專利名稱：：水不溶性的或低水溶性藥物在脂質化糖胺聚糖顆粒中的制劑和它們的診斷和治療用途的制作方法水不溶性的或低水溶性藥物在脂質化糖胺聚糖顆粒中的制劑和它們的診斷和治療用途相關申請的交叉引用本申請要求來自2004年11月2日提出的美國臨時申請?zhí)?0/623,862的根據35U.S.C.S119(e)的優(yōu)先權利益，將其全部內容通過參考結合于此。發(fā)明背景發(fā)明領域本發(fā)明涉及藥物遞送和制劑，并且具體涉及包封水不溶性的或低水溶性藥物的脂質化糖胺聚糖顆粒以及它們在診斷和治療病理性病癥中的用途。相關技術描述糖胺聚糖，或粘多糖，連同膠原一起，是全部結締組織的主要結構元件。糖胺聚糖，或gags，是與少量蛋白質結合的多糖鏈的大的復合物。這些化合物具有結合大量水的能力，從而產生形成身體的結締組織的類似凝膠的基質。糖胺聚糖是由重復二糖單元(氨基糖-酸性糖重復單元)組成的長鏈。所述氨基糖典型地是葡糖胺或半乳糖胺。所述氨基糖還可以是硫酸化的。所述酸性糖可以是D-葡糖醛酸或L-艾杜糖醛酸。在體內，不同于透明質酸，糖胺聚糖共價結合到蛋白質，形成蛋白聚糖單體。所述多糖鏈通過酸性糖類和氨基糖類的順序加入而延長。最常見的糖胺聚糖是透明質酸、硫酸角質素、硫酸軟骨素、硫酸肝素、和硫酸皮膚素(dermatinsulfate)?？梢詫⑻前肪厶腔瘜W修飾成比它們的最初提取形式中含有更多硫基。另外，可以將糖胺聚糖部分或完全合成并且可以是植物或者動物來源的。透明質酸是糖胺聚糖家族的天然存在的成員，以特別高的濃度存在于軟骨和關節(jié)接合處的滑液中，而且存在于玻璃體液中，血管壁、和臍帶及其它結締組織中。透明質酸可以是游離形式，諸如在滑液中，并且可以是結合的形式，諸如細胞外基質成分。由交替的N-乙酰基-D-葡糖胺和D-葡糖醛酸殘基通過交替的卩-l,3-葡糖醛酸(glucuronidic)和卩-l,4-葡糖胺(glucosaminidic)的鍵結合而組成該多糖。在水中，透明質酸溶解而形成高度粘性的流體。從天然來源分離的透明質酸分子量一般在5><104直到107道爾頓的范圍內。透明質酸對于細胞外基質和多種腫瘤具有高度親合性，所述腫瘤包括乳房、腦、肺、皮膚、及其它器官和組織的那些。藥物遞送系統通過將藥物施用到身體內，用于經過長時期保持恒定的藥物血液水平，或者通過全身或局部施用并且經過延長的時期，用于保持藥物在特定靶向器官內的最理想濃度。例如，化學修飾的透明質酸可以用于控釋的藥物遞送。Balazs等，在美國專利4,582,865中，報道了透明質酸的交聯的凝膠可以減慢分散在其中但不共價結合到凝膠大分子基質的低分子量物質的釋放。將其它形式的藥物制劑/制劑用作藥物遞送系統，包括作為藥用載體的聚合物薄膜的使用或脂質體的使用。存在兩個基本類別的藥物載體微粒系統，諸如細胞、微球體、病毒包膜、和脂質體；禾tl非-微粒系統，通常是可溶解的系統，由大分子諸如蛋白質或合成聚合物組成。然而在臨床中可用的大多數藥物劑型(超過99%)是游離藥物劑型。然而，作為藥物遞送系統起作用的微觀和亞微觀微粒載體，與用游離藥物治療相比，用于改善臨床結果。載體之內的包封保護所述藥物免受生物學環(huán)境影響，減少降解和失活的風險。包封作用也防止生物學環(huán)境對游離藥物的不加選擇的分布，減少毒性和不利的副作用的風險。經過延長的時期，通過全身的或通過局部的施用，載體介導減少過早的藥物清除并且確保恒定的藥物血液水平和/或在靶向器官的最理想藥物濃度。微粒載體作為持續(xù)釋放或控釋藥物長效制劑起作用，從而有助于改進藥物功效并可以減少劑量給藥頻率。盡管提供了所述優(yōu)點，但是還存在一些與利用包封藥物的生物聚合物有關的困難。例如，構造為微米顆?；蚣{米顆粒的生物聚合物具有有限的耙向能力、有限的循環(huán)中保留和穩(wěn)定性、長期施用時的潛在毒性、和不能外滲的。已經進行了許多嘗試而將不同的識別物質，包括抗體、糖蛋白、和凝集素，結合到微粒系統，所述微粒系統諸如脂質體、微球體及其他，以便賦予它們一些程度的靶向。雖然這些識別試劑結合到所述微粒體系已經成功，但是得到的修飾微粒系統不能如所希望的發(fā)揮作用，特別是在體內。當利用這樣的識別物質時，也出現其它困難。例如，抗體可以是患者-特異性的，并且從而對于藥物療法增加成本。另外，并非全部識別底物和載體之間的結合是共價的。共價鍵是必要的，因為非共價結合可以導致識別物質在施用部位從所述微粒體系離解，原因在于微粒體系和所述識別物質靶向部位的識別相反部分之間的競爭。在這樣的離解時，施用的修飾微粒體系可以回復到規(guī)則的微粒體系，從而使修飾微粒體系施用的目的失敗。當涉及具有低水溶解度的藥物(自此以后稱為低水溶性和水不溶性的藥物)時，還存在用游離藥物治療中的缺陷。為了產生將完全容許治療的劑型，必需將水不溶性的或低水溶性藥物配制在媒介物中，所述媒介物將是足夠疏水的以溶解所述藥物，還是足夠親水的以提供到水介質中的施用。這些媒介物通常是類似洗滌劑的，諸如用于紫杉醇的CremophorEL(聚乙氧基化蓖麻油(polyethoxylatedcasteroil))和乙醇的1:1摻合物。缺點是這些媒介物及其它類似的清潔劑基媒介物是高度毒性的并且引起高敏感性反應和組胺在患者中的釋放。授予Sakurai等的美國專利5，733，892公開了可溶于水溶液中的脂質化的糖胺聚糖分子。WO03/015755公開了在水相中形成顆粒懸浮液的脂質化的糖胺聚糖顆粒的類似體系。本發(fā)明是WO03/015755的脂質化糖胺聚糖顆粒的改進，因為對于與水不溶性的和低水溶性藥物的靶向遞送有關的問題，沒有一種當前可用的遞送技術提供滿意的解決方案。在這里任何文件的引用不意欲承認，對于本申請的任何權利要求的可專利性，這樣的文件是有關的現有技術，或是考慮過的材料。關于任何文件的內容或日期的任何聲明是基于提出時對于申請人可用的信息，并且不構成關于這樣一種聲明的正確性的承認。發(fā)明概述本發(fā)明的目的是克服現有技術的缺陷。本發(fā)明的另一個目的是形成用于包封水不溶性的或低水溶性藥物的脂質化糖胺聚糖顆粒。本發(fā)明的進一步的目的是遞送包封在脂質化糖胺聚糖顆粒中的這種水不溶性的或低水溶性藥物。本發(fā)明提供包封在脂質化糖胺聚糖顆粒中的水不溶性的或低水溶性藥物的劑型，也稱"gagomers"。這樣的gagomers是生物附著的生物聚合物，通過將具有伯氨基的脂質交聯到含有羧酸的糖胺聚糖而產生。以受控方式形成微米顆粒(microparticle)或納米顆粒，對于微米顆粒主要粒徑范圍約為2-5微米，和對于納米顆粒大于50-200納米。小的或大的水不溶性的或低水溶性的有效成分/藥物可以被包封/包埋在這些gagomer顆粒中，具有大于50%的高功效，并且通常大于80%。本發(fā)明也提供含有包封在脂質化糖胺聚糖顆粒中的水不溶性的或低水溶性的藥物/有效成分的藥物組合物。本發(fā)明的其它方面包括制備包封藥物/有效成分的脂質化糖胺聚糖顆粒的方法，以及用于治療患有病理性病癥的受試者的方法，所述方法施用有效量的包封在脂質化糖胺聚糖顆粒中的水不溶或低水溶性有效成分/藥物。本發(fā)明進一步的方面涉及用于治療適應證的改進方法，所述方法用對于治療所述適應證是有效的水不溶或低水溶性藥物，在這里所述改進是施用包封在脂質化糖胺聚糖顆粒中的水不溶或低水溶性藥物。附圖簡述圖1是顯示在經由-DMSO方法中，gagomers中紫杉醇包封效率作為gagomer濃度(mgPE/ml的單位)函數的曲線圖。所述點是在如列出的不同初始藥物濃度獲得的實驗數據。