專利名稱：18元環(huán)大環(huán)化合物及其類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的抗菌組合物及其與已有藥物合用治療革蘭氏陽性厭氧菌引起的感染的應(yīng)用，該組合物包含R-Tiacumicins，特別是R-TiacumicinB(在C-19位有R-羥基)。
此外，本發(fā)明涉及其中含約70-100％、優(yōu)選90％(相對全部抗菌物質(zhì)，用HPLC定量分析)R-Tiacumicin B的新的OPT-80制劑。剩余部分基本上由少量Tiacumicin B相關(guān)化合物(包括但不限于閏年霉素A4和C-19酮)組成。該類型制劑在PCT專利申請PCT/USO3/21977中有詳細(xì)描述，國際公開號為WO 2004/014295A2。然而，在給非人類專用時(shí)，可以用包含少于70％的光學(xué)純R-Tiacumicin B(相對全部抗菌物質(zhì)，用HPLC定量分析)的粗OPT-80。
根據(jù)本發(fā)明，提供了式VII結(jié)構(gòu)的化合物
式VII 其中， X選自低級烷基，其中此處所用術(shù)語“低級烷基”指包括一至兩個(gè)碳原子的支鏈或直鏈烷基，其包括甲基、乙基、正丙基、異丙基等； Y選自O(shè)H或酮(＝O)；并且 Z選自H或低級烷基，其中此處所用術(shù)語“低級烷基”指包括一至五個(gè)碳原子的支鏈或直鏈烷基，其包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基等。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物是其中X為甲基或乙基、Y為酮(＝O)或OH并且Z為異丙基的式VII化合物。
本發(fā)明的更優(yōu)選化合物是其中X為乙基、Y為酮(＝O)或OH并且Z為異丙基的式VII化合物。
本發(fā)明的最優(yōu)選化合物是其中X為乙基、Y為OH并且Z為異丙基的式VII化合物。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是發(fā)現(xiàn)Tiacumicin B的C-19位手性中心對生物活性有重要影響。目前已發(fā)現(xiàn)在19位有R羥基的R-Tiacumicin B的活性顯著高于S-Tiacumicin B和其它Tiacumicin B相關(guān)化合物(閏年霉素A4和C-19酮)。MIC值越低表示活性越高，見下面關(guān)于艱難梭菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌(E.faecalis)和屎腸球菌(E.faecium)菌株的實(shí)施例3、表3和表4。C-19位手性中心對生物活性的影響是出乎意料的新發(fā)現(xiàn)。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，OPT-80(其幾乎完全由R-Tiamicin B組成)有顯著長的抗生素后效應(yīng)(PAE)。這在下面的實(shí)施例4進(jìn)行討論，其中OPT-80有多于24小時(shí)的PAE。該P(yáng)AE出乎意料地長于通常的抗生素的1-5小時(shí)的PAE。
本發(fā)明也涉及藥物組合物，該藥物組合物包括本發(fā)明的化合物及藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的另一方面公開一種抑制或治療人類細(xì)菌感染的方法，該方法包括對患者給予單獨(dú)的本發(fā)明化合物或結(jié)合其它抗細(xì)菌或抗真菌物質(zhì)。
生產(chǎn) 18元環(huán)大環(huán)化合物和其類似物通過發(fā)酵的方法生產(chǎn)。在含有碳源、無機(jī)鹽和其它帶有一種或多種吸收劑的有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中，在適當(dāng)?shù)耐鈼l件和無菌環(huán)境混合情況下，對用于產(chǎn)Tiacumicins的橙色指孢囊菌hamdenensis亞種AB 718C-41 NRRL 18085進(jìn)行培養(yǎng)。
經(jīng)鑒定，用于產(chǎn)活性抗菌劑的微生物屬于放線菌科，孢囊菌屬(抗生素雜志1987，40567-574和US專利4918174)。該微生物被命名為橙色指孢囊菌hamdenensis亞種718C-41。傳代培養(yǎng)物得自ARS Patent Collection ofthe Northern Regional Research Center，United States Department ofAgriculture，1815 North University street，Peoria，IL.61604，U.S.A.，其登記號為NRRL 18085。菌株AB 718C-41的特性在抗生素雜志，1987，40567-574和US專利4918174中給出。
