專利名稱：：腸血管活性多肽藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及多肽類似物及其合成和用途。更具體而言，本發(fā)明涉及與腸血管活性多肽有關(guān)的合成多肽類似物，及其藥物組合物。
背景技術(shù)：
：當(dāng)消化道中存在食物時(shí)，腸中的細(xì)胞分泌激素信號(hào)(“腸降血糖素”)，使胰腺對(duì)葡萄糖的存在敏感，并且導(dǎo)致增強(qiáng)的葡萄糖依賴性胰島素分泌反應(yīng)。對(duì)于腸降血糖素信號(hào)、胰高血糖素樣肽1(GLP1)和葡萄糖依賴性胰島素釋放肽(GIP)，見到這種提供葡萄糖依賴性胰島素釋放的協(xié)同反應(yīng)(KiefferTJ和Habener，JR(1999)Endocr.Rev.20，876-913)。這些腸降血糖素信號(hào)一般在體內(nèi)表現(xiàn)為短作用時(shí)間，GLP1表現(xiàn)大約1-2分鐘的t1/2(Knudsen，LB2004，J.Med.Chem.47，4128-34)。GLP1和GIP被氨肽酶、二肽酰肽酶IV(DPPIV)切割，因此在醫(yī)藥制劑中通常不使用自然存在的天然激素。在毒蜥(GilaMonster)唾液中發(fā)現(xiàn)的一種肽(毒蜥外泌肽4(exendin4)，Exenatide；AmylinPharmaceuticals，SanDiego，California)顯示與GLP1受體結(jié)合，并且表現(xiàn)出強(qiáng)激動(dòng)活性，從而引起期望的葡萄糖依賴性胰島素分泌反應(yīng)(NielsenLL，Young，AA，Parkes，DG(2004)Regul.Peptides，117，77-88)。曾經(jīng)給需要治療的2型糖尿病患者施用了Exenatide和GLP1的類似物。垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)是一種神經(jīng)調(diào)節(jié)肽，它刺激PAC1、VPAC1和VPAC2受體，是從胰腺中的神經(jīng)末梢上釋放的。該普通類別的受體存在于包括胰腺在內(nèi)的體內(nèi)多種組織內(nèi)。在胰腺中，VPAC2受體的刺激顯示響應(yīng)血糖水平升高提供增強(qiáng)的葡萄糖依賴性胰島素釋放，這類似于GLP1或exenatide(Tsutsumi，M.等人(2002)Diabetes51，1453-60)。因此，這種刺激(來(lái)自于PACAP或VPAC激動(dòng)類似物)可以在刺激葡萄糖依賴性胰島素釋放中與腸降血糖素樣信號(hào)協(xié)同或作為其替代，因?yàn)榈诙愂荏w的激活導(dǎo)致增強(qiáng)的胰島素分泌的類似的分布。這種作用將有利于包括2型糖尿病(T2DM)、代謝性酸中毒、胰島素抵抗和肥胖癥在內(nèi)的代謝紊亂的治療。然而，自然存在的PACAP及其類似物的天然序列在體內(nèi)的存在期一般也較短。合成毒蜥外泌肽-4是作用期較短的肽，因此醫(yī)學(xué)上需要能夠調(diào)節(jié)葡萄糖依賴性胰島素分泌的長(zhǎng)效的肽。發(fā)明概述本發(fā)明提供PACAP和腸血管活性多肽(VIP)的合成多肽類似物及其鹽，其中C末端包含形成兩親性α螺旋的氨基酸殘基，所述殘基選自親水性氨基酸(Haa)和親脂性氨基酸(Laa)，排列順序?yàn)镠aa(LaaLaaHaaHaa)nLaa其中n＝1-5。在一個(gè)實(shí)施方案中，n＝1或2。在本發(fā)明的PACAP和VIP多肽類似物中引入的修飾有利于延長(zhǎng)激活PACAP和VIP家族受體，優(yōu)選VPAC2受體的治療劑的作用持續(xù)時(shí)間。不局限于任何特定理論，認(rèn)為作用持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng)可能是由于C末端區(qū)域中的兩親性螺旋與體內(nèi)細(xì)胞膜的磷脂相互作用的能力，從而具有“貯庫(kù)(depoting)”作用。因此，本發(fā)明的肽類似物與細(xì)胞膜結(jié)合，然后緩慢再釋放到細(xì)胞質(zhì)中，在遠(yuǎn)處發(fā)揮其作用。相反，如果細(xì)胞質(zhì)中不含諸如PACAP、VIP或GLP1的肽，則它被蛋白酶快速作用或通過(guò)腎小球過(guò)濾而被清除。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供PACAP、VIP的類似物和其生理學(xué)活性的截短類似物和同系物，或其鹽，其中C末端包含形成兩親性α-螺旋的氨基酸殘基，所述殘基的序列選自具有穩(wěn)定所述α-螺旋的能力的天然氨基酸或選擇的非天然氨基酸。還提供了用于遞送有效葡萄糖依賴性胰島素釋放量的PACAP、VIP的多肽類似物和其生理學(xué)活性的截短類似物和同系物或其鹽的藥物組合物，其中C末端包含形成兩親性α-螺旋的氨基酸殘基，所述殘基選自排列順序如下的親水性氨基酸(Haa)和親脂性氨基酸(Laa)Haa(LaaLaaHaaHaa)nLaa；其中n＝1-5。本發(fā)明進(jìn)一步提供治療以高血糖為特征的哺乳動(dòng)物疾病的方法，該方法包括給需要的哺乳動(dòng)物施用有效葡萄糖依賴性胰島素釋放量的PACAP、VIP的多肽類似物和其生理學(xué)活性的截短類似物和同系物，或其鹽，其中C末端包含形成兩親性α-螺旋的氨基酸，所述殘基選自排列順序如下的親水性氨基酸(Haa)和親脂性氨基酸(Laa)Haa(LaaLaaHaaHaa)nLaa；其中n＝1-5。本發(fā)明也包括用于固相合成PACAP、VIP的多肽類似物和其生理學(xué)活性的截短類似物和同系物或其鹽的方法，其中C末端包含形成兩親性α-螺旋的氨基酸殘基，所述殘基選自排列順序如下的親水性氨基酸(Haa)和親脂性氨基酸(Laa)Haa(LaaLaaHaaHaa)nLaa；其中n＝1-5。此處所述用于制備多肽類似物的方法包括將受到保護(hù)的氨基酸連續(xù)偶聯(lián)到適當(dāng)?shù)臉渲С治锷希?cè)鏈和Nα保護(hù)基，并且從樹脂上切下多肽。本發(fā)明還提供用于重組合成PACAP、VIP的多肽類似物和其生理學(xué)活性的截短類似物和同系物或其鹽的DNA序列、載體和質(zhì)粒，其中C末端包含形成兩親性α-螺旋的氨基酸殘基，所述殘基選自排列順序如下的親水性氨基酸(Haa)和親脂性氨基酸(Laa)Haa(LaaLaaHaaHaa)nLaa；其中n＝1-5。另外，本發(fā)明還提供用于預(yù)防和治療包括糖尿病、胰島素抵抗、高血糖癥、代謝性酸中毒和肥胖癥在內(nèi)的表現(xiàn)為血糖水平升高的多種代謝紊亂的藥物組合物和方法，包括有效量的本發(fā)明的多肽，或其鹽，和藥學(xué)可接受的載體。在本發(fā)明的其它方面，治療有效量的代謝紊亂化合物，包括胰島素、胰島素類似物、腸降血糖素、腸降血糖素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、毒蜥外泌肽，毒蜥外泌肽類似物、磺酰脲類、雙縮胍類、α-葡糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮類、過(guò)氧化物酶體增生物激活受體(PPAR)激動(dòng)劑、PPAR拮抗劑和PPAR部分激動(dòng)劑，可以與本發(fā)明的多肽聯(lián)合施用。附圖簡(jiǎn)述圖1A、1B和1C是本發(fā)明的示例性多肽類似物的列表。使用氨基酸單字母縮寫的標(biāo)準(zhǔn)命名。字母“X”是指具有C10-C3000鏈的聚乙二醇鏈。術(shù)語(yǔ)“?；笔侵窩2-C16酰基鏈。字母“Z”是指在ε位具有長(zhǎng)?；湹馁嚢彼?。術(shù)語(yǔ)“hex”是指己?；?。術(shù)語(yǔ)“pen”是指戊酰基。術(shù)語(yǔ)“l(fā)au”是指月桂?；?。術(shù)語(yǔ)“myr”是指肉豆蔻?；Ｐg(shù)語(yǔ)“ste”是指硬脂?；?。術(shù)語(yǔ)“pr”是指丙?；D2列出了其他多肽和多肽類似物。發(fā)明詳述縮寫和定義各種常用核苷酸堿基和氨基酸的單字母和三字母縮寫按照PureAppl.Chem.31，639-645(1972)和40，277-290(1974)的建議，并符合37CFR.sctn.1.822(55FR18245，May1，1990)。除非另外指出為D-或DL，縮寫表示L-氨基酸。某些天然和非天然的氨基酸是無(wú)手性的，例如，甘氨酸。所有肽序列都以左側(cè)為N末端氨基酸，右側(cè)為C末端氨基酸的形式表示。“親水性氨基酸(Haa)”是指除了肽鍵形成所需的官能團(tuán)外還具有至少一個(gè)親水性官能團(tuán)的氨基酸，如精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、組氨酸、賴氨酸、絲氨酸、蘇氨酸及其同系物?！坝H脂性氨基酸(Laa)”是指不帶電荷的、脂族的或芳族的氨基酸，如異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸及其同系物。在本發(fā)明中，丙氨酸被歸類為“兩親性氨基酸”，即能夠作為親水性或親脂性氨基酸起作用?！癙ACAP或VIP的同系物”是指在基本類似于PACAP或VIP天然序列的序列中含有氨基酸的多肽，如具有至少50、60、70、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％的氨基酸序列同一性。這里所述的同系物相對(duì)于PACAP或VIP的天然序列可包括氨基酸置換、缺失和/或插入。同系物的例子包括與PACAP或VIP的天然序列相同或基本類似的至少5、10、15、20、25、30或35個(gè)連續(xù)氨基酸?！