專利名稱：：靶向血清白蛋白和glp-1或pyy的雙特異性結(jié)構(gòu)域抗體的制作方法耙向血清白蛋白和GLP-1或PYY的雙特異性結(jié)構(gòu)域抗體相關(guān)申請本申請要求2004年12月2日申請的U.S.臨時專利申請No.60/632，361的權(quán)益和GB專利申請No.0511019.2的權(quán)益。在此將上述申請的全部教導(dǎo)引入作為參考。發(fā)明背景許多藥物具有能用于治療和/或診斷目的的活性，但由于給藥時，它們迅速地從機體排除，因此具有有限的價值。例如，許多具有治療用途活性的多肽通過腎臟迅速地從循環(huán)中清除。因此，為了獲得想要的治療效果，必須給藥大劑量。需要改良的治療與診斷劑，其具有改良的藥學(xué)動力學(xué)特性。一類這樣的在體內(nèi)或體循環(huán)中具有短半衰期的藥物是腸促胰島素激素，如胰高血糖素樣肽1或肽YY。胰高血糖素樣肽(GLP)-1是腸促胰島素激素，具有有效的葡萄糖依賴性促胰島素和glucagonostatic作用、對胰腺P細胞的營養(yǎng)作用和對胃腸分泌和運動的抑制作用，這些結(jié)合起來來降低血漿葡萄糖和降低血糖波動幅度。此外，通過其提高飽腹感的能力，GLP-1降低了食物攝入，因此限制體重增加，甚至可以引起體重減輕。總之，這些作用給予GLP-1獨特的特征，用作抗糖尿病劑是相當理想的，特別是由于其抗高血糖作用的葡萄糖依賴性將最小化嚴重高血糖的任何風險。然而，藥物動力學(xué)/藥效特征使得天然GLP-1在治療上是無用的。因此，盡管連續(xù)給藥時GLP-1最有效，但是單次皮下注射具有短期效果。GLP-1對體內(nèi)酶降解是高度敏感的，二肽酰肽酶IV(DPP-IV)的分裂可能是最相關(guān)的，因為這快速發(fā)生并產(chǎn)生非促胰島素代謝物。因此基于影響其代謝穩(wěn)定性和藥物動力學(xué)/藥效特征的因素的理解，利用GLP-1治療潛能的策略是熱切研究的焦點。已經(jīng)進行了廣泛的工作來嘗試抑制肽酶或修飾GLP-1，以這樣的方式使得減緩其降解同時仍然保持生物活性。WO05/027978公開了具有延長作用特征的GLP-1衍生物(并在此引入作為參考，作為可用于本發(fā)明中的GLP-1衍生物和類似物的實例)。WO02/46227公開了包括融合GLP-1或類似物的多肽(例如，白蛋白)的異種融合蛋白(在此將這些類似物的公開內(nèi)容引入作為參考，作為可用于本發(fā)明中的GLP-1類似物的實例)。WO05/003296、WO03/060071、WO03/059934公開了氨基融合蛋白質(zhì)，其中GLP-1已經(jīng)與白蛋白融合來提高激素的半衰期。然而，盡管這些努力，還是沒有產(chǎn)生長效活性GLP-1。因此，特別是在糖尿病和肥胖癥的領(lǐng)域中，存在對改良的GLP-1肽或其他藥劑極大的需要，這些肽和其他藥劑相似地具有促胰島素效果，特別適于糖尿病和肥胖癥的治療。因此需要改進GLP-1和其他促胰烏素肽來提供較長的體內(nèi)作用持續(xù)時間，同時維持它們的低毒性和治療優(yōu)勢。發(fā)明概述本發(fā)明涉及具有提高的血清半衰期的藥物融合體和藥物綴合物。一方面中，藥物融合體是具有通式的連續(xù)多肽鏈a-(X)nl-b-(Y)n2-C-(Z)n3-d或a-(Z)n3-b-(Y)n2-c-(X)nl-d其中X是具有第一目標結(jié)合特異性的多肽藥物；Y是具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，或具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL);Z是具有笫二目標結(jié)合特異性的多肽藥物；a、b、c和d各自獨立地不存在或是l至約IOO個氨基酸殘基；nl是1至約10;n2是1至約10;和n3是0至約10，附加條件是nl和n2都是1且n3是0時，X不包括抗體鏈或抗體鏈的片段。一些實施方案中，Y包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列，或選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。特定的實施方案中，X是GLP-1或GLP-1類似物。另一方面中，藥物融合體包括連續(xù)多肽鏈，所述鏈包括部分X，和Y'，其中X，是多肽藥物，附加條件是X，不包括抗體鏈或抗體鏈的片段；和Y，是具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，或具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。一些實施方案中，Y，包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列，或選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。特定的實施方案中，X，是GLP-1或GLP-1類似物。另一方面中，本發(fā)明是藥物綴合物，該綴合物包括具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，或具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vl);和共價鍵合所述Vh或Vl的葯物。一些實施方案中，免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列，或選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。特定的實施方案中，藥物是GLP-1或GLP-1類似物。本發(fā)明還提供了編碼在此所述的藥物融合體的重組核酸和構(gòu)建體，和包括重組核酸和/或構(gòu)建體的宿主細胞。本發(fā)明進一步提供了生產(chǎn)藥物融合體的方法，該方法包括在適于所述重組核酸表達的條件下培養(yǎng)含有編碼在此所述的藥物融合體的重組核酸和/或構(gòu)建體的宿主細胞，借此產(chǎn)生藥物融合體。本發(fā)明還提供了包括本發(fā)明的藥物融合體或藥物綴合物的組合物(例如，藥物組合物)。本發(fā)明還提供了患有如在此所述那些的疾病或失調(diào)的個體的治療方法，該方法包括將治療有效量的本發(fā)明的藥物綴合物或藥物融合體給藥于所述個體。一些實施方案中，疾病或失調(diào)是炎癥疾病，如關(guān)節(jié)炎(例如，類風濕性關(guān)節(jié)炎)。再一實施方案中，疾病或失調(diào)是代謝疾病，如糖尿病或肥胖癥。本發(fā)明還提供了本發(fā)明的藥物綴合物或藥物融合體用于制造治療疾病或失調(diào)如炎癥疾病(例如，關(guān)節(jié)炎(例如，類風濕性關(guān)節(jié)炎))，或糖尿病或肥胖癥的藥物的用途。本發(fā)明還涉及在此所述的藥物融合體或藥物綴合物用于治療、診斷或預(yù)防的用途。另一方面中，本發(fā)明是非共價藥物綴合物，該綴合物包括具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，或具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)，和非共價鍵合所述VH或VL的藥物。一些實施方案中，免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列，或選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。進一步的實施方案中，本發(fā)明提供了Dom7h-8、iDom7h-8的失活形式，其不結(jié)合用作研究工具的血清白蛋白并是活性血清白蛋白結(jié)合Dom7h-8的預(yù)測。附圖簡述圖1A是通過結(jié)合小鼠血清白蛋白(MSA)選擇的三個VM的氨基酸序列的序列比對。比對的氨基酸序列來自于指定為MSA16，其也稱為DOM7m-16(SEQIDNO:l)，MSA12，其也稱為DOM7m畫12(SEQIDNO:2)，以及MSA26，其也稱為DOM7m畫26(SEQIDNO:3)的VKS。圖IB是通過結(jié)合老鼠血清白蛋白(RSA)選擇的六個VKS的氨基酸序列的序列比對。比對的氨基酸序列來自于指定為DOM7r-l(SEQIDNO:4)、DOM7r畫3(SEQIDNO:5)、DOM7r國4(SEQIDNO:6)、DOM7r國5(SEQIDNO:7)、DOM7r國7(SEQIDNO:8)以及DOM7r畫8(SEQIDNO:9)的VKS。圖1C是通過結(jié)合人血清白蛋白(HSA)選擇的六個V^的氨基酸序列的序列比對。比對的氨基酸序列是來自于指定為DOM7h-2(SEQIDNO:10)、DOM7h-3(SEQIDNO:ll)、DOM7h國4(SEQIDNO:12)、DOM7h陽6(SEQIDNO:13)、DOM7h誦l(SEQIDNO:14)以及DOM7h-7(SEQIDNO:15)的VKS。圖ID是通過結(jié)合人血清白蛋白與共有序列(SEQIDNO:23)選擇的七個VHS的氨基酸序列的序列比對。比對的氨基酸序列是來自于指定為DOM7h畫22(SEQIDNO:16)、DOM7h陽23(SEQIDNO:17)、DOM7h畫24(SEQIDNO:18)、DOM7h畫25(SEQIDNO:19)、DOM7h畫26(SEQIDNO:20)、DOM7h-21(SEQIDNO:21)以及DOM7h-27(SEQIDNO:22)的VHS。圖IE是通過結(jié)合人血清白蛋白與老鼠血清白蛋白選擇的三個VKS的氨基酸序列的序列比對。比對的氨基酸序列是來自于指定為DOM7h畫8(SEQIDNO:24)、DOM7r-13(SEQIDNO:25)和DOM7r畫14(SEQIDNO:26)的VKS。圖2A和2B是分別用于表達MSA16IL-lra(也稱為DOM7m-16/IL陽lra)和IL-lraMSA16(也稱為IL-lra/DOM7m曙16)融合體的載體的圖譜。圖2C-2D示例了編碼IL-lraMSA16融合體(也稱為IL-lra/DOM7m-16)的核苷酸序列(SEQIDNO:27)，以及該融合體的氨基酸序列(SEQIDNO:28)。圖2E-2F示例了編碼MSA16IL-Ira融合體(也稱為DOM7m-16/IL-lra)的核苷酸序列(SEQIDNO:29)，以及該融合體的氨基酸序列(SEQIDNO:30)。圖2G-2H示例了編碼不與血清白蛋白結(jié)合的DummylL-lra融合體的核苷酸序列(SEQIDNO:31)，以及該融合體的氨基酸序列(SEQIDNO:32)。圖3A示例了IL-1i秀導(dǎo)了通過Hela細胞產(chǎn)生IL-8，而且示例了在ELISA分析中檢測到IL-8的機制。圖3B的圖表顯示了，通過MRC-5細胞，IL-Ira(□，標記的"R&D")，MSA16IL-lra(■)與IL國lraMSA16(▲)每個都抑制IL畫1誘導(dǎo)的IL-8的分泌。觀察到的抑制是IL-lra，MSAl6IL-lra和IL-lraMSA16劑量依賴的。圖4A-4C的圖表顯示了，通過培養(yǎng)的MRC-5細胞，在分析中IL陽lra(□)與MSA16IL-lra(園)都抑制了IL-1諸導(dǎo)的IL-8的分泌，其包括沒有小鼠血清白蛋白(4A)，5%小鼠血清白蛋白(4B)或10%小鼠血清白蛋白(4C)。觀察到的抑制在所有測試條件下都是IL-lra和MSA16IL-1ra劑量依賴的。圖5是ELISA結(jié)果的圖示，其證實了MSA16ILl-ra融合體與IL-lraMSA16融合體都結(jié)合血清白蛋白，但是虛構(gòu)的ILl-ra融合體不結(jié)合血清白蛋白。圖6A-6C的sensograms與表格顯示了，與人血清白蛋白(HSA)結(jié)合的克隆DOM7h-l(6A)，與HAS結(jié)合的DOM7h-7(6B)，以及與老鼠血清白蛋白(RSA)結(jié)合的DOM7r-l(6C)的BIACORE親和性數(shù)據(jù)。圖7的表格顯示了DOM7h-l、D0M7r-l、DOM7h-2、DOM7r國3、DOM7h-7、DOM7h-8、DOM7r-8、DOM7r-13、DOM7r國14、DOM7m-16、DOM7h畫22、DOM7h-23、DOM7h國26、DOM7r國16、DOM7m-26、DOM7r-27以及DOM7R-31對它們結(jié)合的血清白蛋白的親和性。DOM7h-8也結(jié)合豬血清白蛋白，而且親和性(KD)為60nM。圖8A圖示了編碼人白細胞間介素1受體拮抗劑(IL-lra)的核酸的核苷酸序列(SEQIDNO:33)，該人白細胞間介素1受體拮抗劑(IL-lra)在GenBank以登錄號NM_173842保存。該核酸的開放閱讀框從笫65位開始。圖8B示例了由圖8A中所示的核酸(SEQIDNO:33)編碼的人IL-lra的氨基酸序列(SEQEDNO:34)。該成熟蛋白由152個氨基酸殘基組成(SEQIDNO:34的26-177位氨基酸殘基)。圖9顯示了單次靜脈(i.v.)注射(劑量為大約1.5mg/kg)到CD1林雄性動物中后，小鼠血清中結(jié)合dAb/HA抗原表位標簽融合蛋白的MSA的濃度(ng/mL)隨時間(天)變化的曲線圖。使用山羊抗-HA(Abeam，UK)捕獲和蛋白質(zhì)L-HRP(Invitrogen，USA)檢測試劑，通過ELISA來測定血清濃度。在存在lx小鼠血清以確保與測試樣品的可比性時，建立已知濃度的結(jié)合dAb/HA融合體的MSA的標準曲線。用一個區(qū)室模型(WinNonlinSoftware,PharsightCorp.,USA)進行模擬，顯示結(jié)合dAb/HA抗原表位標簽融合蛋白的MSA具有29.1小時的末期tl/2，與559hr>g/mL曲線下的面積。圖IO示例了通過結(jié)合老鼠血清白蛋白(RSA)選擇的VM的氨基酸序列。示例的序列來自于指定為DOM7r-15(SEQIDNO:37)、DOM7r-16(SEQIDNO:38)、DOM7r-17(SEQIDNO:39)、DOM7r畫18(SEQIDNO:40)、DOM7r-19(SEQIDNO:41)的VKS。圖11A-11B示例了結(jié)合老鼠血清白蛋白(RSA)的V朋的氨基酸序列。示例的序列是來自于指定為DOM7r-20(SEQIDNO:42)、DOM7r畫21(SEQIDNO:43)、DOM7r畫22(SEQIDNO:44)、DOM7r曙23(SEQIDNO:45)、DOM7r-24(SEQIDNO:46)、DOM7r－25(SEQIDNO:47)、DOM7r-26(SEQIDNO:48)、DOM7r-27(SEQIDNO:49)、DOM7r-28(SEQIDNO:50)、DOM7r-29(SEQIDNO:51)、DOM7r－30(SEQIDNO:52)、DOM7r畫31(SEQIDNO:53)、DOM7r-32(SEQIDNO:54)以及DOM7r-33(SEQIDNO:55)的VHS。圖12顯示了單次靜脈(i.v.)注射(劑量為大約1.5mg/kg)到CD1林雄性動物中后，D0M7m-16、DOM7m-26或不結(jié)合MSA的對照dAb的濃度隨時間變化的曲線圖，其中D0M7m-16，DOM7m-26或不結(jié)合MSA的對照dAb每個都含有HA抗原表位標簽。使用山羊抗-HA(Abeam，UK)捕獲和蛋白質(zhì)L-HRP(Invitrogen，USA)檢測試劑，通過ELISA來測定血清濃度。在存在lx小鼠血清以確保與測試樣品的可比性時，建立已知濃度的結(jié)合dAb/HA融合體的MSA的標準曲線。用一個區(qū)室模型(WinNonlinSoftware,PharsightCorp"USA)進行模擬，顯示對照dAb具有20分鐘的末期tl/2|3，而DOM7m-16，DOM7m-26在血清中持續(xù)的顯著更長。圖13的圖表顯示了，在小鼠膠原質(zhì)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)模型中，DOM7m-16/IL－lra治療關(guān)節(jié)炎比IL-Ira或ENBREL(entarecept;ImmunexCorporation)更有效。諸導(dǎo)關(guān)節(jié)炎，而且從第21天開始，用0.4mg/Kg(類固醇)的地塞米松、1mg/Kg的(IL-lra/抗-SAlmg/kg)或10mg/Kg(IL畫lra/抗－SA10mg/kg)的DOM7m－16/IL-lra、1mg/Kg或10mg/Kg的IL-lra、5mg/Kg的ENBREL(entarecept;ImmunexCorporation)或鹽處理小鼠。結(jié)果顯示，在該研究中DOM7m-16/IL-lraHsIL畫lra或ENBREL(entarecept;imm[upsilonnexCorporation)更有效。對IL-lra的應(yīng)答是劑量依賴的，如所預(yù)期的，對DOM7m-16/IL-lra的應(yīng)答也是劑量依賴的。用1mg/Kg的DOM7m-16/IL-lra處理的平均分數(shù)始終如一;^M氐于用10mg/kg的IL-lra處理獲得的平均分數(shù)。該結(jié)果表明，在該研究中用DOM7m-16/IL-lra處理比IL-lra有效10倍。圖14A-14G示例了皂草素多肽的氨基酸序列，圖14A示例了以Swissprot登錄號P27559保藏的皂草素-2前體的氨基酸序列(SEQIDNO:60)。信號肽是SEQIDNO:60的1-24位氨基酸。圖14B示例了以Swissprot登錄號P27560保藏的皂草素-3的氨基酸序列(SBQIDNO:61)。圖14C示例了以Swissprot登錄號P27561保藏的皂草素國4前體的氨基酸序列(SEQIDNO:62)。信號肽為SEQIDNO:62的第1-24位氨基酸。圖14D示例了以Swissprot登錄號Q41389保藏的皂草素-5的氨基酸序列(SEQIDNO:63)。圖14E示例了以Swissprot登錄號P20656保藏的皂草素-6前體的氨基酸序列(SEQIDNO:64)。信號肽為SEQIDNO:64的第1-24位氨基酸，而且可能的前肽propeptide為SEQIDNO:64的第278-299位氨基酸。成熟多肽為SEQIDNO:64的第25-277位氨基酸(SEQIDNO:65)。圖14F示例了以Swissprot登錄號Q41391保藏的皂草素-7的氨基酸序列(SEQIDNO:66)。圖14G示例了包括皂草素-6的幾個變體和同工型的共有氨基酸序列(SEQIDNO:67)。圖15示例了WO2004/041862中所述的結(jié)合小鼠血清白蛋白的幾個F冊的氨基酸序列。序列A(SEQIDNO:72)、序列B(SEQIDNO:73)、序列C(SEQIDNO:74)、序列D(SEQIDNO:75)、序列E(SEQIDNO:76)、序列F(SEQIDNO.77)、序列G(SEQIDNO:78)、序列H(SEQIDNO:79)、序列I(SEQIDNO:80)、序列J(SEQIDNO:81)、序列K(SEQIDNO:82)、序列L(SEQIDNO:83)、序列M(SEQIDNO:84)、序列N(SEQIDNO:85)、序列O(SEQIDNO:86)、序列P(SEQIDNO:87)、序列Q(SEQIDNO:88)。圖16A是編碼Pro9GLP-l-Dom7h8融合體的核苷酸序列(SEQIDNO:175)和融合體的氨基酸序列(SEQIDNO:176)的說明。圖16B是編碼[Pro9GLP-l-PSS-Dom7h8融合體的核苷酸序列(SEQIDNO:177)和融合體的氨基酸序列(SEQIDNO:178)的說明。圖16C是編碼[PiVGLP-l-PSSGAP-Dom7h8融合體的核苷酸序列(SEQIDNO:179)和融合體的氨基酸序列(SEQIDNO:180)的說明。圖17是顯示了具有與GLP-1對照(▲)、Exendin-4(T)相等的劑量依賴性細胞增殖活性的[PiVGLP-l-PSSGAP-Dom7h8融合體(€)的圖。基礎(chǔ)零對照顯示為(□)。圖18是顯示了具有與GLP-1對照(▲)、Exendin-4(T)相等的劑量依賴性胰島素釋放的[Pro9]GLP-l-PSSGAP-Dom7h8融合體(€)的圖。基礎(chǔ)零對照顯示為(□)。圖19A畫19C各自i兌明了Dom7h陽8PYY(3-36)(SEQIDNO:181)、PYY(3陽36)DOM7h-8(SEQIDNO:182)和[Pr。9GLP曙l(3-37)-DOM7h-8PYY(3-36)(SEQIDNO:183)融合體的氨基酸序列。發(fā)明詳述如在此使用的，"藥物"指任何化合物(例如，小的有機分子、核酸、多肽)，其給藥給個體以通過結(jié)合和/或改變個體中的生物學(xué)靶分子的功能，而產(chǎn)生有利的治療或診斷效果。靶分子可以是由個體的基因組編碼的內(nèi)源靶分子(例如，由個體的基因組編碼的酶、受體、生長因子、細胞因子)，或者由病原體的基因組編碼的外源靶分子(例如，由病毒、細菌、真菌、線蟲類或其它的病原體編碼的酶)。如在此使用的術(shù)語"藥物基礎(chǔ)"指基于用于分析，測定或確定活性的藥物(或藥物部分)的量標準化的藥物組合物和藥物的活性。一般，本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的分子量比它們包含的藥物的分子量大。因此，按重量計算，等量的藥物組合物和藥物，將包含不同分子或摩爾基礎(chǔ)量的藥物。例如，如果本發(fā)明的藥物組合物的分子量是它包含的藥物的分子量的兩倍，可以使用2fig的藥物組合物和lug藥物，根據(jù)"藥物基礎(chǔ)"來測定200580047647.9說明書活性，因為這些量將包含相同量的藥物(與游離藥物或藥物組合物的部分)。使用適當?shù)挠嬎?，例如，通過根據(jù)每個靶結(jié)合位點基礎(chǔ)表示活性，或?qū)τ诿杆幬锔鶕?jù)每個活性位點基礎(chǔ)，可以對活性進行標準化，并以"藥物基礎(chǔ)"表示。如在此使用的，"藥物組合物"指包括與多肽結(jié)合部分共價或非共價鍵合的藥物的組合物，其中多肽結(jié)合部分含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)。藥物組合物可以是綴合物，其中藥物與多肽結(jié)合部分共價或非共價鍵合。藥物可與多肽結(jié)合部分直接或間接地共價或非共價鍵合(例如，通過合適的連接體和/或互補結(jié)合伴體(例如，生物素和抗生物素蛋白)的非共價鍵合)。當應(yīng)用互補結(jié)合伴體時，一個結(jié)合伴體可直接與藥物共價鍵合或通過合適的連接體部分與藥物結(jié)合，而且互補結(jié)合伴體可與多肽結(jié)合部分直接共價鍵合或通過合適的連接體部分與多肽結(jié)合。當藥物時多肽或肽時，藥物組合物可以是融合蛋白，其中多肽或肽藥物與多肽結(jié)合部分是連續(xù)多肽鏈的離散部分(部分(moieties))。如在此使用的"綴合物"指包括抗體的抗原結(jié)合片段的組合物，該抗體結(jié)合與藥物結(jié)合的血清白蛋白。這種綴合物包括"藥物綴合物"，其包括抗體的抗原結(jié)合片段，該抗體結(jié)合與藥物共價鍵合的血清白蛋白，以及"非共價藥物綴合物"，其包括抗體的抗原結(jié)合片段，該抗體結(jié)合與藥物非共價鍵合的血清白蛋白。如在此使用的，"藥物綴合物"指包括抗體的抗原結(jié)合片段的組合物，該抗體結(jié)合與藥物共價鍵合的血清白蛋白。藥物可直接或通過合適的連接體部分間接與抗原結(jié)合片段共價鍵合。藥物可在任何合適的位置與抗原結(jié)合片段結(jié)合，例如，氨基-末端，羧基末端或通過合適的氨基酸側(cè)鏈(例如，賴氨酸的s氨基)。如在此使用的，"非共價藥物綴合物"指包括抗體的抗原結(jié)合片段的組合物，該抗體結(jié)合與藥物非共價鍵合的血清白蛋白。藥物可直接(例如，靜電作用、疏水作用)或間接(例如，通過互補結(jié)合伴體(例如，生物素和抗生物素蛋白)的非共價鍵合，其中一個伴體與藥物共價鍵合，而且互補結(jié)合伴體與抗原結(jié)合片段共價鍵合)與抗原結(jié)合片段非共價鍵合。當使用互補結(jié)合伴體時，一個結(jié)合伴體可直接或通過合適的連接體部分與藥物共價鍵合，而且互補結(jié)合伴體可直接或通過合適的連接體部分與結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合部分共價鍵合。如在此使用的，"藥物融合體"指融合蛋白，其包括結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段和多肽藥物。結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段和多肽藥物以一個連續(xù)多肽鏈的離散部分(moieties部分)存在。如在此所用的術(shù)語"白蛋白結(jié)合殘基，，意思是非共價鍵合人血清白蛋白的殘基。連接治療多肽的白蛋白結(jié)合殘基通常具有低于10nM的人血清白蛋白親和性，優(yōu)選低于lpM。一實施方案中，各種白蛋白結(jié)合殘基是已知的，其中為含有4-40個碳原子的直鏈和支鏈親脂性部分、具有環(huán)戊二烯并菲骨架的化合物、具有10-30個氨基酸殘基的肽等。如在此使用的"白細胞間介素1受體拮抗劑"(IL-lra)指天然存在的或內(nèi)源的哺乳動物IL-lra蛋白，以及具有與天然存在的或內(nèi)源的相應(yīng)哺乳動物IL-lra蛋白相同的氨基酸序列的蛋白質(zhì)(例如，重組蛋白、合成蛋白(也即，使用合成有機化學(xué)方法產(chǎn)生的))。因此，如這里限定的，該術(shù)語包括IL-lra的成熟蛋白，多態(tài)或等位基因變體，以及其它的同工型(例如，通過選擇性剪接或其它的細胞方法產(chǎn)生的)，以及前述的修飾或非修飾形式(例如，脂質(zhì)化、糖基化、PEG化)。天然存在的或內(nèi)源IL-lra包括野生型蛋白，如天然存在于哺乳動物(例如，人或非人的靈長類動物)中的成熟IL-lra，多態(tài)或等位基因變體以及其它同工型。這種蛋白質(zhì)例如可從天然產(chǎn)生IL-lra的來源重新獲得或分離。這些蛋白質(zhì)，和具有與天然存在的或內(nèi)源的相應(yīng)IL-lra相同的氨基酸序列的IL-lra蛋白，以相應(yīng)的哺乳動物的名稱稱呼。例如，當相應(yīng)的哺乳動物是人時，該蛋白質(zhì)指定為人IL-lra。IL-lra的"功能性變體"包括可使用合適的方法(例如，突變(例如，化學(xué)突變，輻射突變)，重組DNA技術(shù))產(chǎn)生的功能性片段，功能性突變蛋白，和/或功能性融合蛋白。"功能性變體"拮抗白細胞間介素-l型l受體。一般，相對于成熟IL-lra，IL-lra的片段或部分包括具有氨基酸(也即一個或多個氨基酸)缺失和/或添加(也即，一個或多個缺失和/或添加)的那些IL-lra(如N-端、C-端或內(nèi)部缺失)。相對于成熟IL-lra，其中只缺失連續(xù)氨基酸或其中只缺失非連續(xù)氨基酸的片段或部分也是預(yù)見的。人IL-lra的功能性變體可與成熟的152個氨基酸形式的人IL-lra具有至少大約80%，或至少大約85%，或至少大約卯％，或至少大約95%，或至少大約96%，或至少大約97%，或至少大約98%，或至少大約99%的氨基酸序列同一性，并拮抗人白細胞間介素-1型1受體。(參見，Eisenberg等，Nat訓(xùn)343:341誦346(1990))變體可包括一個或多個添加的氨基酸(例如，包括153或154或多個氨基酸)。例如，變體IL-lra的氨基酸序列包括氨基末端的甲硫氨酸殘基，后面是SEQIDNO:33的26到177殘基。(KINERET(anakinra)，AmgenInc.)如在此關(guān)于多肽所用的術(shù)語"類似物"意思是修飾的肽，其中肽的一個或多個氨基酸殘基已經(jīng)由其他氨基酸殘基置換和/或其中一個或多個氨基酸殘基已經(jīng)從肽刪除和/或其中一個或多個氨基酸殘基已經(jīng)從肽刪除和或其中一個或多個氨基酸殘基已經(jīng)添加至肽。這樣的氨基酸殘基的添加或刪除可以發(fā)生在肽的N-端和/或肽的C-端或可以在肽內(nèi)部。使用簡單的系統(tǒng)來描述GLP-1的類似物例如，[Arg34GLP-l(7-37)Lys指定GLP-1類似物，其中在位置34天然產(chǎn)生的賴氨酸已經(jīng)由精氨酸置換并將賴氨酸殘基添加至C-端(位置38)。使用根據(jù)IUPAC-IUB命名法所用的氨基酸標準單字母縮寫來描繪肽類似物及其衍生物的通式。如在此所用的術(shù)語"GLP-1肽"意思是GLP-1(7-37)(SEQIDNo.158)或GLP畫1(7-36)(SEQIDNo.159)、GLP畫1類似物、GLP國1衍生物或GLP-1類似物的衍生物。這樣的肽、類似物和衍生物是促胰島素劑。如在此所用的術(shù)語"促胰島素劑"意思是能夠刺激或引起激素胰烏素的刺激、合成或表達或活性的化合物。促胰島素劑的實例包括但不限于葡萄糖、GIP、GLP、Exendin和OXM。如在此所用的術(shù)語"腸促胰島素"意思是一種在葡萄糖水平正常時或特別是升高時引起釋放的胰島素含量增加的胃腸激素。例如，它們包括GLP畫1、GLP和OXM。如在此所用的術(shù)語"exendin-4肽"意思是exendin-4(1-39)、exendin國4類孑以物、exendin-4矛斤生物或exendin-4類4以物的矛;f生物。一實施方案中，exendin-4肽是促胰島素劑。這樣的肽、類似物和衍生物是促胰島素劑。如在此關(guān)于多肽所用的術(shù)語"DPP-IV保護的"意思是為了給予所述化合物對血漿肽酶二肽酰氨基肽酶-4(DPP-IV)的抗性而已經(jīng)修飾的多肽(例如，化學(xué)修飾)。已知血漿中DPP-IV酶涉及幾種肽激素的降解，例如GLP-1、GLP-2等。因此，為了降低DPP-IV降解的速率和/或程度，進行了相當?shù)呐戆l(fā)展對DPP-IV介導(dǎo)的水解敏感的多肽的類似物和衍生物。如在此使用的"皂草素"指由植物肥皂草(Sfl/7諸"n'fl6|//C/Wfl//S)產(chǎn)生的單鏈核糖體非活性多肽家族。(Stirpe，F(xiàn).，等，Biochem.J.216:617-625(1983)，Bagga，S.等，J.Biol.Chem.278:4813-4820(2003).)。急草素多肽以長度和/或氨基酸序列不同的幾種形式存在。(參見，例如，Id.和Barthelemy，I.等，J.Biol.Chem.268:6541畫6548(1993).)。皂草素-6是最有活性的皂草素形式。(Bagga，S.等，J.Biol.Chem.278:4813-4820(2003).)已經(jīng)描述了至少4種天然存在的皂草素-6的同工型，其中成熟多肽(SEQIDNO:61)的第48位氨基酸是Asp或Glu，成熟多肽(SEQIDNO:61)的第91位氨基酸是Arg或Lys。(Barthelemy,I.等，J.Biol.Chem.268:6541-6548(1993).)其它形式的皂草素-6包括多肽，其中成熟多肽(SEQIDNO:65)的第99位氨基酸是Ser或Leu;成熟多肽(SEQIDNO:65)的第134位氨基酸是Gin或Lys;成熟多肽(SEQIDNO:65)的第147位氨基酸是Ser或Leu;成熟多肽(SEQIDNO:65)的第149位氨基酸是Ser或Phe;成熟多肽(SEQIDNO:65)的笫162位氨基酸是Asp或Asn;成熟多肽(SEQIDNO:65)的第177位氨基酸是Ala或Val;成熟多肽(SEQIDNO:65)的第188位氨基酸是lie或Thr;成熟多肽(SEQIDNO:65)的第196位氨基酸是Asn或Asp;成熟多肽(SEQIDNO:65)的第198位氨基酸是Glu或Asp;成熟多肽(SEQIDNO:65)的第231位氨基酸是Asn或Ser;成熟多肽(SEQIDNO:65)的笫233位氨基酸是Lys或Arg。包括這些同工型和變體的共有序列如圖14G所示(SEQIDNO:67)。因此，術(shù)語"皂草素"包括前體蛋白、成熟蛋白、天然蛋白、多肽或等位基因變體，和其它的同工型(例如，通過選擇性剪接或其它的細胞方法產(chǎn)生的)，以及前述的修飾或非修飾形式(例如，脂質(zhì)化、糖基化、PEG化)，包括天然存在的，合成的或重組產(chǎn)生的多肽。天然存在的或內(nèi)源皂草素包括野生型蛋白如成熟皂草素(例如，成熟皂草素-6)，天然存在于肥皂草中多態(tài)或等位基因變體和其它的同工型。這些蛋白質(zhì)可使用任何合適的方法從肥皂草重新獲得或分離。皂草素的"功能性變體"包括可使用合適的方法(例如，突變(例如，化學(xué)突變，輻射突變)，重組DNA技術(shù))產(chǎn)生的功能性片段，功能性突變蛋白，和/或功能性融合蛋白。一般，相對于成熟皂草素，皂草素(例如，皂草素-5)的片段或部分包括具有氨基酸缺失和/或添加(也即，一個或多個氨基酸缺失和/或添加)的那些皂草素(如N-端，C-端或內(nèi)部缺失)。相對于成熟皂草素，其中只缺失連續(xù)的氨基酸，或其中只缺失非連續(xù)的氨基酸的片段或部分也是預(yù)見的?？梢灾苽湓聿菟氐母鞣N功能性變體。例如，已經(jīng)制備了含有氨基-末端延伸的皂草素-6的融合蛋白，而且顯示在兔網(wǎng)狀細胞溶解產(chǎn)物分析中保持全部的核糖體抑制活性。(Barthelemy，L等，J，BiolChem.268:6541-6548(1993).)變體或皂草素-6是一個活性位點殘基，Tyr72、Tyrl20、Glul76、Arg179或Trp208(SEQIDNO:65的第72、120、176、179或208位氨基酸)被丙氨酸取代，而且其在離體分析中細胞毒性降低。(Bagga,S.等，J，BiolChan.278:4813-4820(2003).)。因此，如果需要制備皂草素另外的功能性變體，應(yīng)該避免活性位點殘基的突變，置換，取代，缺失或修飾。優(yōu)選地，含有比天然存在的成熟多肽少的氨基酸的皂草素的功能性變體，至少包括活性位點。