專利名稱：治療內(nèi)耳疾病的藥用合成物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及合成物，更具體地說，涉及一種由一種或多種化合物組成的 用于預(yù)防和/或治療耳鳴或別的內(nèi)耳疾病的合成物。
背景技術(shù)：
目前，為各種各樣的內(nèi)耳病變提供新的治療方法正受到越來越多的廣泛 關(guān)注，例如聽力喪失、內(nèi)耳傳染疾病或耳鳴。例如，耳鳴是一種非常普遍的
內(nèi)耳病變，即在沒有外部聲音剌激的條件下，產(chǎn)生聲音感知。估計(jì)大約有7 %到14%的人群產(chǎn)生過耳鳴，同時(shí)在大約1%到2.4%的人群中發(fā)生潛在的致 殘性耳鳴(Vesterarger V. ， British Medical Journal 314 (7082): 728-731 (1997))。耳鳴通常與別的聽力疾病相關(guān)，例如聽力喪失或聽覺過敏，例如對(duì) 聲音的超敏性(SahleyT. and Nodar R. ， Hearing Research (152): 43-54)， 這在內(nèi)耳中是經(jīng)常發(fā)生的。
在動(dòng)物模型或人類中，已經(jīng)試驗(yàn)了各種各樣的藥用化合物，例如利多卡 因、加巴噴丁、諾萃達(dá)靈、退黑激素、卡羅維林、巴氯芬、阿普唑嗆、加環(huán) 利定、7-氯犬尿喹啉酸制劑或克他命，以治療內(nèi)耳疾病，例如耳鳴。盡管一 些藥用化合物已經(jīng)顯示了很好的效果，但是仍然沒有將它們?cè)谂R床上正常使 用。發(fā)展有效治療的關(guān)鍵障礙之一是內(nèi)耳像大腦一樣受到生物障礙的保護(hù)。 對(duì)于系統(tǒng)的藥物給藥，通常需要相對(duì)較高的劑量以在內(nèi)耳中達(dá)到期望的治療 效果，這往往會(huì)帶來一定的危險(xiǎn)，對(duì)中央或外圍的神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生巨大的副作 用。在另一側(cè)面對(duì)內(nèi)耳進(jìn)行局部給藥，使得以較小的所需劑量進(jìn)行靶向施用 化合物，如內(nèi)耳藥物動(dòng)力學(xué)研究中所示(Chen et al., Audiol. Neurootol. 8: 49-56 (2003))。要接近內(nèi)耳必須經(jīng)過許多中內(nèi)耳結(jié)構(gòu)組織結(jié)構(gòu)，例如圓 窗膜、橢圓窗/鐙骨足板、環(huán)狀韌帶或內(nèi)淋巴囊/內(nèi)淋巴管。通過各種施用技術(shù)可實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)耳進(jìn)行局部的化合物給藥。這些技術(shù)包括 使用相關(guān)設(shè)備以標(biāo)靶方式將這些化合物發(fā)送和/或傳遞到圓或橢圓窗膜，在那 里該化合物可擴(kuò)散到內(nèi)耳或有效地灌注到內(nèi)耳。例如，耳毛細(xì)管傳送(例如，
