專(zhuān)利名稱(chēng)：通過(guò)過(guò)敏反應(yīng)疫苗的粘膜給藥預(yù)防性治療過(guò)敏反應(yīng)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在對(duì)象體內(nèi)預(yù)防性治療對(duì)過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)的方法，包括在對(duì)象的粘膜表面施用過(guò)敏反應(yīng)疫苗。
背景技術(shù)：
過(guò)敏反應(yīng)是采用西方生活方式國(guó)家的主要健康問(wèn)題。另外，過(guò)敏性疾病的流行在這些國(guó)家日益增加。盡管一般來(lái)說(shuō)，過(guò)敏反應(yīng)不被認(rèn)為是危險(xiǎn)生命的疾病，但每年哮喘會(huì)導(dǎo)致大量的死亡。青少年中大約30％的異常的流行，導(dǎo)致了生活質(zhì)量，工作日和金錢(qián)的顯著降低，并且在西方世界構(gòu)成了健康問(wèn)題的主要類(lèi)型。
過(guò)敏反應(yīng)是復(fù)雜的疾病。由多種因素造成了過(guò)敏事件，其中包括由若干種基因之間尚未充分了解的相互影響所決定的個(gè)體的易感性。另一個(gè)重要因素是接觸超過(guò)某種閾值的過(guò)敏原。在致敏過(guò)程中有若干環(huán)境因素可能是重要的，包括污染、兒童感染、寄生蟲(chóng)感染、腸道微生物等。一旦個(gè)體被致敏，并且建立了過(guò)敏免疫反應(yīng)，只是少量過(guò)敏原的存在就能有效轉(zhuǎn)變?yōu)榘Y狀。
過(guò)敏性疾病的天然過(guò)程通常伴隨著在兩種水平上的加重。首先是癥狀的發(fā)展和疾病的嚴(yán)重性，以及疾病的發(fā)展，例如，從花粉熱轉(zhuǎn)變成哮喘。其次，入侵的過(guò)敏原的傳播最常見(jiàn)的是導(dǎo)致過(guò)敏性多種反應(yīng)。慢性炎癥導(dǎo)致粘膜防御機(jī)制的總體削弱，導(dǎo)致了非特異性刺激，并最終破壞所述粘膜組織。因而可能主要因?yàn)槭称?，即乳制品而過(guò)敏，導(dǎo)致濕疹或腸胃失調(diào)；不過(guò)，最常見(jiàn)的是它們自發(fā)地出現(xiàn)上述癥狀。所述嬰兒在它們的生活中隨后會(huì)發(fā)生吸入過(guò)敏反應(yīng)的危險(xiǎn)。
最重要的過(guò)敏原來(lái)源是我們吸入的空氣中特定大小的最常見(jiàn)的顆粒。所述來(lái)源顯然是普遍的，并且包括青草花粉和房屋塵螨糞便顆粒，它們共造成了所有過(guò)敏反應(yīng)的大約50％。具有全球性重要性的還包括動(dòng)物毛屑，即貓和狗毛屑，其他花粉，如野艾花粉，以及微型真菌，如鏈格孢屬。在區(qū)域基礎(chǔ)上，還有其他花粉起著支配作用，如北歐和中歐的樺樹(shù)花粉，美國(guó)東部和中部的豚草，以及日本的日本雪松花粉。昆蟲(chóng)，即蜜蜂和黃蜂毒液，以及食品各自占所有過(guò)敏反應(yīng)的大約2％。
過(guò)敏反應(yīng)，即I型超敏反應(yīng)是由對(duì)外源非致病物質(zhì)的不適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)引起的。過(guò)敏反應(yīng)的重要的臨床表現(xiàn)包括哮喘、花粉熱、濕疹、胃腸道失調(diào)。過(guò)敏反應(yīng)在接觸入侵的過(guò)敏原時(shí)迅速發(fā)生，并且在20分鐘之內(nèi)達(dá)到高峰。另外，過(guò)敏反應(yīng)是特異性的，即特定的個(gè)體對(duì)特定的過(guò)敏原敏感，而所述個(gè)體不一定對(duì)已知會(huì)導(dǎo)致過(guò)敏性疾病的其他物質(zhì)產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。過(guò)敏現(xiàn)象的特征是目標(biāo)器官的粘膜的顯著發(fā)炎，以及IgE類(lèi)型的過(guò)敏原特異性抗體在循環(huán)系統(tǒng)中以及在肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面上的存在。
過(guò)敏攻擊是由外源過(guò)敏原與過(guò)敏原特異性IgE抗體起反應(yīng)引起的，此時(shí)所述抗體以高的親和力與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面上的IgE特異性受體結(jié)合。所述肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞包括預(yù)形成的介體，即組胺、類(lèi)胰蛋白酶和其他物質(zhì)，它們是在兩種或兩種以上受體結(jié)合的IgE抗體交聯(lián)時(shí)釋放的。IgE抗體是通過(guò)一個(gè)過(guò)敏原分子的同時(shí)結(jié)合交聯(lián)的。因此，遵循只有一個(gè)抗體結(jié)合表位的外源物質(zhì)不會(huì)引起過(guò)敏反應(yīng)的原則。結(jié)合在肥大細(xì)胞表面上的IgE的受體的交聯(lián)，還導(dǎo)致了負(fù)責(zé)將嗜酸性粒細(xì)胞，過(guò)敏原特異性T-細(xì)胞，和其他類(lèi)型的細(xì)胞吸引到過(guò)敏反應(yīng)部位的信號(hào)傳導(dǎo)分子的釋放。所述細(xì)胞與過(guò)敏原，IgE和效應(yīng)細(xì)胞相互作用，導(dǎo)致在接觸過(guò)敏原之后12-24小時(shí)再次出現(xiàn)過(guò)敏癥狀(后期反應(yīng))。
過(guò)敏性疾病控制包括診斷和治療，包括預(yù)防治療。過(guò)敏反應(yīng)的診斷涉及驗(yàn)證過(guò)敏原特異性IgE和確定過(guò)敏原來(lái)源。在很多情況下，認(rèn)真的既往病歷就足以診斷過(guò)敏反應(yīng)，并且確定入侵的過(guò)敏原來(lái)源材料。不過(guò)，最常見(jiàn)的是，診斷是通過(guò)客觀測(cè)定，如皮膚穿刺試驗(yàn)、驗(yàn)血或誘發(fā)試驗(yàn)支持的。
治療選項(xiàng)分為三種主要類(lèi)型。第一種可能是避開(kāi)過(guò)敏原或減少接觸。而避免過(guò)敏原是顯而易見(jiàn)的，例如，對(duì)于食物過(guò)敏原來(lái)說(shuō)就是如此。但也可能是困難的或昂貴的，如對(duì)于房屋塵螨過(guò)敏原來(lái)說(shuō)，或它也許是不可行的，如對(duì)于花粉過(guò)敏原來(lái)說(shuō)。第二種和最廣泛使用的治療方法是開(kāi)處典型的對(duì)癥治療藥物，如抗-組胺和類(lèi)固醇。對(duì)癥治療藥物是安全的和有效的；不過(guò)它們不會(huì)改變有關(guān)疾病的天然病因，也不能控制疾病傳播。第三種治療方案是特異性過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種，在大部分情況下，這樣做可以減輕或緩解由相關(guān)過(guò)敏原引起的過(guò)敏癥狀。
傳統(tǒng)的特異性過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種是過(guò)敏性疾病的病因療法。它能干擾基礎(chǔ)免疫機(jī)制，導(dǎo)致患者免疫狀態(tài)的持久性改善。因此，特異性過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種的保護(hù)作用延長(zhǎng)到超過(guò)治療時(shí)間，與對(duì)癥藥物治療相反。某些接受治療的患者被治愈了，另外，大部分患者經(jīng)歷了疾病嚴(yán)重程度和所經(jīng)歷癥狀的緩解，或至少抑制了疾病的發(fā)展。因此，特定的過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種具有預(yù)防作用，能降低干草熱發(fā)展成哮喘的風(fēng)險(xiǎn)，并且降低了出現(xiàn)新的過(guò)敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。