實線和誤差棒是全部數據點的平均包封效率和Sd。圖2是顯示經由-乙醇方法中，gagomers中紫杉醇包封效率作為gagomer濃度(mgPE/ml的單位)函數的曲線圖。所述點是在如列出的不同初始藥物濃度獲得的實驗數據。實線是非理論的，繪出以強調所述數據的趨勢。圖3是顯示在經由-PE方法中，gagomers中紫杉醇包封效率，載體制備和藥物包封作用作為gagomer濃度(mgPE/ml的單位)函數的曲線圖。所述點是在如列出的不同初始藥物濃度獲得的實驗數據。實線和誤差棒是全部數據點的平均包封效率和sd。圖4是三種制劑類型(即，經由-DMSO，經由-乙醇和經由-PE)中，顯示作為藥物/gagomer比例的函數的紫杉醇包封效率的比較的曲線圖。使用的縮寫TX-紫杉醇；GAG-gagomers;HA-透明質酸(hyaluronan);PE-磷酯酰乙醇胺。所述點是實驗的，符號如下空心方塊經由DMSO;空心圓形經由乙醇；實心圓形經由PE。實線是非理論的，繪出以強調所述數據的趨勢。圖5是顯示在50%人血清中并在37°C的無藥物gagomers和包封紫杉醇的gagomers(經由乙醇方法制備)的穩(wěn)定性作為時間函數的曲線圖。分別監(jiān)控gagomers中的HA濃度，gagomers中的PE濃度，藥物包封的水平。無藥物的和包封紫杉醇的gagomers是(TX-GAG)，通過經由-乙醇方法制備的。所述點是實驗的并且列出了每一檢測變量的特定代號。實線是非理論的，繪出以強調所述數據的趨勢。圖6是顯示在PBS和，單獨地，在50%血清中，在單向流通量(惡化)病癥下，來自用經由乙醇方法制備的gagomers的紫杉醇流出動力學的曲線圖。因變量ft是從所述劑型在時間4時釋放的總藥物的分數。所述點是實驗的數據。實線是根據式(l)和表3腳注中列出的動力學參數繪出的理論預期。圖7顯示用于gagomers內部裝填的不溶藥物的生產過程的方案。圖8是顯示在離心的沉淀中的紫杉醇(TX)保留的曲線圖，所述沉淀單獨用磷酸鹽-緩沖鹽水洗滌(淺色棒)，或用相同的緩沖液但是還含有0.2%牛血清白蛋白洗滌(深色棒)。圖9顯示裝載藥物和無藥物的gagomers還有游離藥物的差示掃描量熱法。上部部分游離的紫杉醇-結晶體(點劃線)和水合的(虛線)和無藥物的gagomers(實黑線)。下部部分游離結晶體(實黑線)或水合的(虛線)紫杉醇與無藥物gagomers的混合物，以藥物脂質的摩爾比為1:2。裝載紫杉醇的gagomers(點劃線)也以藥物脂質的摩爾比為1:2。圖IO是顯示在滅菌前后，在B16F10.9細胞培養(yǎng)中的游離紫杉醇和裝載紫杉醇的gagomers的細胞毒性的曲線圖。發(fā)明詳述脂質化糖胺聚糖顆粒，也稱"gagomers",是用于水不溶和低水溶性藥物/有效成分的新的藥物遞送技術，其克服現有技術的限制和缺陷。該技術依據制造方法和臨床結果提供具有顯著性能改善的多用途的，多產品的藥物遞送系統。這些gagomers具有作為用于全身性、局部的、和區(qū)域性施用的部位-附著，部位-保留，緩釋藥物長效制劑起作用的能力。供水不溶或低水溶性藥物所用的該技術的引入預計將顯著促進靶向藥物遞送形式的技術水平。Gagomer顆粒是生物附著的生物聚合物，通過將糖胺聚糖與至少一種脂質起反應而制備，優(yōu)選磷脂如磷酯酰乙醇胺(PE)，更優(yōu)選二月桂基磷酯酰乙醇胺(DLPE)或二棕櫚?；柞ヵＲ掖及?DPPE)，其在鏈長上不同，將所述糖胺聚糖中的羧酸基團與所述脂質中的伯胺交聯。優(yōu)選地，將在糖胺聚糖羧基殘基和脂質的伯胺之間形成共價鍵的碳二亞胺型的偶聯劑用于所述交聯。由本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現的gagomer技術的獨特特征是這些載體顆粒，依靠它們的內部脂質區(qū)域，提供水不溶和低水溶性藥物的溶解和包封的環(huán)境，不需要包括任何毒性的和不利的引起副作用的類似洗滌劑的媒介物。Gagomer顆粒因此具有有利的能力而作為用于水不溶和低水溶性藥物的耙向遞送系統起作用。將水不溶和低水溶性藥物高效率地包封在gagomer顆粒中而形成根據本發(fā)明的包封藥物的gagomer顆粒。由此得到的制劑作為緩釋藥物長效制劑起作用，其在血清中是穩(wěn)定的并且在類似于或優(yōu)于相等的劑量游離藥物的水平維持藥物活性。本發(fā)明涉及gagomer顆粒中的水不溶或低水溶性藥物的制劑，涉及含有包封藥物的gagomers的藥物組合物并且涉及制備和使用其的方法。根據本發(fā)明包封在gagomer顆粒中的低水溶性藥物的優(yōu)選實施方案是紫杉醇(taxol;TX)，一種首先從太平洋紫杉植物的樹皮中分離的細胞毒藥物。紫杉醇促進高度穩(wěn)定的和功能障礙的細胞內微管蛋白的產生，因為正常的小管動力學中斷而導致細胞死亡，從而阻止細胞分裂?；谠摶钚?，將紫杉醇用作各式各樣的癌癥的化療藥物，所述癌癥包括卵巢、乳房、結腸、頭部、非小細胞肺癌，和AIDS有關的卡波西肉瘤。用紫杉醇的療法面對，如上以一般術語所述，兩個主要問題(l)如同任何化學治療藥物的對腫瘤-靶向載體的迫切需要；和(2)它在水溶液中具有非常低的溶解度。在目前批準的用于臨床的紫杉醇制劑中，將紫杉醇溶解在高毒性的CremophorEL(聚乙氧基蓖麻油)和乙醇的1:1摻合物中。所述領域中正在進行的努力大多數聚焦在用更多有利的媒介物替代CremophorEL/乙醇摻合物上，所述有利的媒介物包括載體諸如PEG化的脂質體。然而迄今為止，還沒有哪一個已經證明是充分滿意的。雖然較好的媒介物可以用于克服所述溶解度問題，但是所述努力沒有一種解決腫瘤靶向的問題。相反，根據本發(fā)明包封在gagomer顆粒中的紫杉醇的優(yōu)選實施方案解決了單一載體/遞送技術中的耙向和溶解度的問題。這應當減少患者中的毒性和副作用并且同時增強治療功效，導致臨床結果的顯著改善。已經預先發(fā)現包封在脂質化糖胺聚糖顆粒中的水溶性的藥物比游離的藥物更加有效，特別是對于已經變得耐藥物的癌細胞?？磥硭鰃agomers結合到癌細胞并且由此成為藥物的長效制劑，所述藥物的長效制劑可以比它們是分泌的更迅速地進入細胞。這些水溶性的藥物由此對細胞具有毒性效果，盡管已經在癌細胞中發(fā)展了的耐藥物的機理。預期與所述游離藥物相比，根據本發(fā)明包封在脂質化糖胺聚糖顆粒中的水不溶或低水不溶藥物也將對細胞具有增強的效果。除紫杉醇之外，用于在gagomer顆粒中包封的具有低水溶解度的藥物/藥物模型的其它非限制性實例連同它們的治療適應癥一起呈現在表1中。具有S30pg/ml的水溶解度的藥物被認為是低水溶性的或水不溶性的。對于本發(fā)明的目的，術語"藥物"意欲指可以治療地影響身體的任何試劑。治療藥物的實例包括癌癥治療的化學治療劑，治療感染的抗生素，治療真菌感染的抗真菌藥，治療炎性病癥的消炎藥等。如在下文的實施例所示，基于制備、包封效率和細胞毒性，優(yōu)選脂質二月桂基磷酯酰乙醇胺用于包封紫杉醇。然而，對于一些其它藥物，可以證實二棕櫚?；柞ヵＲ掖及穼⑹歉玫牟⑶沂歉鼉?yōu)選的。表1具有低水溶解度的藥物/藥物模型和治療適應癥<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>用于本發(fā)明的gagomers是非毒性的微米顆粒和納米顆粒藥物遞送系統，也分別地稱為MDDS和NDDS，其采用藥物包埋粘性生物聚合物。這些載體，當用水不溶性的或低水溶性藥物裝填時，與它們的游離形式施用的相同藥物相比，改善臨床結果。