美國(guó)專利號(hào)6,120,484，申請(qǐng)人Silverstein)、圓窗導(dǎo)管(例如，申請(qǐng)人 Arenberg，美國(guó)專利號(hào)5,421,818; 5,474,529; 5,476,446; 6， 045， 528;或 申請(qǐng)人:Lenarz，美國(guó)專利號(hào)6,377,849，其分案號(hào)2002/0082554)，或微灌 輸(例如，申請(qǐng)人Jukarainen等等，W02004/064912)。 這些技術(shù)進(jìn)一步包括 使用相關(guān)的設(shè)備，插入到耳蝸管或耳蝸的其它部分(例如，申請(qǐng)人Kuzma，美 國(guó)專利號(hào))。別的施用技術(shù)是鼓室內(nèi)注射(有時(shí)也稱為"鼓室注射")，然而藥 物是經(jīng)過鼓膜注射到中耳，然后特別地?cái)U(kuò)散到圓窗膜(詳見例如Light J. and Silverstein H. ， Current Opinion in Otolaryngology & Head and Neck Surgery (12): 378-383 (2004)。在臨床實(shí)施中其已使用很長(zhǎng)一段時(shí)間，并 具有相對(duì)較小的干涉，并可在醫(yī)生辦公室進(jìn)行執(zhí)行。對(duì)于重復(fù)注射，可將中 耳通氣管插入到鼓膜，通過其可將藥物給藥到中耳空間。對(duì)于非常粘性的藥 物也可進(jìn)行注射，通過外科手段在鼓膜開一小口，將該藥物沉積。
為了增加藥用化合物對(duì)內(nèi)耳治療的治療效果，也可使用具有凝膠、水皰 沫或纖維或別的藥物載體的特定形式。它們可提供在超過一定時(shí)間后，進(jìn)行 可控的藥物釋放，例如幾小時(shí)、幾天或幾個(gè)星期，通過增強(qiáng)中內(nèi)耳接口組織 結(jié)構(gòu)或保持與該結(jié)構(gòu)的連續(xù)接觸的形式，可增進(jìn)其擴(kuò)散到內(nèi)耳的能力。與以 溶液給藥這些藥用化合物相比，在溶液形式中，需要多重注射，藥物可能滲 透回到耳道或下流到歐氏管產(chǎn)生顯著的損失，并且連續(xù)地與中內(nèi)耳接口組織 結(jié)構(gòu)接觸是很難的或不可能實(shí)現(xiàn)的。理想的，藥物載體是生物相容的以及生 物可降解的，這不需要以后的移除。
藥用化合物擴(kuò)散到中內(nèi)耳接口組織結(jié)構(gòu)，特別地圓窗膜，取決于各種因 數(shù)，例如分子量、濃度、脂溶性、電荷和膜的厚度(GoycooleaM. and Lundman L， Microscopy Research and Technique 36: 201-211 (1997))。在不具有 對(duì)生物體內(nèi)或膜組織的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的條件下，擴(kuò)散到中內(nèi)耳接口組織結(jié)構(gòu)的能 力，以及任意藥用化合物或?qū)?nèi)耳的局部給藥形式的適宜性仍然是未知的。Selivanova et al. ， Laryngo-Rhino-Otol (82): 235-239 (2003)證明 了在生物體內(nèi)透明質(zhì)酸增強(qiáng)了圓窗膜的滲透性，并且測(cè)試物質(zhì)利多卡因因此 更快速地?cái)U(kuò)散到內(nèi)耳同時(shí)產(chǎn)生較大的效果。Chandrasekhar S. ， Otology & Neurotology (22): 18-23 (2001)顯示了在生物體內(nèi)地塞米松與組胺的鼓室 內(nèi)注射導(dǎo)致了與未給藥相比，內(nèi)耳的外淋巴中這些類固醇具有更高的濃度。