例如，皂草素-6的變體，其含有比天然存在的成熟皂草素-6少的氨基酸，包括成熟皂草素-6的活性位點殘基(Tyr72、Tyrl20、Glul76、Arg179和Trp208(SEQIDNO:65的笫72、120、176、179和208位氨基酸))，而且長度為至少大約137個氨基酸，長度為至少大約150個氨基酸，長度為至少大約175個氨基酸，長度為至少大約200個氨基酸，長度為至少大約225個氨基酸，或長度為至少大約250個氨基酸。皂草素的"功能性變體"具有核糖體滅活活性(例如，rRNAN-糖苷酶活性)和/或細胞毒性。這種活性可使用任何合適的方法分析，如胞系的任何熟知細胞毒素分析。(參見，例如，Bagga，S.等，J.BiolChem.278:4813-4820(2003)和Barthelemy,I，等，J.BiolChem.268:6541-6548(1993))在一些實施方案中，皂草素的功能性變體與成熟皂草素-6(SEQIDNO:65)具有至少大約80%,或至少大約85%，或至少大約90°/o，或至少大約91%，或至少大約92%，或至少大約93°/。，或至少大約94%,或至少大約95°/。，或至少大約96%，或至少大約97%，或至少大約98%，或至少大約99%的氨基酸序列同一性。本發(fā)明涉及包括藥物和藥物結(jié)合部分的藥物組合物，該多肽結(jié)合部分含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)。如這里關(guān)于藥物組合物詳細所述的，該藥物組合物包括特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，藥物與多肽結(jié)合部分可彼此共價或非共價鍵合。在一些實施方案中，藥物組合物是包括多肽藥物與多肽結(jié)合部分的融合蛋白，該多肽結(jié)合部分含有一個能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的抗原結(jié)合部分。在其它的實施方案中，藥物組合物包括與多肽結(jié)合部分共價或非共價鍵合的藥物，該多肽結(jié)合部分含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的抗原結(jié)合位點。本發(fā)明涉及藥物組合物包括藥物和多肽結(jié)合部分含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)具有結(jié)合特異性多肽提高體內(nèi)血清半衰期。如在此所述的詳細關(guān)于藥物組合物包括抗原結(jié)合片段抗體的具有血清白蛋白結(jié)合特異性，藥物和多肽結(jié)合部分相互共價鍵合或非共價。一些實施方案中，藥物組合物是融合蛋白包括多肽藥物和多肽結(jié)合部分含有抗原結(jié)合位點具有多肽結(jié)合特異性提高體內(nèi)血清半衰期。其他實施方案中，藥物組合物包括藥物共價或非共價鍵合多肽結(jié)合部分含有抗原結(jié)合位點具有結(jié)合特異性多肽提高體內(nèi)血清半衰期。通常，增加體內(nèi)血清半衰期的多肽是這樣的多肽，其在體內(nèi)天然出現(xiàn)，并且抵抗降解或者被內(nèi)源性機制除去，所述內(nèi)源性機制將不需要的物質(zhì)從生物體(例如人)中除去。例如，增加體內(nèi)血清半衰期的多肽可以選自下列蛋白來自細胞外基質(zhì)的蛋白，血液中存在的蛋白，血腦屏障或神經(jīng)組織中存在的蛋白，定位于腎、肝臟、肺、心臟、皮膚或骨中的蛋白，應(yīng)激蛋白，疾病特異性蛋白，或參與Fc轉(zhuǎn)運的蛋白。增加體內(nèi)血清半衰期的合適的多肽包括，例如，鐵傳遞蛋白受體特異性配體-神經(jīng)藥劑融合蛋白(參見，美國專利號5，977，307，其教導(dǎo)引入這里作為參考)，腦毛狀內(nèi)皮細胞受體，鐵傳遞蛋白，鐵傳遞蛋白受體(例如，可溶的鐵傳遞蛋白受體)，胰島素，胰島素樣生長因子1(IGF1)受體，胰島素樣生長因子2(IGF2)受體，胰島素受體，血液凝結(jié)因子Xal-抗胰蛋白酶和HNFl-a。增加體內(nèi)血清半衰期的合適的多肽還包括a-l糖蛋白類(a-酸性糖蛋白；AAG)，a-l抗胰凝乳蛋白酶(ACT)、a-l微球蛋白(HC蛋白；AM)、抗凝血酶III(ATIII)、載脂蛋白A-l(ApoA-I)、載脂蛋白B(ApoB)、血漿銅藍蛋白(Cp)、補體成分C3(C3)、補體成分C4(C4)、CI酯酶抑制劑(CIINH)、C-反應(yīng)性蛋白(CRP)、鐵蛋白(FER)、血液結(jié)合素(HPX)、脂蛋白(a)(Lp(a))、甘露糖結(jié)合蛋白(MBP)、肌球素(Myo)、前白蛋白(甲狀腺素運載蛋白；PAL)、維生素A結(jié)合蛋白(RBP)以及類風濕因子(RF)。來自細胞外基質(zhì)的合適的蛋白質(zhì)包括，例如，膠原質(zhì)、層粘連蛋白、整聯(lián)蛋白和纖連蛋白。膠原質(zhì)是細胞外基質(zhì)的主要蛋白質(zhì)。目前已知大約15種膠原質(zhì)分子，其發(fā)現(xiàn)于機體的不同部分，例如，I型膠原質(zhì)(占機體膠原質(zhì)的90%)發(fā)現(xiàn)于骨、皮膚、腱、韌帶、角膜、內(nèi)臟，或II型膠原質(zhì)發(fā)現(xiàn)于軟骨，脊推盤，脊索和眼睛的玻璃狀液。來自血液的合適的蛋白質(zhì)包括，例如，血漿蛋白質(zhì)(例如，纖維蛋白、a-2巨球蛋白、血清白蛋白、纖維蛋白原(例如，纖維蛋白原A、纖維蛋白原B)，血清淀粉樣蛋白A、結(jié)合珠蛋白、抑制蛋白、遍在蛋白質(zhì)、子宮球蛋白和P-2-微球蛋白，酶和酶抑制劑(例如，血漿酶原，溶解酵素，半胱氨酸蛋白酶抑制劑C，a-l-抗胰蛋白酶和胰腺胰蛋白酶抑制劑)，免疫系統(tǒng)的蛋白質(zhì)，如免疫球蛋白(例如，IgA、IgD、IgE、IgG、IgM、免疫球蛋白輕鏈(kA))、轉(zhuǎn)運蛋白(例如，微生素A結(jié)合蛋白，a-l微球蛋白)，防御素(例如，p-防御素1、嗜中性粒細胞防御素1、嗜中性粒細胞防御素2和嗜中性粒細胞防御素3)，等等。在血液腦障礙物或神經(jīng)組織中發(fā)現(xiàn)的合適的蛋白質(zhì)包括，例如，黑腎上腺皮質(zhì)激素受體，髓磷脂，抗壞血酸轉(zhuǎn)運蛋白，等等。增加體內(nèi)血清半衰期的合適的多肽還包括定位于腎的蛋白質(zhì)(例如，聚胱氨酸、IV型膠原質(zhì)、有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白Kl、埃曼氏抗原)，定位于肝臟的蛋白質(zhì)(例如，乙醇脫氫酶、G250)，定位于肺的蛋白質(zhì)(例如，分泌成分，其結(jié)合IgA)，定位于心臟的蛋白質(zhì)(例如，HSP27，其與擴張心臟病相關(guān))，定位于皮膚的蛋白質(zhì)(例如，角蛋白)，骨特異性蛋白如成形素蛋白(BMP),其是證明具有成骨活性的轉(zhuǎn)化生長因子P超家族蛋白的亞型(例如，BMP-2，BMP-4，BMP-5，BMP國6、BMP-7、BMP-8)，腫瘤特異性蛋白(例如，滋養(yǎng)層抗原，herceptin受體，雌激素受體，組織蛋白酶(例如，組織蛋白酶B，其可發(fā)現(xiàn)于肝臟和脾)。合適的疾病特異性蛋白質(zhì)包括，例如，僅僅在激活的T細胞上表達的抗原，包括LAG-3(淋巴細胞活化基因)、骨保護素配體(OPGL;參見，Nature402，304-309(1999))、OX40(TNF受體家族的成員，表達于激活的T細胞上，而且特別地在人T細胞白血病病毒I型(HTLV-I)產(chǎn)生細胞中上調(diào)；參見Immunol.165(1):263-70(2000))。合適的疾病特異性蛋白質(zhì)還包括，例如，金屬蛋白酶(與關(guān)節(jié)炎/癌癥相關(guān))包括果錄CG6512、人paraplegin、人FtsH、人AFG3L2、鼠的ftsH和血管生成生長因子，包括酸性成纖維細胞生長因子(FGF-1)、堿性成纖維細胞生長因子(FGF-2)、血管內(nèi)皮生長因子/血管通透因子(VEGF/VPF)轉(zhuǎn)化生長因子-a(TGFa)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、血管生成素、白細胞介素-3(IL-3)、白細胞介素-8(IL-8)，血小板衍生內(nèi)皮生長因子(PD-ECGF)、胎盤生長因子(P1GF)、midkine血小板衍生生長因子-BB(PDGF)以及fractalkine。增加體內(nèi)血清半衰期的合適的多肽還包括應(yīng)激蛋白如熱激蛋白(HSP)。HSP通常發(fā)現(xiàn)于細胞內(nèi)。當于細胞外發(fā)現(xiàn)它們時，它是細胞已經(jīng)死亡而且溢出它的內(nèi)含物的指示。當由于外傷，疾病或損傷時，這種未編程的細胞死亡(壞死)發(fā)生，細胞外的HSP引發(fā)來自免疫系統(tǒng)的應(yīng)答。結(jié)合細胞外的HSP可導(dǎo)致本發(fā)明的組合物定位于疾病位點。參與Fc轉(zhuǎn)運的合適的蛋白質(zhì)包括，例如，Brambell受體(亦稱FcRB)。這種Fc受體具有兩個作用，二者都可能用于傳遞。作用是(l)把IgG從母親跨越胎盤轉(zhuǎn)運到幼兒(2)保護IgG以免降解從而延長它的血清半衰期。人們認為該受體重復(fù)利用來自核內(nèi)體的IgG。(參見，Holliger等，NatBiotechnol15(7):632國6(1997).)。本發(fā)明的藥物組合物可包括含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的任何多肽結(jié)合部分，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。優(yōu)選地，多肽結(jié)合部分包括至少31，至少大約40，至少大約50，至少大約60，至少大約70，至少大約80個氨基酸，至少大約90個氨基酸，至少大約IOO個氨基酸或至少大約IIO個氨基酸作為一個單獨的分子實體。優(yōu)選地，多肽結(jié)合部分結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，該多肽的KD為至少大約大約5mMKD(KD=Koff(kd)/Kon(ka))。在一些實施方案中，多肽結(jié)合部分結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，該多肽的KD為大約IO到大約100nM，或大約100nM到大約500nM，或大約500nM到大約5mM，如通過表面胞質(zhì)基因共振所測定的(例如，使用BIACORE儀器)。在特定的實施方案中，多肽結(jié)合部分結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，該多肽的KD為大約50nM，或大約70nM，或大約100納米，或大約150nM或大約200nM。優(yōu)選地，含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，不是原核生物的或細菌多肽或肽。優(yōu)選地，多肽結(jié)合部分是真核生物的，哺乳動物或人多肽或肽。在某些實施方案中，含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分，是折疊蛋白功能域。在其他的實施方案中，多肽結(jié)合部分以分子量為至少大約4KDa，至少大約4.5KDa，至少大約5KDa，至少大約5.5KDa，至少大約6KDa，至少大約6.5KDa，至少大約7KDa，至少大約7.5KDa或至少大約8KDa，作為一個單獨的分子實體。含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的合適的多肽結(jié)合部分，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，可以使用任何合適的方法進行鑒定，如通過在合適的附著分析中篩選天然存在或非天然存在的多肽。如這里所描述的，優(yōu)選的多肽結(jié)合部分，其具有用于增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的抗原結(jié)合位點，是能特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段。不過，能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的其他多肽的抗體的抗原結(jié)合片段，可用于本發(fā)明。如果需要，結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段的一個或多個互補決定區(qū)(CDR)，可以制成保留抗體或抗原結(jié)合片段的抗原結(jié)合特異性的非免疫球蛋白結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的藥物組合物可包括這種非免疫球蛋白結(jié)合部分。這種非免疫球蛋白結(jié)合部分可使用任何合適的方法制備，例如天然的細菌受體如SpA已經(jīng)用作支架用于嫁接CDR，以產(chǎn)生特異性結(jié)合抗原表位的多肽結(jié)合部分。美國專利申請?zhí)?,831,012中描述了這種方法的細節(jié)，其教導(dǎo)引入這里作為參考。其他合適的支架包括那些基于纖粘連蛋白和親和體。WO98/58965中詳細描述了合適的方法。其它合適的支架包括lipocallin和CTLA4，如vandenBeuken等，J.Mol.Biol.310:591-601(2001)中所述，以及支架如WO00/69907(MedicalResearchCouncil)中所描述的那些支架，其基于例如細菌GroEL或其他的伴倡多肽的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包括能特異性結(jié)合血清白蛋白的非免疫球蛋白結(jié)合部分，其中非免疫球蛋白結(jié)合部分包括這里所述的VH，Vk或Vhh的一個，兩個或三個CDR，和一個合適的支架。在某些實施方案中，非免疫球蛋白結(jié)合部分包括這里所述的VH，Vk或Vhh的CDR3，而不是CDRl或CDR2，和一個合適的支架。在其他的實施方案中，非免疫球蛋白結(jié)合部分包括這里所述的VH，VK或Vhh的CDRl和CDR2，而不是CDR3，和一個合適的支架。在其他的實施方案中，非免疫球蛋白結(jié)合部分包括這里所述的VH，V,或Vhh的CDR1，CDR2和CDR3，和一個合適的支架。在其他的實施方案中，藥物組合物僅僅包括這里所述的VH，Vk或Vhh的CDR3，和藥物。本發(fā)明的藥物組合物可使用合適的方法制備，如這里描述的用于制備藥物融合體，藥物綴合物和非共價藥物綴合物的方法。另外，本發(fā)明的藥物組合物具有這里詳細描述的關(guān)于藥物融合體，藥物綴合物和非共價藥物綴合物的優(yōu)點和用途。本發(fā)明提供了藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，與單獨的藥物(非綴合的藥物，非融合的藥物)相比較，其具有提高的藥物動力學(xué)特性(例如，增加血清半衰期)及其他的優(yōu)點。藥物綴合物，非共價的藥物綴合物和藥物融合體包括，能特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，和一種或多種想要的藥物。如這里所述，本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，相較于單獨的藥物，具有顯著延長的體內(nèi)血清半衰期和/或增加的AUC。而且，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)中藥物的活性通?；旧蠜]有改變。但是，與單獨的藥物相比，藥物組合物的活性的一些改變是可接受的，而且通常被藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的提高的藥物動力學(xué)特性所補償。例如，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)可以低于單獨的藥物的親和性結(jié)合藥物靶，但是與單獨的藥物相比較，由于藥物組合物提高的藥物動力學(xué)特性(例如，延長的體內(nèi)血清半衰期，較大的AUC)，而具有大約相等的或較高的功效。此外，可以給藥較低量的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物和藥物融合體)，而達到想要的治療或診斷效果。藥物組合物的活性優(yōu)選與單獨的藥物有至多大約100，或至多大約50，或至多大約IO，或至多大約5，或至多大約4，或至多大約3，或至多大約2分之一不同。例如，藥物可具有1nM的KD，Ki或中和劑量50(ND50)，而藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)可具有大約2nM，或大約3nM，或大約4nM，或大約5nM，或大約10nM的KD，Ki或ND50。優(yōu)選地，與藥物的活性相比較，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的活性，基本上沒有降低。在某些實施方案中，相對于藥物的活性，藥物組合物的活性降低至多大約10%,至多大約9%，至多大約8%，至多大約7%，至多大約6%，至多大約5%，至多大約4%，至多大約3%，至多大約2%，至多大約1%，或基本上沒有變化。替換地陳述，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)保留至少大約90%，至少大約91%，至少大約92%，至少大約93%,至少大約94%，至少大約95%，至少大約96%，至少大約97%，至少大約98%,至少大約99%的藥物活性，或基本上與藥物相同的活性。優(yōu)選地，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)和藥物的活性基于"藥物基礎(chǔ)"進行測定和/或比較。如這里描述和顯示的，本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)具有比單獨的藥物更高的活性(例如，體內(nèi)活性)。例如，如實施例6中所示，當這些試劑按體重計以相同的劑量(10mg/Kg或1mg/Kg)給藥時，在小鼠模型中DOM7m-16/IL-lra治療關(guān)節(jié)炎比IL-lra更有效。DOM7m-16/IL-lra是更有效的，盡管它的分子量是IL-lra的分子量的大約兩倍。因此，接受DOM7m-16/IL-lra的小鼠只接受大約一半的接受IL-lra的小鼠的IL-lra(作為DOM7m-16/IL1-ra中的部分)。在某些實施方案中，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)具有比藥物更高的活性(例如，體內(nèi)活性)，藥物組合物可具有至少大約100%，至少大約150%，至少大約200%，至少大約250%，至少大約300%,至少大約350%，至少大約400%，至少大約450%,或至少大約500%的藥物活性。優(yōu)選地，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)和藥物的活性基于"藥物基礎(chǔ)"進行測定和/或比較。藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)和藥物的活性使用合適的體外或或體內(nèi)系統(tǒng)進行測定。在某些實施方案中，如體內(nèi)所測定的，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)具有比它包含的藥物更高的活性。在其他的實施方案中，如體外所測定的，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)具有比它包含的藥物更高的活性。藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，其包括能特異性結(jié)合血清白蛋白的功能抗體(dAb)，提供了另外的優(yōu)點。功能抗體是很穩(wěn)定的，比抗體及抗體其他抗原結(jié)合片段小，通過在大腸桿菌或酵母(例如，巴斯德畢赤氏酵母)中表達可以高產(chǎn)量生產(chǎn)，而且如這里所述的，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，可以很容易地選自人來源的文庫或任何想要的物種。因此，包含結(jié)合血清白蛋白的dAb的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，可以比通常在哺乳動物細胞中生產(chǎn)的治療劑(例如，人，人化或嵌合的抗體)更容易地生產(chǎn)，而且可以使用非免疫原性的dAb(例如，人dAb可用于藥物融合體或藥物綴合物，用于治療或診斷人類的疾病)。當藥物是包含結(jié)合血清白蛋白的多肽結(jié)合部分(例如，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段)的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的部分時，藥物的免疫原性可能被降低。因此，在包含結(jié)合血清白蛋白的多肽結(jié)合部分的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的上下文中，藥物可具有較低的免疫原性(比單獨的藥物)或基本上是非免疫原性的。因此，這種藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以隨時間重復(fù)地給藥給個體，而功效損失最小，由于個體的免疫系統(tǒng)分解了抗藥物抗體。另外，這里描述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可具有比單獨的藥物增加的安全外形和較少的副作用。例如，作為能特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段的血清白蛋白結(jié)合活性的結(jié)果，藥物融合體和綴合物(藥物綴合物，非共價藥物綴合物)在血管循環(huán)中具有增加的停留時間。另外，綴合物和藥物融合體在全身給藥(例如，血管內(nèi)給藥)之后基本上不能通過血腦屏障，并在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中積累。因此，與單獨的藥物相比，可給藥綴合物(藥物綴合物，非共價藥物綴合物)和藥物融合體，其包含具有神經(jīng)學(xué)毒性或不需要的影響精神的作用的藥物，而具有更高的安全和降低的副作用。類似地，綴合物(藥物綴合物，非共價藥物綴合物)和藥物融合體可具有比單獨的藥物對特定的器官(例如，腎或肝臟)降低的毒性。這里描述的綴合物和藥物融合體還可以用于螯合藥物或靶，該藥物或靶在血管循環(huán)中結(jié)合藥物(例如，毒素)，從而降低藥物或靶對組織的作用(例如，抑制毒素的作用)。用于體內(nèi)半衰期的藥物動力學(xué)分析和測定的合適的方法是本領(lǐng)域熟知的。這些方法描述于，例如，Kenneth,A等ChemicalStabilityofPharmaceuticals:AHandbookforPharmacists，與Peters等，Pharmacokinetcanalysis:APracticalApproach(1996)中。也參考文獻'，Pharmacokinetics"，MGibaldi&DPerron,MarcelDekker出版，2ndRev.edition(1982)，其描述了藥物動力學(xué)參數(shù)如ta與tp半衰期(t1/2a，t1/2p)，以及曲線下的面積(AUC)。半衰期(t1/2a，t1/2p)和AUC可根據(jù)綴合物或融合體的血清濃度對時間的曲線來測定。可4吏用WinNonlin分析程序包(可獲自PharsigMCorp.,MountainView,CA94040，USA),例如，用于制作曲線。第一階段(a階段)，藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)主要分散在患者中，并有一些排出。當藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)已經(jīng)分散，而且血清濃度隨著藥物組合物從患者中的清除而降低時，第二階段(P階段)是最后階段。ta半衰期是第一階段的半衰期，tp半衰期是第二階段的半衰期。本發(fā)明提供了一種藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，或包含本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的組合物，其ta半衰期在15分鐘范圍內(nèi)或更長。在一個實施方案中，該范圍的下端是30分鐘，45分鐘，l小時，2小時，3小時，4小時，5小時，6小時，7小時，8小時，9小時，IO小時，11小時或12小時。此外，或者可替換地，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)或本發(fā)明的組合物，其ta半衰期高達并包括12小時。在一個實施方案中，該范圍的上端是ll，10，9，8，7，6或5小時。一個合適范圍的例子是1到6小時，2到5小時或3到4小時。有利地，本發(fā)明提供了藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，其t(3半衰期在2.5小時內(nèi)或更長。在一個實施方案中，該范圍的下端是3小時，4小時，5小時，6小時，7小時，8小時，9小時，10小時，11小時，或12小時。在一些實施方案中，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的tp半衰期高達并包括21天。在一個實施方案中，該范圍的上端是12小時，24小時，2天，3天，5天，10天，15天或20天。在特定的實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的tp半衰期為12到60小時。在另外的實施方案中，它為12到48小時。仍然在另外的實施方案中，它為12到26小時。上述標準以外，或者可替換地，本發(fā)明提供了藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)，其AUC值(曲線下面的面積)為0.01mg.min/mL或更多，或者1mg.min/mL或更多。在一個實施方案中，該范圍的下端是O.Ol，0.1，1，5，10，15，20，30，100，200或者300mg.min/mL。在特定的實施方案中，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的AUC高達600mg.min/mL。在一個實施方案中，該范圍的上端是500，400，300，200，150，100，75或者50mg.min/mL。在其它的實施方案中，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)的AUC在選自下列的范圍內(nèi)15到150mg.min/mL，15到100mg.min/mL，15到75mg.min/mL，15到50mg.min/mL，0.01到50mg.min/mL，0.15!j50mg.min/mL，1多J50mg.min/mL,5到50mg.min/mL，以及10到50mg.min/mL。本發(fā)明涉及藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物，藥物融合體)，其包括藥物和含有結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，該結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。在藥物組合物的優(yōu)選實施方案中，含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分，能特異性結(jié)合血清白蛋白。在一些實施方案中，藥物組合物包括與含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分共價連接的藥物，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。在這些實施方案中，藥物可與多肽結(jié)合功能域在任何合適的位置共價連接，如氨基末端，羧基末端或者通過合適的氨基酸側(cè)鏈(例如，賴氨酸的s氨基)。在其他的實施方案中，藥物組合物包括與含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分非共價連接的藥物，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。在這些實施方案中，藥物可直接(例如，通過靜電相互作用，疏水作用)或者間接地(例如，通過互補結(jié)合伴倡(例如，生物素和抗生物素蛋白)的非共價鍵合，其中一個伴倡與藥物共價連接，互補結(jié)合伴侶與抗原結(jié)合片段共價連接)與抗原結(jié)合片段非共價連接。當使用互補結(jié)合伴侶時，一個結(jié)合伴侶可直接或通過合適的連接體部分與藥物共價連接，而互補結(jié)合伴侶可直接或者通過合適的連接體部分與多肽結(jié)合功能域共價連接。在其他的實施方案中，藥物組合物是融合蛋白，其包括含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分與多肽藥物，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽。融合蛋白質(zhì)包括連續(xù)的多肽鏈，所述的鏈包括多肽結(jié)合部分作為第一部分，該多肽結(jié)合部分含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)，和多肽藥物作為第二部分，其作為多肽鏈的獨立部件(部分)存在。第一和第二部分可通過肽鍵彼此直接連接，或者通過合適的氨基酸，或肽或多肽連接體連接。另外的部分(例如，笫三，第四)和/或連接體序列的存在視情況而定。相對于第二部分(也即，多肽藥物)，笫一部分可位于N-末端，C-末端或內(nèi)部。在某些實施方案中，融合蛋白包括一個或多個含有能特異性結(jié)合增強體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，和一個或多個多肽藥物部分。在這些實施方案中，融合蛋白可包括l到大約10(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9或10)個多肽藥物部分，它們可以是相同的或不同的，和1到大約20(例如，1，2，3,4，5，6，7，8,9,10，11，12，13，14，15，16，17，1819或20)個含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，它們可以是相同的或不同的。含有能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的結(jié)合位點的多肽結(jié)合部分，與多肽藥物部分，可存在于任何預(yù)定位置例如，從氨基末端到羧基末端，這些部分可以下列順序存在一個或多個多肽結(jié)合部分，一個或多個多肽藥物部分，一個或多個多肽結(jié)合部分。在另一個例子中，從氨基末端到羧基末端，這些部分可以下列順序存在一個或多個多肽結(jié)合部分，一個或多個多肽藥物部分，一個或多個多肽結(jié)合部分，一個或多個多肽藥物部分，一個或多個多肽結(jié)合部分。如這里說描述的，多肽結(jié)合部分與多肽藥物部分可通過肽鍵彼此直接連接，或通過合適的氨基酸，或肽或多肽連接體連接。在某些實施方案中，融合蛋白是具有下式的連續(xù)的多肽鏈(氨基末端到羧基末端)a誦(P)n2畫b國(X)nl畫c-(Q)n3-d或a國(Q)n3-b-(X)nl陽c畫(P)n2國d其中X是多肽藥物；P與Q是每個獨立地多肽結(jié)合部分，其包含能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽的結(jié)合位點；a，b,c與d每個獨立地缺乏，或者是1到大約100個氨基酸殘基；nl，n2與n3分別表示X，P或Q部分存在的數(shù)目；nl是1到大約10;n2是0到大約10;而且n3是O到大約10，附帶條件是n2與n3不都是0;而且附帶條件是當nl和n2都是l，而且n3是0時，X不含有抗體鏈或抗體鏈的片段。在一些實施方案中，n2是1，2，3，4，5或6，而且n3是零。在其他的實施方案中，n3是l，2，3，4，5或6，而且n2是零。在其他的實施方案中，nl，n2和n3都是l。在某些實施方案中，X不含有抗體鏈或抗體鏈的片段。在優(yōu)選的實施方案中，P和Q每個獨立地是能特異性結(jié)合血清白蛋白的多肽結(jié)合部分。在尤其優(yōu)選的實施方案中，藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物，藥物融合體)包括含有結(jié)合位點(例如，抗原結(jié)合位點)的多肽結(jié)合部分，該結(jié)合位點能特異性結(jié)合增加體內(nèi)血清半衰期的多肽，其中該多肽結(jié)合功能域是能特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段。