專利名稱：用于治療肥胖的新穎的肽類的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的肽類化合物，它們是一種或多種黑皮質素受體的配體，且可以發(fā)揮延長的活性，涉及所述化合物在治療中的應用，涉及包含將所述化合物施用給患者的治療方法，還涉及所述化合物在制備藥物中的應用。
背景技術：
肥胖是許多常見病(如動脈粥樣硬化、高血壓、II型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM))、血脂障礙、冠心病、骨關節(jié)炎和多種惡性腫瘤)發(fā)展的熟知的危險因素。它還會通過減少的運動性和降低的生活質量引起顯著的問題。肥胖的發(fā)生和由此引起的這些疾病正在所有的工業(yè)化國家中增長。迄今為止，僅可以得到少量的藥理學治療，即西布曲明(Abbot；通過5-羥色胺能機理和去甲腎上腺素機理發(fā)揮作用)和奧利司他(Roche Pharm；減少從腸的脂肪攝入)。但是，由于肥胖作為嚴重的(甚至致命的)和常見的疾病中的危險因素的重要作用，仍然需要用于治療肥胖的藥物化合物。
術語肥胖是指過量的脂肪組織。在本上下文中，最好將肥胖看作會導致健康風險的任意程度過量的肥胖。僅可以估計正常和肥胖個體之間的差異，但是肥胖導致的健康風險可能是具有增加的肥胖的統(tǒng)一體。但是，在本發(fā)明的上下文中，體重指數(BMI＝以千克計的體重/以米計的身高的平方)超過25的個體應當被視作肥胖。
即使輕微的肥胖也會增加早產兒死亡、糖尿病、高血壓、動脈粥樣硬化、膽囊病和某些類型的癌癥的風險。在工業(yè)化的西方國家，肥胖發(fā)病率在過去的數十年中顯著增加。由于肥胖的高發(fā)病率和它的健康后果，它的治療應當具有高度的公共衛(wèi)生優(yōu)先性。
當能量攝入超過能量消耗時，多余的卡路里會儲藏在脂肪組織中，并且如果延長這樣的凈正平衡，則產生肥胖，即重量平衡有2個組成部分，任一方面(攝入或消耗)的異常都會導致肥胖。
阿黑皮素原(POMC)是β-內啡肽和黑皮質素肽(包括促黑激素(α-MSH)和促腎上腺皮質激素(ACTH))的前體。POMC在幾種外周和中樞組織(包括黑素細胞、垂體和下丘腦神經元)中表達。POMC前體在不同的組織中進行不同的加工，導致依賴于表達部位的不同黑皮質素肽的表達。在垂體前葉中，主要生成ACTH，而在垂體中葉和下丘腦神經元中，主要的肽是α-MSH、β-MSH、去乙酰-α-MSH和β-內啡肽。已經證實了幾種黑皮質素肽(包括ACTH和α-MSH)在通過腦室內注射給予大鼠后具有抑制食欲的活性[Vergoni等，European Journal ofPharmacology179，347-355(1990)]。使用人造的環(huán)狀α-MSH類似物MT-II也得到了抑制食欲的效果。
已經鑒別出了5種黑皮質素受體亞型的家族(黑皮質素受體1-5，也稱作MC1，MC2，MC3、MC4和MC5)。MC1，MC2和MC5主要在外周組織中表達，而MC3和MC4主要中樞性地表達，但是MC3也在外周組織中表達。除了參與能量體內穩(wěn)態(tài)外，還已經證實MC3受體也參與幾種炎性疾病。MC3激動劑對這些疾病(例如痛風性關節(jié)炎)也具有積極效果。MC5主要在外周表達，已經證實它參與外分泌和炎癥。已經證實MC4參與體重和進食行為的調節(jié)，因為MC4敲除的小鼠會發(fā)展肥胖[Huzar等，Cell88，131-141(1997)]。另外，已經證實MC4受體參與能量消耗的調節(jié)[Fekete等，Journal of Neuroscience20，1550-1558(2000)]。此外，關于刺鼠蛋白(MC1，MC3和MC4拮抗劑)的異位中樞表達或在小鼠腦中內源性地產生的MC3和MC4拮抗劑(刺鼠基因相關肽，AGRP)的過表達的研究表明，這兩種拮抗劑的過表達會導致肥胖的發(fā)展[Kleibig等，PNAS92，4728-4732(1995)]。而且，腦室內(icv)注射AGRP的C-末端片段會增加進食，并拮抗α-MSH對食物攝入的抑制作用。
在人類中，已經描述了推測是由于MC4中的移碼突變導致的肥胖家族的幾個案例[見例如，Yeo等，Nature Genetics20，111-112(1998)；Vaisse等，Nature Genetics20，113-114(1998)]。
總之，MC4激動劑可以用作食欲減退劑或能量消耗調節(jié)藥，且可以用于治療肥胖或肥胖相關疾病，以及用于治療通過激活MC4得以改善的其它疾病、障礙或病癥。
MC4拮抗劑可以用于治療惡病質或厭食癥，和用于治療虛弱的老齡患者的waisting。而且，MC4拮抗劑可以用于治療慢性疼痛、神經病和神經性炎癥。
大量的專利申請公開了各種類別的作為黑皮質素受體調節(jié)劑的非肽小分子，其中的實例是WO 03/009850、WO 03/007949和WO 02/081443。
許多專利文件中還公開了肽作為黑皮質素受體調節(jié)劑的應用，例如WO 03/006620，US 5731,408和WO 98/27113。Hadle[Pigment CellRes.，4，180-185，(1991)]報告了與脂肪酸綴合的特定促黑色素激素肽的延長的作用，所述的持久作用通過由綴合的脂肪酸造成的調節(jié)劑從可逆作用向不可逆作用的轉化來實現。
發(fā)明概述本發(fā)明的發(fā)明人已經驚奇地發(fā)現，特定的肽綴合物對一種或多種黑皮質素受體(即MC1，MC2，MC3、MC4或MC5受體)具有高調控作用。因此，本發(fā)明涉及式I化合物R1-S-Z1-Z2-Z3-His-Z4-Z5-c[X1-X2-X3-Arg-X4-X5]N(R’)2[I]其中R1代表直鏈、支鏈的和/或環(huán)狀的C14-22烷?；?、C14-22烯酰基或C14-22炔?；?，其可以任選地被一個或多個選自鹵素、羥基和芳基的取代基取代，或R1代表C9-17-C(O)-NH-S(O)2-(CH2)3-C(O)-；S代表一個鍵，4-氨基丁酸殘基，Gly，β-Ala，或由式II代表的結構
Z1代表Gly，β-Ala，Ser，D-Ser，Thr，D-Thr，His，D-His，Asn，D-Asn，Gln，D-Gln，Glu，D-Glu，Asp，D-Asp，Ala或D-Ala；Z2代表Ser，Thr，Gln，Asn，Glu，Asp或His；Z3代表D-Gln或D-Asn；Z4代表Ser，Thr，Dab，Dap，Glu或Asp；Z5代表Ala，Val，Leu，Ile，Met或Nle；X1代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；X2代表His，Cit，Dab，Dap，Cgl，Cha，Val，Ile，tBuGly，Leu，Tyr，Glu，Ala，Nle，Met，Met(O)，Met(O2)，Gln，Gln(烷基)，Gln(芳基)，Asn，Asn(烷基)，Asn(芳基)，Ser，Thr，Cys，Pro，Hyp，Tic，2-PyAla，3-PyAla，4-PyAla，(2-噻吩基)丙氨酸，3-(噻吩基)丙氨酸，(4-噻唑基)Ala，(2-呋喃基)丙氨酸，(3-呋喃基)丙氨酸或Phe，其中所述Phe的苯基任選地被選自下述的取代基取代鹵素，羥基，烷氧基，硝基，苯甲酰基，甲基，三氟甲基，氨基和氰基；X3代表D-Phe，其中D-Phe中的苯基可以任選地被一個或多個選自下述的取代基取代鹵素，羥基，烷氧基，硝基，甲基，三氟甲基和氰基；X4代表Trp，2-Nal，(3-苯并[b]噻吩基)丙氨酸殘基或(S)-2，3，4，9-四氫-1H-β-咔啉-3-甲酸殘基；X5代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；其中X1和X5通過由均獨立地為Cys、高Cys或Pen的X1和X5衍生的二硫鍵，或通過X1的側鏈中的羧酸和X5的側鏈中的氨基之間形成的酰胺鍵，或通過X5的側鏈中的羧酸和X1的側鏈中的氨基之間形成的酰胺鍵連接到一起，使式I化合物成為環(huán)狀；每個R’獨立地代表氫或C1-6烷基，其可以任選地被一個或多個氨基或羥基取代；
條件是，式I化合物不是十四烷酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十八烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2或十六烷酰基-Gly-Ser-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2；和其藥學上可接受的鹽、前藥和溶劑化物。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物在治療中的應用，涉及包含本發(fā)明的化合物的藥物組合物，涉及包含給有此需要的患者施用本發(fā)明的化合物的治療方法，還涉及本發(fā)明的化合物在制備藥物中的應用。
定義使用在基團名稱前面的“Cx-y”型前綴，如在Cx-y烷基(例如C14-22烷基)中，表示具有x至y個碳原子的指定類型的基團。因而，直鏈、支鏈的和/或環(huán)狀的C14-22烷?；?、C14-22烯?；駽14-22炔?；斪鳛楸景l(fā)明的化合物中的取代基R1而存在時，包括具有14，15，16，17，18，19，20，21或22個碳原子(即C14，C15，C16，C17，C18，C19，C20，C21或C22)的直鏈、支鏈的和/或環(huán)狀的烷?；⑾；蛉蝉；?。
如本文所使用的術語“烷基”是指直鏈、支鏈的和/或環(huán)狀的飽和單價烴基。其實例包括甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，1-丁基，2-丁基，叔丁基，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基和環(huán)己基。
如本文所使用的術語“鏈烯基”指直鏈、支鏈的和/或環(huán)狀的包含至少一個碳-碳雙鍵的單價烴基。其實例包括乙烯基，丙-1-烯-1-基，丙-2-烯-1-基和丙-2-烯-2-基。
如本文所使用的術語“炔基”指直鏈、支鏈的和/或環(huán)狀的包含至少一個碳-碳三鍵的單價烴基，且它可以任選地另外包含一個或多個碳-碳雙鍵。其實例包括乙炔基，丙-1-炔-1-基和丙-2-炔-1-基。
如本文所使用的術語“烷?；币庵甘?C(O)-R’的基團，其中R’是如上所述的烷基。
如本文所使用的術語“烯酰基”意指式-C(O)-R”的基團，其中R”是如上所述的鏈烯基。
如本文所使用的術語“炔?；币庵甘?C(O)-R的基團，其中R是如上所述的炔基。
如本文所使用的術語“烷氧基”意指式-OR’的基團，其中R’是如上所述的烷基。其實例包括甲氧基和乙氧基。
在本上下文中，術語“芳基”意指碳環(huán)芳環(huán)基團或稠合的芳環(huán)系統(tǒng)基團，其中至少一個環(huán)是芳族的。典型的芳基包括苯基，聯苯基，萘基等。
術語“鹵素”意指元素周期表的第7主族的成員，它包括氟、氯、溴和碘(分別與氟、氯、溴和碘取代基相對應)。
當提到2個氨基酸成橋時，意指2個分別的氨基酸的側鏈中的官能團已經反應形成共價鍵。
在本上下文中，術語“激動劑”意指可以激活正在討論的受體類型的物質(配體)。
在本上下文中，術語“拮抗劑”意指可以阻斷、中和或消除激動劑作用的物質(配體)。
更具體地，受體配體可以分成下述類別受體激動劑，其可以激活受體；部分激動劑也可以激活受體，但是具有比完全激動劑更低的功效。部分激動劑也可以起受體部分拮抗劑的作用，部分地抑制完全激動劑的作用。
受體中性拮抗劑，其可以阻斷激動劑的作用，但是不會影響受體-構成活性(receptor-constitutive activity)。
受體逆轉激動劑，其可以阻斷激動劑的作用，并同時減弱受體-構成活性。完全逆轉激動劑可以完全減弱受體-構成活性；部分逆轉激動劑可以將受體-構成活性減弱至更小的程度。
如本文所使用的術語“拮抗劑”包括中性拮抗劑和部分拮抗劑，以及逆轉激動劑。術語“激動劑”包括完全激動劑以及部分激動劑。
在本上下文中，術語“藥學上可接受的鹽”意指對患者無害的鹽。這樣的鹽包括藥學上可接受的酸加成鹽、藥學上可接受的金屬鹽、銨和烷基化的銨鹽。酸加成鹽包括無機酸和有機酸的鹽。合適的無機酸的代表性實例包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、硫酸和硝酸等。合適的有機酸的代表性實例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、檸檬酸、富馬酸、羥基乙酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水楊酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、酒石酸、抗壞血酸、撲酸、雙亞甲基水楊酸、乙二磺酸、葡萄糖酸、檸康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、EDTA、乙醇酸、對氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、對甲苯磺酸等。藥學上可接受的無機酸或有機酸的酸加成鹽的其它實例包括在這里引作參考的J.Pharm.Sci.(1977)66，2中列出的藥學上可接受的鹽。相關的金屬鹽的實例包括鋰、鈉、鉀、鎂鹽等。烷基化的銨鹽的實例包括甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、乙基銨、羥乙基銨、二乙基銨、丁基銨、四甲基銨鹽等。