目前有許多關(guān)于(論題)藥用化合物給藥以治療內(nèi)耳疾病的文獻(xiàn)。在臨 床已實(shí)施中，將類固醇和氨基糖苷對(duì)內(nèi)耳進(jìn)行局部給藥已進(jìn)行很長(zhǎng)一段時(shí)間 (例如Hoffer et al.， Otolaryngologic Clinics of North America (37): 1053-1060 (2004)) 。 Sakata et al. ， International Tinnitus Journal (2): 129-135 (1996)描述了將地塞米松鼓室內(nèi)灌注到人類的鼓腔中。Hoffer et al.， Otolaryngologic Clinics of North America (36): 353-358 (2003)描述了 將甲強(qiáng)龍溶液鼓室內(nèi)注射以治療噪音損傷或突發(fā)性耳聾后的耳鳴。在所有的 這些例子中，藥物化合物都是應(yīng)用于溶液中的。然而，目前對(duì)于以別的形式 對(duì)內(nèi)耳疾病進(jìn)行局部治療仍然知之很少。
申請(qǐng)人為Manning等等的專利W01997/38698公開了使用生物相容的聚合
體以施用藥用化合物到內(nèi)耳，從而治療中和內(nèi)耳疾病，例如梅尼埃病或病毒 或細(xì)菌傳染疾病。在試管中的實(shí)驗(yàn)釋放數(shù)據(jù)顯示了具有慶大霉素的透明質(zhì)酸 的形式。
申請(qǐng)人Puel等等的專利W02004/022069描述了以特定的NMDA拮抗藥加 環(huán)利定、D-AP5、 MK 801和7-氯犬尿喹啉酸制劑施用神經(jīng)調(diào)節(jié)劑，以治療各 種內(nèi)耳疾病，其具有各種形式包括藥物載體例如明膠海綿、透明質(zhì)酸、或纖 維蛋白膠。而且，W02004/022069描述了多種可替換的將這些劑型給藥到中耳 的插入方法。
根據(jù)上述文獻(xiàn)和目前用于局部給藥的許多藥用化合物的缺點(diǎn)，現(xiàn)在需要 別的適合于內(nèi)耳疾病的局部治療方法，其可容易地注射到中耳，超個(gè)一擴(kuò)散 時(shí)期可釋放藥物，并使得高百分比的藥物施用到內(nèi)耳
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供合成物，其包括(I)藥學(xué)活性劑，選自芳香基環(huán)己氨類化合 物或相應(yīng)的衍生物、類似物或藥學(xué)活性鹽；以及(II)生物相容聚合物或者 生物相容聚合物的組合。包含這些合成物的合成物或藥劑可用于預(yù)防和/或治 療內(nèi)耳疾病，例如耳鳴。
本發(fā)明的合成物包括生物相容聚合物，其支持合并治療有效數(shù)量的至少 一個(gè)如上定義的藥學(xué)活性劑。芳香基環(huán)己氨類劑可例如抑制或降低耳鳴的感 知。優(yōu)選的，該合成物的形成為， 一旦施用到中耳，其可保持與至少一個(gè)中 內(nèi)耳接口組織機(jī)構(gòu)接觸，并提供藥學(xué)活性劑延長(zhǎng)釋放到內(nèi)耳。優(yōu)選的，具有 生物相容性的聚合物也是可生物降解的，并可增加標(biāo)靶中內(nèi)耳接口組織的滲 透性，從而增強(qiáng)藥學(xué)活性劑的擴(kuò)散。


下面將結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，附圖中-
圖1示出隨時(shí)間變化S-(+)-克他命從5%和7. 5%的透明質(zhì)酸凝膠形式累 積釋放到磷酸鹽緩沖劑溶液；
圖2示出從2. 8%透明質(zhì)酸形式釋放后外淋巴中的S-(+)-克他命的濃度， 其放置在豚鼠的圓窗龕內(nèi)，然后通過該圓窗擴(kuò)散到內(nèi)耳；
