專利名稱：降低肌萎縮性側索硬化中神經(jīng)變性的方法和組合物的制作方法
技術領域：
本公開內(nèi)容涉及改善或治療神經(jīng)變性過程或疾病的至少一個癥狀的組合物和方法。
背景技術：
在任何指定時間，多至30,000美國人遭受幾乎總是致命的肌萎縮性側索硬化癥(ALS)的折磨。ALS，還稱為Lou Gehrig病，是一種攻擊大腦和脊髓中運動神經(jīng)元并導致肌肉軟弱和萎縮的進行性神經(jīng)變性疾病。早期癥狀包括靈巧度和步態(tài)的喪失。隨著疾病的發(fā)展，患者變得麻痹并需要呼吸支持。診斷后，ALS患者的預計壽命通常是3到5年，死亡的首要原因是喪失呼吸功能。
僅僅部分地了解ALS的病因?qū)W。家族的(遺傳的)病例僅占全部ALS患者的約5％-10％。在這個亞組的ALS患者中，五分之一攜帶有目前為止確定的唯一的基因缺陷(SOD1基因突變)。突變等位基因?qū)е庐a(chǎn)生被認為對運動神經(jīng)元有毒的蛋白質(zhì)。大多數(shù)病例，即剩余的90％-95％，好像自然地發(fā)生并且沒有可以確認的模式。因此，ALS似乎能在任何時候侵襲任何人。幾乎沒有或不存在有效的治療。

發(fā)明內(nèi)容
因此，已經(jīng)出現(xiàn)了對改善或消除神經(jīng)變性過程或疾病(包括但不限于ALS)進展的組合物和方法的需求。
本公開內(nèi)容涉及改善或治療神經(jīng)變性過程或疾病的至少一個癥狀的組合物和方法。例如，在一些實施方案中，本公開內(nèi)容提供改善或消除神經(jīng)變性過程或疾病進展的組合物和方法。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，可向患有進行性神經(jīng)變性病癥的對象施用澄清穩(wěn)定的膽汁酸溶液。根據(jù)一些實施方案，膽汁酸溶液可進一步包含另外一種藥物(例如利魯唑)。在一些實施方案中，可向患有肌萎縮性側索硬化癥的對象施用本公開內(nèi)容的膽汁酸溶液。根據(jù)一些實施方案，膽汁酸和利魯唑共施用可產(chǎn)生超過單獨施用兩種藥物的驚人地改善結果。在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的膽汁組合物和利魯唑共施用可降低一些實施方案中利魯唑的毒性或副作用。
本公開內(nèi)容的組合物可包含(1)膽汁酸、膽汁酸衍生物、膽汁酸鹽或與胺綴合的膽汁酸，(2)水，和(3)足夠量的水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，使得膽汁酸和淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在選定pH范圍內(nèi)的任何pH值保持在溶液中。
本公開內(nèi)容還涉及一種組合物，其包含(1)膽汁酸、膽汁酸衍生物、膽汁酸鹽或與胺綴合的膽汁酸，(2)水，和(3)足夠量的水溶性非淀粉多糖，使得膽汁酸和多糖在選定pH范圍內(nèi)的任何pH值保持在溶液中。
本公開內(nèi)容進一步涉及一種藥物組合物，其包含(1)膽汁酸、膽汁酸衍生物、膽汁酸鹽或與胺綴合的膽汁酸，(2)水，(3)藥學上適量的藥物化合物，和(4)足夠量的水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物或水溶性非淀粉多糖，使得膽汁酸、藥物化合物和碳水化合物在選定pH范圍內(nèi)的任何pH水平保持在溶液中。根據(jù)一些非限定性實施方案，所述藥物化合物可以是當施用給患有神經(jīng)變性疾病的對象時具有有益作用的任何藥物。根據(jù)本公開內(nèi)容的一個非限定性實施方案，所述藥物化合物可以是利魯唑或藥學活性或可活化的利魯唑代謝物、前藥、衍生物或類似物。
本公開內(nèi)容進一步涉及膽汁酸組合物的溶液劑型。這些溶液劑型的優(yōu)點包括改善了膽汁酸生物利用度及其可吸收性。溶液劑型的其他優(yōu)點包括改善了藥物化合物生物利用度及其可吸收性。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，提供了一種組合物，其包含(1)膽汁酸、膽汁酸衍生物、膽汁酸鹽或與胺綴合的膽汁酸，(2)水，和(3)足夠量的碳水化合物，使得膽汁酸成分和碳水化合物在選定pH范圍內(nèi)的任何pH保持在溶液中，其中所述碳水化合物是水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和水溶性非淀粉多糖的組合。在含有可溶性非淀粉多糖和高分子量淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的實施方案中，各自的量是一定的，使得它們在組合物中組合在一起時足夠使如果存在的膽汁酸成分、高分子量淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物、可溶性非淀粉多糖和藥物化合物在選定pH范圍內(nèi)的任何pH值保持在溶液中。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，提供了一種組合治療組合物，其可提高對藥物的反應強度或藥物功效。更具體而言，向患有神經(jīng)變性病癥的對象施用含有膽汁酸和利魯唑的本公開內(nèi)容的組合物可具有大于單獨施用兩種藥物的相加作用。


部分地參考下述說明和附圖，可了解本公開內(nèi)容的一些具體實施方案，其中圖1A是預計壽命并且以動物死亡時的存活時間百分率表示其結果；圖1B是轉(zhuǎn)桿試驗并且以每周(直到死亡時)它們從桿上滑落之前，在桿上的保留時間表示其結果；圖2是顯示野生型細胞、A4V細胞和G93A細胞的細胞存活率檢測結果的條形圖，其中所述細胞是未處理的(左面組)或用200nM本公開內(nèi)容的溶解的UDCA溶液培養(yǎng)(中間組)，或用20μM本公開內(nèi)容的溶解的UDCA溶液培養(yǎng)(右面組)；圖3是顯示野生型細胞、A4V細胞和G93A細胞的細胞存活率檢測結果的條形圖，其中所述細胞是未處理的(左面組)或用500μM S-亞硝基谷胱苷肽(GSNO；中間組)培養(yǎng)，或用500μM GSNO培養(yǎng)，隨后用20μM本公開內(nèi)容的UDCA溶液培養(yǎng)(右面組)。
圖4A是顯示未處理的A4V細胞(對照細胞)的顯微圖；圖4B是顯示用500μM S-亞硝基谷胱苷肽(GSNO)培養(yǎng)的A4V細胞的顯微圖；
圖4C是顯示用500μM GSNO培養(yǎng)，接著用20μM本公開內(nèi)容的溶解的UDCA溶液培養(yǎng)的A4V細胞的顯微圖；圖4D是顯示未處理的G93A細胞的顯微圖；圖4E是顯示用500μM GSNO培養(yǎng)的G93A細胞的顯微圖；和圖4F是顯示用500μM GSNO培養(yǎng)，接著用20μM本公開內(nèi)容的溶解的UDCA溶液培養(yǎng)的G93A細胞的顯微圖；具體實施方式
約85％-90％的成年期發(fā)病的ALS患者沒有所述疾病的家族史。這種明顯地隨機或偶然的事件已導致一些從業(yè)者將這些病例確認為散發(fā)性ALS(SALS)。相比較，在約10％-15％的患者中，ALS可作為常染色體顯性病癥遺傳。這些病例已被確認為家族性ALS(FALS)。在約五分之一的FALS病例中，突變基因是細胞質(zhì)酶，即Cu/Zn超氧化物歧化酶-1(SOD)。Cu/Zn SOD中90個以上的突變已被確認并且橫跨30個位點。這些突變可引起新的導致FALS的不良功能，而不僅僅是消弱基因產(chǎn)物的正常功能。例如，在利用過度表達突變型人Cu/Zn SOD(A4V、G93A、G85R、G37R)的轉(zhuǎn)基因小鼠的試驗中，SOD1活性的喪失與疾病的發(fā)作或嚴重程度無關。
具有SOD1突變的FALS患者的癥狀和病理與SALS患者很像。表達突變型SOD1的小鼠的運動神經(jīng)元臨床進程和病理改變也與在SALS患者中發(fā)現(xiàn)的顯著相似，表明了SALS和FALS神經(jīng)變性機制可能具有共同的成分。線粒體在調(diào)節(jié)細胞生命和死亡的許多代謝及凋亡途徑中起關鍵作用。線粒體還是內(nèi)在凋亡級聯(lián)的起始位點，其可被通過caspase依賴或非caspase依賴方式起作用的促凋亡因子的釋放而激活。線粒體功能障礙可直接參與ALS的發(fā)病機理。線粒體功能障礙通過使運動神經(jīng)元易感染鈣介導的興奮毒性、增加活性氧類物質(zhì)的生成和/或啟動內(nèi)在凋亡途徑從而引起運動神經(jīng)元死亡。
線粒體功能障礙可導致促凋亡因子例如細胞色素C、凋亡誘導因子(AIF)以及endo G從單個線粒體的量子釋放，這可能響應局部鈣介導的毒性，例如，在興奮性突觸情況下。這種局部毒性可引起亞細胞區(qū)室例如樹突分枝或軸突分枝的死亡。這種亞細胞區(qū)室變性可能不足以引起細胞立即死亡，但是可在一段時間內(nèi)擴散到細胞體。與這種情況一致，在ALS中，運動神經(jīng)元死亡之前，軸突從末端到近端方向(往回死亡(dying back))變性并且樹突開始萎縮。由于神經(jīng)元具有復雜的亞細胞分枝，這種細胞死亡機制可能是神經(jīng)變性獨有的，并且與其它細胞類型中的典型細胞死亡機制相比，其進展可能相對較慢。因此，這可能是死亡過程中的任何時間，只有少數(shù)細胞實際上死于凋亡。