結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段本發(fā)明的藥物綴合物，非共價的藥物綴合物和藥物融合體包括，結(jié)合血清白蛋白的抗體的(也即，一個或多個)抗原結(jié)合片段?？乖Y(jié)合片段可特異性結(jié)合動物的血清白蛋白，將對該動物給藥藥物綴合物或藥物融合體。優(yōu)選地，抗原結(jié)合片段能特異性結(jié)合人血清白蛋白。然而，獸醫(yī)應(yīng)用是期待的，而且抗原結(jié)合片段能特異性結(jié)合來自預(yù)定動物的血清白蛋白，例如來自狗、貓、馬、母牛、小雞、綿羊、豬、山羊、鹿、貂等等的血清白蛋白。在一些實施方案中，抗原結(jié)合片段能特異性結(jié)合來自超過一個物種的血清白蛋白。例如，如這里所述的，已經(jīng)生產(chǎn)了能特異性結(jié)合鼠血清白蛋白與小鼠血清白蛋白的人dAb，以及能特異性結(jié)合鼠，小鼠與人血清白蛋白的dAb。(表1和圖7)這些dAb提供了允許使用相同的藥物綴合物或藥物融合體進行臨床前的與臨床研究的優(yōu)點，并避免了使用合適的替代品藥物融合體或藥物綴合物進行臨床前的研究的需要。適合用于本發(fā)明的抗原結(jié)合片段包括，例如，F(xiàn)ab片段，F(xiàn)ab'片段，F(xiàn)(ab')2片段，F(xiàn)v片段(包括單鏈Fv(scFv)和二硫鍵連接的Fv)、單鏈可變區(qū)和dAbs(VH，VL)。這些抗原結(jié)合片段可使用任何合適的方法生產(chǎn)，如通過使用胃蛋白酶，木瓜蛋白酶或其他的具有需要的裂解特異性的蛋白酶對抗體進行蛋白水解，或使用重組技術(shù)。例如，F(xiàn)v片段可通過用合適的蛋白酶消化抗體，或使用重組DNA技術(shù)制備。例如，可制備編碼輕鏈可變區(qū)與重鏈可變區(qū)的核酸，該輕鏈可變區(qū)與重鏈可變區(qū)通過合適的肽連接體，如2個到大約20個氨基乙酰殘基鏈連接?？墒褂萌魏魏线m的技術(shù)(例如，轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)化，感染)把核酸引入到合適的宿主(例如，大腸桿菌)中，而且該宿主在適于表達單鏈Fv片段的條件下保持?？墒褂每贵w基因制備抗體的各種抗原結(jié)合片段，其中已經(jīng)引入一個或多個終止密碼子到天然終止位點的上游。例如，可通過在編碼重鏈絞鏈區(qū)的序列的3'端引入翻譯終止密碼子，來設(shè)計編碼免疫球蛋白重鏈的F(ab')2部分的表達構(gòu)建體。本發(fā)明的藥物綴合物，非共價藥物綴合物和藥物融合體，可包括結(jié)合血清白蛋白的抗體的各個重鏈與輕鏈，或結(jié)合血清白蛋白的各個鏈的部分(例如，羊個Vh、Vk或VJ。結(jié)合想要的血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的抗體及其抗原結(jié)合片段，可選自天然或人造抗體或在合適的宿主中針對合適的免疫原產(chǎn)生的抗體的合適的集合。例如，可通過用血清白蛋白(例如，分離的或純化的人血清白蛋白)或血清白蛋白的肽(例如，包括至少大約8，9，10，11，12，15，20，25，30，33，35，37，或40個氨基酸殘基的肽)，免疫合適的宿主(例如，小鼠，人抗體轉(zhuǎn)基因小鼠，鼠，兔，小雞，山羊，非人靈長類動物(例如，猴))，來生產(chǎn)抗體。結(jié)合血清白蛋白的抗體和抗原結(jié)合片段，還可以選自重組抗體或抗原結(jié)合片段的文庫，如噬菌體展示文庫。這種文庫可包括含有天然或人工氨基酸序列的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段。例如，文庫可包括含有人工CDR(例如，隨機氨基酸序列)和人構(gòu)架區(qū)的Fab片段。(參見，例如，美國專利號6，300，064(Knappik，等)。)。在其他的例子中，文庫包括scFv片段或dAb(單鏈VH，單鏈VK或單鏈VJ，其序列有一個或多個CDR不同。(參見，例如，WO99/20749(Tomlinson和Winter)、WO03/002609A2(Winter等)、WO2004/003019A2(Winter等))結(jié)合血清白蛋白的合適的抗體及其抗原結(jié)合片段包括，例如，人抗體及其抗原結(jié)合片段，人化抗體及其抗原結(jié)合片段，嵌合抗體及其抗原結(jié)合片段，嚙齒動物(例如，小鼠，鼠)抗體及其抗原結(jié)合片段，和Camelid抗體及其抗原結(jié)合片段。在某些實施方案中，藥物綴合物，非共價藥物綴合物和藥物融合體包括結(jié)合血清白蛋白的Camelidvhh，Camelidvhh是免疫球蛋白單鏈可變區(qū)多肽，其來源于天然缺乏輕鏈的重鏈抗體。這種抗體存在于Camelid物種中，包括駱駝，美洲駝，羊駝，單峰駱駝和大羊駝。V冊分子比IgG分子小大約10倍，而且如同單個多肽，是很穩(wěn)定的，并且能抵抗極端pH和溫度條件。結(jié)合血清白蛋白的合適的CamelidVHH包括WO2004/0"862(AblytocN.V.)和這里(附圖15和SEQIDNOS:73-84)描述的那些CamelidVHH。在某些實施方案中，CamelidVhh結(jié)合人血清白蛋白，而且包括與SEQIDNO:72、SEQIDNO:73、SEQIDNO:74、SEQIDNO:75、SEQIDNO:76、SEQIDNO:77、SEQIDNO:78、SEQIDNO:79、SEQIDNO:80、SEQIDNO:81、SEQIDNO:82、SEQIDNO:83、SEQIDNO:84、SEQIDNO:85、SEQIDNO:86、EQIDNO:87或SEQIDNO:88具有至少大約80%，或至少大約85%，或至少大約90%，或至少大約95%，或至少大約96%，或至少大約97%,或至少大約98%,或至少大約99%的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。氨基酸序列同一性優(yōu)選使用合適的序列比對算法和缺省參數(shù)進行確定，如BLASTP(Karlin和Altschul，Proc.Natl.Acad.Sd.VSAS7(6):2264畫2268(1990"。免疫抗原的制備，多克隆和單克隆抗體生產(chǎn)可以使用任何合適的技術(shù)進行。已經(jīng)描述了各種方法。(參見，例如，Kohler等，Nature,256:495-497(1975)和Eur.J.Immunol.6:511-519(1976);Milstein等，Nature266:550-552(1977);Koprowski等，U.S.專利No.4,172,124;Harlow，E.和D.Lane，1988，Antibodies:ALaboratoryManual,(ColdSpringHarborLaboratory:ColdSpringHarbor,NY);CurrentProtocolsInMolecularBiology,Vol.2(Supplement27，Summer，94)，Ausubel，F(xiàn).M.等編輯(JohnWiley&Sons:NewYork,NY)，Chapter11，(1991)。)。一般，想要單克隆抗體時，通過融合來自無限增殖細胞系(例如，骨髓瘤細胞系如SP2/0,P3X63Ag8.653或異源骨髓瘤)的合適細胞與抗體產(chǎn)生細胞來生產(chǎn)雜交瘤?？贵w產(chǎn)生細胞可以獲自人，人-抗體轉(zhuǎn)基因動物或用目的抗原免疫的其他合適動物的外周血或，優(yōu)選脾或淋巴結(jié)。生產(chǎn)人來源的抗體(例如，人抗體)的細胞，可以使用合適的方法生產(chǎn)，例如，融合人抗體產(chǎn)生細胞和異源骨髓瘤或trioma，或用EpsteinBarr病毒感染的激活人B細胞的無限增殖。(參見，例如，U.S.專利No.6,197,582(Trakht);Niedbala等，Hybridoma，17:299-304(1998);Zanella等，JImmunolMethods,156:205-215(1992);Gustafsson等，HumAntibodiesHybridomas，2:26-32(1991))。融合的或無限增殖的抗體產(chǎn)生細胞(雜交瘤)，可使用選擇培養(yǎng)條件分離，并通過有限稀釋進行克隆。生產(chǎn)具有想要的特異性的抗體的細胞，可使用合適的分析進行鑒定(例如，ELISA)?？贵w還可以從人，人-抗體轉(zhuǎn)基因動物或用目的抗原免疫的其他合適的動物的分離的抗原特異性抗體產(chǎn)生細胞直接制備(例如，合成或克隆)(參見，例如，美國專利號5，627，052(Schrader))。把藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體給藥給人時，結(jié)合血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的抗體或其抗原結(jié)合片段可以是人，人化的或嵌合抗體或這種抗體的抗原結(jié)合片段。這些類型抗體和抗原結(jié)合片段在人中免疫原性較低或者是非免疫原性的，并提供了眾所周知的優(yōu)點。例如，包含人，人化的或嵌合抗體的藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體，可重復(fù)地給藥給人而較少或不損失功效(相較于其他的完全免疫原性抗體)，由于結(jié)合藥物綴合物或藥物融合體的人抗體的分解。當藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體計劃用于獸醫(yī)給藥時，可使用類似的抗體或抗原結(jié)合片段。例如，來自鼠或人抗體的CDR可以嫁接到來自想要的動物如馬或母牛的構(gòu)架區(qū)。人抗體和編碼人抗體的核酸，可以獲自例如人或人-抗體轉(zhuǎn)基因動物。人-抗體轉(zhuǎn)基因動物(例如，小鼠)是能產(chǎn)生人抗體的基因庫的動物，如XENOMOUSE(Abgenix，F(xiàn)remont,CA)，HUMAB-MOUSE，KIRINTCMOUSE或KM國MOUSE(MEDAREX，Princeton,NJ)。通常，人-抗體轉(zhuǎn)基因動物的基因組已經(jīng)改變成包括轉(zhuǎn)基因，該轉(zhuǎn)基因包括來自可進行功能性重排的人免疫球蛋白基因座的DNA?？善茐幕騽h除人-抗體轉(zhuǎn)基因動物中的內(nèi)源免疫球蛋白基因座，以消除動物產(chǎn)生內(nèi)源基因編碼的抗體的能力。用于生產(chǎn)人-抗體轉(zhuǎn)基因動物的合適的方法是本領(lǐng)域熟知的。(參見，例如，美國專利號5,939,598和6，075，181(Kucherlapati等)，美國專利號5,569,825、5，545，806、5，625，126、5，633，425、5,661,016，和5，789，650(Lonberg等)，Jakobovits等，Proc.NatlAcad.ScLUSA,90:2551-2555(1993)，Jakobovits等，Nature,362:255-258(1993)，Jakobovits等WO98/50433，Jakobovits等WO98/24893，Lonberg等WO98/24884，Lonberg等WO97/13852，Lonberg等WO94/25585，Lonberg等EP0814259A2，Lonberg等GB2272440A，Lonberg等，Nature368:856-859(1994)，Lonberg等，IntRevImmunol13(1):65畫93(1995)，Kucherlapati等WO96/34096，Kucherlapati等EP0463151Bl，Kucherlapati等EP0710719Al，Surani等美國專利號5,545,807，Bruggemann等WO90/04036，Bruggemann等EP0438474Bl，Taylor等，Int.Immunol.6(4)579-591(1994)，Taylor等，NucleicAcidsResearch20(23):6287畫6295(1992)，Green等，NatureGenetics7:13-21(1994)，Mendez等，NatureGenetics15:146-156(1997)，Tuaillon等，ProcNatlAcadSciUSA90(8):3720畫3724(1993)以及Fishwild等，NatBiotechnol14(7):845-851(1996)，前述每個的教導(dǎo)以其全部內(nèi)容引入這里作為參考)。人-抗體轉(zhuǎn)基因動物可以用合適的抗原(例如，人血清白蛋白)進行免疫，可使用常規(guī)方法分離和融合抗體產(chǎn)生細胞以形成雜交瘤。生產(chǎn)具有想要的特性(例如，特異性，親和性)的人抗體的雜交瘤，可使用任何合適的分析(例如，ELISA)進行鑒定，而且如果需要，使用合適的培養(yǎng)技術(shù)進行選擇和亞克隆?？梢允褂萌魏魏线m的方法制備人化的抗體及其他CDR嫁接的抗體。CDR嫁接的抗體的CDR，可以源自于結(jié)合血清白蛋白的合適的抗體(稱為供體抗體)。合適的CDR的其它來源包括天然的和人造血清白蛋白特異性抗體，其獲自人或非人類的來源，如嚙齒動物(例如，小鼠，鼠，兔)，小雞，豬，山羊，非人靈長類動物(例如，猴)或文庫。人化抗體的構(gòu)架區(qū)優(yōu)選是人來源的，而且可源自于與供體抗體的抗原結(jié)合區(qū)的類似或等價區(qū)(例如，重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū))具有序列相似性的任何人抗體可變區(qū)。人來源的構(gòu)架區(qū)的其它來源包括人可變區(qū)共有序列。(參見，例如，Kettleborough，CA.等，ProteinEngineering4:773-783(1991);Carter等，WO94/04679;Kabat，E.A.，等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,U.S.GovernmentPrintingOffice(1991))。其它類型的CDR嫁接的抗體，可包括合適來源的構(gòu)架區(qū)，如由來自馬，母牛，狗，貓等等的種系抗體基因部分編碼的構(gòu)架區(qū)。人來源的構(gòu)架區(qū)可包括氨基酸取代或置換，如"回復(fù)突變"，其用來自供體抗體相應(yīng)位置的殘基置換人或動物來源的構(gòu)架區(qū)中的氨基酸殘基?？梢赃M行構(gòu)架區(qū)中的一個或多個突變，包括一個或多個氨基酸的缺失，插入和取代。變體可通過各種合適的方法產(chǎn)生，包括非人類供體或受體人鏈的誘變。(參見，例如，美國專利號5，693，762(Queen等)和5,859,205(Adair等)，其以其全部教導(dǎo)引入這里作為參考)?？贵w，抗體鏈(例如，重鏈，輕鏈)或其片段或部分的恒定區(qū)，如果存在，可源自于任何合適的來源。例如，人，人化和某些嵌合抗體，抗體鏈(例如，重鏈，輕鏈)或其片段或部分的恒定區(qū)，如果存在，可以是人來源的，而且可源自于任何合適的人抗體或抗體鏈。例如，人來源的恒定區(qū)或其部分可源自于人k或k輕鏈，和/或人y(例如，yl、y2、y3、)，n，a(例如，al，a2)，5或￡重鏈，包括等位變體。在某些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段(例如，人來源的抗體，人抗體)，可包括氨基酸取代或置換，其改變或修整了作用(例如，效應(yīng)子功能)。例如，人來源的恒定區(qū)(例如，恒定區(qū)，恒定區(qū))可以設(shè)計成降低補體激活和/或Fc受體結(jié)合。(參見，例如，美國專利號5,648,260(Winter等)，5,624,821(Winter等)和5，834，597(Tso等)，其以其全部教導(dǎo)引入這里作為參考)。優(yōu)選地，包括這種氨基酸取代或置換的人來源的恒定區(qū)的氨基酸序列，與人來源的未改變的恒定區(qū)的氨基酸序列全長具有至少大約95°/。同一性，更優(yōu)選與人來源的未改變的恒定區(qū)的氨基酸序列全長具有至少大約99°/。同一性。人化抗體，CDR嫁接抗體，人化或CDR嫁接抗體的抗原結(jié)合片段，可使用任何合適的方法制備。幾個這種方法是本領(lǐng)域熟知的。(參見，例如美國專利號5,225,539(Winter),美國專利號5，530，101(Queen等)。)。人化或CDR嫁接抗體(例如，CDR，骨架，恒定區(qū))的部分，可獲自或直接來源于合適的抗體(例如，通過一部分的從頭合成)，或者可生產(chǎn)和表達編碼具有想要特性(例如，結(jié)合血清白蛋白)的抗體或其鏈的核酸。為了制備鏈的部分，可以在想要的位置引入一個或多個終止密碼子。例如，可使用PCR誘變方法以改變存在的DNA序列，來構(gòu)建編碼人化或CDR嫁接可變區(qū)的核酸(例如，DNA)序列。(參見，例如，Kamman，M.，等，Nucl.AcidsRes.17:5404(1989)。)。編碼新CDR的PCR引物可與預(yù)先人化的可變區(qū)的DNA模板雜交，該預(yù)先人化的可變區(qū)基于相同的或很相似的人可變區(qū)(Sato，K.，等，CancerResearch53:851-856(1993))。如果相似的DNA序列不能有效用作模板，可以從合成寡核苷酸來構(gòu)建包括編碼可變區(qū)序列的序列的核酸(參見，例如，Kolbinger，F(xiàn)"ProteinEngineering8:971-980(1993))。還可以把編碼信號肽的序列整合到該核酸中(例如，合成，插入到載體中)?？梢允褂脕碜允荏w抗體的天然信號肽序列，來自另一個抗體的信號肽序列或其他的合適序列(參見，例如，kettleborough，C.A.，ProteinEngineeringA:112-783(1991))。使用這些方法或其他的合適方法，可以很容易地生產(chǎn)變體。在一個實施方案中，可以對克隆的可變區(qū)進行突變，并選擇編碼具有想要的特異性的變體的序列(例如，來自噬菌體文庫；參見，例如，美國專利號5，514，548(Krebber等)和WO93/06213(Hoogenboom等))。結(jié)合血清白蛋白的抗體或抗原結(jié)合片段，可以是嵌合抗體或嵌合抗體的抗原結(jié)合片段。嵌合抗體或其抗原結(jié)合片段包括來自一個物種(例如，小鼠)的可變區(qū)，和來自另一個物種(例如，人)的恒定區(qū)的至少一部分嵌合抗體和嵌合抗體的抗原結(jié)合片段可以使用任何合適的方法制備。幾種合適的方法是本領(lǐng)域熟知的。(參見，例如，美國專利號4，816，567(Cabilly等)，美國專利號5，116，946(Capon等))。一種用于獲得結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段的優(yōu)選方法，包括從全部基因庫抗原結(jié)合片段選擇能特異性結(jié)合想要的血清白蛋白的抗原結(jié)合片段(例如，scFvs，dAb)。例如，如這里所描述的，結(jié)合血清白蛋白的dAb可選自合適的噬菌體展示文庫。已經(jīng)描述了許多合適的噬菌體顯示文庫和選擇方法(例如，單價展示和多價展示系統(tǒng))。(參見，例如，Griffiths等，美國專利號6,555,313Bl(引入這里作為參考)；Johnson等，美國專利號5，733，743(引入這里作為參考)；McCafferty等，美國專利號5,969,108(引入這里作為參考)；Mulligan-Kehoe，美國專利號5，702，892(引入這里作為參考)；Winter,G.等；Amiu.Rev.Immunol.72:433-455(1994);Soumillion，P.等，ApplBiochem.Biotechnol47(2國3):175國189(1994);Castagnoli，L.等，Comb.Chem.HighThroughputScreen,4(2):121-133(2001);WO99/20749(Tomlinson和Winter);WO03/002609A2(Winter等)；WO2004/003019A2(Winter等)。)。噬菌體文庫中展示的多肽可以展示在任何合適的噬菌體上，如絲狀噬菌體(例如，fd，Ml3，F(xiàn)l)，裂解性噬菌體(例如，T4、T7、k)，或RNA噬菌體(例如，MS2)，例如，并選擇其與血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的結(jié)合。通常，顯示基因庫多肽的噬菌體文庫與合適的噬菌體外殼蛋白用作融合蛋白。這種文庫可以使用任何合適的方法生產(chǎn)，如引入編碼顯示抗體或其抗原結(jié)合片段的噬菌體載體的或噬菌粒載體文庫到合適的宿主細菌中，并培養(yǎng)得到的細菌，來生產(chǎn)噬菌體(例如，如果需要，使用合適的輔助噬菌體或補體質(zhì)粒)。噬菌體的文庫可以使用任何合適的方法從這種培養(yǎng)物中重新獲得，如沉淀和離心。文庫可包括含有任何想要量的氨基酸序列多樣性的基因庫抗體或其抗原結(jié)合片段。例如，基因庫可包括抗體或其抗原結(jié)合片段，其氨基酸序列相應(yīng)于來自想要的有機體的天然存在的抗體，和/或可包括隨機或隨機化的氨基酸序列(例如，CDR序列)的一個或多個區(qū)域。這種基因庫或文庫中的抗體或其抗原結(jié)合片段，可包括隨機或隨機化的氨基酸序列的限定區(qū)域，和常見氨基酸序列的限定區(qū)域。在某些實施方案中，基因庫中全部或基本上全部多肽是想要類型的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，人Vh或人VJ。例如，基因庫中每個多肽可包括VH，Vl或Fv(例如，單鏈Fv)?？墒褂萌魏魏线m的方法，把氨基酸序列差異引入到抗體或其抗原結(jié)合片段的任何想要的區(qū)域。例如，使用任何合適的誘變方法(例如，低保真PCR，寡核普酸介導(dǎo)的或位點定向誘變，使用NNK密碼子的多樣化)或任何其他的合適方法，制備編碼多樣化的抗體或其抗原結(jié)合片段的核酸的文庫，可把氨基酸序列差異引入到目標區(qū)域，如抗體可變區(qū)的互補決定區(qū)。如果需要，待多樣化的抗體或其抗原結(jié)合片段的區(qū)域，可以隨機化。合適的噬菌體展示文庫可用于選擇結(jié)合血清白蛋白并具有其他的有益特性的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段。例如，可選擇當展開時能抵抗聚集的抗體或抗原結(jié)合片段。聚集受多肽濃度的影響，而且認為在部分折疊或展開中間物的很多情況下出現(xiàn)。促成部分折疊中間物的因素和條件，如高溫和高多肽濃度，促進不可逆的聚集。(Fink，A.L.，F(xiàn)olding&Design3:R1-R23(1998).)。例如，以濃縮形式儲存純化的多肽，如凍干制品，經(jīng)常導(dǎo)致至少部分多肽的不可逆聚集。并且，通過在生物系統(tǒng)如大腸桿菌中表達來生產(chǎn)多肽，常常導(dǎo)致含有聚集多肽的包涵體的形成。從包涵體回收活性多肽可能是很困難的，而且需要增加另外的步驟如再折疊步驟到生物生產(chǎn)系統(tǒng)中?？梢詮暮线m的噬菌體展示文庫選擇，當加熱時，抵抗聚集和可逆展開的抗體和抗原結(jié)合片段。通常，包括展示的抗體或其抗原結(jié)合片段的基因庫的噬菌體展示文庫被加熱到某個溫度(Ts)，該溫度時至少部分展示的抗體或其抗原結(jié)合片段是展開的，然后冷卻到某個溫度(Tc)，其中Ts>Tc，從而至少部分抗體或其抗原結(jié)合片段已經(jīng)再折疊，而且部分多肽已經(jīng)聚集。然后，在溫度(Tr)時回收可逆展開并結(jié)合血清白蛋白的抗體或其抗原結(jié)合片段?；厥盏目赡嬲归_的抗體或其抗原結(jié)合片段具有解鏈溫度(Tm)，而且優(yōu)選地，基因庫被加熱到Ts，冷卻到Tc，在Tr時分離可逆展開的抗體或其抗原結(jié)合片段，以便Ts>Tm>Tc，而且Ts>Tm>Tr。通常，在選擇之前，喏菌體展示文庫被加熱到大約80"C，并冷卻到大約室溫或大約401C。能可逆展開并抵抗聚集的抗體或其抗原結(jié)合片段，還可以通過用能可逆展開的殘基置換某些氨基酸殘基進行設(shè)計或基因工程操作。(參見，WO2004/101790(Jespers等)，和美國臨時專利申請?zhí)?0/470,340(2003年5月14日提交)和60/554,021(2004年3月17日提交)詳細論述了用于選擇和設(shè)計或基因操作能可逆展開的抗體或其抗原結(jié)合片段的方法。WO2004/101790和前述的兩個美國臨時專利申請的教導(dǎo)引入這里作為參考。)?？赡嬲归_和抵抗聚集的抗體或其抗原結(jié)合片段提供了幾個優(yōu)點。例如，由于它們對聚集的抗性，通過使用合適的生物生產(chǎn)系統(tǒng)如大腸桿菌進行表達，能可逆展開的抗體或其抗原結(jié)合片段，可以很容易地高產(chǎn)量生產(chǎn)為可溶蛋白。此外，能可逆展開的抗體或其抗原結(jié)合片段，可以高于常規(guī)多肽的濃度配制和/或儲存，而較少聚集和損失活性。DOM7h-26(SEQIDNO:20)是能可逆展開的人VH。優(yōu)選地，結(jié)合血清白蛋白的抗體或其抗原結(jié)合片段包括可變區(qū)(VH、VK、VJ，其中一個或多個構(gòu)架區(qū)(FR)包含(a)人構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列，(b)人構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列的至少8個連續(xù)的氨基酸，或(c)由人種系抗體基因部分編碼的氨基酸序列，其中所述的構(gòu)架區(qū)如Kabat所定義。在某些實施方案中，一個或多個構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列與由人種系抗體基因部分編碼的對應(yīng)構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列相同，或者相對于由人種系抗體基因部分編碼的所述對應(yīng)構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列，一個或多個所述構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列共同地包含高達5個氨基酸的差異。在其他的實施方案中，F(xiàn)R1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列與由人種系抗體基因部分編碼的對應(yīng)構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列相同，或者相對于由所述的人種系抗體基因部分編碼的對應(yīng)構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列，F(xiàn)R1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列共同地包括高達10個氨基酸的差異。在其他的實施方案中，所述的FR1，F(xiàn)R2和FR3的氨基酸序列，同。在特定的實施方案中，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，包括基于人種系序列的免疫球蛋白可變區(qū)(例如，VH，Vl)，而且如果需要，可具有一個或多個多樣化區(qū)域，如互補決定區(qū)。用于Vh的合適的人種系序列包括，例如，由Vh基因片段DP4、DP7、DP8、DP9、DPIO、DP31、DP33、DP45、DP46、DP47、DP49、DP50、DP51、DP53、DP54、DP65、DP66、DP67、DP68和DP69，以及JH片段JH1、JH2、JH3、JH4、JH4b、JH5和JH6編碼的序列。用于VL的合適的人種系序列包括，例如，由Vk基因片段DPK1、DPK2、DPK3、DFK4、DPK5、DPK6、DPK7、DPK8、DPK9、DPKIO、DPK12、DPK13、DPK15、DPK16、DPKI8、DPK19、DPJC20、DPK21、DPK22、DPK23、DPK24、DPK25、DPK26和DPK28，以及由Jk片段Jk1、Jk2、Jk3、Jk4和JK5編碼的序列。在某些實施方案中，藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體不包括結(jié)合血清白蛋白的小鼠，鼠和/或兔抗體，或者這種抗體的抗原結(jié)合片段?？乖Y(jié)合片段可以任何想要的親和性，結(jié)合速率(onrate)和解離速率(offrate),結(jié)合血清白蛋白?？梢赃x擇親和性(KD)，結(jié)合速率(K。n或ka)和解離速率(K。ff或kd)，以獲得特定藥物想要的血清半衰期。例如，獲得藥物最大的血清半衰期是需要的，該藥物中和慢性炎癥性紊亂的炎癥介質(zhì)(例如結(jié)合并中和炎性細胞因子的dAb)，而較短的半衰期可能是具有一些毒性的藥物所需要的(例如，化療劑)。一般，對血清白蛋白的快速結(jié)合速率和快速或中速解離速率是優(yōu)選的。包括具有這些特性的抗原結(jié)合片段的藥物綴合物和藥物融合體，在給藥后將迅速地結(jié)合血清白蛋白，并迅速地解離和重新結(jié)合血清白蛋白。這些特性將降低藥物的快速清除(例如，通過腎)，但是仍然提供高效的傳遞并到達藥物靶。結(jié)合血清白蛋白的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)，一般以大約lnM到大約50(HiM的KD結(jié)合。在一些實施方案中，抗原結(jié)合片段以大約IO到大約100nM，或大約100nM到大約500nM，或大約500nM到大約5mM的KD(KD=K。ff(kd)/K。n(ka))結(jié)合血清白蛋白，如通過表面胞質(zhì)基因共振所測定的(例如，使用BIACORE儀器)。在特定的實施方案中，藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體包括以大約50nM，或大約70nM，或大約100nM，或大約150nM或大約200nM的KD結(jié)合血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的抗體的抗原結(jié)合片段。這里所述的藥物綴合物，非共價藥物綴合物和藥物融合體的提高的藥物動力學(xué)特性(例如，延長的tl/2p，增加的AUC)，可能與結(jié)合血清白蛋白的抗原結(jié)合片段的親和性有關(guān)。因此，具有提高的藥物動力學(xué)特性的藥物綴合物，非共價藥物綴合物或藥物融合體，一般可使用以高親和性(例如，大約500nM或較少，大約250nM或較少，大約100nM或較少，大約50nM或較少，大約10nM或較少，或大約lnM或較少，或大約100pM或較少的KD)結(jié)合血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)的抗原結(jié)合片段制備。優(yōu)選地，與結(jié)合血清白蛋白的抗原結(jié)合片段共軛或融合的藥物，以比抗原結(jié)合片段對血清白蛋白更強的親和性(KD)，和/或比抗原結(jié)合片段對血清白蛋白更快的Koff(kd)與它的靶(藥物靶)結(jié)合，如通過表面胞質(zhì)基因共振所測定的(例如，使用BIACORE儀器)。例如，藥物可能以比結(jié)合SA的抗原結(jié)合片段對SA高大約1到大約100000，或大約100到大約100000，或大約1000到大約100000，或大約10000到大約100000的親和性與它的靶結(jié)合。例如，結(jié)合SA的抗體的抗原結(jié)合片段，可以大約10jiM的親和性結(jié)合，而藥物以大約100pM的親和性結(jié)合它的耙。在特定的實施方案中，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段是結(jié)合人血清白蛋白的dAb。例如，具有選自SEQIDNO:IO、SEQIDNO:ll、EQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列的VKdAb，或具有選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列的VHdAb。在其他的實施方案中，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段是結(jié)合人血清白蛋白，并包括任何上述氨基酸序列的CDR的dAb。在其它的實施方案中，結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段是dAb，其結(jié)合人血清白蛋白，并包括與SEQIDNO:10、SEQIDNO:ll、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22或SEQIDNO:23具有至少大約80%,或至少大約85%,或至少大約90%，或至少大約95%，或至少大約96%，或至少大約97%，或至少大約98%，或至少大約99%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。氨基酸序列同一性優(yōu)選使用合適的序列比對算法和缺省參數(shù)進行確定，如BLASTP(Karlin和Altschul，Proc.Natl.Acad.ScLUSAS7(6):2264-2268(1990))。