而且，這些gagomer顆粒具有許多超過其它顆粒載體的其它優(yōu)點，諸如(l)循環(huán)中的良好和充分保留-糖胺聚糖成分已經具有親水的外殼，發(fā)現延遲由RES的調理作用和攝取，和(2)糖胺聚糖成分的生物附著屬性賦予所述gagomer顆粒具有以高親合性結合到體內識別位點并賦予主動靶向的測量。可以將本發(fā)明的包封藥物的gagomers用于藥物組合物，以治療需要其的受試者中病理性病癥。如這里所用的術語"受試者"用于包括人及其它哺乳動物諸如牛、羊、豬、山羊、狗、貓、大鼠、小鼠等，還有包括兩棲動物、鳥、爬行動物和魚的動物。適于用本發(fā)明的包封藥物的gagmomers治療的病理性病癥包括水不溶性的或低水溶性藥物用于治療的任何適應證。實例包括，但不限于，癌癥，細菌和真菌感染，包括對于創(chuàng)傷諸如灼燒、由寄生蟲或病毒所引起感染繼發(fā)的那些，傷口愈合，炎癥等。由此，本發(fā)明也提供治療患有病理性病癥的受試者的方法，所述方法涉及將有效量的包封在根據本發(fā)明的gagomer中的水不溶或低水溶性藥物施用到所述受試者，以治療所述病理性病癥。在紫杉醇的優(yōu)選藥物實施方案的情況下，所述病理性病癥是癌癥。本發(fā)明是在當前方法上的進一步改進，用于將水不溶或低水溶性藥物遞送到需要對特定適應證治療的受試者，所述藥物對于治療那適應證是有效的，所述改進是將施用到受試者的藥物包封在gagomer顆粒中。雖然為了避免免疫原性和毒性的問題，在本發(fā)明使用的gagomers中優(yōu)選天然存在的糖胺聚糖，但是也可以使用合成的糖胺聚糖，還有天然的、合成的、或半合成的分子，包括但不限于軟骨素、透明質酸、葡糖醛酸、艾杜糖醛酸、硫酸角質素、硫酸角蛋白、硫酸乙酰肝素、硫酸皮膚素，及其片段、鹽、和混合物。如這里所用的術語"糖胺聚糖"還包括糖胺聚糖的鹽和游離酸以及已經化學變更的(但不是部分水解了的)，然而維持它們的功能的糖胺聚糖。這些修飾包括，但不限于，酯化、硫酸鹽化、聚硫酸鹽化、和甲基化。利用透明質酸(HA)作為實例，它的透明質酸鹽包括透明質酸鈉鹽、透明質酸鉀鹽、透明質酸鎂鹽、和透明質酸鈣鹽。糖胺聚糖的天然來源包括植物和動物來源，即，山毛櫸樹和動物軟骨的形式，包括鯊魚軟骨、牛氣管、鯨隔膜、豬鼻孔，和軟體動物諸如綠殼蛘(尸e，c,to/w"禾口海參。以它們從它們的生物學來源純化獲得的大小使用所述糖胺聚糖，而且不進行化學的和/或生物的降解。例如，對于透明質酸，這對應于約lxl()S至約lxl(^道爾頓的范圍。可以通過任何方便的路線施用根據本發(fā)明含有包封藥物的gagomers的藥物組合物，包括胃腸外的，例如皮下的、靜脈內的、局部的、肌肉內的、腹內的、透皮的、直腸的、陰道的、鼻內的或眼內的。備選地或伴隨地，可以通過經口路線施用。腸胃外投藥可以通過推注注射或通過隨時間的逐步灌注。腸胃外投藥的一般特征在于注射，最典型的是皮下的、肌肉內的或靜脈內的。本發(fā)明的由包封藥物的gagomer顆粒，滲透增強劑，及其它生物學活性的藥物或藥劑組成的局部制劑可以以許多方式施用。液體形成可以從適合的遞送裝置逐滴施用至皮膚或患病皮膚或粘膜的適當區(qū)域并且以用手用力擦入或簡單進行風干。可以將適合的膠凝劑加入到液體制劑并且可以將所述制劑施用到適當的區(qū)域并用力擦入。對于施用到創(chuàng)傷或燒傷，可以將所述gagomers結合到諸如油劑、乳劑等劑型中?？梢砸韵磩⑷楦鄤?、糊劑、軟膏劑等形式直接將這樣的制劑施用到作用區(qū)域。備選地，可以將局部液體制劑放入到噴霧器件中并作為噴霧遞送。這類藥物遞送裝置特別好地適合于受皮膚病理影響的大面積皮膚、高度敏感皮膚或鼻或口腔的施用。任選地，可以以軟膏劑或透皮貼的形式施用所述gagomers。應當理解，施用的經口路線包括施用的含服和舌下路線。本發(fā)明的gagomers也可以通過其它路線施用，其通過粘膜優(yōu)化攝取。例如，陰道的(特別是治療陰道病理的情況)，直腸的和鼻內的路線是優(yōu)選的施用路線。此外，所述gagomers特別適于通過粘膜組織或上皮細胞的遞送。如果鼻內施用，則gagomers將典型地以氣溶膠形式或以滴劑形式施用。這可以特別用于治療肺病變。可以在Remington'sPharmaceuticalScisncss，16th禾口l她版,MackPublishing,Easton，Pa.(1980and1990),禾口IntroductiontoPharmaceuticalDosageForms,她版,Lea&Febiger，Philadelphia(1985)中發(fā)現適合的制劑，其中的每一個通過參考結合于此。取決于施用的預定方式，使用的組合物可以以固體、半固體或液體劑型的形式，例如，片劑、栓劑、丸劑、膠囊、散劑、液體、混懸劑等，優(yōu)選以適于精確劑量的單一施用的單位劑型。所述藥物組合物含有所述本發(fā)明的包封藥物的gagomer顆粒和藥學上可接受稀釋劑、載體、賦形劑、輔劑、或助劑。優(yōu)選所述藥學上可接受載體是對于所述活性化合物化學惰性的并且其在使用條件下沒有有害副作用或毒性的一種。載體的選擇是由特定有效成分還由用于施用所述成分的特定方法而部分確定的。因此，存在本發(fā)明藥物組合物的各式各樣的適合的制劑。適合的賦形劑是，特別是，填充劑諸如糖類(例如，乳糖或蔗糖，甘露糖醇，山梨糖醇，等)纖維素制劑和/或磷酸鈣(例如，磷酸三鈣、磷酸氫鈣等)以及粘合劑諸如利用例如玉米淀粉、小麥淀粉、水稻淀粉、馬鈴薯淀粉的淀粉糊劑，明膠，黃蓍膠，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，和/或聚乙烯基吡咯烷。腸胃外投藥的可注射制劑可以作為液體混懸劑、在注射之前液體中的適于溶液或混懸劑的固體形式，或作為乳劑制備。適合的賦形劑是，例如，水、鹽水、右旋糖、甘油、乙醇等。另外，如果需要，要施用的藥物組合物也可以含有少量的非毒性助劑諸如潤濕劑或乳化劑、pH緩沖劑等，例如，乙酸鈉、山梨聚糖單月桂酸鹽、三乙醇胺油酸鹽等。水性注射混懸劑也可以含有增加所述混懸液粘度的物質，包括，例如，羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、和/或葡聚糖。任選地，所述混懸液也可以含有穩(wěn)定劑。胃腸外的制劑可以存在于單位劑量或多個劑量的密封容器中，諸如安瓿和小瓶，并且可以儲存在冷凍-干燥的(凍干的)條件中，在用于注射的立即使用之前僅需要加入無菌液體載體，例如，水。臨時的注射混懸液可以從之前描述種類的無菌散劑、粒劑、和片劑制備。對于口服，藥學上可接受的、非毒性的成分是由任何通常采用的賦形劑的結合形成的，所述賦形劑諸如，甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、交聯羧甲纖維素、葡萄糖、明膠、蔗糖、碳酸鎂等。這樣的組合物包括混懸劑、片劑、可分散的片劑、丸劑、膠囊、散劑、緩釋制劑等。適于口服的制劑可以由液體混懸劑組成，例如有效量的懸浮在稀釋劑諸如水、鹽水、或橙汁中的包封藥物的gagomer顆粒；小藥囊，錠劑，和藥片，各自含有預定量的有效成分作為固體或粒劑；散劑，適當液體中的混懸劑；和適合的乳劑。液體制劑可以包括稀釋劑諸如水和醇類，例如，乙醇、苯甲醇、和聚乙烯醇，或者有或者沒有加入藥學上可接受的表面活性劑、懸浮劑、或乳化劑。