可在細胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)基因小鼠模型中研究SOD1突變引起的運動神經(jīng)元變性。體外分析中，在錯義突變中，例如人Cu/Zn超氧化物歧化酶基因(hSOD1)中的G93A(93位甘氨酸變成丙氨酸)和A4V(4位丙氨酸變成纈氨酸)，可觀察到擴散性和漸進性運動神經(jīng)元死亡。例如，使用MTT分析和臺盼藍染色評價神經(jīng)元分化后24小時的野生型、G93A以及A4V hSOD1的細胞存活率。存活率隨時間顯著降低。在野生型細胞中，神經(jīng)元分化后48小時，存活率顯著降至(85.91±9.08％)(P＜0.05)，神經(jīng)元分化后72小時，存活率顯著降至59.41±13.54％(P＜0.01)。神經(jīng)元分化后24小時，與野生型細胞(100±6.97％)相比較，G93A(63.71±6.25％)以及A4V細胞的存活率(58.85±7.83％)下降更多。神經(jīng)元分化后48小時，G93A細胞的存活率降至23.12±8.96％，A4V細胞的存活率降至20.79±8.07％(P＜0.01)。神經(jīng)元分化后72小時，這些突變細胞幾乎全部死亡，存活率約為0％。這些結果表明hSOD1中G93A或A4V突變使得運動神經(jīng)元更脆弱。根據(jù)這些結果，在一些實施方案中，可在約24小時進行根據(jù)本公開內(nèi)容進行的分析，以避免大幅度降低存活率，這可能在更晚的時間點出現(xiàn)。
轉(zhuǎn)基因小鼠表達G93A或A4V出現(xiàn)了嚴重的運動神經(jīng)元變性綜合征，不管SOD活性正?；虺稣！Ｏ啾容^，這些癥狀可能不出現(xiàn)在Cu/Zn SOD敲除或過表達的小鼠中。
一氧化氮(NO)可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生理和病理過程中起作用，線粒體可能是腦中NO毒性的主要靶。NO可與超氧陰離子相互作用形成反應性過氧亞硝酸陰離子，所述反應性過氧亞硝酸陰離子可通過氧化損傷、干擾能量代謝、鈣穩(wěn)態(tài)、以及線粒體功能引起細胞死亡。這種毒性可被NOS抑制劑和一氧化氮清除劑即過氧亞硝酸陰離子和羥基自由基清除劑阻止。
S-亞硝基谷胱苷肽(GSNO)可以是有用的NO供體，其可在生理條件下緩慢并自發(fā)地釋放NO。GSNO可以是體內(nèi)的NO儲庫和/或轉(zhuǎn)運工具。GSNO代謝酶可從細菌到人進行保存。氧化應激過程中在內(nèi)皮細胞和星形膠質(zhì)細胞中可產(chǎn)生內(nèi)源性GSNO，可能位于大鼠的小腦中。因此，GSNO可能是內(nèi)源性NO儲庫(reservoir)并在腦中起到一種或多種作用。有趣的是，當用GSNO處理細胞時，可觀察到顯著的凋亡。
與野生型蛋白質(zhì)相比較，一些FALS突變型Cu/Zn SOD酶可在體外引起過氧化物酶活性顯著升高。過氧亞硝酸陰離子，它是超氧陰離子(O2)和一氧化氮(NO)的產(chǎn)物，與突變型SOD的Cu2+反應，產(chǎn)生硝離子，這導致蛋白質(zhì)硝化以及后來的神經(jīng)毒性；ALS患者的運動神經(jīng)元顯示硝基酪氨酸免疫反應性升高。過氧化物酶活性升高可增加損傷神經(jīng)元的羥基自由基的生成。
在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的膽汁酸組合物可缺少現(xiàn)有的UDCA商業(yè)劑型的一個或多個不利特征。此外，在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的膽汁酸組合物可改善和/或治療ALS和/或晚期ALS的至少一個癥狀。根據(jù)本公開內(nèi)容的一些實施方案，膽汁酸劑型可適用于或能適用于口服或胃腸外施用。在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的膽汁酸組合物可包含UDCA完整分子和水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物(例如，淀粉水解的產(chǎn)物)。根據(jù)本公開內(nèi)容的一些實施方案，膽汁酸組合物可溶解在水中并可在任意pH值保持在水溶液中而不沉淀。
在一些實施方案中，UDCA在本公開內(nèi)容的溶液中的溶解度可高于商業(yè)UDCA的約3,000倍(0.15mol對比0.05mmol)并且可高于TUDCA300倍。在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的溶液向血液、腦、胃、十二指腸、空腸、回腸和/或結腸遞送溶解的UDCA。在一些實施方案中，口服和胃腸外劑型可包含，例如，500mg UDCA并且可具有高于現(xiàn)有的商業(yè)UDCA形式的至少8倍的Cmax，短于現(xiàn)有的商業(yè)UDCA形式的約4-6倍的Tmax。
此外，根據(jù)一些實施方案，本公開內(nèi)容的膽汁組合物可在任意pH值不含有任何沉淀，并可起到全身藥物的作用。根據(jù)一些實施方案，溶液可與一種或多種藥物化合物同時施用(例如，治療活性的抗ALS的藥物化合物)。在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的膽汁組合物與另一種藥物化合物一起施用，可以(a)增加對所述藥物化合物的響應強度，(b)增加所述藥物化合物的功效，(c)降低所述藥物化合物的所需劑量，和/或(d)降低所述藥物化合物的毒性。根據(jù)施用途徑和時間，還可單獨地施用本公開內(nèi)容的溶液。
在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的溶液可用于治療或改善ALS疾病和/或晚期ALS疾病。例如，本公開內(nèi)容的溶液可包含降低運動神經(jīng)元死亡的藥物化合物，例如對氨基水楊酸異煙肼(抑制結核菌藥)、芐噻嗪(利尿劑、抗高血壓藥)、氫化潑尼松(糖皮質(zhì)激素)、薄荷醇局部止痛劑(antipuritic)、萘磺酸甲芐咔啉(H1，抗組胺劑)、三氯噻嗪(利尿劑、抗高血壓藥)、土霉素(抗菌藥)、硫酸魁蛤素(Arcaine sulfate)(NOS抑制劑，NMDA抑制劑，抗原蟲劑)、紅霉素(抗菌藥)、谷胱甘肽(重金屬中毒，抗氧化劑)、三甲呋豆素(黑化劑(Melanizing agent)，抗銀屑病藥)、鹽酸布酚寧(外周血管擴張劑)、去甲西泮(鎮(zhèn)靜劑，弱安定劑)、鹽酸嘧啶二胺(抗組胺劑)、丙戊酸鈉(抗驚厥劑)、氨基比林(退熱藥，鎮(zhèn)痛藥)、磺胺甲二唑(抗菌藥)、氟哌利多(精神抑制藥)、2-硫脲嘧啶抗甲狀腺劑(抑制藥)、犬尿烯酸(維生素B缺乏疾病的營養(yǎng)品)、夫西地酸(抗菌藥)、亞葉酸鈣(抗貧血藥、葉酸拮抗劑的解毒劑)、硫酸司巴丁(催產(chǎn)劑)、苦杏仁苷(抗炎藥，試驗用抗腫瘤藥)、鹽酸丙嗎卡因(麻醉藥、局部)、呋塞米(利尿劑、抗高血壓藥)、雙硝米特(抗原蟲劑)、布地縮松(抗炎藥)、夫洛丙酮(解痙藥)、氟氫縮松(糖皮質(zhì)激素，抗炎藥)、N-甲酰甲硫氨酰苯丙氨酸(趨化肽)、硫噴妥鈉(麻醉藥)、達克普隆(抗消化性潰瘍藥)、溴苯乙胺(去甲腎上腺素釋放抑制劑)、頭孢孟多酯鈉(抗微生物藥)、丙氧咪唑(oxybendazole)(抗蠕蟲藥)、環(huán)亮氨酰甘氨酸(抑制麻醉劑引起的多巴胺R敏感性)、達者侖鈉(骨骼肌松弛藥)、四氫對醌(角質(zhì)層分離劑)、哌嗪(抗蠕蟲藥)、七葉苷(Aesculin)(抗炎藥)、炔孕酮(孕激素)、二甲雙酮(抗驚厥劑)、灰黃霉素(抗真菌藥，抑制中期有絲分裂，與聚合微管和相關蛋白相互作用)、醋胺沙羅(止痛劑，退熱劑)、鹽酸檳榔次堿(GABA激動劑)、二鹽酸腐胺(鳥氨酸脫羧酶抑制劑，細胞生長因子)、鹽酸依米丁(抗阿米巴藥)、抑制RNA、DNA和蛋白質(zhì)的合成)、氨苯磺胺(抗菌藥)、含羞草堿(脫毛劑)、乙酰膽堿(心抑制劑，縮瞳劑，外周血管擴張劑)、甲磺酸碘磷定(膽堿酯酶復活藥)、賴氨酰色氨酰-賴氨酸(醋酸鹽結合DNA)、海可皂苷元(類固醇前體)、醋酸氫化潑尼松(糖皮質(zhì)激素)、阿苯噠唑(抗蠕蟲藥)、氫氯噻嗪(利尿劑)、鹽酸去甲金霉素(抗菌藥)、呋喃西林(局部抗感染)、雙氯青霉素鈉(抗菌藥)、α-生育酚(維生素E缺乏)、鹽酸四環(huán)素(抗阿米巴藥，抗菌藥，抗立克次氏體藥)、非諾貝特(抗高脂血癥藥)、丙磺舒(促尿酸尿制劑)、維A酸(角質(zhì)層分離劑)、對乙酰氨基酚(止痛藥，退熱藥)、鹽酸白毛莨分堿(強心劑，子宮內(nèi)穩(wěn)態(tài))、d[-精氨酸-2]醋酸高托爾芬(止痛藥，NMDANMDA激動劑)、頭孢美唑鈉(抗微生物藥)、病毒唑(抗病毒藥)、O-芐基-L-絲氨酸(氨基酸衍生物)、印防己毒素(興奮劑，驚厥劑，GABAR拮抗劑，魚毒素)、羥乙卡因(局部麻醉劑)、磺胺噻唑(抗菌藥)、三氯氮芥(抗腫瘤藥，細胞毒劑)、萘丁美酮(抗炎藥)、氯霉素(抗菌藥，抗立克次氏體藥，抑制蛋白質(zhì)合成)、利魯唑、人參及其提取物，甘草甜素和甘草酸、carboquinone的衍生物、輔酶Q10、肌酸、胰島素樣生長因子-1、米諾環(huán)素、mecamserin、扎利羅登(xaliproden)、加巴噴丁、右美沙芬、他侖帕奈(talampanel)、IL-1、TR-500、丙環(huán)司坦、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、巴氯芬、替扎尼定、苯二氮類、格隆溴銨、阿托品、奎寧、苯妥英和嗎啡。
喂食給大鼠的疏水性膽汁鹽可引起肝臟中的凋亡。此外，共施用熊去氧膽酸(UDCA)可抑制體內(nèi)肝細胞凋亡。肝細胞和非肝源細胞的凋亡都可被多種因素例如疏水性的酸、乙醇、轉(zhuǎn)化生長因子-α、Fas激動性抗體或?qū)锼嵴T導。令人驚訝地，UDCA可通過調(diào)節(jié)線粒體膜紊亂、Bax轉(zhuǎn)位和/或細胞色素C釋放來減少凋亡并表現(xiàn)細胞保護作用。
熊去氧膽酸(3□-7□-二羥基-5□-膽烷酸；UDCA)是無毒的親水性膽汁酸并且通常存在于人膽汁中，雖然濃度低，僅為總膽汁酸的約3％。UDCA是美國食品與藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準的唯一可用于治療多種膽汁郁積病癥的藥物。
UDCA是熊膽汁的主要成分，可用作治療及預防許多類型肝病的藥劑。目前，其醫(yī)療用途包括溶解射線可透的膽石和多種膽汁郁積病癥，其中包括原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥、膽囊纖維化相關的肝病、多種小兒肝病、和肝臟的慢性移植物抗宿主病。