本發(fā)明包括由橙色指孢囊菌hamdenensis亞種微生物經(jīng)深層需氧發(fā)酵得到的新抗菌劑(Tiacumicins)的組合物。制備方法在WO2004/014295A2中記載，在此引入作為參考。
藥物制劑和給藥 根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的Tiacumicin化合物的藥物組合物，特別是OPT-80(其幾乎完全由R-Tiacumicin組成)可以制成制劑，以在給藥后基本上立即或在給藥后的任何預(yù)定時(shí)間或時(shí)間段內(nèi)釋放抗生素。
后一種類型的組合物通常為緩釋制劑，該緩釋制劑包括較長時(shí)段內(nèi)在腸道中釋放基本恒定濃度的藥物的制劑和如在緩釋釋藥投送技術(shù)(Modified-Release Drug Delivery Technology)，編者M(jìn).J.Rathbone，J.Hodgraft和M.S.Roberts.Marcel Dekker，Inc.New York中所述的基于暫時(shí)的或環(huán)境條件的有緩釋特性的制劑。
任何口服生物可接受劑型或其組合可在本發(fā)明的方法中應(yīng)用。這些劑型的示例包括但不限于咀嚼片、速溶片、泡騰片、可復(fù)制粉劑、酏劑、水劑、栓劑、乳膏劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、片劑、多層片劑、雙層片劑、膠囊、軟明膠膠囊、硬明膠膠囊、滲透泵片劑、滲透膠囊、薄膜衣片、錠劑、咀嚼錠劑、珠劑、粉劑、顆粒劑、粒劑、微粒劑、分散顆粒劑、可攝入劑、輸液、保健棒、糖膏劑、動(dòng)物飼料、谷類食品、谷類包衣、食品、營養(yǎng)食品、保健食品及其組合。上述任何劑型的制備對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是公知的。另外，藥物制劑可以設(shè)計(jì)為在到達(dá)靶位置時(shí)立即或控制釋放抗生素。根據(jù)多種因素選擇立即或控制釋放組合物，這些因素包括物種、所治療的革蘭氏陽性菌的抗生素敏感性和治療藥物的抑菌/殺菌特性。在如RemingtonThe Science and Practice of pharmacy(20th ed.)編者A.R.Gennaro，2000，Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia，或在Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，編者J.Swarbrick和J.C.Boylan，1988-1999，Marcel Dkker，New York中可發(fā)現(xiàn)用于制備制劑的本領(lǐng)域公知方法。
口服的立即釋放制劑包括含有活性成分和非毒性的藥學(xué)上可接受賦形劑混合物的片劑或膠囊劑。這些賦形劑可以包括例如惰性稀釋劑或填充劑(如蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露醇、微晶纖維素、包括土豆淀粉的淀粉、碳酸鈣、氯化鈣、乳糖、磷酸鈣、硫酸鈣或磷酸鈉)；成粒劑和崩解劑(如包括微晶纖維素的纖維素衍生物、包括土豆淀粉的淀粉、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、藻酸鹽或藻酸)；粘合劑(如蔗糖、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇、阿拉伯膠、藻酸、藻酸鈉、明膠、淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、硅酸鋁鎂、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙甲纖維素、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；潤滑劑、助流劑和抗粘劑(如硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、硅酸鹽、氫化植物油或滑石粉)。其它藥學(xué)上可接受輔料可以是著色劑、調(diào)味劑、增塑劑、潤濕劑、緩沖劑及在例如由Arthur H.Kibbe編寫的TheHandbook of Pharmaceutical Excipients，Third edition，AmericanPharmaceutical Association Washington DC中可發(fā)現(xiàn)的上述類似物。