癙ACAP或VIP的類似物”是指一種多肽，其含有(i)PACAP、VIP和/或PACAP或VIP的同系物；和(ii)至少一個(gè)在自然存在的天然PACAP和/或VIP中不存在的官能團(tuán)。例如，類似物可以任選地包含氨基酸側(cè)鏈內(nèi)的或多肽的氨基端或羧基端處的官能團(tuán)。官能團(tuán)的例子包括烷基-、芳基-、?；?、酮基-、疊氮基-、羥基-、肼、氰基-、鹵代-、酰肼、烯基、炔基、醚、硫醇、硒基-、磺?；?，硼酸鹽(borate)、硼化物(boronate)、磷酸基、膦?；?、雜環(huán)、烯酮(enone)、亞胺、醛、酯、硫代酸、羥胺、氨基等，或它們的任意組合。其它可以引入的示例性的官能團(tuán)包括但不限于含有可光敏化交聯(lián)劑的氨基酸、自旋標(biāo)記的(spin-labeled)氨基酸、熒光氨基酸、金屬結(jié)合氨基酸、含金屬氨基酸、放射性氨基酸、具有新官能團(tuán)的氨基酸、與其它分子共價(jià)或非共價(jià)相互作用的氨基酸、光束縛的(photocaged)和/或可光致異構(gòu)化的氨基酸、含有生物素或生物素類似物的氨基酸、糖基化的氨基酸如糖取代的絲氨酸、其他碳水化合物修飾的氨基酸、含酮氨基酸、含有聚乙二醇或聚醚的氨基酸、重原子取代的氨基酸、化學(xué)可切割的和/或光可切割的氨基酸、與天然氨基酸相比具有延長(zhǎng)的側(cè)鏈的氨基酸(例如具有聚醚或長(zhǎng)鏈烴，例如多于大約5個(gè)或多于大約10個(gè)碳)、碳連接的含糖氨基酸、氧化還原活性氨基酸、含氨基硫代酸的氨基酸、和含有一個(gè)或多個(gè)毒性部分的氨基酸。此處提供的類似物可以包括基于天然氨基酸的非天然氨基酸，如酪氨酸類似物，包括對(duì)位取代的酪氨酸、鄰位取代的酪氨酸和間位取代的酪氨酸，其中取代的酪氨酸含有乙?；?、苯甲?；?、氨基、肼、羥胺、硫醇基、羧基、異丙基、甲基、C6-C20直鏈或支鏈烴、飽和或不飽和烴、O-甲基、聚醚基、硝基等。谷氨酰胺類似物包括但不限于α-羥基衍生物、β-取代的衍生物、環(huán)狀衍生物和酰胺取代的谷氨酰胺衍生物。苯丙氨酸類似物的例子包括但不限于間位取代的苯丙氨酸，其中取代基包括羥基、甲氧基、甲基、烯丙基、乙?；?。具體例子包括但不限于O-甲基-L-酪氨酸、L-3-(2-萘基)丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、O-4-烯丙基-L-酪氨酸、4-丙基-L-酪氨酸、三-O-乙?；?GlcNAc-β-絲氨酸、左旋多巴、氟化苯丙氨酸、異丙基-L-苯丙氨酸、對(duì)-疊氮基-L-苯丙氨酸、對(duì)-?；?L-苯丙氨酸、對(duì)-苯甲?；?L-苯丙氨酸、L-磷絲氨酸、膦絲氨酸、膦酪氨酸、對(duì)-碘-苯丙氨酸、對(duì)-溴苯丙氨酸、對(duì)-氨基-L-苯丙氨酸、和異丙基-L-苯丙氨酸，等等。通常，任選地設(shè)計(jì)或選擇類似物，以改變多肽的生物學(xué)性質(zhì)，如調(diào)節(jié)毒性、生物分布、溶解性、穩(wěn)定性，例如熱、水解、氧化、對(duì)酶降解的抗性等，純化和處理的容易程度、結(jié)構(gòu)特性、分光性質(zhì)、化學(xué)和/或光化學(xué)性質(zhì)、催化活性、氧化還原電位、半衰期、與其他分子反應(yīng)(例如共價(jià)或非共價(jià)反應(yīng))的能力，等?！癙ACAP或VIP的生理學(xué)活性的截短同系物或類似物”是指其序列包含少于PACAP或VIP中所見氨基酸的全部互補(bǔ)序列，但是引發(fā)類似的生理學(xué)反應(yīng)的多肽。這里提供的代表性的截短同系物和/或類似物至少包括在PACAP或VIP的天然序列中所見的5、10、15、20、25、30或35個(gè)連續(xù)氨基酸。截短的PACAP或VIP不需要與PACAP或VIP完全同源就能引發(fā)類似的生理學(xué)反應(yīng)。PACAP或VIP是優(yōu)選的，但不是排他性的，是該類的代表?！癙EG”是指聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯。在一個(gè)實(shí)施方案中，PEG包含C10-C3000鏈。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PEG的分子量大于40kD。PEG在本領(lǐng)域中眾所周知，例如在美國(guó)專利Nos.4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192；和4,179,337中描述?！皟捎H性α-螺旋”是指某些多肽呈現(xiàn)的二級(jí)結(jié)構(gòu)，其中氨基酸采取α-螺旋構(gòu)型，具有沿螺旋的長(zhǎng)軸定向的相對(duì)的極性面和非極性面。通過(guò)構(gòu)建適當(dāng)斜度的″Schiffer-Edmundson輪″(M.Schiffer和A.B.Edmundson，Biophys.J.7，121(1967)，在此引用作為參考)，并且注意限定螺旋的圓柱形相對(duì)面上親水性和親脂性殘基的隔離，一定程度地研究了目標(biāo)多肽中α-螺旋結(jié)構(gòu)的可能性?？蛇x擇地，可以獲得實(shí)驗(yàn)證據(jù)，如圓二色性或x-射線衍射數(shù)據(jù)，表明特定多肽中α-螺旋區(qū)的存在。一種理想的α-螺旋每圈具有3.6個(gè)氨基酸殘基，其相鄰的側(cè)鏈分開100°弧度。多肽在實(shí)施方案中，此處提供的多肽包含PACAP和/或VIP的截短的部分，其具有PACAP或VIP的天然序列的至少5、10、15、20、25、30或35個(gè)連續(xù)氨基酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的多肽與PACAP或VIP的天然序列具有至少50、60、70、80、85、90、95或99％的氨基酸序列同一性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的多肽包含PACAP和/或VIP的至少5、10、15、20、25、30或35個(gè)連續(xù)氨基酸，與PACAP或VIP的天然序列具有至少50、60、70、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％的氨基酸序列同一性。這里提供的多肽任選地包含調(diào)節(jié)VPAC2選擇性的修飾、官能團(tuán)和/或氨基酸置換。示例性的修飾、官能化和/或置換包括但不限于Gourlet等人(Peptides18，403-8；XiaM等人(1997)和J.Pharmacol.Exp.Ther.281629-33(1997)報(bào)道的C-末端陽(yáng)離子延伸和/或突變；這兩篇文獻(xiàn)的內(nèi)容在此引用作為參考)。任選地可以向本發(fā)明的多肽中引入在氨基端或羧基端的修飾。例如，本發(fā)明的多肽，如VIP類似物，可以用長(zhǎng)鏈脂肪酸在N末端?；?，生成表現(xiàn)低效力、部分激動(dòng)劑和拮抗劑活性的多肽(Gourlet等人，Eur.J.Pharmacol.354105-111(1998)，其內(nèi)容在此引用作為參考)。本發(fā)明多肽，如VIP類似物的其他示例性的修飾包括使用己酸酰化，生成顯現(xiàn)出對(duì)VPAC2選擇性提高的多肽(Langer等人，Peptides25275-8(2004)，其內(nèi)容在此引用作為參考)。因此，該?；拈L(zhǎng)度和定位可以改變效力，并且能夠?qū)е滦ЯΦ膯适?拮抗)或激動(dòng)類似物。與這種不可預(yù)測(cè)性相反，設(shè)計(jì)和檢測(cè)這里提供的多肽獲得期望的效力和活性。任選地可以在本發(fā)明多肽的至少一個(gè)氨基酸的側(cè)鏈內(nèi)引入修飾，以提高作用持續(xù)時(shí)間和/或效力。例如，本發(fā)明的多肽任選地可以在側(cè)鏈中包含至少一個(gè)?；癁楣倌苄缘陌被?即R基團(tuán))。代表性的修飾包括反應(yīng)性側(cè)鏈(如Lys)在多肽內(nèi)各個(gè)位點(diǎn)的脂肪酸?；urtzhals等人已經(jīng)報(bào)道了類似的修飾，其中胰島素在LysB29的酰化產(chǎn)生地特胰島素(insulindetemir)(Kurtzhals等人.，BiochemJ.312，725-31(1995)，Kurtzhals，P.，Int.J.Obesity28Suppl2，S23-8(2004))。類似地，使用長(zhǎng)鏈脂肪酸通過(guò)連接體分子?；a(chǎn)生有效且長(zhǎng)效的GLP1類似物(KnudsenLB等人(2000).J.Med.Chem.43，1664-69)，但是這種酰化可能導(dǎo)致活性的喪失或強(qiáng)激動(dòng)劑，這取決于酰基鏈的長(zhǎng)度和定位。與引入長(zhǎng)鏈脂肪酸的不可預(yù)測(cè)的效果相反，這里所述的多肽已經(jīng)設(shè)計(jì)為引入最佳數(shù)目、長(zhǎng)度和定位的?；?，以獲得期望的活性。任選地可以引入本發(fā)明多肽中(例如多肽鏈內(nèi)或N或C末端)來(lái)延長(zhǎng)作用時(shí)間的另一種類型的修飾是PEG化或引入長(zhǎng)鏈聚乙二醇聚合物(PEG)。PEG或長(zhǎng)鏈PEG聚合物的引入提高了本發(fā)明多肽的有效分子量，從而阻止了向尿中的快速過(guò)濾。引入PEG或長(zhǎng)鏈PEG聚合物的方法在本領(lǐng)域中眾所周知，例如在Greenwald等人，Adv.DrugDel.Rev.55217-250(2003)中描述，其內(nèi)容在此引入作為參考。