UDCA的藥理學作用可包括以劑量依賴方式用UDCA替換和/或置換有毒的膽汁酸、劑量依賴方式的細胞保護作用、劑量依賴方式的細胞膜穩(wěn)定作用/保護作用，劑量依賴方式的抗凋亡作用、劑量依賴方式的細胞內(nèi)糖皮質(zhì)激素受體激活引起的免疫調(diào)節(jié)作用、抑制NF-κB以及抑制一氧化氮合酶引起的抗炎作用、以劑量依賴方式刺激膽汁分泌、以劑量依賴方式刺激胞吐作用和插入小管膜轉(zhuǎn)運蛋白。
實際上UDCA在pH 1-8是不溶解的。其質(zhì)子化形式的溶解度為約0.05mM。其與?；撬峋Y合的代謝物(TUDCA；0.45mM)的溶解度高于UDCA的溶解度約10倍。此外，TUDCA是僅有的當質(zhì)子化時溶解度相對較低的膽汁酸?？诜┯煤?，由于晶體UDCA是不溶解的，約30％-60％的UDCA通過非離子型被動擴散沿著空腸和回腸段被吸收并通過主動轉(zhuǎn)運機制被回腸吸收，并且由于結晶狀UDCA的不溶性，只有少量(被吸收劑量的20％)在結腸吸收，由于UDCA的非離子型分子的水溶性低并且親脂性比離子型膽汁鹽類高，使得其溶解非常慢并且溶解不完全，因此可分配到生物膜中。
一旦被肝細胞吸收，UDCA可與TUDCA和GUDCA相綴合，后兩者是人分泌的膽汁酸并通過肝臟首過清除排泄。因此，它們在體循環(huán)中的血液水平非常低。膽汁酸經(jīng)歷廣泛的肝循環(huán)，或游離UDCA還可通過肝細胞分泌到膽汁中，在此它可以被膽管細胞主動和有效地重吸收。UDCA和GUDCA通過主動和被動轉(zhuǎn)運機制被吸收，而與?；撬峋Y合的UDCA(TUDCA)可在回腸末段被主動轉(zhuǎn)運。
在一些實施方案中，UDCA每日劑量超過10±12mg/kg可能不再進一步增加其膽汁中的比例，這是由于大量UDCA可通過小腸細菌的7-酮-石膽酸生物轉(zhuǎn)化成CDCA。作為替代，UDCA可通過7β-羥基的差向異構作用轉(zhuǎn)化成CDCA并進一步轉(zhuǎn)化為石膽酸(LCA)。因此，隨UDCA劑量的增加，UDCA的吸收降低。
在一些實施方案中，施用本公開內(nèi)容的組合物可在肝臟中、體循環(huán)中和/或腦中達到足量的UDCA以產(chǎn)生治療作用。在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的溶液顯示可顯著增加UDCA的水溶性、增加膜通透性、防止UDCA差向異構成CDCA。
在疾病早期階段，在睡眠時通過給予呼吸治療以及在疾病進展中和吞咽變得更加困難時通過維持良好營養(yǎng)的替代飲食法可提高ALS患者的存活時間和生活質(zhì)量。迄今為止，僅僅利魯唑這一種藥物已經(jīng)被美國食品與藥品監(jiān)督管理局批準用于治療ALS。然而，接受利魯唑的患者的壽命僅僅延長幾個月。干細胞和基因治療的相關研究是具有希望的新領域，但是還沒有加強對治療醫(yī)師可行的選擇。
不受任何特定作用機制的限制，本公開內(nèi)容提供了可改善神經(jīng)變性過程的澄清、穩(wěn)定的可溶解膽汁酸的溶液。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，所述組合物包含利魯唑。利魯唑(已得到FDA批準的治療ALS的唯一藥物)可通過降低信號轉(zhuǎn)導過程中谷氨酸釋放量起作用。已經(jīng)在兩個主要的對照臨床試驗中初步證實了利魯唑的功效。該藥物的最常見的不良事件是惡心、嘔吐、厭食、腹瀉、虛弱、嗜睡、眩暈、口感異常、腹部疼痛和頭暈眼花。其中，在接受較高劑量的患者中，眩暈、腹瀉、惡心、口感異常和厭食似乎更常見。在開始利魯唑治療的3個月內(nèi)，通常觀察到血清轉(zhuǎn)氨酶水平升高。然而，這些水平在治療2-6個月之后消退。建議在利魯唑治療的第一年監(jiān)測血清轉(zhuǎn)氨酶水平。
膽汁酸可用作細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導劑，其調(diào)節(jié)細胞運輸、改變細胞內(nèi)Ca2+水平以及激活細胞表面受體。熊去氧膽酸(UDCA)是已經(jīng)證實具有治療肝膽管病癥臨床療效的親水性膽汁酸。UDCA在體內(nèi)可迅速與甘氨酸或?；撬嵯嗑Y合以來分別產(chǎn)生甘氨熊去氧膽酸和牛磺熊去氧膽酸(TUDCA)。UDCA及其衍生物和綴合物可通過抑制凋亡起到細胞保護劑的作用。
由于谷氨酸神經(jīng)毒性可通過凋亡導致細胞死亡，阻斷凋亡可減慢急性和慢性神經(jīng)變性過程。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，膽汁組合物阻斷P53介導的毒性作用。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，膽汁組合物阻斷氧化過程介導的毒性作用。
本公開內(nèi)容涉及一種水溶液，其包含(i)一種或多種可溶性膽汁酸、水溶性膽汁酸衍生物、膽汁酸鹽或與胺綴合的膽汁酸(全體稱為“膽汁酸”)，(ii)水，和(iii)足夠量的一種或多種水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物或或水溶性非淀粉多糖，以產(chǎn)生在所需pH范圍內(nèi)的任意pH值都不產(chǎn)生沉淀的溶液。所述組合物可包含自身具有藥物效力的膽汁酸或膽汁酸鹽。本公開內(nèi)容的配方可用作遞送藥物材料的載體、佐劑或增強劑，所述藥物材料在所需pH范圍內(nèi)保持溶解在本公開內(nèi)容的組合物中。作為替代，根據(jù)本公開內(nèi)容的一些實施方案，所述組合物可包含不完全溶解的非膽汁酸藥物。
在一些實施方案中，所述膽汁酸和所述碳水化合物在從酸性到堿性的任意pH值保留在溶液中而不沉淀可能是本公開內(nèi)容的一個優(yōu)點。這些膽汁酸水溶液體系基本上沒有沉淀或顆粒。本公開內(nèi)容的又一個優(yōu)點是，添加強酸或堿之后甚至在50℃的加速條件儲存下觀察幾個月后，所述水溶液體系證實沒有例如澄清度、顏色或氣味變化的物理外觀變化。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，口服施用所述膽汁酸水溶液體系時，其通過胃腸道到達小腸，暴露于酸性胃液和堿性腸液而不產(chǎn)生膽汁酸沉淀。這些溶解的膽汁酸配方證實小腸中完整的溶液體系可被有效并完全吸收，并因此經(jīng)歷腸肝循環(huán)。根據(jù)本公開內(nèi)容的一個實施方案，某些膽汁酸的羧酸側鏈可質(zhì)子化(非離子化)、是離子化的或者是簡單的羧酸，膽汁酸溶解性(例如沉淀和物理外觀的變化)均受其影響。
膽汁酸羧酸側鏈的離子化狀態(tài)可顯著影響膽汁酸在一些水溶液體系中的疏水性和親水性。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，可通過調(diào)整pH值操縱那種離子化狀態(tài)來控制膽汁酸的毒性、吸收和兩親性。一種或多種膽汁酸可溶解在這些水溶液體系中作為治療活性劑、藥物佐劑、藥物載體或藥物溶解度增強劑。這些水溶液體系可制備成口服消費品、灌腸劑、漱劑、含漱劑、鼻制劑、耳制劑、注射劑、沖洗劑、局部用皮膚制劑、其它局部用制劑和化妝品制劑，它們具有期望的pH而且長時間后沒有沉淀或物理外觀變性的缺點。
可溶性膽汁酸是任意類型的水溶性膽汁酸。膽汁酸鹽是膽汁酸的任意水溶性鹽。膽汁鹽展示出更強的溶解磷脂和膽固醇的能力并且因此是較好的清潔劑。越疏水的膽汁鹽，可能越對膜有害，包括體內(nèi)和體外。通過上述的膽汁酸和胺反應可形成膽汁酸的水溶解的鹽，所述胺包括但不限于脂肪族游離胺例如曲恩汀、二乙撐三胺、四乙烯五胺；堿性氨基酸例如精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸；氨；氨基糖例如D-葡糖胺、N-烷基葡糖胺；季銨衍生物例如膽堿；雜環(huán)胺例如哌嗪、N-烷基哌嗪、哌啶、N-烷基哌啶、嗎啉、N-烷基嗎啉、吡咯烷、三乙醇胺和三甲醇胺。根據(jù)本公開內(nèi)容，膽汁酸的水溶性金屬鹽、膽汁酸和環(huán)糊精的包合物及其衍生物和水溶性O-磺化膽汁酸也被包括為可溶性膽汁酸鹽。
根據(jù)本公開內(nèi)容的一些實施方案，可溶性膽汁酸衍生物可以是與相應的未衍生化膽汁酸相比，能一樣溶解在水溶液中或更易溶解在水溶液中的那些衍生物。膽汁酸衍生物包括但不限于在膽汁酸的羥基和羧酸基與其它官能團形成的衍生物，所述官能團包括但不限于鹵素和氨基?？扇苄阅懼峥砂懼岬挠坞x酸形式和HCl、磷酸、檸檬酸、乙酸、氨或精氨酸的一種組合的水溶液制劑。
根據(jù)可用于本公開內(nèi)容的教導，可以使用的膽汁酸包括但不限于熊去氧膽酸、鵝去氧膽酸、膽酸、豬去氧膽酸、去氧膽酸、7-氧代石膽酸、石膽酸、碘代去氧膽酸、iocholic acid、牛磺熊去氧膽酸、牛磺鵝去氧膽酸、?；侨パ跄懰?、?；鞘懰帷⒏拾毙苋パ跄懰?、?；悄懰?、甘氨膽酸和它們在甾核上羥基或羧酸基處的衍生物。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，一個優(yōu)點可能在于，在溶液中遞送膽汁酸達到比現(xiàn)有的商業(yè)制劑更高的體內(nèi)膽汁酸水平。因此，與先前的制劑相比，可更全面地實現(xiàn)膽汁酸的治療潛能。其中膽汁不完全溶解的現(xiàn)有制劑達到的體內(nèi)膽汁酸水平較低并且需要施用大量的膽汁酸。由于膽汁酸完全溶解在本發(fā)明的制劑中，因此可實現(xiàn)更高的體內(nèi)膽汁酸水平，甚至在施用較低劑量的情況下。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，多種膽汁酸可用于單一配方中。兩種或多種不同疏水活性的膽汁鹽的混合物可起到中間疏水活性的單一膽汁鹽的作用。因此，兩種不同疏水活性的膽汁酸混合物的清潔性能和毒性通常介于單個的成分之間。
兩種或多種不同疏水活性的膽汁鹽的混合物可起到中間疏水活性的單一膽汁鹽的作用。因此，兩種不同疏水活性的膽汁酸混合物的清潔性能和毒性通常介于單個的成分之間。
