸酯的多糖是硫酸葡聚糖或其類似物或衍生物。
98.如權利要求94所述的醫(yī)療裝置，其中所述含有硫酸酯的多糖是肝素或其類似物或衍生物。
99.醫(yī)療裝置，其包含其醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸和聚合物的組合物所包被，其中所述聚合物抑制透明質酸的降解。
100.如權利要求99所述的醫(yī)療裝置，其中所述聚合物包含具有(-O-CH(CH3)-CO-)結構的乳酸殘基。
101.如權利要求99所述的醫(yī)療裝置，其中所述聚合物包含具有(-OCH2CH2-)結構的環(huán)氧乙烷殘基。
102.如權利要求99所述的醫(yī)療裝置，其中所述聚合物包含聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)。
103.如權利要求99所述的醫(yī)療裝置，其中所述聚合物包含聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(MePEG-PLLA)(60∶40)。
104.如權利要求99所述的醫(yī)療裝置，其中所述聚合物包含聚(乳酸-co-乙醇酸)-co-聚乙二醇(PLGA-PEG)。
105.如權利要求99所述的醫(yī)療裝置，其中所述聚合物包含聚己內(nèi)酯-co-聚乙二醇(PCL-PEG)。
106.如權利要求99所述的醫(yī)療裝置，其中所述聚合物選自山梨糖醇酐酯、以及環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷聚合物的共聚物。
107.如權利要求99所述的醫(yī)療裝置，其中所述聚合物是聚合物的混合物。
108.如權利要求99所述的醫(yī)療裝置，其中所述聚合物是聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)和聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(MePEG-PLLA)的混合物。
109.醫(yī)療裝置，其包含其醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸和選自如下的物質的組合物所包被，所述物質選自聚乙二醇、辛基酚乙氧基化物、丙二醇和羧甲基纖維素(CMC)，其中所述物質抑制透明質酸的降解。
110.醫(yī)療裝置，其包含醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸和選自如下的化合物的組合物所包被，所述化合物選自山萘酚、硫酸酸化的β-(1，4)-四半乳糖苷、硫酸新霉素、木犀草素、楊梅黃素、根皮素、槲皮黃素、水飛薊素、甘草素、曲尼司特、黃芩素、曲呫諾、異甘草素、色甘酸二鈉、二氫黃酮-7-硫酸鈉和5-羥基黃酮-7-硫酸鈉，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
111.醫(yī)療裝置，其包含醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸和選自如下的化合物的組合物所包被，所述化合物選自維生素C、七葉皂苷、曲尼司特、曲呫諾、長春藤皂苷元、鹽酸胍、L-精氨酸、norlignane、urolithin B、甘草素、黃芩素、異甘草素、色甘酸二鈉(DSCG)、7-硫酸白楊素、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、木犀草素、桑色素、楊梅黃素、保泰松、羥基保泰松、非諾洛芬、硫代蘋果酸金鈉、磷酸化橙皮苷、紫錐花、迷迭香酸、具有0.2至1的磺化度的磺酸酸化的β-(1，4)-乳-低聚糖(n＝2-6)，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
112.醫(yī)療裝置，其包含醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸和選自如下的化合物的組合物所包被，所述化合物選自縮合單寧、單寧酸、山萘酚和槲皮黃素，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
113.醫(yī)療裝置，其包含醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸和選自如下的化合物的組合物所包被，所述化合物選自磺酸新霉素、sulfonated planetose、硫酸對苯二酚二半乳糖苷和硫酸-2-羥苯基單乳二糖苷，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
114.醫(yī)療裝置，其包含醫(yī)療植入物，其中所述植入物被包含透明質酸和選自如下的化合物的組合物所包被，所述化合物選自水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、7-硫酸白楊素、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸和吲哚-2-羧酸，其中所述化合物抑制透明質酸的降解。
115.如權利要求93至114中任一權利要求所述的醫(yī)療裝置，其中所述組合物還包含金化合物，其中所述金化合物抑制透明質酸的降解。
116.組合物，其包含透明質酸和選自如下的化合物硫代蘋果酸金鹽、吲哚美辛、巖藻多糖、硫酸葡聚糖、肝素、聚乙二醇、丙二醇、羧甲基纖維素(CMC)、和它們的類似物和衍生物，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照的粘度的50％或更高，其中使用透明質酸粘度測定法測量所述粘度。