最近報(bào)道的一種通過(guò)加入非天然氨基酸引入PEG或PEG聚合物的替代方法可以用本發(fā)明的多肽進(jìn)行。該方法采用設(shè)計(jì)的tRNA/tRNA合成酶對(duì)，在表達(dá)質(zhì)粒中由琥珀抑制密碼子編碼(Deiters，A等人.(2004).Bio-org.Med.Chem.Lett.14，5743-5)。例如，對(duì)-疊氮基苯丙氨酸可以加入本發(fā)明的多肽中，然后在存在還原劑和銅離子的條件下與具有乙炔部分的PEG聚合物反應(yīng)，以促進(jìn)被稱為“Huisgen[3+2]環(huán)加成作用”的有機(jī)反應(yīng)。兩親性螺旋本發(fā)明的多肽包含對(duì)應(yīng)于以下通式的兩親性α-螺旋Haa(LaaLaaHaaHaa)nLaa其中n、Haa和Laa如以上定義，Haa選自親水性氨基酸，Laa選自親脂性氨基酸。不被任何特定理論所限制，認(rèn)為C末端區(qū)域中的兩親性螺旋通過(guò)與體內(nèi)細(xì)胞膜的磷脂相互作用而使本發(fā)明多肽的作用持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，從而具有“貯庫(kù)”作用。本發(fā)明的多肽包含是兩親性α螺旋，而不僅僅是優(yōu)化的α螺旋的肽區(qū)。不希望被任何特定理論所限制，認(rèn)為兩親性α螺旋有利于提高與細(xì)胞膜的相互作用，并且?guī)椭鶦末端脂肪?；溞揎棇?duì)于膜相互作用的正確放置。Eisenberg等人的研究將疏水性等級(jí)與螺旋輪組合，以量化兩親性螺旋的概念(Nature299371-374(1982)和Proc.Nat.Acad.Sci.USA81140-144(1984)；其公開內(nèi)容在此引用作為參考)。平均疏水性力矩(hydrophobicmoment)被定義為構(gòu)成螺旋的成分氨基酸的疏水性的矢量和。以下氨基酸的疏水性是Eisenberg等人報(bào)道為“一致”等級(jí)的那些Ile0.73；Phe0.61；Val0.54；Leu0.53；Trp0.37；Met0.26Ala0.25；Gly0.16；Cys0.04；Tyr0.02；Pro-0.07；Tlir-0.18；Ser-0.26；His-0.40；Glu-0.62；Asn-0.64；Gln-0.69；Asp-0.72；Lys-1.10；Arg-1.76。每圈有3.6個(gè)殘基(或側(cè)鏈之間100°弧度(＝36073.6))的理想α-螺旋的疏水性力矩，μH，可以由以下公式計(jì)算μH＝[(∑HNsineδ(N-1)2+(∑HNcosδ(N-1))2]1/2其中HN是第N個(gè)氨基酸的疏水性值，對(duì)周期性為δ＝100°的序列中的N個(gè)氨基酸求和。疏水性力矩可以表示為每個(gè)殘基的平均疏水性力矩，將μH除以N，得到<μH>。在100°±20°時(shí)<μH>的值為大約0.20或更高提示兩親性螺旋形成。Cornett等人的研究通過(guò)引入“兩親性指數(shù)”作為兩親性的預(yù)測(cè)手段進(jìn)一步擴(kuò)展了對(duì)兩親性α-螺旋的研究(J.Mol.Biol.，195659-685(1987)；其公開內(nèi)容在此引用作為參考)。他們的結(jié)論是所有已知的α-螺旋中有大約一半是兩親性的，優(yōu)勢(shì)頻率(dominantfrequency)為97.5°，而不是100°。每圈的殘基數(shù)更接近3.7，而不是3.6。Eisenberg等人的基本方法足以將給定的序列歸類為兩親性的，特別是當(dāng)從頭開始設(shè)計(jì)形成兩親性α-螺旋的序列時(shí)。取代的兩親性α-螺旋氨基酸序列可能缺乏與天然存在的多肽的特定片段序列的同源性，但是在生理環(huán)境中產(chǎn)生類似的二級(jí)結(jié)構(gòu)，即具有相對(duì)的極性和非極性面的α-螺旋。將天然存在的氨基酸序列置換為可替代的序列可能有利地影響改變的親本多肽的生理學(xué)活性、穩(wěn)定性或其它性質(zhì)。描述這些序列的設(shè)計(jì)和選擇的報(bào)道的例子在J.L.Krstenansky等人，F(xiàn)EBSLetters2422，409-413(1989)，和J.P.Segrest等人ProteinsStructure，F(xiàn)unction，andGenetics8103-117(1990)中提供。本發(fā)明的多肽包含對(duì)應(yīng)于以下通式的兩親性α-螺旋Haa(LaaLaaHaaHaa)nLaa其中如上定義的，Haa選自親水性氨基酸，Laa選自親脂性氨基酸。在采取理想的α-螺旋的一個(gè)實(shí)施方案中，n＝2，殘基1、4、5、8和9在彼此大約140°弧度內(nèi)沿螺旋的一個(gè)面(A)分布，而殘基2、3、6、7和10占據(jù)螺旋另一個(gè)面(B)的相對(duì)的140°弧度。在一個(gè)實(shí)施方案中，一個(gè)面上的所有殘基為相同極性，而另一面上的所有殘基為相反的極性，即如果A面全為親水性的，則B面全為親脂性的，反之亦然。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道盡管本發(fā)明的螺旋被描述為Haa(LaaLaaHaaHaa)nLaa，但是相反的序列Laa(HaaHaaLaaLaa)nHaa也將滿足殘基分布標(biāo)準(zhǔn)，并且是本發(fā)明的螺旋的等同描述。丙氨酸可以替代親水性或親脂性氨基酸，因?yàn)锳la可以容易地位于兩親性α-螺旋的任一面上，盡管Ala-10不形成兩親性α-螺旋。通常不使用脯氨酸、半胱氨酸和酪氨酸；但是可以容忍它們?cè)谛蛄兄械拇嬖诤推渌S機(jī)錯(cuò)誤，例如親脂性面上的親水性殘基，只要該片段中的其余氨基酸基本符合親水性面—親脂性面分區(qū)。用于確定一個(gè)序列的兩親性是否足以成為本發(fā)明的序列的一種方便的方法是計(jì)算如上定義的平均疏水性力矩。如果在100°±20°時(shí)每個(gè)殘基的峰平均力矩超過(guò)大約0.20，則該序列將形成兩親性螺旋，并且是本發(fā)明的序列。在將該概念應(yīng)用于PACAP和VIP時(shí)，假定任一個(gè)區(qū)或兩個(gè)區(qū)(N-末端或C-末端)，優(yōu)選C-末端，可以呈現(xiàn)α-螺旋二級(jí)結(jié)構(gòu)，并且能夠被具有類似結(jié)構(gòu)趨勢(shì)的非同源序列替代，而不喪失生物活性或免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)。藥物制劑本發(fā)明的多肽可以以導(dǎo)致有益療效的任意量施用。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物在治療血糖水平升高、高血糖癥、包括2型糖尿病在內(nèi)的糖尿病、胰島素抵抗、代謝性酸中毒和肥胖癥中有用。在一個(gè)實(shí)施方案中，此處所述的化合物在胰島素和/或葡萄糖水平的調(diào)節(jié)上具有有益的活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的多肽以高于或低于調(diào)節(jié)胰島素和/或葡萄糖分泌的其他治療形式的濃度給患者施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的多肽與其他化合物一起施用，產(chǎn)生協(xié)同療效，例如，本發(fā)明的多肽可以與毒蜥外泌肽或毒蜥外泌肽類似物一起施用。實(shí)施例實(shí)施例1合成類似物圖1中示出的一些示例性的合成多肽類似物來(lái)源于VPAC2selUldB(見圖1)。圖1中示出的其他示例性合成多肽類似物是VIP的截短的同系物(見圖1)。在一個(gè)方面，本發(fā)明的多肽是VIP的生理活性截短同系物的類似物，如圖1所示的TP1至TP6。類似物TP1至TP6具有含有C12-C24，優(yōu)選C16-C24的長(zhǎng)酰基殘基。圖1所示的類似物TP7至TP12在N末端上具有含有C2-C16，優(yōu)選C6的酰基殘基。圖2所示的類似物SQNM10-12(對(duì)應(yīng)于SEQIDNO40-42)在C或N末端不含?；?。這里提供的其他代表性多肽類似物具有對(duì)應(yīng)于通式(I)的氨基酸序列?；?His-Ser-Asp-aa1-aa2-Phe-Thr-aa3-aa4-Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg-Lys-Gln-aa7-Ala-aa8-Lys-Lys-Tyr-Leu-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14-aa15-aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-Lys(ε-長(zhǎng)?；?-X通式(I)其中n＝1-3；Haa是親水性氨基酸；Laa是親脂性氨基酸；酰基是C2-16?；?；長(zhǎng)酰基是C12-24?；湥籜是OH或NHR1，其中R1是H或低級(jí)烷基、鹵代烷基或PEG；aa1是Gly或Ala；aa2是Val、Ile或Leu；aa3是Asp或Arg；aa4是Ser或Asn；aa5是Ser或Thr；aa6是Leu或Tyr；aa7是Met、Leu或Val；aa8是Ala或Val；aa9是Asn、Gln或Ala；aa10是Trp、Ala或Ser；aa11是Ile或Val；aa12是Leu或Lys；aa13是Lys、Arg、Asn或Gly；aa14是Ala或Gly；aa15是Lys或Arg；且aa16是Lys或Arg。