溶出或擴(kuò)散的控制釋放可以通過對化合物的片劑、膠囊、丸劑或顆粒劑制劑適當(dāng)包衣來實(shí)現(xiàn)，或通過將化合物加入適當(dāng)?shù)幕|(zhì)來實(shí)現(xiàn)?？刂漆尫虐驴梢园ㄒ环N或多種上面提到的包衣物質(zhì)及/或如蟲膠、蜂蠟、glycowax、蓖麻蠟、加拿巴蠟、十八烷醇、甘油單硬脂酸酯、甘油二硬脂酸酯、甘油硬脂酸棕櫚酸酯、乙基纖維素、丙烯酸類樹脂、dl-聚乳酸、醋酸丁酸纖維素、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、異丁烯酸甲酯、2-羥基異丁烯酸、異丁烯酸水凝膠、1，3-丁二醇、乙二醇異丁烯酸酯和/或聚乙二醇。在控制釋放基質(zhì)的制劑中，基質(zhì)材料也可以包括例如水合甲基纖維素、加拿巴蠟、十八烷醇、Carbopol934、硅氧烷、甘油三硬脂酸酯、丙烯酸甲酯-異丁烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯和/或鹵代碳氟化合物。
控釋組合物也可以為漂浮片或膠囊形式(如用于口服的可在胃內(nèi)容物上面漂浮一定時(shí)段的片劑或膠囊)?；衔锏钠∑苿┛梢酝ㄟ^將抗生素及賦形劑和20-75％w/w的水膠體(如羥乙基纖維素、羥丙基纖維素或羥丙甲纖維素)的混合物成粒加以制備。然后將制得的顆粒壓制成片劑。與胃液接觸時(shí)，上述片劑在其表面形成基本不透水的膠體屏障。該膠體屏障使密度保持小于1，因此上述片劑在胃液中保持漂浮。其它有用的控釋組合物在本領(lǐng)域內(nèi)是公知的(見例如US專利4946685和6261601)。
緩釋組合物可以包括壓制包衣的芯，該芯的幾何形狀控制包裹在內(nèi)的抗生素的釋放模式。通過改變芯的幾何形狀，抗生素的釋放模式可以調(diào)節(jié)至0級、一級或其組合。該體系也可以設(shè)計(jì)用于同時(shí)傳送多種有用物質(zhì)，其中每種物質(zhì)有不同的釋放模式(見例如US專利4111202和3279995)。
本發(fā)明中Tiacumicin化合物(特別是幾乎完全由R-Tiacumicin組成的OPT-80)的釋放到腸道特定區(qū)域的制劑也得以制備。本發(fā)明的Tiacumicin化合物(特別是OPT-80)可以包裹在腸溶衣中，腸溶衣可以防止在胃中降解和釋放，但是其在小腸的弱酸性或中性pH環(huán)境下很容易溶解。用于在結(jié)腸中釋放抗生素的制劑，也可以用如時(shí)間依賴的、pH值依賴的或酶侵蝕的聚合基質(zhì)技術(shù)或包衣技術(shù)。
本發(fā)明中Tiacumicin化合物(特別是幾乎完全由R-Tiacumicin組成的OPT-80)的靶向傳送特性包括可以用其它方法改性的制劑。例如，抗生素可通過包埋、離子締合、氫鍵、疏水鍵或共價(jià)鍵進(jìn)行復(fù)合。另外易于被酶或微生物裂解的聚合物或復(fù)合物也可以用作傳送藥物的方法。
本發(fā)明的Tiacumicin化合物(特別是幾乎完全由R-Tiacumicin組成的OPT-80)的膠囊化微球是另外一種有用的用于抗生素靶向釋放的藥物制劑。包含抗生素的微球可單獨(dú)用于抗生素傳送或用來作為兩階段釋放劑型的組分。適當(dāng)?shù)姆蛛A段釋放制劑可以包括對酸穩(wěn)定的微球(其中包裹后來在下層腸道釋放的本發(fā)明的Tiacumicin化合物(特別是幾乎全部由R-Tiacumicin組成的OPT-80))及將抗生素釋放到胃和上部的十二指腸的立即釋放制劑。
微球可以通過任何適當(dāng)?shù)姆椒ɑ蛴萌魏嗡帉W(xué)上可接受的材料制備。特別有用的為類蛋白質(zhì)微球(見如US專利5601846或5792451)和含有PLGA的微球(見如US專利6235224或5672659)。其它通常用于形成微球的聚合物包括如聚-ε-己內(nèi)酯、聚(e-己內(nèi)酯-Co-DL-乳酸)、聚(DL-乳酸)、聚(DL-乳酸-Co-乙醇酸)和聚(s-己內(nèi)酯-Co-乙醇酸)(見如Pitt等人，J.Pharm.Sci.，681534，1979)。微球可以通過本領(lǐng)域公知的方法制得，這些方法包括噴霧干燥、凝聚和乳化(見如Davis等人，Microsphere and Drug Therapy，1984，Elsevier；Benoit等人，Biodegradable MicrospheresAdvances inProduction Technologies，Chapter 3，ed.Benita，S，1996，Dekker，NewYork；Microencapsulation and Related Drug Processes，Ed.Deasy，1984，Dekker，New York；US專利6365187)。