圖3示出從0. 7%透明質(zhì)酸形式或20%的泊洛沙姆形式釋放后外淋巴中 的s-(+)-克他命的濃度，其放置在豚鼠的圓窗龕內(nèi)，然后通過該圓窗擴(kuò)散到 內(nèi)耳。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明是基于使用合成物的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，其特定適合于局部給藥芳香基環(huán) 己氨類、或相應(yīng)的衍生物、相似物或藥學(xué)上活性的鹽，以特定地治療內(nèi)耳疾 病。
本發(fā)明包括作為藥學(xué)上活性劑的芳香基環(huán)己氨類化合物。這些芳香基環(huán) 己氨類化合物具有通式I:<formula>formula see original document page 9</formula>(I)
其中，Rl， R2， R3， R4， R5， R6和R7是H， Cl， F， I， CH3， CH2CH3, NH2， OH , C0NH2， C0C1或優(yōu)選COOH。
特別優(yōu)選的一個(gè)芳香基環(huán)己氨類化合物是克他命?？怂?C13H16C1N0 (自由基)，2-(2-氯苯基)-2-(甲氨基)-環(huán)己酮)，其結(jié)構(gòu)式是
其是非競(jìng)爭(zhēng)的麗DA受體拮抗劑，并結(jié)合到PCP結(jié)合位，NMDA受體合成物 的分離位位于離子通道內(nèi)，因此屏蔽了跨膜離子流。
在本發(fā)明的合成物中，克他命的任意相應(yīng)的衍生物、相似物和/或?qū)τ丑w 形式或通式I或II所定義的芳香基環(huán)己氨類化合物分別用作活性劑。
通過美國(guó)專利3,254,124所公開的方法可制備克他命。更特別地，優(yōu)選 合成物是(S)-克他命，因?yàn)槠浣Y(jié)合3-4折疊，與(R)-克他命相比，其更高親 和于麗DA 受體的 PCP 結(jié)合位(Vollenweider et al. ， Eur. Neuropsychopha皿col. 7: 25-38 (1997))。如DE 2062620或W001/98265 所描述的可執(zhí)行該光學(xué)異構(gòu)體的合成，其在此全文引用。
包含在本發(fā)明藥用合成物內(nèi)的芳香基環(huán)己氨類化合物可以藥學(xué)上可接受 的鹽的形式進(jìn)行提供。這些鹽的例子包括但不限于有機(jī)酸形式形成的鹽(例 如，乙酸、乳酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、硬脂酸、維生素C、 丁二酸、苯 甲酸、甲磺酸、甲苯磺酸、或撲酸)、無機(jī)酸(例如，鹽酸、硝酸、焦磷酸、硫酸、或磷酸)、以及聚合物酸(例如，丹寧酸、纖維素、聚乳酸、聚乙二醇 或聚羥乙酸)。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，可將克他命作為自由基形式的鹽酸
鹽(C13H17C12NO)進(jìn)行給藥。
本發(fā)明涉及合并為芳香基環(huán)己氨類劑的合成物，并最終與至少一個(gè)別的 藥學(xué)活性劑合并。對(duì)其進(jìn)行明確地表達(dá)，以便將其局部地給藥到中耳，用于 該試劑的可控釋放，以最大化進(jìn)入內(nèi)耳的通道。優(yōu)選的，通過生物粘附力或 機(jī)械性質(zhì)，可將該合成物粘附到選擇的中內(nèi)耳接口組織結(jié)構(gòu)。