當所述組合物是丸劑或片劑時，它將連同所述有效成分一起含有稀釋劑諸如乳糖、蔗糖、磷酸二鈣等；潤滑劑諸如硬脂酸鎂等；和粘合劑諸如淀粉、阿拉伯膠、明膠、聚乙烯吡咯浣、纖維素及其衍生物等。片劑形式可以包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、瓜爾膠、膠體二氧化硅、交聯羧甲纖維素鈉、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酸、防腐劑、增香劑、藥學上可接受的崩解劑、潤濕劑、和藥理學相容的載體的一種或多種。膠囊形式可以是普通的硬質或軟質殼的明膠類型，含有例如表面活性劑、潤滑劑、和惰性填充劑，諸如乳糖、蔗糖、磷酸鈣、和玉米淀粉。錠劑形式可以在通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠的載體中含有包封藥物的gagomer顆粒，還有在諸如明膠或甘油的惰性基底中包含有效成分的軟錠劑，或蔗糖和阿拉伯膠。在確定要施用的gagomer顆粒的劑量中，根據特定有效成分的藥理特性選擇施用的劑量和頻率。通常，應該使用至少三個劑量水平。一般在毒性研究中，最高劑量應當達到毒性水平但是對于所述組中的大多數動物是亞致死量的。如有可能，最低的劑量應當誘導生物學可證明的效果。這些研究對于每一種選擇的化合物應該平行進行。另外，所述的有效成分(包封藥物的gagomer顆粒)的ED5"對于檢測總體的50%有效的劑量)水平應當是選擇的劑量水平的一種，并且選擇的另兩個達到毒性水平。最低劑量是不顯示生物學可證明效果的劑量。應該利用根據獲得的結果計算的使用適當的新劑量反復檢測毒理學。屬于明確限定品系的年輕健康小鼠或大鼠是種類的第一個選擇，并且第一個研究一般使用優(yōu)選的給藥途徑。將給出安慰劑或不治療的對照組包括在所述檢測中。一般毒性的檢測，如上所述，通常應當在另一個非嚙齒動物種類例如兔或狗中重復。也可以利用備選的施用路線重復研究。單一劑量毒性檢驗應當以這樣一種方式進行，以便揭示急性毒性的病征并確定的死亡方式。根據上述毒性檢驗獲得的結果計算要施用的劑量。不繼續(xù)研究全部最初選擇的化合物可以是適意的。關于單一劑量毒性的數據，例如，LD5C，實驗動物的50%死亡的劑量，將以每kg體重的重量或體積單位表達并且應當一般用不同的施用方式供給至少兩個種類。除嚙齒動物中的LDso值之外，合乎需要的是對于其它種類即狗和兔確定最高耐受劑量和/或最低致死劑量。當適合的和推測安全的劑量水平已經如上所建立時，包封藥物的gagomer顆粒的慢性毒性的研究、它對繁殖的影響、和潛在的突變性也可以是需要的，以便確保計算的適當劑量范圍關于這些危險也將是安全的。例如，然后進行揭示有效成分和代謝物的吸收、分布、生物學轉化、和分泌的藥動學的藥理學動物研究。利用獲得的結果，然后設計關于人藥理學的研究。所述化合物在人中的藥效學和藥動學的研究應該在健康的受試者中利用為臨床使用設計的施用路線進行，并且可以在患者中重復。應當研究給定不同劑量時，或當給定幾種類型綴合物或綴合物的組合和游離化合物時的劑量-應答關系，以便闡明劑量-應答關系(劑量對血漿濃度對效果)，治療范圍，和最佳劑量時間間隔。同樣，應該進行關于時間-效果關系的研究，例如，效果的時間過程的研究和不同器官的研究，以便闡明所需和不想要的所述藥物的藥理學效果，特別是關于維持生命的器官系統。然后將本發(fā)明的化合物準備用于臨床試驗以比較所述化合物對于現有療法的功效?？梢栽谶@點更細致地建立對于治療效果和副作用的劑量-應答關系。要施用到任何給定患者的本發(fā)明包封藥物的gagomer顆粒的量必須經驗確定，并且將取決于所述患者的病征而不同?？梢允紫仁┯孟鄬ι倭康陌馑幬锏膅agomer顆粒，如果沒有注意到副作用則穩(wěn)定增加劑量。當然，應當不超過在常規(guī)動物毒性試驗中確定的最大安全毒性劑量。在本發(fā)明范圍內的組合物包括全部組合物，其中以有效量包含包封水不溶性的或低水溶性藥物的gagomers以實現它的預定的目的。雖然個體需要不同，但是每一化合物的有效量的最理想范圍的測定在本領域技術的范圍之內。施用的劑量將取決于其個體接受者的年齡、健康、和重量，還有任何共同作用的治療屬性和所需效果。典型的劑量包括0.01至100mg/kg體重。優(yōu)選的劑量在約0.1至100mg/kg體重的范圍內。最優(yōu)選的劑量在約1至50mg/kg體重的范圍內。用藥物包埋的gagomers制劑是簡單的和節(jié)省成本的。這些包封藥物的gagomer顆粒作為緩釋藥物長效制劑，對于抗生素和化學治療的流出具有在19-35小時范圍內的半壽命。這些gagomer顆粒的性質，連同它們的生物附著屬性，提供這些藥物載體作為部位-粘附的、部位-保留的、緩釋的藥物長效制劑起作用的能力，所述藥物長效制劑用于全身性的給藥，包括經口的、局部的、和部位的，包括鼻內的。Gagomer制劑的原理是將所述脂質溶解在有機溶劑中并將它以形成薄脂質膜的的方式蒸發(fā)至干燥，然后在堿性緩沖液中水合，通常是pH9的硼酸鹽緩沖液。備選地，所述脂質可以在脂質的Tm之上的溫度在適當的堿緩沖液中直接水合。將糖胺聚糖分開溶解在酸性水相中并且用水溶性偶聯劑諸如碳二亞胺活化。將水合的脂質膜和活化的糖胺聚糖的水溶液一起產生并且將所述體系保持在堿性pH緩沖液中以發(fā)生共價結合?？梢院铣蓛蓚€基本類型的gagomers:低脂質對糖胺聚糖的比例(1:1，重量比)，表示為LLG，和高比例的脂質對糖胺聚糖(5:1至20:1，重量比)，表示為HLG。通過改變所述制劑中的特定步驟，結果可以涉及形成微米或納米顆粒?？梢詫⒂杀景l(fā)明的程序形成的gagomers在有或者沒有藥物的情況下凍干(冷凍-干燥)，并且單獨與水再水合或者與感興趣的藥物水溶液再水合。不像其它微粒載體諸如脂質體，在冷凍干燥之前不需要為了增強長期儲存和制劑的穩(wěn)定性而加入保護劑(冷凍保護劑諸如糖類)到所述gagomers。所述gagomers具有由透明質酸(hyaluronan)(透明質酸)提供的內在的冷凍保護。在再水合之后，可以加熱所述制劑。一旦所述gagomers已經冷凍干燥，可以將它們在延長的時期儲存直到使用它們。用于儲存的適當溫度將取決于gagomers的脂質制劑和包封材料的溫度靈敏性。當冷凍干燥的gagomers將要使用時，通過簡單地將水溶液諸如蒸餾水或適當的緩沖液加入到所述gagomers并使它們再水合。該再水合可以在室溫或在適合于gagomers和它們的內部內容物的其它溫度進行。優(yōu)選通過下列方法將具有至少一個伯氨基的脂質共價結合到含有羧酸的糖胺聚糖而制備本發(fā)明的gagomers,脂質化的糖胺聚糖，所述脂質優(yōu)選是磷脂，更優(yōu)選是磷酯酰乙醇胺，并且最優(yōu)選是二月桂基或二棕櫚?；牧柞ヵＲ掖及?，所述含有羧酸的糖胺聚糖優(yōu)選透明質酸(HA):(1)單獨將脂質和水不溶性的或低水溶性的有效成分溶解在有機溶劑中；(2)將溶解的脂質和溶解的水不溶性的或低水溶性的有效成分一起組合到組合的溶液中；(3)將所述組合的溶液蒸發(fā)至干燥并作為懸浮液分散在堿性硼酸鹽緩沖液中；(4)將分散的懸浮液與通過與偶聯劑預溫育而活化的糖胺聚糖的溶液混合并溫育，而形成包封水不溶性的或低水溶性有效成分的脂質化糖胺聚糖顆粒；和(5)通過連續(xù)離心分級以富集脂質化的糖胺聚糖顆粒?？梢匀芜x將分級的和富集的脂質化糖胺聚糖顆粒進一步冷凍干燥。備選地，可以在包封藥物/有效成分之前通過下列方法制備脂質化的gagomers:(a)提供一個反應容器，其中所述脂質在所述容器底部和壁上展開成薄層。