如本文所使用的，化合物的″治療有效量″指足以治愈、減輕或部分地阻止指定疾病和/或其并發(fā)癥的臨床表現的量。將足以實現該目的的量定義為″治療有效量″。每個目的的有效量取決于疾病或損傷的嚴重性，以及對象的體重和總體病癥。應當理解，通過構建矩陣(matrix)值并測試矩陣中的不同點，使用常規(guī)實驗可以確定適當的劑量，其均屬于熟練的醫(yī)生或獸醫(yī)的常識范圍之內。
如本文所使用的術語“治療(treatment)”，“治療(treating)”和它的其它變體指為抵抗病癥(例如疾病或障礙)的目的而管理和護理患者。該術語意在包括針對患者患有的指定病癥的全譜治療，例如施用正在討論的活性化合物來減輕癥狀或其并發(fā)癥，延遲疾病、障礙或病癥的進展，治愈或消除疾病、障礙或病癥，和/或預防病癥，其中預防應當理解為抵抗疾病、病癥或障礙的目的而管理和護理患者，還包括施用正在討論的活性化合物來預防癥狀或并發(fā)癥的發(fā)作。待治療的患者優(yōu)選地是哺乳動物，特別是人類，但是其它動物如狗、貓、牛、馬、綿羊、山羊或豬等的治療，也在本發(fā)明的范圍內。
如本文所使用的，術語“溶劑化物”指溶質(in casu，根據本發(fā)明的化合物)和溶劑形成的確定化學計量的絡合物。溶劑可以包括，例如，水、乙醇或乙酸。
在本上下文中使用的氨基酸縮寫具有下面的含義



以D-開始、后面跟著3字母代碼的氨基酸縮寫，如D-Ser，D-His等，指對應氨基酸的D-對映體，例如D-絲氨酸，D-組氨酸等。在3字母代碼或氨基酸名稱前面沒有字母D的情況下，如在例如Ser(絲氨酸)、His(組氨酸)等中，應當理解，指正在討論的氨基酸的L-對映體。
發(fā)明詳述如上面已經指出的，本發(fā)明的一個方面涉及式I化合物R1-S-Z1-Z2-Z3-His-Z4-Z5-c[X1-X2-X3-Arg-X4-X5]N(R’)2[I]其中R1代表直鏈、支鏈的和/或環(huán)狀的C14-22烷酰基、C14-22烯酰基或C14-22炔?；淇梢匀芜x地被一個或多個選自鹵素、羥基和芳基的取代基取代，或R1代表C9-17-C(O)-NH-S(O)2-(CH2)3-C(O)-；S代表一個鍵，4-氨基丁酸殘基，Gly，β-Ala，或由式II代表的結構 Z1代表Gly，β-Ala，Ser，D-Ser，Thr，D-Thr，His，D-His，Asn，D-Asn，Gln，D-Gln，Glu，D-Glu，Asp，D-Asp，Ala或D-Ala；Z2代表Ser，Thr，Gln，Asn，Glu，Asp或His；Z3代表D-Gln或D-Asn；Z4代表Ser，Thr，Dab，Dap，Glu或Asp；Z5代表Ala，Val，Leu，Ile，Met或Nle；X1代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；X2代表His，Cit，Dab，Dap，Cgl，Cha，Val，Ile，tBuGly，Leu，Tyr，Glu，Ala，Nle，Met，Met(O)，Met(O2)，Gln，Gln(烷基)，Gln(芳基)，Asn，Asn(烷基)，Asn(芳基)，Ser，Thr，Cys，Pro，Hyp，Tic，2-PyAla，3-PyAla，4-PyAla，(2-噻吩基)丙氨酸，3-(噻吩基)丙氨酸，(4-噻唑基)Ala，(2-呋喃基)丙氨酸，(3-呋喃基)丙氨酸或Phe，其中所述Phe的苯基任選地被選自下述的取代基取代鹵素，羥基，烷氧基，硝基，苯甲?；谆?，三氟甲基，氨基和氰基；X3代表D-Phe，其中D-Phe中的苯基可以任選地被一個或多個選自下述的取代基取代鹵素，羥基，烷氧基，硝基，甲基，三氟甲基和氰基；X4代表Trp，2-Nal，(3-苯并[b]噻吩基)丙氨酸殘基或(S)-2，3，4，9-四氫-1H-β-咔啉-3-甲酸殘基；X5代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；其中X1和X5通過由均獨立地為Cys、高Cys或Pen的X1和X5衍生的二硫鍵，或通過X1的側鏈中的羧酸和X5的側鏈中的氨基之間形成的酰胺鍵，或通過X5的側鏈中的羧酸和X1的側鏈中的氨基之間形成的酰胺鍵連接到一起，使式I化合物成為環(huán)狀；每個R’獨立地代表氫或C1-6烷基，其可以任選地被一個或多個氨基或羥基取代；條件是，式I化合物不是十四烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十八烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2或十六烷?；?Gly-Ser-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2；和其藥學上可接受的鹽、前藥和溶劑化物。
在本發(fā)明的化合物的某些實施方案中，式I中的R1是C14-18-烷?；?，且S是一個鍵或由式II代表的結構。
在本發(fā)明的化合物的進一步的實施方案中，式I中的R1是4-(C14-18烷?；?氨磺酰基)丁?；?，如4-(十六烷?；被酋；?丁?；襍是一個鍵。
在本發(fā)明的化合物的其它實施方案中，式I中的Z1是Gly，Glu或Asp，且Z5是Nle或Ala。
在本發(fā)明的化合物的其它實施方案中，式I中的Z2是Glu，Asp，Ser，Thr，Gln或Asn，特別是Ser，Thr，Gln或Asn，特別是Thr或Ser。
在本發(fā)明的化合物的某些實施方案中，式I中的Z3是D-Gln。在其它實施方案中，Z3是D-Asn。
在本發(fā)明的化合物的更進一步的實施方案中，式I中的Z4是Glu，Asp，Ser，Thr，Dab或Dap，特別是Ser或Thr。
在本發(fā)明的化合物的其它實施方案中，式I中的Z5是Nle。在其它實施方案中，Z5是Ala。
在本發(fā)明的化合物的一組實施方案中，式I中的X1是Glu，式I中的X3是D-Phe，式I中的X4是Trp，且式I中的X5是Lys。在另一組實施方案中，X1是Asp，X3是D-Phe，X4是Trp，且X5是Lys。
在本發(fā)明的化合物的某些其它實施方案中，式I中的X1和X5獨立地是Cys，高Cys或Pen，式I中的X3是D-Phe，且式I中的X4是Trp。
本發(fā)明的化合物的其它相關的實施方案包括這樣的化合物，其中式I中的X2是Tic，Met(O)2，Ser，Hyp，Cit，Dap，Asn，Gln或(4-噻唑基)Ala。其中，特別令人感興趣的實施方案是其中X2是Hyp的實施方案、其中X2是Asn或Gln的實施方案，和其中X2是Cit的實施方案。
在本發(fā)明的化合物的一組特別的實施方案中，式I中的基團N(R′)2是NH2(即氨基)。
令人感興趣的本發(fā)明化合物的具體類型包括下列化合物R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO1)，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO2)，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO3)，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO4)，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO5)，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO6)，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO7)，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO8)，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO9)，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO10)，
R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO11)，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO12)，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO13)，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO14)，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO15)，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO16)，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO17)，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO18)，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO19)，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO20)，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO21)，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO22)，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO23)，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO24)，
R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO25)，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO26)，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO27)，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO28)，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO29)，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO30)，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO31)，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO32)，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO33)，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO34)，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO35)，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO36)，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[高Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-高Cys]-NH2(SEQ ID NO37)，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Dap-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Pen]-NH2(SEQ ID NO38)，
R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Dap-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Cys]-NH2(SEQ ID NO39)，R1-S-Glu-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO40)，R1-S-Gly-Glu-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO41)，R1-S-Glu-Ser-D-Gln-His-Glu-Nle-G[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO42)，和R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Ala-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO43)。