藥物本發(fā)明特定的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物)可以包括任何藥物(例如，小的有機分子、核酸、多肽)，這些藥物可以給藥于個體來產(chǎn)生有益治療或診斷效果，例如，通過結(jié)合和/或改變個體中生物目標分子的功能。本發(fā)明的其他藥物組合物(例如，藥物融合體)可以包括多肽或肽藥物。藥物融合體的優(yōu)選實施方案中，藥物不包括抗體鏈或抗體鏈的片段(例如，VH、VK、v,)。特定的實施方案中，藥物選自促胰島素劑、腸促胰島素、胰高血糖素樣1肽、GLP-1肽、GLP-1類似物、GLP-1衍生物、PYY、PYY肽、PYY類似物、PYYf;t生物、Exendin國3、Exendin陽3肽、Exendin畫3類4以物、Exendin陽3衍生物、Exendin國4和Exendin-4肽、Exendin-4類似物、Exendin-4衍生物或這些中兩種或多種的組合(例如，GLP-1肽和PYY肽)。用于本發(fā)明中合適的藥物包括，例如，免疫抑制劑(例如，環(huán)孢菌素A、雷帕霉素、FK506、強的松)、抗病毒劑(無環(huán)鳥苷、更昔洛韋(ganciclovir)、茚地那韋(indinavir))、抗生素(青霉素、mynocyclin、四環(huán)素)、抗炎劑(阿司匹林、布洛芬、強的松)、細胞毒素或細胞毒劑(例如，紫杉醇(paclitaxel)、細胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、吐根堿、絲裂霉素C、足葉乙戒、替尼泊苷(tenoposide)、長春新堿、長春花堿、秋水仙素、阿霉素、柔紅霉素、二羥基anthracindione、米托蒽極、光神霉素、防線菌素D、l-二氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、邦妥卡因、利多卡因、心得安、嘌呤霉素，以及上述任一種藥劑的類似物或同系物。合適的藥物還包括抗代謝物(例如，氨甲喋呤、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶)、烷化劑(例如，氮齊、thioepachlorambucil、CC-1065、苯丙氨酸氮芥、卡氮芥(BSNU)、環(huán)已亞硝脲(CCNU)、環(huán)磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、鏈脲菌素、絲裂霉素C和順-二氯二胺鉑(II)(DDP)順鉑)、anthracycline(例如，柔紅霉素(之前為道諾霉素)和阿霉素)、抗生素(例如，防線菌素D(之前為防線菌素)、博來霉素、光神霉素和氨茴霉素(AMC))、放射性核素(例如，吲哚-125、-126)、釔(例如，釔-90、-91)和鐠(例如，鐠-144、-145)和蛋白酶抑制劑(例如，基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制劑)。其他合適的藥物是核酸，如反義核酸和RNAi。刺孢霉素也適用于本發(fā)明。合適的藥物還包括止痛劑，包括麻醉劑(例如，可待因、納美芬(nalmefene)、納洛酮、芬太尼、麥啶、嗎啡、曲馬多、丙氧吩、氧可酮、美沙酮、納布啡)、非甾族抗炎劑(例如，消炎痛、ketorolac,anthrotec、布洛芬、萘普生、水楊酸鹽、塞來考昔(celecoxib)、refecoxib)、醋氨酚、辣椒素、ziconotide等。特定的實施方案中，藥物是多肽毒素，例如，毒素，如相思豆毒素、蓖麻毒A、假單胞菌外毒素或白喉毒素。其他合適的多肽藥物包括抗體或抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)、多肽激動劑、激活劑、促分泌素、拮抗劑或抑制劑。例如，多肽或肽藥物可以結(jié)合并促進或抵抗細胞表面蛋白，如CD抗原、細胞因子受體(例如，白細胞間介素受體、趨化因子受體)、粘附分子或共刺激分子。例如，多肽藥物可以結(jié)合細胞因子、生長因子、細胞因子受體、生長因子受體和其他目標配體，其包括但不限于ApoE、Apo-SAA、BDNF、促心臟激素陽l、CEA、CD40、CD40配體、CD56、CD38、CD138、EGF、EGF受體、ENA畫78、Eotaxin、Eotaxin陽2、Exodus曙2、FAPa、FGF陽酸、FGF畫堿、成纖維細胞生長因子-10、FLT3配體、Fractalkine(CX3C)、GDNF、G國CSF、GM-CSF、GF-pi、人血清白蛋白、胰島素、IFN畫y、IGF-I、IGF-II、IL畫la、IL誦ip、IL畫1受體、IL畫2、IL國3、IL畫4、IL-5、IL國6、IL畫7、IL-8(72a.a.)、IL-8(77a.a.)、IL國9、IL畫IO、IL-ll、IL畫12、IL-13、IL畫15、IL-16、IL-17、IL-18(IGIF)、抑制素ou抑制素(5、IP國IO、角質(zhì)細胞生長因子誦2(KGF-2)、KGF、Leptin、LIF、Lymphotactin、Mullerian抑制物質(zhì)、單核細胞集落抑制因子、單核細胞引誘蛋白、M-CSF、MDC(67a.a.)、MDC(69a.a.)、MCP畫1(MCAF)、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MDC(67a.a.)、MDC(69a.a.)、MIG、MIP-la、MIP-ip、MIP-3ouMIP畫3p、MIP陽4、脊髓前體抑制因子-1(MPIF畫1)、NAP-2、Neurturin、神經(jīng)生長因子、(3畫NGF、NT-3、NT畫4、制瘤素M、PDGF-AA、PDGF國AB、PDGF國BB、PF國4、RANTES、SDFla、SDFip、SCF、SCGF、干細胞因子(SCF)、TARC、TGF-a、TGF-p、TGF國卩2、TGF-p3、肺瘤壞死因子(TNF)、TNF-a、TNF陽p、TNF受體I、TNF受體II、TNIL-1、TPO、VEGF、VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGF受體1、VEGF受體2、VEGF受體3、GCP-2、GRO/MGSA、GRO-p、GRO-y、HCC1、1-309、HER1、HER2、HER3和HER4。認識到該列表不是窮舉。合適的藥物還包括激素，包括垂體激素(PTH)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)、血管緊張肽原酶、促黃體生成激素-釋放激素(LHRH)、促性腺激素-釋放激素(GnRH)、促黃體生成激素(LH)、促卯泡激素(FSH)、醛甾酮等。合適的藥物還包括膠質(zhì)細胞生長因子、干擾素(例如，IFN-a、IFN-p、IFN-y)、促紅細胞生成素(EPO)、蛋白酶、彈性蛋白酶、LHRH類似物、激動劑和拮抗劑、阿片樣物質(zhì)受體激動劑，如k阿片樣物質(zhì)受體激動劑(例如，強啡肽A)、降鈣素和降鈣素類似物、抗利尿激素(后葉加壓素)、催產(chǎn)素拮抗劑、血管活性腸肽、凝血酶抑制劑、馮威勒布蘭德氏因子、表面活性劑和蝸牛毒液(例如，ziconotide)。合適的藥物還包括具有抗癌活性(例如，增殖抑制、生長抑制、凋亡抑制、轉(zhuǎn)移抑制、粘附抑制、新血管形成抑制)的肽和多肽。幾種這樣的肽和多肽是本領(lǐng)域已知的。(參見，例如，JaninY.L.，爿m/m^c/^，25:1-40(2003)。將該參考文獻的全部教導(dǎo)，特別是其中公開的肽和多肽，在此引入作為參考)。表8中列出了幾種這樣的肽的氨基酸序列。其他合適的藥物包括具有抗病毒活性的肽和多肽。幾種這樣的肽和多肽是本領(lǐng)域已知的，例如以下文獻中所公開的肽和多肽，Giannecchini等，77(6):3724畫33(2003);Wang，J.，等，C7/wC7ie附(2003);Hilleman，M.R"Fflc"7ie，21(32):4626-49(2003);Tziveleka，L.A.，等，Cm/t7bpC/ie附，3(13):1512-35(2003);Poritz，M.A"等，柳，313(7):170-83(2003);Oevermann，A.，等，顛/v/m/to,59(i):23-33(2003);Cole,A.M.等，Cm/t泡,附Z)"，9(18):1463-73(2003);Pinon，J.D"等，,/，77(5):3281隱90(2003);Sia，S.K.，等，胸//torft/5L4，99(23):14664-9(2002);Bahbouhi，B.，等，丑/oc/^附/，66(Pt5):863國72(2002);deSoultrait，V.R"等，JMo/所o/，18(i):45-58(2002);Witherell,G.，Cw/rOp/w/rtveW/g"fM^s，2(5):340誦7(2001);Ruff，M.R.，等，Jw"vkfl/及es，52(1):63-75(2001);Bultmann，H.,等，/腸/，75(6):2634畫45(2001);Egal，M.，等，/w"顛/附/cn"Ge我13(/):57陽60(1999)和Robi歸n，W.E.，/r.,//^mA^c所o/，63(7):94-100(1998)。在此將這些參考文獻的全部教導(dǎo)，特別是其中公開的肽和多肽，引入作為參考。這些肽和多肽是可以用于本發(fā)明的組合物、藥物融合體、藥物綴合物、非共價藥物綴合物中的藥物實例。多肽藥物還可以是細胞因子或生長因子或受體的可溶性部分(例如，細胞因子受體、生長因子受體、激素受體)或其他多肽，如上述的多肽。例如，合適的多肽藥物還包括受體(例如，生長因子受體、細胞因子受體、激素受體)激動劑和拮抗劑，如白細胞間介素1受體拮抗劑(Eisenberg等，iVfl似re343:341-346(1990))、血栓形成素受體激動劑(例如，GW395058(deSerres等，StemCells17:316-326(1999))、黑素皮質(zhì)素受體拮抗劑(例如，MCR-4拮抗劑(Cepoi等，BrainRes.1000:64-71(2004))、anginex、6DBF7(Mayo等，丄C7^附.278:45746-45752(2003))、趨化因子模擬物(例如，RANTES模擬物(Nardese等，7VflL&ni".5/。/.8:611-615(2001))、生長激素(例如，人生長激素)、生長激素類似物和生長激素促分泌素(例如，CP-424,391(MacAndrew等，丄P/iamrflCo/.432:195-202(2001))、生長激素釋放激素模擬物(例如，MK-677(Chapman等，/.C//".五m/ocn'm/.M"M.82:3455-:3463(1997))、細胞粘附分子相互作用的抑制劑(例如，LFA-I/ICAM-I、VLA-1/VCAM-1(Yusuf-Makagiansar等，M^/./".iev.22:146-167(2002))、干擾素的模擬物(例如，SYR6(Sato等，B/oc/^m.丄371(Pt.2):603-608(2003)、herceptin的模擬物(iVfl似/^5/Wec/im7/18:137(2000))、抗原遞呈的抑制劑(Bolin等，43:2135-2148(2000))、GPIB/IIIA拮抗劑(例如，F(xiàn)K633(Aoki等，77m附6.及m.81:439-450(1996))、a卩3拮抗劑(例如，SC56631(Engleman等，/C7/m./"ve".99:2284-2292(1997))、促纟工細胞生成素模才以物(例如，EMP1(Johnson等，必/oc/^附/W/j37:3699-3710(1998))、阿片樣物質(zhì)受體拮抗劑(例如，[(2S，3R)-TMT1DPDPE(Liao等，/C7ie肌41:4767-4776(1998))、造血因子(例如，促紅細胞生成素(EPO)、粒細胞集落刺激因子(GM-CSF))。其他合適的肽和多肽藥物包括結(jié)合人1型IL-1受體的肽拮抗劑(例如，AF11377(FEWTPGYWQPYALPL，SEQIDNO:56)、AF11869(FEWTPGYWQJYALPL，SEQIDNO:57(J=l-吖丁咬-2國羧酸)、FEWTPGYWQJY(SEQIDNO:58)、FEWTPGWYQJY(SEQIDNO:59)、FEWTPGWYQJYALPL(SEQIDNO:60)、或任選地含有乙?；被撕?或胺化羧基端的任一在前序列(Akeson等，/.所o/.C7^附.271:30517-305123(1996))、TNF-a-介導(dǎo)的細胞毒性的肽拮抗劑(例如，Chirinos國Rojas等公開的那些，//附細朋/.161:5621-5626(1998))、促紅細胞生成素受體的肽激動劑(例如，McConnel等，歷o/.C7ie附.379:1279-1286(1998)或Wrighton等，5We"ce273:458-464(1996)公開的那些)、胰高血糖素樣肽-1(GLP-1，例如，GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)酰胺及其類似物(參見，例如，RitzelU.等，/E"rf畫Vw/柳159:93-102(1998))和干擾素(例如，INF-a、INF-p、INF-X)。其他合適的多肽和肽藥物包括整聯(lián)蛋白抑制劑(例如，RGD肽，如H隱Glu[環(huán)(Arg-Gly-Asp國D畫Phe誦Lys)]2(Janssen，MX"等，及e^fln^62:6146-6151(2002))、環(huán)(Arg畫Gly誦Asp陽D畫Phe-Lys)(KantlehnerM.，等，y4gwew./W.38:560(1999))、環(huán)(Arg-Gly國Asp國D-Tyr-Lys)(Haubner，R.，等，丄iV"c/.42:326-336(2001))、核糖體滅活蛋白(RIP)，如Saporin(例如，SEQIDNO:67)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(例如，U.S.PatentNo.5,616,605)和抗病毒肽和多肽，如HIV融合抑制劑(例如，T-1249和T-20(FUZEON(enfuvirtide);TrimerisInc.)，和可溶性受體拮抗劑，如免疫附著因子(例如，LFA3-Ig，CTLA4-Ig)?？刮⑸锒嚯暮碗乃幬镆策m用于本發(fā)明中。合適的抗微生物多肽和肽藥物的實例包括adenoregulin、dermcidin陽lL、cathelicidin(例如，cathelicidin樣肽、人LL-37/hCAP-18)、防御素，包括a-防御素(例如，人嗜中性肽1(HNP-1)、HNP-2、HNP-3、HNP-4、人防御素5、人防御素6)、p防御素(例如，人p-防御素-l、人p-防御素-2)和e-防御素(例如，0-防御素-l)、histatin(例如，histatinl、histatin3、histatin5)、乳鐵蛋白衍生的肽和相關(guān)的肽(參見，TomitaM等，^c似//m.36:585-591(1994)和Strom,M.B.等，B/oc/^附OZ/祝o/.80:65-74(2002))。本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，藥物是促胰島素藥物。合適的促胰島素藥物的實例包括GLP-1、GLP-1衍生物、GLP-1類似物或GLP-1類似物的f汙生物。此外，它們包括Exedin-4、Exedin-4類卩以物和Exedin-4矛汙生物和Exedin-3、Exedin-3衍生物和Exedin-3類4以物。其他合適的藥物包括肽YY(3-36)或類似物。肽YY(PYY)是最初從胰腸分離的36個殘基肽酰胺，并位于胃腸道和胰腺的內(nèi)分泌細胞中(Tatemoto等，Proc.Natl.Acad.Sci.79:2514，1982)。肽YY具有N-端和C-端酪氨酸酰胺；因此，這兩個酪氨酸給予PYY其名字(Y表示肽命名中的氨基酸酪氨酸)。此外，PYY共享其最初從豬腦分離出來的同源肽神經(jīng)肽Y(NPY)的多個中樞和外周調(diào)節(jié)作用(Tatemoto，Proc.Natl.Acad.Sci.79:5485，1982)。與PYY的細胞定位相反，NPY存在于粘膜下和腸肌層神經(jīng)元中，其各自神經(jīng)支配粘膜和平滑肌層(Ekblad等，Neuroscience20:169，1987)。認為PYY和NPY都能抑制腸運動性和血流(Laburthe，TrendsEndocrinol.Metab.l:168，1990)，還認為它們在大鼠中減弱基礎(chǔ)的(Cox等，Br.J.Pharmacol.101:247，1990)和促分泌素i秀導(dǎo)的腸分泌(Lundberg等，Proc.Natl.Acad.SciUSA79:4471，1982)，以及刺激凈吸收(MacFadyen等，Neuropeptides7:219，1986)。總之，這些觀察表明進餐后PYY和NPY釋放至循環(huán)中(Adrian等，Gastroenterology89:1070，1985;Balasubramaniam等，Neuropeptides14:209，1989)，因此在調(diào)節(jié)腸分泌和吸收中起著生理作用。已經(jīng)在大鼠腸上皮中表征了呈現(xiàn)出對PYY的親和性略高于NPY的高親和性PYY受體系統(tǒng)(Laburthe等，Endocrinology118:1910，1986)并顯示出消極地結(jié)合腺苷酸環(huán)化酶(Servin等，Endocrinology124:692，1989)。使用幾個部分序列的結(jié)構(gòu)活性研究已經(jīng)導(dǎo)致PYY(22-36)鑒定為與腸PYY受體相互作用的活性位點(Balsubrammaniam等，Pept.Res.1:32，1988)。此外，PYY涉及各種生理活動，包括營養(yǎng)吸收(Bilcheik等，DigestiveDiseaseWeek506:623，1993)、細胞增殖(Laburthe，TrendsEndocrinol.Metab.l:168，1990;Voisin等，J.Biol.Chem，1993)、月旨肪分解(Valet等，J.Clin.Invest.291，1990)和血管收縮(Lundberg等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA79:4471，1982)。WO03/057235和WO03/026591公開了通過給藥PYY或激動劑和GLP-1降低熱量攝入、食物攝入和食欲的方法。這些公開以其整體在此引入作為參考，特別是用來提供PYY和GLP-1藥物和可以用于本發(fā)明中的方法的實例。更多其他適用于本發(fā)明中的藥物包括胰島素、Resistin、Leptin、MC3R/MC4R拮抗劑、AgRP拮抗劑、載脂蛋白A-IV、Enterostatin、胃泌素-釋放肽(GRP)、IGF1、BMP-9、IL-22、RegIV、干擾素ouINGAP肽、生長激素釋放抑制因子、amylin、neurulin、干擾素P、干擾素雜合體、脂聯(lián)素、內(nèi)源性大麻素、C肽、WNT10b、Orexin-A、促腎上腺皮質(zhì)激素、Enterostatin、縮膽嚢肽、oxyntomodulin、黑素細胞刺激激素、黑素皮質(zhì)素、黑色素濃縮激素、BB-2、NPYY2激動劑、NPYY5/Y1拮抗劑、OXM、Gal-1R拮抗劑、MCH-1R拮抗劑、MC-3/4激動劑、BRS-3激動劑、胰多肽、抗-Chrelin抗體片段、腦產(chǎn)生的神經(jīng)營養(yǎng)因子、人生長激素、甲狀旁腺激素、促卵泡激素、胃抑制肽或其類似物。藥物融合體本發(fā)明的藥物融合體是包括連續(xù)多肽鏈的融合蛋白，所述的鏈包含結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段作為第一部分，與多肽藥物的第二部分連接。笫一和第二部分可通過肽鍵彼此直接連接，或者通過合適的氨基酸，或肽或多肽連接體連接。另外的部分(例如，第三，第四)和/或連接體序列的存在視情況而定。相對于第二部分(也即，多肽藥物)，笫一部分可位于N-末端，C-末端或內(nèi)部。在某些實施方案中，每個部分可存在超過1個拷貝。例如藥物融合體可包括兩個或多個第一部分，每個都含有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，結(jié)合人血清白蛋白的VH，和結(jié)合人血清白蛋白的VL，或結(jié)合人血清白蛋白的兩個或多個Vh或VJ。在一些實施方案中，藥物融合體是具有下式的連續(xù)多肽鏈口a-(X)nl-b-(Y)n2-c-(Z)n3-d或a-(Z)n3-b-(Y)n2-c-(X)nl-d;其中X是能特異性結(jié)合第一靶的多肽藥物；Y是特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的單鏈抗原結(jié)合片段；Z是能特異性結(jié)合笫二靶的多肽藥物；a，b，c和d每個獨立地缺乏，或者是1到大約100個氨基酸殘基；nl是l到大約10;n2是l到大約10;和n3是0到大約10，附帶條件是當nl和n2都是l，而且當n3是0時，X不包括抗體鏈或抗體鏈的片段。在一個實施方案中，X和z都不含有抗體鏈或抗體鏈的片段。在一個實施方案中，nl是l，n3是l，n2是2，3，4，5，6，7，8或9。優(yōu)選地，Y是特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH)，或特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(VJ。更優(yōu)選地，Y是結(jié)合人血清白蛋白的dAb(例如，VH，Vk或VJ。在一個特定的實施方案中，X或Z是人IL-lra或人IL-lra的功能性變體。在某些實施方案中，Y包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列。在其它的實施方案中，Y包括選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。在其他的實施方案中，藥物融合體包括X，與Y'部分，其中X'是多肽藥物，附帶條件是X'不包含抗體鏈或抗體鏈的片段；和Y，是特異性結(jié)合血清白蛋白的抗體的單鏈抗原結(jié)合片段。優(yōu)選地，Y，是特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH)，或特異性結(jié)合血清白蛋白的免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(Vl)。更優(yōu)選地，Y，是結(jié)合人血清白蛋白的dAb(例如，VH，Vk或VJ。X'可位于Y，的氨基末端，或Y'可位于X'的氨基末端。在一些實施方案中，X，與Y，被氨基酸，或被含有2到大約100個氨基酸的肽或多肽連接體隔開。在一個特定的實施方案中，X，是人IL-lra或人IL-lra的功能性變體。在某些實施方案中，Y，包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:ll、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列。在其他的實施方案中，Y'包括選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。在特定的實施方案中，藥物融合體包括結(jié)合血清白蛋白的dAb，與人IL-lra(例如，SEQIDNO:28)。優(yōu)選地，dAb結(jié)合人血清白蛋白并包括人構(gòu)架區(qū)。在其他的實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括人IL-lra的功能性變體，其與成熟的152個氨基酸形式的人IL-lra具有至少大約80%，或至少大約85%，或至少大約90%，或至少大約95%，或至少大約96%，或至少大約97%，或至少大約98%，或至少大約99%的氨基酸序列同一性，并拮抗人白細胞介素-1型1受體。(參見，Eisenberg等，Nature343:341-346(1990).)。變體可包含一個或多個另外的氨基酸(例如，包含153或154個或更多個氨基酸)。本發(fā)明的藥物融合體可使用任何合適的方法生產(chǎn)。例如，一些實施方案是通過把編碼藥物融合體的核酸插入到合適的表達載體中來生產(chǎn)。然后把得到的構(gòu)建體引入到合適的宿主細胞中用于表達。緊接著表達之后，可使用任何合適的方法，從細胞溶解產(chǎn)物或優(yōu)選地從培養(yǎng)基或周質(zhì)分離或純4匕融合蛋白。(參見，例如，CurrentProtocolsinMolecularBiology(Ausubel，F(xiàn).M.等，編輯，Vol.2，Suppl.26，pp.16.4.1-16.7.8(1991))。進一步的實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括促胰島素劑。優(yōu)選的實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括GLP-1，或GLP-1的類似物或肽。進一步優(yōu)選的實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括Ser8GLP-l(7-36)酰胺。進一步的實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括具有一個或多個以下置換的GLP-1類似物VaP或Pro9。優(yōu)選，GLP-1類似物是Pro9GLP-l(7-36)或Pro9GLP-l(7-37)。更多的GLP-1類似物或肽可以包括任一種以下的C-端延伸PSS、PSSGAP或PSSGAPPS。另一個實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括含有通式I序列的GLP-1類似物His7-Xaa8-Xaa9-Gly'0-Xaa"墨Phe'2-Thr'3-Xaa'4-Asp'5-Xaa'6-Xaa'7-Xaa"-Xaa'9-Xaa20.Xaa2l-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe28-Ile29-Xaa"-Xaa31-Xaa32-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xad43-Xaa44-Xaa45通式I-SEQIDNO:171其中位置8的Xaa為Ala、Gly、Ser、Thr、Leu、Ile、Val、Glu、Asp或Lys;位置9的Xaa為Glu或Asp;位置11的Xaa為Thr、Ala、Gly、Ser、Leu、Ile、Val、Glu、Asp或Lys;位置14的Xaa為SerAsp或Lys;位置16的Xaa為ValGlu、Asp、Trp或Lys;位置17的Xaa為SerAsp或Lys;位置18的Xaa為SerAsp、Trp、Tyr或Lys;位置19的Xaa為Tyr、Phe、Trp、Glu、位置20的Xaa為Leu、Ala、Gly、Ser、Asp、Met、Trp、Tyr或Lys;位置21的Xaa為Glu、Asp或Lys;位置22的Xaa為Gly、Asp或Lys位置23的Xaa為Gln、位置24的Xaa為Ala、Glu、Asp或Lys;位置25的Xaa為Ala、Asp或Lys;位置26的Xaa為Lys、位置27的Xaa為Leu、位置30的Xaa為AlaAsp或Lys;位置31的Xaa為Trp、Ala、Gly、Thr、Leu、lle、Val、Glu、Ala、Gly、Ser、Thr、Leu、Ile、Tyr、Ala、Gly、Thr、Leu、Ile、Val、Glu、Ala、Gly、Thr、Leu、Ile、Val、Glu、Asp、Gin或Lys;Thr、Ile、Val、Glu、Ala、Ser、Thr、Leu、Ile、Val、Glu、Asn、Gly、Arg、Glu、Ser、Thr、Asp或Lys;Leu、Ile、Val、Arg、Gly、Ser、Thr、Leu、Ile、Val、Glu、Arg、Glu、,Gly、Gln、Glu、Asp或His;Asp或Lys;Ser、Thr、Leu、Ile、Val、Glu、Phe、Tyr、Glu、Asp或Lys;位置32的Xaa為Leu、Gly、Ala、Ser、Thr、Ile、Val、Glu、Asp或Lys;位置33的Xaa為Val、Gly、Ala、Ser、Thr、Leu、Ile、Glu、Asp或Lys;位置34的Xaa為Asn、Lys、Arg、Glu、Asp或Hisj位置35的Xaa為Gly、Ala、Ser、Thr、Leu、Ile、Val、Glu、Asp或Lys;位置36的Xaa為Gly、Arg、Lys、Glu、Asp或His;位置37的Xaa為Pro、Gly、Ala、Ser、Thr、Leu、Ile、Val、Glu、Asp或Lys，或刪除；位置38的Xaa為Ser、Arg、Lys、Glu、Asp或His，或刪除；位置39的Xaa為Ser、Arg、Lys、Glu、Asp或His，或刪除；位置40的Xaa為Gly、Asp、Glu或Lys，或刪除位置41的Xaa為Ala、Phe、Trp、Tyr、Glu、Asp或Lys，或刪除；位置42的Xaa為Ser、Pro、Lys、Glu或Asp，或刪除；位置43的Xaa為Ser、Pro、Glu、Asp或Lys，或刪除；位置44的Xaa為Gly、Pro、Glu、Asp或Lys，或刪除；和位置45的Xaa為Ala、Ser、Val、Glu、Asp或Lys，或刪除；倘若位置37、38、39、40、41、42、43或44的氨基酸刪除時，那么該氨基酸的每個氨基酸下游也是刪除的。另一個實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括含有通式(II)的氨基酸序列的GLP-1類似物Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa1、Xaa'9-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa3()-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa"-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46通式(II)-SEQIDNO:172其中Xaa7是L-組氨酸、D-組氨酸、脫氨基-組氨酸、2-氨基-組氨酸、3-羥基組氨酸、同型組氨酸、Na-乙酰-組氨酸、a-氟甲基-組氨酸、a-甲基-組氨酸、3-吡啶丙氨酸、2-吡啶丙氨酸或4-吡啶丙氨酸；Xaa8是Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Lys、Aib、(l陽氨基環(huán)丙基)羧酸、U-氨基環(huán)丁基)羧酸、(l-氨基環(huán)戊基)羧酸、(l-氨基環(huán)己基)羧酸、(l-氨基環(huán)庚基)羧酸或U-氨基環(huán)辛基)羧酸；Xaa"為Val或Leu;Xaa"為Ser、Lys或Arg;Xaa"為Tyr或Gln;Xaa20為Leu或Met;Xaa"為Gly、Glu或Aib;Xaa"為Gln、Glu、Lys或Arg;Xaa25為Ala或Val;Xaa"為Lys、Glu或Arg;Xaa27為Glu或Leu;Xaa鄧為Ala、Glu或Arg;Xaa"為Val或Lys;Xaa"為Lys、Glu、Asn或Arg;Xaa"為Gly或Aib;Xaa"為Arg、Gly或Lys;Xaa"為Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、酰胺或不存在；Xaa"為Lys、Ser、酰胺或不存在。Xaa39為Ser、Lys、酰胺或不存在；Xaa卯為Gly、酰胺或不存在；Xaa"為Ala、酰胺或不存在；Xaa42為Pro、酰胺或不存在；Xaa"為Pro、酰胺或不存在；Xaa"為Pro、酰胺或不存在；Xaa4s為Ser、酰胺或不存在；Xaa46為酰胺或不存在；倘若Xaa38、Xaa39、Xaa40、Xaa41、Xaa42、Xaa43、Xaa44、Xaa45或Xaa46不存在，那么每個氨基酸殘基下游也不存在。本發(fā)明的另一實施方案中，藥物融合體或藥物綴合物包括含有通式(III)的氨基酸序列的GLP-1肽Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-T)rrLeu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-Phe-lle-Xaa30-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa"-Xaa36-Xaa37-Xaa38通式(III)陽SEQIDNO:173其中Xaa為L-組氨酸、D-組氨酸、脫氨基-組氨酸、2-氨基組氨酸、p-羥基-組氨酸、同型組氨酸、N，l-乙酰-組氨酸、a-氟甲基-組氨酸、a-甲基-組氨酸、3-吡啶丙氨酸、2-吡啶丙氨酸或4-吡啶丙氨酸；Xaa8是Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Lys、a國氨基異丁酸(Aib)、U-氨基環(huán)丙基)羧酸、U-氨基環(huán)丁基)羧酸、U-氨基環(huán)戊基)羧酸、(l-氨基環(huán)己基)羧酸、(l-氨基環(huán)庚基)羧酸或(l-氨基環(huán)辛基)羧酸；Xaa"為Ser、Lys或ArgjXaa"為Gly、Glu或Aib;Xaa23為Gln、Glu、Lys或Arg;Xaa"為Lys、Glu或Arg;Xaa卯為Ala、Glu或Arg;Xaa"為Lys、Glu或Arg;Xaa"為Gly或Aib;Xaa為Arg或Lys;Xaa"為Gly、Ala、Glu或Lys;Xaa"為Lys、酰胺或不存在。