尚不了解支持成功的過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種的免疫學(xué)機(jī)制的細(xì)節(jié)。已知，特異性免疫反應(yīng)，如抗特定病原體的抗體的產(chǎn)生是適應(yīng)性免疫反應(yīng)。這種反應(yīng)有別于先天性免疫反應(yīng)，先天性免疫反應(yīng)是針對(duì)病原體的非特異性反應(yīng)。過(guò)敏反應(yīng)疫苗致力于解決適應(yīng)性免疫反應(yīng)的問(wèn)題，它包括具有抗原特異性的細(xì)胞和分子，如T-細(xì)胞和產(chǎn)生抗體的B-細(xì)胞。如果沒(méi)有具有相應(yīng)特異性的T-細(xì)胞的幫助的話，B-細(xì)胞不能成熟為能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞。參與過(guò)敏性免疫反應(yīng)攻擊的T-細(xì)胞主要是Th2型的。業(yè)已提出了Th1和Th2細(xì)胞之間新的平衡的建立對(duì)于特異性過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種的免疫學(xué)機(jī)制來(lái)說(shuō)是有利的和重要的。這是否是通過(guò)Th2細(xì)胞減少，從Th2到Th1細(xì)胞的偏移，或Th1細(xì)胞的上調(diào)所引起的是可疑的。最近，業(yè)已提出了調(diào)控T-細(xì)胞對(duì)過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種的機(jī)制來(lái)說(shuō)是重要的。根據(jù)這種模型調(diào)控T-細(xì)胞，即Th3或Tr1細(xì)胞，下調(diào)了具有相應(yīng)的抗原特異性的Th1和Th2細(xì)胞。盡管存在這些不確定性，但一般認(rèn)為活性疫苗必須具備刺激過(guò)敏原特異性T-細(xì)胞，優(yōu)選TH1細(xì)胞的能力。
盡管具備優(yōu)點(diǎn)，特異的過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種并沒(méi)有廣泛使用，這主要是由于兩個(gè)原因。一個(gè)原因是，與傳統(tǒng)疫苗接種方案相關(guān)的不方便性，該方案包括重復(fù)的疫苗接種，即在幾個(gè)月時(shí)間內(nèi)進(jìn)行注射。另一個(gè)更重要的原因是，出現(xiàn)過(guò)敏副反應(yīng)的危險(xiǎn)。針對(duì)感染物的普通疫苗接種是通過(guò)一次或幾次大劑量免疫接種有效進(jìn)行的。不過(guò)，這種方法不能用于過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種，因?yàn)闃I(yè)已發(fā)生了病理性免疫反應(yīng)。
因此，常規(guī)特異性過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種是通過(guò)在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)多次皮下免疫接種進(jìn)行的。這一過(guò)程可以分成兩個(gè)階段，加大劑量階段和維持階段。在加大劑量階段，從小的劑量開(kāi)始，增加接種劑量，通常持續(xù)16周時(shí)間。當(dāng)達(dá)到推薦的維持劑量時(shí)，在維持階段采用該劑量。通常每六周注射一次。在每次注射之后，患者必須接受30分鐘的醫(yī)療看護(hù)，因?yàn)榇嬖谶^(guò)敏性副反應(yīng)的危險(xiǎn)，盡管極為罕見(jiàn)，但原則上這種副反應(yīng)可能威脅生命。另外，診所的裝備應(yīng)當(dāng)能支持急診處理。毫無(wú)疑問(wèn)的是，基于不同施用途徑的疫苗可以消除或減少現(xiàn)有基于皮下注射疫苗所固有的過(guò)敏性副反應(yīng)，以及有利于更廣泛的使用，甚至能夠在家中進(jìn)行自我疫苗接種。
改善特異性過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種的嘗試業(yè)已進(jìn)行了30年以上，并且包括各種各樣的方法。已有若干種方法通過(guò)改變IgE反應(yīng)性集中在過(guò)敏原本身。
Fanta等(Int.Arch.Allergy Immunol，1999，120218-224)涉及在青草花粉過(guò)敏性患者組內(nèi)通過(guò)SLIT誘導(dǎo)的免疫學(xué)變化的研究，所述患者是按照以下標(biāo)準(zhǔn)選擇的在青草花粉散粉季節(jié)具有臨床癥狀(鼻炎和/或季節(jié)性支氣管哮喘)，對(duì)青草花粉提取物表現(xiàn)出陽(yáng)性皮膚單刺試驗(yàn)，和對(duì)青草花粉的特異性IgE，這是通過(guò)RAST-CAP確定的。SLIT是通過(guò)舌下給藥施用過(guò)敏原提取物的滴劑進(jìn)行的。
Holt等(“Suppression of IgE responses following inhalationof antigen”，Immunology Today，vol.8，No.1，1987)提到了以下事實(shí)，作為對(duì)接觸吸入的或口鼻滴入的過(guò)敏原的反應(yīng)，在上呼吸道誘導(dǎo)了相應(yīng)于在胃腸道通過(guò)飲食抗原誘導(dǎo)的反應(yīng)的耐受性。
Holt等(“Sublingual allergen administration.I.Selectivesuppression of IgE production in rats by high allergen doses”，Clinical Allergy，1988，Volume 18，pages 229-234)涉及連續(xù)七天對(duì)首次用于實(shí)驗(yàn)的大鼠進(jìn)行過(guò)敏原(卵白蛋白)的舌下給藥，在最后一次舌下給藥5天之后，用卵白蛋白進(jìn)行腸胃外攻擊，結(jié)果表明IgE對(duì)卵白蛋白特異的選擇性抑制作用。據(jù)推測(cè)，所述治療機(jī)制涉及過(guò)敏原-特異性抑制細(xì)胞的攻擊。該文獻(xiàn)還披露了所提出的治療首次用于實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物相關(guān)，并且應(yīng)當(dāng)不同于舌下脫敏方法。
WO 95/17208披露了預(yù)防過(guò)敏性疾病的方法，包括給以前未致敏的對(duì)象施用一定劑量的過(guò)敏原，該劑量能有效誘導(dǎo)過(guò)敏原-特異性T-輔助-1-樣記憶淋巴細(xì)胞的穩(wěn)定群體的建立，所述細(xì)胞能夠抑制過(guò)敏原-特異性T-輔助-2-樣淋巴細(xì)胞的活性。所述要治療的對(duì)象優(yōu)選3個(gè)月至7歲大。例如，作為過(guò)敏原可以是屋塵螨，青草花粉和樹(shù)木花粉。所述過(guò)敏原的給藥可以通過(guò)口腔，鼻內(nèi)，口鼻，直腸，真皮內(nèi)，肌內(nèi)或皮下途徑進(jìn)行。
例如，主頁(yè)www.immunetolerance.org(2004年10月11日)上披露了沒(méi)有對(duì)吸入劑致敏的兒童的預(yù)防性治療的有計(jì)劃的臨床研究，其中，給所述兒童施用含有任意過(guò)敏原(屋塵螨、梯牧草和貓)的舌下滴劑，并且其中，所述兒童在隨后三年出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)。該研究招募的所述兒童具有特應(yīng)性皮炎或食物過(guò)敏反應(yīng)病史，并且他們的生物學(xué)母親或父親或一個(gè)同胞具有特異反應(yīng)性病史。
本發(fā)明的目的是提供預(yù)防性治療個(gè)體，特別是兒童的改進(jìn)方法。