適用于通過加水制備本發(fā)明的Tiacumicin化合物(特別是幾乎完全由R-Tiacumicin組成的OPT-80)的水溶液或混懸液的粉劑、分散性粉劑或顆粒劑是用于口服的適當(dāng)劑型?；鞈乙褐苿┲杏信c分散劑或潤濕劑混合在一起的活性成分、助懸劑和一種或多種防腐劑。適當(dāng)?shù)姆稚┗驖櫇駝┦侨缣烊淮嬖诘牧字?如卵磷脂或環(huán)氧乙烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物、長鏈脂肪醇或由脂肪酸衍生的偏酯)和己糖醇或己糖醇脫水物(如聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇糖單油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨醇糖單油酸酯等)。適當(dāng)?shù)闹鷳覄┦侨玺燃谆w維素鈉、甲基纖維素鈉、藻酸鈉等。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例 提供以下實(shí)施例，用以描述本發(fā)明的具體實(shí)施方案，但對本發(fā)明的范圍沒有任何限制。
實(shí)施例1R-Tiacumicin B的確切結(jié)構(gòu) R-Tiacumicin B的確切結(jié)構(gòu)(OPT-80的最主要活性成分)在下面式IV中顯示。R-Tiacumicin B的X光衍射晶體結(jié)構(gòu)是從甲醇中生長出的無色平行六面體形晶體(0.08×0.14×0.22mm)得到的，并在

圖1中用ORTEP圖顯示。該X光衍射晶體結(jié)構(gòu)確證了下面式IV中所示結(jié)構(gòu)。正式化學(xué)名為3-[[[6-去氧-4-O-(3，5-二氯-2-乙基-4，6-二羥基苯甲?；?-2-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基]氧基]-甲基-12(R)-[[6-去氧-5-C-甲基-4-O-(2-甲基-1-氧代丙基)-β-D-來蘇-吡喃己糖基]氧基]-11(S)-乙基-8(S)-羥基-18(S)-(1(R)-羥基乙基)-9，13，15-三甲基氧雜環(huán)十八烷-3，5，9，13，15-五烯-2-酮。

式IV 實(shí)施例2OPT-80和相關(guān)物質(zhì)的分析數(shù)據(jù) OPT-80(幾乎完全由R-Tiacumicin B組成，R-Tiacumicin B是OPT-80的活性最好組分)及三個(gè)相關(guān)化合物(S-Tiacumicin B、閏年霉素A4和C-19酮)的分析數(shù)據(jù)總結(jié)如下。這些化合物的結(jié)構(gòu)在下面的式VIII和表2中列出。

式VIII 表2R-Tiacumicin B(OPT-80的主要的活性最好組分)和其相關(guān)化合物的結(jié)構(gòu) R-Tiacumicin B的分析數(shù)據(jù) mp 166-169℃(從異丙醇中得到的白色針晶) [α]D20-6.9(c 2.0，MeOH)； Ms m/z(ESI) 1079.7(M+Na)+； 1H 1H NMR NMR(400MHz，CD3OD)δ7.21(d，1H)，6.59(dd，1H)，5.95(ddd，1H)，5.83(brs，1H)，5.57(t，1H)，5.13(brd，1H)，5.09(t，1H)，5.02(d，1H)，4.71(m，1H)，4.71(brs，1H)，4.64(brs，1H)，4.61(d，1H)，4.42(d，1H)，4.23(m，1H)，4.02(pentet，1H)，3.92(dd，1H)，3.73(m，2H)，3.70(d，1H)，3.56(s，3H)，3.52-3.56(m，2H)，2.92(m，2H)，2.64-2.76(m，3H)，2.59(heptet，1H)，2.49(ddd，1H)，2.42(ddd，1H)，2.01(dq，1H)，1.81(s，3H)，1.76(s，3H)，1.65(s，3H)，1.35(d，3H)，1.29(m，1H)，1.20(t，3H)，1.19(d，3H)，1.17(d，3H)，1.16(d，3H)，1.14(s，3H)，1.12(s，3H)，0.87(t，3H)； 13C NMR(100MHz，CD3OD)δ178.4，169.7，169.1，154.6，153.9，146.2，143.7，141.9，137.1，137.0，136.4，134.6，128.5，126.9，125.6，124.6，114.8，112.8，108.8，102.3，97.2，94.3，82.5，78.6，76.9，75.9，74.5，73.5，73.2，72.8，71.6，70.5，68.3，63.9，62.2，42.5，37.3，35.4，28.7，28.3，26.9，26.4，20.3，19.6，19.2，18.7，18.2，17.6，15.5，14.6，14.0，11.4. S-Tiacumicin B的分析數(shù)據(jù)