適用于本公開內(nèi)容的碳水化合物包括水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和水溶性非淀粉多糖。根據(jù)本公開內(nèi)容的一些實施方案，水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物包括在各種pH值條件下直接由淀粉部分或不完全水解得到的碳水化合物。非限定性實例包括麥芽糊精、糊精、液體葡萄糖、玉米糖漿固體(液體葡萄糖干粉)和可溶性淀粉(例如麥芽糊精或玉米糖漿固體)。在一些實施方案中，可以使用MALTRINM200(玉米糖漿固體)和MALTRINM700(麥芽糊精)，可以使用GPC，Grain ProcessingCorporationof Muscatine，Iowa生產(chǎn)的上述兩種物質(zhì)。為了該實施方案的目的，術語“玉米糖漿”包含玉米糖漿和液體葡萄糖。如果淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物是聚合的，聚合物具有至少一個還原末端和至少一個非還原末端并且可以是直鏈的或支鏈的。分子量可從約100個質(zhì)量單位到超過106個質(zhì)量單位。高分子量水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物是分子量超過105的那些。
根據(jù)本公開內(nèi)容的一些實施方案，水溶性非淀粉多糖可在各種pH條件下通過多種水解或合成機制得到。非限定性實例包括葡聚糖、瓜爾膠、果膠、不能消化的可溶性纖維。如果是聚合的，聚合物具有至少一個還原末端和至少一個非還原末端。所述聚合物可以是直鏈或支鏈的。分子量從約100個質(zhì)量單位到超過106個質(zhì)量單位。優(yōu)選分子量超過105個質(zhì)量單位。
本公開內(nèi)容的實施方案中所用的高分子量水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和/或可溶性非淀粉多糖的量至少是使得制劑中所選的膽汁酸溶解在所需濃度和所需pH值范圍可溶的量。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，防止UDCA沉淀所需的麥芽糊精和UDCA的近似最小重量比是6∶1(即100mL水中每0.2g UDCA需要1.2g麥芽糊精，每1gUDCA需要6g，以及每2gUDCA需要12g)。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，麥芽糊精的近似最小量是每200mg鵝去氧膽酸需要30g，每200mg 7-酮石膽酸需要12g，每200mg膽酸需要10g，每200mg去氧膽酸需要50g。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，防止膽汁酸從本公開內(nèi)容的水溶液劑型中沉淀所需的液體葡萄糖(市售淡玉米糖漿(light corn syrup))和UDCA的近似最小重量比是約25∶1(即100mL水中每500mg UDCA需要12.5g液體葡萄糖，200mL水中每1g熊去氧膽酸需要25g)。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，防止膽汁酸從本公開內(nèi)容的水溶液劑型中沉淀所需的液體葡萄糖干粉(玉米糖漿固體，例如MALTRINM200)的近似最小量是100mL水中每1g熊去氧膽酸需要30g液體葡萄糖干粉，200mL水中每2g熊去氧膽酸需要約60g。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，防止膽汁酸從本公開內(nèi)容的水溶液劑型中沉淀所需的可溶性非淀粉多糖的近似最小量是100mL水中每500mg熊去氧膽酸需要50g瓜爾膠，100mL水中每500mg熊去氧膽酸需要80g果膠。高分子量水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物或可溶性非淀粉多糖的最小需要量主要由溶液配方中膽汁酸的絕對量決定，而不是由濃度決定。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，除了淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和/或非淀粉多糖以外，配方可包含環(huán)糊精。作為替代，在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的組合物可不含有環(huán)糊精。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，所述配方進一步包含膳食纖維。膳食纖維的非限定性實例包括瓜爾膠、果膠、洋車前子(psyllium)、燕麥膠、大豆纖維、燕麥麩、玉米麩、纖維素和麥麩。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，所述配方進一步包含乳化劑。對于本公開內(nèi)容的目的，術語“乳化劑”包含乳化劑和懸浮劑。乳化劑的非限定性實例包括瓜爾膠、果膠、阿拉伯膠、角叉菜膠、羧甲基纖維素鈉、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯醇、聚維酮、黃蓍膠、黃原膠、脫水山梨酸酯(Sorbian ester)。
所述配方不產(chǎn)生其膽汁酸、淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物、可溶性非淀粉多糖或其藥物化合物沉淀的選的pH范圍可以是水溶液體系可達到的pH水平的任意范圍。優(yōu)選地這個范圍為約pH1-約pH14，更優(yōu)選為約pH1-約pH10。還更優(yōu)選范圍是水溶液體系中可達到的pH水平范圍的任意亞組，在所述范圍內(nèi)根據(jù)施用方法，所述水溶液體系足夠使得藥物配方從制劑到施用，到身體吸收都保持在溶液中。因此，所述組合物可用作藥物配方，其中所述藥物化合物在口腔、胃和腸道的常規(guī)pH中保持在溶液中，而不沉淀。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，雖然膽汁酸在酸性條件下通常不溶解，但是膽汁酸在酸性條件下仍作為游離膽汁酸保持溶解狀態(tài)。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，所述藥物是利魯唑。其它藥物化合物的非限定性實例包括激素、激素拮抗劑、止痛藥、退熱藥、抗炎藥、免疫活性藥物、抗腫瘤藥物、抗生素、抗炎劑、擬交感神經(jīng)藥、抗感染藥、抗腫瘤劑和麻醉劑。另外的非限定性實例包括靶向或影響胃腸道、肝臟、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的藥物。藥物化合物的另外非限定性實例包括胰島素、肝素、降鈣素、氨芐西林、善得定、枸櫞酸西地那非、骨化三醇、雙氫速甾醇、阿樸嗎啡(ampomorphine)、育亨賓(yihimbim)、曲唑酮、阿昔洛韋、鹽酸金剛胺、鹽酸金剛乙胺、西多福韋(cidofovir)、甲磺酸地拉韋定、地達諾新、泛昔洛韋、forscarnet sodium，氟尿嘧啶、更昔洛韋鈉、碘苷、干擾素-α，拉米夫定，奈韋拉平、噴昔洛維、利巴韋林、司他夫定、三氟尿苷、鹽酸伐昔洛韋(valacyclovir HCl)、扎西他賓、齊多夫定、硫酸莫地那韋、利托那韋、甲磺酸奈非那韋、甲磺酸沙奎那韋、d-青霉胺、氯喹、羥氯喹、金硫葡糖、硫代蘋果酸金鈉、金諾芬、左旋咪唑、DTC、異丙肌苷、甲基肌苷單磷酸鹽、胞壁酰二肽、二氮嗪、鹽酸肼苯噠嗪、米諾地爾、雙嘧達莫、鹽酸苯氧丙酚胺、煙酸、鹽酸布酚寧、酚妥拉明、甲磺酸多沙唑嗪、鹽酸哌唑嗪，鹽酸特拉唑嗪(terazocin HCl)、鹽酸可樂定、硝苯地平、脈導敏、胺碘酮、乙酰水楊酸、維拉帕米、地爾硫、尼索地平、伊拉地平、芐普地爾、硝酸異山梨酯、戊四硝酯、硝酸甘油、西米替丁、法莫替丁、尼扎替丁、雷尼替丁、蘭索拉唑、奧美拉唑、米索前列醇、硫糖鋁、鹽酸胃復安、紅霉素、鉍化合物、前列地爾、沙丁胺醇、吡布特羅、硫酸特布他林、沙美特羅、氨茶堿、甘油茶堿、麻黃堿、乙諾那林、新異丙腎上腺素、異丙腎上腺素、間羥異丙腎上腺素、n-docromil、oxy triphylline、茶堿、比托特羅、非諾特羅、布地奈德、氟尼縮松、丙酸倍氯米松、丙酸氟地松、可待因、硫酸可待因、磷酸可待因、氫溴酸右美沙芬、曲安奈德、孟魯司特鈉、扎魯司特、苯噻羥脲、色甘酸鈉、異丙托溴銨、奈多羅米納苯甲酸鹽、鹽酸苯海拉明、重酒石酸二氫可待因酮、鹽酸美沙酮、硫酸嗎啡、乙酰半胱氨酸、愈創(chuàng)木酚甘油醚、碳酸銨、氯化銨、酒石酸銻鉀、甘油、水合萜品氫氧化物、棕櫚酸考福西利、阿托伐他汀鈣、西立伐他汀鈉(cervastatin sodium)、氟伐他汀鈉、洛伐他汀、普伐他汀鈉、斯伐他汀、picrorrhazia kurrva、穿心蓮(andrographis paniculata)、辣木(moringa oleifera)、闊莢合歡(albizzia lebeck)、鴨嘴花(adhatavasica)、姜黃(curcuma longa)、苦瓜(momordica charantia)、匙羹藤(gymnema sylvestre)、阿江欖仁(terminalia arjuna)、印楝(azadirachtaindica)、心葉青牛膽(tinosporia cordifolia)、甲硝唑、兩性霉素B、克霉唑、氟康唑、鹵普羅近、酮康唑、灰黃霉素、伊曲康唑、鹽酸特比萘酚、硝酸益康唑、咪康唑、制霉菌素、硝酸奧昔康唑、硝酸硫康唑、鹽酸西替利嗪、地塞米松、氫化可的松、氫化潑尼松、可的松、兒茶素及其衍生物、甘草甜素、甘草酸、倍他米松、ludrocortisone acetate、氟尼縮松、丙酸氟地松甲基潑尼松龍、生長激素釋放抑制因子、賴脯胰島素(lispro)、胰高血糖素、胰島素原、不溶性胰島素、拜糖平、氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、鹽酸二甲雙胍、瑞格列奈、甲磺丁脲、氨基酸、秋水仙堿、磺吡酮、別嘌呤醇、吡羅昔康、托美汀鈉、吲哚美辛、布洛芬、雙氟尼酸、甲滅酸、萘普生和曲恩汀。