發(fā)明概述通過(guò)本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了這一目的，本發(fā)明涉及在對(duì)象體內(nèi)預(yù)防性治療對(duì)過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)的方法，包括在對(duì)象的粘膜表面施用包括所述過(guò)敏原作為活性物質(zhì)的過(guò)敏反應(yīng)疫苗，a)其中，所述要治療的對(duì)象被致敏，以便表現(xiàn)出對(duì)所述過(guò)敏原特異的IgE反應(yīng)，b)其中，所述要治療的對(duì)象沒(méi)有所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的臨床癥狀，和c)其中，所述預(yù)防性治療的目的是預(yù)防或減輕所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的隨后的臨床癥狀。
本發(fā)明基于以下新的發(fā)現(xiàn)，可以預(yù)防在個(gè)體中出現(xiàn)對(duì)所述過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)癥狀，所述個(gè)體的免疫系統(tǒng)業(yè)已接觸了過(guò)敏原，但其中，所述免疫反應(yīng)還沒(méi)有發(fā)展到與臨床癥狀，如鼻炎、結(jié)膜炎、鼻漏、鼻塞、鼻竇炎、噴嚏、特應(yīng)性皮炎、瘙癢、流淚、流鼻涕、喘鳴和皮膚刺激相關(guān)的狀態(tài)。迄今為止一直相信為了獲得過(guò)敏反應(yīng)的有效的預(yù)防性治療，要治療的個(gè)體應(yīng)當(dāng)沒(méi)有被致敏。另外，迄今為止一直相信與預(yù)防過(guò)敏反應(yīng)相關(guān)的機(jī)制是誘導(dǎo)與通過(guò)飲食抗原在胃腸道誘導(dǎo)的反應(yīng)相應(yīng)的口腔耐受性的誘導(dǎo)。不過(guò)，根據(jù)本發(fā)明，已令人吃驚地證實(shí)，通過(guò)治療業(yè)已致敏，但尚未表現(xiàn)出任何臨床癥狀的個(gè)體可以獲得預(yù)防效果。據(jù)信，獲得的預(yù)防效果通過(guò)某種機(jī)制起作用，該機(jī)制與在特異性過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種(免疫療法)中發(fā)生的脫敏的機(jī)制部分或完全相似。
還相信，在致敏之后在免疫系統(tǒng)反應(yīng)開(kāi)始進(jìn)一步向過(guò)敏性Th2細(xì)胞反應(yīng)發(fā)展之前盡可能快地進(jìn)行預(yù)防性治療是最有效的。換句話說(shuō)，在兒童業(yè)已接觸過(guò)敏原之后在它們盡可能小的時(shí)候進(jìn)行治療一般是有利的。另外，據(jù)信，由于早期預(yù)防性治療的效果，治療能夠以更小的劑量更少的施用次數(shù)和/或更短的治療時(shí)間進(jìn)行，以上比較是相對(duì)出現(xiàn)了臨床癥狀的成年人特異性過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種而言的。由于預(yù)防性治療方法的柔和性，它適用于所有兒童或大型特定兒童群體的一般性疫苗接種方法。
本發(fā)明方法的其他優(yōu)點(diǎn)是致敏個(gè)體是最可能出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)的個(gè)體，因此致敏的個(gè)體構(gòu)成了進(jìn)行預(yù)防性治療的最相關(guān)的人群。
本發(fā)明還涉及將過(guò)敏原用于生產(chǎn)用來(lái)在對(duì)象體內(nèi)預(yù)防性治療過(guò)敏反應(yīng)的粘膜疫苗的用途，a)其中，所述要治療的對(duì)象被致敏，以便表現(xiàn)出對(duì)所述過(guò)敏原特異的IgE反應(yīng)，b)其中，所述要治療的對(duì)象沒(méi)有所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的臨床癥狀，和c)其中，所述預(yù)防性治療的目的是預(yù)防或減輕所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的隨后的臨床癥狀。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1A表示用5000 SQ Phl p或緩沖液鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠臨床資料(打噴嚏次數(shù))。
圖1B表示用5000 SQ Phl p或緩沖液鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠體內(nèi)血清IgE水平。
圖1C表示用5000 SQ Phl p或緩沖液鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠體內(nèi)BALIgE水平。
圖1D表示用5000 SQ Phl p或緩沖液鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠體內(nèi)NALIgE水平。
圖1E表示用5000 SQ Phl p或緩沖液鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠體內(nèi)NAL嗜酸性粒細(xì)胞水平。
圖2A表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的的致敏小鼠的臨床資料(打噴嚏次數(shù))。
圖2B表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠對(duì)醋甲膽堿攻擊的反應(yīng)(通過(guò)Penh值衡量)的呼吸道過(guò)敏反應(yīng)。
圖3A表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠體內(nèi)血清IgE水平。
圖3B表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠體內(nèi)血清IgG1水平。
圖4A表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠體內(nèi)BAL IgE水平。
圖4B表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠體內(nèi)NAL IgE水平。
圖4C表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠體內(nèi)BAL IgA水平。
圖4D表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠體內(nèi)NAL IgA水平。
圖5A表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠的BAL嗜酸性粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶水平。
圖5B表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠的NAL嗜酸性粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶水平。
圖6A表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠脾臟中的T細(xì)胞增殖。
