專利名稱：超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的混合物治療炎性皮膚病損的應(yīng)用的制作方法
超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的混合物治療炎性皮膚病損的應(yīng)用
在真皮或表皮的病損(有時使人喪失勞動能力)中，盡管對有些病損已進(jìn)行了許多 嘗試，但目前仍然缺少令人滿意的治療效果這些病損是真皮纖維化、表皮角化病、 瘢痕疙瘩或肥厚性瘢痕。
雖然這些病損的起因和起源均不同，但它們包括相似的發(fā)病機理，這使得能夠 開發(fā)一種組合物，以生產(chǎn)用于治療這些病痛，更具體是瘢痕疙瘩和皮膚纖維化(尤其 是輻射誘導(dǎo)的纖維化)的皮膚或皮膚美容制劑。
纖維化是非特異性病損，其特征是結(jié)締組織增生和成纖維細(xì)胞或纖維細(xì)胞增殖, 形成膠原。它們轉(zhuǎn)變成主要由結(jié)締組織組成的束，隨后產(chǎn)生病理現(xiàn)象或治療作用。
常常認(rèn)為，成纖維細(xì)胞的激活是這種疾病起源的原因之一。在正常的瘢痕形成 過程中，暫時激活成纖維細(xì)胞，使其變成成肌纖維細(xì)胞，后者增殖和形成膠原基質(zhì)。
可認(rèn)為纖維化以某種方式影響的皮膚部分是激活瘢痕形成的信號連續(xù)釋放的區(qū) 域，因此產(chǎn)生了異常產(chǎn)量的細(xì)胞因子和生長因子，這種異常產(chǎn)量可產(chǎn)生慢性激活作 用和長期作用于成肌纖維細(xì)胞導(dǎo)致纖維化。
已知的引發(fā)因素包括輻射(特別是放療)和自由基，可通過化療藥如博來霉素加強 其作用。
此外，離子化輻射與活組織的相互作用(通過產(chǎn)生自由基)引起了產(chǎn)生炎性反應(yīng)的 生物疾病和病損。
已根據(jù)所涉及的各種現(xiàn)象(如包括TGF-pi因子)和可能的治療方法(如采用基于 鹵夫酮的治療)作出了大量假設(shè)。
然而，迄今為止，仍然沒有令人滿意的治療方法。
瘢痕疙瘩是一種良性皮膚腫瘤，其外觀通常為皺褶狀，在瘢痕上發(fā)生。它是由 瘢痕形成區(qū)域上發(fā)生的纖維組織失控性生長引起的，切除后不會消退。這種類型的 瘢痕形成過程失調(diào)導(dǎo)致或可能導(dǎo)致肥厚性瘢痕，當(dāng)瘢痕形成過程的同化或異化代謝 階段之間失去平衡時產(chǎn)生這種現(xiàn)象，導(dǎo)致產(chǎn)生的膠原量大于降解的膠原量，而導(dǎo)致 在所有方向上生長出瘢痕。
僅當(dāng)病損成熟時，瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕之間才顯現(xiàn)出主要差異，組織學(xué)差異主要是瘢痕疙瘩中存在瘢痕疙瘩膠原。在它們開始形成時，出現(xiàn)炎性階段，常常是 紅斑形式。治療各有不同，主要是預(yù)防性治療包括敷料、瘢痕形成期間壓迫、皮 質(zhì)類固醇、放療(有很大爭議)和干擾素治療。
也廣泛采用手術(shù)介入，如冷凍手術(shù)和激光治療。己進(jìn)行基于給予影響膠原合成 的活性分子的治療嘗試，所述分子包括脯氨酸-6-羥基脯氨酸、鈴蘭氨酸、曲尼斯特
(trinilast)或具有抗過敏活性的分子。采用生長因子也獲得了滿意程度或高或低的結(jié)果。
此外，很顯然這些不同疾病所涉及的瘢痕形成過程失調(diào)可能起源于氧化過程產(chǎn) 生的炎性。
由US5080886得知用基于超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)的藥物組 合物預(yù)防或治療心臟手術(shù)后再灌注階段由氧化、缺血或血液凝塊引起病損。
另外，2004年的臨床試驗驗證了外用SOD對減少乳腺癌放療后的纖維化具有 優(yōu)勢參見Campana等，J. Cell. Med.，第8巻，第1期，2004， 109-116。
然而，在治療上述炎性來源的其它病損中沒有證實這種優(yōu)勢。
因此，本發(fā)明涉及超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的混合物在制備治療真皮纖維 化、表皮角化病、瘢痕疙瘩或肥厚性瘢痕的外用組合物中的應(yīng)用。
超氧化物歧化酶(SOD)是天然來源的穩(wěn)定酶它能在不消耗的情況下產(chǎn)生超氧化
物自由基，通?？扇苡谒?。超氧化物歧化酶來自植物，或通過生物技術(shù)獲得。
過氧化氫酶是能催化過氧化氫釋放分子氧的鐵卟啉酶。這些酶稱作代謝酶，它們能催化細(xì)胞內(nèi)的反應(yīng)，如產(chǎn)生能量和解毒。在天然狀 態(tài)下，這些酶常同時存在，因為它們的機制互補。
過氧化氫酶通過攻擊游離的過氧化物自由基而保護(hù)細(xì)胞。