可包含在配方中的藥物化合物的另外實例是加入到所述配方中時能保持溶解的任意化合物。當配方中含有另外的藥物化合物，溶液中的膽汁酸可用作佐劑、載體、或某些治療活性劑的溶解度的增強劑，其包括但不限于胰島素(pH7.4-7.8)、肝素(pH5-7.5)、降鈣素、氨芐西林、金剛烷胺、金剛乙胺、西地那非、硫酸新霉素(pH5-7.5)、阿樸嗎啡、育亨賓、曲唑酮、利巴韋林、紫杉醇及其衍生物、視黃醇和維A酸，并且在酸性和/或堿性條件下是可溶解的和穩(wěn)定的，并可根據(jù)需要添加到本公開內(nèi)容的某些膽汁酸濃度的水溶液劑型中。某些治療活性劑包括但不限于鹽酸二甲雙胍(pH5-7)、鹽酸雷尼替丁、西米替丁、拉米夫定、鹽酸西替利嗪(pH4-5)、金剛烷胺、金剛乙胺、西地那非、阿樸嗎啡、育亨賓、曲唑酮、利巴韋林和地塞米松、氫化可的松、氫化潑尼松、曲安奈德、可的松、煙酸、牛磺酸、維生素、天然氨基酸、兒茶酚及其衍生物、甘草提取物及其主要成分例如甘草甜和甘草酸、水溶性鉍化合物(例如酒石酸鉍鈉)，并可根據(jù)需要將在酸性和/或堿性條件下可溶解的和穩(wěn)定的那些添加到本公開內(nèi)容的含有熊去氧膽酸的水溶液劑型配方中。
可用pH調(diào)節(jié)劑實施本公開內(nèi)容的一些實施方案。非限定性實例包括HCl、H3PO4、H2SO4、HNO3、CH3COOH、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、乳酸、磷酸、eidetic acid和堿。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，所述配方可用于治療人和哺乳動物疾病。本公開內(nèi)容預期治療ALS、ALS相關病癥和其它神經(jīng)變性病癥。本公開內(nèi)容的溶液還可用于治療胃腸道病癥、肝病、膽石和高脂血癥。肝病的非限定性實例包括酒精性肝病和非酒精性肝病。胃腸道病癥的非限定性實例包括慢性胃炎、反流性胃炎和消化性潰瘍。非酒精性肝病的非限定性實例包括原發(fā)性膽汁性肝硬化、急性和慢性肝炎、原發(fā)性硬化性膽管炎、慢性活動性肝炎和肝臟脂肪堆積過多。本公開內(nèi)容還預期治療病毒性、細菌性和真菌性疾病。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，施用配方以治療和/或根除幽門螺旋桿菌(helicobacter pylori)感染。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，施用配方以治療和/或根除丙型肝炎病毒感染、甲型流感病毒感染、丙型流感病毒感染、1型副流感、仙臺病毒、風疹病毒和偽狂犬病病毒。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，施用配方以治療急性或慢性炎性疾病。炎性疾病的非限定性實例包括支氣管炎、慢性咽炎和慢性扁桃體炎。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，施用配方以治療高膽固醇血癥。
在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，改進所述配方使得其可作為液體、固體、粉末或片劑施用。在本公開內(nèi)容的一些實施方案中，所述配方包含在非腸道溶液(例如注射液、溶液劑、糖漿、稠糖漿或糊劑)中。糖漿的非限定性實例是麥芽糊精的濃度小于500g/L的麥芽糊精溶液。糖漿的非限定性實例是麥芽糊精的濃度為500g/L-1.0kg/L，其中包括端值的麥芽糊精溶液。稠糖漿的非限定性實例是麥芽糊精的濃度為1.0kg/L-1.2kg/L，其中包括端值的麥芽糊精溶液。糊劑的非限定性實例是麥芽糊精的濃度大于1.2kg/L的麥芽糊精溶液。
可通過在各種pH和溫度水平測量制劑中隨時間過去相關膽汁酸濃度來評價本公開內(nèi)容的劑型配方的穩(wěn)定性，所述制劑包含可溶性的膽汁酸、高分子量的水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和水。可根據(jù)需要調(diào)整各種膽汁酸的保留時間(高效液相色譜)以允許獨立地分析復雜樣品(即含有多種膽汁酸的樣品)中存在的各種膽汁酸。還可通過評價試驗溶液的光散射特性進行穩(wěn)定性試驗。此外，還可使用確定的加速試驗條件。
對本公開內(nèi)容的溶液進行的所有穩(wěn)定性試驗是令人滿意的，因為HPLC測量的膽汁酸濃度在各種pH水平下隨時間沒有一點變化。尤其是，檢測的所有膽汁酸溶液配方在穩(wěn)定性試驗中顯示出極好結果，在試驗期間沒有沉淀及外觀變化。一些配方保持穩(wěn)定超過2年。盡管添加了在鹽酸溶液中穩(wěn)定并可溶的治療及化學活性劑，在加速條件的各種pH下，被檢測的根據(jù)本公開內(nèi)容的水溶液劑型均沒有物理或化學變化。因此，這些水溶液體系可能是非常有價值的治療活性膽汁酸制劑的藥物劑型，和/或藥物遞送制劑，其中膽汁酸通過在各種pH條件下沒有穩(wěn)定性問題(包括酸性條件下的沉淀)的膠束形成，起到藥物佐劑、藥物載體、或藥物溶解度增強劑的作用。
使用本公開內(nèi)容的溶液和50μM過氧化氫和/或順鉑處理人神經(jīng)元細胞。過氧化氫是強氧化劑。順鉑刺激活性氧(ROS)的產(chǎn)生，所述活性氧干擾抗氧化防御體系。然后通過檢測MTT還原來分析細胞存活率，細胞增殖和凋亡。使用外源性ROS和H2O2的幾個研究尤其顯示，將人和大鼠外周血管平滑肌細胞(VSMCs)暴露于相對低水平的氧化應激下，短時間促進細胞生長，而長時間暴露于較高濃度下通過凋亡或壞死導致細胞死亡。
使用MTT分析評價過氧化氫和本公開內(nèi)容的溶液處理細胞或者過氧化氫處理細胞的細胞存活率。用本公開內(nèi)容的溶液(0.2mg/ml溶解的UDCA)和過氧化氫(50μM)處理的細胞表現(xiàn)出最高的細胞存活率(與對照100％相比，75％)。而在過氧化氫(50μM)單獨處理的細胞中觀察到最低的細胞存活率(與對照100％相比，26％)。發(fā)現(xiàn)這些結果呈劑量依賴形式。
以同樣方法評價順鉑存在下的細胞存活率。在順鉑(20μM)和本公開內(nèi)容的溶液(1mg/ml可溶性UDCA)處理的細胞中觀察到最高的細胞存活率(與對照100％相比，87％)。而在順鉑(20μM)單獨處理的細胞中觀察到最低的細胞存活率(與對照100％相比，35％)。發(fā)現(xiàn)這些結果也呈劑量依賴形式。根據(jù)MTT分析，本公開內(nèi)容的溶液可幾乎完全阻斷過氧化氫引起的氧化細胞毒性以及可完全阻斷順鉑引起的氧化細胞毒性?？傊?，本公開內(nèi)容的溶液具有強抗氧化性能并無細胞毒性。
實施例結合下面的實施例可理解本公開內(nèi)容的一些實施方案。然而，本領域技術人員可容易地了解具體的材料、組合物，所述結果僅僅舉例說明本公開內(nèi)容，而不希望，也不應用于限制本公開內(nèi)容的范圍及其各種實施方案。
實施例1膽汁酸溶液的制備首先將UDCA(60g)溶解在500mL NaOH(6.7g)溶液中制備膽汁酸的貯備液。接下來，向所得的澄清溶液中加入375g麥芽糊精，分步進行強力攪拌。然后通過逐滴加入HCl和高通量超聲(750W，20kHz)調(diào)節(jié)pH至7.0-7.2。然后用注射用蒸餾水將體積調(diào)至1.0L。最后，用0.22μGP express plus濾膜在無菌條件下過濾并滅菌所得的澄清溶液。(該過濾對滅菌是重要的，但是由于所述溶液已經(jīng)是澄清的，所以對于去除顆粒物質(zhì)是不重要的)。根據(jù)標準藥房實踐制備所需UDCA濃度的這種溶液的稀釋液。
實施例2膽汁酸溶液的制備首先將UDCA(25g)溶解在400mL NaOH(2.7g)溶液中制備膽汁酸的貯備液。接下來，向所得的澄清溶液中加入745g麥芽糊精，分步進行強力攪拌。向所得的溶液中加入100mL含有0.95g對羥基苯甲酸甲酯和0.3g亞硫酸氫鈉的保存溶液，隨后攪拌。然后用藥用級水將體積調(diào)至1.0L。最后，用適當?shù)倪^濾裝置過濾所得的澄清的溶液。(由于所述溶液已經(jīng)是澄清的，所以該過濾不是為了去除顆粒物質(zhì)而進行的)。根據(jù)標準藥房實踐制備所需UDCA濃度的這種溶液的稀釋液。
實施例3動物試驗轉(zhuǎn)基因大鼠；本實施例所用的轉(zhuǎn)基因動物是攜帶甘氨酸93-丙氨酸突變(G93A)的雜合性hSOD1。該品系表現(xiàn)出含有拷貝數(shù)減少的hSOD1的B6SJL-TgN(SOD1-G93A)1Gur(The Jackson Lab.，Bar Harbor，ME，USA)，購于Jackson實驗室。轉(zhuǎn)基因小鼠，其能過表達含有ALS患者中確定的突變的人SOD1基因，形成成人期發(fā)病的、進行性動作惡化。這些轉(zhuǎn)基因小鼠被認為是所述疾病的模型并已用于測試延遲疾病進行和死亡率的許多策略。
為了評價本發(fā)明對ALS的潛在益處，每周兩次口服施用240mg/kg溶解UDCA的本發(fā)明溶液，G93A轉(zhuǎn)基因小鼠70天齡時開始并持續(xù)到死亡。
預計壽命及其結果；圖1顯示對照小鼠(n＝8)和經(jīng)處理小鼠(n＝8)的平均預計壽命。澄清溶液(25mg/kg)將平均存活時間從對照小鼠的134.8天增加到經(jīng)處理小鼠的146.6天，死亡延遲了13天。這與G93A小鼠的壽命增加8.81％相對應。
旋轉(zhuǎn)棍試驗及其結果；使用旋轉(zhuǎn)棍評價運動行為。將小鼠置于棍上，與棍的旋轉(zhuǎn)方向相反，迫使它們保持朝前運動以防止向后從棍上滑落。學習幾天后，小鼠能保持在15r.p.m旋轉(zhuǎn)速率的旋轉(zhuǎn)棍上。每周測試小鼠1次。在每次旋轉(zhuǎn)棍試驗中每只小鼠進行3次試驗，記錄滑落前在棍上的保留時間(潛伏期)。從3次試驗中選擇在棍上的最高停留時間作為運動行為的測量值。