其中R1和S可以如上所述變化。
根據本發(fā)明令人感興趣的化合物的具體實例是十六烷酰基-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO44)，十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO45)，十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO46)，十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO47)，十六烷酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO48)，十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Gln-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO49)，十六烷?；?Gly-Gln-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO50)，
十六烷?；?Gly-Gln-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO51)，十六烷?；?Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO52)，十六烷?；?Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO53)，十八烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[G lu-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO54)，4-(十六烷?；被酋；?丁酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO55)，4-(十六烷?；被酋；?丁酰基-Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO56)，2-[2-(十六烷?；被?乙氧基]乙氧基乙?；?Gly-Thr-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO57)，4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO58)，4-(十三烷?；被酋；?丁?；?Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO59)，十六烷酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[homoCys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-homoCys]-NH2(SEQ ID NO60)，4-(十六烷酰基氨磺?；?丁酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Dap-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Pen]-NH2(SEQ ID NO61)，4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Dap-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Cys]-NH2(SEQ ID NO62)，4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Glu-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO63)，4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Gly-Glu-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO64)，4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Glu-Ser-D-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO65)，和4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Ala-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2(SEQ ID NO66)。
本發(fā)明也包括如上所述的本發(fā)明的化合物的兩個或多個實施方案的組合。
在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明的化合物是黑皮質素受體的激動劑，尤其是MC4的激動劑。在本發(fā)明的另一個方面，所述化合物是MC4的選擇性激動劑。在此上下文中，選擇性應當理解為化合物相對于MC1、MC3和/或MC5的活性。如果化合物作為MC4激動劑比作為MC1、MC3和/或MC5激動劑明顯更有效，則視其為選擇性MC4激動劑。通過對比下面“測定IV”(MC1)所述的MC1結合測定和下面“測定III”(MC4)所述的功能MC4測定，可以確定化合物相對于MC1和MC4的激動效力。如果化合物對于MC4的效力比對于MC1的效力大于10倍、例如大于50倍、例如大于100倍，則將其視為相對于MC1的選擇性MC4激動劑。在如“測定II”(MC3和MC5)和“測定III”(MC4)所述的功能測定中，可以確定化合物對于MC3、MC4和MC5的激動效力。如果化合物對于MC4的效力比對于MC3的效力大于10倍、例如大于50倍、例如大于100倍，則將其視為相對于MC3的選擇性MC4激動劑。如果化合物對于MC4的效力比對于MC5的效力大于10倍、例如大于50倍、例如大于100倍，則將其視為相對于MC5的選擇性MC4激動劑。在一個具體的方面，本發(fā)明的化合物是相對于MC1、相對于MC3、相對于MC5、相對于MC1和MC3、相對于MC1和MC5、相對于MC3和MC5或相對于MC1、MC3和MC5的選擇性MC4激動劑。
在本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明的化合物是選擇性的MC4激動劑和MC3拮抗劑。在此上下文中，如果化合物是如上所述的相對于MC1和MC5的選擇性MC4激動劑，且如“測定II”所述測得其能拮抗MC3，則將其視為選擇性MC4激動劑和MC3拮抗劑。在后一測定中，將表現出小于100nM、例如小于10nM、例如小于5nM、例如小于1nM的IC50值的化合物視為MC3拮抗劑。
在本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明的化合物是選擇性MC3激動劑和選擇性MC4激動劑。在此上下文中，如果化合物作為MC3和MC4激動劑比作為MC1和MC5激動劑明顯更有效，則將其視為選擇性MC3和MC4激動劑。通過對比如“測定IV”所述測得的MC1的效力和如“測定II”所述測得的MC3的效力，可以確定化合物對于MC1和MC3的選擇性。如果化合物對于MC3的效力與對于MC1相比大于10倍、例如大于50倍、例如大于100倍，將其視為相對于MC1的選擇性MC3激動劑。通過對比如“測定II”所述測得的效力，可以確定化合物對于MC3和MC5的選擇性。如果化合物對于MC3的效力與對于MC5相比大于10倍、例如大于50倍、例如大于100倍，將其視為相對于MC5的選擇性MC3激動劑。如上所述，可以確定化合物相對于MC3和MC5的MC4選擇性。
本發(fā)明的化合物可以發(fā)揮長效作用，即可以延長它們發(fā)揮生物活性的時間期限。在略作修改的“測定I”中，通過對比本發(fā)明的化合物和其中R1是氫且S是一個鍵的對應化合物，可以評價延長效果。該實驗允許持續(xù)時間段T，直到大鼠已經吃得與實驗前一樣多。測量本發(fā)明的化合物和其中R1是氫且S是一個鍵的對應化合物的T值，并計算差異ΔT。認為產生超過3小時、例如超過7小時、例如超過12小時、例如超過24小時、例如超過48小時、例如超過72小時的ΔT的本發(fā)明的化合物會發(fā)揮長效作用(protracted effect)。
本發(fā)明的化合物能調控黑皮質素受體，因此認為它們特別適用于治療可以通過調控黑皮質素受體活性來治療的疾病或狀態(tài)。更具體地，認為本發(fā)明的化合物適用于通過激活MC4來治療疾病或狀態(tài)。
在一個方面，本發(fā)明涉及激動或激活對象中的MC4的方法，該方法包含給對象施用有效量的本發(fā)明的化合物(即式I的化合物)。
在另一個方面，本發(fā)明提供了延遲從葡萄糖耐受不良(IGT)向II型糖尿病發(fā)展的方法，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物。
在另一個方面，本發(fā)明提供了延遲從II型糖尿病向胰島素依賴性糖尿病(insulin-requiring diabetes)發(fā)展的方法，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物。
在另一個方面，本發(fā)明涉及治療肥胖或預防超重的方法，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物。
在另一個方面，本發(fā)明提供了調節(jié)食欲的方法，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的另一個方面涉及誘導飽感的方法，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的另一個方面涉及預防成功地減肥后體重反彈的方法，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的另一個方面涉及增加能量消耗的方法，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的其它方面包括治療與超重或肥胖有關的疾病或狀態(tài)的方法，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物；治療食欲過盛的方法，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物；治療暴食的方法，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物；治療選自下述的疾病或狀態(tài)的方法動脈粥樣硬化，高血壓，糖尿病，II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障礙，冠心病，膽囊病，膽結石，骨關節(jié)炎，癌癥，性功能障礙和早產兒死亡的危險，該方法包含給有此需要的患者施用有效量的本發(fā)明的化合物。
更具體地，本發(fā)明的化合物適用于治療肥胖或超重患者的疾病。因此，本發(fā)明還提供了治療肥胖患者的選自下述的疾病或狀態(tài)的方法II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障礙，冠心病，膽囊病，膽結石，骨關節(jié)炎，癌癥，性功能障礙和肥胖患者早產兒死亡的危險，該方法包含給有此需要的肥胖患者施用有效量的本發(fā)明的化合物。
此外，本發(fā)明的化合物的施用可以有利地用于治療已經經歷或要經歷胃囊?guī)g和/或胃手術的患者、尤其是肥胖或超重的患者。
另外，MC4激動劑通過調控獎勵系統(tǒng)(reward system)和出血性休克對胰島素敏感性、藥物濫用具有積極效果。而且，MC3和MC4激動劑具有解熱作用，且已經證實二者都參與外周神經再生，還已知MC4受體能降低應激反應。
將本發(fā)明的化合物施用給本發(fā)明上下文中的患者的適當途徑包括，腸胃外途徑，如鼻、肺或舌下給藥途徑，它們都是給藥領域的技術人員熟知的。
在上面所述的所有治療方法中，可以單獨地或與一種或多種(即1、2、或3....等)本發(fā)明的其它化合物組合施用本發(fā)明的化合物。此外，本發(fā)明的化合物，或2種或多種(即2、3、或4....等)本發(fā)明化合物的組合可以與一種或多種其它的治療活性試劑或化合物(即不在本發(fā)明范圍內的試劑或化合物)依次地或同時地組合施用。
當用在根據本發(fā)明的方法中時，本發(fā)明的化合物的典型劑量范圍是約0.001-約100mg/kg體重/天，例如約0.01-約50mg/kg體重/天，如約0.05-約10mg/kg體重/天，分一個或多個劑量給藥，如1-3個劑量。準確劑量取決于給藥的頻率和方式，治療的對象的性別、年齡、體重和總體情況，治療的病癥的性質和嚴重性，要治療的任何并發(fā)疾病，和本領域的技術人員顯而易見的其它因素。
使用本領域技術人員熟知的技術，可以方便地將本發(fā)明化合物配制成單位劑型。用于每天口服給藥1或3次(例如每天1-3次)的典型單位劑型可以合適地含有0.05-約1000mg、例如約0.1-約500mg、例如約0.5mg-約200mg本發(fā)明的化合物。