包含在本發(fā)明的合成物中的生物相容聚合體主要通過兩個(gè)機(jī)制支持這種 目的。第一，確保該藥用合成物施用到標(biāo)靶中內(nèi)耳接口組織結(jié)構(gòu)，在這兒其 可擴(kuò)散到內(nèi)耳。為了該目的，通過粘附到局部的中耳粘膜或粘滯特性，聚合 物必須保留在標(biāo)耙位置一段時(shí)間，以實(shí)現(xiàn)期望的持續(xù)和藥物治療效果。第二， 通過增加標(biāo)靶的中內(nèi)耳接口組織結(jié)構(gòu)的滲透性，以便促進(jìn)進(jìn)入內(nèi)耳的藥用合 成物的通道。
包含藥學(xué)活性的芳香基環(huán)己氨類劑的合成物(下面簡(jiǎn)單的稱為"活性劑") 可具有固態(tài)、半固態(tài)、凝膠態(tài)或液態(tài)形式。優(yōu)選的，該合成物是溶液、懸浮 液、乳狀液或熱硬化性凝膠。
本發(fā)明的合成物包括具有生物相容性的聚合物或其組合。具有生物相容 性的聚合物定義為完全地不與人/動(dòng)物身體或體液發(fā)生反應(yīng)。它們可以是天然 的，例如天然產(chǎn)生或合成的多糖。
優(yōu)選的，包含在本發(fā)明的合成物中的聚合物在生物體內(nèi)是可降解的，水 解或酶解，以生成生物相容的毒理安全的副產(chǎn)品，其可通過正常的代謝途徑 排除。許多天然的、合成的和生物合成的聚合物都是生物可降解的?；赾-c 主鏈的聚合物是非生物可降解的，但是含雜原子聚合物主鏈可給予了生物可 降解性。因此通過添加合適的化學(xué)聯(lián)接例如酐、脂或氨基化合物鍵、以及其 它，可使得聚合物具有生物可降解性。通過水解或酶分裂可實(shí)現(xiàn)降解，以導(dǎo) 致聚合物主鏈分裂。優(yōu)選的，具有水解化學(xué)鍵的生物可降解聚合物。
為了在醫(yī)學(xué)合成物中使用，生物可降解聚合物必須是生物相容的和優(yōu)選 的達(dá)到別的標(biāo)準(zhǔn)，例如可加工、可消毒的生物材料，以及穩(wěn)定性或降解性可控的，以適應(yīng)一定的生物條件。因此，降解產(chǎn)品通常定義為聚合物的生物相 容性，而不必須為聚合物本身。
基于聚交脂(PLA)、聚乙交脂纖維(PGA)、聚已酸內(nèi)脂(PCL)以及它們 的共聚物的聚(脂)是藥用合成物中有用的聚合物。這些材料的降解產(chǎn)生了 相應(yīng)的羥基酸，使得它們可安全地在體內(nèi)使用。別的生物可降解聚合物包括 例如PHB-PHV類的聚羥基脂肪酸酯、附加的聚酯和天然聚合物，特別地改良 的多糖、纖維素和殼聚糖。
這些生物相容聚合物也可以選自塊(共)聚合物，例如聚(環(huán)氧乙垸)、 PEO和聚(丁烯對(duì)苯二酸脂)、PBT的多塊共聚物是合適的材料。這些材料可 水解(經(jīng)過脂鍵)和氧化(經(jīng)過脂鍵)。PEO的分子量和成分影響降解速率。 具有最高吸水的共聚物降解最快。
本發(fā)明的合成物可包括具有生物相容性的聚合物的同族形式或可包括一 個(gè)、兩個(gè)或多個(gè)不同的聚合物的混合物，對(duì)其的制備可以是由于通過有關(guān)的 制備方法得到的許多聚合物，所導(dǎo)致的非均一的聚合物產(chǎn)品或通過在分離的 混合步驟組合不同的聚合物。
本發(fā)明的合成物中所使用的具有生物相容性的聚合物優(yōu)選的可形成凝 膠，其可以是生物可降解或非生物可降解的，水的或非水的，或基于微球體 的。
形成凝膠的生物相容聚合物的例子包括但不限于透明質(zhì)酸resp.透明質(zhì) 酸鹽、卵磷脂凝膠、(聚)丙胺酸衍生物、普朗尼克、聚(乙二醇)、泊洛沙 姆、殼聚糖、木聚糖、膠原質(zhì)、纖維蛋白、聚脂、聚(丙交脂)、聚(乙膠脂) 或它們的共聚物PLGA、 二乙酸六異丁酸蔗糖酯和油酸甘油酯。優(yōu)選的可容易 地給藥到中耳的凝膠，其可在超過一擴(kuò)展時(shí)期釋放該藥物，并使得高百分比 的該藥物傳遞到內(nèi)耳。