經(jīng)處理小鼠的運動行為隨疾病的發(fā)展顯著提高，而未處理小鼠的運動行為隨疾病的進行下降越來越快。在第112天(p＝0.01)、第119天(0.001)、第126天(p＝0.01)、第133天(p＝0.001)和第140天(p＝0.043)，未處理小鼠和經(jīng)處理小鼠的運動行為差異非常顯著。
結論；70天齡(在SOD1-G93A大鼠中證實是廣泛開始進行性細胞骨架改變的階段)被認為是ALS的臨床發(fā)作。這些數(shù)據(jù)證實溶解的UDCA溶液在ALS小鼠模型中顯著延長壽命，延遲麻痹的發(fā)作并減慢肌肉力量相關功能參數(shù)的發(fā)展。另外，天齡大于70天的較老模型施用溶解UDCA后運動行為提高，這已證實本發(fā)明的溶液可治療晚期ALS疾病并恢復運動行為。
實施例4細胞存活試驗為了評價溶解的UDCA溶液對野生型細胞、G93A細胞和A4V細胞的保護作用，神經(jīng)元分化后，用含有200nM或20μM的溶解的UDCA溶液處理這些細胞，然后培養(yǎng)24h。使用MTT分析和臺盼藍染色測定溶解的UDCA溶液對野生型細胞、G93A細胞和A4V細胞的保護作用。如圖2所示，可用細胞存活的百分率表示細胞存活率。
已知GSNO與細胞凋亡有關。為了評價溶解的UDCA在野生型細胞、hSOD1中含有G93A和A4V突變的細胞中對抗GSNO的抗凋亡作用，用500μM GSNO培養(yǎng)野生型細胞、G93A細胞和A4V細胞24小時以誘導凋亡，然后測定細胞存活率。接下來用20μM溶解的UDCA培養(yǎng)這些被凋亡誘導的野生型細胞、G93A細胞和A4V細胞24小時并使用MTT分析和臺盼藍染色測定細胞存活率。如圖3所示，可用細胞存活的百分率表示細胞存活率。
細胞培養(yǎng)將VSC4.1.(腹側脊髓4.1；運動神經(jīng)元-神經(jīng)母細胞瘤雜交細胞)保持在含有Sato′s成分(Sigma，St.Louis，MD)及2％熱滅活新生牛血清(HyClone，Logan，UT)的Dulbecco′smodified Eagles培養(yǎng)基/F-12生長培養(yǎng)基(Gibco，Grand Island，NY)中。它們在聚-(L-鳥氨酸)-預涂的培養(yǎng)皿(Falcon，F(xiàn)ranklin lakes，NJ)中進行對數(shù)生長期生長。細胞鋪滿后，將細胞以1×10n(n＝4)個細胞/孔的密度鋪于96-孔板中(NUNC，Denmark)。對于免疫印跡，將1×10n(n＝5)個細胞接種在100mm培養(yǎng)皿中(Falcon，F(xiàn)ranklin Lakes，NJ)。
構建并確定穩(wěn)定的細胞系將野生型(對照)或突變型(G93、A4V)人Cu/Zn SOD-1 cDNA克隆到pcDNA 3.0的BamHI和EcoRII位點。將不含有插入物的空載體用作對照。細胞被轉(zhuǎn)染(Superfect，Qiagen，Valencia，CA)并維持在含有濃度為400mg/ml的G418(Gibco，GrandIsland，NY)的培養(yǎng)基中。使用抗人SOD1多克隆抗體(Calbiochem，LaJolla，CA)通過Western印跡分析證明人SOD1(WT，突變體)的表達后，將單菌落或混合菌落用于該試驗。這些細胞系在與VSC4.1細胞相同的條件下生長。
MTT分析和臺盼藍染色以評價保護作用及其結果；將溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)吸收到細胞內(nèi)并通過線粒體琥珀酸脫氫酶轉(zhuǎn)化成甲 。因此，甲 的累積直接反映線粒體活性并間接反映細胞存活率。因此，將神經(jīng)分化的細胞(野生型細胞(對照)、G93A細胞、A4V細胞)以1×10n(n＝4)個細胞/孔的密度鋪于96-孔板中。為了評價G93A或A4V突變對存活率的作用，用含有1mM雙丁酰cAMP和0.025μg/ml艾菲地可寧的培養(yǎng)基培養(yǎng)鋪板的細胞，作為濃度的函數(shù)評價野生型細胞、G93A細胞和A4V細胞的存活率。為了評價溶解的UDCA對存活率的保護作用，將200nM和20μM溶解的UDCA加入到所述培養(yǎng)基中。在培養(yǎng)的第24小時，將培養(yǎng)基(200μL)加入到各個孔中，之后，加入50μL 2mg/mL MTT(Sigma，Saint Louis，MO，USA)。隨后，從各個孔中移去220μL溶液，然后向各個孔中加入150μL二甲基亞砜。最后，通過微孔板混合器溶解孔中的顆粒10分鐘后，在ELISA讀板上540nm讀取光密度(OD)。使用無細胞培養(yǎng)測量的OD校正結果。對于臺盼藍染色，將10μL臺盼藍溶液加入到從各個板中收集的10μL細胞中，培養(yǎng)所述細胞2分鐘。通過血球計計算未染色的活細胞。以細胞存活的百分率表示細胞存活率。
當用200nM溶解的UDCA處理時，與未處理的野生型細胞(對照，100％)相比較，野生型細胞、G93A細胞和A4V細胞的存活率分別為100％、130％和115％。在高于200nM濃度100倍的溶解UDCA(20μM)濃度下，與未處理的野生型細胞(對照，100％)相比較，野生型細胞、G93A細胞和A4V細胞的存活率分別為89％、133％和101％。這個試驗數(shù)據(jù)顯示溶解的UDCA對G93A細胞和A4V細胞具有保護作用，并且對野生型細胞、G93A細胞和A4V細胞無毒。
DAPI染色以評價GSNO誘導的凋亡及其結果；如下進行4′，6-聯(lián)脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽(DAPI)染色以評價凋亡。分化后，用500μMGSNO或不用GSNO培養(yǎng)野生型細胞、G93A細胞和A4V細胞24小時，然后在265g離心所述細胞2分鐘，將4％中性甲醛緩沖液加入到細胞沉淀物中。將50μL等分試樣的細胞懸浮物置于載玻片上并在室溫下干燥。在PBS中清洗固定的細胞，空氣干燥，并用DNA特異性熒光染料，DAPI(Sigma，Saint Louis，MO，USA)染色20分鐘。用PBS沖洗附著的細胞，空氣干燥，并用90％甘油固定。在Olympus熒光顯微鏡下觀察所述載玻片(圖片)。以細胞存活的百分率表示細胞存活率。
DAPI染色顯示，與野生型細胞的凋亡細胞百分率(8％)相比較，G93A細胞和A4V細胞的凋亡細胞百分率(分別是19％對比25％)顯著提高。G93A細胞和A4V細胞中經(jīng)歷凋亡的細胞百分率提高證實了GSNO對G93A細胞和A4V細胞的凋亡作用顯著大于對野生型細胞的凋亡作用。
MTT分析和臺盼藍染色以評價溶解的UDCA的抗凋亡作用及其結果；將溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)吸收到細胞內(nèi)并通過線粒體琥珀酸脫氫酶轉(zhuǎn)化成甲 。因此，甲 的累積直接反映線粒體活性并間接反映細胞存活率。因此，將神經(jīng)分化的細胞(野生型細胞(對照)、G93A細胞、A4V細胞)以1×10n(n＝4)個細胞/孔的密度鋪于96-孔板中。用含有1mM雙丁酰cAMP和0.025μg/mL艾菲地可寧的培養(yǎng)基培養(yǎng)鋪板的細胞，隨后用500μM GSNO或不用GSNO再培養(yǎng)24小時。為了評價溶解的UDCA對細胞的抗凋亡作用，將200nM和20μM溶解的UDCA加入到所述培養(yǎng)基中。在培養(yǎng)的第24小時，將培養(yǎng)基(200μL)加入到各個孔中后，加入50μL 2mg/mL MTT(Sigma，Saint Louis，MO，USA)。隨后，從各個孔中移去220μL溶液，然后向各個孔中加入150μL二甲基亞砜。最后，通過微孔板混合器溶解孔中的顆粒10分鐘后，在ELISA讀板上540nm讀取光密度(OD)。使用無細胞培養(yǎng)測量的OD校正結果。對于臺盼藍染色，將10μL臺盼藍溶液加入到從各個板中收集的10μL細胞中，培養(yǎng)所述細胞2分鐘。通過血球計計算未染色的活細胞。以細胞存活的百分率表示細胞存活率。
S-亞硝基谷胱甘肽誘導的凋亡引起的G93A細胞和A4V細胞存活率降低顯著大于野生型細胞存活率降低。與野生型細胞相比較，在G93A細胞和A4V細胞中，溶解的UDCA引起的GSNO處理(凋亡)細胞存活率的提高顯著大于野生型細胞存活率的提高。更具體而言，用500μMGSNO再培養(yǎng)后24小時，與野生型細胞(92％)相比較，G93A和A4V突變體的存活率分別是81％和75％。加入溶解的UDCA繼續(xù)培養(yǎng)后，野生型細胞的存活率從92％增加到98％，G93A細胞的存活率從81％增加到100％，A4V細胞的存活率從75％增加到115％。
這個試驗證實溶解的UDCA溶液可保護G93A細胞和A4V細胞免于NO-介導的凋亡并可恢復凋亡介導的損傷的ALS細胞。
改善和/或治療神經(jīng)變性疾病和/或運動神經(jīng)元疾病癥狀的其它等同或替代方法和/或組合物是本領域普通技術人員應當理解的。例如，可根據(jù)診斷和/或治療的不同大小(例如兒童和成人)的對象、具有另外過敏癥或病癥的對象和/或過敏和/或癥狀嚴重變化的對象來衡量方法和劑量。此外，可隨時間(例如每月或每季度)波動調(diào)整方法和劑量。希望這些等價物和替代以及明顯的變動和改進也包括在本公開內(nèi)容的范圍內(nèi)。例如，所提供的值和/或范圍終點不希望嚴格限制所有實施方案。而且，本領域普通技術人員應當理解，沒有單一的實施方案、用途和/或優(yōu)點希望是完全控制或排除另外的實施方案、用途和/或優(yōu)點。例如，執(zhí)業(yè)醫(yī)師可認為是彼此參考的情況。而本公開內(nèi)容包括ALS的遺傳學、生物化學和細胞生物學的當前理解的廣泛信息以及膽汁酸的代謝，進一步的工作可揭示這些理解方面是不準確或不完全的。因此，本領域技術人員應當理解，本公開內(nèi)容，不管是整體或部分，不被特定的模型或作用機制所限制。此外，本領域技術人員應當理解可以使用其它的等同或替代的組合物和方法。例如，盡管已公開許多化合物可與膽汁酸施用，還可包括其它的化合物。而且，可在施用膽汁酸組合物時同時施用藥物或這兩種可同時或在重疊時期(例如在同一小時、同一天或同一周)施用。因此，前述的公開內(nèi)容用于舉例說明而不是限制下述權利要求舉例說明的本公開內(nèi)容的范圍。