這可以通過將所述脂質溶解在有機溶劑中并且在旋轉蒸發(fā)器中在低壓下將所述脂質蒸發(fā)至干燥而實現。(b)通過在酸性pH中與交聯劑預溫育而活化所述糖胺聚糖。(c)將活化的糖胺聚糖加入到所述反應容器。(d)將脂質和活化的糖胺聚糖的反應混合物緩沖到8.6-9.0范圍內的堿性pH。(e)隨著連續(xù)振動，將所述緩沖的反應混合物溫育充分的時期而形成脂質化的糖胺聚糖，諸如在37。C過夜。因為脂質化的gags設計成用于體內使用，所以它們應當在大約37°C是穩(wěn)定的。雖然更高的溫度可以用于脂質化，但是脂質隨著升高的溫度經歷物理變化，一般約62。C。因此，優(yōu)選在約30-40°C的溫度進行脂質化。(f)將脂質化的糖胺聚糖緩沖到中性pH并且根據需要加入其它離子和水溶性添加劑以便用生物流體中存在的離子或鹽(諸如NaCl、KC1、Ca2+和Mg"將離子強度升高到生理性水平。(g)通過連續(xù)離心分級所述顆粒，每一在4°C以1.6xl05g的力運行40分鐘，如下3次運行以后的沉淀是富集微米顆粒的級分，進行3次另外運行的微米顆粒富集級分的上清液是富集納米顆粒的級分。(h)將得到的脂質化糖胺聚糖冷凍干燥。(i)將水不溶性的或低水溶性有效成分的儲備溶液制備在有機溶劑諸如DMSO或乙醇中。然后通過將所述儲備溶液稀釋到水中而制備工作溶液，以致有機溶劑的濃度是3%。然后將該工作溶液用于將冷凍干燥的gagomer粉末再水合。可以對于相等濃度的可溶透明質酸和從透明質酸和磷酯酰乙醇胺制備的gagomer進行分光光度計^的光散射后的濁度研究，以獲得所述合成是否實際得到微粒物質的觀察。正如所料，在檢測的濃度范圍上，游離透明質酸是可溶的，并且它的溶液不散射光。相反，含有gagomer的樣品是混濁的，隨著gagomer濃度增加的光散射表明所述生物聚合物是不可溶物質。優(yōu)選在不用任何包封材料的情況下制造所述脂質化糖胺聚糖顆粒，然后冷凍干燥而形成粉末。然后將粉末狀的糖胺聚糖顆粒與要包封的材料的粉末混合。備選地，通過將粉末狀的糖胺聚糖顆粒與要包封的材料溶液在有機溶劑混合而使之重構，其有機溶劑優(yōu)選是乙醇。一旦使所述混合物重構，所述顆粒將已經捕獲了混合在其中的材料。由此，小的水不溶性的或低水溶性的分子，諸如抗生素和化學治療藥物，還有大分子，可以用這個技術包封。通過將至少一種長形式的糖胺聚糖反應而制備本發(fā)明的顆粒，所述長形式即gag還沒有被切成較小的尺寸。全部糖胺聚糖，除透明質酸之外，天然地是以共價結合到多糖部分的蛋白質部分的形式。用于水解蛋白質-糖鍵的方法，化學地和酶法地，對于本領域技術人員是眾所周知的。另外，一些已經除去蛋白質部分的商業(yè)產品是可用的。將糖胺聚糖聚合物與脂質反應，所述脂質具有至少一個伯氨基而將糖胺聚糖的羧基殘基交聯到所述脂質中的伯胺。一旦該反應發(fā)生，熱力學穩(wěn)定性引起所述脂質彼此相互作用以致將所述產物拉成糖胺聚糖在外面和脂質在內部的球形。脂質分子的自組裝是獲得gagomer顆粒的決定力。這些顆粒用于將水不溶性的或低水溶性藥物/有效成分包封在所述顆粒的內部。在本發(fā)明的一個實施方案中，除去糖胺聚糖的蛋白質部分并且僅將糖骨架與所述脂質反應。將透明質酸結合到脂質體的外部用于靶向或用于制造更具生物附著性的脂質體是本領域已知的。在本發(fā)明中，沒有脂質體；相反地，脂質分子共價結合到透明質酸。在本發(fā)明另一個實施方案中，可以首先將其它分子結合到所述糖胺聚糖，然后將其與脂質反應。產生的顆粒使這些其它分子呈現在所述顆粒的外部。這些其它分子可以是，例如，抗體、葉酸、卟啉、或凝集素，并且可以用于靶向?，F在一般地描述了本發(fā)明，參考下列實施例將更容易地理解本發(fā)明，所述實施例作為舉例說明提供而不意欲作為本發(fā)明的限制。實施例1裝填紫杉醇的gagomers的制備DMSO中的初始藥物溶解，接著是廣泛稀釋到水中(稱為經由-DMSO方法)將冷凍干燥的無藥物的gagomer粉末制備如下平行運行下面的步驟(1)和(2):(l)將透明質酸(HA)溶解在水中，到2mg/ml的濃度。將EDC以20mg/mgHA的比例加入到所述溶液，通過用HCl(lM)滴定將pH調節(jié)到4.0，并且將所述體系在37°C在振蕩器中溫育2小時。(2)將60mg的二棕櫚?；柞ヵＲ掖及?DPPE)溶解在氯仿:甲醇(3:1，體積比)中達1.5mg/ml的濃度并在低壓下在旋轉蒸發(fā)器中將所述溶液蒸發(fā)至完全干燥，直到獲得干燥的均勻膜。其后，將10ml的0.1M的硼酸鹽緩沖液，PH9.0，加入到所述干燥的脂質，將懸浮液劇烈攪拌數分鐘，然后在37°C在振蕩器中溫育2小時而產生均勻的脂質分散體。(3)將活化的HA溶液和PE的堿性懸浮液以1:1的HA:脂質重量比混合，并且在37。C在振蕩器中過夜溫育。(4)將來自(3)的反應混合物在超速離心機中以160,000g的力并且在4。C離心40分鐘。棄去上清液，并且將所述沉淀進行4個循環(huán)的洗滌如下在磷酸鹽緩沖液鹽水(PBS)，pH7.2中的沉淀的再懸浮作用，在上面列出的條件下再次離心。棄去上清液，將所述沉淀重懸在PBS等中。將最后的沉淀懸浮在PBS中達所需體積(通常是體系(3)的體積)。(5)將gagomer懸浮液分配到1ml的冷凍干燥微型瓶中，并且冷凍干燥如下在-80。C的2小時冷凍，過夜冷凍干燥(環(huán)境溫度，冷凝器溫度LT-50。C，壓力0.055hPa。將gagomer粉末冷凍儲存(-18。C)直到使用。在該實施例并且在全部隨后的實施例中，gagomer濃度將由它的磷酯酰乙醇胺(PE)含量限定。在40mM的藥物濃度范圍內制備DMSO中紫杉醇的儲備溶液。通過這些儲備溶液在水中稀釋到170-625嗎/ml的濃度范圍并且最后的DMSO濃度是<1%而制備工作紫杉醇溶液。將給定的工作溶液立即與選擇數量的gagomer粉末混合到最后的gagomer濃度在0.16-5mgPE/ml的范圍內。將所述混合物在37。C在振蕩器浴中溫育2小時。通過在所述制劑中包含痕量的311-紫杉醇而檢定紫杉醇。將藥物包封效率定義為在載體顆粒內包封的體系中總藥物的分數。通過"熱力學方法"確定紫杉醇包封效率，如下。將紫杉醇-gagomer制劑進行超高速離心(40分鐘，4°C，175000g的力)。將上清液(其含有未包封的藥物)從所述沉淀(其含有包封藥物的gagomers)分離。將所述沉淀重懸浮在無藥物的緩沖液中達初始體積。在所述分離以前的原始制劑中確定上清液和重懸沉淀中的紫杉醇濃度，并且將這些數據用于確定包封效率。如圖1所示，這些制備的離子中的紫杉醇包封效率是很高的，96(±2)%，并且對于gagomer濃度不是敏感的。實施例2裝填紫杉醇的gagomers的制備乙醇中的初始藥物溶解，接著是廣泛稀釋到水中(稱為經由-乙醇方法)類似于實施例1中描述的那些制備紫杉醇-gagomer制劑，但是具有下列區(qū)別將乙醇代替DMSO用作儲備溶液用的溶劑。工作紫杉醇濃度在43-170pg/ml的范圍內并且最后的乙醇濃度是<1%。如圖2所示，通過在測試范圍之內關于gagomer濃度具有輕微的或沒有相依性的該方法，同樣獲得高包封效率，對于高和低紫杉醇濃度分別是80(±6)%和95(±1)%。實施例3裝填紫杉醇的gagomers的制備初始藥物溶解在乙醇中，接著是加入到有機PE溶液(稱為經由-PE的方法)在該方法中，將紫杉醇引入在gagomer制備的過程中，在所述階段中將PE溶解在有機溶劑體系中。