117.組合物，其包含透明質酸和選自如下的化合物辛基酚乙氧基化物、山梨糖醇酐酯、以及環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷聚合物的共聚物，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照的粘度的50％或更高，其中使用透明質酸粘度測定法測量所述粘度。
118.組合物，其包含透明質酸和選自如下的聚合物包含具有(-O-CH(CH3)-CO-)結構的乳酸殘基的聚合物、包含具有(-OCH2CH2-)結構的環(huán)氧乙烷殘基的聚合物、聚乳酸-co-聚乙二醇(PLA-PEG)、聚(L-乳酸)-co-甲氧基聚乙二醇(MePEG-PLLA)(60∶40)、聚(乳酸-co-乙醇酸)-co-聚乙二醇(PLGA-PEG)、聚己內(nèi)酯-co-聚乙二醇(PCL-PEG)，或其混合物，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照的粘度的50％或更高，其中使用透明質酸粘度測定法測量所述粘度。
119.組合物，其包含透明質酸和選自如下的化合物山萘酚、硫酸酸化的β-(1，4)-四半乳糖苷、硫酸新霉素、木犀草素、楊梅黃素、根皮素、槲皮黃素、水飛薊素、甘草素、曲尼司特、黃芩素、曲呫諾、異甘草素、色甘酸二鈉、二氫黃酮-7-硫酸鈉和5-羥基黃酮-7-硫酸鈉，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照的粘度的50％或更高，其中使用透明質酸粘度測定法測量所述粘度。
120.組合物，其包含透明質酸和化合物，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照的粘度的50％或更高，其中使用透明質酸粘度測定法測量所述粘度，并且其中所述化合物選自維生素C、七葉皂苷、曲尼司特、曲呫諾、長春藤皂苷元、鹽酸胍、L-精氨酸、norlignane、urolithinB、甘草素、黃芩素、異甘草素、色甘酸二鈉(DSCG)、7-硫酸白楊素、二氫黃酮-7-硫酸鈉、5-羥基黃酮-7-硫酸鈉、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酮、1-(2-羥基-4，6-二甲氧基苯基)-3-(4-氯苯基)丙酮、7-氟-4’-羥基黃酮-4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、木犀草素、桑色素、楊梅黃素、保泰松、羥基保泰松、非諾洛芬、硫代蘋果酸金鈉、，磷酸化橙皮苷、紫錐花、迷迭香酸、具有0.2至1的磺化度的磺酸酸化的β-(1，4)-乳-低聚糖(n＝2-6)。
121.組合物，其包含透明質酸和選自如下的化合物縮合單寧、單寧酸、山萘酚、槲皮黃素和芹菜素，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照的粘度的50％或更高，其中使用透明質酸粘度測定法測量所述粘度。
122.組合物，其包含透明質酸和選自如下的化合物磺酸新霉素、sulfonated planetose、硫酸對苯二酚二半乳糖苷和硫酸-2-羥苯基單乳二糖苷，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照的粘度的50％或更高，其中使用透明質酸粘度測定法測量所述粘度。
123.組合物，其包含透明質酸和選自如下的化合物水飛薊素、根皮素、花旗松素、黃豆苷元(4’，7-二羥基異黃酮)、鳶尾種苷元(4’，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、7-硫酸白楊素、4’-氯-4，6-二甲氧基查耳酮、二苯基丙烯酸、二苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸、3-(4-三氟甲基-苯基)-3-苯基丙酸和吲哚-2-羧酸，其中所述組合物的粘度是透明質酸對照的粘度的50％或更高，其中使用透明質酸粘度測定法測量所述粘度。
124.組合物，其包含透明質酸和選自如下的化合物肝素(鈉鹽)、硫代蘋果酸金鈉、羧甲基纖維素、硫酸葡聚糖、巖藻多糖，以及它們的類似物和衍生物，其中所述透明質酸的分子量高于透明質酸對照的分子量的約10％，其中使用GPC分子量分析測量所述分子量。
125.如權利要求125所述的組合物，其中所述透明質酸的分子量高于所述透明質酸對照的分子量的約25％。
126.如權利要求125所述的組合物，其中所述透明質酸的分子量高于所述透明質酸對照的分子量的約50％。
127.如權利要求125所述的組合物，其中所述透明質酸的分子量高于所述透明質酸對照的分子量的約75％。
128.如權利要求125所述的組合物，其中所述透明質酸的分子量高于所述透明質酸對照的分子量的約90％。
129.組合物，其包含透明質酸和選自如下的化合物肝素(鈉鹽)、硫代蘋果酸金鈉、羧甲基纖維素、硫酸葡聚糖、巖藻多糖，以及它們的類似物和衍生物，其中所述化合物包含在微粒中。
全文摘要
包含透明質酸和抑制透明質酸降解的化合物的組合物和裝置，以及制造和使用所述組合物和裝置的方法。
文檔編號A61K31/19GK101039683SQ200580035142
公開日2007年9月19日 申請日期2005年8月15日 優(yōu)先權日2004年8月13日
發(fā)明者威廉·L·亨特, 大衛(wèi)·M·格雷維特, 飛利浦·M·特雷科斯, 約翰·K·杰克遜 申請人:血管技術國際有限公司, 不列顛哥倫比亞大學