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，?；荂2-8酰基鏈，長(zhǎng)酰基是C12-24?；湣＿@里提供的其他代表性多肽類似物具有對(duì)應(yīng)于通式(II)的氨基酸序列?；?His-Ser-Asp-aa1-aa2-Phe-Thr-aa3-aa4-Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg-Lys-Gln-aa7-Ala-aa8-Lys-Lys-Tyr-Leu-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14-aa15-aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-aa17-Pro-Pro-Pro-Lys(ε-長(zhǎng)酰基)-X通式(II)其中n＝1-3；Haa是親水性氨基酸；Laa是親脂性氨基酸；?；荂2-16?；?；長(zhǎng)?；荂12-24?；湥籜是OH或NHR1，其中R1是H或低級(jí)烷基、鹵代烷基或PEG；aa1是Gly或Ala；aa2是Val、Ile或Leu；aa3是Asp或Arg；aa4是Ser或Asn；aa5是Ser或Thr；aa6是Leu或Tyr；aa7是Met、Leu或Val；aa8是Ala或Val；aa9是Asn、Gln或Ala；aa10是Trp、Ala或Ser；aa11是Ile或Val；aa12是Leu或Lys；aa13是Lys、Arg、Asn或Gly；aa14是Ala或Gly；aa15是Lys或Arg；aa16是Lys或Arg；且aa17不存在或是Gln。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，?；荂2-8?；?，長(zhǎng)?；荂12-24酰基鏈。這里提供的其他代表性多肽類似物具有對(duì)應(yīng)于通式(III)的氨基酸序列?；?His-Ser-Asp-aa1-aa2-Phe-Thr-aa3-aa4-Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg-Lys-Gln-aa7-Ala-aa8-Lys-Lys-Tyr-Leu-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14-aa15-aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-Lys(ε-長(zhǎng)酰基)-PEG通式(III)其中n＝1-3；Haa是親水性氨基酸；Laa是親脂性氨基酸；?；荂2-16?；湥婚L(zhǎng)?；荂12-24?；?；aa1是Gly或Ala；aa2是Val、Ile或Leu；aa3是Asp或Arg；aa4是Ser或Asn；aa5是Ser或Thr；aa6是Leu或Tyr；aa7是Met、Leu或Val；aa8是Ala或Val；aa9是Asn、Gln或Ala；aa10是Trp、Ala或Ser；aa11是Ile或Val；aa12是Leu或Lys；aa13是Lys、Arg、Asn或Gly；aa14是Ala或Gly；aa15是Lys或Arg；且aa16是Lys或Arg。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，?；荂2-8?；?，長(zhǎng)酰基是C12-24?；?。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道，可以合成多肽類似物的大量變換形式，假如在100°±20°時(shí)每個(gè)殘基具有大于約0.20的平均疏水性力矩的氨基酸序列被插入C末端區(qū)的位置中，它們將具有此處所述多肽類似物的期望的特征。實(shí)施例2合成多肽的常用方法本發(fā)明的多肽可以用如下所述的方法合成，J.M.Stewart和J.D.Young，SolidPhasePeptideSynthesis，2nded.，PierceChemicalCo.，Rockford，I11.(1984)和J.Meienhofer，HormonalProteinsandPeptides，Vol.2，AcademicPress，NewYork，(1973)的固相合成，和E.Schroder和K.Lubke，ThePeptides，Vol.1，AcademicPress，NewYork，(1965)的溶液合成，和Houben-Weyl，SynthesisofPeptidesandPeptidomimetics.4thed.VolE22；M.Goodman，A.Felix，L.Moroder，C.Toniolo，Eds.，ThiemeNewYork，2004的通用合成技術(shù)。上述論文的內(nèi)容在此引用作為參考。通常，這些方法涉及向延長(zhǎng)的肽鏈上連續(xù)加入受保護(hù)的氨基酸。通常，第一個(gè)氨基酸的氨基或羧基和任何反應(yīng)性側(cè)鏈基團(tuán)受到保護(hù)。這種受到保護(hù)的氨基酸然后連接到惰性固體支持物上，或者在溶液中使用，并且在適合形成酰胺鍵的條件下加入也適當(dāng)?shù)厥艿奖Ｗo(hù)的序列中的下一個(gè)氨基酸。在所有需要的氨基酸已經(jīng)以正確順序連接后，除去保護(hù)基和任何固體支持物，得到粗多肽。將多肽脫鹽并純化，優(yōu)選層析，產(chǎn)生終產(chǎn)物。一種制備含有不到約40個(gè)氨基酸的生理活性截短多肽的類似物的優(yōu)選方法包括固相肽合成。在該方法中，α-氨基(Nα)官能團(tuán)和任何反應(yīng)性側(cè)鏈被酸或堿敏感的基團(tuán)保護(hù)。保護(hù)基應(yīng)當(dāng)對(duì)肽鍵形成條件穩(wěn)定，并且易于除去，而不影響已有的多肽鏈。合適的α-氨基保護(hù)基包括但不限于叔丁氧羰基(Boc)、芐氧羰基(Cbz)、鄰-氯代芐氧羰基、聯(lián)苯基異丙氧羰基、叔-戊氧羰基(Amoc)、異冰片基氧羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基芐氧基-羰基、鄰-硝基苯硫基、2-氰-叔-丁氧羰基、9-芴基-甲氧羰基(Fmoc)等，優(yōu)選叔丁氧羰基(Boc)。合適的側(cè)鏈保護(hù)基包括但不限于乙?；?、芐基(Bzl)、芐氧基甲基(Bom)、鄰-溴芐氧羰基、叔丁基、叔丁基二甲基硅烷基、2-氯芐基(Cl-z)、2，6-二氯芐基、環(huán)己基、環(huán)戊基、異丙基、特戊?；⑺臍溥拎?2-基、甲苯磺?；?Tos)、三甲基硅烷基和三苯甲基。在固相合成中，C末端氨基酸首先連接到合適的樹脂支持物上。合適的樹脂支持物是對(duì)于分步縮合和脫保護(hù)反應(yīng)的試劑和反應(yīng)條件而言為惰性，并且在使用的介質(zhì)中不可溶的那些材料。商業(yè)上可購(gòu)到的樹脂的例子包括用反應(yīng)基修飾的苯乙烯/二乙烯基苯樹脂，例如氯代甲基化共聚-(苯乙烯-二乙烯基苯)、羥基甲基化共聚-(苯乙烯-二乙烯基苯)等。優(yōu)選芐基化的、羥基甲基化的苯乙酰胺甲基(PAM)樹脂。當(dāng)化合物的C末端是酰胺時(shí)，一種優(yōu)選的樹脂是對(duì)甲基二苯甲基氨基-共-聚-(苯乙烯-二乙烯基苯)樹脂。向PAM樹脂上連接可以如下實(shí)現(xiàn)通過(guò)在升高的溫度下，例如約40°至60℃，優(yōu)選約50℃下，使乙醇、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)等中的Na保護(hù)的氨基酸，優(yōu)選Boc-氨基酸，例如其銨、銫、三乙銨、1，5-二氮二環(huán)-[5.4.0]十一碳-5-烯、四甲基銨或類似的鹽，優(yōu)選在DMF中的銫鹽，與樹脂反應(yīng)約12-72小時(shí)，優(yōu)選約48小時(shí)?？梢酝ㄟ^(guò)，例如，在約10°到50℃，優(yōu)選25℃的溫度下，在諸如二氯甲烷或二甲基甲酰胺，優(yōu)選二氯甲烷的溶劑中，N，N′-二異丙基碳二亞胺(DIC)/1-羥基苯并三唑(HOBt)介導(dǎo)地偶聯(lián)約2小時(shí)到約24小時(shí)，優(yōu)選約2小時(shí)，將Nα-Boc-氨基酸連接到二苯甲基胺樹脂上。受保護(hù)的氨基酸的連續(xù)偶聯(lián)可以用本領(lǐng)域眾所周知的方法進(jìn)行，典型地使用自動(dòng)肽合成儀。用三乙胺或類似的堿中和后，優(yōu)選加入約1.5-2.5倍摩爾過(guò)量的每種受保護(hù)的氨基酸，在諸如二氯甲烷、DMF或其混合物的惰性非水極性溶劑中，優(yōu)選在二氯甲烷中，在室溫下進(jìn)行偶聯(lián)。代表性偶聯(lián)劑是N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、N，N′-二異丙基-碳二亞胺(DIC)或其他碳二亞胺，其單獨(dú)或在存在1-羥基苯并三唑(HOBt)、O-?；?、苯并三唑-1-基-氧代三(吡咯基)磷六氟磷酸鹽(PyBop)、N-羥基琥珀酰亞胺、其他N-羥基亞胺或肟的條件下使用?？蛇x擇地，可以使用受保護(hù)的氨基酸活性酯(例如對(duì)硝基苯酯、五氟苯酯等)或?qū)ΨQ酐。在固相合成結(jié)束時(shí)，從樹脂上除去完全保護(hù)的肽。當(dāng)與樹脂支持物的連接是芐酯類型時(shí)，可以如下實(shí)現(xiàn)切割對(duì)于具有烷基胺C末端的肽通過(guò)使用烷基胺或氟烷基胺的氨解作用，或者對(duì)于具有未取代的酰胺C末端的肽通過(guò)使用例如氨/甲醇或氨/乙醇的氨解作用，反應(yīng)溫度為約-10°至50℃，優(yōu)選約25℃，反應(yīng)時(shí)間為約12-24小時(shí)，優(yōu)選約18小時(shí)。