在另一個方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含任選地與一種或多種其它的治療活性化合物或物質相組合的本發(fā)明化合物，以及一種或多種藥學上可接受的載體或賦形劑。該組合物可以合適地是單位劑型，其包含約0.05mg至約1000mg、例如約0.1mg至約500mg、例如約0.5mg至約200mg本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物在生產用于治療選自下述的疾病或病癥的藥物中的應用，其任選地與一種或多種其它的治療活性化合物或物質相組合超重或肥胖，食欲過盛，暴食，動脈粥樣硬化，高血壓，II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障礙，冠心病，膽囊病，膽結石，骨關節(jié)炎，癌癥，性功能障礙和早產兒死亡的危險。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物在生產藥物中的應用，其任選地與一種或多種其它的治療活性化合物或物質相組合，所述藥物能有效地延遲從IGT向II型糖尿病的發(fā)展；延遲從II型糖尿病向胰島素依賴性糖尿病的發(fā)展；調節(jié)食欲；誘導飽感；預防成功地減肥后體重反彈；或增加能量消耗。
如上所述，本發(fā)明的化合物可以與一種或多種其它的治療活性化合物或物質組合施用或使用。合適的其它化合物或物質可以選自，例如，抗糖尿病藥、抗高血脂藥、抗肥胖藥、抗高血壓藥和用于治療糖尿病導致的或與糖尿病有關的并發(fā)癥的藥物。
合適的抗糖尿病藥包括胰島素；胰島素的衍生物或類似物，包括表現出延長(protract)的或拉長(prolong)活性的衍生物或類似物，例如在這里引作參考的WO 95/07931，WO 97/31022和WO 2005/012347(Novo Nordisk A/S)中公開的那些；GLP-1(胰高血糖素樣肽-1)的衍生物，例如在這里引作參考的WO 98/08871(Novo Nordisk A/S)中公開的那些；GLP-1類似物的衍生物，例如在這里引作參考的US 6,458,924(Knudsen等)中公開的那些；以及口服活性降血糖藥。
合適的口服活性的降血糖藥包括咪唑啉；磺酰脲；雙胍；美格替耐(meglitinide)；唑烷二酮；噻唑烷二酮；胰島素敏化劑；α-葡糖苷酶抑制劑；作用于ATP-依賴性的胰腺β-細胞的鉀通道的藥物，例如鉀通道開啟物，例如在這里引作參考的WO 97/26265、WO 99/03861和WO 00/37474(Novo Nordisk A/S)中公開的那些；鉀通道開啟物，例如ormitiglinide；鉀通道阻斷劑，例如那格列奈或BTS-67582；胰高血糖素拮抗劑，例如在這里引作參考的WO 99/01423和WO00/39088(Novo Nordisk A/S和Agouron Pharmaceuticals，Inc.)中公開的那些；GLP-1激動劑，例如在這里引作參考的WO 00/42026(NovoNordisk A/S和Agouron Pharmaceuticals，Inc.)中公開的那些，DPP-IV(二肽基肽酶-IV)抑制劑；PTP酶(蛋白酪氨酸磷酸酶)抑制劑；葡糖激酶活化劑，例如在這里引作參考的WO 2004/002481(NovoNordisk)和WO 02/08209(Hoffmann La Roche)中公開的那些；參與刺激糖原異生和/或糖原分解的肝酶的抑制劑；葡萄糖攝入調節(jié)劑；GSK-3(糖原合酶激酶-3)抑制劑；調節(jié)脂類代謝的化合物，例如抗高血脂藥和抗血脂藥；降低食物攝入的化合物；以及PPAR(過氧化物酶體增殖劑-活化的受體)激動劑和RXR(類維生素A(retinoid)X受體)激動劑，例如ALRT-268、LG-1268或LG-1069。
合適的其它治療活性化合物的其它實例包括胰島素或胰島素類似物；磺酰脲，例如甲苯磺丁脲，氯磺丙脲，妥拉磺脲，格列本脲，格列吡嗪，格列美脲，格列齊特，格列本脲；雙胍，例如二甲雙胍；美格替耐，例如瑞格列奈或色那列奈/那格列奈。
合適的其它治療活性物質的其它實例包括噻唑烷二酮胰島素敏化劑，例如曲格列酮，環(huán)格列酮，吡格列酮，羅格列酮，伊沙列酮，達格列酮，恩格列酮，CS-011/CI-1037或T 174，或在這里引作參考的WO 97/41097(DRF-2344)、WO 97/41119、WO 97/41120、WO 00/41121和WO 98/45292(Dr.Reddy’s Research Foundation)中公開的化合物。
合適的其它治療活性物質的其它實例包括胰島素敏化劑，例如GI 262570，YM-440，MCC-555，JTT-501，AR-H039242，KRP-297，GW-409544，CRE-16336，AR-H049020，LY510929，MBX-102，CLX-0940，GW-501516，和在這里引作參考的WO 99/19313(NN622/DRF-2725)、WO 00/50414、WO 00/63191、WO 00/63192、WO 00/63193(Dr.Reddy’sResearch Foundation)和WO 00/23425、WO 00/23415、WO 00/23451、WO 00/23445、WO 00/23417、WO 00/23416、WO 00/63153、WO 00/63196、WO 00/63209、WO 00/63190和WO 00/63189(Novo Nordisk A/S)中公開的化合物。
合適的其它治療活性物質的其它實例包括α-葡糖苷酶抑制劑，例如伏格列波糖，乙格列酯，米格列醇或阿卡波糖；糖原磷酸化酶抑制劑，例如在WO 97/09040(Novo Nordisk A/S)中公開的化合物；葡糖激酶活化劑；作用于ATP-依賴性的胰腺β-細胞的鉀通道的藥物，例如甲苯磺丁脲，格列本脲，格列吡嗪，格列齊特，BTS-67582或瑞格列奈；其它合適的其它治療活性物質包括抗高血脂藥和抗血脂藥，例如考來烯胺，考來替泊，氯貝丁酯，吉非貝齊，洛伐他汀，普伐他汀，辛伐他汀，普羅布考或右旋甲狀腺素；適用作其它治療活性物質的其它試劑包括抗肥胖試劑和食欲調節(jié)劑。這樣的物質可以選自CART(可卡因安非他明調節(jié)的轉錄物)激動劑，NPY(神經肽Y)拮抗劑，Y2和Y4受體激動劑，MC3(黑皮質素3)激動劑，MC3(黑皮質素3)拮抗劑，MC4(黑皮質素4)激動劑，阿立新拮抗劑，TNF(腫瘤壞死因子)激動劑，CRF(促皮質釋放素)激動劑，CRFBP(促皮質釋放因子結合蛋白)拮抗劑，urocortin激動劑，β3腎上腺素能激動劑如CL-316243，AJ-9677，GW-0604，LY362884，LY377267或AZ-40140，MC1(黑皮質素1)激動劑，MCH(濃縮黑素細胞的激素)拮抗劑，CCK(縮膽囊肽)激動劑，5-羥色胺再攝入抑制劑(例如氟西汀，賽樂特或西酞普蘭)，5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝入抑制劑，5HT(5-羥色胺)激動劑，鈴蟾肽激動劑，甘丙肽拮抗劑，生長激素，生長因子例如促乳素或胎盤催乳激素，生長激素釋放化合物(生長激素促分泌素)，ghrelin拮抗劑，TRH(促甲狀腺激素釋放激素)激動劑，UCP 2或3(解偶聯蛋白2或3)調節(jié)劑，化學解偶聯劑，瘦蛋白(leptin)激動劑，DA(多巴胺)激動劑(溴隱亭，doprexin)，脂酶/淀粉酶抑制劑，PPAR調節(jié)劑，RXR調節(jié)劑，TRβ激動劑，腎上腺素能CNS刺激劑，AGRP(刺鼠相關蛋白)抑制劑，組胺H3受體拮抗劑例如在這里引作參考的WO 00/42023、WO 00/63208和WO 00/64884中公開的那些，exendin-4，GLP-1激動劑和纖毛神經營養(yǎng)因子。
其它合適的抗肥胖藥是丁氨苯丙酮(抗抑郁藥)，托吡酯(抗驚厥藥)，依考匹泮(多巴胺D1/D5拮抗劑)，納曲酮(阿片樣物質拮抗劑)，和肽YY3-36(Batterham等，Nature418，650-654(2002))。
在本發(fā)明的方法中用作與本發(fā)明的化合物組合使用的其它治療活性物質的合適的抗肥胖藥的一個實施方案是瘦蛋白。
合適的抗肥胖藥的另一個實施方案是肽YY3-36。
合適的抗肥胖藥的另一個實施方案是5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝入抑制劑，例如西布曲明。
合適的抗肥胖藥的其它實施方案是脂酶抑制劑，例如奧利司他。
合適的抗肥胖藥的其它實施方案是腎上腺素能CNS刺激劑，例如右旋安非他明，安非他明，芬特明，馬吲哚，苯甲曲秦，安非拉酮，芬氟拉明或右旋芬氟拉明。
合適的其它治療活性化合物的其它實例包括抗高血壓藥?？垢哐獕核幍膶嵗铅?阻斷劑例如烯丙洛爾、阿替洛爾、噻嗎洛爾、吲哚洛爾、普萘洛爾和美托洛爾，ACE(血管緊張肽轉換酶)抑制劑例如貝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利、喹那普利和雷米普利，鈣通道阻斷劑例如硝苯吡啶、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地爾硫和維拉帕米，以及α-阻斷劑例如多沙唑嗪、烏拉地爾、哌唑嗪和特拉唑嗪。
在本發(fā)明的應用和方法的某些實施方案中，本發(fā)明的化合物可以與一種以上上述的合適的其它治療活性化合物或物質組合施用或使用，例如與下述物質組合二甲雙胍和磺酰脲例如格列本脲；磺酰脲和阿卡波糖；那格列奈和二甲雙胍；阿卡波糖和二甲雙胍；磺酰脲，二甲雙胍和曲格列酮；胰島素和磺酰脲；胰島素和二甲雙胍；胰島素，二甲雙胍和磺酰脲；胰島素和曲格列酮；胰島素和洛伐他?。坏?。
藥物組合物如已經提及的，本發(fā)明的一個方面提供了包含本發(fā)明化合物的藥物組合物(制劑)。這種制劑的適當的實施方案經常含有濃度為10-3mg/ml-200mg/ml(例如10-1mg/ml-100mg/ml)的本發(fā)明化合物。本發(fā)明的這種制劑的pH范圍典型地是2.0-10.0。制劑還可以包含緩沖系統(tǒng)，防腐劑，張力劑，螯合劑，穩(wěn)定劑和/或表面活性劑。在本發(fā)明的一個實施方案中，藥物制劑是含水制劑，即包含水的制劑，且術語“含水制劑”在本上下文中通常用于指包含至少50重量％(w/w)水的制劑。制劑典型地是溶液或懸浮液。含水溶液形式的本發(fā)明的含水制劑通常包含至少50％(w/w)水。類似地，含水懸浮液形式的本發(fā)明的含水制劑通常包含至少50％(w/w)水。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物(制劑)可以是冷凍干燥的(即冷凍干燥的)制劑，其由醫(yī)師或患者在使用前加入溶劑和/或稀釋劑來重配。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物(制劑)可以是干燥的制劑(例如冷凍干燥的或噴霧干燥的)，其無需任何事先溶解即可使用。
在另一個方面，本發(fā)明涉及藥物組合物(制劑)，其包含本發(fā)明的化合物的含水溶液，和緩沖液，其中本發(fā)明的化合物以0.1-100mg/ml或以上的濃度存在，且其中該制劑具有約2.0-約10.0的pH。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，制劑的pH具有選自下述的值2.0，2.1，2.2，2.3，2.4，2.5，2.6，2.7，2.8，2.9，3.0，3.1，3.2，3.3，3.4，3.5，3.6，3.7，3.8，3.9，4.0，4.1，4.2，4.3，4.4，4.5，4.6，4.7，4.8，4.9，5.0，5.1，5.2，5.3，5.4，5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0，6.1，6.2，6.3，6.4，6.5，6.6，6.7，6.8，6.9，7.0，7.1，7.2，7.3，7.4，7.5，7.6，7.7，7.8，7.9，8.0，8.1，8.2，8.3，8.4，8.5，8.6，8.7，8.8，8.9，9.0，9.1，9.2，9.3，9.4，9.5，9.6，9.7，9.8，9.9和10.0。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的緩沖藥物組合物中的緩沖液可以包含一種或多種選自下述的緩沖物質乙酸鈉，碳酸鈉，檸檬酸鹽，甘氨酰甘氨酸二肽酶，組氨酸，甘氨酸，賴氨酸，精氨酸，磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，磷酸鈉，三(羥基甲基)氨基甲烷(TRIS)，N，N-二(羥乙基)甘氨酸，三(羥甲基)甲基甘氨酸(tricine)，蘋果酸，琥珀酸鹽，馬來酸，富馬酸，酒石酸和天冬氨酸。這些具體緩沖劑中的每一種構成本發(fā)明的一個可選擇的實施方案。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可以包含藥學上可接受的防腐劑，例如一種或多種選自下述的防腐劑苯酚，鄰甲酚，間甲酚，對甲酚，對羥基苯甲酸甲酯，對羥基苯甲酸丙酯，2-苯氧乙醇，對羥基苯甲酸丁酯，2-苯基乙醇，芐醇，氯丁醇，硫柳汞，溴硝丙二醇，苯甲酸，咪脲，氯己定(chlorohexidine)，甲醋吡喃酮鈉，氯甲酚，對羥基苯甲酸乙酯，芐索氯銨和chlorphenesine(3對-氯苯氧基丙烷-1，2-二醇)。這些具體防腐劑中的每一種構成本發(fā)明的一個可選擇的實施方案。在本發(fā)明的另一個實施方案中，防腐劑以0.1mg/ml-20mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明這樣的藥物組合物的另一個實施方案中，防腐劑以0.1mg/ml-5mg/ml的濃度、5mg/ml-10mg/ml的濃度、或10mg/ml-20mg/ml的濃度存在。防腐劑在藥物組合物中的應用是本領域技術人員熟知的。為了方便，在這方面可以參考RemingtonThe Science and Practice ofPharmacy，第20版，2000。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，制劑還包含張力調節(jié)劑，即為了調節(jié)本發(fā)明的液體制劑(尤其是含水制劑)或重配的冷凍干燥制劑的張力(滲透壓)至預期水平的目的而加入的物質，通常這會使產生的最終液體制劑是等滲的或基本上等滲的。合適的張力調節(jié)劑可以選自鹽(例如氯化鈉)，糖和糖醇(例如甘露醇)，氨基酸(例如甘氨酸，組氨酸，精氨酸，賴氨酸，異亮氨酸，天冬氨酸，色氨酸或蘇氨酸)，醛糖醇[例如甘油(丙三醇)，1，2-丙二醇(丙二醇)，1，3-丙二醇或1，3-丁二醇]，聚乙二醇(例如PEG 400)和它們的混合物。