將紫杉醇溶解在乙醇中并在室溫下以氯仿:甲醇為3:1體積比加入到PE溶液(即，上面的實施例1的步驟2)。從這點開始，如實施例1中所描述繼續(xù)進行gagomer制備，不同之處在于省略步驟5(冷凍干燥)。所述制劑中的紫杉醇終濃度是0.2-1.2mM。如圖3中所示，該方法也獲得高的包封效率，82(±5)%，優(yōu)點是該方法可以包封比實施例1和2更高的藥物劑量。后者的點是通過顯示在表2中的比較強調的，用于紫杉醇溶解在乙醇中的體系。雖然包封效率比"經由PE"方法是相對低的，它可以利用更加高的藥物劑量。因此，優(yōu)選方法(即，經由-PE)中的包封藥物劑量是5倍更高的。表2:紫杉醇裝填儲存<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>實施例4包封效率和紫杉醇裝填的關系將描述在上面實施例1-3中的全部三種方法的包封效率對裝填水平(紫杉醇/PE，重量比)進行比較。如圖4所示，在經由各種各樣的紫杉醇裝填的三種包封方法之間存在良好的一致。實施例5血清中的穩(wěn)定性血清中紫杉醇-gagomer制劑的全面穩(wěn)定性概貌(l)顆粒完整性的保留，所述顆粒完整性可以由下列的兩個組分-透明質酸和PE的結果獨立監(jiān)控和(2)在所述顆粒內裝填藥物的保留。為了評價紫杉醇-gagomer制劑的血清穩(wěn)定性，將樣品在50%人血清中在37°C溫育直到24小時。關于顆粒完整性和它對紫杉醇存在的靈敏性的血清效果，為了得到更多的理解，用無藥物的gagomers進行類似的研究。在實驗的整個持續(xù)時間內選擇的時間點從反應混合物取出等分部分，并通過離心進行分離。離心條件和細節(jié)類似于實施例1中對于確定包封效率的熱力學方法公開的那些。將含有完整gagomers的沉淀和它們的包封藥物重懸在PBS中。利用下列痕量標記檢定離心以前的取出的等分部分、上清液和重懸的沉淀中的透明質酸(HA)，PE和紫杉醇FITC-標記的HA(F-HA)，"C-PE，和在有關的地方，3H-紫杉醇。結果總結在圖5中。所述數據相當清楚地顯示，對于無藥物的和裝填藥物的檢測體系，不取決于PE，大多數透明質酸保留在所述沉淀中。經過大部分時間范圍，對于兩個組分，該保留還在相同的水平。這些發(fā)現可以得出結論，在血清中存在良好的顆粒穩(wěn)定性。類似的包封藥物的保留還證實了該結論。將全部數據采用在一起使之表明，不僅gagomers在血清中是穩(wěn)定的，包封的藥物不從完整的顆粒損失，而且它的存在不削弱血清中的顆粒穩(wěn)定性。實施例6紫杉醇從完整gagomers的流出在單向通量(下沉(sink))條件下，利用如WO03/015755和Margalit等(1991)中所描述的透析方法，在PBS和50%人血清中研究了紫杉醇從gagomers的流出。將痕量的311-紫杉醇包括在制劑中以檢定在每一時間點從透析袋釋放的紫杉醇，還有在時間=0和在所述實驗結尾的gagomers中的紫杉醇。根據在本發(fā)明的發(fā)明人的實驗室中預先開發(fā)的程序進行數據處理和分析(WO03/015755;Margalit等，1991)并且發(fā)現在時間岣時符合兩個獨立的藥物池(drugpools)的情況，一種是包封的藥物，另一個是未包封的藥物。結果顯示在圖6和表3中。該類型的數據分析重建gagomers和外部介質在時間=0時的藥物分布，并且因此構成確定包封效率的另一個方法，與實施例1中公開的熱力學方法無關。表3:在PBS和血清中的來自gagomers的紫杉醇流出的參數<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>d)PBS中50%的人血清(2)方程(l):ft=(100-f2)(l-e部)+f2(l_e-k2t)ft-時間^t從制劑釋放的總藥物的分數&:時間=0的gagomer-包封藥物的分數k,:未包封的藥物流出的速率常數k2:包封的藥物流出的速率常數圖6中提出的每一數據顯示包封和未包封的藥物在透析液中的組合積累，并且清除地看出在血清存在下的流出比PBS中慢。如表3中所見，與上面的實施例4的數據和結論相伴隨，保留高血清穩(wěn)定性-f2(包封水平)值在血清和PBS中相當類似。在兩種介質中，紫杉醇-gagomer制劑作為持續(xù)釋放藥物長效制劑起作用，一種在藥物載體中高度合意的特性。有趣的是，當血清存在于透析袋內時，兩個速率常數減少。對于本情況一親脂性藥物的流出一血清組分是白蛋白和脂蛋白，二者在全部實驗中保留在所述袋內(膜截止值是12000-14000Da)。如Margalit等(1991)中所詳細論述，未包封的藥物和包封的藥物從透析袋流出到透析液各自是具有單一速率限制性步驟的獨立多步驟過程，其中所述藥物從它的原始池通過一系列中間池擴散，結果為透析液。該相同的特性一從各自原始藥物池擴散的單一速率限制性步驟一也保持在紫杉醇的本情況中，并且血清比PBS的速率常數差異意味著在速率限制性藥物池的環(huán)境中的微小變化。實施例7體外的細胞毒性在藥物-gagomer制劑的基質、細胞系和治療規(guī)程上評價紫杉醇和gagomer-包封的紫杉醇的細胞毒性(見實施例1，2和3)，藥物濃度范圍跨越lnM至100nM。在實驗前的二十四小時，將所需的細胞系以5"03細胞/孔的范圍內的密度接種到96-孔多孔培養(yǎng)板上。在亞-融合單層上啟動所述實驗。在實驗啟動時，加入治療介質，如表4中所列出。使用兩個規(guī)程(I)短規(guī)程。將所述細胞用治療介質溫育4小時，在其結尾抽出所述治療介質，將所述細胞洗滌并在無藥物的補充血清的細胞生長培養(yǎng)基中溫育44小時。終點是從開始的48小時。(II)長規(guī)程將所述細胞在所述治療介質中溫育48小時。在終止時，在兩種規(guī)程中，利用MTT或者SRB測定法在每一孔中確定細胞生存能力。表4:用于紫杉醇-gagomer細胞毒性體外評價的治療介質的組成。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>長和短的兩個規(guī)程的基本原理如下所述長規(guī)程是常規(guī)的一種，用于不同藥物制劑之中細胞毒性的體外比較。通常在24-72小時時間范圍之內的時期將所述細胞用治療制劑溫育，并且全部制劑溫育相同的時間。當所述比較在游離藥物和載體配制的藥物之間時，所述載體特別是與所述耙細胞具有特定的正相互作用的載體，該相同溫育時期使所述結果有利于游離藥物偏斜。在體內，所述游離藥物不會在靶向區(qū)域保留長久，而耙向載體可以停留延長的時期。將短的規(guī)程設計成對于體內情況調節(jié)該游離藥物對載體藥物的不平衡。在4小時以后治療介質的除去將全部細胞外的游離藥物從所述體系清除，而裝填藥物的載體可以與所述細胞締合(結合到所述膜和/或胞吞)。如果這樣的締合發(fā)生，則在4小時治療介質除去時，并非清除全部載體介導的藥物，并且殘留的藥物-載體制劑可以在所述實驗的其余部分始終繼續(xù)將藥物供給所述細胞。對于每一細胞系，證實使用的gagomer濃度(不需要超過1.5mgPE/ml的gagomer濃度范圍)對于所述細胞沒有毒性。將細胞生存能力作為紫杉醇濃度的函數的數據用于求出ICso(引起細胞增殖的50%抑制的藥物濃度)。該參數廣泛用作本領域標準的參數效能一IC5Q越低，給定制劑的效能越高。對于游離的和gagomer裝填的藥物的紫杉醇ICso值列出在表5中。