在本發(fā)明合成物中優(yōu)選作為具有生物相容性的聚合物的透明質(zhì)酸是生理 學(xué)物質(zhì)，其廣泛地分布在身體的所有器官中結(jié)締組織的細(xì)胞外基質(zhì)中。其可 具有各種分子量并是非抗原性的。而且，其具有極好的生物相容性并也可以 是生物可降解的。這些高分子量聚合物廣泛用于制藥和化妝品工業(yè)，例如作為各種前路處理中的眼外科助劑，例如囊內(nèi)和囊外白內(nèi)障手術(shù)、人工晶狀體 植入手術(shù)、角膜形成術(shù)、青光眼手術(shù)和創(chuàng)傷后手術(shù)。透明質(zhì)酸也應(yīng)用于關(guān)節(jié) 疾病的治療。透明質(zhì)酸是天然產(chǎn)生的多糖，由長(zhǎng)鏈聚合物組成的粘多糖包含
重復(fù)的Na-糖羰-N-乙酰氨基葡萄糖的二糖單元。透明質(zhì)酸的主要性質(zhì)是其可 結(jié)合水并因此形成具有高粘性的可降解的凝膠。隨著濃度和分子量的增加， 透明質(zhì)酸溶液的粘性也增加。藥學(xué)活性劑可在透明質(zhì)酸凝膠中溶解或懸浮。
與別的添加劑耦聯(lián)的磷脂可作為非常有希望的局部藥物施用工具，例如 卵磷脂有機(jī)凝膠(LO)。 LO是熱動(dòng)力穩(wěn)定的、透明的、粘彈性的、生物相容的， 并且是由磷脂(卵磷脂)、合適的有機(jī)溶劑和極性溶劑組成的均質(zhì)凝膠。凍膠 狀狀態(tài)構(gòu)成了纏繞的逆反圓柱(類聚合物)膠束的三維網(wǎng)絡(luò)，其使得連續(xù)的 或肉眼可見的外部有機(jī)狀態(tài)固定不動(dòng)，因此將液態(tài)變?yōu)槟z。在有機(jī)凝膠中 三維網(wǎng)絡(luò)的形成是在無極性有機(jī)溶液中由卵磷脂逆反膠束組成的低粘性牛頓 流體中膠束級(jí)別的轉(zhuǎn)變的結(jié)果。該脂質(zhì)聚集的球狀逆反膠束狀態(tài)開始形成伸 長(zhǎng)的具有附加水的管狀膠束，隨后纏繞形成溶液塊中的暫時(shí)的三維網(wǎng)絡(luò)。后 者可使得外部有機(jī)狀態(tài)保持固定，因此產(chǎn)生初始的非粘性溶液的凝膠形式或 凍狀狀態(tài)。
聚乙二醇PEG是聚乙烯氧化物PEO的衍生物，其位于每個(gè)分子末端的附 加的羥基團(tuán)中。使得PEG作為藥用合成物中的聚合物的關(guān)鍵性質(zhì)是生物相容 性、親水性和多功能性。通過化學(xué)相互作用可修改簡(jiǎn)單的水溶線性聚合物， 以形成不能水溶但可吸水膨脹的水凝膠。例如，通過使得聚合物進(jìn)行共價(jià)交 聯(lián)或產(chǎn)生由親水和疏水成分(通過氫鍵有效的交聯(lián))構(gòu)成的聯(lián)合聚合物，可 制備作為水凝膠使用的吸水性聚合物。
熱固性凝膠包括低溫時(shí)是液體的聚合物，但在人體正常溫度時(shí)在植入的 位置形成高粘性和近乎固態(tài)。最普遍的這些可逆的熱硬化系統(tǒng)是泊洛沙姆。 當(dāng)在濃度20% (w/w)以上溶解時(shí)，該溶液在低溫時(shí)將保持為液體，但隨著溫 度增加(通常在15。C附近)將形成高粘性和固態(tài)狀的植入體。準(zhǔn)確的凝膠化 溫度可隨著泊洛沙姆的成分的變化或添加別的賦性劑而改變。 一旦在適當(dāng)?shù)?位置，通過擴(kuò)散到聚合物可釋放可溶性的藥物。該聚合物植入體不會(huì)長(zhǎng)時(shí)間保持完整。