有三種類型的SOD:銅/鋅SOD、錳SOD和鐵SOD。這些酶保護(hù)細(xì)胞SOD Cu/Zn 保護(hù)胞漿，胞漿中的代謝反應(yīng)會產(chǎn)生自由基；SODMn保護(hù)細(xì)胞的線粒體，其含有遺 傳信息并作為細(xì)胞能量產(chǎn)生部位起作用。
在本發(fā)明制劑中，SOD可以是任何來源的SOD。
大多數(shù)植物中天然存在SOD，在提取物、蘋果、某些品種的巻心菜、花椰菜、 球芽甘藍(lán)或者甚至是巻心菜或瓜類(可任選是轉(zhuǎn)基因植物)，還有辣根中存在SOD， 或者SOD可提取自富酶谷物如小麥、玉米、大豆或大麥的種子或芽。
也可通過生物技術(shù)產(chǎn)生SOD;例如，它可來自釀酒酵母OS""cc/wram少c" ce"v&'fle)菌株。它還可提取自牛或人的紅細(xì)胞，通過微生物如大腸桿菌(五.C0/Z)或酵母重組合成 而產(chǎn)生，或提取自哺乳動物肝臟。
因此，本發(fā)明的一個實施方式涉及一種組合物，其特征是其中的超氧化物歧化 酶通過生物技術(shù)獲得，來自(例如)釀酒酵母的天然菌株。
按照本發(fā)明，SOD可與聚合物絡(luò)合或結(jié)合，而不降低其酶活性一所述聚合物包 括(例如)聚乙二醇或多糖。
能夠?qū)⑦^氧化氫轉(zhuǎn)變?yōu)樗脱醯倪^氧化氫酶(CAT)可以是任何來源。 過氧化氫酶可以(例如)獲自哺乳動物肝提取物，或微生物如黑曲霉04w^g///^
它還可獲自植物提取物或通過重組合成獲得。
與SOD相似，它可與聚合物共價結(jié)合或絡(luò)合，而不降低其酶活性一所述聚合物 包括(例如)聚乙二醇或多糖。
可將這兩種酶包裹到或摻入聚合物微粒中，該聚合物微粒由(例如)交聯(lián)的離子型 多糖和/或親水性聚合物組成。
單獨或混合的這兩種酶制劑能保護(hù)酶活性，例如，不與外界環(huán)境相互作用，同 時能促進(jìn)耙向、分布，也可為藥物制劑。
這兩種酶可以凍干形式(如粉末形式)、結(jié)晶懸液形式或硫酸銨懸液形式存在。
許多動物或植物提取同時含有這兩種酶例如包括瓜類提取物、巻心菜提取物
或哺乳動物肝臟提取物。'
按照本發(fā)明，無論其來源，SOD/CAT混合物指該提取物含有提取的這兩種酶的 混合物，或者無論是否經(jīng)過制備，必須使酶活性比值為14/2-15/5、 SOD酶活性為每 克10 000-16 000 IU。
過氧化氫酶的活性約為每克1500-4000 IU。
可用Spitz， D.禾口 Oberley， L.: An Assay for Superoxide Dismutase Activity in Mammalian Tissue Homogenates(卩甫乳動物組織勻漿物中超氧化物歧化酶活性的測 定)，Anal. Biochem. 179， 8， 1989修改的Beauchamp C.禾卩Fridovich I.， Analytical Biochemistry 44, 276 (1971)的方法測定SOD的酶活性。
由于SOD半衰期短，所以該方法是間接方法；該方法通過SOD抑制黃嘌吟/黃 嘌呤氧化酶系統(tǒng)產(chǎn)生的超氧化物陰離子流的能力評估SOD。
通過ClaiBorne A. ， Catalase Activity, CRC Handbook of Methods for oxygen radical research(過氧化氫酶活性CRC氧自由基研究方法手冊)，283-284， 1985的方法測定過氧化氫酶的酶活性。該方法依據(jù)過氧化氫酶分解過氧化氫，用UV分光光度計于240 nm處監(jiān)測該過程。因此，本發(fā)明涉及超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的混合物在制備治療炎性來源 皮膚病損的外用組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述病損選自真皮纖維化、表皮角化病、瘢 痕疙瘩或肥厚性瘢痕。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述超氧化物歧化酶提取自可以任選是轉(zhuǎn)基因 植物的蘋果、花椰菜、球芽甘藍(lán)、巻心菜或瓜類，或者辣根。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述超氧化物歧化酶提取自選自小麥、玉米、 大豆或大麥的富酶谷物的種子或芽。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述超氧化物歧化酶是通過生物技術(shù)獲得的。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述超氧化物歧化酶獲自釀酒酵母菌株。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述超氧化物歧化酶提取自?；蛉说募t細(xì)胞或 提取自哺乳動物肝臟。