圖6B表示進(jìn)行SLIT或緩沖液處理，并且用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊的致敏小鼠淋巴結(jié)(LN)細(xì)胞內(nèi)的T細(xì)胞增殖。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明過(guò)敏原本發(fā)明制劑的過(guò)敏原可以是業(yè)已報(bào)導(dǎo)了在反復(fù)接觸個(gè)體時(shí)能夠誘導(dǎo)過(guò)敏性，即IgE介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng)的任何天然存在的蛋白。天然存在的過(guò)敏原的例子包括花粉過(guò)敏原(樹(shù)木、藥草、雜草和青草花粉過(guò)敏原)，昆蟲(chóng)過(guò)敏原(吸入劑、唾液和毒液過(guò)敏原，例如，螨蟲(chóng)過(guò)敏原、蟑螂和蠓過(guò)敏原、膜翅目昆蟲(chóng)(hymenopthera)毒液過(guò)敏原)，動(dòng)物毛發(fā)和皮屑過(guò)敏原(例如，來(lái)自狗、貓、馬、大鼠、小鼠等)，以及食物過(guò)敏原。來(lái)自樹(shù)木、草類(lèi)和藥草的花粉過(guò)敏原是來(lái)自分類(lèi)學(xué)上以下目的植物山毛櫸目、油橄欖目(Oleales)、松目和懸鈴木科，包括樺樹(shù)(樺屬)、榿木(赤楊)、榛木(榛屬)、鵝耳櫪屬(CarpInus)和橄欖(Olea)、雪松(柳杉屬和檜屬)、懸鈴木(法國(guó)梧桐)、禾本目(Poales)包括黑麥草屬、梯牧草屬、早熟禾屬、絆根草屬、貓尾草、絨毛草屬、虉草屬、喬麥和高粱屬、菊目和蕁麻目包括豚草屬、蒿屬、和墻草屬的藥草。其他重要的吸入性過(guò)敏原是來(lái)自以下屬的家庭塵螨表皮螨屬和歐螨屬、儲(chǔ)螨屬，例如，LepIdoglyphys，食甜螨屬和食酪螨屬，來(lái)自蟑螂、蠓和跳蚤的過(guò)敏原，例如，小蠊屬、大蠊屬、搖蚊屬和Ctenocepphalides，以及來(lái)自哺乳動(dòng)物，如貓、狗和馬的過(guò)敏原、毒液過(guò)敏原，包括如來(lái)自螫咬或叮咬昆蟲(chóng)，如來(lái)自分類(lèi)學(xué)上的膜翅目，包括蜜蜂(總科蜜蜂科)、黃蜂(總科黃蜂科)和螞蟻(總科蟻科)的過(guò)敏原。來(lái)自真菌的重要的吸入過(guò)敏原，如來(lái)自支鏈孢屬和枝孢菌屬的過(guò)敏原。
在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，所述過(guò)敏原是Bet v 1、Aln g 1、Cor a 1和Car b 1、Que a 1、Cry j 1、Cry j 2、Cup a 1、Cup s 1、Jun a 1、Jun a 2、jun a 3、Ole e 1、Lig v 1、Pla l 1、Pla a 2、Amb a 1、Amb a 2、Amb t 5、Art v 1、Art v 2 Par j 1、Par j 2、Par j 3、Sal k 1、Ave e 1、Cyn d 1、Cyn d 7、Dac g 1、Fes p 1、Hol l 1、Lol p 1 and 5、Pha a 1、Pas n 1、Phl p 1、Phl p 5、Phl p 6、Poa p 1、Poa p 5、Sec c 1、Sec c 5、Sor h 1、Der f 1、Der f 2、Der p 1、Der p 2、Der p 7、Der m 1、Eur m 2、Gly d 1、Lep d 2、Blo t 1、Tyr p 2、Bla g 1、Bla g 2、Per a 1、Fel d 1、Can f 1、Can f 2、Bos d 2、Equ c 1、Equ c 2、Equ c 3、Mus m 1、Rat n 1、ApIs m 1、ApI m 2、Ves v 1、Ves v 2、Ves v 5、Dol m1、Dil m 2、Dol m 5、Pol a 1、Pol a 2、Pol a 5、Sol i 1、Soli 2、Sol i 3和Sol i 4、Alt a 1、CIa h 1、Asp f 1、Bos d 4、Mal d 1、Gly m 1、Gly m 2、Gly m 3、Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3、Ara h 4、Ara h 5或來(lái)自上述任意一種的分子繁殖的改組子(shufflant)雜合體。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述過(guò)敏原選自下列一組樹(shù)木花粉過(guò)敏原、青草花粉過(guò)敏原、藥草過(guò)敏原和動(dòng)物過(guò)敏原，優(yōu)選所述過(guò)敏原選自青草花粉過(guò)敏原、塵螨過(guò)敏原、豚草屬過(guò)敏原、雪松花粉、貓過(guò)敏原和樺樹(shù)過(guò)敏原。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，所述制劑包括至少兩種不同類(lèi)型的過(guò)敏原，所述過(guò)敏原來(lái)自相同的過(guò)敏原來(lái)源或來(lái)自不同的過(guò)敏原來(lái)源，例如，1型和5型草類(lèi)過(guò)敏原，或1型和2型螨蟲(chóng)過(guò)敏原，分別來(lái)自不同的螨蟲(chóng)和草類(lèi)，雜草抗原，如矮小和巨大豚草屬過(guò)敏原，不同的真菌過(guò)敏原，如支鏈孢屬和枝孢菌屬、樹(shù)木過(guò)敏原、如樺樹(shù)、榛木、鵝耳櫪、橡樹(shù)和赤楊過(guò)敏原，食物過(guò)敏原，如花生、大豆和牛奶過(guò)敏原。
摻入所述制劑中的過(guò)敏原可以是提取物形式的，純化的過(guò)敏原，改性的過(guò)敏原，重組過(guò)敏原或重組過(guò)敏原的突變體。過(guò)敏原提取物可天然含有相同過(guò)敏原的一種或多種異構(gòu)型，而重組過(guò)敏原通常只代表過(guò)敏原的一種異構(gòu)型。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述過(guò)敏原是提取物形式的。在另一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述過(guò)敏原是重組過(guò)敏原。在另一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述過(guò)敏原是天然存在的低IgE-結(jié)合變體或重組低IgE-結(jié)合變體。
過(guò)敏原能夠以相同的摩爾數(shù)量存在或所存在的過(guò)敏原的比例可以優(yōu)選波動(dòng)到1∶20。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，所述低IgE結(jié)合過(guò)敏原是如WO99/47680，WO 02/40676或WO 03/096869 A2所述的過(guò)敏原。
預(yù)防性治療從本世紀(jì)開(kāi)始業(yè)已將特異性過(guò)敏反應(yīng)疫苗接種(SAV)，以前稱(chēng)之為特異性免疫治療或脫敏作用，用于治療1型IgE介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病。
通過(guò)SAV獲得的一般性優(yōu)點(diǎn)包括a)減輕過(guò)敏性癥狀和醫(yī)療消費(fèi)，b)在眼睛，鼻子和肺中改善對(duì)所述過(guò)敏原的耐受性和c)減輕皮膚反應(yīng)性(早期和晚期反應(yīng))。
通過(guò)SAV獲得的改善的根本機(jī)制尚不了解，不過(guò)，可以從在過(guò)去十年中進(jìn)行的多項(xiàng)SAV研究中提取出多項(xiàng)共同特征1)在治療期間總的IgE數(shù)量沒(méi)有改變，2)在加大劑量期間，過(guò)敏原特異性IgE的數(shù)量短時(shí)間增加，然后又回落到起始(預(yù)處理)水平，3)IgE的表位特異性和親和力保持不變，4)過(guò)敏原特異性IgG，特別是IgG4，在SAV期間快速升高，5)表面上啟動(dòng)了新的Th0/1/Reg反應(yīng)和6)Th2反應(yīng)似乎沒(méi)有改變。在由SAV誘導(dǎo)的作用和特異性IgG發(fā)作之間沒(méi)有相關(guān)性。
SAV誘導(dǎo)了新的免疫反應(yīng)，它在治療期間成熟(募集了Th0/1 T-細(xì)胞，啟動(dòng)了過(guò)敏原特異性IgX(X可能是A1，A2，G1，G2，G3，G4，M或D))。作為新的抗體反應(yīng)的親和力(或數(shù)量/親和力)，IgX業(yè)已成熟，IgX可能與IgE有效競(jìng)爭(zhēng)所述過(guò)敏原，抑制″正?！錞h2型過(guò)敏性反應(yīng)，以肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面上的受體結(jié)合的IgE的交聯(lián)為特征。因此，臨床癥狀會(huì)逐漸減輕。