可以使用任意的糖，如單-、二-或多糖，或水溶性葡聚糖，包括例如果糖，葡萄糖，甘露糖，山梨糖，木糖，麥芽糖，乳糖，蔗糖，海藻糖，葡聚糖，芽霉菌糖，糊精，環(huán)糊精，可溶性淀粉，羥乙基淀粉或羧甲基纖維素鈉；在一個實施方案中，可以使用蔗糖。糖醇(源自單-、二-、寡-或多糖的多元醇)包括，例如，甘露醇，山梨醇，肌醇，半乳糖醇，衛(wèi)矛醇，木糖醇和阿糖醇。在一個實施方案中，使用的糖醇是甘露醇。上述的糖或糖醇可以單獨地或組合地使用。對于用量沒有固定的限制，只要糖或糖醇可溶于液體組合物(制劑)，且不會不利地影響使用本發(fā)明的方法實現的穩(wěn)定作用。在一個實施方案中，糖或糖醇的濃度是約1mg/ml至約150mg/ml。
在另一個實施方案中，張力調節(jié)劑以1mg/ml-50mg/ml，如1mg/ml-7mg/ml、8mg/ml-24mg/ml或25mg/ml-50mg/ml的濃度存在。含有上面具體指出的任一種張力調節(jié)劑的本發(fā)明藥物組合物構成本發(fā)明的一個實施方案。張力調節(jié)劑在藥物組合物中的應用是本領域技術人員熟知的。為了方便，可以參考RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000。
在本發(fā)明藥物組合物(制劑)的另一個實施方案中，制劑還包含螯合劑。合適的螯合劑可以選自，例如，乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸和天冬氨酸的鹽，和它們的混合物。螯合劑的濃度合適地是0.1mg/ml-5mg/ml，如0.1mg/ml-2mg/ml或2mg/ml-5mg/ml。含有上面具體指出的任一種螯合劑的本發(fā)明藥物組合物構成本發(fā)明的一個實施方案。螯合劑在藥物組合物中的應用是本領域技術人員熟知的。為了方便，可以參考RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000。
在本發(fā)明藥物組合物(制劑)的另一個實施方案中，制劑還包含穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑在藥物組合物中的應用是本領域技術人員熟知的。為了方便，可以參考RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000。
更具體地，特別有用的本發(fā)明組合物包括穩(wěn)定化的液體藥物組合物，它的治療活性組分包括可能在液體藥物制劑儲存過程中表現出聚集物(aggregate)形成的寡-或多肽?！寰奂镄纬伞逯赣晒?或多肽分子之間的物理相互作用導致的寡聚物的形成，其可以保持可的或從溶液中沉淀出來可見的大聚集物。術語″儲存過程中″指液體藥物組合物或制劑在制備出來后通常并不立即施用給對象的事實。然而，在制備后，將它包裝以便儲存，無論以液體形式，冷凍狀態(tài)，還是以用于以后重配成液體形式或適合施用給對象的其它形式的干燥形式?！甯稍镄问健逯府斖ㄟ^冷凍干燥(即冷凍干燥；見例如，Williams和Polli(1984)J.ParenteralSci.Technol.3848-59)、通過噴霧干燥[見例如，Masters(1991)inSpray-Drying Handbook(第5版Longman Scientific and Technical，Essex，U.K.)，pp.491-676；Broadhead等(1992)Drug Devel.Ind.Pharm.181169-1206；和Mumenthaler等(1994)Pharm.Res.1112-20]、或通過風干[見例如，Carpenter和Crowe(1988)Cryobiology25459-470；和Roser(1991)Biopharm.447-53]干燥液體藥物組合物或制劑時得到的產物。儲存液體藥物組合物過程中的寡-或多肽的聚集物形成會不利地影響該肽的生物活性，導致藥物組合物的治療效果損失。而且，聚集物形成可以造成其它問題，例如，當使用輸注系統(tǒng)施用含有寡-或多肽的藥物組合物時輸液管、膜或泵的堵塞。
本發(fā)明的藥物組合物還可以包含足以減少儲存組合物過程中寡-或多肽的聚集物形成的量的氨基酸堿?！灏被釅A″指氨基酸，或氨基酸的組合，其中任何特定的氨基酸以它的游離堿形式或它的鹽形式存在。當使用氨基酸的組合時，所有氨基酸都可以以它們的游離堿形式存在，都可以以它們的鹽形式存在，或有些以它們的游離堿形式存在，而其它的以它們的鹽形式存在。在一個實施方案中，用于制備本發(fā)明的組合物的氨基酸是攜帶帶電荷的側鏈的那些，如精氨酸，賴氨酸，天冬氨酸和谷氨酸。特定氨基酸(例如甲硫氨酸，組氨酸，精氨酸，賴氨酸，異亮氨酸，天冬氨酸，色氨酸或蘇氨酸，和它們的混合物)的任何立體異構體(即L，D，或它們的混合物)或這些立體異構體的組合可以存在于本發(fā)明的藥物組合物中，只要該特定氨基酸以它的游離堿形式或它的鹽形式存在。在一個實施方案中，使用氨基酸的L-立體異構體。也可以用這些氨基酸的類似物配制本發(fā)明的組合物?！灏被犷愃莆铩逯柑烊淮嬖诘陌被岬难苌铮鋾崿F減少儲存本發(fā)明的液體藥物組合物過程中寡-或多肽的聚集物形成的預期作用。合適的精氨酸類似物包括，例如，氨基胍，鳥氨酸和N-單乙基-L-精氨酸。合適的甲硫氨酸類似物包括乙硫氨酸和丁硫氨酸，且合適的半胱氨酸類似物包括S-甲基-L-半胱氨酸。象氨基酸本身一樣，氨基酸類似物以它們的游離堿形式或它們的鹽形式摻入本發(fā)明的組合物中。在本發(fā)明的另一個實施方案中，氨基酸或氨基酸類似物以足以預防或延遲寡-或多肽的聚集的濃度摻入。
在本發(fā)明的一個具體的實施方案中，當起治療劑作用的寡-或多肽是包含至少一個對氧化敏感的甲硫氨酸殘基的肽時，可以將甲硫氨酸(或另一種含硫的氨基酸或氨基酸類似物)摻入本發(fā)明的組合物中，以抑制甲硫氨酸殘基氧化成甲硫氨酸亞砜。術語″抑制″在本上下文中指甲硫氨酸-氧化的種類隨時間的積累最小化。甲硫氨酸氧化的抑制導致寡-或多肽增加在它的合適的分子形式的保持?？梢允褂眉琢虬彼岬娜魏瘟Ⅲw異構體(L或D)或其組合。加入的量應當是足以抑制甲硫氨酸殘基的氧化的量，使得甲硫氨酸亞砜的量是管理機構可接受的。通常，這意味著存在不超過約10％-約30％的亞砜化的甲硫氨酸的寡-或多肽的形式。通常，這可以通過將甲硫氨酸摻入組合物中，使得加入的甲硫氨酸與甲硫氨酸殘基的比為約1∶1-約1000∶1，如約10∶1-約100∶1來實現。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，制劑還包含選自高分子量聚合物和低分子量化合物的穩(wěn)定劑。因而，例如，穩(wěn)定劑可以選自下述物質，如聚乙二醇(例如PEG 3350)，聚乙烯醇(PVA)，聚乙烯吡咯烷酮，羧基-/羥基纖維素和其衍生物(例如HPC，HPC-SL，HPC-L或HPMC)，環(huán)糊精，含硫的物質如單硫代甘油，巰基乙酸和2-甲基硫代乙醇，和各種鹽(例如氯化鈉)。含有上面具體指出的任一種穩(wěn)定劑的本發(fā)明的藥物組合物構成本發(fā)明的一個實施方案。
本發(fā)明的藥物組合物也可以包含其它穩(wěn)定劑，其可以進一步加強其中的治療活性的寡-或多肽的穩(wěn)定性。在本發(fā)明的上下文中特別感興趣的穩(wěn)定劑包括但不限于甲硫氨酸和EDTA，其可以保護肽免于甲硫氨酸氧化；和表面活性劑，尤其是非離子型表面活性劑，其會保護多肽免于與凍融或機械剪切有關的聚集或降解。
因而，在本發(fā)明的另一個實施方案中，藥物制劑包含表面活性劑，尤其是非離子型表面活性劑。其實例包括乙氧基化的蓖麻油，聚乙二醇化的甘油酯，乙?；膯胃视王?，山梨聚糖脂肪酸酯，聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物(例如泊洛沙姆如PluronicF68，泊洛沙姆188和407，Triton X-100)，聚氧乙烯脫水山梨聚糖脂肪酸酯，聚氧乙烯和聚乙烯衍生物如烷基化的和烷氧基化的衍生物(吐溫，例如吐溫-20，吐溫-40，吐溫-80和Brij-35)，單甘油酯或其乙氧基化的衍生物，二甘油酯或其聚氧乙烯衍生物，醇，甘油，凝集素和磷脂(例如磷脂酰基-絲氨酸，磷脂?；?膽堿，磷脂?；?乙醇胺，磷脂?；?肌醇，二磷脂?；?甘油和鞘磷脂)，磷脂(例如二棕櫚?；字?和溶血磷脂(例如棕櫚?；苎字；?L-絲氨酸，和乙醇胺、膽堿、絲氨酸或蘇氨酸的1-?；?sn-甘油-3-磷酸酯)的衍生物，和溶血磷脂酰基和磷脂酰膽堿的烷基、烷基酯和烷基醚衍生物，例如溶血磷脂酰膽堿、二棕櫚酰基磷脂酰膽堿的月桂?；腿舛罐Ⅴ；苌铮蜆O性頭基團的修飾，即膽堿、乙醇胺、磷脂酸、絲氨酸、蘇氨酸、甘油、肌醇和帶正電荷的DODAC、DOTMA、DCP、BISHOP、溶血磷脂?；z氨酸和溶血磷脂酰基蘇氨酸，以及甘油磷脂(例如腦磷脂)，甘油糖脂(例如吡喃半乳糖苷)，神經鞘氨糖脂(例如神經酰胺，神經節(jié)苷酯)，十二烷基磷酸膽堿，母雞蛋溶血卵磷脂，夫西地酸衍生物(例如?；嵌溏匏崦顾剽c等)，長鏈脂肪酸(例如油酸或辛酸)和其鹽，酰基肉毒堿和衍生物，賴氨酸、精氨酸或組氨酸的Nα-?；难苌?，或賴氨酸或精氨酸的側鏈?；难苌?，包含賴氨酸、精氨酸或組氨酸和中性或酸性氨基酸的任意組合的二肽的Nα-?；难苌?，包含中性氨基酸和2個帶電荷的氨基酸的任意組合的三肽的Nα-?；难苌?，DSS(多庫酯鈉，CAS登記號[577-11-7])，多庫酯鈣，CAS登記號[128-49-4])，多庫酯鉀，CAS登記號[7491-09-0])，SDS(十二烷基硫酸鈉或月桂基硫酸鈉)，辛酸鈉，膽酸或其衍生物，膽汁酸和其鹽和甘氨酸或牛磺酸綴合物，熊去氧膽酸，膽酸鈉，去氧膽酸鈉，?；悄懰徕c，甘膽酸鈉，N-十六烷基-N，N-二甲基-3-銨基-1-丙烷磺酸酯，陰離子型(烷基-芳基-磺酸酯)單價表面活性劑，兩性離子型表面活性劑(例如N-烷基-N，N-二甲基銨基-1-丙烷磺酸酯，3-膽氨基-1-丙基二甲基銨基-1-丙烷磺酸酯，陽離子型表面活性劑(季銨堿)(例如鯨蠟基-三甲基銨溴化物，鯨蠟基吡啶氯化物)，非離子型表面活性劑(例如十二烷基β-D-吡喃葡萄糖苷)，poloxamines(例如Tetronic’s)，它們是將環(huán)氧丙烷和環(huán)氧乙烷依次添加到乙二胺上產生的四功能嵌段共聚物。表面活性劑也可以選自咪唑啉衍生物和它們的混合物。含有上面具體指出的任一種表面活性劑的本發(fā)明的藥物組合物構成本發(fā)明的一個實施方案。
表面活性劑在藥物組合物中的應用是本領域技術人員熟知的。為了方便，可以參考RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，2000。
在本發(fā)明的藥物組合物(制劑)中也可以存在其它成分。這樣的其它成分可以包括，例如，潤濕劑，乳化劑，抗氧化劑，填充劑，金屬離子，油性介質，蛋白(例如人血清白蛋白，明膠或其它蛋白)以及兩性離子型物質(例如氨基酸，如甜菜堿，?；撬?，精氨酸，甘氨酸，賴氨酸或組氨酸)。這樣的其它成分當然不會不利地影響本發(fā)明的藥物制劑的總穩(wěn)定性。
可以將含有根據本發(fā)明的化合物的藥物組合物施用給需要這樣的治療的患者的一個或多個部位，例如在局部部位(例如皮膚和粘膜部位)，在環(huán)繞吸收的部位(例如通過動脈、靜脈或心臟內給藥)，和在參與吸收的部位(例如在皮膚中、在皮下、在肌肉中或在腹中)。
可以通過幾種給藥途徑向需要的患者施用根據本發(fā)明的藥物組合物。它們包括，例如，舌的，舌下的，頰的，在口腔中的，口服的，在胃和腸中，鼻的，肺的(例如通過細支氣管和氣泡或其組合)，表皮的，真皮的，透皮的，陰道的，直腸的，眼睛的(例如通過結膜)，輸尿管的和腸胃外的。
本發(fā)明的組合物可以以多種劑型施用，例如以溶液、懸浮液、乳劑、微乳劑、復合型乳劑、泡沫、藥膏、糊劑、硬膏劑、軟膏劑、片劑、包衣片劑、洗劑、膠囊劑(例如硬明膠膠囊劑或軟明膠膠囊劑)、栓劑、直腸膠囊劑、滴劑、凝膠劑、噴霧劑、粉末、氣霧劑、吸入劑、滴眼劑、眼膏、洗眼劑、陰道栓劑、陰道洗劑、陰道軟膏劑、注射溶液、原位-轉化溶液(例如原位膠凝，原位安裝，原位沉淀或原位結晶)、輸注溶液或植入物。