具有羥基C-末端的肽可以用HF或其他強(qiáng)酸性脫保護(hù)方案或通過(guò)皂化切下?？蛇x擇地，可以通過(guò)轉(zhuǎn)酯作用，例如使用甲醇，然后氨解或皂化，從樹脂上除去肽。受保護(hù)的肽可以通過(guò)硅膠層析純化。側(cè)鏈保護(hù)基可以通過(guò)以下方法從肽上除去在存在茴香醚或其他碳鎓離子清除劑的條件下，例如用無(wú)水液體氟化氫處理氨解產(chǎn)物，用氟化氫/吡啶復(fù)合物處理，用三(三氟乙?；?硼和三氟乙酸處理，用氫和碳載鈀或聚乙烯吡咯烷酮還原，或用液氨中的鈉還原，優(yōu)選用液態(tài)氟化氫和茴香醚，反應(yīng)溫度為約-10°至+10℃，優(yōu)選約0℃，反應(yīng)時(shí)間為約15分鐘至2小時(shí)，優(yōu)選約1.5小時(shí)。對(duì)于二苯甲胺樹脂上的肽，樹脂切割和脫保護(hù)步驟可以使用如上所述的液態(tài)氟化氫和茴香醚組合為一步。溶液可以脫鹽(例如使用BioRadAG-3.RTM陰離子交換樹脂)，通過(guò)使用任意或全部以下類型的一系列層析步驟純化肽以乙酸鹽形式在弱堿性樹脂上離子交換；在未衍生化的共聚(苯乙烯-二乙烯基苯)，例如Amberlite.RTM.XAD上疏水性吸附層析；硅膠吸附層析；在羧甲基纖維素上離子交換層析；分配層析，例如在Sephadex.RTM.G-25上；逆流分配；或高效液相層析(HPLC)，特別是在辛基-或十八烷基硅烷基硅(ODS)鍵合相柱填充物上反相HPLC。因此，本發(fā)明的另一方面涉及制備多肽及其藥學(xué)可接受的鹽的方法，該方法包括在適合的樹脂支持物上連續(xù)縮合受保護(hù)的氨基酸，除去保護(hù)基和樹脂支持物，并純化產(chǎn)物，獲得PACAP和VIP(優(yōu)選如上定義的其中C末端氨基酸形成兩親性α-螺旋肽序列的PACAP和VIP)的生理活性截短同系物和類似物的類似物。實(shí)施例3代表性多肽類似物的示例性合成和純化方案使用以下所述的合成和純化方法制備對(duì)應(yīng)于SEQIDNO1的代表性多肽類似物。戊?；?His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Val-Ala-Ala-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Trp-Ile-Lys-Lys-Ala-Lys-Arg-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Lys(ε硬脂?；?-NH2(SEQIDNO1)通常，利用Fmoc化學(xué)方法在Fmoc-Rink-酰胺-PEG樹脂上合成肽。用于氨基酸側(cè)鏈官能團(tuán)的保護(hù)基是用于Glu、Tyr、Thr、Asp和Ser的叔丁基；用于Lys和Trp的Boc基團(tuán)；用于Arg團(tuán)的Pbf基團(tuán)；用于Asn和His的Trt基團(tuán)。N-αFmoc保護(hù)的氨基酸購(gòu)自EMDBiosciences(SanDiego，CA)。用于偶聯(lián)和切割的試劑購(gòu)自Aldrich(St.Louis，MO)。溶劑購(gòu)自FisherScientific(Fairlawn，NJ)。通常，合成方案涉及通過(guò)重復(fù)除去Fmoc保護(hù)基和偶聯(lián)被保護(hù)的氨基酸在樹脂上裝配肽鏈。為了合成，首先將Dde-Lys(Fmoc)-OH偶聯(lián)到Rink酰胺樹脂上。然后用20％哌啶的DMF溶液除去Fmoc保護(hù)基。使用HBTU、HOBt和NMM將硬脂酸偶聯(lián)到Lys的側(cè)鏈上。用2％肼的DMF溶液除去Dde基團(tuán)，然后偶聯(lián)Fmoc保護(hù)的氨基酸。使用HBTU和HOBt作為偶聯(lián)試劑，使用NMM作為堿。除去最后一個(gè)Fmoc保護(hù)基后，用DIC(4當(dāng)量)和HOBt(4當(dāng)量)將戊酸(4當(dāng)量)偶聯(lián)到氨基端上。用混合物1處理肽樹脂，用于切割和除去側(cè)鏈保護(hù)基。從冷醚中沉淀粗肽，并通過(guò)過(guò)濾收集。使用來(lái)自Waters(Milford，MA)的20mm×250mm柱通過(guò)RP-HPLC進(jìn)行粗肽的純化。使用TFA緩沖液純化肽。使用在60分鐘里從35％至55％乙腈的線性梯度。將合并的級(jí)分凍干。通過(guò)質(zhì)譜分析和氨基酸分析證實(shí)肽的身份。肽的純度通過(guò)分析HPLC柱(C18柱，4.6×250mm，Supelco(St.Louis，MO)生產(chǎn))層析測(cè)定。上述程序可以總結(jié)為以下的分步方案步驟1.樹脂溶脹Fmoc-Rink-酰胺-PEG樹脂在DCM中溶脹30分鐘(10ml/g樹脂)步驟2.脫保護(hù)a.將20％哌啶/DMF溶液(10ml/g樹脂)加入樹脂中；b.將溶液攪拌30分鐘(當(dāng)所有樹脂在反應(yīng)容器中自由飄浮時(shí)開始計(jì)時(shí))；和c.排出溶液。步驟3.洗滌用DMF(10ml/g樹脂)洗滌樹脂5次。進(jìn)行茚三酮試驗(yàn)，顯示陽(yáng)性。步驟4.偶聯(lián)a.稱取Fmoc-AA-OH(3當(dāng)量，相對(duì)于樹脂載量計(jì)算)和HOBt(3當(dāng)量，相對(duì)于樹脂載量)加入塑料瓶中。b.用DMF(5ml/g樹脂)溶解固體。c.將HBTU(3當(dāng)量，相對(duì)于樹脂)加入混合物中，然后加入NMM(6當(dāng)量，相對(duì)于樹脂)。d.將混合物加入樹脂中。e.將混合物輕輕鼓泡(或攪拌)10-60分鐘，直到用小樣品樹脂獲得陰性茚三酮試驗(yàn)。步驟5.洗滌用DMF洗滌樹脂3次。步驟6.重復(fù)步驟2-5，直到肽裝配。步驟7.N-末端Fmoc脫保護(hù)重復(fù)步驟2。步驟8.洗滌和干燥a.在最后一次偶聯(lián)后，用DMF洗滌樹脂3次，用MeOH洗一次，用DCM洗三次，用MeOH洗三次。b.樹脂在真空下(例如吸水泵)干燥2小時(shí)，在高真空(油泵)下干燥最少12小時(shí)。步驟9.切割a.將干燥樹脂置于塑料瓶中，加入切割混合物。在室溫下振蕩混合物2.5小時(shí)。b.通過(guò)減壓過(guò)濾除去樹脂。樹脂用TFA洗兩次。合并過(guò)濾物，加入8-10倍體積的冷醚，獲得沉淀物。c.通過(guò)過(guò)濾分離粗肽，然后用冷醚洗滌兩次。在上述合成方案中使用如下化學(xué)試劑和溶劑NMM(N-甲基嗎啉)；HBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯)；HOBt(1-羥基苯并三唑)；DMF(二甲基甲酰胺)；DCM(二氯甲烷)；甲醇；二乙醚；哌啶；Tis(三異丙基硅烷)；茴香硫醚；苯酚；EDT(1，2-乙二硫醇)；三氟乙酸混合物1TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/EDT(87.5/5/2.5/2.5/2.5v/v/)；TFA緩沖液A(0.1％TFA水溶液)；和TFA緩沖液B(0.1％TFA的乙腈溶液)。其他代表性多肽類似物用類似于以上的方法制備。以下表1中列出了本發(fā)明的示例性多肽類似物的化學(xué)性質(zhì)。表1.示例性多肽類似物的性質(zhì)實(shí)施例4多肽的重組合成可選擇地，可以通過(guò)克隆和表達(dá)編碼所需多肽的基因制備本發(fā)明的多肽。在該方法中，制備含有所需要的DNA序列的質(zhì)粒，并將其插入適當(dāng)?shù)乃拗魑⑸镏?，典型地是?xì)菌，如大腸桿菌，或酵母，如釀酒酵母，包括宿主微生物，以生產(chǎn)多個(gè)拷貝的質(zhì)粒，以及編碼本發(fā)明的多肽類似物的cDNA。首先，設(shè)計(jì)編碼選擇的PACAP或VIP類似物的合成基因，使其具有適宜的限制酶切位點(diǎn)，以利于隨后的改變?？梢岳肕ullis在美國(guó)專利Nos.4,683,195和4,683,202中教導(dǎo)的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)來(lái)擴(kuò)增序列，在此引用作為參考。可以分離擴(kuò)增的合成基因，并連接到合適的質(zhì)粒如TrpLE質(zhì)粒中，可以向該質(zhì)粒中串聯(lián)插入4個(gè)拷貝的基因。TrpLE質(zhì)粒的制備在美國(guó)專利No.4,738,921和歐洲專利公開No.0212532中描述，在此引用作為參考。TrpLE質(zhì)粒通常比TrpE質(zhì)粒產(chǎn)生多8-10倍的蛋白質(zhì)。然后可以在諸如大腸桿菌或釀酒酵母等合適的宿主中表達(dá)多拷貝基因。在本發(fā)明中可以使用TrpLE18Prot(He3，Pro5)作為表達(dá)載體。TrpLE18Prot(He3，Pro5)含有以下元件含有氨芐青霉素抗性基因和質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)的pBR322片段(EcoRI-BamHI)；含有trp啟動(dòng)子和trpE基因的EcoRI-SacII片段；HIV蛋白酶(He3，Pro5)基因片段(SacII-HindIII)；bGRF基因片段(HindIII-BamHI)；和來(lái)自大腸桿菌rpoc基因的轉(zhuǎn)錄終止子。HIV蛋白酶和bGRF基因片段不是關(guān)鍵性的，如果需要可以替換為其他編碼序列。