本發(fā)明的再一實施方案中，GLP-1肽選自GLP-1(7-35)、GLP-1(7-36)、GLP國1(7畫36)-酰胺、GLP畫1(7誦37)、GLP-1(7-38)、GLP畫1(7-39)、GLP-1(7-40)、GLP-1(7-41)或其類似物或肽。本發(fā)明的另一實施方案中，GLP-1肽是GLP-1(A-B)或其類似物，其中A是1至7的整數(shù)，B是"至"的整數(shù)，含有一個通過親水性間隔物連接C-端氨基酸殘基的白蛋白結(jié)合殘基，和任選地，笫二個連接其他氨基酸殘基之一的白蛋白結(jié)合殘基。另一個實施方案中，GLP-1肽包括與GLP-1(7-37)相比較不超過十五個已經(jīng)改變、添加或刪除的氨基酸殘基或與GLP-1(7-37)相比較不超過十個已經(jīng)改變、添加或刪除的氨基酸殘基。另一個實施方案中，GLP-1肽包括與GLP-1(7-37)相比較不超過六個(優(yōu)選，不超過5、4、3、2或1個)已經(jīng)交換、添加或刪除的氨基酸殘基。另一個實施方案中，GLP-1肽包括不超過4個(優(yōu)選，不超過3、2或1個)不是由遺傳密碼編碼的氨基酸殘基。另一個實施方案中，GLP-1肽是DPPIV保護的GLP-1肽。另一個實施方案中，促胰島素劑是DPPIV穩(wěn)定的。另一個實施方案中，GLP-1肽在位置8含有a-氨基異丁酸(Aib)殘基。另一個實施方案中，所述GLP-1肽位置7的氨基酸殘基選自D-組氨酸、脫氨基-組氨酸、2-氨基-組氨酸、P-羥基-組氨酸、高組氨酸、Na-乙酰-組氨酸、a-氟曱基-組氨酸、a-甲基-組氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸和4-吡啶基丙氨酸。另一個實施方案中，GLP-1肽選自Arg34GLP-l(7-37)，Arg26'34Lys38GLP-l(7-38)，Arg26'34Lys38GLP-l(7隱38)-OH，Lys36Arg26'34GLP-l(7-36)，Aib8'22'35GLP-l(7-37》，Aib8'35GiP-l(7-37)，Aib8'22GLP-l(7-37),Aib8'22'35Arg26'34Lys38GLP-l(7-38〗，Aib8'"Arg26'34LyS38GLP-l(7-38)，Aib8i2Arg26'34Lys3rGLP-l(7-38),Aib8'22,:f5Arg26'34Lys38GLP，l(7-38),Aib8'35Arg26'34Lys38GLP-l(7-38),Aib8'22'35Arg26Lys58GLP-l(7-38)，Aib8'35Arg26LyS38GLP-l(7-38),Aib8'22Arg26Lys38GLP-l(7-38),Aib8'22'"Arg^I^GLP-l(7-38)，Aib8'.35Arg34Lys38GLP-l(7-38),Aib8'22Arg34Lys38GLP-l(7-38)，Ail/'22'35Ala37Lys38GLP-l(7-38),Aib8'35Ala"Lys38GLP"(7-38)，Aib8'22Ala37Lys38GLP-l(7-38),Aib8'22'35Lys"GLP-l(7-37〗，Aib8'35Lys"GLP-l(7-37),Aib8Arg26'34Glu22'23'3。Lys38GLP-l(7-38)，Gly8Arg26'34Lys"GLP-l(7-37)，Aib8Arg26'34Lys38GLP-l(7-38),Aib8Lys38GLP-l(7-38),Gly8Arg2"4Lys38GLP-l(7-38)，'GLP陽1(7畫37)酰胺、GLP-l(7-37)酰胺、Aib8Arg26'34Lys36GLP-l(7-37),Arg26'34Lys36GLP-l(7-37)，Gly8Arg2"4Lys36GLP-l(7-37),Aib8'35Lys37GLP-l(7-37)-OH,Ala8Arg26'34Lys38GLP-l(7-38),AibS'22'35Lys38GLP-l(7-38)，Aib8Arg26'34L"36GLP-l(7-36)，Gly8Arg26'34Lys36GLP-l(7-37)-OH，Aib8'22'r5Lys3fGLP-l(7-37)-NH2,Aib8Ar§34GLP-l(7-37)-OH，;Gly8Arg26'34Lys38GLP-1(7-38),Arg34GLP-1(7-37)-OH,GlySGlu52'23'3^^8'26'34Lys"GLP-l(7-38)，咪唑基丙酸7Asp18Aib22'35Lys38GLP-l(7-38)、咪唑基丙酸7Aib22'35Lys38GLP-l(7-38)、[3-(5-咪唑基)丙?；?Aib8Arg26'34Lys38GLP-1(7-38)和Aib8'22Lys37GLP-l(7-38)。另一個實施方案中，GLP-l肽通過天然GLP-l或GLP-l類似物位置23、26、34、36或38的氨基酸殘基連接親水性間隔物。另一個實施方案中，促胰島素劑是Lys2°exendin-4(l-39)-NH2。另一個實施方案中，GLP-l肽是-酰胺-SEQIDNO:174。另一個實施方案中，GLP-l肽是HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGX-SEQIDNO:175其中X-P或Y，或其片段或類似物。本發(fā)明的另一個實施方案中，GLP-l肽是Arg18、Leu2°、Gln34、Lys33(Ns-(，氨基丁?；?Na-十六烷?；?))Exendin-4-(7-45)-酰胺或Arg33、Leu20、Gln34、Lys18(Ns-(&y;-氨基丁?；?Na國十六烷?；?))Exendin畫4-(7-45)-酰胺。可以用作根據(jù)本發(fā)明的GLP-l類似物或衍生物或GLP-l樣藥物的促胰島素劑實例描述于國際專利申請No.W087/06941(TheGeneralHospitalCorporation)中，其涉及包括GLP-1(7-37)及其功能性衍生物的肽片段并涉及其作為促胰島素劑的用途(在此引入作為參照，特別是用于本發(fā)明中的藥物實例)。更多的GLP-1類似物描述于國際專利申請No.90/11296(TheGeneralHospitalCorporation)中，其涉及包括GLP誦l(7-36)及其功能性衍生物并具有超過GLP-1(1-36)或GLP-1(1-37)促胰島素(在此引入作為參考，特別是用于本發(fā)明中的藥物實例)。國際專利申請N0.WO91/11457(Buckley等)公開了活性GLP醫(yī)l肽7-34、7-35、7-36和7-37的類似物，其還可以用作根據(jù)本發(fā)明的GLP-1藥物(在此引入作為參考，特別是用于本發(fā)明中的藥物實例)。用于本發(fā)明中的更多Exendin-類似物描述于PCT專利公開W099/25728(Beeley等)、W099/25727(Beeley等)、WO98/05351(Young等)、WO99/40788(Young等)、WO99/07404(Beeley等)和WO99/43708(Kundsen等)中(在此全部引入作為參考，特別是用于本發(fā)明中的藥物實例)。合適的表達載體可以含有多個成分，例如，復(fù)制起點、選擇標記基因、一個或多個表達控制元素，如轉(zhuǎn)錄控制元素(例如，啟動子、增強子、終止子)和/或一個或多個翻譯信號、信號序列或前導(dǎo)序列等。表達控制元素和信號序列，如果存在，可以通過載體或其他來源來提供。例如，克隆的編碼抗體鏈的核酸的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯控制序列可以用來指導(dǎo)表達。啟動子為所需宿主細胞中的表達作準備。啟動子可以是組成型或誘導(dǎo)型。例如，啟動子可以可操作地連接編碼抗體、抗體鏈或其一部分的核酸，使得其指導(dǎo)核酸的轉(zhuǎn)錄。各種用于原核生物(例如，用于E.coli的lac、tac、T3、T7啟動子)和真核生物宿主(例如，猿病毒40早期或晚期啟動子、魯斯氏肉瘤病毒長末端重復(fù)啟動子、巨細胞病毒啟動子、腺病毒晚期啟動子)的合適啟動子是可獲得的。此外，表達載體通常包括選擇標記用于攜帶載體的宿主細胞的選擇，且在可復(fù)制表達載體的情況中，包括復(fù)制起點。編碼給予抗生素或抗藥性產(chǎn)物的基因是常用的選擇標記并可以用于原核生物(例如，內(nèi)酰胺酶基因(氨節(jié)青霉素抗性)、用于四環(huán)霉素抗性的r&基因)和真核生物細胞(例如，新霉素(G418或geneticin)、gpt(霉酚酸)、氨芐青霉素或潮霉素抗性基因)。二氫葉酸鹽還原酶標記基因允許在各種宿主中使用氨甲喋呤的選擇。編碼宿主營養(yǎng)缺陷標記基因產(chǎn)物的基因(例如，Z^f/厶t//L43、好/5"3)通常用作酵母中的選擇標記。還考慮了使用病毒(例如，桿狀病毒)或噬菌體載體，以及能夠整合至宿主細胞中的載體，如逆轉(zhuǎn)錄病毒栽體。用于在哺乳動物細胞和原核生物細胞(五."http://)、昆蟲細胞(果蠅S2細胞、Sf9)和酵母(曱醇畢赤酵母CR附e"flwoZ/cfl)、P/7flWon's、釀酒酵母(51.ce"v/s/"e))中的合適表達栽體是本領(lǐng)域公知的。提供了表達藥物融合體的重組宿主細胞和制備在此所述的藥物融合體的方法。重組宿主細胞包括編碼藥物融合體重組核酸?？梢酝ㄟ^編碼蛋白質(zhì)的重組核酸在合適宿主細胞中的表達來產(chǎn)生藥物融合體，或使用其他合適的方法。例如，可以將在此所述的表達構(gòu)建體引入合適的宿主細胞中，并在適于構(gòu)建體表達的條件下培養(yǎng)所得到的細胞(例如，在培養(yǎng)物、動物中)。合適的宿主細胞可以是原核生物的，包括細菌細胞，如大腸桿菌、枯草芽胞桿菌和或其他合適的細菌，真核生物的，如真菌或酵母細胞(例如，P/c/i/fl/7flWon's、曲霉菌種、釀酒酵母、粟酒裂殖酵母(iScA/zos(zcc/rfl尸o附j(luò)c^y/o附6e)、鏈抱審(7Vew/Y^/70尸flcnwsfl))，或其他低等真核細胞，和高等真核生物的細胞，如來自昆蟲(例如，Sf9昆蟲細胞(WO94/26087(O'Connor))或哺乳動物(例如，COS細胞，如COS-l(ATCC登錄號No.CRL-1650)和COS誦7(ATCC登錄號No.CRL國1651)、CHO(例如，ATCC登錄號No.CRL-卯96)、293(ATCC登錄號No.CRL-1573)、HeLa(ATCC登錄號No.CCL-2)、CV1(ATCC登錄號No.CCL-70)、WOP(Dailey等，丄Ww/.54:739-749(1985))、3T3、293T(Pear等，TVfl".Jaw/.Z7.5*.A90:8392-8396(1993))、NSO細胞、SP2/0、HuT78細胞等的那些(參見，例如，Ausubel，F(xiàn).M.等，編輯，Cwfrewf/VWoco/;s所o/ogj，GreenePublishingAssociatesandJohnWiley&SonsInc.,(1993))。本發(fā)明還包括生產(chǎn)藥物融合體的方法，包括在適于藥物融合體表達的條件下培養(yǎng)本發(fā)明的重組宿主細胞。如果需要，該方法可以進一步包括分離或回收藥物融合體的步驟。在另一個實施方案中，將藥物人血清白蛋白和IL-lra的dAb)化學(xué)裝配來形成連續(xù)的多肽鏈。綴合物另一個方面中，本發(fā)明提供了包括結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段的綴合物，該片段結(jié)合藥物。這樣的綴合物包括"藥物綴合物"，其包括結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，該片段與藥物共價鍵合，和"非共價藥物綴合物"，其包括結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，該片段與藥物非共價鍵合。優(yōu)選，綴合物足夠穩(wěn)定使得結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段和藥物在體內(nèi)條件下(例如，給藥于人時)彼此保持實質(zhì)性的結(jié)合(共價或非共價)。優(yōu)選，在體內(nèi)條件下不高于約20%、不高于約15%、不高于約10%、不高于約9%、不高于約8%、不高于約7%、不高于約6%、不高于約5%、不高于約4%、不高于約3/、不高于約2%、不高于約1%或基本上沒有綴合物分解或分裂來釋放藥物和抗原結(jié)合片段。例如，通過在血清(例如，人血清)中37TC孵育藥物綴合物或非共價藥物綴合物24小時來方便地評定"體內(nèi)"條件下的穩(wěn)定性。該方法的一個實施例中，將等量的藥物綴合物和未綴合的藥物稀釋至兩個不同瓶子的血清中。將每個瓶子的一半內(nèi)含物立即在-20TC冷凍，并將另一半在371C孵育24小時。然后使用任何合適的方法如SDS-PAGE和/或蛋白質(zhì)印跡來分析全部的四種樣品?？梢允褂媒Y(jié)合藥物的抗體來探測蛋白質(zhì)印跡。如果不存在分解，藥物綴合物泳道中的所有藥物將跑到藥物綴合物的大小處。許多合適的方法可以用來測定"體內(nèi)"條件下的穩(wěn)定性，例如，使用合適的分析方法來分析如上所述制得的樣品，如色鐠法(例如，凝膠過濾、離子交換和反相)、ELISA、質(zhì)鐠等。藥物綴合物另一方面中，本發(fā)明提供了藥物綴合物，該綴合物包括具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段，和共價鍵合所述抗原結(jié)合片段的藥物，附加條件是藥物綴合物不是單個連續(xù)的多肽鏈。一些實施方案中，藥物綴合物包括具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，或具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vl)，和共價鍵合所述Vh或Vl的葯物，前提條件是藥物綴合物不是單個連續(xù)多肽鏈。優(yōu)選藥物綴合物包括單個結(jié)合血清白蛋白的Vh或羊個結(jié)合血清白蛋白的Vl。特定的實施方案中，藥物綴合物包括結(jié)合人血清白蛋白的VKdAb并包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列。其他實施方案中，藥物綴合物包括結(jié)合人血清白蛋白的VHdAb并包括選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。藥物綴合物可以包括任何所需的藥物并可以使用任何合適的方法制得。例如，藥物可以通過合適的連接部分在一個或多個位置如氨基端、羧基端或通過氨基酸側(cè)鏈直接或間接結(jié)合抗體的抗原結(jié)合片段，抗體結(jié)合血清白蛋白。一實施方案中，藥物綴合物包括結(jié)合人血清白蛋白的dAb和多肽藥物(例如，人IL-lra或人IL-lra的功能變體)，且多肽藥物(例如，人IL-lra或人IL-lra的功能變體)的氨基端直接地或通過合適的連接體部分結(jié)合dAb的羧基端。另一個實施方案中，藥物綴合物包括結(jié)合人血清白蛋白的dAb和促胰島素藥物(例如，GLP-1或GLP-1類似物)，且促胰島素藥物的氨基端是游離的(即，在綴合物中不是連接的或結(jié)合的)和羧基端直接或通過合適的連接體部分結(jié)合dAb的氨基端。其他實施方案中，藥物綴合物包括結(jié)合人血清白蛋白的dAb和兩個或多個共價鍵合dAb的不同藥物。例如，第一個藥物可以共價鍵合(直接或間接)dAb的羧基端和笫二個藥物可以共價鍵合(直接或間接)或通過側(cè)鏈氨基(例如，賴氨酸的s氨基)結(jié)合氨基端。優(yōu)選的實施方案中，促胰島素藥物(例如，GLP-1或GLP-1類似物)的氨基端是游離的?？梢允褂眠x擇性結(jié)合的公知方法來制得這樣的藥物綴合物。(參見，例如，Hermanson，G.T.7fecAm々Me51，AcademicPress:SanDiego，CA(1996"?？梢允褂酶鞣N用于綴合藥物和具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段的方法。將根據(jù)待綴合的藥物來選擇特定的方法。如果需要，可以使用含有末端官能團的連接體來連接抗原結(jié)合片段和藥物。通常，通過將含有反應(yīng)性官能團(或修飾來含有反應(yīng)性官能團)的藥物與連接體反應(yīng)或直接與結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段反應(yīng)來實現(xiàn)綴合。通過使含有(或修飾來含有)可以在合適條件下與第二個化學(xué)基團反應(yīng)因此形成共價鍵的化學(xué)部分或官能團的藥物反應(yīng)來形成共價鍵。如果需要，可以使用任何合適的方法將合適的反應(yīng)性化學(xué)基團添加至抗原結(jié)合片段或連接體。(參見，例如，Hermanson，G.T.jB/ocw_/Mgfl&r"Aw/^e51，AcademicPress:SanDiego，CA(1996))。許多合適的反應(yīng)性化學(xué)基團組合是本領(lǐng)域已知的，例如，胺基可以與親電子基團如甲苯磺酸鹽、甲磺酰酯、卣素(氯、溴、氟、碘)、N-羥基湖泊酰酯(NHS)等反應(yīng)。硫醇可以與馬來酰亞胺、吲哚乙?；⒈；?、吡啶二硫化物、5-硫醇-2-硝基苯甲酸硫醇(TNB-硫醇)等反應(yīng)。醛官能團可以結(jié)合含有胺或酰肼的分子，疊氮基可以與三價含磷基團反應(yīng)來形成氨基磷酸酯或磷酰亞胺鍵。將活性基團引入分子中的合適方法是本領(lǐng)域已知的(參見，例如，Hermanson，G.T.所oc咖gfl^rec/im々f^，AcademicPress:SanDiego,CA(1996))。一些實施方案中，通過兩個硫醇反應(yīng)來形成二硫鍵將具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段結(jié)合藥物。其他實施方案中，通過異硫氰酸鹽基團和伯胺反應(yīng)來產(chǎn)生異硫脲鍵將具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段結(jié)合藥物。合適的連接體部分可以是直鏈或支鏈的，并包括，例如，四乙二醇、C2C12乙烯、-NH-(CH2)p-NE^(CH2)p-NH-(其中p是一至十二)、CH2-OCH2-CH2.0-CH2-CH20-CH-NH-、包括1至約100個(優(yōu)選l至約l2)氨基酸的多肽鏈等。非共價藥物綴合物一些非共價鍵(例如，氫鍵、范德華相互作用)可以產(chǎn)生穩(wěn)定的、高度特異性的分子間連接。例如，在互補結(jié)合伴侶之間通過多個非共價鍵獲得的分子識別相互作用成為許多重要生物相互作用的基礎(chǔ)，如酶與底物的結(jié)合、抗體對抗原的識別、配體與其受體的結(jié)合以及蛋白質(zhì)和肽的三維結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。因此，可以使用這樣的弱非共價相互作用(例如，氫鍵、范德華相互租用、靜電相互租用、疏水性相互租用等)來將藥物結(jié)合具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段。優(yōu)選，連接抗原結(jié)合片段和藥物的非共價鍵是足夠強的，使得抗原結(jié)合片段和藥物在體內(nèi)條件(例如，給藥于人時)下彼此保持實質(zhì)性的結(jié)合。通常，連接抗原結(jié)合片段和藥物的非共價鍵具有至少約10"M"的強度。優(yōu)選的實施方案中，非共價鍵的強度為至少約IO"M-!、至少約10'2M1、至少約10"M1、至少約10"M"或至少約10"M1。已知生物素和抗生物素蛋白之間以及生物素和抗生蛋白鏈菌素之間的相互作用在許多條件下是非常有效和穩(wěn)定的，并且如在此所述的，生物素和抗生物素蛋白之間或生物素和抗生蛋白鏈菌素之間的非共價鍵可以用來制備本發(fā)明的非共價藥物綴合物?？梢栽诰哂醒灏椎鞍滋禺愋缘目贵w的抗原結(jié)合片段和藥物之間直接形成非共價鍵，或可以在合適的互補結(jié)合伴倡之間形成(例如，生物素和抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素)，其中一個伴侶與藥物共價鍵合，互補的結(jié)合伴倡與抗原結(jié)合片段共價鍵合。使用互補結(jié)合伴倡時，結(jié)合伴倡之一可以直接或通過合適的連接體部分與藥物共價鍵合，互補結(jié)合伴倡可以直接或通過合適的連接體部分與結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段共價鍵合?；パa結(jié)合伴倡是成對的選擇性彼此結(jié)合的分子。許多互補結(jié)合伴侶是本領(lǐng)域已知的，例如，抗體(或其抗原結(jié)合片段)與其同源的抗原或抗原決定部位，酶與其底物，以及受體與其配體。優(yōu)選的互補結(jié)合伴侶是生物素和抗生物素蛋白，以及生物素和抗生蛋白鏈菌素?？梢匀缟纤鐾瓿苫パa結(jié)合對的成員與具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗原結(jié)合片段或藥物的直接或間接共價鍵合，例如，通過將含有反應(yīng)性官能團(或修飾來含有反應(yīng)性官能團)的互補結(jié)合伴侶與結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段反應(yīng)，使用或沒用連接體。將根據(jù)待綴合的化合物(例如，藥物、互補結(jié)合伴侶、結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段)來選擇特定的方法。如果需要，可以使用含有末端反應(yīng)性官能團的連接體(例如，同型雙功能連接體、雜雙功能連接體)來連接抗原結(jié)合片段和/或藥物與互補結(jié)合伴侶。一實施方案中，可以使用含有兩個不同反應(yīng)部分的雜雙功能連接體?？梢赃x擇雜雙功能連接體，使得反應(yīng)部分之一與具有血清白蛋白結(jié)合特異性的抗體的抗原結(jié)合片段或藥物反應(yīng)，且另一個反應(yīng)部分與互補結(jié)合伴侶反應(yīng)?？梢允褂萌魏魏线m的連接體(例如，雜雙功能連接體)并且許多這樣的連接體是本領(lǐng)域已知的并是商業(yè)來源可獲得的(例如，PierceBiotechnology,Inc.,IL)。組合物以及治療和診斷方法提供了含有本發(fā)明藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的組合物，包括藥物或生理組合物(例如，用于人和/或牲畜給藥)。藥物或生理組合物包括一種或多種藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，和藥物學(xué)上或生理學(xué)上可接受的載體。通常，這些載體包括水或醇/水溶液、乳法液或懸浮液，包括鹽水和/或緩沖介質(zhì)。非腸道載體包括氯化鈉溶液、Ringer，s葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉和乳酸鹽化Ringer，s。合適的生理學(xué)上可接受的佐劑，如果需要將多肽復(fù)合物保持于懸浮液中，可以選自增稠劑，如羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、明膠和藻朊酸鹽。靜脈內(nèi)載體包括流體以及營養(yǎng)補充劑和電解質(zhì)補充劑，如基于Ringer，s葡萄糖的那些。防腐劑和其他佐劑，如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體，也可以存在(Mack(1982)/e/m7ig^m、戶/^/7M"c^^/cfl/5Wewces，第16版)。組合物可以包括所需量的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)。例如，組合物可以包括約5%至約99%重量的藥物綴合物、非共價藥物綴合物或藥物融合體。特定的實施方案中，組合物可以包括約10%至約99%、或約20%至約99%、或約30%至約99%或約40%至約99%、或約50°/。至約99%、或約60%至約99%、或約70%至約99%、或約80%至約99%、或約90%至約99%、或約95%至約99%重量的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)。在一個實施例中，組合物是冷凍干燥的(凍干)。在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)通常在預(yù)防、抑制或治療以下病癥中發(fā)現(xiàn)用途，這些病癥為炎癥狀態(tài)(例如，急性和/或慢性炎癥疾病)，如慢性梗塞性肺病(例如，慢性支氣管炎、慢性梗塞性支氣管炎、氣腫)、過敏性超敏、癌癥、細菌或病毒感染、肺炎，如細菌性肺炎(例如，葡萄球菌肺炎)、自體免疫失調(diào)(其包括，但不限于，I型糖尿病、多發(fā)性硬化、關(guān)節(jié)炎(例如，骨關(guān)節(jié)炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、青少年類風濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、狼瘡關(guān)節(jié)炎、脊柱關(guān)節(jié)病(例如，強直性脊柱炎))、全身性紅斑狼瘡、炎性腸病(例如，節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎)、Behcet's綜合癥和重癥肌無力)、子宮內(nèi)膜異位、牛皮褲、腹部粘附(例如，腹部手術(shù)后)、哞喘和膿毒性休克。在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以用于預(yù)防、抑制或治療疼痛，如慢性或急性外傷疼痛、慢性或急性神經(jīng)痛、急性或慢性肌肉骨骼疼、慢性或急性癌癥疼痛等。還可以給藥在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)用于診斷目的。使用在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以預(yù)防、抑制或治療的癌癥包括淋巴瘤(例如，B細胞淋巴瘤、急性骨髓淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤)、骨髓瘤(例如，多發(fā)性骨髓瘤)、肺癌(例如，小細胞肺癌、非小細胞肺癌)、結(jié)直腸癌、頭頸部癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、乳癌、卵巢癌、膀胱癌、白血病(例如，急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性'淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病)、腺癌、腎癌、haematopoetic癌(例如，骨髓發(fā)育不良綜合癥、骨髓增生性失調(diào)(例如，真性紅血球增多癥、基礎(chǔ)(或原發(fā)性)血小板增多癥、先天性骨髓纖維化)等。在此所述的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)還適用于預(yù)防、抑制或治療子宮內(nèi)膜異位、纖維化、不育癥、早產(chǎn)、勃起障礙、骨質(zhì)疏松、糖尿病(例如，II型糖尿病)、生長失調(diào)、HIV感染、呼吸窘迫綜合征、腫瘤和尿床。本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中涉及根據(jù)本發(fā)明的化合物用于制備治療高血糖、2型糖尿病、葡萄糖耐量異常、1型糖尿病、肥胖癥、高血壓、綜合征X、血脂異常、(P-細胞凋亡、j3-ce)i不足、心肌梗塞、炎性腸綜合征、消化不良、認識失調(diào)，例如，認知增強、神經(jīng)保護、動脈粥樣硬化、冠心病和其他心血管疾病藥物的用途。在用于這些適應(yīng)癥的特定實施方案中，藥物選自促胰島素劑、腸促胰島素、胰高血糖素-樣l肽、GLP-1肽、GLP-1類似物、GLP-1衍生物、PYY、PYY肽、PYY類似物、PYY衍生物、Exendin畫3、Exendin畫3肽、Exendin-3類似物、Exendin陽3衍生物、Exendin-4、Exendin陽4肽、Exendin-4類似物、Exendin-4矛汴生物或這些中兩種或多種的組合(例如，GLP-1肽和PYY肽)。本發(fā)明的另一個實施方案涉及根據(jù)本發(fā)明的化合物用于制備治療小腸綜合征、炎性腸綜合征或節(jié)段性回腸炎藥物的用途。用于這些適應(yīng)癥的特定實施方案，藥物選自促胰島素劑、腸促胰島素、胰高血糖素-樣1肽、GLP-1肽、GLP-1類似物、GLP-1衍生物、PYY、PYY肽、PYY類似物、PYY衍生物、Exendin國3、Exendin-3狀、Exendin誦3類4以物、Exendin-3衍生物、Exendin-4、Exendin國4肽、Exendin-4類似物、Exendin-4衍生物或這些中兩種或多種的組合(例如，GLP-1肽和PYY肽)。另一個實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的化合物用于制備治療高血糖、1型糖尿病、2型糖尿病或p-細胞不足藥物的用途。用于這些適應(yīng)癥的特定實施方案中，藥物選自促胰島素劑、腸促胰島素、胰高血糖素-樣1肽、GLP-1肽、GLP-1類似物、GLP-1衍生物、PYY、PYY肽、PYY類似物、PYY衍生物、Exendin-3、Exendin-3肽、Exendin醫(yī)3類似物、Exendin-3衍生物、Exendin-4、Exendin國4肽、Exendin-4類似物、Exendin-4衍生物或這些中兩種或多種的組合(例如，GLP-1肽和PYY肽)。用根據(jù)本發(fā)明的化合物的治療還可以結(jié)合笫二種或更多藥物學(xué)活性物質(zhì)，其可以是藥物綴合物或融合體的一部分。例如，活性物質(zhì)選自抗糖尿病劑、抗肥胖癥劑、食欲調(diào)節(jié)劑、抗高血壓劑、用于治療和/或預(yù)防由糖尿病引起或糖尿病相關(guān)并發(fā)癥的藥劑和用于治療和/或預(yù)防由肥胖癥引起或肥胖癥相關(guān)并發(fā)癥和失調(diào)的藥劑。在本發(fā)明的內(nèi)容中，表述"抗糖尿病劑"包括用于治療和/或預(yù)防胰島素抗藥性和其中胰島素抗藥性是病理生理機制的疾病的化合物。這些藥物學(xué)活性物質(zhì)的實例是胰烏素、GLP-1激動劑、磺脲(例如，曱苯磺丁脲、格列苯脲、格列吡嗪和格列齊特)、雙胍，例如，二曱雙胍、meglitinide、葡糖苦酶抑制劑(例如，acorbose)、胰高血糖素拮抗劑、DPP-IV(二肽酰肽酶-IV)抑制劑、涉及刺激糖原異生和/或糖原分解的肝臟酶的抑制劑、葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑、噻唑二酮，如troglitazone和ciglitazone，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的化合物，如抗高脂血劑，如HMGCoA抑制劑(斯他汀類)，降低食物攝入的化合物，RXR激動劑和作用于p-細胞的ATP-依賴性鉀通道的藥劑，例如，格列苯脲、格列吡溱、格列齊特和瑞格列那；消膽胺、考來替潑、吉非貝齊、lovastatin、普伐他汀、辛伐他汀、普羅布考、右旋曱狀腺素、neteglinide、瑞格列奈；(卩-阻斷劑如alprenolol、阿替洛爾、蓉嗎洛爾、pindolol、普萘洛爾和美托洛爾，ACE(血管緊張素轉(zhuǎn)化酶)抑制劑如benazepril、卡托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利、alatriopril、全那普利和雷米普利，鈣通道阻斷劑如硝苯地平、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地爾硫革和verapamil,以及a-阻斷劑如多沙唑溱、烏拉地爾、哌唑溱和特拉唑溱；CART(可卡因-苯丙胺相關(guān)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物)激動劑、NPY(神經(jīng)肽Y)拮抗劑、MC4(黑皮酥4)激動劑、orexin拮抗劑、TNF(腫瘤壞死因子(激動劑、CRF(促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子)激動劑、CRFBP(促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子結(jié)合蛋白)拮抗劑、urocortin激動劑、卩3激動劑、MSH(黑素細胞刺激激素)激動劑、MCH(黑素細胞濃縮激素)拮抗劑、CCK(膽嚢收縮素)激動劑、serotonin再吸收抑制劑、serotonin和noradrenaline再吸收抑制劑、混合的serotonin和noradrenergic孑匕合物、5HT(serotonin)激動劑、bombesin激動劑、galanin拮抗劑、生長激素、生長激素釋放化合物、TRH(thyreotropin釋放激素)激動劑、UCP2或3(解偶聯(lián)蛋白2或3)調(diào)節(jié)劑、leptin激動劑、DA激動劑(bromocriptin、doprexin)、月旨酶/淀粉酶抑制劑、RXR(視黃醇X受體)調(diào)節(jié)劑、TRp激動劑；組胺H3拮抗劑。