權利要求
1.一種改善或治療對象的神經(jīng)變性疾病的至少一個癥狀的方法，所述方法包括向?qū)ο笫┯贸吻逅芤?，所述澄清水溶液包?a)第一材料，其選自膽汁酸、膽汁酸的水溶性衍生物、膽汁酸鹽和通過酰胺鍵與胺綴合的膽汁酸；(b)碳水化合物，其選自水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物或水溶性非淀粉多糖；(c)水，其中所述第一材料和所述碳水化合物在選定pH值范圍內(nèi)針對溶液的所有pH值均保持在溶液中。
2.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述神經(jīng)變性疾病選自帕金森病、亨廷頓舞蹈癥、阿爾茨海默病、肌萎縮性側索硬化、中風和脊髓損傷。
3.根據(jù)權利要求2的方法，其中所述神經(jīng)變性疾病是肌萎縮性側索硬化。
4.根據(jù)權利要求3的方法，其中所述肌萎縮性側索硬化是晚期肌萎縮性側索硬化。
5.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述癥狀選自壽命縮短和麻痹。
6.根據(jù)權利要求1的方法，其中對象是哺乳動物。
7.根據(jù)權利要求1的方法，其中對象是人。
8.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述第一材料以治療活性量存在。
9.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述第一材料選自鵝去氧膽酸、膽酸、豬去氧膽酸、去氧膽酸、7-氧代石膽酸、石膽酸、碘代去氧膽酸、iocholic acid、牛磺熊去氧膽酸、?；蛆Z去氧膽酸、?；侨パ跄懰?、甘氨熊去氧膽酸、?；悄懰?、甘氨膽酸和它們在甾核上羥基或羧酸基處的衍生物、它們的鹽或它們與胺的綴合物。
10.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物選自麥芽糊精、糊精、液體葡萄糖、玉米糖漿固體和可溶性淀粉。
11.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述選定的pH范圍是約1-約10，其中包括端值。
12.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述第一材料是熊去氧膽酸或熊去氧膽酸的鈉鹽。
13.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物是麥芽糊精。
14.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述水溶性非淀粉多糖選自葡聚糖、瓜爾膠、果膠、不能消化的可溶性纖維。
15.一種改善或治療對象的運動神經(jīng)元疾病的至少一個癥狀的方法，所述方法包括向?qū)ο笫┯贸吻逅芤?，所述澄清水溶液包?a)第一材料，其選自膽汁酸、膽汁酸的水溶性衍生物、膽汁酸鹽和通過酰胺鍵與胺綴合的膽汁酸；(b)碳水化合物，其選自水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物或水溶性非淀粉多糖；(c)水，其中所述第一材料和所述碳水化合物在選定pH值范圍內(nèi)針對溶液的所有pH值均保持在溶液中。
16.根據(jù)權利要求15的方法，其中所述運動神經(jīng)元疾病選自肌萎縮性側索硬化、進行性延髓麻痹、假性球麻痹、原發(fā)性側索硬化、進行性肌萎縮和小兒麻痹后遺癥。
17.根據(jù)權利要求16的方法，其中所述運動神經(jīng)元疾病是肌萎縮性側索硬化。
18.根據(jù)權利要求17的方法，其中所述肌萎縮性側索硬化是晚期肌萎縮性側索硬化。
19.根據(jù)權利要求15的方法，其中所述癥狀選自壽命縮短和麻痹。
20.根據(jù)權利要求15的方法，其中對象是哺乳動物。
21.根據(jù)權利要求15的方法，其中對象是人。
22.根據(jù)權利要求15的方法，其中所述第一材料以治療活性量存在。
23.根據(jù)權利要求15的方法，其中所述第一材料選自鵝去氧膽酸、膽酸、豬去氧膽酸、去氧膽酸、7-氧代石膽酸、石膽酸、碘代去氧膽酸、iocholic acid、?；切苋パ跄懰?、?；蛆Z去氧膽酸、?；侨パ跄懰?、甘氨熊去氧膽酸、?；悄懰?、甘氨膽酸和它們在甾核上羥基或羧酸基處的衍生物、它們鹽或它們與胺的綴合物。
24.根據(jù)權利要求15的方法，其中所述水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物選自麥芽糊精、糊精、液體葡萄糖、玉米糖漿固體和可溶性淀粉。
25.根據(jù)權利要求15的方法，其中所述選定的pH范圍是約1-約10其中包括端值。
26.根據(jù)權利要求15的方法，其中所述第一材料是熊去氧膽酸或熊去氧膽酸的鈉鹽。
27.根據(jù)權利要求15的方法，其中所述水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物是麥芽糊精。
28.根據(jù)權利要求15的方法，其中所述水溶性非淀粉多糖選自葡聚糖、瓜爾膠、果膠、不能消化的可溶性纖維。
29.一種改善或治療對象的神經(jīng)變性疾病的至少一個癥狀或運動神經(jīng)元疾病的至少一個癥狀的方法，所述方法包括向?qū)ο笫┯盟幬锘衔?；和向?qū)ο笫┯贸吻逅芤海龀吻逅芤喊?a)第一材料，其選自膽汁酸、膽汁酸的水溶性衍生物、膽汁酸鹽和通過酰胺鍵與胺綴合的膽汁酸；(b)碳水化合物，其選自水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物或水溶性非淀粉多糖；(c)水，其中所述第一材料和所述碳水化合物在選定pH值范圍內(nèi)針對溶液的所有pH值均保持在溶液中。
30.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述對象是哺乳動物。
31.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述對象是人。
32.根據(jù)權利要求29的方法，其中施用藥物化合物和施用澄清水溶液同時進行。
33.根據(jù)權利要求29的方法，其中施用藥物化合物和施用澄清水溶液在指定時期內(nèi)的不同時刻進行。
34.根據(jù)權利要求33的方法，其中在施用澄清水溶液之前施用藥物化合物。
35.根據(jù)權利要求33的方法，其中在施用澄清水溶液之后施用藥物化合物。
36.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述施用藥物化合物還包括施用多個劑量的所述藥物化合物。
37.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述施用澄清水溶液還包括施用多個劑量的所述澄清水溶液。
38.根據(jù)權利要求37的方法，其中所述施用藥物化合物還包括施用多個劑量的所述藥物化合物。
39.根據(jù)權利要求38的方法，其中所述施用藥物化合物還包括在施用澄清水溶液之后施用至少一個劑量的所述藥物化合物。
40.根據(jù)權利要求38的方法，其中所述施用藥物化合物還包括在施用澄清水溶液之前施用至少一個劑量的所述藥物化合物。
41.根據(jù)權利要求38的方法，其中所述施用澄清水溶液還包括在施用藥物化合物之后施用至少一個劑量的所述澄清水溶液。
42.根據(jù)權利要求38的方法，其中所述施用澄清水溶液還包括在施用藥物化合物之前施用至少一個劑量的所述澄清水溶液。
43.根據(jù)權利要求38的方法，其中所述施用澄清水溶液和所述施用藥物化合物在各個劑量下均同時進行。
44.根據(jù)權利要求43的方法，其中所述澄清水溶液還包含所述藥物化合物。
45.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述第一材料以治療活性量存在。
46.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述第一材料選自鵝去氧膽酸、膽酸、豬去氧膽酸、去氧膽酸、7-氧代石膽酸、石膽酸、碘代去氧膽酸、iocholic acid、?；切苋パ跄懰?、?；蛆Z去氧膽酸、?；侨パ跄懰?、甘氨熊去氧膽酸、?；悄懰帷⒏拾蹦懰岷退鼈冊阽藓松狭u基或羧酸基處的衍生物、它們的鹽或它們與胺的綴合物。
47.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物選自麥芽糊精、糊精、液體葡萄糖、玉米糖漿固體和可溶性淀粉。
48.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述選定的pH范圍是約1-約10，其中包括端值。
49.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述第一材料是熊去氧膽酸或熊去氧膽酸的鈉鹽。
50.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物是麥芽糊精。
51.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述水溶性非淀粉多糖選自葡聚糖、瓜爾膠、果膠、不能消化的可溶性纖維。
52.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述神經(jīng)變性疾病或運動神經(jīng)元疾病選自帕金森病、亨廷頓舞蹈癥、阿爾茨海默病、肌萎縮性側索硬化、中風、脊髓損傷、進行性延髓麻痹、假性球麻痹、原發(fā)性側索硬化、進行性肌萎縮和小兒麻痹后遺癥。