本發(fā)明的組合物還可以化合或結合(例如，通過共價的、疏水的或靜電的相互作用)到藥物載體、藥物遞送系統(tǒng)或高級藥物遞送系統(tǒng)中，以便進一步提高本發(fā)明的化合物的穩(wěn)定性、提高生物利用度、提高溶解度、降低副作用、實現本領域技術人員熟知的時間治療、和提高患者的依從性，或其任意組合。載體、藥物遞送系統(tǒng)或高級藥物遞送系統(tǒng)的實例包括但不限于聚合物，例如纖維素和衍生物；多糖，例如葡聚糖和衍生物，淀粉和衍生物；聚(乙烯醇)；丙烯酸酯和異丁烯酸酯聚合物；聚乳酸和聚乙醇酸及其嵌段共聚物；聚乙二醇；載體蛋白，例如白蛋白；凝膠，例如熱膠凝系統(tǒng)，如本領域的技術人員熟知的嵌段共聚系統(tǒng)；微粒；脂質體；微球；納米顆粒；液晶和其分散系；L2相和本領域技術人員熟知的它在脂-水系統(tǒng)中的相行為的分散系；聚合微粒；復合型乳劑(自乳化，自微乳化)；環(huán)糊精和其衍生物；以及樹枝狀大分子。
本發(fā)明的組合物可以用于配制經肺施用本發(fā)明化合物的固體、半固體、粉末和溶液，其中使用，例如壓力定量吸入器(metered dose inhaler)，干粉吸入器或噴霧器，所有這些裝置都是本領域技術人員熟知的。
本發(fā)明的組合物可以用于配制控制釋放、持續(xù)釋放、延長的、遲緩的或緩釋藥物遞送系統(tǒng)。因而，本發(fā)明的組合物在本領域技術人員熟知的腸胃外控制釋放和持續(xù)釋放系統(tǒng)(兩種類型的系統(tǒng)都會導致需要的給藥次數的多倍減少)的配制中是有價值的。
特別有價值的是皮下給藥的控制釋放和持續(xù)釋放系統(tǒng)。不限制本發(fā)明的范圍，有用的控制釋放系統(tǒng)和組合物的實例是含有水凝膠，油性凝膠、液晶、聚合微粒、微球或納米顆粒的那些。
生產用于本發(fā)明的組合物中的控制釋放系統(tǒng)的方法包括但不限于，結晶，冷凝，共結晶，沉淀，共沉淀，乳化，分散，高壓勻漿，包囊，噴霧干燥，微囊化，凝聚，相分離，溶劑蒸發(fā)產生微球，擠壓和超臨界流體過程。在本上下文中一般參考Handbook of PharmaceuticalControlled Release(Wise，D.L.，ed.Marcel Dekker，New York，2000)，和Drugs and the Pharmaceutical Sciences，vol.99ProteinFormulation and De-livery(MacNally，E.J.，ed.Marcel Dekker，NewYork，2000)。
借助于注射器，例如筆裝置形式的注射器，通過皮下的、肌肉內的、腹膜內的或靜脈內的注射，可以進行腸胃外給藥?；蛘?，可以借助于輸注泵進行腸胃外給藥。另一個選擇是施用本發(fā)明的組合物，它是鼻或肺噴霧劑形式的液體(典型地，含水的)溶液或懸浮液。作為另一個選擇，本發(fā)明的藥物組合物可以適于透皮給藥(例如通過無針注射或通過貼劑，如離子電滲療法貼劑)或透粘膜的(例如頰的)給藥。
術語“穩(wěn)定化的制劑”指具有提高的物理穩(wěn)定性、提高的化學穩(wěn)定性或提高的物理和化學穩(wěn)定性的制劑。在含有寡-或多肽的制劑的上下文中，術語“物理穩(wěn)定性”指，作為暴露于熱-機械應激(stress)和/或與失穩(wěn)的界面和表面(例如疏水表面和界面)相互作用的結果，肽形成無生物活性的和/或不溶的聚集物的趨勢。在將裝在合適的容器(例如藥筒或小瓶)中的制劑在不同溫度暴露于機械/物理應激(例如攪拌)不同時間段后，通過視覺檢查和/或濁度測量，可以評價含水蛋白制劑的物理穩(wěn)定性。在黑背景下，在強聚焦光下進行制劑的視覺檢查。通過視覺評分分級渾濁度，例如在0-3的量表(其中，沒有表現出濁度的制劑相當于視覺評分0，而在白天表現出可視濁度的制劑相當于視覺評分3)，表征制劑的濁度。當在白天表現出可視濁度時，通常認為制劑就聚集而言是物理上不穩(wěn)定的?；蛘撸ㄟ^本領域技術人員熟知的簡單濁度測量可以評價制劑的濁度。使用肽的構象狀態(tài)的分光試劑或探針，也可以評價含水寡-或多肽制劑的物理穩(wěn)定性。探針優(yōu)選地是優(yōu)先結合寡-或多肽的非天然構象異構體的小分子。這類小分子分光探針的一個實例是硫磺素T。硫磺素T是一種已經廣泛地用于檢測淀粉狀蛋白纖絲的熒光染料。在有纖絲以及可能的其它構型存在下，當結合纖絲形式時，硫磺素T會產生在約450nm的新的最大激發(fā)，和在約482nm的增強的發(fā)射。未結合的硫磺素T在討論波長下基本上是無熒光的。
其它小分子可以用作肽結構從天然狀態(tài)至非天然狀態(tài)的變化的探針。實例是“疏水貼片”探針，其優(yōu)先結合多肽的暴露的疏水貼片。疏水貼片通常埋藏在天然狀態(tài)的多肽的三級結構的內部，但是隨著它開始展開或變性變成暴露的。這樣的小分子的分光探針(spectroscopic probe)的實例是芳族的疏水染料，如蒽，吖啶，菲咯啉等。其它分光探針是氨基酸的金屬復合物，如疏水氨基酸，例如苯丙氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，甲硫氨酸，纈氨酸，等的鈷復合物。
如本文所使用的藥物制劑的術語“化學穩(wěn)定性”指寡-或多肽結構的化學共價變化，其可以導致與原始分子相比具有可能更低的生物效力和/或可能提高的免疫原性的化學降解產物的形成。根據起始分子的類型和性質和它暴露的環(huán)境，可以形成不同的化學降解產物。如本領域技術人員熟知的，在儲存和使用寡-或多肽制劑的過程中，最可能地，不會完全避免化學降解的消除，且經?？吹街饾u增多量的化學降解產物。經常遇到的降解過程是脫酰胺，在該過程中，谷氨?；蛱於０孵；鶜埢膫孺滜０被鶊F被水解，形成游離的羧酸。其它降解途徑包含更高分子量轉化產物的形成，其中原料的兩個或多個分子通過轉酰胺基作用和/或二硫鍵相互作用彼此共價結合，導致共價結合的二聚物、寡聚物或聚合物降解產物的形成(見例如，Stability of Protein Pharmaceuticals，Ahern.T.J.& Manning M.C.，Plenum Press，New York 1992)。作為化學降解的另一種變體，可以提及氧化(例如，甲硫氨酸殘基的氧化)。通過在暴露于不同環(huán)境條件后的不同時間點測量化學降解產物的量(其中降解產物的形成經常會被例如升高的溫度所加速)，可以評價制劑的化學穩(wěn)定性。經常使用各種色譜技術(例如SEC-HPLC和/或RP-HPLC)，依賴于分子大小和/或電荷來分離降解產物，確定每種單獨的降解產物的量。
因此，如上所述，“穩(wěn)定化的制劑”指具有提高的物理穩(wěn)定性、提高的化學穩(wěn)定性或提高的物理和化學穩(wěn)定性的制劑。通常，在達到失效期之前，在使用和儲存過程中(按照推薦的使用和儲存條件)，藥物組合物(制劑)必須是穩(wěn)定的。
本發(fā)明的藥物組合物(制劑)優(yōu)選地應當穩(wěn)定超過2周使用和超過2年儲存，更優(yōu)選地超過4周使用和超過2年儲存，理想地，超過4周使用和超過3年儲存，且最優(yōu)選地超過6周使用和超過3年儲存。
本文引用的所有文獻，包括出版物、專利申請和專利，都在此整體引作參考，其程度與單獨地和具體地指明每篇文獻引作參考并在本文中整體闡述相同(達到法律允許的最大程度)。
在本文中使用標題和子標題只是為了方便，不應當理解為以任何方式限制本發(fā)明。
在本說明書中，除非另有說明，任一個和所有實例或示例性語言(包括“例如”，“如”)的使用只是為了更好地解釋本發(fā)明，不對本發(fā)明的范圍產生限制。本說明書中的語言都不應解釋為表示任何未要求的元素是實現本發(fā)明所必需的。
本文中引用和并入專利文件只是為了方便，并不反映這些專利文件的有效性、專利性和/或可實施性的任何觀點。
本發(fā)明包括適用的法律允許的所附權利要求闡述的主題的所有改進和等同方案。
實施例使用的縮寫的列表AcOH乙酸BSA 牛血清白蛋白DCM 二氯甲烷DIC 二異丙基碳二亞胺DIPEA 乙基二異丙基胺DMAP4-N，N-二甲基氨基吡啶DMEMDulbecco氏改進的Eagle培養(yǎng)基DMF N，N-二甲基甲酰胺DMSO二甲基亞砜EGTA1，2-二(2-氨基乙氧基)乙烷-N，N，N’，N’-四乙酸FCS 胎牛血清Fmoc9-芴基甲氧基羰基HEPES 2-[4-(2-羥乙基)-哌嗪-1-基]-乙烷磺酸HOAt1-羥基-7-氮雜苯并三唑HOBt1-羥基苯并三唑HSA 人血清白蛋白MeCN乙腈MeOH甲醇α-MSH α-形式的促黑激素MTX 甲氨蝶呤
NEt3三乙胺NMPN-甲基吡咯烷酮PBS磷酸鹽緩沖鹽水PEI聚乙烯亞胺PhMe 甲苯PyBop (苯并三唑-1-基氧)三吡咯烷子基-六氟磷酸鹽使用標準的偶聯和脫保護步驟，本領域的技術人員可以合成本發(fā)明的所有化合物。在“The Fine Art Of Solid Phase Synthesis”，2002/3 Catalog，Novabiochem中，可以找到所有必要的工具和合成方法的說明，包括肽合成的標準縮寫。
在下面給出的實施例中，Rt值是保留時間，質量值是使用下述HPLC-MS裝置(LCMS)之一得到的并由質譜(MS)檢測器檢測到的值。
LCMSSciex API-150 Ex Quadrupole MS，電噴霧，m/z＝200至m/z＝1500；柱Waters XTerraMS C185μm 3.0×50mm；用溶液A(含0.1％TFA的水)和溶液B(含0.08％TFA的乙腈)的混合物洗脫；梯度5％→20％溶液B，從1.0至3.0分鐘，20％→50％溶液B，從3.0至16.0分鐘，50％→90％溶液B，從16.0至18.0分鐘，洗脫直到t＝18.0min；流速1.5ml/min。在214nm紫外檢測。
肽濃度的計算是基于1-cm單元格(cell)中的Trp殘基在280nm的吸光度(mg肽)/ml＝(吸光度×稀釋因子×分子量)/(Trp殘基數×5560ml/mmol)。
實施例1十六烷?；?Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 從3.25mmol商業(yè)上得到的Rink酰胺聚苯乙烯樹脂合成受保護的肽基樹脂Fmoc-Nle-Glu(2-苯基異丙基氧)-Hyp(tBu)-D-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Lys(Mtt)-NH-Rink連接物聚苯乙烯。根據Fmoc策略，在配備有一個反應器的MultiSyntech半自動合成儀上進行合成。采用了使用(1)0.45M HBTU于DMF中，(2)2M DIPEA于NMP中，和(3)在0.5MHOBt/HOAt(1∶1)于NMP中的溶液中溶劑化的受保護的Fmoc-氨基酸的0.5M溶液的實驗設計。通過混合3種溶液[18ml(1)，14ml(2)和18ml(3)]，并攪拌混合物10min，預活化氨基酸。反應進行2h，例外是第一種氨基酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH的結合需重復一次。用60ml NMP洗滌樹脂3次，然后去除Fmoc保護基。通過用50ml 20％哌啶于NMP中的溶液兩次處理樹脂分別為5和15min進行Fmoc-去除，然后用6×60ml NMP洗滌。重復Fmoc-去除和偶聯步驟，直到得到希望的序列。
為了脫保護Glu和Lys的側鏈，用3×60ml DCM洗滌肽基樹脂，然后在規(guī)律攪拌下，用50ml 2％三氟乙酸(TFA)、于DCM中的2.5％TES處理6×10min。用5×50ml DCM、含有5％DIPEA的NMP和NMP洗滌樹脂。在規(guī)律攪拌下，使用HOBt(13mmol)、PyBOP(13mmol)和于DMF(50ml)中的DIPEA(39mmol)環(huán)化肽16h。用4×60ml NMP和6×60ml DCM洗滌樹脂。
根據上述的方法，添加剩余的5種羧酸Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-D-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH和十六烷酸(棕櫚酸)。
通過用35ml含有2.5％水和2.5％TES的TFA，在室溫攪拌2小時，從樹脂斷裂(cleave)肽。過濾斷裂混合物，并用另外10ml TFA洗滌樹脂。通過加入400ml二乙醚，從合并的濾液沉淀出粗肽，并離心分離。用二乙醚洗滌沉淀2次。
根據下面的方法，通過制備RP-HPLC，純化粗環(huán)狀肽。
將粗肽溶于用NH4OH調至pH 7.5的水/乙腈(65∶35)(100ml)中，通過半制備HPLC，在裝有7μ C-18二氧化硅的25mm×250mm柱上純化。以10ml/min的流速，在40℃的溫度下，用50-70％乙腈梯度相對于0.1％TFA/水洗脫柱47min。收集含有肽的級分，用3體積水稀釋，并冷凍干燥。這得到617mg(11％產率)十六烷酰基-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2。
LCMSRt＝13.95min(在UV 214nm，100％純度)；((m+2)/2)＝868.