表達(dá)的多聚體融合蛋白然后在細(xì)胞內(nèi)積累為穩(wěn)定的包涵體，可以通過(guò)離心與其余的細(xì)胞蛋白質(zhì)分離。分離的融合蛋白轉(zhuǎn)化為單體PACAP或VIP類似物，并且可以通過(guò)陽(yáng)離子交換和/或反相HPLC進(jìn)行純化?？寺?、擴(kuò)增、表達(dá)和純化的替代方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。代表性的方法在Maniatis等人，MolecularCloning，aLaboratoryManual，3rdEd.，ColdSpringHarborLaboratory(2001)中公開，在此引用作為參考。實(shí)施例5使用胰島細(xì)胞靜置培養(yǎng)的體外生物測(cè)定進(jìn)行如下的示例性體外生物測(cè)定來(lái)評(píng)價(jià)代表性多肽類似物調(diào)節(jié)胰島素分泌的能力。胰島分離。從體重約為250g并且通過(guò)腹膜內(nèi)注射戊巴比妥鈉(35mg/230g大鼠)麻醉的雄性Fisher大鼠中分離大鼠胰島(SweetIR等人(2004)Biochem.Biophys.Res.Commun.314，976-983)。通常通過(guò)向局部切開的胰臟的胰管內(nèi)注射膠原酶(10mL的0.23mg/mLLiberase，RocheMolecularBiochemicals，Indianapolis，IN)并將其手術(shù)切除來(lái)制備胰島。所有操作都經(jīng)過(guò)華盛頓大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)管理委員會(huì)(InstitutionalAnimalCareandUseCommitteeattheUniversityofWashington)的批準(zhǔn)。將胰置于含有5mL的0.23mg/mLLiberase的15mL錐形管中，在37℃孵育30分鐘。然后將消化物通過(guò)400-微米不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾，用Hanks緩沖鹽溶液漂洗，在Optiprep梯度溶液(Nycomed，Oslo，Norway)中純化。胰島在進(jìn)行測(cè)定之前在補(bǔ)加了10％(v/v)熱滅活胎牛血清(FBS)、抗生素-抗真菌劑(100U/mL青霉素，100μg/mL鏈霉素和0.25μg/mL兩性霉素B)、2mM谷氨酰胺(均來(lái)自Gibco-BRL，GrandIsland，NY)和1mMβ巰基乙醇的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)18-24小時(shí)。生物測(cè)定。在顯微鏡下挑取胰島，置于10ml3mMKrebsRinger緩沖液(KRB)中洗滌。將胰島在3mM葡萄糖KRB中孵育60分鐘，然后以每孔10個(gè)胰島置于96孔板的200μl培養(yǎng)基中。將胰島在對(duì)照或處理?xiàng)l件下孵育120分鐘，收集上清液。典型的一組條件檢測(cè)3mM葡萄糖(安靜對(duì)照)，16mM葡萄糖(檢測(cè)對(duì)照)，16mM葡萄糖+10nmGLP1，16mM葡萄糖+10nM毒蜥外泌肽-4，16mM葡萄糖+50nM測(cè)試肽。緩沖液條件是含有0.1％BSA，20mMHEPES的KRB，一式四份進(jìn)行測(cè)定。使用商品胰島素酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)測(cè)定根據(jù)廠商使用說(shuō)明評(píng)價(jià)上清液的胰島素含量。生物測(cè)定的結(jié)果。表2列出了在上述測(cè)定中獲得的類似物TP-106的胰島素分泌，在該測(cè)定中TP-106在200nM的濃度時(shí)表現(xiàn)出最大活性。為了比較，在該測(cè)定中檢測(cè)了毒蜥外泌肽4，其在10nM時(shí)顯示最大活性。TP-106是高度疏水性的類似物，設(shè)計(jì)為在皮下注射部位貯存(depot)，因此TP-106的有效濃度預(yù)期大大低于標(biāo)稱濃度(200nM)。表2.使用TP-106的胰島細(xì)胞靜置培養(yǎng)生物測(cè)定的結(jié)果對(duì)其他示例性多肽類似物進(jìn)行上述胰島細(xì)胞靜置培養(yǎng)測(cè)定。濃度為100nM的TP-107在該測(cè)定中表現(xiàn)出最大活性。作為對(duì)比，在該測(cè)定中檢測(cè)了毒蜥外泌肽4，其在10nM時(shí)表現(xiàn)出最大活性。所示的肽設(shè)計(jì)為與血清白蛋白結(jié)合，因此，預(yù)期賦予胰島素活性的游離肽的濃度相當(dāng)?shù)?，因此該類似物比該體外測(cè)定中所示的更有效。表3.使用TP-107和TP-108的胰島細(xì)胞靜置培養(yǎng)生物測(cè)定的結(jié)果實(shí)施例6體內(nèi)生物測(cè)定進(jìn)行以下的示例性體內(nèi)測(cè)定以評(píng)價(jià)代表性多肽類似物調(diào)節(jié)胰島素分泌的能力。檢測(cè)的研究組。初次接受試驗(yàn)的8周大的雌性db/db小鼠適應(yīng)一周，在此期間定期處理這些動(dòng)物，使它們適應(yīng)實(shí)驗(yàn)程序。研究組每組包括6只小鼠，通過(guò)腹膜內(nèi)注射施用以下成分之一(1)載體對(duì)照；(2)陽(yáng)性對(duì)照(毒蜥外泌肽-4或其他標(biāo)準(zhǔn)治療)；(3)高劑量的多肽類似物；或(4)低劑量的多肽類似物。從尾尖部的切口取少量血液進(jìn)行血液采樣。用商品手持式葡萄糖計(jì)測(cè)定血糖水平。在第1天的早晨，給動(dòng)物注射多肽類似物和對(duì)照物。在注射前以及注射后2、4、8、14、24小時(shí)采集血樣并立即分析。在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中隨意喂養(yǎng)動(dòng)物(Tsutsumi等人，Diabetes511453-60(2002))。表4列出了上述體內(nèi)測(cè)定獲得的數(shù)據(jù)的代表性采樣。如下所示，高劑量的TP-106在注射后2小時(shí)表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的活性(例如，血漿葡萄糖降低)，在給藥后4小時(shí)保持活性。表4.使用TP-103和TP-106的體內(nèi)測(cè)定的結(jié)果*s.d.＝標(biāo)準(zhǔn)差實(shí)施例7本發(fā)明的應(yīng)用本發(fā)明的多肽可用于預(yù)防和治療多種代謝紊亂。具體而言，本發(fā)明的化合物用于預(yù)防和治療血糖水平升高、高血糖癥、包括2型糖尿病在內(nèi)的糖尿病、胰島素抵抗、代謝性酸中毒和肥胖癥。通常，本發(fā)明的多肽或其鹽以每天約0.01至1μg/kg體重，優(yōu)選每天約0.07至約0.2μg/kg體重的量施用。對(duì)于50kg的人類女性受試者，活性成分的每日劑量為約0.5至約50μg，優(yōu)選約3.5至約10μg。對(duì)于其他哺乳動(dòng)物，如馬、狗和牛，可能需要較高的劑量。該劑量在常規(guī)藥物組合物中可以根據(jù)需要通過(guò)一次施用、通過(guò)多次應(yīng)用或通過(guò)控制釋放來(lái)遞送，以達(dá)到最有效的結(jié)果，優(yōu)選每天注射一次或多次。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的多肽可以與在治療代謝紊亂中有用的其他化合物聯(lián)合施用，例如，本發(fā)明的多肽可以與一種或多種在代謝紊亂的治療中使用的如下化合物一起施用，這些化合物包括但不限于胰島素、胰島素類似物、腸降血糖素、腸降血糖素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽類似物、磺酰脲類、雙縮胍類、α-葡糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮類、過(guò)氧化物酶體增生物激活受體(PPAR，包括作用于PPAR受體α、β或γ亞型的試劑和/或作用于PPAR受體多種亞型的試劑)激動(dòng)劑、PPAR拮抗劑和PPAR部分激動(dòng)劑，它們可以與本發(fā)明的多肽聯(lián)合給藥。準(zhǔn)確劑量和組合物和最合適的給藥方式的選擇尤其受到所選擇的多肽的藥理學(xué)性質(zhì)、所治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度、接受者的身體狀態(tài)和精神敏度的影響。代表性的給藥方式包括口服、腸胃外(包括皮下、肌肉內(nèi)和靜脈內(nèi))、直腸、口腔(包括舌下)、透皮和鼻內(nèi)。藥學(xué)可接受的鹽保留親本多肽的需要的生物活性，而沒有毒副作用。這些鹽的實(shí)例包括(a)由例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等無(wú)機(jī)酸形成的酸加成鹽；和由例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、富馬酸、葡糖酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸、鞣酸、撲酸(pamoicacid)、海藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸等有機(jī)酸形成的鹽；(b)由諸如鋅、鈣、鉍、鋇、鎂、鋁、銅、鈷、鎳、鎘等多價(jià)金屬陽(yáng)離子形成的堿加成鹽；或由N，N′-二芐基乙二胺或乙二胺形成的有機(jī)陽(yáng)離子形成的堿加成鹽；或(c)(a)和(b)的組合，例如鞣酸鋅鹽等。