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述超氧化物歧化酶是由大腸桿菌微生物或酵 母重組合成而產(chǎn)生的。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述超氧化物歧化酶是通過生物技術(shù)、由釀酒 酵母的天然菌株產(chǎn)生的。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述過氧化氫酶獲自哺乳動物肝臟提取物或微 生物如黑曲霉的提取物。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述過氧化氫酶獲自植物提取物。 本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述過氧化氫酶是通過重組合成獲得的。 本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是單獨或混合的所述過氧化氫酶或超氧化物歧化酶共價結(jié)合或絡(luò)合于聚合物。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述聚合物選自聚乙二醇或多糖。 ， 本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是單獨或混合的所述過氧化氫酶或超氧化物歧化酶包裹到或摻入聚合物微粒中。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述聚合物微粒由交聯(lián)的離子型多糖和/或親水、性聚合物組成。 ，本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是單獨或混合的所述過氧化氫酶和超氧化物歧化酶是凍干粉末形式、結(jié)晶懸液形式或硫酸銨懸液形式。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述過氧化氫酶和超氧化物歧化酶以天然提取 物中的混合物形式存在。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述天然提取物選自瓜類提取物、巻心菜提取 物或哺乳動物肝臟提取物。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述SOD/CAT混合物的酶活性比值為 14/2-15/5、 SOD酶活性為每克10 000-16 000 IU。本發(fā)明涉及上述應(yīng)用，其特征是所述過氧化氫酶活性約為每克1500-4000 IU。用以下配方舉例說明本發(fā)明配方例子局部外用于病損處的乳膏。二壬酸丙二醇酯 丙二醇硬脂酸甘油酯和PEG硬脂酸酯硬脂酸黃原膠乙二醇十六烷酸鯨蠟酯礦脂鍔梨油液體石蠟三乙醇胺山梨酸鉀防腐劑精油(橙花油)SOD/CAT混合物水6% 5% 3% 3% 2% 1% 1% 0.5% 1% 2% 0.67% 0.2% 0.3%2% qs所用SOD/CAT混合物是提取自各種歐洲油菜(5m^'ca朋; ^)的混合物。 通過上述方法評估該SOD的酶活性，約為每克14 000 1U。 通過上述方法評估該過氧化氫酶的酶活性，為3000IU。在另一個例子中，用瓜類提取物拜諾公司(Bionov)以商品名愛初梅爾(Extramel) 出售的穩(wěn)定化提取物提供所述SOD/CAT混合物。通過上述方法評估該SOD的酶活性，約為每克14 000 IU。 通過上述方法評估該過氧化氫酶的酶活性，為2000IU。在另一個例子中，用含有獲自生物技術(shù)研究公司(Biotics Research Corporation)出售的植物提取物的SOD和過氧化氫酶的混合物提供所述SOD/CAT混合物。 通過上述方法評估該SOD的酶活性，約為每克14 500 IU。 通過上述方法評估該過氧化氫酶的酶活性，為2500 IU。在另一個例子中，按照所需的最終酶活性，即SOD為14 000 IU/克和過氧化氫 酶為3000IU/克，制備提取自大腸桿菌的凍干粉末形式的SOD(2500IU/mg)和提取自 黑曲霉的凍干形式的過氧化氫酶(170 IU/mg)的混合物，從而提供所述SOD/CAT混合 物。配制本發(fā)明組合物，以提供常規(guī)用于將組合物外用于皮膚的所有藥學(xué)形式。 將它們配制成(例如)乳劑、乳膏、洗劑、硬膏劑或貼劑形式，或者為條形，或者 是可在臨用前溶于水或生理血清的粉末。本發(fā)明組合物可任選地含有各種添加劑，如懸浮劑，乳化劑，陰離子型、陽離 子型、非離子型或兩性聚合物，蛋白質(zhì)，維生素，表面活性劑，礦物油，植物油， 蠟，有機硅樹脂和/或橡膠，增稠劑，酸化劑或堿化劑，溶劑，pH穩(wěn)定劑，UV保護(hù) 劑，防腐劑，抗菌劑和抗真菌劑，香料或美容學(xué)或皮膚病學(xué)采用的其它常用佐劑。
權(quán)利要求
1.超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的混合物在制備治療炎性來源皮膚病損的外用組合物中的應(yīng)用。