更多的胰島素可以是以下類似物之一的形式AspB2S-人胰島素、LysB28，ProB29-人胰島素、LysB3GluB29-人胰島素、GlyA21，ArgB31，ArgB32-人胰島素和des(B30)人胰島素。更多其他的活性藥物包括，人生長激素或其類似物、甲狀旁腺激素或其類似物、生長因子如血小板產(chǎn)生的生長因子(PDGF)、轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)、轉(zhuǎn)化生長因子-P(TGF-卩)、上皮生長因子(EGF)、血管上皮生長因子(VEGF)、促生長因子如胰島素生長因子I(IGF-I)、胰島素生長因子II(IGF-II)、促紅細胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)或血管生成素、干擾素、尿激酶原、尿激酶、組織血纖蛋白溶酶原激活因子(t-PA)、血纖蛋白溶酶原激活因子抑制劑1、血纖蛋白溶酶原激活因子抑制劑2、馮威勒布蘭德氏因子、細胞因子，例如，白細胞間介素如白細胞間介素(IL)l、IL-lRa、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-ll、IL畫12、IL隱13、IL國15、IL16、IL-17、IL畫18、IL-20或IL-21、集落刺激因子(CFS)如GM-CFS、干細胞因子、腫瘤壞死因子如TNF-a、淋巴細胞毒素-a、淋巴細胞毒素-p、CD40L或CD30L、蛋白酶抑制劑，例如，抑肽酶、人促卵泡激素或其類似物、酶如超氧物歧化酶、天冬酰胺酶、精氨酸酶、精氨酸脫氨酶、腺苷脫氨酶、核糖酶、過氧化氫酶、尿酸酶、膽紅素氧化酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性磷酸酶、3-葡萄糖醛酸酶、嘌呤核苷磷酸化酶或類凝血酶、鎮(zhèn)靜劑，例如，內(nèi)啡肽、腦啡肽或非天然鎮(zhèn)靜劑，激素或神經(jīng)肽，例如，降鈣素，胰高血糖素，胃泌素，促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)，縮膽嚢肽，促黃體激素，促性腺激素-釋放激素，絨膜促性腺激素，促腎上腺皮質(zhì)激素-釋放因子，后葉加壓素，催產(chǎn)素，抗利尿激素，曱狀腺刺激激素，促曱狀腺激素釋放激素，松弛素，催乳激素，肽YY，神經(jīng)肽Y，胰多肽，leptin，CART(可卡因-苯丙胺相關(guān)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物)，CART相關(guān)肽，脂滴包被蛋白，黑素皮質(zhì)素(黑素細胞-刺激激素)如MC-4，黑色素濃縮激素，促尿鈉排泄肽，腎上腺髓質(zhì)素，內(nèi)皮素，分泌素，amylin，血管活性腸肽(VIP)，垂體腺苷酸環(huán)化酶激活多肽(PACAP)，bombesin,bombesin-樣肽，胸腺素，肝素結(jié)合蛋白，可溶性CD4，hypothalmic釋放因子，褪黑激素及其類似物。還可以給藥在此所述的藥物綴合物或藥物融合體用于診斷目的或作為成像劑。在本發(fā)明的應(yīng)用中，術(shù)語"防止"涉及在疾病誘導(dǎo)之前給藥保護性的組合物。"抑制"指的是誘導(dǎo)事件之后但在疾病臨床顯現(xiàn)之前給藥組合物。"治療"涉及在疾病癥狀變得明顯之后給藥保護性的組合物。可以用于篩選藥物組合物(例如，藥物綴合物，非共價藥物綴合物、藥物融合體)在保護或治療疾病中有效性的動物模型系統(tǒng)是可獲得的。用于測試易感大鼠中全身性紅斑狼瘡(SLE)的方法是本領(lǐng)域已知的(Knight等，(1978)，丄Merf.，147:1653;Reinersten等(1978)A^wE"g./M^/.，299:515)。通過用來自另一個物種的可溶性AchR蛋白誘導(dǎo)疾病在SJL/J雌性小鼠中測試重癥肌無力(MG)(Lindstrom等，(1988)插./顯麵/"42:233)。通過注射II型膠原在小鼠易感林系中i秀導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(Stuart等(1984)及ev.J/mmmW.42:233)。已經(jīng)描述了通過注射分枝桿菌熱擊蛋白在易感大鼠中誘導(dǎo)佐劑性關(guān)節(jié)炎的模型(VanEden等，(1988)，iV"m"，331:171)?？梢栽谄渲型ㄟ^關(guān)節(jié)內(nèi)注射膠原酶誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的鼠模型中測定治療骨關(guān)節(jié)炎的有效性(Blom，A.B.等，0WeoflW/m'"'sCflW/flge12:627-635(2004)。按照所述的通過給藥曱狀腺球蛋白在小鼠中誘導(dǎo)甲狀腺炎(Maron等，(1980)/.Aferf.152:1115)。胰島素依賴型糖尿病(IDDM)自然地產(chǎn)生或可以在特定的小鼠林系中誘導(dǎo)，如Kanasawa等，(1984)"/fl&油g/fl，27:113所述的那些。小鼠和大鼠中的EAE作為人MS的模型。在該模型中，通過給藥髓磷脂堿性蛋白來誘導(dǎo)脫髄鞘疾病(參見Paterson(1986o//m附"mpfl"o/柳，Mischer等，編輯，Crune和Stratton，NewYork,pp.l79誦213;McFarlin等(1973)Sc/ewce，179:478:和Satoh等(1987)//附附tmo/"138:179)。本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以用作分開給藥的組合物或結(jié)合其他藥劑。這些可以包括各種免疫治療藥物，如cylcosporine、氨甲喋呤、阿霉素或順鉑、免疫毒素等。藥物組合物可以包括各種細胞毒素或其他藥劑的"混合物"。結(jié)合本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)，或包括不同藥物的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物組合物、藥物融合體)的藥物組合物的組合。依照任何合適的技術(shù)將藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)給藥于任何個體或患者。各種給藥途徑是可能的，包括，例如，口服、飲食、局部、經(jīng)皮、直腸、非腸道(例如，靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)注射)和吸入(例如，支氣管內(nèi)、鼻內(nèi)或口服吸入、鼻內(nèi)滴液)給藥途徑，取決于藥物組合物和待治療的疾病或病癥。給藥可以是所示的局部的或全身的。優(yōu)選的給藥模式可以根據(jù)選定的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)和待治療的病癥(例如，疾病)而改變。給藥的劑量和頻率將取決于患者的年齡、性別和狀況，其他藥物的同時給藥，臨床醫(yī)師考慮的conterindication和其他參數(shù)。給藥藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的治療有效量。治療有效量是在給藥的條件下足以獲得所需治療效果的含量。本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明含有GLP-1藥物或GLP-1類似物或衍生物的藥物組合物可以非腸道給藥于需要這樣治療的患者。非腸道給藥可以通過注射器任選筆式注射器通過皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射來進行?；蛘?，可以通過灌輸泵來進行非腸道給藥。進一步的選項是粉末或液體的組合物用于以鼻或肺噴霧形式給藥GLP-1藥物或GLP-1類似物或衍生物。作為再一選項，本發(fā)明的GLP-1藥物或GLP-1類似物或衍生物還可以經(jīng)皮給藥，例如從貼膏，任選離子導(dǎo)入貼劑，或經(jīng)粘膜，例如，頰給藥。其他實施方案中，可以口服給藥組合物，例如作為丸劑、膠嚢、飲劑(例如，市售的作為肥胖癥治療的減輕體重飲料)?？梢园凑绽鏦O03/002136(在此引入作為參考)中所述的來制備用于非腸道給藥GLP-1化合物的組合物?？梢园凑绽鐨W洲專利No.272097(NovoNordiskA/S)或W093/18785(在此全部引入作為參考)中所述的來制備用于特定肽的鼻給藥的組合物。在此限定的術(shù)語"患者"或"個體"包括動物，如哺乳動物，包括但不限于，靈長類(例如人)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔子、豚鼠、大鼠、小鼠或其他牛、綿羊、馬、犬、貓、嚙齒動物或鼠科種。藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)可以作為中性化合物或作為鹽來給藥?？梢垣@得含有胺或其他堿基的化合物(例如，藥物組合物、藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的鹽，例如，通過與合適的有機或無機酸反應(yīng)，如氯化氫、溴化氫、乙酸、高氯酸等。具有季胺基團的化合物還含有反陽離子，如氯、溴、碘、醋酸鹽、高氯酸鹽?？梢酝ㄟ^與合適的堿反應(yīng)來制備含有羧酸或其他酸官能團的化合物的鹽，堿例如為，氫氧化堿。酸性官能團的鹽含有反陽離子，如鈉、鉀等。本發(fā)明還提供了用于將藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)給藥于患者(例如，病人)的藥盒，該藥盒包括藥物組合物(例如，藥物組合物、非共價藥物組合物、藥物融合體)、藥物傳送裝置和任選的使用說明書?？梢砸灾苿┤鐑龈芍苿﹣硖峁┧幬锝M合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)。特定實施方案中，藥物傳送裝置選自注射器、吸入器、鼻內(nèi)或眼睛給藥裝置(例如，mister,眼睛或鼻滴管)和無針注射裝置?？梢詫⒈景l(fā)明的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)凍干，用于存儲和在使用前在合適載體中重建?？梢允褂萌魏魏线m的凍干方法(例如，噴霧干燥、濾餅干燥)和/或重建技術(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到凍干和重建將導(dǎo)致不同程度的抗體活性損失(例如，對于常規(guī)免疫球蛋白，IgM抗體易于具有比IgG抗體更高的活性損失)，并認識到可以調(diào)節(jié)使用水平來補償。特定的實施方案中，本發(fā)明提供了含有如在此所述的凍干(冷凍干燥)藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的組合物。優(yōu)選，凍干(冷凍干燥)藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)在水合時，其活性損失不超過約20%、或不超過約25%、或不超過約30%、或不超過約35%、或不超過約40%、或不超過約45%、或不超過約50%(例如，對于血清白蛋白的結(jié)合活性)。活性是在凍干之前產(chǎn)生藥物組合物效果需要的藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的含量。例如，獲得并維持所需血清濃度一段所需時間需要的藥物綴合物或藥物融合體的含量?？梢栽趦龈汕笆褂萌魏魏线m的方法來測定藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的活性，并可以使用相同方法在復(fù)水后測量活性來測定損失的活性量。可以給藥含有藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)或其混合物的組合物用于預(yù)防性和/或治療性處理。特定的治療應(yīng)用中，將給藥條件下足以獲得所需治療或預(yù)防效果的含量定義為"治療有效量或劑量"，這些效果如選定細胞群的至少部分抑制、遏制、調(diào)節(jié)、殺滅或一些其它可測量參數(shù)。獲得該劑量需要的含量將取決于疾病的嚴重程度和病人自身免疫系統(tǒng)和一般健康的一般狀態(tài)，但通常為約10jig/kg至約80mg/kg，或約0.005至5.0mg藥物綴合物或藥物融合體每公斤體重，更常使用0.05至2.0mg/kg/劑的劑量。例如，可以每天(例如，每天高達四次給藥)、每兩天、每三天、每周兩次、每周一次、每兩周一次、一月一次或每兩月一次給藥本發(fā)明的藥物組合物(例如，藥物融合體、藥物綴合物、非共價藥物綴合物)，以劑量，例如，約10jig/kg至約80mg/kg、約100jig/kg至約80mg/kg、約lmg/kg至約80mg/kg、約lmg/kg至約70mg/kg、約lmg/kg至約60mg/kg、約lmg/kg至約50mg/kg、約lmg/kg至約40mg/kg、約lmg/kg至約30mg/kg、約lmg/kg至約20mg/kg、約lmg/kg至約10mg/kg、約10fig/kg至約10mg/kg、約10jig/kg至約5mg/kg、約10|ig/kg至約2.5mg/kg、約lmg/kg、約2mg/kg、約3mg/kg、約4mg/kg、約5mg/kg、約6mg/kg、約7mg/kg、約8mg/kg、約9mg/kg或約10mg/kg。對于預(yù)防性應(yīng)用，含有藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)或其混合物的組合物也可以以相似或略低的劑量給藥。含有根據(jù)本發(fā)明藥物組合物(例如，藥物綴合物、非共價藥物綴合物、藥物融合體)的組合物可以用于預(yù)防性和治療性環(huán)境中來幫助緩解、滅活、殺滅或去除哺乳動物中選擇的靶細胞群。實施例白細胞間介素1受體拮抗劑(ILl-ra)是通過竟爭性抑制IL-1結(jié)合白細胞間介素1受體(IL-1R1)而阻斷IL-1生物活性的拮抗劑。應(yīng)答炎癥剌激物誘導(dǎo)了IL-1并介導(dǎo)了各種生物應(yīng)答，包括炎癥和免疫應(yīng)答。IL-1具有各種活性，包括軟骨降解和骨吸收的刺激。在類風濕性關(guān)節(jié)炎病人中，局部產(chǎn)生的IL-1的含量升高了且天然產(chǎn)生的ILl-ra的水平不足以竟爭這些異常升高的含量。存在幾種可用于RA的處理，包括疾病改變抗風濕病藥物(DMARDS)，如氨曱喋呤，和生物制劑如KINERET(anakinra、Amgen)。KINERET(anakinra、Amgen)是人白細胞間介素-1受體拮抗劑的重組、非糖基化形式，由153個氨基酸構(gòu)成并具有17.3千道爾頓的分子量。(KINERET(anakinra、Amgen)的氨基酸序列對應(yīng)于天然產(chǎn)生IL-lra中的152個氨基酸和另外的N-端蛋氨酸)。KINERET(anakinra、Amgen)適用于降低具有一種或多種DMARD無效的18歲年齡或更大患者中中度至嚴重類風濕性關(guān)節(jié)炎的信號和癥狀。劑量是單次使用每日皮下注射lOOmg藥物。Tpw是4-6小時且71%病人在14-28天內(nèi)產(chǎn)生注射部位反應(yīng)。在此我們證明了連接治療多肽和血清-白蛋白結(jié)合dAb形成化合物，其(i)具有與治療多肽單獨相似的活性和(ii)還結(jié)合血清白蛋白。此外，本發(fā)明提供了形成長血清半衰期形式治療多肽的方法。例如，我們已經(jīng)將血清白蛋白結(jié)合dAb結(jié)合ILl-ra，這形成了血清半衰期長于IL1-ra單獨的化合物。實施例1結(jié)合小鼠、大鼠和人血清白蛋白的結(jié)構(gòu)域抗體的選擇該實施例說明了制備對準血清白蛋白的單結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)的方法。描述了對準小鼠血清白蛋白(MSA)、人血清白蛋白(HSA)和大鼠血清白蛋白(RSA)的dAb的選擇。按照WO2004/003019A2中所述的來選擇對準小鼠血清白蛋白的dAb。使用了三個人噬菌體展示抗體文庫。每個文庫基于VH(V3-23/DP47和JH4b)或VK(ol2/o2/DPK9和JK1)的單個人框架，Vh和Vk具有在互樸性決定片段(CDR1、CDR2和CDR3)中引入的NNK密碼子編碼的側(cè)鏈多樣性。文庫1(VH)多樣性位置在H30、H31、H33、H35、H50、H52、H52a、H53、H55、H56、H58、H95、H97、H98文庫大小6.2xl09文庫2(VH):多樣性位置在H30、H31、H33、H35、H50、H52、H52a、H53、H55、H56、H58、H95、H97、H98、H99、HIOO、H100A、HIOOB。文庫大小4.3xl09文庫3(VK)多樣性位置在L30、L31、L32、L34、L50、L53、L91、L93、L94、L96文庫大小2xl09已經(jīng)預(yù)選了Vu和Vk文庠，用于各自結(jié)合種屬配體蛋白A和蛋白L，使得選定文庫中的大部分克隆是功能性的。以上所示的文庫大小對應(yīng)于預(yù)選后的大小。使用各自分開的文庫對血清白蛋白進行兩輪選擇。對于每次選擇，將抗原以4mLPBS中100ng/ml的濃度涂覆在免疫管(nunc)上。在第一輪的選擇中，將三個文庫中的每一個對HSA(Sigma)或MSA(Sigma)分開涂布。在第二輪選擇中，將來自六個第一輪選擇中每一個的噬菌體對(i)相同抗原再次(例如，第一輪MSA、第2輪MSA)和(ii)對互換的抗原(例如，第1輪MSA，第2輪HSA)涂布，形成總共12輪選擇。在每種情況中，笫二輪選擇后，測試48個克隆與HSA和MSA的結(jié)合。按照對于scFv片段所述的產(chǎn)生可溶性dAb片段，Harrison等，MW/^rfs五"矽附o/.1996;267:83-109,并遵照標準ELISA方案(Hoogenboom等，(1991)7Vwc/e/c爿"Vfe及""19:4133)，除了將2%吐溫PBS用作阻斷緩沖劑并用蛋白質(zhì)L-HRP(Sigma)(用于VKS)和蛋白質(zhì)A陽HRP(AmershamPharmaciaBiotech)(用于VHS)來檢測結(jié)合的dAb。以ELISA不溶性形式測試給予表示結(jié)合MSA、HSA或兩者的高出背景信號的dAb，只結(jié)合塑料但全部是血清白蛋白特異性的。然后將克隆測序(參見表l)，揭示已經(jīng)鑒定出21個獨特的dAb序列。選定的VKdAb克隆之間的最小相似性(在氨基酸水平)是86.25%((69/80)xl00;所有多樣化殘基不同時的結(jié)果，例如，克隆24和34)。選定的VHdAb之間的最小相似性是94。/。((127/136)x國。接著，測試血清白蛋白結(jié)合dAb從溶液中捕獲生物素化抗原的能力。遵照ELISA方案(如上)，除了用lfig/ml蛋白L(用于Vk克隆)和1(ig/ml蛋白A(用于Vh克隆)覆蓋ELISA平板。按照方案從溶液捕獲可溶性dAb，并用生物素化MSA或HSA和抗生蛋白鏈菌素HRP來檢測。已經(jīng)根據(jù)制造商的說明制備了生物素化MSA和HSA，目的是獲得每個血清白蛋白分子平均2個生物素。在ELISA中鑒定了二十四個從溶液中捕獲生物素化MSA的克隆。這些中的兩個克隆(以下的克隆2和38)還捕獲了生物素化的HSA。接著，測試dAb結(jié)合涂覆于CM5Biacore芯片上MSA的能力。在Biacore上發(fā)現(xiàn)/\個結(jié)合MSA的克隆。對于抗MSA-aAb，按照之前所述的選擇對準人血清白蛋白和大鼠血清白蛋白的dAb，除了以下對方案的改變合成Vh結(jié)枸域的噬菌體文庫是文庫4G，其是基于包括DP47種系基因和JH4片段的人VH3。通過誘變引入以下特定位置的多樣性(使用NNK密碼子；根據(jù)Kabat編號)，CDR1:30、31、33、35;CDR2:50、52、52a、53、55、56;和CDR3:4-12個多樣化殘基例如，4GH11中H95、H96、H97和H98，以及4GH19中H95、H96、H97、H98、H99、HIOO、H100a、H100b、H100c、H100d、H100e和H100f。最后三個CRR3殘基是FDY，因此CDR3長度在7-15個殘基之間改變。文庫包括>1xl(T單個克隆。已經(jīng)預(yù)選Vh和VK文庫的子集用于各自結(jié)合種屬配體蛋白A和蛋白L，使得未選擇文庫中的大部分克隆是功能性的。以上所示文庫的大小對應(yīng)于預(yù)選后的大小。使用分開的VH和Vk文庫的子集對大鼠和人血清白蛋白進行兩輪選擇。對于每次選擇，將抗原(i)以4mlPBS中100fig/ml的濃度涂覆于免疫管(nunc)上，或(ii)生物素化，然后用于可溶性選擇，接著在抗生蛋白鏈菌素珠子(笫1輪中)和neutravidin珠子(笫2輪中)上的捕獲。(參見表1用于分離每個克隆的選擇策略的詳細內(nèi)容)。在每種情況中，在第二輪選擇后.測試24個噬菌體克隆與HSA或RSA的結(jié)合。如果選擇之一中顯著比例的克隆在噬菌體ELISA中是陽性的，然后將該選擇的DNA克隆至表達載體中，用于生產(chǎn)可溶性dAb，并挑選單個克隆。按照對于scFV片段所述的生產(chǎn)可溶性dAb片段，Harrison等(MethodsEnzymol.1996;267:83-109)，并遵照標準ELISA方案(Hoogenboom等，(1991)NucleicAcidsRes"19:4133)，除了將2%吐溫PBS用作阻斷緩沖劑并用抗-myc-HRP檢測結(jié)合的dAb。然后對于結(jié)合MSA、RSA或HSA篩選ELISA中的陽性克隆，使用BIACORE表面等離子共振裝置(BiacoreAB)。進一步分析結(jié)合MSA、RSA或HSA的dAb。然后將克隆測序并鑒定出獨特的dAb序列。表l.結(jié)合血清白蛋白的dAb的選擇方案<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage77</column></row><table>然后進一步分析BIACORE芯片(BiacoreAB)上結(jié)合血清白蛋白的dAb來獲得關(guān)于親和性的信息。使用覆蓋血清白蛋白的CM5芯片(羧曱基化的葡聚糖基質(zhì))進行分析。流動細胞1是未涂覆的、阻斷的陰性對照，流動細胞2覆蓋HSA，流動細胞3覆蓋RSA，流動細胞4覆蓋MSA。將血清白蛋白固定于醋酸鹽緩沖劑pH5.5中，使用BIACORE覆蓋wizard,將其編程來瞄準覆蓋材料的500共振單位(RU)。在大腸桿菌的周質(zhì)中以200mL-500mL規(guī)模表達每種目標dAb并使用用于Vh的蛋白A-流線型親和樹脂(Amersham,UK)和用于Vk的蛋白L-瓊脂糖親和樹脂(Affitech，Norway)分批吸收從上清液中純化，接著用pH2.2的甘氨酸洗脫并緩沖交換至PBS。通過稀釋至BIACOREHBS-EP緩沖劑中來制備各種濃度的dAb(5nM至5jiM的范圍)并流動通過BIACORE芯片。通過使結(jié)合速率和解離速率曲線適合KD范圍內(nèi)dAb濃度產(chǎn)生的痕跡從BIACORE痕跡計算親和性(KD)。鑒定具有不同血清白蛋白親和性的dAb。10-1OOnM范圍內(nèi)包括的是DOM7h-8對HSA、DOM7h-2對HSA和DOM7r-l對RSA的親和性。100nM至500nM范圍內(nèi)包括的是DOM7h-7對HSA、DOM7h-8對RSA和DOM7h-26對HSA的親和性。500nM至5jiM范圍內(nèi)包括的是DOM7h-23對HSA和DOM7h-l對HSA的親和性。圖6A-6C中包括了實例痕跡。實施例2.格式化抗血清白蛋白抗體作為與IL-1受體拮抗劑(IL-lra)的融合體該實施例描述了制備包括IL-lra和結(jié)合血清白蛋白的dAb的融合蛋白的方法。形成兩個融合體，一個具有IL-lra的dAbN-端(MSA16IL1-ra)和一個具有IL-1ra的dAbC-端(ILl-raMSA16)。融合體的次序和載體顯示于圖2C和2D中。還產(chǎn)生了沒有結(jié)合MSA的對照融合體，其序列顯示于圖2E中。KINERET(anakina、Amgen)具有4-6小時的短半衰期，推薦的劑量方案要求每日注射。該方案在71%的情況中在14-28天內(nèi)導(dǎo)致注射部位反應(yīng)。因此，具有較長血清半衰期的人IL-lra形式將是有益的并可以提高效率和降低給藥頻率。這些對于藥物學(xué)都是理想的特征?？寺『喍灾?，按照以下詳述的設(shè)計兩個多克隆位點(MCS)并插入具有T7啟動子的表達栽體中。設(shè)計限制位點用于ILl-ra、dAb、GAS前導(dǎo)和連接體的插入。一個(MCS1+3)編碼具有IL-lra的dAbN端的蛋白，另一個(MCS2+4)編碼具有ILlra的dAbC-端的蛋白。用于dAbIL-1ra融合體的克隆位點1+3Ndel、填充物、Sall、Notl、填充物、Xhol、BamHIgcgcatatgttagtgcgtcgacgtcaaaaggccatagcgggcggccgctgcaggtctcgagtgcgatggatcc(SEQIDNO:35)用于ILl-radAb融合體的克隆位點2+4Ndel、填充劑、StUI、Sacl、填充劑、Sall、Notl、TAATAABamHIgcgcatatgttaagcgaggccttctggagagagctcaggagtgtcgacggacatccagatgacccaggcggccgctaataaggatccaatgc(SEQIDNO:36)然后通過使用合適的限制酶消化MCS和連接編碼前導(dǎo)的退火引物將GAS前導(dǎo)插入每個栽體中。接著，以相似的方式插入編碼連接體的連接體DNA。通過PCR(使用設(shè)計來添加所需限制位點的引物)從cDNA克隆獲得編碼IL-lra的DNA并插入TOPO克隆栽體。通過核酸測序證實正確序列后，從TOPO載體切除編碼IL-lra的DNA并連接含有前導(dǎo)和連接體的載體。最后，從dAb表達載體切除編碼dAb的DNA并通過插入片段(通過凝膠過濾純化的)和載體的SalI/Notl消化插入載體。表達和純化在大腸桿菌的周質(zhì)中表達MSA16ILl-ra、ILl-raMSA16和偽IL-lra并使用蛋白L-瓊脂糖親和樹脂(Affitech，Norway)的分批吸收接著用pH2.2甘氨酸洗脫從上清液中純化。然后通過SDS-PAGE凝膠電泳接著庫馬西染色分析純化的dAb。對于蛋白質(zhì)之一(IL-lraMSA16)，>90%的蛋白質(zhì)是預(yù)期大小的并因此分析活性而不需要進一步的純化。另一種蛋白(MSA16ILl-ra和偽IL-lra)受到較小條帶的污染并因此在pH9的RESOURSEQ離子交換柱上通過FPLC離子交換色譜來進一步純化。使用0-500mMNaCl的線性鹽梯度來洗脫蛋白質(zhì)。通過SDS-PAGE凝膠電泳分析后，合并含有預(yù)期大小蛋白質(zhì)的級分，產(chǎn)生>90%純度的合并部分。將該蛋白質(zhì)用于進一步的分析。實施例3.dAbILl-ra融合體體外活性的測定MRC-5IL-8測定測試MSA16IL-lra融合體中和通過MRC-5細胞中的IL-l(ATCC登錄號No.CCL-171;美國典型培養(yǎng)收集中心，Manassas,VA)誘導(dǎo)IL國8分泌的能力。該方法改編自Akeson，L.等(1996)JournalofBiologicalChemistry271，30517-30523，其描述了HUVEC中通過IL-l誘導(dǎo)IL-8，使用MRC-5來替代HUVEC細胞系。簡而言之，用dAbIL-lra融合蛋白質(zhì)或IL-lra對照，和IL-l(100pg/mL)將涂布于微量滴定平板中的MRC-5細胞孵育過夜。孵育后，將上清液從細胞中吸出并通過夾層ELISA(R&DSystems)來測量IL-8濃度。融合蛋白中IL-lra的活性導(dǎo)致IL-8分泌的降低。將MSA16IL1-ra融合體的活性和IL-lraMSA16的活性引起的IL-8分泌降低與使用IL-lra對照(重組人IL-lra，R&D系統(tǒng))所觀察到的降低相比較。測定每種測試蛋白的中和劑量50(NDSo)并列于表2中。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table>結(jié)果證明了IL-lra作為具有抗血清白蛋白dAb的融合構(gòu)建體的一部分保留了活性。進一步研究MSA16IL-lra蛋白來測定其藥物動力學(xué)(PK研究)。血清白蛋白、抗IL-lra夾層ELISA測試三種dAb/IL-lra融合體結(jié)合血清白蛋白的能力并同時通過單克隆抗-ILra抗體來檢測。測試的融合體是MSA16IL-lra、IL-lraMSA16和偽IL-lra。簡而言之，用10fig/ml的小鼠血清白蛋白覆蓋ELISA平板過夜，用0.05%吐溫PBS洗滌5x，然后用4%MarvelPBS阻斷1小時。阻斷后，用0.05%吐溫PBS將平板洗滌5x，然后用稀釋于4%MPBS中的dAb、IL-lra融合體各自孵育1小時。以l^M濃度和7個連續(xù)4-倍稀釋度(即降至60pM)來孵育每種融合體。孵育后，用0.05%吐溫PBS洗滌5x，然后用制造商推薦的稀釋于4%MPBS中的兔子多克隆抗體(ab-2573)對人IL-l受體拮抗劑(Abcam，UK)的稀釋度孵育1小時。該孵育后，用0.05%吐溫PBS將平板洗滌5x，然后用稀釋于4%MPBS中的1/2000稀釋度的二抗(抗兔子IgG-HRP)孵育lh。用二抗孵育后，用0.05%吐溫PBS將平板洗滌3x和PBS洗滌2x，然后用每孔50plTMB微孔過氧化物酶底物(KPL，MA)發(fā)展并用每孔50[ilHCl來停止反應(yīng)。在450nM處閱讀吸收值。在夾層ELISA中以lnM濃度在高于2x背景水平來檢測MSA16IL-lra和IL-lraMSA16蛋白質(zhì)。在降至3.9nM的稀釋度在2x背景或更高來檢測MSA16IL-lra，而僅在降至500nM的2x背景來檢測IL-lraMSA16蛋白質(zhì)。顯示出MSA16IL-lra融合體與血清白蛋白的結(jié)合對于血清白蛋白是特異性的，因為對照構(gòu)建體(偽IL-lra)沒有結(jié)合血清白蛋白。實施例4.小鼠PK研究中藥物融合體血清半衰期的測定A.小鼠中MSA結(jié)合dAb/HA抗原決定部位標記融合蛋白的血清半衰期的測定在大腸桿菌的周質(zhì)中表達MSA結(jié)合dAb/HA抗原決定部位標記融合蛋白并使用蛋白質(zhì)L-瓊脂糖親和樹脂(Affitech,Norway)的分批吸收接著用pH2.2的甘氨酸洗脫來純化。在單次靜脈內(nèi)(i.v.)注射約1.5mg/kg至CD1柱系雄性動物后在小鼠中測定融合蛋白的血清半衰期。使用山羊抗-HA(Abcam，UK)捕獲和用4%Marvel阻斷的蛋白質(zhì)L-HRP(Invitrogen，USA)檢測通過ELISA來檢測血清水平。用0.05%吐溫-20PBS洗滌。在lx小鼠血清存在下設(shè)定已知濃度MSA結(jié)合dAb/HA融合體的標準曲線來確保與測試樣品的相容性。用1區(qū)隔模型的模型化(WinNonlinSoftware,PharsightCorp.,USA)顯示出MSA結(jié)合dAb/HA抗原決定部位標記融合蛋白具有29.1小時的終止期tl/2和559hr小g/ml的曲線下面積。這證明了超過短為僅有幾分鐘的HA抗原決定部位標記肽單獨的預(yù)定半衰期內(nèi)的極大提高。該使用HA抗原決定部位標記作為藥物模型的研究結(jié)果，證明了將藥物制為具有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)的藥物融合體或藥物綴合物時，可以延長藥物的體內(nèi)血清半衰期。還測定了小鼠中抗-MSAdAbDOM7m-16和DOM7m-26，和沒有結(jié)合MSA的對照dAb的體內(nèi)半衰期。再者，含有HA抗原決定部位標記的DOM7m-16、DOM7m-26和對照dAb，作為藥物(例如，肽藥物)模型。該研究中，沒有結(jié)合MSA的對照dAb，具有20分鐘的體內(nèi)半衰期，而DOM7m-16和DOM7m-26的體內(nèi)半衰期明顯延長。(圖12)在進一步的研究中發(fā)現(xiàn)DOMm-16在小鼠中具有29.5小時的體內(nèi)半衰期。另一個研究中，評價了小鼠中含有HA抗原決定部位標記的DOM7h-8的體內(nèi)半衰期(tl/2p)。用2個區(qū)隔模型(WinNonlinSoftware,PharsightCorp.,USA)的模型化顯示出DOM7h-8具有29.1小時的tl/2p。這些使用HA抗原決定部位標記作為藥物(例如，肽藥物)模型研究中的每一個結(jié)果證明了將藥物制為具有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)的藥物融合體或藥物綴合物時，藥物的體內(nèi)血清半衰期顯著延長。B.小鼠中MSA結(jié)合dAb/IL-lra融合蛋白的血清半衰期的測定在大腸桿菌的周質(zhì)中表達MSA結(jié)合dAb/IL-lra融合蛋白(MSA16IL-lra)并使用蛋白質(zhì)L-瓊脂糖親和樹脂(Affitech，Norway)的分批吸收接著用pH2.2的甘氨酸洗脫來純化。在單次i.v.注射約1.5mg/kg至CD1柱系雄性動物后測定了小鼠中MSA16IL-lra(DOM7m-16/IL-lra)、具有沒有結(jié)合MSA的dAb的IL-lra融合體(偽dAb/IL-lra)和融合HA抗原決定部位標記物的抗-MSAdAb(DOM7m-16HA標記物)的體內(nèi)半衰期。