可以以類似于實施例1的化合物的方式得到的本發(fā)明的其它化合物的實例是下面的實施例2-23的化合物。下面描述了在合成實施例12、13、15和18-23的標題化合物時使用的結構單元的合成。
實施例2十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2實施例3十六烷酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2實施例4十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2
實施例5十六烷酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2實施例6十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Gln-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2實施例7十六烷?；?Gly-Gln-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2實施例8十六烷酰基-Gly-Gln-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2實施例9十六烷?；?Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2實施例10十六烷?；?Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2實施例11十八烷酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2
實施例124-(十六烷?；被酋；?丁酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 實施例134-(十六烷?；被酋；?丁?；?Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 實施例142-[2-(十六烷?；被?乙氧基]乙氧基乙酰基-Gly-Thr-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2
實施例154-(十六烷?；被酋；?丁酰基-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMSRt＝15.39min；((m+2)/2)＝942。
實施例164-(十三烷?；被酋；?丁酰基-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 LCMSRt＝12.80min；((m+2)/2)＝922。
實施例17十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[高Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-高Cys]-NH2
實施例184-(十六烷酰基氨磺?；?丁酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Dap-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Pen]-NH2 實施例194-(十六烷?；被酋；?丁酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Dap-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Cys]-NH2 實施例204-(十六烷?；被酋；?丁?；?Glu-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2
實施例214-(十六烷?；被酋；?丁?；?Gly-Glu-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 實施例224-(十六烷酰基氨磺?；?丁酰基-Glu-Ser-D-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 實施例234-(十六烷?；被酋；?丁?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Ala-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2 制備用于合成實施例12、13、15和18-23的標題化合物的4-(十六烷?；被酋；?丁酸
該結構單元的合成以前已經記載在WO 2004/099246(Novo NordiskA/S)中。簡而言之，從商業(yè)上得到的4-氨磺?；∷嶂苽?-氨磺?；∷峒柞ィ⒃?-二甲基氨基吡啶存在下，與棕櫚酰氯?；７蛛x得到的?；北交前?sulfoamide)。與氫氧化鈉皂化并重結晶，得到4-(十六烷酰基氨磺?；?丁酸。
藥理學方法測定(I)-使用隨意飼喂的大鼠模型，用MC4類似物進行食欲功效測試的實驗方法在實驗中使用從丹麥的M&B Breeding and Research Centre A/S得到的TAC:SPRD大鼠或Wistar大鼠。在實驗開始時，大鼠的體重為200-250g。大鼠在實驗開始前的至少10-14天抵達，體重180-200g。在8只大鼠的組中測試化合物的每個劑量。每組測試包括8只大鼠的介質組。
當動物抵達時，將它們各自圈養(yǎng)在顛倒的光/暗周期中(上午7:30關燈，下午7:30開燈)，即白天關燈，且在夜間開燈。由于大鼠通常在熄燈時開始食物攝入，且在晚上吃掉它們每日的大部分食物攝入，該安排可以導致當熄燈時已經將食物攝入的起始時間改變?yōu)樯衔?:30。在10-14天的適應階段，大鼠可以自由接近食物和水。在該階段，處理動物至少3次。在大鼠的住所籠中進行實驗。根據體重將大鼠隨機地分成不同的處理組(n＝8)，隨后立即給藥。在上午7:00和7:45之間，根據體重給它們腹膜內(ip)、口服(po)或皮下(sc)施用1-3mg/kg溶液。記錄每組的給藥時間。給藥后，讓大鼠返回它們的住所籠，它們在這里攝取食物和水。分別記錄食物消耗，每隔7小時記錄1小時，然后在24小時后，并且有時在48小時后。在實驗階段的結束時，處死動物。
將各數據記錄到Microsoft excel表格中。使用關于選出值(outlier)的Grubbs統(tǒng)計評價檢驗后，排除逸出值，使用GraphPadPrism程序將結果繪圖。
測定(II)-使用AlphaScreenTMcAMP檢測試劑盒進行黑皮質素受體3和5(MC3和MC5)cAMP功能測定分別在穩(wěn)定表達MC3和MC5受體的細胞(HEK293或BHK細胞)上，進行MC3和MC5受體的cAMP測定。通過PCR，從cDNA克隆受體，并插入到pcDNA 3表達載體中。使用1mg/ml G418選擇穩(wěn)定的克隆。
用PBS洗滌約80-90％匯合的細胞3次，用凡爾生(Versene)從板中提起，并在PBS中稀釋。然后將它們在1300rpm離心2分鐘，去除上清液。用刺激緩沖液洗滌細胞2次，重新懸浮到刺激緩沖液中，至終濃度為1×106或2×106細胞/ml。將25μl細胞懸浮液加入含有25μl實驗化合物或參照化合物(都在刺激緩沖液中稀釋)的微量滴定板中。在設定至低速振搖的板式搖床上，在室溫(RT)溫育滴定板30分鐘。通過加入25μl帶有抗-cAMP的受體珠終止反應，2分鐘后，向每個孔加入50μl在溶胞(lysis)緩沖液中的帶有生物素化的cAMP的供體珠。然后用塑料密封滴定板，振搖30分鐘，靜置過夜，然后在AlphaTM微量板讀數器中計數。
使用WindowsTM程序GraphPadTMPrism(GraphPadTMSoftware，USA)，通過非線性回歸分析劑量/反應曲線(最少6點)計算EC50值。以nM為單位表達所有結果。
為了檢測在MC3功能性cAMP測定中的拮抗活性，用3nM α-MSH刺激MC3受體，通過增加潛在拮抗劑的量進行抑制。將拮抗劑的IC50值定義為抑制MC3刺激達50％的濃度。
測定(III)-黑皮質素受體4(MC4)cAMP測定用潛在的MC4激動劑刺激能表達MC4受體的BHK細胞，使用FlashPlatecAMP測定(NENTMLife Science Products目錄號SMP004)，確定cAMP的刺激程度。
通過將編碼的MC4受體的cDNA轉染進BHK570/KZ10-20-48，并選擇表達MC4受體的穩(wěn)定克隆，可以制備表達MC4受體的BHK細胞。MC4受體cDNA以及表達MC4受體的CHO細胞系均可以從EuroscreenTM購得。細胞生長在DMEM、10％FCS、1mg/ml G418、250nM MTX和1％青霉素/鏈霉素中。
用PBS洗滌約80-90％匯合的細胞3次，用凡爾生從板中提起，并在PBS中稀釋。然后將它們在1300rpm離心2分鐘，去除上清液。用刺激緩沖液洗滌細胞2次，重新懸浮到刺激緩沖液中，至終濃度為0.75×106細胞/ml(其消耗7ml/96孔微量滴定板)。將50μl細胞懸浮液加入至含有50μl實驗化合物或參照化合物(都在H2O中稀釋)的Flash Plate。振搖混合物5分鐘，在室溫靜置25分鐘。通過向每個孔加入100μl檢測混合物(檢測混合物＝11ml檢測緩沖液+100μl(約2μCi)cAMP[125I]示蹤劑)終止反應。然后用塑料密封滴定板，振搖30分鐘，靜置過夜(或2小時)，然后在Topcounter中計數(2分鐘/孔)。通常，實驗方法如Flash Plate試劑盒-操作手冊(FlashPlatecAMP測定(NENTMLife Science Products目錄號SMP004))所述。但是，在0.1％HSA和0.005％吐溫TM20中而不是在刺激緩沖液中稀釋cAMP標準品。
使用WindowsTM程序GraphPadTMPrism(GraphPadTMSoftware，USA)，通過非線性回歸分析劑量/反應曲線(最少6點)計算EC50值。以nM為單位表達所有結果。
測定(IV)-黑皮質素受體1(MC1)結合測定在穩(wěn)定表達MC1受體的BHK細胞膜上進行MC1受體結合測定。該測定的總體積是250μl；25μl125NDP-α-MSH(終濃度22pM)，25μl實驗化合物/對照和200μl細胞膜(35μg/ml)。將實驗化合物溶解到DMSO中。將放射標記的配體、膜和實驗化合物在緩沖液中稀釋25mMHEPES，pH 7.4，0.1mM CaCl2，1mM MgSO4，1mM EDTA，0.1％HSA和0.005％吐溫TM20。在Greiner微量滴定板中將樣品在30℃溫育90分鐘，用在0.5％PEI中預潤濕60分鐘的GF/B濾紙隔開，并用NaCl(0.9％)洗滌2-3次，然后通過過濾分離結合的和未結合的放射標記的配體。過濾后，用冰冷的0.9％ NaCl洗滌濾紙10次。濾紙在50℃下干燥30分鐘，密封，并將30μl Microscint 0(Packard，目錄號6013616)加入每個孔中。在Topcounter中計數平板(1分鐘/孔)。
使用WindowsTM程序GraphPadTMPrism(GraphPad Software，USA)，通過結合曲線的非線性回歸分析分析數據。
測定(V)-黑皮質素受體4(MC4)結合測定125NDP-α-MSH與表達人MC4受體的重組BHK細胞的體外結合(過濾測定)。
使用表達人MC4受體的BHK細胞(從瑞典Uppsala的Wikberg教授得到)，在5ml minisorb vials(Sarstedt No.55.526)或在96孔filterplate(Millipore MADVN 6550)中進行該測定。測定前，將BHK細胞保存在-80℃，該測定直接在該細胞懸浮液的稀釋液上進行，不進行其它準備。將懸浮液稀釋，最大產生10％特異性結合，即約50-100倍稀釋。以200μl總體積進行測定；將50μl細胞懸浮液、50μl125NDP-α-MSH(≈79pM終濃度)、50μl實驗化合物和50μl結合緩沖液(pH 7)相混合，在25℃溫育2小時[結合緩沖液25mM HEPES(pH7.0)，1mM CaCl2，1mM MgSO4，1mM EGTA，0.02％桿菌肽和0.2％BSA]。將實驗化合物溶解到H2O中，并在結合緩沖液中稀釋。將放射標記的配體和膜在結合緩沖液中稀釋。通過用5ml冰冷的0.9％NaCl稀釋，終止溫育，隨后經用0.5％聚乙烯亞胺預處理1小時的Whatman GF/C過濾器迅速過濾。用3×5ml冰冷的NaCl洗滌過濾器。使用Cobra II自動γ計數器對殘留在過濾器上的放射活性計數。
使用WindowsTM程序GraphPadTMPrism(GraphPad Software，USA)，通過結合曲線的非線性回歸分析分析數據。
測定(VI)-能量消耗的評價使用從丹麥的M&B Breeding and Research Centre A/S得到的TAC:SPRD大鼠或Wistar大鼠。適應至少1周后，將大鼠單個地置于代謝室(Oxymax system，Columbus Instruments，Columbus，Ohio；每天校正系統(tǒng))中。在測量過程中，動物自由攝取水，但是室中沒有提供食物。亮/暗周期是12h∶12h，在6.00開燈。當動物在室中度過大約2小時(即當達到基線能量消耗時)后，施用實驗化合物或介質(口服，腹膜內或皮下)，繼續(xù)記錄，以確定實驗化合物的作用時間。在共22小時中(適應2小時(基線)和測量20小時)，每10-18分鐘收集每只動物的數據(氧消耗、二氧化碳產生和流速)。在每個10-18分鐘周期中，進行流入空氣中的O2和CO2含量變化的校正。
計算每代謝體重((kg體重)0.75)的氧消耗和二氧化碳產生的數據，并計算每只動物的熱量數據。將氧消耗(VO2)被作為感興趣的主要能量消耗參數。
權利要求