在全部情況中，并且對于三種不同紫杉醇-gagomer類型的制劑，所述數據相當清楚地顯示包封的紫杉醇保持活性的。對于經由-DMSO和經由-乙醇的制劑，在游離的和載體-配制的藥物之間不存在顯著差異。表5:游離的和gagomer-包封的紫杉醇的細胞毒性<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>(1)短規(guī)程用治療介質的4小時溫育，然后氣吸，洗滌，在無藥物的補充血清的細胞生長培養(yǎng)基中溫育另外的44小時。長規(guī)程用治療介質的48小時溫育。(2)直接稀釋到培養(yǎng)基中的游離紫杉醇(3)TX-GAG:紫杉醇-包封的gagomers(4)細胞來源和類型B16F10.9:小鼠黑素瘤，B16F10的亞系，MDR,超表達的透明質酸受體D122:小鼠肺Lewis癌亞系，MDR,超表達的透明質酸受體C-26:小鼠結腸癌,MDR,超表達的透明質酸受體PANC-1:人胰腺癌，MDR,超表達的透明質酸受體COS-7:綠色非洲猴(GreenAfricanmonkey)腎，CV-1的亞系。非腫瘤細胞和透明質酸受體的差表達體SNU-251:人卵巢癌，在文獻中未發(fā)現關于透明質酸受體或MDR狀態(tài)的報道。經由-PE制劑的結果，也列出在表5中。這些結果是許多中最振奮人心的。它們相當清楚地顯示，在短規(guī)程中(當比較游離的對比載體-配制的藥物時更相關的一種)存在1(35()值的下降。由此，從游離的到所述gagomer-配制的藥物的潛能增加超過4倍?？紤]以上論述的向細胞提供藥物的機理，當在gagomers中配制時潛能的增加甚至可能更高。而且，腫瘤細胞系中的增加比對照非腫瘤系中顯著更高。實施例8紫杉醇-裝填的gagomers的制劑和表征最初的藥物溶解在乙醇中，接著是加入到乙醇DPPE溶液(稱為經由乙醇的-DPPE方法)。該方法類似于實施例3的那些，具有下列不同(l)將所述脂質，二棕櫚?；字Ｒ掖及?DPPE)，在55。C溶解在乙醇中，達12mgPE/ml的濃度。(2)將儲存濃度的紫杉醇溶解在乙醇中并加入到乙醇DPPE溶液，將合并的DPPE/紫杉醇乙醇溶液在55°C保持另外的15分鐘。(3)將DPPE/紫杉醇乙醇溶液蒸發(fā)至干燥并分散在如實施例1步驟2中所描述的堿性硼酸鹽緩沖液中，不同之處在于該分散的溫育是在65°C。從該點，如實施例3繼續(xù)所述過程。紫杉醇的功效是完全的(即，100%)。如實施例7中所描述的確定B16D10.9細胞中的細胞毒性。表示在表6第一行中的結果表明，gagomer-包封的紫杉醇保持活性并且比游離紫杉醇更有效(即，更低的ICs。)。將紫杉醇的乙醇溶液在40-70。C范圍內的數個溫度加熱，在該實施例方法中用于制造紫杉醇-包封gagomers的相同條件下，并且利用相同的細胞毒性檢定法，證實，在本條件下，加熱不削弱所述藥物的細胞毒活性。表6:游離的和gagomer-包封的紫杉醇、作為脂溶劑的乙醇在B16F10.9細胞中的細胞毒性。TX匿GAG制劑方法IC5o短規(guī)程(1)(jxM紫杉醇)游離的紫杉醇(2)TX-GAG(3)經由乙醇的-DPPE1.81.1經由乙醇的-DLPE1.80.15(1)短的規(guī)程用治療介質溫育4小時，然后氣吸，洗滌，在無藥物的補充血清的細胞生長培養(yǎng)基中溫育另外的44小時。長規(guī)程用治療介質溫育48小時。(2)直接稀釋到培養(yǎng)基中的游離紫杉醇(3)TX-GAG:包封紫杉醇的gagomers實施例9紫杉醇-裝填的gagomers的制劑和表征最初的藥物溶解在乙醇中，接著加入到乙醇DLPE溶液(稱為經由乙醇的-DLPE方法)Gagomer制劑和紫杉醇包封全部類似于實施例8描述的那些，除下列之外.(l)DPPE，具有兩個棕櫚酰基鏈(即，C16)，用另一個PE-DLPE替代，其中兩個鏈是二月桂基(即，C12)。(2)乙醇中脂質溶解的溫度，用于乙醇脂質溶液與乙醇紫杉醇溶液的混合，并且將用于DLPE和紫杉醇在堿性硼酸鹽緩沖液中的分散用的2小時溫育的溫度全部降低至44。C。全部其它步驟類似于實施例8的那些。紫杉醇的功效是完全的(即，100%)。如實施例7中所描述的測定B16D10.9細胞中的細胞毒性。表示在表6第二行中的結果表明，gagomer-包封的紫杉醇保持活性，并且比游離紫杉醇更有效(S卩，更低的IC50)。在迄今為止制造的全部紫杉醇-gagomer制劑之中，依據制劑、包封效率和細胞毒性，該制劑(見表5和6)是最好的。實施例IOTX-GAG顆粒的藥物裝填容量利用DLPE作為所述脂質，根據圖7中描繪的方案制備TX-GAG顆粒。初始的藥物/脂質摩爾比范圍從1:10(即，O.l)至1:2(SP，0.5)的TX:脂質，并且通過離心和洗滌，如實施例1所描述，對于這些制劑的每一個測定包封效率。為了評價離心沉淀中的紫杉醇是否完全在gagomer顆粒內，或它的一些一特別是因為增加藥物裝填一作為所述顆粒外部的游離的不溶藥物保留，從過量試劑洗滌出TX-GAG顆粒，所述洗滌通過高速離心進行，(圖7中的步驟5)進行如下將每一制劑分成兩個部分。如上述實施例中，將一部分離心并單獨用磷酸鹽-緩沖鹽水(PBS)洗滌。將另一個部分離心并在類似條件下洗滌，但是洗滌介質是含有0.2。/。牛血清白蛋白(BSA)的PBS。利用后者的基本原理不僅基于該蛋白質作為一般的"污染物吸收蛋白質"的常規(guī)用途，而且特別因為紫杉醇具有對于該蛋白質的高親合性，并且血清白蛋白作為在目前使用的商業(yè)制劑中提供給患者的游離紫杉醇的內源載體起作用。如果離心的沉淀包含不進入gagomer顆粒的藥物，并且由于它的不溶性，在所述沉淀中連同TX-GAG顆粒一起沉淀，所以BSA應當已經溶解至少一些沉淀的游離藥物。與單獨用PBS洗滌同等的體系相比，這個從沉淀中沉淀的游離紫杉醇除去到上清液中將減少離心沉淀中的藥物。顯示在圖8中的結果使之相當清楚，BSA洗滌不減少所述沉淀中的藥物，由此表明對于全部裝填一與gagomers締合的全部紫杉醇實際上被裝填在gagomerrs內部。更高的BSA濃度(3%)也不從TX-GAG顆粒洗出紫杉醇。實施例11TX-GAG顆粒的量熱分析如實施例10中所描述而制備TX-GAG顆粒，藥物/脂質摩爾比在1:10至1:2的范圍內。類似地制備無藥物的gagomers，省略所述藥物。將兩個類型的體系冷凍干燥，如圖7的步驟6中所描述。在230-250°C的溫度范圍內，晶體的紫杉醇還有從水懸浮液凍干的紫杉醇(表示水合的紫杉醇)，已知首先經歷熔化，然后分解。還已知，所述熔化是吸熱過程并且所述分解是放熱過程。兩個過程，以及它們的首先是吸熱峰接著是放熱峰的連續(xù)圖樣，可以通過將所述物質進行差示掃描量熱法(DCS)確定并觀察。這通過兩種掃描舉例說明，一種是對于晶體的和另一個是對于水合的紫杉醇，在圖9的上部中。也如圖9上部中所顯示，發(fā)現進行DSC的無藥物的gagomers在100°C的區(qū)域具有小的吸熱峰，原因在于所述脂質，但是在230-270。C范圍內不經歷熱變化，在230-270。C范圍的地方游離紫杉醇經歷大量的變化，如上所顯示和所論述。將藥物:脂質摩爾比為1:2的無藥物gagomers和晶體的或水合的紫杉醇的混合物同樣進行DSC。如圖9下部中所例舉，混合物中獨立的組分保留它們的各自的熱行為，顯示所述脂質，吸熱峰在100°C的區(qū)域，并且兩個連續(xù)的吸熱和放熱峰在230-250。C的范圍內。與上述全部相反，將TX-GAG制劑進行DCS，對于包封(與游離的相比)的藥物揭示不同的熱行為。