2. 如權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于，所述病損選自真皮纖維化、表皮 角化病、瘢痕疙瘩或肥厚性瘢痕。
3. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶提 取自可以任選是轉(zhuǎn)基因植物的蘋果、花椰菜、球芽甘藍(lán)、巻心菜或瓜類，或者辣根。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶提取自選自小麥、玉米、大豆或大麥的富酶谷物的種子或芽。
5. 如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶是通過生 物技術(shù)獲得的。
6. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶獲 自釀酒酵母菌株。
7. 如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶提取自牛 或人的紅細(xì)胞或提取自哺乳動物肝臟。
8. 如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶是由大腸 桿菌微生物或酵母重組合成而產(chǎn)生的。
9. 如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶是通過生 物技術(shù)、由釀酒酵母的天然菌株產(chǎn)生的。
10. 如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述過氧化氫酶獲自哺乳動 物肝臟提取物或微生物如黑曲霉的提取物。
11. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述過氧化氫酶獲自 植物提取物。
12. 如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述過氧化氫酶是通過重組 合成獲得的。
13. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，單獨或混合的所述過 氧化氫酶和超氧化物歧化酶共價結(jié)合或絡(luò)合于聚合物。
14. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述聚合物選自聚乙 二醇或多糖。
15. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，單獨或混合的所述過 氧化氫酶或超氧化物歧化酶包裹到或摻入聚合物微粒中。
16. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述聚合物微粒由交 聯(lián)的離子型多糖和/或親水性聚合物組成。
17. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，單獨或混合的所述過 氧化氫酶和所述超氧化物歧化酶是凍干粉末形式、結(jié)晶懸液形式或硫酸銨懸液形式。
18. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述過氧化氫酶和所述超氧化物歧化酶以天然提取物的混合物存在。
19. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述天然提取物選自瓜類提取物、巻心菜提取物或哺乳動物肝臟提取物。
20. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述SOD/CAT混合物 的酶活性比值為14/2-15/5、 SOD酶活性為每克10 000-16 00Q IU。
21. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述過氧化氫酶活性 約為每克1500-4000 IU。
全文摘要
本發(fā)明涉及超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的混合物在制備用于治療炎性皮膚病損的外用組合物中的應(yīng)用，所述病損選自真皮纖維化、表皮角化病、瘢痕疙瘩或肥厚性瘢痕。配制本發(fā)明組合物，以獲得常用于將外用組合物施涂于皮膚的所有劑型，如乳劑、乳膏、洗劑、硬膏劑或貼劑劑型，或者是可臨用前溶于水或生理血清的粉條(powder stick)。
文檔編號A61P17/02GK101247824SQ200580051410
公開日2008年8月20日 申請日期2005年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月28日
發(fā)明者C·迪爾 申請人:生命科學(xué)發(fā)明有限公司