據(jù)信，本發(fā)明中進(jìn)行的預(yù)防性治療至少能在某種程度上通過(guò)與上文所述SAV相同的機(jī)制起作用。
要施用所述過(guò)敏反應(yīng)疫苗的粘膜可以是任何合適的粘膜，并且給藥途徑包括口腔(通過(guò)消化系統(tǒng)粘膜)、鼻腔、陰道、舌下、眼睛、直腸、尿道、乳腺內(nèi)、肺、耳內(nèi)(即通過(guò)耳朵)和含服給藥，優(yōu)選含服或舌下給藥(口腔粘膜給藥)。所述過(guò)敏反應(yīng)疫苗可以是噴霧劑、氣溶膠、混合物、懸浮液、分散液、乳液、凝膠、糊劑、糖漿、乳膏、油膏、植入物(耳朵、眼睛、皮膚、鼻子、直腸、和陰道)、乳房?jī)?nèi)制劑、陰道托(vagitories)、栓劑、或子宮托(uteritories)形式的。
據(jù)推測(cè)，優(yōu)選通過(guò)粘膜進(jìn)行疫苗的粘膜給藥，所述粘膜自然接觸抗原制劑。因此，對(duì)于氣載粘膜抗原制劑的過(guò)敏反應(yīng)來(lái)說(shuō)，優(yōu)選通過(guò)呼吸系統(tǒng)給藥，優(yōu)選口腔粘膜給藥。相應(yīng)地，對(duì)于粘膜抗原制劑的過(guò)敏反應(yīng)來(lái)說(shuō)，它要與消化系統(tǒng)的粘膜接觸，優(yōu)選采用口腔給藥。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，所述對(duì)象接受了疫苗接種方案，包括每天施用所述疫苗。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，所述疫苗接種方案包括每?jī)商?，每三天，或每四天施用一次疫苗。例如，所述疫苗接種方案包括施用所述疫苗超過(guò)4周，優(yōu)選超過(guò)8周，更優(yōu)選超過(guò)12周，更優(yōu)選超過(guò)16周，更優(yōu)選超過(guò)20周，更優(yōu)選超過(guò)24周，更優(yōu)選超過(guò)30周，最優(yōu)選超過(guò)36周。
給藥時(shí)間可以是連續(xù)時(shí)間。或者，給藥時(shí)間是由一個(gè)或多個(gè)不給藥期打斷的不連續(xù)的時(shí)間。優(yōu)選的是，不給藥的(總)時(shí)間比給藥的(總)時(shí)間短。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，每天給受試個(gè)體施用一次疫苗?；蛘撸刻旖o所述受試個(gè)體施用兩次疫苗。所述疫苗可以是單一劑量的疫苗。
口腔粘膜給藥口腔粘膜給藥可以用任何現(xiàn)有的口腔粘膜給藥制劑，包括溶液，懸浮液，快速分散劑型，滴劑和錠劑進(jìn)行。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，采用了舌下免疫療法(SLIT)，在這種情況下，快速分散劑型，滴劑和錠劑是優(yōu)選的制劑。
快速分散劑型的例子可以參見(jiàn)US-A-5,648,093，WO 00/51568，WO 02/13858，WO99/21579，WO 00/44351，US-A-4,371,516和EP-278877，以及待審批的DK PA 2003 00279和DK PA 2003 00318，都是以受讓人ALK-AbellóA/S的名義申請(qǐng)的。優(yōu)選的快速分散劑型是通過(guò)冷凍干燥生產(chǎn)的。生產(chǎn)制劑的優(yōu)選的基質(zhì)是魚(yú)明膠和改性淀粉。
典型的增量劑量減敏作用可用于本發(fā)明，其中，將快速分散固體劑型形式的過(guò)敏原的劑量加大到某一最大限度。所述劑型的單位劑量的優(yōu)選效力為150-1000000SQ-u/劑型，更優(yōu)選的效力為500-500000SQ-u/劑型，更優(yōu)選的效力為1000-250000SQ-u/劑型，更優(yōu)選1500-125000SQ-u/劑型，最優(yōu)選1500-75000SQ-u/劑型。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，所述劑型是重復(fù)的單一劑量，優(yōu)選在1500-75000SQ-u/劑型范圍內(nèi)。
致敏要治療的對(duì)象被致敏，以便表現(xiàn)出對(duì)所施用過(guò)敏原特異的IgE反應(yīng)。在本發(fā)明中，短語(yǔ)“表現(xiàn)出對(duì)所述過(guò)敏原特異的IgE反應(yīng)”表示在至少一種免疫測(cè)定中可檢測(cè)到的過(guò)敏原-特異性IgE抗體水平。所述過(guò)敏原-特異性IgE抗體的檢測(cè)可以用任何常規(guī)免疫測(cè)定方法進(jìn)行，例如，參見(jiàn)WO 94/11734和WO 99/67642。
在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，進(jìn)一步對(duì)所述對(duì)象進(jìn)行致敏，以便表現(xiàn)出對(duì)所述過(guò)敏原特異的Th2細(xì)胞反應(yīng)。
在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，進(jìn)一步對(duì)所述對(duì)象進(jìn)行致敏，以便在皮膚單刺試驗(yàn)(SPT)中表現(xiàn)出陽(yáng)性過(guò)敏原-特異性反應(yīng)。
在本發(fā)明的其他具體實(shí)施方案中，所述對(duì)象的年齡小于40歲，優(yōu)選小于30歲，更優(yōu)選小于20歲，最優(yōu)選為2-10歲。
臨床癥狀要治療的對(duì)象沒(méi)有所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的臨床癥狀。
所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的臨床癥狀可以是任何常見(jiàn)癥狀，包括鼻炎、結(jié)膜炎、鼻漏、鼻塞、鼻竇炎、噴嚏、特應(yīng)性皮炎、瘙癢、流淚、流鼻涕、喘鳴和皮膚刺激。
有多種因素是發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)的指標(biāo)，隨后在生命中表現(xiàn)出臨床癥狀。表現(xiàn)出一種或多種這些指示因素的以下對(duì)象被稱(chēng)作高危對(duì)象。高危對(duì)象的指示因素是與除了疫苗的過(guò)敏原以外的一種或多種過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的臨床癥狀。高危對(duì)象的其他指示因素是在父母或祖父母之一或兩者或在一個(gè)或多個(gè)同胞兄妹中存在一種或多種過(guò)敏反應(yīng)。本發(fā)明的預(yù)防性治療特別適用于高危對(duì)象。不過(guò)，要治療的對(duì)象還可以是沒(méi)有表現(xiàn)出高危對(duì)象的指示因素的對(duì)象，例如，沒(méi)有對(duì)其他過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)的臨床癥狀。
過(guò)敏反應(yīng)疫苗的制備用于本發(fā)明方法中的過(guò)敏反應(yīng)疫苗可以是適合粘膜表面施用的任何制劑形式，包括噴霧劑、氣溶膠、混合物、片劑(腸溶和非腸溶片劑)、膠囊(硬質(zhì)和軟質(zhì)、腸溶和非腸溶)、懸浮液、分散液、顆粒、粉末、溶液、乳液、咀嚼片劑、滴劑、凝膠、糊劑、糖漿、乳膏、錠劑(粉末、顆粒、片劑)、快速分散片劑、滴注液體、氣體、蒸汽、油膏、條狀物、植入物(耳朵、眼睛、皮膚、鼻子、直腸和陰道)、乳房?jī)?nèi)制劑、陰道托、栓劑、或子宮托。