式II(C-19酮) 式V(S-Tiacumicin B) 將NaBH4(9當(dāng)量，48mg)分三批加到C-19酮(150mg)的甲醇(3mL)溶液中。1小時(shí)后，加入飽和NH4Cl溶液。混合物用CHCl3萃取，然后濃縮。用YMC-pack-ODS-A 75×30mm I.D.柱純化S-Tiacumicin B(H2O∶MeOH∶AcOH 28∶72∶1)，制得35mg純的S-Tiacumicin B。
MS m/z 1074.5(M+NH4)+； 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.15(d，J＝11.4Hz，1H)，6.58(dd，J＝14.1，11.4Hz，1H)，5.82(ddd，J＝14.1，10.6，3.5Hz，1H)，5.78(s，1H)，5.40(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，5.15(dd，J＝9.5，9.5Hz，1H)，5.01(d，J＝9.9Hz，1H)，5.01(d，J＝9.9Hz，1H)，4.77(ddd，J＝5.8，5.3，5.3Hz，1H)，4.68(d，J＝11.6Hz，1H)，4.65(brs，1H)，4.62(brs，1H)，4.42(d，J＝11.6Hz，1H)，4.28(brs，1H)，4.07-3.97(m，2H)，3.74-3.58(m，4H)，3.61(s，3H)，3.52(dq，J＝9.5，5.8Hz，1H)，3.08(dq，J＝12.6，6.1Hz，1H)，3.01(dq，J＝12.6，6.1Hz，1H)，2.77-2.65(m，2H)，2.60(heptet，J＝6.9Hz，1H)，2.55-2.44(m，3H)，1.95-1.84(m，1H)，1.80(s，3H)，1.76(s，3H)，1.66(s，3H)，1.34(d，J＝5.8Hz，3H)，1.29-1.24(m，1H)，1.27(d，J＝6.6Hz，3H)，1.21(t，J＝6.1Hz，3H)，1.19(d，J＝6.9Hz，3H)，1.18(d，J＝6.9Hz，3H)，1.15(s，3H)，1.10(s，3H)，0.84(t，J＝7.2Hz，3H)； 13C NMR(100MHz，CDCl3)δ177.4，170.1，168.8，157.6，152.8，144.4，143.1，141.1，136.7，136.2，134.9，133.8，128.7，125.7，125.2，123.0，113.9，107.5，107.2，101.7，94.9，92.6，80.8，79.2，76.6，74.8，73.5，72.7，71.9，71.7，70.2，70.1，69.5，63.5，62.3，41.5，36.6，34.3，29.5，28.2，26.2，26.0，19.4，19.3，18.9，18.5，17.8，17.3，15.3，14.1，13.7，11.1； 閏年霉素A4的分析數(shù)據(jù) MS m/z 1060.5(M+NH4)+； 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.12(d，J＝11.6Hz，1H)，6.59(dd，J＝14.1，11.6Hz，1H)，5.85(brs，1H)，5.83(ddd，J＝14.1，10.6，4.8Hz，1H)，5.47(dd，J＝8.3，8.3Hz，1H)，5.12(dd，J＝9.6，9.6Hz，1H)，5.00(d，J＝10.1Hz，1H)，4.98(brd，J＝10.6Hz，1H)，4.75-4.69(m，1H)，4.68(d，J＝11.4Hz，1H)，4.66(brs，1H)，4.62(brs，1H)，4.40(d，J＝11.4Hz，1H)，4.26(brs，1H)，4.07-4.00(m，1H)，4.02(brd，J＝3.3Hz，1H)，3.75-3.61(m，4H)，3.62(s，3H)，3.55(dq，J＝9.6，6.1Hz，1H)，2.82-2.45(m，6H)，2.60(s，3H)，2.07-1.97(m，1H)，1.92(s，3H)，1.81(s，3H)，1.67(s，3H)，1.32(d，J＝6.1Hz，3H)，1.30-1.22(m，1H)，1.21(d，J＝6.6Hz，3H)，1.19(d，J＝7.1Hz，3H)，1.18(d，J＝7.1Hz，3H)，1.15(s，3H)，1.10(s，3H)，0.83(t，J＝7.2Hz，3H)； 