53.根據(jù)權利要求52的方法，其中所述神經(jīng)變性疾病或運動神經(jīng)元疾病是肌萎縮性側索硬化。
54.根據(jù)權利要求29的方法，其中所述藥物化合物降低運動神經(jīng)元死亡。
55.根據(jù)權利要求54的方法，其中所述降低運動神經(jīng)元死亡的藥物化合物選自對氨基水楊酸異煙肼、芐噻嗪、氫化潑尼松、薄荷醇、萘磺酸甲芐咔啉、三氯噻嗪、土霉素、硫酸魁蛤素(Arcainesulfate)、紅霉素、谷胱甘肽、三甲呋豆素、鹽酸布酚寧、去甲西泮、鹽酸嘧啶二胺、丙戊酸鈉、氨基比林、磺胺甲二唑、氟哌利多、2-硫脲嘧啶、犬尿烯酸、夫西地酸、亞葉酸鈣、硫酸司巴丁、苦杏仁苷、鹽酸丙嗎卡因、呋塞米、雙硝米特、布地縮松、夫洛丙酮、氟氫縮松、抗炎藥)、N-甲酰甲硫氨酰苯丙氨酸、硫噴妥鈉、達克普隆、溴苯乙胺、頭孢孟多酯鈉、丙氧咪唑(Oxybendazole)、環(huán)亮氨酰甘氨酸、達者侖鈉、四氫對醌、哌嗪、七葉苷(Aesculin)、炔孕酮、二甲雙酮、灰黃霉素、醋胺沙羅、鹽酸檳榔次堿、二鹽酸腐胺、鹽酸依米丁、氨苯磺胺、含羞草堿、乙酰膽堿、甲磺酸碘磷定、賴氨酰色氨酰-賴氨酸、?？稍碥赵⒋姿釟浠瘽娔崴?、阿苯噠唑、氫氯噻嗪、鹽酸去甲金霉素、呋喃西林、雙氯青霉素鈉、α-生育酚、鹽酸四環(huán)素、非諾貝特、丙磺舒、維A酸、對乙酰氨基酚、鹽酸白毛莨分堿、d[-精氨酸-2]醋酸高托爾芬、NMDA、頭孢美唑鈉、病毒唑、O-芐基-L-絲氨酸、印防己毒素、羥乙卡因、磺胺噻唑、三氯氮芥、萘丁美酮、氯霉素、利魯唑、人參及其提取物，甘草甜素和甘草酸、carboquinone的衍生物、輔酶Q10、肌酸、胰島素樣生長因子-1、米諾環(huán)素、mecamserin、扎利羅登(xaliproden)、加巴噴丁、右美沙芬、他侖帕奈(talampanel)、IL-1、TR-500、丙環(huán)司坦、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、巴氯芬、替扎尼定、苯二氮類、格隆溴銨、阿托品、奎寧、苯妥英和嗎啡。
56.權利要求29的方法，其中所述藥物化合物選自激素、激素拮抗劑、止痛藥、退熱藥、抗炎藥、免疫活性藥物、抗腫瘤藥物、抗生素、抗炎劑、擬交感神經(jīng)藥、抗感染藥、抗腫瘤劑和麻醉劑。
57.權利要求29的方法，其中所述藥物化合物選自胰島素、肝素、降鈣素、氨芐西林、善得定、枸櫞酸西地那非、骨化三醇、雙氫速甾醇、阿樸嗎啡(ampomorphine)、育亨賓(yohimbin)、曲唑酮、阿昔洛韋、鹽酸金剛胺、鹽酸金剛乙胺、西多福韋(cidofovir)、甲磺酸地拉韋定、地達諾新、泛昔洛韋、forscarnet sodium，氟尿嘧啶、更昔洛韋鈉、碘苷、干擾素-α，拉米夫定，奈韋拉平、噴昔洛維、利巴韋林、司他夫定、三氟尿苷、鹽酸伐昔洛韋(valacyclovir·HCl)、扎西他賓、齊多夫定、硫酸莫地那韋、利托那韋、甲磺酸奈非那韋、甲磺酸沙奎那韋、d-青霉胺、氯喹、羥氯喹、金硫葡糖、硫代蘋果酸金鈉、金諾芬、左旋咪唑、DTC、異丙肌苷、甲基肌苷單磷酸鹽、胞壁酰二肽、二氮嗪、鹽酸肼苯噠嗪、米諾地爾、雙嘧達莫、鹽酸苯氧丙酚胺、煙酸、鹽酸布酚寧、酚妥拉明、甲磺酸多沙唑嗪、鹽酸哌唑嗪，鹽酸特拉唑嗪(terazocinHCl)、鹽酸可樂定、硝苯地平、脈導敏、胺碘酮、乙酰水楊酸、維拉帕米、地爾硫、尼索地平、伊拉的平、芐普地爾、硝酸異山梨酯、戊四硝酯、硝酸甘油、西米替丁、法莫替丁、尼扎替丁、雷尼替丁、蘭索拉唑、奧美拉唑、米索前列醇、硫糖鋁、鹽酸胃復安、紅霉素、鉍化合物、前列地爾、沙丁胺醇、吡布特羅、硫酸特布他林、沙美特羅(salmetrol)、氨茶堿、甘油茶堿、麻黃堿、乙諾那林、新異丙腎上腺素、異丙腎上腺素、間羥異丙腎上腺素、n-docromil、oxy triphylline、茶堿、比托特羅、非諾特羅、布地奈德、氟尼縮松、丙酸倍氯米松、丙酸氟地松、可待因、硫酸可待因、磷酸可待因、氫溴酸右美沙芬、曲安奈德、孟魯司特鈉、扎魯司特、苯噻羥脲、色甘酸鈉、異丙托溴銨、奈多羅米苯甲酸鈉、鹽酸苯海拉明、重酒石酸二氫可待因酮、鹽酸美沙酮、硫酸嗎啡、乙酰半胱氨酸、愈創(chuàng)木酚甘油醚、碳酸銨、氯化銨、酒石酸銻鉀、甘油、水合萜品、棕櫚酸考福西利、阿托伐他汀鈣、西立伐他汀鈉(cervastatinsodium)、氟伐他汀鈉、洛伐他汀、普伐他汀鈉、斯伐他汀、picrorrhazia kurrva、穿心蓮(andrographis paniculata)、辣木(moringa oleifera)、闊莢合歡(albizzia lebeck)、鴨嘴花(adhatavasica)、姜黃(curcuma longa)、苦瓜(momordica charantia)、匙羹藤(gymnema sylvestre)、阿江欖仁(terminalia arjuna)、印楝(azadirachta indica)、心葉青牛膽(tinosporia cordifolia)、甲硝唑、兩性霉素B、克霉唑、氟康唑、鹵普羅近、酮康唑、灰黃霉素、伊曲康唑、鹽酸特比萘酚、硝酸益康唑、咪康唑、制霉菌素、硝酸奧昔康唑、硝酸硫康唑、鹽酸西替利嗪、地塞米松、氫化可的松、氫化潑尼松、可的松、兒茶素及其衍生物、甘草甜素、甘草酸、倍他米松、ludrocortisone acetate、氟尼縮松、丙酸氟地松甲基潑尼松龍、生長激素釋放抑制因子、賴脯胰島素(lispro)、胰高血糖素、胰島素原、不溶性胰島素、拜糖平、氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、鹽酸二甲雙胍、瑞格列奈、甲磺丁脲、氨基酸、秋水仙堿、磺吡酮、別嘌呤醇、吡羅昔康、托美汀鈉、吲哚美辛、布洛芬、雙氟尼酸、甲滅酸、萘普生和曲恩汀。
58.一種澄清水溶液，其包含(a)第一材料，其選自膽汁酸、膽汁酸的水溶性衍生物、膽汁酸鹽和通過酰胺鍵與胺綴合的膽汁酸；(b)碳水化合物，其選自水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物或水溶性非淀粉多糖；(c)藥學有效量的降低運動神經(jīng)元死亡的藥物化合物；和(d)水，其中所述第一材料、所述碳水化合物和利魯唑在選定pH值范圍內(nèi)針對溶液的所有pH值均保持在溶液中。
59.根據(jù)權利要求58的澄清水溶液，其中所述第一材料以神經(jīng)保護量存在。
60.根據(jù)權利要求58的澄清水溶液，其中所述藥物化合物在選定范圍內(nèi)針對所有pH值均保持在溶液中。
61.根據(jù)權利要求58的澄清水溶液，其中所述第一材料是熊去氧膽酸。
62.根據(jù)權利要求58的澄清水溶液，其中所述第一材料是熊去氧膽酸的鈉鹽。
63.根據(jù)權利要求58的澄清水溶液，其中所述第一材料選自鵝去氧膽酸、膽酸、豬去氧膽酸、去氧膽酸、7-氧代石膽酸、石膽酸、碘代去氧膽酸、iocholic acid、?；切苋パ跄懰?、?；蛆Z去氧膽酸、牛磺去氧膽酸、甘氨熊去氧膽酸、?；悄懰帷⒏拾蹦懰岷退鼈冊阽藓松狭u基或羧酸基處的衍生物、它們的鹽或它們與胺的綴合物。
64.根據(jù)權利要求58的澄清水溶液，其中所述選定的pH范圍是約1-約10，其中包括端值。
65.根據(jù)權利要求58的澄清水溶液，其中所述水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物選自麥芽糊精、糊精、液體葡萄糖、玉米糖漿固體和可溶性淀粉。
66.根據(jù)權利要求58的澄清水溶液，其中所述水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物是麥芽糊精。
67.根據(jù)權利要求58的澄清水溶液，其中所述水溶性非淀粉多糖選自葡聚糖、瓜爾膠、果膠、不能消化的可溶性纖維。
68.根據(jù)權利要求58的澄清水溶液，其中所述藥物化合物選自對氨基水楊酸異煙肼、芐噻嗪、氫化潑尼松、薄荷醇、萘磺酸甲芐咔啉、三氯噻嗪、土霉素、硫酸魁蛤素(Arcaine sulfate)、紅霉素、谷胱甘肽、三甲呋豆素、鹽酸布酚寧、去甲西泮、鹽酸嘧啶二胺、丙戊酸鈉、氨基比林、磺胺甲二唑、氟哌利多、2-硫脲嘧啶、犬尿烯酸、夫西地酸、亞葉酸鈣、硫酸司巴丁、苦杏仁苷、鹽酸丙嗎卡因、呋塞米、雙硝米特、布地縮松、夫洛丙酮、氟氫縮松、抗炎藥)、N-甲酰甲硫氨酰苯丙氨酸、硫噴妥鈉、達克普隆、溴苯乙胺、頭孢孟多酯鈉、丙氧咪唑(Oxybendazole)、環(huán)亮氨酰甘氨酸、達者侖鈉、四氫對醌、哌嗪、七葉苷(Aesculin)、炔孕酮、二甲雙酮、灰黃霉素、醋胺沙羅、鹽酸檳榔次堿、二鹽酸腐胺、鹽酸依米丁、氨苯磺胺、含羞草堿、乙酰膽堿、甲磺酸碘磷定、賴氨酰色氨酰-賴氨酸、海可皂苷元、醋酸氫化潑尼松、阿苯噠唑、氫氯噻嗪、鹽酸去甲金霉素、呋喃西林、雙氯青霉素鈉、α-生育酚、鹽酸四環(huán)素、非諾貝特、丙磺舒、維A酸、對乙酰氨基酚、鹽酸白毛莨分堿、d[-精氨酸-2]醋酸高托爾芬、NMDA、頭孢美唑鈉、病毒唑、O-芐基-L-絲氨酸、印防己毒素、羥乙卡因、磺胺噻唑、三氯氮芥、萘丁美酮、氯霉素、利魯唑、人參及其提取物，甘草甜素和甘草酸、carboquinone的衍生物、輔酶Q10、肌酸、胰島素樣生長因子-1、米諾環(huán)素、mecamserin、扎利羅登(xaliproden)、加巴噴丁、右美沙芬、他侖帕奈(talampanel)、IL-1、TR-500、丙環(huán)司坦、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、巴氯芬、替扎尼定、苯二氮類、格隆溴銨、阿托品、奎寧、苯妥英和嗎啡。
全文摘要
本公開內(nèi)容涉及一種或多種膽汁酸和水溶性淀粉轉(zhuǎn)化產(chǎn)物或非淀粉多糖的澄清水溶液。本公開內(nèi)容的溶液可結合對患有神經(jīng)變性疾病和/或運動神經(jīng)元疾病的對象具有治療作用的藥物化合物向?qū)ο笫┯?。在一些實施方案中，所述疾病是肌萎縮性側索硬化。
文檔編號A61P25/28GK101048164SQ200580037307
公開日2007年10月3日 申請日期2005年10月31日 優(yōu)先權日2004年11月1日
發(fā)明者柳署弘 申請人:柳署弘