1.式I的化合物R1-S-Z1-Z2-Z3-His-Z4-Z5-c[X1-X2-X3-Arg-X4-X5]N(R’)2[I]其中R1代表直鏈、支鏈的和/或環(huán)狀的C14-22烷?；?、C14-22烯?；駽14-22炔?；?，其可以任選地被一個或多個選自鹵素、羥基和芳基的取代基取代，或R1代表C9-17-C(O)-NH-S(O)2-(CH2)3-C(O)-；S代表一個鍵，4-氨基丁酸殘基，Gly，β-Ala，或由式II代表的結構 Z1代表Gly，β-Ala，Ser，D-Ser，Thr，D-Thr，His，D-His，Asn，D-Asn，Gln，D-Gln，Glu，D-Glu，Asp，D-Asp，Ala或D-Ala；Z2代表Ser，Thr，Gln，Asn，Glu，Asp或His；Z3代表D-Gln或D-Asn；Z4代表Ser，Thr，Dab，Dap，Glu或Asp；Z5代表Ala，Val，Leu，Ile，Met或Nle；X1代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；X2代表His，Cit，Dab，Dap，Cgl，Cha，Val，Ile，tBuGly，Leu，Tyr，Glu，Ala，Nle，Met，Met(O)，Met(O2)，Gln，Gln(烷基)，Gln(芳基)，Asn，Asn(烷基)，Asn(芳基)，Ser，Thr，Cys，Pro，Hyp，Tic，2-PyAla，3-PyAla，4-PyAla，(2-噻吩基)丙氨酸，3-(噻吩基)丙氨酸，(4-噻唑基)Ala，(2-呋喃基)丙氨酸，(3-呋喃基)丙氨酸或Phe，其中所述Phe的苯基任選地被選自下述的取代基取代鹵素，羥基，烷氧基，硝基，苯甲?；谆?，三氟甲基，氨基和氰基；X3代表D-Phe，其中D-Phe中的苯基可以任選地被一個或多個選自下述的取代基取代鹵素，羥基，烷氧基，硝基，甲基，三氟甲基和氰基；X4代表Trp，2-Nal，(3-苯并[b]噻吩基)丙氨酸殘基或(S)-2，3，4，9-四氫-1H-β-咔啉-3-甲酸殘基；X5代表Glu，Asp，Cys，高Cys，Pen，Lys，Orn，Dab或Dap；其中X1和X5通過由均獨立地為Cys、高Cys或Pen的X1和X5衍生的二硫鍵，或通過X1的側鏈中的羧酸和X5的側鏈中的氨基之間形成的酰胺鍵，或通過X5的側鏈中的羧酸和X1的側鏈中的氨基之間形成的酰胺鍵連接到一起，使式I化合物成為環(huán)狀；每個R’獨立地代表氫或C1-6烷基，其可以任選地被一個或多個氨基或羥基取代；條件是，式I化合物不是十四烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十八烷酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2或十六烷?；?Gly-Ser-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2；和其藥學上可接受的鹽、前藥和溶劑化物。
2.根據權利要求1的化合物，其中R1是C14-18-烷?；?，且S是一個鍵或由式II代表的結構。
3.根據權利要求1的化合物，其中R1是4-(C14-18烷?；被酋；?丁?；?，且S是一個鍵。
4.根據權利要求3的化合物，其中R1是4-(十六烷?；被酋；?丁?；?。
5.根據權利要求1-4中的任一項的化合物，其中Z1是Gly，Glu或Asp，且Z5是Nle或Ala。
6.根據權利要求1-5中的任一項的化合物，其中Z2是Glu，Asp，Ser，Thr，Gln或Asn。
7.根據權利要求1-6中的任一項的化合物，其中Z2是Ser，Thr，Gln或Asn。
8.根據權利要求1-7中的任一項的化合物，其中Z2是Thr或Ser。
9.根據權利要求1-8中的任一項的化合物，其中Z3是D-Gln。
10.根據權利要求1-8中的任一項的化合物，其中Z3是D-Asn。
11.根據權利要求1-10中的任一項的化合物，其中Z4是Glu，Asp，Ser，Thr，Dab或Dap。
12.根據權利要求1-11中的任一項的化合物，其中Z4是Ser或Thr。
13.根據權利要求1-12中的任一項的化合物，其中Z5是Nle。
14.根據權利要求1-12中的任一項的化合物，其中Z5是Ala。
15.根據權利要求1-14中的任一項的化合物，其中X1是Glu，X3是D-Phe，X4是Trp，且X5是Lys。
16.根據權利要求1-14中的任一項的化合物，其中X1是Asp，X3是D-Phe，X4是Trp，且X5是Lys。
17.根據權利要求1-14中的任一項的化合物，其中X1和X5獨立地是Cys，高Cys或Pen，X3是D-Phe，且X4是Trp。
18.根據權利要求中的任一項的化合物1-17，其中X2是Tic，Met(O)2，Ser，Hyp，Cit，Dap，Asn，Gln或(4-噻唑基)Ala。
19.根據權利要求1-18中的任一項的化合物，其中X2是Hyp。
20.根據權利要求1-18中的任一項的化合物，其中X2是Asn或Gln。
21.根據權利要求1-18中的任一項的化合物，其中X2是Cit。
22.根據權利要求1-21中的任一項的化合物，其中N(R′)2是NH2。
23.根據權利要求1的化合物，其選自R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Thr-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Gln-D-Asn-His-Thr-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[高Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-高Cys]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Dap-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Pen]-NH2，R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Dap-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Cys]-NH2，R1-S-Glu-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Gly-Glu-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，R1-S-Glu-Ser-D-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，和R1-S-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Ala-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2。
24.根據權利要求1的化合物，其選自十六烷?；?Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Cit-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Asn-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Gln-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷?；?Gly-Gln-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷?；?Gly-Gln-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷?；?Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷?；?Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十八烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Dap-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺?；?丁酰基-Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺?；?丁酰基-Gly-Ser-D-Asn-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，2-[2-(十六烷酰基氨基)乙氧基]乙氧基乙?；?Gly-Thr-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十三烷?；被酋；?丁酰基-Gly-Thr-D-Gln-His-Thr-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，十六烷?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[高Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-高Cys]-NH2，4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Dap-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Pen]-NH2，4-(十六烷酰基氨磺?；?丁?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Dap-Nle-c[Cys-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Cys]-NH2，4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Glu-Ser-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷?；被酋；?丁酰基-Gly-Glu-D-Gln-His-Ser-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Glu-Ser-D-Gln-His-Glu-Nle-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2，和4-(十六烷?；被酋；?丁?；?Gly-Ser-D-Gln-His-Ser-Ala-c[Glu-Hyp-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-NH2。
25.延遲從IGT向II型糖尿病進展的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
26.延遲從II型糖尿病向胰島素依賴性糖尿病進展的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
27.治療肥胖或預防超重的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
28.調節(jié)食欲的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
29.誘導飽感的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
30.預防成功減肥后體重反彈的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
31.增加能量消耗的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
32.治療與超重或肥胖有關的疾病或狀態(tài)的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
33.治療食欲過盛的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
34.治療暴食的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
35.治療選自下述的疾病或狀態(tài)的方法動脈粥樣硬化，高血壓，糖尿病，II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障礙，冠心病，膽囊病，膽結石，骨關節(jié)炎，癌癥，性功能障礙和早產兒死亡的危險，包含給有此需要的患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
36.治療肥胖患者的選自下述的疾病或狀態(tài)的方法II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障礙，冠心病，膽囊病，膽結石，骨關節(jié)炎，癌癥，性功能障礙和早產兒死亡的危險，包含給有此需要的肥胖患者施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物，其任選地與一種或多種其它治療活性化合物相組合。
37.根據權利要求25-36中的任一項的方法，其中所述其它治療活性化合物選自抗糖尿病藥，抗高血脂藥，抗肥胖藥，抗高血壓藥，和用于治療糖尿病導致的或與糖尿病有關的并發(fā)癥的藥物。
38.根據權利要求25-37中的任一項的方法，其中所述根據權利要求1-24中任一項的化合物是以包含約0.05mg-約1000mg所述化合物的單位劑型施用給所述患者。
39.激活對象中的MC4的方法，該方法包含給所述對象施用有效量的根據權利要求1-24中任一項的化合物。
40.根據權利要求25-39中的任一項的方法，其中所述根據權利要求1-24中任一項的化合物通過鼻、肺或舌下給藥來腸胃外地施用。
41.根據權利要求1-24中任一項的化合物在治療中的應用。
42.藥物組合物，其包含根據權利要求1-24中任一項的化合物。
43.根據權利要求1-24中任一項的化合物在制備藥物中的應用，所述藥物用于延遲從IGT向II型糖尿病的進展；延遲從II型糖尿病向胰島素依賴性糖尿病的進展；治療肥胖或預防超重；調節(jié)食欲；誘導飽感；預防成功減肥后的體重反彈；增加能量消耗；治療與超重或肥胖有關的疾病或狀態(tài)；治療食欲過盛；治療暴食；治療動脈粥樣硬化，高血壓，II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障礙，冠心病，膽囊病，膽結石，骨關節(jié)炎，癌癥，性功能障礙或早產兒死亡的危險；或治療肥胖患者的選自下述的疾病或狀態(tài)II型糖尿病，葡萄糖耐受不良(IGT)，血脂障礙，冠心病，膽囊病，膽結石，骨關節(jié)炎，癌癥，性功能障礙或早產兒死亡的危險。
全文摘要
本發(fā)明涉及新穎的肽類化合物，它們可有效地調控一種或多種黑皮質素受體類型，涉及所述化合物在治療中的應用，涉及包含將所述化合物施用給有此需要的患者的治療方法，還涉及所述化合物在制備藥物中的應用。在肥胖以及許多與肥胖有關的疾病或病癥的治療方面，本發(fā)明的化合物是特別令人感興趣的。
文檔編號A61K38/33GK101052650SQ200580037548
公開日2007年10月10日 申請日期2005年11月4日 優(yōu)先權日2004年11月4日
發(fā)明者U·森斯富斯, L·克里斯滕森 申請人:諾和諾德公司