同樣如圖9下部中所示，對于1:2的TX:PE的藥物裝填，紫杉醇的熔化峰消失，然而分解峰保留。用下面的藥物:脂質裝填獲得類似的結果。對于全部樣品，也通過熱解重量分析(TGA)進行分解峰的識別。全部上述結果一起符合實施例10的發(fā)現，強烈表明獲得了具有特別高藥物裝載的TX-GAG顆粒。實施例12滅菌TX-GAG顆粒中的紫杉醇穩(wěn)定性根據圖7的方案制備TX-GAG顆粒的水懸浮液，直到并且包括步驟5，也制備單獨的紫杉醇水懸浮液(即，游離紫杉醇)。將來自TX-GAG和游離紫杉醇的樣品留出，并且將每一體系的其余部分進行下列滅菌過程在120°C的12分鐘的高壓滅菌法。該滅菌過程的關鍵問題是對于TX-GAG制劑是可行的，是藥物活性的保留。因此，將在滅菌過程之前留出的原始樣品，還有經歷所述過程的樣品，在B16F10.9培養(yǎng)中對它們的細胞毒性測試，如實施例7中所描述。如圖10中圖解的結果所示，并且如預期，滅菌過程在游離紫杉醇的細胞毒性方面不產生任何顯著的下降。而且，該過程在gagomer-裝填的紫杉醇的細胞毒性方面也不引起任何顯著的下降。事實上，全部四個體系在細胞毒性方面、0.30^M紫杉醇范圍內的ICso值是類似的。這些結果表明TX-GAG制劑在施加的滅菌條件下具有良好的穩(wěn)定性，并且還表明對于產物滅菌這是一個可行的方法。現在已經充分描述了本發(fā)明，本領域技術人員應當理解，在不背離本發(fā)明實質和范圍并且不用過多實驗的情況下，可以在各種各樣的同等參數、濃度、和條件之內進行相同的發(fā)明。雖然己經關于其具體的實施方案描述了本發(fā)明，但是應當理解還可以修改它。該申請意欲覆蓋本發(fā)明的任何變化、用途、或改編，一般得，按照本發(fā)明原理并且將本公開內容的背離，例如進入本領域內已知的或通常的實施，和例如可以應用于陳述如下的上文的基本特征，包括在后附權利要求的范圍內。在這里引用的全部參考文獻，包括期刊論文或摘要，公開的或相應的美國或國外的專利申請，出版的美國或國外的專利，或任何其它參考文獻，通過參考全部結合于此，包括引用的參考文獻中出現的全部數據、表、圖、和正文。另外，在這里引用的參考文獻中引用的參考文獻也通過參考全部結合。對于已知方法步驟、常規(guī)方法步驟、已知方法或常規(guī)方法的參考不以任何方式承認，本發(fā)明的任何方面、描述或實施方案是在有關技術中公開的、教導的或提出的。上述具體實施方案的描述將充分揭示本發(fā)明的一般屬性，以致他人可以通過應用本領域技術之內的知識(包括在這里引用的參考文獻的內容)，在不背離本發(fā)明一般概念的情況下，不用過多實驗而容易地為多種應用修改和/或改編這樣的具體實施方案。因此，基于在這里提出的教導和指導，意欲將這樣的改編和修改在公開的實施方案的等效的含義和范圍內。應當理解，在這里的措辭或術語是為了描述而不是限制的目的，因此本說明書的術語或措辭將由技術人員根據在這里提出的教導和指導結合本領域普通技術人員的知識而解釋。參考文獻R.Margalit，R.Alon，M.Linenberg,I.Rubin,T丄Roseman,R.W.Wood.Liposomaldrugdelivery:thermodynamicandchemicalkineticconsiderations.J.ControlledRelease17:285-296(1991)權利要求1.一種脂質化糖胺聚糖顆粒，所述脂質化糖胺聚糖顆粒包含至少一種糖胺聚糖與至少一種具有伯氨基的脂質的反應產物，并且包封水不溶性的或低水溶性的有效成分。2.權利要求l的脂質化糖胺聚糖顆粒，其中所述水不溶性的或低溶解性的有效成分是用于治療癌癥的化療藥物。3.權利要求2的脂質化糖胺聚糖顆粒，其中所述化療藥物是紫杉醇。4.權利要求3的脂質化糖胺聚糖顆粒，其中所述至少一種脂質是二月桂基磷脂酰基乙醇胺。5.權利要求l的脂質化糖胺聚糖顆粒，其中所述至少一種糖胺聚糖選自由透明質酸、硫酸角蛋白、硫酸角質素、硫酸軟骨素、硫酸肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸皮膚素，及其片段、鹽、和混合物組成的組。6.權利要求1的脂質化糖胺聚糖顆粒，其中所述至少一種糖胺聚糖是透明質酸。7.權利要求1的脂質化糖胺聚糖顆粒，其中所述脂質是磷酯酰乙醇胺。8.權利要求7的脂質化糖胺聚糖顆粒，其中所述磷脂酰乙醇胺是二棕櫚?；柞ヵＲ掖及?。9.權利要求7的脂質化糖胺聚糖顆粒，其中所述磷脂酰乙醇胺是二月桂基磷酯酰乙醇胺。10.權利要求1的脂質化糖胺聚糖顆粒，其中所述顆粒大小在約2-5微米的范圍內。11.根據權利要求1的脂質化糖胺聚糖顆粒，其中所述顆粒大小在約50-200納米的范圍內。12.—種藥物組合物，所述藥物組合物包含權利要求1的脂質化糖胺聚糖顆粒和藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或助劑。13.—種用于治療患有病理性病癥的受試者的方法，所述方法包含將包封在權利要求1的脂質化糖胺聚糖顆粒中的有效量的水不溶性或低水溶性有效成分施用到所述受試者，以治療所述病理性病癥。14.權利要求13的方法，其中所述病理性病癥是癌癥。15.權利要求14的方法，其中所述水不溶性或低水溶性有效成分是紫杉醇。16.在用水不溶性的或低水溶性藥物治療適應證的方法中，所述藥物對于治療所述適應證是有效的，改進是其中所述藥物被包封在脂質化糖胺聚糖顆粒中施用。17.用于制備權利要求1的脂質化糖胺聚糖顆粒的方法，所述方法包含將脂質和水不溶性的或低水溶性的有效成分溶解在有機溶劑中；將溶解的脂質和溶解的水不溶性的或低水溶性有效成分一起組合到組合溶液中；將所述組合溶液蒸發(fā)至干燥并且分散為堿性硼酸鹽緩沖液中的懸浮液；將分散的懸浮液和通過與偶聯劑預溫育活化的糖胺聚糖溶液混合并溫育，而形成包封水不溶性的或低水溶性有效成分的脂質化糖胺聚糖顆粒；并且通過連續(xù)離心分級而富集脂質化糖胺聚糖顆粒。18.權利要求17的方法，所述方法還包含將分級的和富集的脂質化糖胺聚糖顆粒冷凍干燥。19.權利要求17的方法，其中所述脂質是磷酯酰乙醇胺。20.權利要求19的方法，其中所述磷酯酰乙醇胺選自由二棕櫚?；柞ヵＲ掖及泛投鹿鸹柞ヵＲ掖及方M成的組。21.權利要求17的方法，其中所述有機溶劑是乙醇。22.權利要求17的方法，其中所述糖胺聚糖是透明質酸。23.權利要求17的方法，其中所述混合的分散的懸浮液和活化的糖胺聚糖溶液的糖胺聚糖對脂質的重量比約為1:1。24.權利要求17的方法，其中所述混合的分散的懸浮液和活化的糖胺聚糖溶液的有效成分對脂質的摩爾比在約1:10至1:2的范圍內。25.權利要求1的脂質化糖胺聚糖顆粒在配制用于治療病理性病癥的藥劑中的用途，其中將對于治療所述病理性病癥有效的水不溶性的或低水溶性的有效成分包封在所述脂質化糖胺聚糖顆粒中。26.根據權利要求25的用途，其中所述病理性病癥是癌癥。27.根據權利要求26的用途，其中所述水不溶性的或低水溶性的有效成分是紫杉醇。全文摘要本發(fā)明提供在脂質化糖胺聚糖顆粒中包封的水不溶性的或低水溶性藥物的劑型，用于靶向藥物遞送。文檔編號A61K9/50GK101217946SQ200580044983公開日2008年7月9日申請日期2005年11月2日優(yōu)先權日2004年11月2日發(fā)明者伊利亞·里夫金,諾加·葉魯沙爾米,達恩·佩爾,里莫納·毛爾高利特申請人:特拉維夫大學未來技術研發(fā)有限公司