通過IL-lra夾層ELISA(R&DSystems,USA)分析血清水平。在lx小鼠血清存在下設(shè)定已知濃度dAb/IL-lra融合體的標準曲線來確保與測試樣品的相容性。使用WinNonlin藥物動力學(xué)軟件(PharsightCorp.,USA)來進行模型化。預(yù)期與非MSA結(jié)合dAb與IL-lra的融合體的對照相比較時，與抗-MSAdAb的IL-lra融合體將顯著提高血清半衰期。預(yù)測對照非MSA結(jié)合dAb/IL-lra融合體具有短的半衰期。研究的結(jié)果列于表3中，并顯示出具有抗MSAdAb的IL-lra融合體(DOM7m-16/IL-lra)具有比具有沒有結(jié)合MSA的dAb的IL-lra融合體(偽dAb/IL-lra)長約10倍的血清半衰期。結(jié)果還揭示了與偽/IL-lra(AUC:1.5hr.ng/ml)相比較，對于DOM7m-16/IL畫lra存在>200倍的濃度時間曲線下面積的提高(增加)(AUC:267hr.[ig/ml)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table>這些研究的結(jié)果證明了將藥物制為具有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)的藥物融合體或藥物綴合物時，藥物的體內(nèi)血清半衰期顯著延長。實施例5.大鼠中RSA結(jié)合dAb/HA抗原決定部位標記融合蛋白的血清半衰期的測定在大腸桿菌的周質(zhì)中表達具有C-端HA的抗大鼠血清白蛋白dAb，并使用用于VkdAb的蛋白質(zhì)L-瓊脂糖親和樹脂(Affitech，Norway)的分批吸收和用于VHdAb的蛋白質(zhì)A親和樹脂的分批吸收，接著用pH2.2的甘氨酸洗脫來純化。為了測定血清半衰期，將一組4只大鼠給予單次i.v.注射1.5mg/KgDOM7r-27、DOM7r-31、DOM7r-16、DOM7r-3或結(jié)合無關(guān)抗原的對照dAb(HEL4)。通過在7天時間段內(nèi)從尾巴連續(xù)抽血來獲得血清樣品并使用覆蓋于ELISA平板上的山羊抗-HA(Abcam，CambridgeUK)的夾層ELISA，接著用蛋白A-HRP(用于VHdAb)或蛋白L-HRP(用于VkdAb)檢測來分析。在lx大鼠血清存在下設(shè)定已知濃度dAb的標準曲線來確保與測試樣品的相容性。使用2個區(qū)隔模型的模型化(使用WinNonlin藥物動力學(xué)軟件(PharsightCorp.,USA)的模型化來計算tl/2p和曲線下面積(AUC)(表4)。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage84</column></row><table>該使用HA抗原決定部位標記作為藥物模型的大鼠研究的結(jié)果，證明了將藥物制為具有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)的藥物融合體或藥物綴合物時，藥物的體內(nèi)血清半衰期顯著延長。人體中半衰期的預(yù)測可以使用類比法(allometricscaling)從動物獲得的半衰期數(shù)據(jù)來計算人體中dAb、藥物融合體或藥物綴合物的體內(nèi)半衰期。將3種動物中測定的體內(nèi)半衰期的對數(shù)對動物體重的對數(shù)作曲線。通過繪制的點畫一條直線，并將直線的斜率和y-截距用于計算人體內(nèi)的體內(nèi)半衰期，使用公式logY=log(a)+blog(W)，其中Y是人體內(nèi)的體內(nèi)半衰期，log(a)是y-截距，b是斜率，W是人的體重。使用體重約35克(例如，小鼠)、約260克(例如，大鼠)和約2710克的動物中獲得的體內(nèi)半衰期數(shù)據(jù)來產(chǎn)生直線。對于該計算，可以考慮人的體重為70,000克。實施例6.膠原誘導(dǎo)的類風濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)炎模型小鼠中抗-SAdAb/IL-lra藥物融合體的功效測定了融合DOM7m-16/IL-lra和IL-lra在公認的類風濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型中(DBA/1小鼠中的II型膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA))的功效。在整個研究中，將小鼠飼養(yǎng)于標準2型籠子的測試設(shè)備中，圏養(yǎng)于20-24匸的HEPA-過濾的Scantainer中，使用12-小時亮12-小時暗的循環(huán)周期。隨意提供食物(Harlan-Teklad通用膳食2016)和UV滅菌的水。在開始研究前將小鼠放入測試設(shè)備中至少7天來確保合適的適應(yīng)(acclimitization)。將7-8周大的DBA/1小鼠(從TaconicM和B獲得，Domholtveg，Denmark)注射一次以1:1比例乳化直至乳濁液穩(wěn)定的Arthrogen-CIA佐劑和Arthrogen-CIA膠原(兩者都是MDbiosceiences)的乳濁液。認為將一滴乳濁液加入一燒杯水中形成固體塊時，乳濁液是穩(wěn)定的。然后給小鼠注射乳濁液。乳濁液注射二十一天后，從研究中除去20只關(guān)節(jié)炎疾病最嚴重的動物，將剩余的小鼠分成10只動物一組(每組含有5只雄性和5只雌性)。如表5中所示的處理小鼠，所有處理以計算的濃度來傳送，使得給藥10ml/Kg。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table>從第21天至第49天每周記錄關(guān)節(jié)炎嚴重程度的臨床評分3次。在第49天將小鼠安樂死。如果存在12或更高的關(guān)節(jié)炎分值或具有嚴重的活動問題，將個別小鼠提前安樂死。對于臨床評分，根據(jù)以下的標準將每肢評分并將全部四肢的分值相加來產(chǎn)生該小鼠的總分。該方法對于每只小鼠得到0至16的分值。評分標準為0=正常；1=輕度但的腳踝或腰有一定的紅腫，或限于個別足趾的明顯紅腫，與受影響足趾的數(shù)目無關(guān)；2=腳踝和腰的中度紅腫；3=整個爪包括足趾的嚴重紅腫；4=涉及多個關(guān)節(jié)的最大發(fā)炎肢。使用來自個體小鼠的臨床分值計算每個處理天每個處理組的組平均關(guān)節(jié)炎分值。將出于倫理原因從研究中退出的任何動物定位于最大16的分值。將組平均關(guān)節(jié)炎分值對時間作圖(圖13)。使用Wilcoxon測試進行第49天的組平均關(guān)節(jié)炎分值的統(tǒng)計學(xué)分析。該統(tǒng)計學(xué)分析揭示了與鹽水對照組(組6)相比較時，用DOM7m-16/IL-lra(lmg/Kg或10mg/Kg(組3和4)處理的兩個組在第49天已經(jīng)顯著提高了關(guān)節(jié)炎分值(各自為P〈"/o和P〈0.05Vo顯著水平)。相反，用lmg/KgIL-lra的處理(組1)在笫49天沒有導(dǎo)致顯著提高關(guān)節(jié)炎分值，而用10mg/KglL-lra的處理(組2)在P〈5。/0的顯著水平導(dǎo)致顯著提高。用ENBREL(entarecept;ImmunexCorporation)的處理(組5)在第49天在P〈10。/。的顯著水平導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎分值顯著提高。與使用5mg/KgENBREL(entarecept;ImmunexCorporation)的標準處理(組5)相比較時，用10mg/Kg劑量DOM7m-16/IL-lra的處理(組4)，在第49天提高關(guān)節(jié)炎分值中是有效的(在P<0.5%水平的顯著性)。此外，用較低lmg/Kg劑量DOM7m-16/IL-lra的處理(組3)在第49天提高關(guān)節(jié)炎分值中比用相同劑量IL-lra單獨處理(組l)(在P〈10。/。水平的顯著性)更有效。研究的結(jié)果表明在該研究中特定劑量的DOM7m-16/IL-lra比IL-lra或ENBREL(entarecept;ImmunexCorporation)更有效。對IL-lra的應(yīng)答是劑量依賴性的，和預(yù)期的一樣，對DOM7m-16/IL-lra的應(yīng)答也是劑量依賴性的。用lmg/KgDOM7m-16/IL-lra治療的平均分值顯著低于用lOmg/kgIL-lra治療獲得的平均分值。這些圖示的結(jié)果(圖13)表明在該研究中用DOM7m-16/IL-lra的處理約比IL-lra有效IO倍。即使DOM7-16/IL-lra融合蛋白含有約一半數(shù)量的IL-1受體結(jié)合抗原決定部位，觀察到DOM7m-16/IL-lra這種上等的功效，如重量基的IL國lra(例如，lmg的DOM7m-16/IL-lra(MW-31.2kD)含有約一半數(shù)量的IL-1受體結(jié)合抗原決定部位作為lmg的IL-lra(MW-17.1kD)。該研究的結(jié)果證明了結(jié)合血清白蛋白的dAb可以連接IL-lra(對于RA臨床上證明有效的療法)且所得到的藥物融合體具有長的血清半衰期特征(dAb給予的)和IL-1受體結(jié)合特征(IL-lra給予的)。由于藥物融合體的血清停留時間，治療CIA有效的DOM7-16/IL-lra的劑量相對于IL-lra顯著降低。該研究的結(jié)果證明了除了延長的半衰期和提高的AUC的益處，以具有結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段(例如，dAb)的藥物融合體或藥物綴合物制備的藥物是提供超過藥物單獨優(yōu)勢的高度有效的治療劑。例如，如在小鼠CIA模型中證明的，較低劑量的藥物融合體是有效的并與IL-lra單獨相比較，抑制了關(guān)節(jié)炎癥和由IL-1引起的關(guān)節(jié)損傷更長的時間段，并提供了更大的對抗疾病進程的保護。實施例7.抗SAdAb/Saporin非共價藥物綴合物核糖體-滅活蛋白Saporin(抗癌藥物)對變性劑和蛋白酶是高度穩(wěn)定的并已經(jīng)用作T淋巴細胞的靶向毒素。通過生物素-抗生蛋白鏈菌素連接結(jié)合Saporin和DOM7h-8來制備非共價藥物綴合物。用該非共價藥物綴合物獲得的結(jié)果證明了與藥物結(jié)合時DOM7h-8保留了血清白蛋白結(jié)合特征。通過在HB2151細胞中重組核酸的表達來制備各種稱為DOM7h-8cys的DOM7h-8變體，其中位置108(SEQIDNO:24的氨基酸108)的C-端精氨酸由半胱氨酸殘基替代。使細胞生長并在通過離心回收上清液之前在過夜表達自體誘導(dǎo)TBreadymix(MerckKGa，Germany)中301C誘導(dǎo)72小時。使用蛋白質(zhì)L-瓊脂糖上的親和性捕獲從上清液中純化DOM7h-8cys。然后用10柱體積2xPBS洗滌樹脂并用0.1MpH2的甘氨酸洗脫DOM7h-8cys。用0.2x體積的TrispH8中和洗脫的DOM7h-8cys并濃縮至lmg/ml(使用CENTRICON20ml濃縮器(MilliporeCorp.，MA)。使用NAP5脫鹽柱(CEHealthcare/AmershamBiosciences,NJ)將濃縮的DOM7h-8cys緩沖交換至PBS并測定濃度。然后使用EZ-LINK磺陽NHS-LC-生物素(PierceBiotechnologyInc.,IL)將dAb生物素化(通過伯胺)。將生物素化dAb與抗生蛋白鏈菌素-saporin以1:1的摩爾比混合。為了證實形成了dAb/saporin復(fù)合物，使用夾層ELISA來檢測完整的復(fù)合物。以每孔100pl體積的10pg/ml將人血清白蛋白(HAS)覆蓋在ELISA平板(Nunc,NY)的一半孔上過夜。在過夜孵育后，用PBS、0.05°/吐溫洗滌平板3次，然后用2%PBS將整個平板阻斷。阻斷后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于2%吐溫PBS中至0.5jiM的DOM7h-8/saporin非共價綴合物孵育1小時。作為相同ELISA平板上的對照，將0.5nM未結(jié)合的saporin和0.5jiM未結(jié)合的DOM7h8在2%吐溫PBS中孵育.另外的對照是在沒有覆蓋HAS并用2%吐溫阻斷的ELISA平板的孔上孵育的相同三種稀釋的蛋白質(zhì)。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于2%吐溫PBS中1/2000稀釋度的山羊抗-saporin多克隆抗體(AdvancedTherapeuticSystems)醉育1小時。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用檢測二抗(1/2000的抗山羊IgHRP綴合物)孵育1小時。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，用PBS洗滌一次，在紙上輕叩干燥。用lOOjil3,3，，5，5，-四甲基聯(lián)苯胺作為底物來發(fā)展ELISA，并用50fil1M鹽酸停止反應(yīng)。通過比較綴合物和任一個未綴合部分的OD600來證實DOM7h-8和saporin的非共價綴合物的存在。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table>該研究的結(jié)果證明了藥物可以綴合結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段，且綴合的抗原結(jié)合片段保持血清白蛋白結(jié)合活性。此外，由于生物素-抗生蛋白鏈菌素的穩(wěn)定性和強度，結(jié)果顯示出可以制備共價鍵合的和非共價鍵合的綴合物保持結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段的結(jié)合血清白蛋白活性。實施例8.抗-SAdAb/熒光素綴合物熒光素異硫氰酸鹽(FITC)可以與蛋白質(zhì)上的氨基、巰基、咪唑基、酪氨?；螋驶宦?lián)。其具有389Da的分子量，這在大小上與許多小分子藥物是相容的。用該綴合物獲得的結(jié)果證明了抗-sadAb結(jié)合小化學(xué)部分時保持了血清白蛋白結(jié)合特征，并表示小分子藥物可以綴合抗國SAdAb。按照實施例7中所述的制備濃縮的DOM7h-8cys。使用NAP5脫鹽柱(CEHealthcare/AmershamBiosciences,NJ)將濃縮的dAb緩沖交換至50mMpH8硼酸鹽中(結(jié)合緩沖劑)，然后使用2mlCENTRICO濃縮器濃縮至2.3mg/ml(MilliporeCorp.,MA)。根據(jù)制造商的說明將FITC(PierceBiotechnologyInc.)稀釋于二甲基曱酰胺(DMF)中至10mg/ml，然后與dAb在結(jié)合緩沖劑中以24:1FITC:dAb的摩爾比混合。使反應(yīng)進行30分鐘。在這點上，使用PBS預(yù)先平衡的PD10脫鹽柱(GEHealthcare/AmershamBioscinces,NJ)從反應(yīng)中除去過量的未反應(yīng)FITC，并用PBS洗脫DOM7h-8cys/FITC綴合物。為了證實FITC/dAb結(jié)合反應(yīng)是成功的，使用夾層ELISA來檢測結(jié)合的dAb。以每孔100jil體積的10ng/ml將人血清白蛋白(HAS)覆蓋在ELISA平板(Nunc,NY)的一半孔上過夜。過夜孵育后，用PBS、0.05%吐溫將整個平板洗滌3次，然后用2%吐溫PBS將全部孔阻斷2小時。阻斷后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于2%吐溫PBS中至luM的DOM7h-8cys/FITC孵育1小時。作為相同ELISA平板上的對照，在2%吐溫PBS中孵育1jiM的對照FITC結(jié)合的抗體和l(iM的未結(jié)合的DOM7h-8。另外的對照是未覆蓋HAS并用2%吐溫阻斷的ELISA平板的孔上孵育的相同三種稀釋的蛋白質(zhì)。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于2%吐溫PBS中的1/500稀釋度的大鼠FITC抗體(Serotec)孵育1小時。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于2%吐溫PBSzhong的檢測二抗(1/5000抗大鼠IgHRP綴合物)孵育1小時。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，用PBS洗滌一次，在紙上扣干。用lOOjil3，3，,5，5，-四曱基聯(lián)苯胺作為底物來發(fā)展ELISA，并用50jil1M鹽酸停止反應(yīng)。通過比較綴合物和任一個未綴合部分的OD600來證實DOM7h-8和saporin的非共價綴合物的存在。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage90</column></row><table>實施例9.抗-SAdAb/肽綴合物許多肽具有治療效果。將具有N或C-端半胱氨酸的模型肽結(jié)合抗血清白蛋白dAb。在這種情況中，使用四種不同的肽肽lYPYDVPDYAKKKKKKC(SEQIDNO:68);肽2CKKKKKKYPYDVPDYA(SEQIDNO:69);肽3HHHHHHKKKKKKC(SEQIDNO:70)和肽4:CKKKKKKHHHHHH(SEQIDNO:71)。肽1和2包括血球凝集素標記(HA標記)的序列，肽3和4包括His標記的序列。按照實施例7中所述的制備濃縮的DOM7h-8cys。用5mM二硫蘇糖醇還原濃縮的dAb，然后使用NAP5脫鹽柱(GEHealthcare/AmershamBiosciences,NJ)將緩沖交換至結(jié)合緩沖劑(20mMBisTrispH6.5，5mMEDTA，10%甘油)。使用終濃度為5mM二硫代二吡啶阻斷半胱氨酸(來防止dAb與其自身二聚)，將其加入dAb溶液形成DMSO中100mM二硫代二吡咬的儲液。使dAb和二硫代二吡啶來結(jié)合20-30分鐘。然后使用PD10脫鹽柱來除去未反應(yīng)的二硫代二吡咬，并將dAb洗脫于結(jié)合緩沖劑(20mMBisTrispH6.5，5mMEDTA，10%甘油)中。然后將所得到的蛋白質(zhì)冷凍直至需要。將肽1-4以200jiM的濃度分別溶解于水中，使用5mMDTT來還原，然后4吏用NAP5脫鹽柱(GEHealthcare/AmershamBiosciences,NJ)來脫鹽。然后以20:1的比例將每種肽加入還原和阻斷的dAb的溶液中，用于產(chǎn)生肽-dAb結(jié)合。為了證實肽、dAb結(jié)合反應(yīng)的成功，使用夾層ELISA來檢測抗-SAdAb/肽綴合物。以每孔100fil體積的10ng/ml將人血清白蛋白涂覆于ELISA平板(Nunc,NY)上過夜。過夜孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用4%MarvelPBS阻斷2小時。阻斷后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用稀釋于4%MarvelPBS中至ljiM的DOM7h-8/肽孵育1小時。作為相同ELISA平板上的對照，在4。/。MPBS中孵育20fiM未結(jié)合的肽和lnM未結(jié)合的DOM7h-8。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，然后用1/2000稀釋度的用于肽1和2的山羊抗HA抗體(Abcam)，和稀釋于4%MarvelPBS中的1/2000稀釋度的NiNTA-HRP(用于肽3和4)孵育1小時。孵育后，用PBS、0.05%吐溫將平板洗滌3次，并稀釋于4%MPBS中1/2000的抗山羊HRP二抗將含有山羊抗HA抗體的孔孵育lh(其他孔阻斷l(xiāng)h)。賻育后，用PBS、0.05°/吐溫將平板洗滌3次，用PBS洗滌一次，然后在紙上扣干。用100nl3，3，，5，5，-四曱基聯(lián)苯胺作為底物來發(fā)展ELISA，并用1M鹽酸停止反應(yīng)。通過比較綴合物和任一個未綴合部分的OD600來證實DOM7h-8/肽綴合物的綴合物的存在。表8抗癌肽<table>tableseeoriginaldocumentpage91</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage92</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage93</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage94</column></row><table>SEQIDNO:131Trp-Val-Arg-Trp-HisSEQIDNO:132Trp-His-Phe-Ile-Phe-TrpSEQIDNO:133Ile-Trp-Leu-Ser-Gly-Leu-Ser-Arg-Gly-Val-Trp-Val-Ser-Phe-ProSEQIDNO:134Gly-Ser-Arg-Ile-Leu-Thr-Phe-Arg-Ser-Gly-Ser-Trp-Tyr-Ala-SerSE(JIDNO:135Asp-Glu-Leu-Lys-Arg-Ala-Phe-Ala-Ala-Leu-Arg-Asp-Gln-IleSEQIDNO:136Bcl2Lys-Lys-Leu-Ser-Glu-Cys-Leu-Lys-Lys-Arg-Ile-Gly-Asp-Glu-Leu-Asp-SerSEQIDNO:137引發(fā)無細胞系統(tǒng)中的凋亡Gly-Gln-Val-Gly-Arg-Gln-Leu-Ala-Ile-Ile-Gly-Asp-Asp-Ile-Asn-ArgSEQIDNO:138Arg-Asn-Ile-Ala-Arg-His-Leu-Ala-Gln-Val-Gly-Asp-Ser-Met-Asp-ArgSEQIDNO:139整聯(lián)蛋白Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH2SEQIDNO:140抑制腫瘤細胞結(jié)合ECMAc-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NH2SEQIDNO:141Ac-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-NHCH3SEQIDNO:142Ac-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg-N(CH3)2SE(JIDNO:143Phe(pNH2)-Ile-Gly-Ser-Arg-NH2<table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table>實施例10.GLP藥物組合物的分析可以通過從劑量-應(yīng)答曲線計算EC50值來測定促胰島素劑的效力。用GLP-1和肽類似物刺激從穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的表達人GLP-1受體的細胞系BHK467-12A(tk-tsl3)純化的質(zhì)膜，并使用來自PerkinElmerLifeSciences的AlphaScreencAMP來測量cAMP產(chǎn)生的效力。制備穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系并選擇高表達克隆用于篩選。然后將細胞生長于DMEM，5°/0FCS，1%Pen/Strep和0.5mg/mlG418中，5%co2。用PBS洗滌大約80%匯合的細胞2x，并用Versene收集，在lOOOrpm離心5分鐘并除去上清液。在冰上進行其他的步驟。通過Ultrathurax將細胞沉淀物在10ml緩沖劑1中(20mMNa-HEPES，10mMEDTA，pH7.4)均質(zhì)20-30秒，在20000rpm離心15分鐘，將沉淀重懸浮于10ml的緩沖劑2中(20mMNa-HEPES，O.lmMEDTA，pH7.4)。將懸浮液均質(zhì)20-30秒，并在20000rpm離心15分鐘。將懸浮于緩沖劑2中、均質(zhì)和離心重復(fù)一次，并將膜重懸浮于緩沖劑2中并準備用于進一步的分析或存儲于-80TC。通過TheAlphaScreenTechnology通過測量肽i秀導(dǎo)的cAMP產(chǎn)生來進行功能受體測定。TheAlphaScreenTechnology的基礎(chǔ)原理是內(nèi)源cAMP和外源添加的生物素-cAMP之間的竟爭。^^用與受體珠子綴合的特異性抗體來實現(xiàn)cAMP的捕獲。用AlphaFusion微量平板分析儀計數(shù)并測量所形成的cAMP。使用Graph-PadPrisme軟件來計算EC50值?？梢酝ㄟ^以下降解測試來測定肽對二肽酰氨基肽酶IV降解的抗性用等份的純化二肽酰氨基肽酶IV將等份的肽在在pH7-8的合適緩沖劑中371C孵育4-22小時(緩沖劑不是白蛋白)。通過加入三氟醋酸來終止酶反應(yīng)，分離肽降解產(chǎn)物并使用HPLC或LC-MS分析來定量。將混合物運用至Zorbax300SB-C18(30nm孔，5nm顆粒)150x2.1mm柱上并使用0.1%三氟醋酸中線性梯度的乙腈以0.5ml/min的流速來洗脫(在30分鐘內(nèi)0%-100%乙腈)。通過214nm(肽鍵)或280nm(芳香族氨基酸)的吸收值來監(jiān)控肽及其降解產(chǎn)物，并通過它們的峰面積的積分來定量。使用LC-MS來測定降解模式，其中可以測定分開的峰的MC譜。將給定時間的百分比完整/降解的化合物用于估算肽DPPIV穩(wěn)定性。當基于給定時間的百分比完整化合物穩(wěn)定性高于天然肽io倍時，將肽定義為DPPIV穩(wěn)定的。因此，DPPIV穩(wěn)定的GLP-1化合物比GLP-1(7-37)至少穩(wěn)定10倍。腺苷酸環(huán)化酶的刺激將BRIN-BD11細胞接種于24-孔平板中(3xlOV孔)并在補充氚化腺噪呤(2mCi)的培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)16h之前培養(yǎng)4811。用冷的Hanks緩沖鹽水(HBS)將細胞洗滌兩次并加入測試溶液(400fil;37匸)。然后將細胞暴露于HBS緩沖劑中各種濃度(10-10-10-5M)的GLP-1化合物中，在lmMIBMX和5.6mM葡萄糖的存在下(20分鐘；37"C)。孵育后，除去測試溶液，并加入300nl裂解溶液(5%TFA,3%SDS，5mM未標記的ATP，和300jiM未標記的cAMP)。使用Dowex和氧化鋁交換樹脂從細胞裂解物中氚化腺嘌呤和ATP分離氚化cAMP，如所述的(MiguelJC等，Biochem.Pharmacol.2003，65:283)?？梢栽谝认貾-細胞BRIN-BD11細胞中測量胰島素分泌應(yīng)答?？梢詫⒓毎詌xl0V孔的密度接種于24-多孔平板中，并使其在過夜培養(yǎng)過程中粘附。通過在補充l.lmM葡萄糖的1.0Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖劑(115mMNaCl、4.7mMKC1、1.28mMCaCl22H20、1.2mMKH2P04、1.2mMMgS04.H20、10mMNaHCO和5g/L牛血清白蛋白，pH7.4)中37TC預(yù)孵育40分鐘來進行胰島素釋放的急性研究。在S.6mM葡萄糖存在下使用各種濃度的GLP-1化合物(10-12-10-6M)在"1C進行測試孵育。20分鐘孵育后，從每個孔中除去緩沖劑并將等份試樣存儲于-20lC，用于胰島素的測量。肥胖糖尿病(ob/ob)小鼠中葡萄糖降低和胰烏素分泌活性可以在12-16周大的肥胖糖尿病(ob/ob)小鼠中測定GLP-1化合物的體內(nèi)生物活性。以12h亮12h暗循環(huán)周期將動物單獨飼養(yǎng)在22士21C的空調(diào)房間里。使動物隨意飲水并持續(xù)接近標準嚙齒動物飼養(yǎng)膳食。將小鼠禁食18h并在腹膜內(nèi)給藥8ml/kg體重鹽水(9g/LNaCl)、葡萄糖單獨(18mM/kg體重)或結(jié)合GLP-1化合物(25nM/kg體重)。就在注射之前和注射后15、30和60分鐘將血樣收集至冷卻的氟化物/肝素微量離心管中，并將獲得的血漿存儲于-20"C。其他測定可以使用Analox葡萄糖分析儀(Hammersmith,London,UK)測定血漿葡萄糖水平，其使用了葡萄糖氧化酶方法(StevensJF，Clin.Chim.Acta1971，32:199)。可以通過葡聚糖-覆蓋的活性炭放射免疫測試(FlattPR和BaileyCJ，Diabetologia1981，20:573)來測定胰島素水平。可以使用GraphPadPRISM版本3.0(GraphpadSoftware,SanDiego,CA，USA)計算遞增的血漿葡萄糖和胰島素曲線下面積(AUC)。GLP-1化合物的活性可以是本發(fā)明藥物組合物的一部分，只要GLP-1藥物能夠結(jié)合并誘導(dǎo)通過GLP-1受體的信號。可以使用體外測試，如EP619，322的實施例2、3和4中和U.S.專利No.5，120，712的實施例1、2和3中各自所述的那些測試(在此引入作為參考)，來測定GLP-1受體結(jié)合和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)?？梢园凑誛O02/46227的實施例中所述的進行藥物動力學(xué)研究(在此引入作為參考)。i.v.或s.c.給藥后GLP-1衍生物的半衰期延長可以通過監(jiān)控sc給藥于健康豬后血漿中的濃度來測定GLP-1類似物的半衰期延長。為了比較，可以遵照sc.給藥后GLP-1(7-37)(天然活性形式GLP-1并用作對照)血漿中的濃度。將測試物質(zhì)溶解于適于皮下或靜脈內(nèi)給藥的載體中。調(diào)節(jié)濃度使得給藥體積大約為lml。在12只來自EllegaardGottingenMinipigsApS的雄性Giittingen小種豬中進行研究。在動物進入研究之前給予大約10天的適應(yīng)環(huán)境階段。在適應(yīng)環(huán)境階段開始時，小種豬為5個月大且體重范圍為8-10kg。在具有21-23TC室溫和大約50%相對濕度設(shè)定的合適動物房中進行研究。將房間照明來給予12小時亮和12小時黑暗的循環(huán)周期。光從06.00至18.00h。將動物飼養(yǎng)在有稻草作為床的圍欄中，每個圍欄里一共六只。在研究過程中使動物自由接近馴養(yǎng)質(zhì)量飲用水，但在給藥前一天從大約16.00h開始禁食直至給藥后大約12小時。在到達時和給藥那天將動物稱重。動物接受單次靜脈內(nèi)或皮下注射。在頸部右側(cè)給予皮下注射，大約離開耳朵5-7cm和離開頸部中間7-9cm。用針上的制動器給予注射，使0.5cm的針引入。將每種測試物質(zhì)給予三只動物。每只動物接受2nmol/kg體重的劑量。每周給藥六只動物，而剩余六只休息。從每只動物獲得全部血漿濃度-時間特征。根據(jù)以下時間表來采集血樣靜脈內(nèi)給藥后給藥前(0)，注射后0.17(10分鐘)、0.5、1、2、4、6、8、12、24、48、72、96和120小時。皮下給藥后給藥前(0)、注射后0.5、1、2、4、6、8、12、24、48、72、96和120小時。在每次取樣時間，從每只動物抽出2ml血。從頸靜脈采取血樣。將血樣收集至含有用于穩(wěn)定的緩沖劑的試管中，以便防止GLP-1類似物的酶降解。將血漿立即轉(zhuǎn)移至Micronic-管中。將大約200nl血漿轉(zhuǎn)移至每個Micronic-管中。將血漿儲存在-20TC直至測定。使用免疫測定測定血漿樣品的GLP-1類似物含量。通過非-間隔藥物動力學(xué)分析來分析血漿濃度-時間特征。在每種情況計算以下的藥物動力學(xué)參數(shù)AUC、AUC/Dose、AUC%Extrap、Cmax、tmax、\、t1/2、CL、CL/f、Vz、V乂f和MRT。還可以在DanishLandrace豬中測試本發(fā)明的組合物。從實驗開始4吏豬(50。/。Duroc、25%Yorkshire、25%DanishLandrace,大約40kg)禁食。給每只豬給藥50pM等滲溶液(5mM磷酸鹽、pH7.4，0.02%吐溫@-20(Merck)、45mg/ml甘露醇(無熱原，NovoNordisk)中0.5nmol測試化合物/kg體重。從頸靜脈的導(dǎo)管中抽取血樣。將5ml血樣倒入冷卻的含有175^il以下溶液的杯子中0.18MEDTA、15000KIE/ml抑肽酶(NovoNordisk)和(U0mM纈氨酸-Pyrrolidide(NovoNordisk)，pH7.4。在30分鐘內(nèi)，將樣品在5-6000*g離心IO分鐘。將溫度保持在41C。將上清液吸移至不同的杯子中并保持在-20iC直至使用。在夾層ELISA中或通過RIA使用不同的單-或多克隆抗體測定肽的血漿濃度?？贵w的選擇取決于GLP-1類似物。獲得血漿中達到峰濃度的時間在寬的界限內(nèi)變化，這取決于選定的特定GLP-1類似物。