本發(fā)明的另一方面涉及藥物組合物，其含有本發(fā)明的多肽或其藥學(xué)可接受的鹽作為活性成分，與藥學(xué)可接受的無(wú)毒性載體混合。如上所述，這種組合物可以制備用于腸胃外(皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi))給藥，特別是液體溶液或懸浮液的形式；用于口服或口腔給藥，特別是片劑或膠囊的形式；用于鼻內(nèi)給藥，特別是粉末、滴鼻劑或氣霧劑的形式；用于直腸或透皮給藥。該組合物可以方便地以單位劑量形式給藥，并且可以用藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的任何方法制備，例如，如Remington′sPharmaceuticalSciences，17thed.，MackPublishingCompany，Easton，Pa.，(1985)所述，其在此引用作為參考。用于腸胃外給藥的制劑可以含有無(wú)菌水或鹽水、烷撐二醇如丙二醇、聚烷撐二醇如聚乙二醇、植物來(lái)源的油、氫化萘等作為賦形劑。用于口服給藥的制劑可以通過(guò)加入膽汁酸鹽或?；舛緣A而增強(qiáng)。用于經(jīng)鼻給藥的制劑可以是固體，并且可以含有賦形劑，例如乳糖或葡聚糖，或者可以是以滴鼻劑或計(jì)量噴劑形式使用的水性或油性溶液。對(duì)于口腔給藥，典型的賦形劑包括糖、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、預(yù)膠化淀粉等。當(dāng)配制用于經(jīng)鼻給藥時(shí)，可以用表面活性酸增強(qiáng)通過(guò)鼻粘膜的吸收，所述酸例如甘氨膽酸、膽酸、?；悄懰?、ethocholicacid、脫氧膽酸、鵝脫氧膽酸、脫氫膽酸、甘氨脫氧膽酸、環(huán)糊精等，含量為約0.2至15重量％，優(yōu)選約0.5至4重量％，最優(yōu)選約2重量％。表現(xiàn)出較高效力而刺激性降低的另一類吸收增強(qiáng)劑是烷基麥芽苷類，如十四烷基麥芽苷(Arnold，JJ等人(2004).JPharm.Sci.93，2205-13，和此處的參考文獻(xiàn)，均引用作為參考)。在延長(zhǎng)的時(shí)間期限內(nèi)，例如在一周到一年的期限內(nèi)給受試者施用本發(fā)明的化合物，可以通過(guò)單次施用含有對(duì)于期望的釋放期而言足夠活性成分的控制釋放系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)。各種控制釋放系統(tǒng)，如整塊(monolithic)或儲(chǔ)庫(kù)(reservoir)型微膠囊、儲(chǔ)庫(kù)型(Depot)植入物、滲透泵、囊泡、微團(tuán)、脂質(zhì)體、透皮帖劑、離子電滲裝置和可替代的注射劑型，可以用于該目的。在期望遞送活性成分的部位局部化是某些控制釋放裝置的另一個(gè)特征，這可以證明在某些疾病的治療中是有益的?？刂漆尫胖苿┑囊环N形式含有在諸如共聚(乳/乙醇)酸等緩慢降解的無(wú)毒性非抗原性聚合物中分散或包封的多肽或其鹽，如Kent，Lewis，Sanders和Tice在美國(guó)專利No.4,675,189中的先驅(qū)性工作所述，該專利在此引用作為參考。化合物或優(yōu)選其相對(duì)不溶性鹽，也可以配制在膽固醇或其他脂質(zhì)基質(zhì)沉淀物或硅塑料基質(zhì)植入物中。其他的緩釋、儲(chǔ)庫(kù)型植入物或注射制劑對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。參見，例如，SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems，J.R.Robinsoned.，MarcelDekker，Inc.，NewYork，1978，和R.W.Baker，ControlledReleaseofBiologicallyActiveAgents，JohnWiley&Sons，NewYork，1987，在此引用作為參考。本說(shuō)明書中提到的所有出版物和專利申請(qǐng)都在此引用作為參考，如同每一獨(dú)立的出版物和專利申請(qǐng)具體且單獨(dú)地引用作為參考。盡管上面給出的實(shí)施例和討論旨在說(shuō)明本發(fā)明的代表性化合物的合成和檢測(cè)，但是應(yīng)當(dāng)理解，它能夠進(jìn)一步修飾，并且不應(yīng)理解為限制所附權(quán)利要求書的范圍。參考文獻(xiàn)US5,589,452(1996)，AnalogsofParathyroidHormoneandParathyroidHormoneRelatedpeptideSynthesisandUsefortheTreatmentofOsteoporosis.J.L.Krstenanskyetal.Arnold，JJ，etal.(2004).CorrelationofTetradecylmaltosideInducedIncreasesinNasalPeptideDrugDeliverywithMorphologicalChangesinNasalEpithelialCells.JPharm.Sci.93，2205-13Yung，SL.，etal.(2003)GenerationofHighlySelectiveVPAC2ReceptorAgonistsbyHighThroughputMutagenesisofVasoactiveIntestinalPolypeptideandPituitaryAdenylateCyclase-activatingPeptide.JBiolChem278，10273-81.Tsutsumi，M.，etal.(2002)APotentandHighlySelectiveVPAC2AgonistEnhancesGlucose-InducedInsulinReleaseandGlucoseDisposal.APotentialTherapyforType2Diabetes.Diabetes51，1453-60.Langer，I.，etal.(2004)HexanoylationofVPAC2receptor-preferringligandmarkedlyincreaseditsselectivityandpotency.Peptides25，275-8.Knudsen，LB，etal.(2000).PotentDerivativesofGlucagon-likePeptide-1withPharmacokineticPropertiesSuitableforOnceDailyAdministration.J.Med.Chem.43，1664-9GourletP，etal.(1997).Thelong-actingvasoactiveintestinalpolypeptideagonistRO25-1553ishighlyselectiveoftheVTP2receptorsubclass.Peptides18，403-8GourletP，etal.(1998).InteractionoflipophilicVIPderivativeswithrecombinantVTP1/PACAPandVIP2/PACAPreceptors.Eur.J.Pharmacol.354，105-111GreenwaldRB，etal.(2003).EffectivedrugdeliverybyPEGylateddrugconjugates.Adv.DrugDel.Rev.55，217-250NielsenLL，Young，AA，Parkes，DG(2004).Pharmacologyofexenatide(syntheticexendin-4)apotentialtherapeuticforimprovedglycemiccontroloftype2diabetes.Regul.Peptides117，77-88KiefferTJandHabener，JR(1999).TheGlucagon-LikePeptides.Endocr.Rev.20，876-913Knudsen，LB.(2004).Glucagon-likePeptide-1TheBasisofaNewClassofTreatmentforType2Diabetes.J.Med.Chem.47，4128-34Kurtzhals，Petal.(1995).Albuminbindingofinsulinsacylatedwithfattyacidscharacterizationoftheligand-proteininteractionandcorrelationbetweenbindingaffinityandtimingoftheinsulineffectinvivo.BiochemJ.312，725-31.Kurtzhals，P.(2004).Engineeringpredictabilityandprotractioninabasalinsulinanaloguethepharmacologyofinsulindetemir.Int.J.Obesity28，Suppl2，S23-8XiaM，etal.(1997).NovelcyclicpeptideagonistofhighpotencyandselectivityforthetypeIIvasoactiveintestinalpeptidereceptor.J.Pharmacol.Exp.Ther.281，629-33Deiters，A，etal.