應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的制劑還包括適合所述制劑類(lèi)型的其他佐劑和其他賦形劑。所述其他佐劑和賦形劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，并且包括，例如，溶劑、乳化劑、濕潤(rùn)劑、增塑劑、著色物質(zhì)、填料、防腐劑、黏度調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、和粘膜黏性物質(zhì)等。配制方法的例子為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。
佐劑所述粘膜過(guò)敏反應(yīng)疫苗可以包括佐劑，它可以是任何常規(guī)佐劑，包括含氧金屬鹽，熱不穩(wěn)定性腸毒素(LT)，霍亂毒素(CT)，霍亂毒素B亞基(CTB)，聚合化脂質(zhì)體，突變型毒素，例如，LTK63和LTR72，微囊劑，白細(xì)胞介素(例如，IL-1β、IL-2、IL-7、IL-12、INFγ)，GM-CSF、MDF衍生物、CpG寡核苷酸、LPS、MPL、phosphophazenes、Adju-Phos、葡聚糖、抗原制劑、脂質(zhì)體、DDE、DHEA、DMPC、DMPG、DOC/明礬復(fù)合物、弗氏不完全佐劑、ISCOMs、LT Oral佐劑、胞壁酰二肽、單磷酰脂質(zhì)A、胞壁酰三肽、和磷脂酰乙醇胺。
所述含氧金屬鹽可以是任何含氧金屬鹽，只要能提供需要的效果即可。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述含氧金屬鹽的金屬陽(yáng)離子選自下列一組Al、K、Ca、Mg、Zn、Ba、Na、Li、B、Be、Fe、Si、Co、Cu、Ni、Ag、Au和Cr。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述含氧金屬鹽的金屬陰離子選自下列一組硫酸鹽、氫氧化物、磷酸鹽、硝酸鹽、碘酸鹽、溴酸鹽、碳酸鹽、水合物、乙酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽和酒石酸鹽，以及它們的混合形式。例子有氫氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁、醋酸鋁、硫酸鋁鉀、磷酸鈣、Maalox(氫氧化鋁和氫氧化鎂的混合物)、氫氧化鈹、氫氧化鋅、碳酸鋅、氯化鋅、和硫酸鋇。
參見(jiàn)WO 04/047794，水溶液或快速分散片劑形式的過(guò)敏反應(yīng)疫苗特別適合含服和舌下給藥。
使用粘膜給藥評(píng)估免疫調(diào)節(jié)治療方法的作用的方法本發(fā)明還涉及在試驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)評(píng)估免疫調(diào)節(jié)治療方法對(duì)過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)的作用的方法，該方法包括以下步驟a)使所述動(dòng)物對(duì)所述過(guò)敏原致敏，b)通過(guò)鼻腔或氣管內(nèi)接觸對(duì)所述動(dòng)物進(jìn)行第一次過(guò)敏原攻擊，c)使用口腔粘膜給藥對(duì)所述動(dòng)物實(shí)施所述治療方法，d)對(duì)生物標(biāo)記的水平進(jìn)行測(cè)量，和e)使用所述測(cè)量結(jié)果評(píng)估所述治療方法的效果。
Herz等(Methods 32(2004)271-280)是一篇綜述性文章，披露了多種動(dòng)物模型。在一種這樣的模型中，參見(jiàn)3.1部分，通過(guò)腹膜內(nèi)注射rBet v 1和用Bet v 1提取物的氣溶膠攻擊使小鼠致敏。然后，通過(guò)注射免疫優(yōu)勢(shì)肽或通過(guò)粘膜施用rBet v 1獲得免疫調(diào)節(jié)作用，這在致敏之前或之后進(jìn)行。鼻內(nèi)或口腔施用rBet v 1導(dǎo)致了所有同種型的過(guò)敏原-特異性抗體水平的抑制作用，減少了IL-4，IL-5和IFN-γ，以及抑制了首次試驗(yàn)動(dòng)物和致敏動(dòng)物的呼吸道炎癥和呼吸道過(guò)敏反應(yīng)。Herz等披露了多種其他模型，參見(jiàn)表2，同樣包括用過(guò)敏原進(jìn)行各種類(lèi)型的腸胃外，鼻內(nèi)和口腔致敏，例如，施用抗體、細(xì)胞因子進(jìn)行攻擊和治療、皮膚試驗(yàn)、組胺釋放、嗜酸性粒細(xì)胞、呼吸道炎癥和T細(xì)胞等等。
本發(fā)明正是基于這樣的任何，可以嘗試將口腔粘膜給藥用在評(píng)估免疫調(diào)節(jié)治療方法在試驗(yàn)動(dòng)物中對(duì)過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)的作用的評(píng)估方法。
本發(fā)明動(dòng)物模型試驗(yàn)方法的原理是，使試驗(yàn)動(dòng)物對(duì)過(guò)敏原致敏，即進(jìn)行處理，以便表現(xiàn)出對(duì)所述過(guò)敏原的過(guò)敏性免疫反應(yīng)，然后用所述過(guò)敏原攻擊，以便誘導(dǎo)過(guò)敏性反應(yīng)，然后可以進(jìn)行測(cè)量和評(píng)估，其中，進(jìn)一步對(duì)所述動(dòng)物實(shí)施治療方法，然后可以研究所述方法對(duì)過(guò)敏性反應(yīng)的影響。
所述試驗(yàn)動(dòng)物可以是通常被用作試驗(yàn)動(dòng)物的任何動(dòng)物，包括嚙齒類(lèi)動(dòng)物，例如，小鼠、大鼠、豚鼠和兔子、豬、狗、貓和猴子。
在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述口腔粘膜給藥是舌下給藥(舌下免疫療法(SLIT))。用于所述治療方法中的所述過(guò)敏原和制劑可以是上面結(jié)合過(guò)敏反應(yīng)的預(yù)防性治療方法所披露的任何過(guò)敏原和制劑。
在進(jìn)行口腔粘膜給藥時(shí)，應(yīng)當(dāng)確保所述制劑能夠在口腔的預(yù)定部位保持預(yù)定時(shí)間。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，可以防止所述試驗(yàn)動(dòng)物吞咽。例如，防止吞咽可以通過(guò)用手固定所述動(dòng)物實(shí)現(xiàn)。例如，對(duì)于嚙齒類(lèi)動(dòng)物來(lái)說(shuō)，可以通過(guò)將頸部皮膚的折紋固定在兩個(gè)手指之間以便緊固頭部周?chē)钠つw防止吞咽。另外，還可以通過(guò)施用麻醉劑防止吞咽，如吸入麻醉劑，例如，乙醚、三氟溴氯乙烷和七氟醚，或注射麻醉劑，例如，芬太尼、氟阿尼酮和咪達(dá)唑侖的混合物，芬太尼、氟阿尼酮和安定的混合物，克他命和美托咪定的混合物，克他命和甲苯噻嗪的混合物，阿替美唑、尿烷和三溴乙醇。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，所述治療方法是在致敏之后并且在第一次過(guò)敏原攻擊之前進(jìn)行的?；蛘?，所述治療方法是在第一次過(guò)敏原攻擊之后進(jìn)行的。在后一種例子中，通過(guò)鼻腔或氣管內(nèi)接觸進(jìn)行的任選的第二次過(guò)敏原攻擊可以在所述治療方法之后進(jìn)行。
在本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述生物標(biāo)記選自下列一組過(guò)敏原-特異性抗體，臨床癥狀和效應(yīng)細(xì)胞。所述抗體可以是任何類(lèi)型，亞型或它們的組合，包括IgA，IgA1，IgA2，IgD，IgE，IgG，IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgM。所述過(guò)敏原的抗體特異性的檢測(cè)是使用任何常規(guī)免疫測(cè)定方法進(jìn)行的，優(yōu)選的免疫測(cè)定方法可以參見(jiàn)WO 94/11734和WO 99/67642。臨床癥狀可以是常用于動(dòng)物模型的任何癥狀，包括打噴嚏次數(shù)，擦鼻子次數(shù)等。例如所述效應(yīng)細(xì)胞可以是選自下列一組嗜酸性粒細(xì)胞，肥大細(xì)胞，嗜堿性粒細(xì)胞，B細(xì)胞，T細(xì)胞，抗原呈遞細(xì)胞(APC’s)以及由上述細(xì)胞衍生的細(xì)胞。在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，效應(yīng)細(xì)胞的水平是通過(guò)測(cè)量效應(yīng)細(xì)胞標(biāo)記的水平測(cè)定的。所述標(biāo)記優(yōu)選選自下列一組分泌分子，表面分子和細(xì)胞內(nèi)分子。優(yōu)選的是，所述分泌分子選自下列一組介體，細(xì)胞因子，細(xì)胞毒性蛋白和可溶性受體。