13C NMR(100MHz，CDCl3)δ177.4，170.5，168.9，157.8，153.0，144.3，140.9，137.7，137.0，136.3，134.6，134.4，129.1，127.9，125.3，123.2，114.5，107.4，107.0，101.8，94.7，92.5，80.3，79.6，76.7，74.9，73.5，72.7，71.9，71.6，70.2，70.1，69.1，63.6，62.3，41.9，36.9，34.4，28.8，28.2，25.9，20.0，19.3，19.0，18.6，18.5，17.8，17.2，15.5，13.8.11.2； C-19酮的分析數(shù)據(jù) MS m/z 1072.5(M+NH4)+； 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.27(d，J＝11.4Hz，1H)，6.61(dd，J＝14.7，11.4Hz，1H)，5.91(ddd，J＝14.7，9.1，5.8Hz，1H)，5.83(s，1H)，5.31(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，5.14(dd，J＝9.7，9.7Hz，1H)，5.06(d，J＝10.6Hz，1H)，5.00(d，J＝10.1Hz，1H)，4.98(dd，J＝7.1，4.8Hz，1H)，4.67(d，J＝11.9Hz，1H)，4.66(brs，1H)，4.61(brs，1H)，4.42(d，J＝11.9Hz，1H)，4.30(brs，1H)，4.02(brd，J＝3.3Hz，1H)，3.63-3.60(m，4H)，3.62(s，3H)，3.51(dq，J＝9.7，6.1Hz，1H)，3.09(dq，J＝14.4，7.3Hz，1H)，3.03(dq，J＝14.4，7.3Hz，1H)，2.76-2.50(m，6H)，2.21(s，3H)，1.93-1.87(m，1H)，1.87(s，3H)，1.75(s，3H)，1.63(s，3H)，1.32(d，J＝6.1Hz，3H)，1.27-1.22(m，1H)，1.21(t，J＝7.3Hz，3H)，1.19(d，J＝7.1Hz，3H)，1.18(d，J＝7.1Hz，3H)，1.14(s，3H)，1.10(s，3H)，0.84(t，J＝7.3Hz，3H)； 13C NMR(100MHz，CDCl3)δ205.5，177.4，170.1，166.9，157.6，152.8，145.7，143.1，142.0，137.1，136.8，135.5，133.7，128.3，124.8，124.0，122.8，113.9，107.3，107.2，101.3，94.8，92.4，80.4，77.7，76.6，74.7，73.5，72.6，71.8，71.7，70.2，70.0，63.0，62.3，41.5，36.5，34.3，29.6，28.1，26.2，26.1，26.0，19.2，18.9，18.5，17.8，17.3，15.2，14.0，13.3，11.0 實(shí)施例3生物活性 對幾種艱難梭菌菌株的MIC測定值 用艱難梭菌對OPT-80(幾乎完全由R-Tiacumicin B組成)和其相關(guān)化合物進(jìn)行測試。MIC值在下面表3中報(bào)道?？梢钥闯?，與S-Tiacumicin B和閏年霉素A4相比，OPT-80活性更好。
表3對艱難梭菌菌株的MIC(μg/mL) 對多種微生物的MIC測定值 用其它幾種病原體對OPT-80(幾乎全部由R-Tiacumicin B組成)和其相關(guān)化合物進(jìn)行測試。MIC值在下面表4中報(bào)道?？梢钥闯觯cS-Tiacumicin B和閏年霉素A4相比，OPT-80活性更好。
表4對其它微生物的MIC(μg/mL) 實(shí)施例4 OPT-80對艱難梭菌的抗生素后效應(yīng) 用兩種艱難梭菌菌株(ATCC 43255和臨床分離菌LC3)對OPT-80(幾乎全部由R-Tiacumicin B組成)的抗生素后效應(yīng)進(jìn)行測定。另外，用LC3對萬古霉素和利福平進(jìn)行測試。
觀察到在4倍MIC下的PAE非常長對于兩種菌株都超過24小時(shí)。由于該效應(yīng)的長持續(xù)時(shí)間，沒有計(jì)算出準(zhǔn)確的PAE。另一方面，用LC3菌株在4倍MIC下，萬古霉素有小于1小時(shí)的很一般的PAE。