(2004).Site-specificPEGylationofproteinscontainingunnaturalaminoacids.Bio-org.Med.Chem.Lett.14，5743-權(quán)利要求1.一種腸血管活性多肽，選自(a)對(duì)應(yīng)于通式(I)的多肽?；?His-Ser-Asp-aa1-aa2-Phe-Thr-aa3-aa4-Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg-Lys-Gln-aa7-Ala-aa8-Lys-Lys-Tyr-Leu-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14-aa15-aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-Lys(ε-長(zhǎng)?；?-X通式(I)其中n＝1-3；Haa是親水性氨基酸；Laa是親脂性氨基酸；?；荂2-16?；?；長(zhǎng)?；荂12-24?；?；X是OH或NHR1，其中R1是H或低級(jí)烷基、鹵代烷基或PEG；aa1是Gly或Ala；aa2是Val、Ile或Leu；aa3是Asp或Arg；aa4是Ser或Asn；aa5是Ser或Thr；aa6是Leu或Tyr；aa7是Met、Leu或Val；aa8是Ala或Val；aa9是Asn、Gln或Ala；aa10是Trp、Ala或Ser；aa11是Ile或Val；aa12是Leu或Lys；aa13是Lys、Arg、Asn或Gly；aa14是Ala或Gly；aa15是Lys或Arg；且aa16是Lys或Arg；(b)對(duì)應(yīng)于通式(II)的多肽?；?His-Ser-Asp-aa1-aa2-Phe-Thr-aa3-aa4-Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg-Lys-Gln-aa7-Ala-aa8-Lys-Lys-Tyr-Leu-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14-aa15-aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-aa17-Pro-Pro-Pro-Lys(ε-長(zhǎng)?；?-X通式(II)其中n＝1-3；Haa是親水性氨基酸；Laa是親脂性氨基酸；?；荂2-16酰基鏈；長(zhǎng)?；荂12-24?；?；X是OH或NHR1，其中R1是H或低級(jí)烷基、鹵代烷基或PEG；aa1是Gly或Ala；aa2是Val、Ile或Leu；aa3是Asp或Arg；aa4是Ser或Asn；aa5是Ser或Thr；aa6是Leu或Tyr；aa7是Met、Leu或Val；aa8是Ala或Val；aa9是Ash、Gln或Ala；aa10是Trp、Ala或Ser；aa11是Ile或Val；aa12是Leu或Lys；aa13是Lys、Arg、Asn或Gly；aa14是Ala或Gly；aa15是Lys或Arg；aa16是Lys或Arg；且aa17不存在或是Gln；(c)對(duì)應(yīng)于通式(III)的多肽?；?His-Ser-Asp-aa1-aa2-Phe-Thr-aa3-aa4-Tyr-aa5-Arg-aa6-Arg-Lys-Gln-aa7-Ala-aa8-Lys-Lys-Tyr-Leu-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14-aa15-aa16-Haa-(Laa-Laa-Haa-Haa)n-Laa-Lys(ε-長(zhǎng)?；?-PEG通式(III)其中n＝1-3；Haa是親水性氨基酸；Laa是親脂性氨基酸；?；荂2-16?；?；長(zhǎng)?；荂12-24酰基鏈；aa1是Gly或Ala；aa2是Val、Ile或Leu；aa3是Asp或Arg；aa4是Ser或Asn；aa5是Ser或Thr；aa6是Leu或Tyr；aa7是Met、Leu或Val；aa8是Ala或Val；aa9是Asn、Gln或Ala；aa10是Trp、Ala或Ser；aa11是Ile或Val；aa12是Leu或Lys；aa13是Lys、Arg、Asn或Gly；aa14是Ala或Gly；aa15是Lys或Arg；且aa16是Lys或Arg；和(d)選自SEQIDNO1-SEQIDNO38的多肽。2.權(quán)利要求1的多肽，其中酰基是C4-C8酰基鏈；長(zhǎng)?；荂6-C14酰基鏈；PEG是C2-C20鏈的聚乙二醇鏈。3.一種制備權(quán)利要求1的多肽的方法，所述方法包括通過(guò)向肽鏈上連續(xù)添加受保護(hù)的氨基酸而合成多肽，除去保護(hù)基，脫鹽并純化該多肽。4.一種制備權(quán)利要求1的多肽的方法，所述方法包括表達(dá)編碼所述多肽的基因，并純化表達(dá)的多肽。5.編碼權(quán)利要求1的多肽的表達(dá)載體。6.用權(quán)利要求5的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。7.一種藥物組合物，其含有有效量的權(quán)利要求1的多肽或其可接受的鹽，和至少一種藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。8.權(quán)利要求7的藥物組合物，進(jìn)一步包含有效量的至少一種化合物，該化合物選自胰島素、胰島素類似物、腸降血糖素、腸降血糖素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽類似物、磺酰脲類、雙縮胍類、α-葡糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮類、過(guò)氧化物酶體增生物激活受體(PPAR)激動(dòng)劑、PPAR拮抗劑和PPAR部分激動(dòng)劑。9.一種治療血糖水平升高的方法，該方法包括施用治療有效量的權(quán)利要求1的多肽。10.權(quán)利要求9的方法，進(jìn)一步包括施用治療有效量的至少一種化合物，該化合物選自胰島素、胰島素類似物、腸降血糖素、腸降血糖素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽類似物、磺酰脲類、雙縮胍類、α-葡糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮類、PPAR激動(dòng)劑、PPAR拮抗劑和PPAR部分激動(dòng)劑。11.一種治療糖尿病的方法，該方法包括施用治療有效量的權(quán)利要求1的多肽。12.權(quán)利要求11的方法，其中所述糖尿病是2型糖尿病。13.權(quán)利要求11的方法，進(jìn)一步包括施用治療有效量的至少一種化合物，該化合物選自胰島素、胰島素類似物、腸降血糖素、腸降血糖素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽類似物、磺酰脲類、雙縮胍類、α-葡糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮類、PPAR激動(dòng)劑、PPAR拮抗劑和PPAR部分激動(dòng)劑。14.一種治療胰島素抵抗的方法，該方法包括施用治療有效量的權(quán)利要求1的多肽。15.權(quán)利要求14的方法，進(jìn)一步包括施用治療有效量的至少一種化合物，該化合物選自胰島素、胰島素類似物、腸降血糖素、腸降血糖素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽類似物、磺酰脲類、雙縮胍類、α-葡糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮類、PPAR激動(dòng)劑、PPAR拮抗劑和PPAR部分激動(dòng)劑。16.一種預(yù)防代謝性酸中毒的方法，包括施用治療有效量的權(quán)利要求1的多肽。17.權(quán)利要求16的方法，進(jìn)一步包括施用治療有效量的至少一種化合物，該化合物選自胰島素、胰島素類似物、腸降血糖素、腸降血糖素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽類似物、磺酰脲類、α-葡糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮類、PPAR激動(dòng)劑、PPAR拮抗劑和PPAR部分激動(dòng)劑。18.一種治療肥胖癥的方法，包括施用治療有效量的權(quán)利要求1的多肽。19.權(quán)利要求18的方法，進(jìn)一步包括施用治療有效量的至少一種化合物，該化合物選自胰島素、胰島素類似物、腸降血糖素、腸降血糖素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、毒蜥外泌肽、毒蜥外泌肽類似物、磺酰脲類、雙縮胍類、α-葡糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮類、PPAR激動(dòng)劑、PPAR拮抗劑和PPAR部分激動(dòng)劑。全文摘要本發(fā)明提供了涉及腸血管活性多肽的藥物組合物和治療包括糖尿病、胰島素抵抗、代謝性酸中毒和肥胖癥在內(nèi)的代謝紊亂的方法。也公開了使用腸血管活性多肽組合物的方法。文檔編號(hào)A61K38/12GK101056647SQ200580039056公開日2007年10月17日申請(qǐng)日期2005年10月7日優(yōu)先權(quán)日2004年10月8日發(fā)明者J·內(nèi)斯特申請(qǐng)人:福布斯梅迪泰克(研究)公司