所述治療方法的效果是根據(jù)上述測(cè)量結(jié)果評(píng)估的，測(cè)量結(jié)果是根據(jù)對(duì)成功治療的免疫反應(yīng)的生物標(biāo)記的表現(xiàn)的一般性科學(xué)認(rèn)識(shí)進(jìn)行的。
定義在本發(fā)明中，使用了以下定義術(shù)語(yǔ)″口腔粘膜給藥″表示將所述劑型放置在舌頭下面或口腔中的任何地方的給藥途徑，使得活性成分與患者口腔或咽喉的粘膜接觸，以便獲得所述活性成分的局部或系統(tǒng)性作用?？谇徽衬そo藥途徑的例子是舌下給藥。
術(shù)語(yǔ)″舌下給藥″表示給藥途徑，其中，將劑型放置在舌頭下面，以便獲得活性成分的局部或系統(tǒng)作用。
術(shù)語(yǔ)″SQ-u″表示SQ-單位SQ-單位是按照ALK-AbellóA/S′s″SQ生物效能″-標(biāo)準(zhǔn)化方法測(cè)定的，其中100,000SQ單位等于標(biāo)準(zhǔn)的皮下維持劑量。通常，1mg的提取物含有100,000-1,000,000SQ-單位，這取決于過(guò)敏原的來(lái)源和所使用的生產(chǎn)方法?？梢酝ㄟ^(guò)免疫測(cè)定確定確切的過(guò)敏原含量，即總的主要過(guò)敏原含量和總的過(guò)敏原活性。
短語(yǔ)“免疫調(diào)節(jié)治療”表示能調(diào)節(jié)接受治療的對(duì)象的免疫反應(yīng)的治療。
具體實(shí)施方案例1SLIT在鼻炎的小鼠模型上的作用基本原理建立了鼻炎模型，以便檢驗(yàn)舌下免疫療法(SLIT)在具有臨床表現(xiàn)的小鼠模型上的作用。
方法動(dòng)物對(duì)6-10周大的雌性BALB/c小鼠進(jìn)行圈養(yǎng)，并且用不含能與梯牧草(Phl p)的抗血清交叉反應(yīng)的成分的特定飲食維持。每一個(gè)實(shí)驗(yàn)組包括8-10只動(dòng)物。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通過(guò)三次腹膜內(nèi)(i.p.)注射吸附在明礬上的Phl p提取物對(duì)小鼠進(jìn)行致敏，然后用Phl p-提取物或緩沖液進(jìn)行舌下治療6-9周時(shí)間。隨后用Phl p-提取物對(duì)小鼠進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊兩周時(shí)間，并且按以下方法分析臨床癥狀。在宰殺放血之后，收集支氣管肺泡液體(BAL)，鼻咽液體(NAL)，脾臟和頸淋巴結(jié)用于分析。
臨床資料噴嚏和擦鼻子在鼻內(nèi)施用Phl之后用10分鐘時(shí)間觀察小鼠，并且統(tǒng)計(jì)打噴嚏次數(shù)和擦鼻子次數(shù)。
呼吸道超敏反應(yīng)采用整個(gè)身體容積描記圖(pletysmograph)，通過(guò)加大氣溶膠化的醋甲膽堿的濃度誘導(dǎo)氣流阻塞。肺氣流阻塞是通過(guò)施用醋甲膽堿之后在6分鐘時(shí)間內(nèi)增強(qiáng)的停頓(penh)測(cè)定的。
IgA分析結(jié)合在山羊抗小鼠IgA上的Estapore磁珠(Estapore IB-MR/0，86)與BAL或NAL一起培養(yǎng)。然后洗滌并且用生物素化的過(guò)敏原培養(yǎng)。然后洗滌并且用抗生物素蛋白鏈菌素標(biāo)記的LITE制劑進(jìn)行培養(yǎng)，并且在洗滌之后，用光度計(jì)(Magic Lite Analyser EQ)測(cè)定發(fā)光。
IgE分析結(jié)合在山羊抗小鼠IgE上的Estapore磁珠(Estapore IB-MR/0，86；A0201)與小鼠血清一起培養(yǎng)。然后洗滌并且用生物素化的過(guò)敏原培養(yǎng)。然后洗滌并且用抗生物素蛋白鏈菌素標(biāo)記的LITE制劑進(jìn)行培養(yǎng)，并且在洗滌之后，用光度計(jì)(Magic Lite Analyser EQ)測(cè)定發(fā)光。
IgG，IgG1和IgG2a分析將Phl p(10μg/ml)提取物添加到ELISA平板的孔中，并且在4-8℃下將所述平板靜置到次日。然后用緩沖液洗滌經(jīng)過(guò)包衣的平板，并且用2％酪蛋白緩沖液在室溫下在振動(dòng)臺(tái)上封閉一小時(shí)。在除去酪蛋白緩沖液之后，將稀釋的血清樣品添加到所述平板上，并且在室溫下在振動(dòng)臺(tái)上培養(yǎng)2小時(shí)。洗滌所述平板，并且將用0.5％BSA緩沖液稀釋的生物素化的兔抗-小鼠IgG/IgG1/IgG2a添加到每一個(gè)孔中，并且在室溫下在振動(dòng)臺(tái)上放置一小時(shí)。在洗滌之后，將稀釋在0.5％BSA緩沖液中的抗生物素蛋白鏈菌素-HRP添加到每一個(gè)孔中，并且在室溫下在振動(dòng)臺(tái)上放置一小時(shí)。用TMP底物(3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺)顯影所述平板20分鐘，然后用0.5M H2SO4終止。所得到的反應(yīng)混合物在450nm的終點(diǎn)下進(jìn)行分光光度計(jì)測(cè)量。
T-細(xì)胞增殖試驗(yàn)將脾臟挑碎成單細(xì)胞懸浮液，并且用培養(yǎng)基洗滌三次。統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)量，并且調(diào)整到1.67×106細(xì)胞/mL。將3×105細(xì)胞添加到96孔平底培養(yǎng)板的每一個(gè)孔中，并且用0，10和40μg/mL Phl p提取物攻擊所述細(xì)胞。在37℃和5％CO2中培養(yǎng)所述細(xì)胞6天時(shí)間，通過(guò)在培養(yǎng)階段的最后18小時(shí)將0.5μCi的3H-胸腺嘧啶添加到每一個(gè)孔中，然后收獲細(xì)胞并且統(tǒng)計(jì)整合的放射性標(biāo)記來(lái)測(cè)量增殖。
結(jié)果鼻炎的誘導(dǎo)從圖1A-E中可以看出，在腹膜內(nèi)注射致敏之后用Phl p提取物(5000SQ/小鼠/天)對(duì)小鼠進(jìn)行鼻內(nèi)(IN)攻擊兩周表現(xiàn)出明確的鼻炎癥狀。首先，它們打噴嚏的次數(shù)明顯比用緩沖液攻擊的致敏的小鼠多(圖1A)。其次，在血清，BAL和NAL中具有較高的IgE水平(圖1B-D)。第三，這些小鼠在NAL中的嗜酸性粒細(xì)胞粒細(xì)胞的流量增強(qiáng)(圖1E)。
SLIT在鼻炎小鼠模型上的作用為了評(píng)估SLIT在上述鼻炎的鼠類(lèi)模型上的作用，用125.000SQ Phlp提取物或緩沖液對(duì)致敏小鼠進(jìn)行舌下處理9周時(shí)間，然后用Phl p進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊。另外，一組致敏小鼠不進(jìn)行舌下處理，并且用緩沖液對(duì)它們進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊，因此被用作陰性對(duì)照。
參見(jiàn)圖2，SLIT-治療能夠減輕臨床癥狀，因?yàn)榕c緩沖液-處理的小鼠相比，打噴嚏次數(shù)顯著減少(圖2A)。類(lèi)似地，對(duì)醋甲膽堿攻擊作出反應(yīng)的氣道超敏反應(yīng)性(通過(guò)Penh值測(cè)量)減輕，特別是在用5-15mg/mL的劑量對(duì)小時(shí)進(jìn)行攻擊時(shí)(圖2B)。