在液體流動(dòng)顯著的位置(例如，皮下空間)，植入體最多保持12-24 小時(shí)的時(shí)間。泊洛沙姆不是生物可降解的，因?yàn)樗鼈兪蔷勖?聚環(huán)氧乙垸和 聚氧丙烯的塊共聚物)。它們?cè)谀蛑型暾嘏懦觯驗(yàn)樗鼈兪窍鄬?duì)分子量相對(duì) 較低的聚合物(〈20kD)。盡管存在顯著的突釋效應(yīng)，特別對(duì)于親水藥物，但 是它們能攜帶相當(dāng)大的藥物負(fù)載?？赡苁怯捎谥踩塍w的疏水核中的藥物所妨 礙，疏水藥物的動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)往往是發(fā)展遲緩。
可生物降解的并且與泊洛沙姆相比具有較慢的釋放特性的熱固性凝膠包 括PLA-PEG或PEG-PLGA-PEG的三塊共聚物。因?yàn)榕c泊洛沙姆系統(tǒng)一致，它 們?cè)诘蜏厥且后w。 一旦給藥，它們就形成半固態(tài)凝膠。
幾丁質(zhì)是纖維素后的世界上第二豐富的天然聚合物。 一旦發(fā)生脫乙酰作 用，其就會(huì)產(chǎn)生極低分子量的低聚糖。脫乙酰幾丁質(zhì)具有可生物降解核抗菌 特性。脫乙酰幾丁質(zhì)-磷酸甘油溶液可形成可逆的熱固性凝膠。再次地，其在 低溫是液體，并在正常體溫進(jìn)行給藥就形成半固體。例如，這些系統(tǒng)可用于 施用成長(zhǎng)激素。直到p朋.2的水溶液中，脫乙酰幾丁質(zhì)仍然保持可溶性。p朋.2 以上將導(dǎo)致該聚合物的電荷中和沉淀。添加基于糖的磷酸鹽可將脫乙酰幾丁 質(zhì)轉(zhuǎn)換成熱可逆的凝膠藥物施用系統(tǒng)。
除了熱可逆凝膠外，別的刺激響應(yīng)聚合物適合用于本發(fā)明的合成物中， 其非常依賴于在各種刺激變化下，包括溫度、PH、離子強(qiáng)度、溶劑濃度、壓 力、切應(yīng)力、光強(qiáng)度、電或磁場(chǎng)或這些因素的組合，聚合物-聚合物與聚合物 -溶劑相互作用之間的平衡。PH-可逆的水凝膠的例子是聚丙烯酸聚合物的水 溶液，其經(jīng)受濃度O. 1X以上通過重量實(shí)現(xiàn)的PH調(diào)停階段的轉(zhuǎn)變。
刺激靈敏性的凝膠也可從酶可降解多肽聚合物中形成。在多肽聚合物中 的多肽鍵比PEG/PLGA聚合物系統(tǒng)中的例如酯鍵更穩(wěn)定以防止水解，因此也可 提供更高級(jí)的存儲(chǔ)穩(wěn)定性。多肽載體也包括可生物降解的聚合物，其具有聯(lián) 接到第二聚合物塊的可生物降解的多肽塊，以形成嫁接或線性的聚合物。多 肽聚合物的例子是聚丙胺酸和相應(yīng)的衍生物。多肽載體也可以是蛋白基質(zhì)例 如纖維蛋白。纖維蛋白原是天然產(chǎn)生的蛋白，當(dāng)與酶凝血酶即另一個(gè)天然產(chǎn) 生的蛋白結(jié)合時(shí)，形成雙基質(zhì)例如熟知的纖維蛋白。也可使用別的生物相容聚合物，包括淀粉、纖維素、凝膠普朗尼克類、 特求尼克，后面的兩個(gè)是聚乙烯氧化物/聚丙烯氧化物材料。別的可使用的材 料包括硫酸軟骨素、 一般類的]黏多糖(例如粘多糖)、以及別的具有與透明 質(zhì)酸相類似特性的具有生物相容性的聚合物。
包含在本發(fā)明合成物中的藥劑優(yōu)選形成藥物可釋放的形式，經(jīng)過幾小時(shí) 到幾周的時(shí)間其可釋放藥學(xué)活性劑。
在本發(fā)明的第一實(shí)施例中，活性劑形成核周圍由具有生物相容性的聚合 物形成惰性擴(kuò)散屏障。這些系統(tǒng)包括例如膜、囊、微囊、脂質(zhì)體和中空纖維。 在此，活性劑的釋放主要是通過擴(kuò)散控制。