實(shí)施例5 OPT-80的體外活性 用艱難梭菌的110種遺傳性不同的臨床分離菌通過瓊膠稀釋法對T-80(幾乎全部由R-Tiacumicin B組成)、甲硝唑和萬古霉素的體外效應(yīng)進(jìn)行評估。MIC數(shù)據(jù)列在表5和表6中。
表5OPT-80、萬古霉素和甲硝唑?qū)τ谄D難梭菌的110種臨床分離菌的幾何平均數(shù)、MIC范圍、MIC50和MIC90值，單位μg/mL 表6OPT-80、萬古霉素(VAN)和甲硝唑(MTZ)對于艱難梭菌的110種臨床分離菌的原始MIC數(shù)據(jù)，單位μg/mL 實(shí)施例6 OPT-80對所選厭氧菌的活性 測得OPT-80對350種厭氧菌的體外活性。所用實(shí)驗(yàn)方法在抗微生物劑和化學(xué)治療，2004，484430-4434中記載，在此引入作為參考。
包括21種艱難梭菌菌株的所有生物為分開的分離菌，不是與克隆有關(guān)的菌。所有NCCLS推薦的質(zhì)量對照革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均包括在每一系列中在每種情況下，結(jié)果(當(dāng)可得到時(shí))在范圍內(nèi)。
MIC測試結(jié)果在表7中列出。
表7 OPT-80的MICs(μg/mL) 實(shí)施例7OPT-80對腸細(xì)菌的體外活性 對OPT-80針對腸細(xì)菌的體外活性進(jìn)行評價(jià)。所用實(shí)驗(yàn)方在抗微生物劑和化學(xué)治療，2004，484898-4902中記載，在此引入以作參考。
抗微生物濃度范圍選取包括或超過在腸中應(yīng)當(dāng)達(dá)到的水平(到可以獲得信息的程度)，受測試介質(zhì)中的藥物溶解度的限制。在測試中所用OPT-80的濃度范圍為0.03μg/mL至1024μg/mL。
為了進(jìn)行分析，測試菌通常以包括10種分離菌的屬、種或其它組別歸類。除了少于10種測試菌株(只報(bào)道了濃度范圍)的生物外，對濃度范圍和50％和90％分離菌被抑制的MICs進(jìn)行測定(表8)。
OPT-80對大多數(shù)厭氧革蘭氏陽性非芽胞桿菌和厭氧革蘭氏陽性球菌有很好活性。OPT-80對腸球菌和葡萄球菌也有好的活性。
表8 OPT-80對453種細(xì)菌分離菌的體外活性 其它實(shí)施方案 在此引入上面討論的所有文獻(xiàn)的全部內(nèi)容作為參考，并用于本發(fā)明的各種目的。盡管參照優(yōu)選的實(shí)施方案對本發(fā)明進(jìn)行了具體顯示和描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，可以進(jìn)行各種形式或細(xì)節(jié)的改變而不違背所附權(quán)利要求書中所定義的本發(fā)明的范圍和精神。
權(quán)利要求
1.組合物，該組合物包含70％-100％式VII化合物
式VII
其中，
X為選自甲基、乙基、正丙基和異丙基的低級烷基；
Y為OH或酮(＝O)；并且
Z為H或選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、叔丁基和戊基的低級烷基。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物另外包括0％-30％的Tiacumicin B相關(guān)化合物。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包括75％的式VII化合物。
4.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包括80％的式VII化合物。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包括85％的式VII化合物。
6.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包括90％的式VII化合物。
7.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包括95％的式VII化合物。
8.權(quán)利要求1的組合物，其中
X為甲基或乙基；
Y為OH或酮(＝O)；并且
Z為異丙基。
9.權(quán)利要求8的組合物，其中
X為乙基；
Y為OH或酮(＝O)；并且
Z為異丙基。
10.權(quán)利要求9的組合物，其中
X為乙基；
Y為OH；并且
Z為異丙基。
11.組合物，該組合物包含70％-100％式IV化合物
式IV。
12.權(quán)利要求11的組合物，其中所述組合物另外包括0％-30％的Tiacumicin B相關(guān)化合物。