另外，血清中的抗體水平受SLIT-治療的影響。參見(jiàn)圖3，與緩沖液處理的小鼠相比，在SLIT-處理的小鼠體內(nèi)，Phl p特異性IgE(圖3A)和IgG1(圖3B)的血清水平顯著降低。
在SLIT-處理的小鼠的BAL和NAL液體中特異性IgE水平同樣降低，而特異性IgA水平在BAL中降低，但是在NAL液體中不明顯(參見(jiàn)圖4A-C)。
另外，以上結(jié)果表明，與緩沖液處理的小鼠相比，在SLIT-處理的小鼠中，BAL和NAL的嗜酸性粒細(xì)胞粒細(xì)胞水平均顯著降低(參見(jiàn)圖5A-B)。
最后，檢查了用Phl p提取物重新攻擊時(shí)脾臟和頸淋巴結(jié)(LN)細(xì)胞(舌頭引流物)的離體反應(yīng)性。盡管在脾臟中存在Phl p-特異性T-細(xì)胞反應(yīng)下調(diào)的趨勢(shì)，但是，這種趨勢(shì)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不明顯(圖6A)。與此相反，與緩沖液-處理的小鼠相比，在SLIT-處理的小鼠中在引流的頸部LNs中對(duì)Phl p的T-細(xì)胞反應(yīng)(圖6B)顯著減弱。
結(jié)論以上結(jié)果表明，SLIT治療能夠在鼻炎的鼠類(lèi)模型上減輕疾病的臨床，血清學(xué)和細(xì)胞特征。
權(quán)利要求
1.在對(duì)象體內(nèi)預(yù)防性治療對(duì)過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)的方法，包括給對(duì)象的粘膜表面施用含有所述過(guò)敏原作為活性物質(zhì)的過(guò)敏反應(yīng)疫苗，a)其中，所述要治療的對(duì)象被致敏，以便表現(xiàn)出對(duì)所述過(guò)敏原特異的IgE反應(yīng)，b)其中，所述要治療的對(duì)象沒(méi)有所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的臨床癥狀，和c)其中，所述預(yù)防性治療的目的是預(yù)防或減輕所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的隨后的臨床癥狀。
2.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述對(duì)象被致敏，以便表現(xiàn)出對(duì)所述過(guò)敏原特異的Th2細(xì)胞反應(yīng)。
3.如權(quán)利要求1或2的方法，其中，所述對(duì)象沒(méi)有鼻炎、結(jié)膜炎、鼻漏、鼻塞、鼻竇炎、噴嚏、特應(yīng)性皮炎、瘙癢、流淚、流鼻涕、喘鳴和皮膚刺激的臨床癥狀。
4.如權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)的方法，其中，所述對(duì)象的年齡小于40歲，優(yōu)選小于30歲，更優(yōu)選小于20歲，更優(yōu)選為2-10歲。
5.如權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)的方法，其中，所述過(guò)敏原選自下列一組吸入過(guò)敏原和毒液過(guò)敏原。
6.如權(quán)利要求5的方法，其中，所述過(guò)敏原選自下列一組樹(shù)木花粉過(guò)敏原，青草花粉過(guò)敏原，塵螨過(guò)敏原，藥草過(guò)敏原和動(dòng)物過(guò)敏原。
7.如權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)的方法，其中，所述給藥是口腔(通過(guò)消化系統(tǒng)的粘膜)、鼻腔、陰道、舌下、眼睛、直腸、尿道、乳腺內(nèi)、肺、耳內(nèi)(即通過(guò)耳朵)或含服給藥。
8.如權(quán)利要求7的方法，其中，所述給藥是含服或舌下給藥(口腔粘膜給藥)。
9.如上述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的方法，其中，所述要治療的對(duì)象具有與除了所述疫苗的過(guò)敏原以外的一種或多種過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的臨床癥狀。
10.將過(guò)敏原用于生產(chǎn)用來(lái)在對(duì)象體內(nèi)預(yù)防性治療過(guò)敏反應(yīng)的粘膜疫苗的用途，a)其中，所述要治療的對(duì)象被致敏，以便表現(xiàn)出對(duì)所述過(guò)敏原特異的IgE反應(yīng)，b)其中，所述要治療的對(duì)象沒(méi)有所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的臨床癥狀，和c)其中，所述預(yù)防性治療的目的是預(yù)防或減輕所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的隨后的臨床癥狀。
11.在試驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)評(píng)估免疫調(diào)節(jié)治療方法對(duì)過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)的作用的方法，該方法包括以下步驟a)使所述動(dòng)物對(duì)所述過(guò)敏原致敏，b)通過(guò)鼻內(nèi)或氣管內(nèi)接觸讓所述動(dòng)物接受第一次過(guò)敏原攻擊，c)通過(guò)口腔粘膜給藥對(duì)所述動(dòng)物實(shí)施所述治療方法，d)對(duì)生物標(biāo)記的水平進(jìn)行測(cè)量，和e)利用所述測(cè)量結(jié)果評(píng)估所述治療方法的作用。
12.如權(quán)利要求11的方法，其中，所述口腔粘膜給藥是舌下給藥(舌下免疫療法(SLIT))。
13.如權(quán)利要求11-12中任意一項(xiàng)的方法，其中，所述治療方法是在致敏之后，在第一次過(guò)敏原攻擊之前進(jìn)行的。
14.如權(quán)利要求11-12中任意一項(xiàng)的方法，其中，所述治療方法是在第一次過(guò)敏原攻擊之后進(jìn)行的。
15.如權(quán)利要求14的方法，其中，通過(guò)鼻腔或氣管內(nèi)接觸進(jìn)行的第二次過(guò)敏原攻擊是在所述治療方法之后進(jìn)行的。
16.如權(quán)利要求11-15中任意一項(xiàng)的方法，其中，所述生物標(biāo)記選自下列一組抗體，臨床癥狀和效應(yīng)細(xì)胞。
17.如權(quán)利要求16的方法，其中，所述效應(yīng)細(xì)胞選自下列一組嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞(APC’s)和在步驟c)之后由它衍生的細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及在對(duì)象體內(nèi)預(yù)防性治療對(duì)過(guò)敏原的過(guò)敏反應(yīng)的方法，包括在對(duì)象的粘膜表面施用含有所述過(guò)敏原作為活性物質(zhì)的過(guò)敏反應(yīng)疫苗，a)其中，所述要治療的對(duì)象被致敏，以便表現(xiàn)出對(duì)所述過(guò)敏原特異的IgE反應(yīng)，b)其中，所述要治療的對(duì)象沒(méi)有與所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的臨床癥狀，和c)其中，所述預(yù)防性治療的目的是預(yù)防或減輕與所述過(guò)敏原相關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)的隨后的臨床癥狀。
文檔編號(hào)A61K39/35GK101065146SQ200580040827
公開(kāi)日2007年10月31日 申請(qǐng)日期2005年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月10日
發(fā)明者J·布里莫奈斯, J·基爾德斯加德 申請(qǐng)人:阿爾克-阿貝洛有限公司