96-孔微量滴定平板中夾層ELISA的一般測定方案覆蓋緩沖劑(PBS):磷酸鹽緩沖鹽水，pH7.2洗滌-緩沖劑(PBS-洗滌)磷酸鹽緩沖鹽水，0.05%v/v吐溫20，pH7.2測定-緩沖劑(BSA-緩沖劑)磷酸鹽緩沖鹽水，10g/l牛血清白蛋白(Fluka05477)，0.05%v/v吐溫20，pH7.2抗生蛋白鏈菌素-緩沖劑磷酸鹽緩沖鹽水，0.5MNaCl，0.05%v/v吐溫20，pH7.2標準血漿基質(zhì)中的單個化合物A畫TNP:Nonsense抗體AMDEX:抗生蛋白鏈菌素-辣根-過氧化物酶(AmershamRPN4401V)TMB-底物3，3，，5，5，-四曱基聯(lián)苯胺(<0.02%)，過氧化氫可以如下進行測定(體積/孔)1.)用lOOulPBS-緩沖劑中5jig/ml的接觸抗體覆蓋，孵育o/n，4TC，5xPBS洗滌，用最少30分鐘的最后洗滌來阻斷，然后倒空平板2.)2(Hil樣品+100jil含有10ng/mlA-TNP的BSA-緩沖劑中l(wèi)^ig/ml生物素化的檢測抗體；孵育2h，室溫，在振蕩器上；5xPBS洗滌，然后倒空平板。3.)lOOnl抗生蛋白鏈菌素-緩沖劑中1:8000AMDEX，孵育45-60分鐘，室溫，振蕩器上；5xPBS-洗滌，然后倒空平板。4.)100filTMB-底物，在振蕩器上室溫孵育，用100nl4MH3PO4停止反應(yīng)。在450nm處閱讀吸收值，620nm作為對照?？梢詮臉藴是€計算樣品中的濃度。用于RIA的一般測定方案DB-緩沖劑80mM磷酸鹽緩沖劑，0.1%人血清白蛋白，10mMEDTA，0.6mM硫柳汞，pH7.5FAM-緩沖劑40mM磷酸鹽緩沖劑，0.1%人血清白蛋白，0.6mM硫柳汞，pH7.5活性炭40mM磷酸鹽緩沖劑，0.6mM硫柳汞，16.7%牛血漿，15g/l活性碳，pH7.5(在使用前在4TC混合懸浮液最少lh)標準血漿基質(zhì)中的單個化合物。如下在12x75mm的minisorp管(體積/管)中進行測定:<table>tableseeoriginaldocumentpage102</column></row><table>在4TC混合并孵育30分鐘。在3000rpm離心30分鐘，此后立即將上清液轉(zhuǎn)移至新的試管中，用塞子密封并在Y計數(shù)器上計數(shù)1分鐘。從單個標準曲線計算樣品中的濃度。GLP-l放射性受體測定(RRA):GLP-l放射性受體測定是使用LEADMder成像顆粒的放射性測量-配體結(jié)合測定。測定包括含有GLP-l受體的膜片段、未標記的GLP-l類似物、1251標記的人GLP-l和麥芽凝集素(WGA)覆蓋的PSLEADwe/^r顆粒。冷的和1251-標記的GLP-l將竟爭與受體的結(jié)合。加入LEAD"e&r顆粒時，它們通過WGA-殘基結(jié)合膜片段上的碳水化合物殘基。1251-分子和LEADwdw之間的接近引起光從顆粒發(fā)射出來。LEAD^dw將發(fā)射的光成《象并使其可逆地與樣品中存在的GLP-l類似物含量相關(guān)聯(lián)。試劑&材料動物血漿的預(yù)處理將動物血漿在56"C熱處理4h并在10，000rpm離心10分鐘。此后，加入Val-Pyr(lO[iM)和aprotenin(500KOE/mI)并存儲在-18"C直至使用。GLP-l類似物標準將GLP-l類似物摻入熱處理過的血漿中來產(chǎn)生大約ljiM至lpM的線形稀釋度。GLP-lRRA測定緩沖劑25mMNa國HEPES(pH7.5)、2.5mMCaCl2、ImMMgCl2、50mMNaCl、0.1。/。卵清蛋白、0.003%吐溫20、0.005%桿菌肽、0.05%NaN3。GLP-l受體懸浮液從表達人胰腺GLP-l受體的嬰兒倉鼠腎臟(BHK)細胞純化GLP-l受體膜片段。存儲于-80lC直至使用。WGA-綴合的聚苯乙烯LEADwdw成像珠(RPNQ0260，Amersham):用GLP-lRRA測定緩沖劑重建珠子至13.3mg/ml的濃度。然后加入GLP-l受體膜懸浮液并在使用之前冷(2-81C)孵育至少lh。材料125I-GLP-1(7-36)酰胺(NovoNordiskA/S)。存儲于-18TC直至使用。乙醇99.9。/。vo1(DeDanskSprotfabrikkerA/S)。存儲于-18匸直至使用。MultiScreenSolvinert0.45jim疏水性PTFE平板(MSRPN0450,MilloporeCorp.)。聚丙烯384-孔平板(cat.No.781075，GreinerBio-One)。裝置水平平板混合器具有標準回擺料桶微量滴定平板轉(zhuǎn)子部件的離心機UltrVap，Drydown樣品濃縮器(Provair)LEADwetoMultimodality成像系統(tǒng)(Amersham)程序樣品制備將MultiScreenSolvinert濾板裝在化學(xué)相容接受平板(即聚丙烯平板)上來收集濾液。將150fd水冷乙醇99.9%加入MultiScreenSolvinert濾板的空孔中，接著加入50pl校準或血漿樣品。將存儲蓋放在濾板上并在水平平板混合器上18-22lC孵育15分鐘。將裝配的帶有蓋子的過濾和接受平板放入標準回擺料桶微量滴定平板轉(zhuǎn)子部件中。通過1500rpm2分鐘將濾液收集至接受平板的空孔中。使用UltraVap使用加熱的N2(401C)將濾液干燥15分鐘。通過將lOOfilGLP-1RRA測定緩沖劑加入每個孔中來重建干物質(zhì)。將這在水平混合器上孵育5分鐘。GLP-1放射性受體測定使用以下吸移方案和白色聚苯乙烯384-孔平板1.35jilGLP-1RRA測定緩沖劑2.5jil重建的濾液3.10nl125I-GLP-1(7-36)酰胺。在使用前將儲液稀釋于GLP-1RRA測定緩沖劑中至20000cpm/孔。4.15jiLGLP-1受體膜片段(0.5fig/孔)預(yù)先覆蓋WGA-聚苯乙烯LEADseeker成<象珠(0.2mg/孔)。將平板密封并在18-22t！孵育過夜。使用LEADseekerMultimodality成像系統(tǒng)檢測每個孔的光發(fā)射，持續(xù)IO分鐘。表達克隆的人GLP-1受體的細胞系中cAMP形成的刺激用GLP-1和肽類似物刺激表達人GLP-1受體的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細胞系BHK467-12A(tk-ts13)的純化的血漿膜，并使用來自PerkinElmerLifeSciences的AlphaScreencAMP測定試劑盒測量cAMP產(chǎn)生的功效。制備穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系并選擇高表達克隆用于篩選。將細胞生長于5%C02DMEM，5%FCS，l%Pen/Strep和0.5mg/mlG418中。用PBS將大約80%匯合的細胞洗滌2X并用Versene收集，在lOOOrpm離心5分鐘并除去上清液。其他步驟全部在水上進行。通過Ultrathurax將細胞沉淀物在10ml緩沖劑l(20mMNa-HEPES，10mMEDTA，pH7.4)中均質(zhì)20-30秒，在20,000rpm離心15分鐘并將沉淀重懸浮于10ml的緩沖劑2中(20mMNa-HEPES，O.lmMEDTA，pH7.4)。將懸浮液均質(zhì)20-30秒并在20，000rpm離心15分鐘。將緩沖劑2中的懸浮、均質(zhì)和離心重復(fù)一次并將膜重懸浮于緩沖劑2中并準備進一步分析或存儲于-80lC。通過AlphaScreen技術(shù)通過測量肽誘導(dǎo)的cAMP產(chǎn)生來進行功能受體測定。TheAlphaScreenTechnology的基礎(chǔ)原理是內(nèi)源cAMP和外源添加的生物素-cAMP之間的竟爭。使用與受體珠子綴合的特異性抗體來實現(xiàn)cAMP的捕獲。在AlphaFusion微量平板分析儀上計數(shù)并測量所形成的cAMP。使用Graph-PadPrisme軟件來計算ECs。值。實施例11.胰高血糖素樣肽-1和iDom7h-8的遺傳融合體使用GAS前導(dǎo)的細菌表達使用GAS前導(dǎo)將GLP-l(7-37)，位置9的谷氨酸鹽由脯氨酸替代([Pro9GLP-l(7-37))，作為與iDom7h-8的融合體(CDR3中通過Kabat編號的P96E突變)克隆至pET12a載體中(參見WO05/093074)。GLP-1谷氨酸鹽至脯氨酸9的替代是為了給予融合體的GLP-1部分對二肽酰肽酶IV(DPPIV)分裂降解的抗性(BrianD.Green等(2003)AfCfl6o//c5Vfl6/鄉(xiāng),及ec印^所wrf/wg,c4Af尸高血糖樣肽-1的新N-端Glu9置換類似物的代謝穩(wěn)定性、受體結(jié)合、cAMP產(chǎn)生、胰島素分泌和抗高血糖活性Biol.Chem.(384)1543-1555)。總地，形成三種構(gòu)建體，一個不具有連接體，一個在[PiVGLP-l(7-37)和iDOM7h-8之間具有PSS氨基酸，一個在[Pro9GLP-l(7醫(yī)37)和iDOM7h-8之間具有PSSGAP氨基酸(圖7中顯示為白蛋白結(jié)合形式的Dom7h-8)。在通過離心回收上清液之前使用過夜表達自體謙導(dǎo)TBreadymix(Novagen)在BL21DE3PlysS細胞中30t)表達48小時。使用蛋白質(zhì)L-瓊脂糖上的親和性捕獲從上清液中純化[Pro9GLP-l(7-37)iDom7h-8融合體。然后用10體積的PBS洗滌樹脂并用0.1M甘氨酸pH2洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。然后將[Pro^GLP-l(7-37)-iDom7h-8融合體裝載于甘氨酸緩沖劑中，裝載于用pH6.2的20mM檸檬酸鹽緩沖劑預(yù)平衡的陽離子交換柱上(lmlS-柱，GEhealthcare)。用0-50%梯度的補充1MNaCl的相同緩沖劑洗脫。收集峰并通過SDSPAGE電泳來測定蛋白質(zhì)的大小。合并具有預(yù)期大小的蛋白質(zhì)的峰并將緩沖劑交換至PBS。通過質(zhì)譖和N-端測序來證實蛋白質(zhì)的同一性。實施例12.[Pro9]GLP-l(7-37)-PSSGAP-iDOM7h-8融合體的GLP-1活性測定為了證實[Pro9GLP-l(7-37)-PSSGAP-iDOM7h-8融合體證明的GLP-1活性，將融合體接受兩個不同的生物測定。在第一個測定中，用不同濃度(10pM至0.1nM)的GLP國1和[Pro9]GLP隱1(7-37)-PSSGAP-iDOM7h-8融合體將RINm5f大鼠胰島瘤細胞系(1980年由Gadzar等從x-射線誘導(dǎo)的大鼠可移植胰島素瘤產(chǎn)生的)孵育60分鐘。此外，增加Exendin-4(對二肽酰肽酶IV降解抗性的GLP-1類似物)的單點測定，和單點緩沖劑僅有測定作為對照。盡管RINmSf大鼠細胞對葡萄糖應(yīng)答差，當暴露于營養(yǎng)素或非促分泌素時，它們呈現(xiàn)出與P細胞相似的分泌應(yīng)答。因此，通過4吏用細胞增殖ELISA系統(tǒng)(Amersham，LittleChalfont,UK)在增殖細胞中的DNA合成過程中測量5-溴-2，-脫氧尿苷(BrdU)的引入水平來測定化合物對細胞增殖的作用，參見圖17。使用OD450來測量DNA水平，隨著[Pro9GLP-l(7-37)-PSSGAP-iDOM7h-8融合體遞增的水平高達100nM的融合體濃度，存在DNA水平的劑量依賴性增加。GLP-1也顯示出預(yù)期的劑量依賴性應(yīng)答。在第二個測定中，在5.6mM中用不同濃度(10pM至O.ljiM)的GLP畫l和[Pro9GLP-l(7-37)畫PSSGAP誦iDOM7h國8融合體將RINm5f細胞孵育60分鐘。此外，增加Exendin-4(對DPPIV降解抗性的GLP-1類似物)的單點測定，和單點Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖劑(KRB)僅有測定作為對照。在371C使用補充GLP-1、3A23或exendin-4的KBR緩沖劑孵育60分鐘后測定胰烏素分泌。收集培養(yǎng)基，離心并使用放射免疫測試來測定上清液的胰島素濃度。將胰島素濃度標準化至每個孔內(nèi)的細胞數(shù)量。然后將胰島素濃度(以ng/ml/hr測量)對化合物濃度作圖。在[PiVGLP-l(7-37)-PSSGAP-iDOM7h-8融合體的遞增劑量高達10nM的融合體濃度，存在胰島素釋放的劑量依賴性增加。這與GLP-1單獨的公開數(shù)據(jù)非常一致。實施例13.胰高血糖素樣肽-1和iDom7h-8的遺傳融合體使用OMP-T前導(dǎo)的細菌表達。用OMP-T前導(dǎo)重制實施例11中所述相同的3種構(gòu)建體(一種不具有連接體，一種在[Pro9GLP-l(7-37)和iDOM7h-8之間具有PSS氨基酸，一個在[Pro9]GLP-l(7-37)和iDOM7h-8之間具有PSSGAP氨基酸)。為了清楚，構(gòu)建體中元素的次序是OMP-T前導(dǎo)、[Pro9GLP-l、連接體(在合適的情況中)和iDom7h-8。在通過離心回收細胞沉淀之前，在0.5mMIPTG在OD16誘導(dǎo)的TB培養(yǎng)基中在BL21DE3PlysS細胞中25"C表達4小時。然后通過周質(zhì)制備來回收分泌的蛋白質(zhì)。使用蛋白質(zhì)L-瓊脂糖上的親和性捕獲從周質(zhì)級分鐘純化GLP-1iDom7h-8融合體。然后用10體積PBS洗滌樹脂并用0.1M甘氨酸pH洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。然后將[PiVGLP-l(7-37)融合體裝栽于甘氨酸緩沖劑中，裝載于用20mMpH6.2檸檬酸緩沖劑預(yù)平衡的陽離子交換柱上(lmlS-柱，GEhealthare)。用補充1MNaCl的相同緩沖劑的0-50%梯度來洗脫。在這種情況中，用pH6.2(0%NaCl)的20mM檸檬酸鹽緩沖劑洗滌柱子導(dǎo)致流過預(yù)期大小的條帶，因此使用5Kvivaspin柱(Vivascience)來將其濃縮。實施例14.胰高血糖素樣肽-1和iDom7h-8的遺傳融合體的Pichiapastoris表達將[Pro9]GLP-l-PSS-iDOM7h-8融合體構(gòu)建體(如圖16b中所述的但使用iDom7h-8)克隆至單獨和具有N-端EAEA延伸的pPICza載體中并轉(zhuǎn)化至PichiapastorisKM71h中。(i)使用301C甲醇誘導(dǎo)4天和(ii)使用25TC曱醇誘導(dǎo)2天來表達蛋白質(zhì)。通過離心回收上清液并在SDSPAGE凝膠上檢測蛋白質(zhì)的大小。通過SDSPage預(yù)期融合體具有正確大小并且在實施例10和實施例12中所述的GLP-1測定中是活性的。實施例15.胰高血糖素樣肽-1和iDom7h-8在BL21DE3包含體中的大腸桿菌表達。將實施例11中所述的相同融合體克隆至pET21表達載體(Novagen)中，將其設(shè)計用于細胞質(zhì)中的蛋白表達。任選地，在[Pro9]GLP-l(7-37)的犧牲N-端和HAP…之間的構(gòu)建體中包括蛋白酶分裂位點。這能夠使蛋白質(zhì)得到消化來確保完全天然的N-端?？梢杂糜诖说拿赴ㄒ蜃覺a、凝血酶或DPPI。然后在IPTG誘導(dǎo)時在BL21(DE3)細胞中高水平表達蛋白質(zhì)并將在細胞內(nèi)包涵體中累積。從BL21細胞分離包涵體并溶解于HC1胍中。還原后，將包涵體在氧化還原滑移緩沖劑系統(tǒng)中重新折疊(Buchner，J.，Pastan，I.和Brinkmann,U(1992)。Amethodforincreasingtheyieldofproperlyfoldedrecombinantfusionproteins(用于提高正確4斤疊的重組融合蛋白產(chǎn)量的方法)Jwa/.所oc/iem.205，263-270。重新折疊后，將蛋白質(zhì)在5Kvivaspin柱(Vivascience)中滲析和濃縮并通過S-柱(GEhealthcare)純化。通過SDSPage預(yù)期融合體具有正確大小并在實施例IO和實施例12中所述的GLP-1測定中是活性的。實施例16.胰高血糖素樣肽-1和Dom7h-8的哺乳動物表達使用鼠分泌信號肽將[PiV]GLP-l-PSS-DOM7h-8融合構(gòu)建體(如圖16b中所述的)克隆至PcDNA(-)載體中來促進翻譯的蛋白質(zhì)分泌至培養(yǎng)基中。使用堿性裂解在大腸桿菌中制備lmg的DNA(megaprep試劑盒，qiagen，CA)并轉(zhuǎn)染至1.5L生長于Dulbecco，s改良Elgle，s培養(yǎng)基(Gibro)中的HEK293細胞中，用于瞬時蛋白質(zhì)表達。通過在371C孵育培養(yǎng)物5天來表達蛋白質(zhì)并通過離心來回收上清液(含有表達的蛋白質(zhì))。使用蛋白質(zhì)L-瓊脂糖上的親和性捕獲從周質(zhì)級分鐘純化[Pro9GLP-l-PSS-DOM7h-8融合體。然后用10體積PBS洗滌樹脂并用0.1M甘氨酸pH2洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。然后將蛋白質(zhì)裝載于甘氨酸緩沖劑中，裝載于用pH6.2的20mM檸檬酸緩沖劑預(yù)平衡的陽離子交換柱上(1mlS-柱，GEhealthare)。用補充1MNaCl的相同緩沖劑的0-50%梯度來洗脫。然后使用5Kvivaspin柱(Vivascience)濃縮SDS-PAGE凝膠上正確大小的蛋白質(zhì)并緩沖交換至PBS中用于生物測定。實施例17.與Dom7h-8融合的肽YY的大腸桿菌表達肽PYY(3-36)(PYY:氨基酸序列IDNo.167和核酸序列IDNo.168IKPEAPGEDASPEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY)抑制人的食物攝入并在血漿中具有短的半衰期(1(K30分鐘)。應(yīng)答進餐而釋放并通過弓狀核中的Y2R起作用在生理學(xué)上調(diào)節(jié)食物攝入。將PYY克隆至鄰接DOM7h-8的pETGAS載體中(WO05093074)(參見圖20a和20b,其各自顯示了DOM7h-8的肽C-端和N-端)。在通過離心回收細胞沉淀之前在BL21DE3PlysS細胞中在251C在05mMIPTG誘導(dǎo)的TB培養(yǎng)基中表達4小時。然后通過周質(zhì)制備來回收分泌的蛋白質(zhì)。使用蛋白質(zhì)L-瓊脂糖上的親和性捕獲來純化PYYDom7h-8融合體。然后用10體積PBS洗滌樹脂并用0.1M甘氨酸pH2洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)，并通過離子交換進一步純化。然后通過滲析將純化的蛋白質(zhì)緩沖交換至PBS,在5Kvivaspin柱(Vivascience)中濃縮并接受生物測定來測量cAMP釋放的刺激，如所述的(Goumain等(2001)77^Pe/7rtV/eJT-ZVe/e/Wwg/ece/^o/"Aferf/fl"'"gEV/rfe"ce^mrfMo/ecwZarC7om7ig:Mo/ecw/fl/*/7/ifl簡flc0/ogy(介導(dǎo)小腸分泌抑制的肽YY偏好受體是外周Y2受體藥理學(xué)證據(jù)和分子克隆分子藥理學(xué))60124-134)。簡而言之，在連續(xù)攪拌下將200fig蛋白質(zhì)/ml的分離腸窩細胞在0.5ml磷酸鹽緩沖鹽水中，pH70，含有1.4%(w/v)牛血清白蛋白，0.:T/。桿菌肽和0.2mM3-異丁基-l-甲基黃嘌呤(IBMX)中15TC孵育45分鐘，如所述的(Servin等(1989):Peptide-YYandneuropeptide-Yinhibitvasoactiveintestinalpeptide-sitimulatedadenosine3',5，-monophosphateproductioninratsmallintestinal:structuralrequirementsofpeptidesforinterationgwithPYY國preferringreceptors.(肽YY和神經(jīng)肽Y抑制大鼠小腸中血管活性腸肽-刺激的腺苷3，，5，-單磷酸鹽產(chǎn)生用于與PYY偏好受體相互作用的肽的結(jié)構(gòu)要求)五w^cn'朋/0g);124:692-700)。將PYY單獨或PYY-Dom7h-8融合體一起加入，在腸細胞中(例如，VIP)具有有效的cAMP產(chǎn)生生理刺激。通過加入細胞來啟動反應(yīng)并在45分鐘后通過加入50jil的11M高氯酸來停止反應(yīng)。在4,000g離心10分鐘后，將上清液中存在的cAMP琥珀酰化，通過放射免疫測定來測量其濃度，如所述的(Laburthe等,(1982)Alpha國adrenergicinhibitionofcyclicAMPaccumulationinepithelialcellsisolatedfromratsmallintestine.(從大鼠小腸分離的上皮細胞中環(huán)AMP累積的a-腎上腺素抑制)倫c/w.附所—勿fl721:101-108)。預(yù)期融合體是預(yù)期的大小并顯示出與非融合對照相等的PYY活性。實施例18.Dom7h-8肽YY、GLP-1、融合體的大腸桿菌表達將[Pr。9]GLP-l(7-37)畫DOM7h畫8誦PYY(參見圖19c)融合體克隆至pETGAS載體中，然后按照實施例17中對Dom7h-8PYY所述的來表達。純化后，按照實施例17和實施例12中各自所述的測定，測定融合體的PYY和GLP-1的生物活性。預(yù)期融合體是預(yù)期大小的并顯示出與非融合對照相等的PYY和GLP-1活性。盡管已經(jīng)參照其優(yōu)選實施方案特別地顯示并描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解其中可以形成各種形式上和詳細內(nèi)容的改變，而沒有脫離所附權(quán)利要求包括的本發(fā)明的范圍。權(quán)利要求1.具有下式的藥物融合體a-(X)n1-b-(Y)n2-c-(Z)n3-d或a-(Z)n3-b-(Y)n2-c-(X)n1-d，其中X是促胰島素劑或其類似物；Y是具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，或具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)；Z是具有目標結(jié)合特異性的多肽藥物；a、b、c和d獨立地是包括1至約100個氨基酸殘基的多肽或不存在；n1是1至約10；n2是1至約10；且n3是0至約10。2.權(quán)利要求l的融合體，其中X是GLP-1(7-37)、GLP-(7-36)酰胺、[Ser8]GLP-l(7-36)酰胺、[Pro9GLP(7-37)或其類似物。3.任一項在前權(quán)利要求的融合體，其中nl和n3都是1，且n2是2至約10。4.任一項在前權(quán)利要求的融合體，其中那個或每個Y包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列。5.權(quán)利要求1至4任一項的融合體，其中那個或每個Y包括選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。6.包括部分X，和Y，的藥物融合體，其中X，是GLP-1或其類似物；且Y，是具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)，或具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。7.權(quán)利要求6的藥物融合體體，其中X，位于Y，的氨基端。8.權(quán)利要求6的藥物融合體體，其中Y'位于X，的氨基端。9.權(quán)利要求6、7或8的藥物融合體，其中所述Vh和Vl具有人血清白蛋白結(jié)合特異性。10.權(quán)利要求6的藥物融合體，其中Y，包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25和SEQIDNO:26的氨基酸序列。11.權(quán)利要求6的藥物融合體，其中Y，包括選自SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。12.藥物綴合物，其包括具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)或具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VJ;和共價鍵合所述Vh或Vl的GLP-1或其類似物。13.權(quán)利要求12的藥物綴合物，其中藥物綴合物包括單個VH。14.權(quán)利要求12的藥物綴合物，其中藥物綴合物包括單個15.權(quán)利要求12、13或14的藥物綴合物，其中所述GLP-1或類似物通過連接體部分共價鍵合所述的Vh或Vl。16.權(quán)利要求12至15任一項的藥物綴合物，其包括一種或多種共價鍵合所述Vu或Vl的不同葯物。17.權(quán)利要求12至16任一項的藥物綴合物，其中所述具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)或所述具有血清白蛋白結(jié)合特異性的免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VJ包括選自SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22和SEQIDNO:23的氨基酸序列。18.編碼權(quán)利要求1或權(quán)利要求6的藥物融合體的重組核酸。19.含有權(quán)利要求18的重組核酸的核酸構(gòu)建體。20.含有權(quán)利要求18的重組核酸的宿主細胞。21.生產(chǎn)藥物融合體的方法，所述方法包括在適于所述重組核酸表達的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求20的宿主細胞，借此產(chǎn)生藥物融合體。22.藥物組合物，其包括權(quán)利要求l或權(quán)利要求6的藥物融合體，或權(quán)利要求12的藥物綴合物和藥物學(xué)上可接受的載體。23.藥物綴合物或融合體，其包括促胰島素劑和結(jié)合抗原的抗體片段，其中抗原作用來提高藥物綴合物或融合體的體內(nèi)半衰期。24.權(quán)利要求23的藥物綴合物或融合體，其中藥物是包括鍵合抗體片段的促胰島素劑肽的藥物融合體蛋白。25.權(quán)利要求24的藥物，其中促胰島素劑通過肽連接體部分與抗體片段融合。26.權(quán)利要求23至25任一項的藥物，其中抗原是血清白蛋白。27.權(quán)利要求23至26任一項的藥物，其中促胰島素劑是胰高血糖素樣肽。28.權(quán)利要求23至27任一項的藥物，其中促胰島素劑選自GLP國1、GLP畫1類4以物、Exendin-3、Exendin腸3類f乂物、Exendin陽4和Exendin-4類似物。29.權(quán)利要求l、6、12和28任一項的藥物，其中GLP-1或類似物包括與選自SEQIDNO:157或159的序列至少80%同源的氨基酸序列。30.權(quán)利要求l、6、12和28任一項的藥物，其中GLP-1類似物包括Gly1。、Thr12、Asp14、Phe"和Ile29。31.權(quán)利要求29和30任一項的藥物，其中GLP-1類似物不同于SEQIDNO:157或SEQIDNO:159不超過6個氨基酸。32.權(quán)利要求1、6、12和28任一項的藥物，其包括單個血清白蛋白(SA)特異性的可變結(jié)構(gòu)域，其對SA具有l(wèi)nM至500jiM的解離常數(shù)(KJ，通過表面等離子共振測定。33.權(quán)利要求32的藥物，其中SA特異性結(jié)構(gòu)域在標準配體結(jié)合測定中結(jié)合SA，具有InM至500fiM的IC50。34.權(quán)利要求23的藥物，其包括2、3或4個促胰島素劑(IA)部分。35.權(quán)利要求34的藥物，其包括IA-IA，-AF或IA-(AF)n-IA，，其中IA和IA，是相同或不同的促胰島素劑，且AF是權(quán)利要求23中所述的抗體片段，且n等于l、2、3、4或5。36.權(quán)利要求35的藥物，其包括[GLP-II-[AFHGLP-II或[GLP-1腸[GLP-l-網(wǎng)。37.在前任一項權(quán)利要求的藥物，其包括抗飽腹感劑。38.權(quán)利要求37的藥物，其中抗飽腹感劑選自PYY、PYY類似物、PYY(3-36)。39.權(quán)利要求37或38的藥物，其包括IA-(AF)n-(IA，V[抗飽腹感劑或抗飽腹感劑HIA，Xr(AF)n-IA，其中n等于l、2、3、4或5，且x等于0、1、2、3、4或5。40.任一項在前權(quán)利要求的藥物，其具有l(wèi)至6小時的tl/2a。41.任一項在前權(quán)利要求的藥物，其具有12至60小時的tl/2p。42.權(quán)利要求1、6、12和23任一項的藥物，其進一步包括選自下列的活性劑胰島素、Exendin-4、Exendin-3、PYY(3隱36)、Resistin、Leptin、MC3R/MC4R拮抗劑、AgRP拮抗劑、栽脂蛋白A-IV、Enterostatin、胃泌素釋放肽(GRP)、IGF1、BMP畫9、IL-22、RegIV、干擾素ouINGAP肽、生長抑制素、amylin、neurulin、干擾素p、干擾素雜合體、adiponectin、內(nèi)大麻素、C肽、WNT10b、Orexin-A、促腎上腺皮質(zhì)激素、Enterostatin、縮膽嚢肽、oxyntomodulin、黑素細胞刺激激素、黑素皮質(zhì)素、黑色素濃縮激素、BB-2、NPYY2激動劑、NPYY5/Y1拮抗劑、OXM、Gal-1R拮抗劑、MCH-1R拮抗劑、MC-3/4激動劑、BRS-3激動劑、胰多肽、抗-Ghrelin抗體片段、腦產(chǎn)生的神經(jīng)營養(yǎng)因子、人生長激素、曱狀旁腺激素、促卵泡激素、胃抑制肽或其類似物。43.藥物，其包括GLP-1或其類似物和含有抗原結(jié)合位點的蛋白質(zhì)部分，其中抗原結(jié)合位點結(jié)合抗原，其作用來提高藥物綴合物的體內(nèi)半衰期，附加條件是蛋白質(zhì)部分不是具有10-30個氨基酸的肽。44.藥物融合體，其包括GLP-1或其類似物和含有抗原結(jié)合位點的蛋白質(zhì)部分，其中抗原結(jié)合位點結(jié)合抗原，其起作用來提高藥物綴合物的體內(nèi)半衰期。45.權(quán)利要求43或44的藥物，其中GLP或類似物是GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)酰胺、[Ser8GLP-l(7-36)酰胺Pro9GLP-l(7-36)Pro9]GLP-l(7-37)或其類似物。46.權(quán)利要求45的藥物，其中GLP類似物具有選自PSS、PSSGAP或PSSGAPPPS的C端肽。47.權(quán)利要求43、44、45或46的藥物，其中所述抗原是血清白蛋白。48.權(quán)利要求43至47任一項的藥物，其包括單個蛋白質(zhì)部分。49.編碼權(quán)利要求43至48任一項藥物的重組核酸。50.含有權(quán)利要求49的重組核酸的核酸構(gòu)建體。51.含有權(quán)利要求49的重組核酸的宿主細胞。52.生產(chǎn)藥物融合體的方法，所述方法包括在適于所述重組核酸表達的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求51的宿主細胞，借此生產(chǎn)藥物融合體。53.藥物組合物，其包括權(quán)利要求43至48任一項的藥物和生理學(xué)上可接受的載體。54.治療和/或預(yù)防患者病癥的方法，所述方法包括將權(quán)利要求1至17和23至48任一項的藥物給藥于患者，其中所述病癥選自高血糖、2型糖尿病、葡萄糖耐量異常、1型糖尿病、肥胖癥、高血壓、綜合征X、血脂異常、認知障礙、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血管病癥、中風、炎性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍。55.延遲或防止患者2型糖尿病疾病進展的方法，該方法包括將權(quán)利要求1至17和23至48任一項的藥物給藥于患者。56.降低患者食物攝入、降低患者p-細胞凋亡、提高(5-細胞功能和p-細胞數(shù)量和/或恢復(fù)P-細胞葡萄糖敏感性的方法，該方法包括將權(quán)利要求1至17和23至48任一項的藥物給藥于患者。57.降低患者食物攝入、降低P-細胞凋亡、提高P-細胞功能和(3-細胞數(shù)量和/或恢復(fù)P-細胞葡萄糖敏感性的方法，該方法包括將權(quán)利要求1至17和23至48任一項的藥物給藥于患者。58.治療和/或預(yù)防患者高血糖、1型糖尿病、2型糖尿病或P-細胞不足的方法，該方法包括將權(quán)利要求1至17和23至48任一項的藥物給藥于患者。59.用于治療和/或預(yù)防糖尿病的權(quán)利要求1至17和23至48任一項的藥物。60.用于治療和/或預(yù)防肥胖癥的權(quán)利要求1至17和23至48任一項的藥物。61.用于降低患者的食物攝入的權(quán)利要求1至17和23至48任一項的藥物。全文摘要含有融合或綴合結(jié)合了血清白蛋白的抗體的抗原結(jié)合片段的腸降血糖素治療或診斷劑的藥物融合體和綴合物。與未綴合或未融合的治療或診斷劑相比較，綴合物和融合體具有更長的體內(nèi)半衰期。文檔編號A61P1/00GK101128487SQ200580047647公開日2008年2月20日申請日期2005年11月30日優(yōu)先權(quán)日2004年12月2日發(fā)明者I·M·湯林森,L·J·霍爾特,L·S·耶斯珀斯,S·霍爾姆斯申請人:杜門蒂斯有限公司