13.權(quán)利要求12的組合物，其中所述Tiacumicin B相關(guān)化合物選自閏年霉素A4和C-19酮。
14.權(quán)利要求12的組合物，其中所述組合物包括
(a)≥90％的式IV化合物；和
(b)≤10％的Tiacumicin B相關(guān)化合物。
15.權(quán)利要求14的組合物，其中所述Tiacumicin B相關(guān)化合物選自閏年霉素A4和C-19酮。
16.藥物組合物，該藥物組合物包括
(a)70％-100％的式VII化合物，
其中，
X為選自甲基、乙基、正丙基和異丙基的低級烷基；
Y為OH或酮(＝O)；并且
Z為H或選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、叔丁基和戊基的低級烷基；
(b)0％-30％的Tiacumicin B相關(guān)化合物；和
(c)藥學(xué)上可接受載體。
17.權(quán)利要求16的藥物組合物，該藥物組合物另外包括選自抗微生物劑和抗真菌劑的附加物質(zhì)。
18.權(quán)利要求16的藥物組合物，其中
X為甲基或乙基；
Y為OH或酮(＝O)；并且
Z為異丙基。
19.權(quán)利要求18的藥物組合物，其中
X為乙基；
Y為OH或酮(＝O)；并且
Z為異丙基。
20.權(quán)利要求19的藥物組合物，其中
X為乙基；
Y為OH；并且
Z為異丙基。
21.權(quán)利要求20的藥物組合物，其中所述Tiacumicin B相關(guān)化合物選自閏年霉素A4和C-19酮。
22.藥物組合物，該藥物組合物包括
(a)70％-100％的式IV化合物；
(b)0％-30％的Tiacumicin B相關(guān)化合物；和
(c)藥學(xué)上可接受載體。
23.權(quán)利要求22的藥物組合物，其中所述藥物組合物包括
(a)≥90％的式IV化合物；
(b)≤10％的Tiacumicin相關(guān)化合物；和
(c)藥學(xué)上可接受載體。
24.權(quán)利要求23的藥物組合物，其中所述Tiacumicin B相關(guān)化合物選自閏年霉素A4和C-19酮。
25.治療哺乳動(dòng)物細(xì)菌感染的方法，該方法包括對哺乳動(dòng)物給予藥物組合物，該藥物組合物包括治療有效量的權(quán)利要求16的藥物組合物。
26.權(quán)利要求25的方法，其中
X為甲基或乙基；
Y為OH或酮(＝O)；并且
Z為異丙基。
27.權(quán)利要求26的方法，其中
X為乙基；
Y為OH或酮(＝O)；并且
Z為異丙基。
28.權(quán)利要求27的方法，其中
X為乙基；
Y為OH；并且
Z為異丙基。
29.權(quán)利要求28的方法，其中所述Tiacumicin B相關(guān)化合物選自閏年霉素A4和C-19酮。
30.權(quán)利要求28的方法，其中藥物組合物包括權(quán)利要求23的藥物組合物。
31.權(quán)利要求30的方法，其中所述Tiacumicin B相關(guān)化合物選自閏年霉素A4和C-19酮。
32.權(quán)利要求30的方法，其中所述藥物組合物有MIC值，其顯著低于Tiacumicin B相關(guān)化合物的MIC值。
33.權(quán)利要求32的方法，其中所述Tiacumicin B相關(guān)化合物選自閏年霉素A4和C-19酮。
34.權(quán)利要求32的方法，其中所述MIC值用選自艱難梭菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和屎腸球菌的細(xì)菌進(jìn)行測定。
35.權(quán)利要求30的方法，其中所述藥物組合物有超過24小時(shí)的抗生素后效應(yīng)(PAE)。
36.權(quán)利要求30的方法，其中所述藥物組合物另外包括選自抗微生物劑和抗真菌劑的附加物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明廣泛地涉及稱為Tiacumicins的18元環(huán)大環(huán)抗微生物劑，特別是OPT-80(幾乎完全由R-Tiacumicin B組成)，本發(fā)明還涉及包含OPT-80的藥物組合物和應(yīng)用OPT-80的方法。具體地講，該化合物是用于治療細(xì)菌感染的有效藥物，特別是艱難梭菌(C.difficile)感染。
文檔編號A61K31/70GK101128114SQ200580048715
公開日2008年2月20日 申請日期2005年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月31日
發(fā)明者Y-K·舒, C-K·王, Y-H·邱, A·羅梅羅, F·巴巴卡尼, P·西爾斯, F·奧庫姆 申請人:浩鼎生技公司