在第二實(shí)施例中，合成物包括具有生物相容性的聚合物的溶液，其中活 性劑溶解、乳化或分散。因?yàn)樵谛钏叵到y(tǒng)中，通過聚合物基質(zhì)的活性劑的 擴(kuò)散是速率受限的步驟，并且釋放速率由選擇的聚合物所確定，其效果影響 了活性劑的擴(kuò)散和分配系數(shù)的釋放。
在本發(fā)明的另一實(shí)施例中，合成物包括交聯(lián)聚合物凝膠，其形成大分子 "籠"，活性劑在其中擴(kuò)散?？蛇x擇的，本發(fā)明的合成物包括交聯(lián)的凝膠，其 由生物相容的親水的聚合物組成，活性物質(zhì)在其中擴(kuò)散。
在進(jìn)一步的實(shí)施例中，合成物包括具有生物相容性的聚合物的交聯(lián)凝膠
或至少兩個(gè)包含活性劑的親水聚合物的交聯(lián)混合凝膠，其中活性劑共價(jià)地耦 聯(lián)到至少其中一個(gè)聚合物的大分子。
通過這樣的交聯(lián)可延長(zhǎng)從基于聚合物的凝膠中藥用化合物的釋放速率， 但是通過產(chǎn)生共價(jià)鍵將聚合物的相鄰鏈相結(jié)合。得到的交聯(lián)的聚合物分裂得 更慢，并因此可保留藥用活性劑更長(zhǎng)的時(shí)間。
各種交聯(lián)劑以及實(shí)現(xiàn)生物相容的材料交聯(lián)的方法是本領(lǐng)域熟知的。優(yōu)選 的，完成交聯(lián)后，對(duì)于施用單元，最終的交聯(lián)材料是完全無毒的(例如，通 過使用熱交聯(lián)、伽馬輻射、紫外線輻射、化學(xué)交聯(lián)等等)。 一般的，根據(jù)成形 的聚合物結(jié)構(gòu)，交聯(lián)的程度與膨脹或水的吸收程度是成反比的。根據(jù)聚合物 的結(jié)構(gòu)，膨脹或水吸收的程度調(diào)節(jié)藥物運(yùn)輸?shù)乃俾省?br> 在本發(fā)明進(jìn)一步的實(shí)施例中，從聚合物中釋方文活性齊l]是化學(xué)可控的。通過使用生物溶蝕或吊鏈可實(shí)現(xiàn)該控制。聚合物生物溶蝕可定義為材料的轉(zhuǎn)換， 將其從不可水溶解轉(zhuǎn)換成可水溶解。在該系統(tǒng)中，活性劑是理想地均一分別
在聚合物中。因?yàn)榛钚詣┲車木酆衔镏饾u消蝕掉，活性劑就可逃脫。在吊 鏈系統(tǒng)中，活性劑是共價(jià)地聯(lián)接到聚合物，并由于水或酶作用通過鍵分裂而 釋放。在活性溶劑可控系統(tǒng)中，活性劑在聚合物基質(zhì)中溶解或分散，并且不 能擴(kuò)散穿過該基質(zhì)。在一個(gè)類型的溶劑可控系統(tǒng)中，作為環(huán)境液體例如水滲 透該基質(zhì)，聚合物膨脹，并且其玻璃化溫度低于環(huán)境溫度。因此，膨脹的聚 合物處于橡膠似的狀態(tài)，并使得所包含的藥物擴(kuò)散穿過該密封劑。
另外的延長(zhǎng)離子合成物的釋放速率的技術(shù)是如W01997/38698中所描述的 合并藥學(xué)活性劑為疏水離子對(duì)合成物。在此，藥學(xué)活性劑表現(xiàn)形式為具有兩 性分子材料的疏水離子對(duì)合成物。優(yōu)選的，對(duì)于形成具有芳香基環(huán)己氨類活 性劑的疏水離子對(duì)的兩性分子材料是十二烷基硫酸鈉(SDS)和琥珀酸二辛酯 磺酸鈉(AOT)?？筛鶕?jù)本領(lǐng)域熟知的生產(chǎn)過程制備疏水離子對(duì)合成物。關(guān)于疏 水離子對(duì)合成物別的信息和它們的制備方法可從PCT公開號(hào)為WO 94/08599， 公布時(shí)間為1994年4月28日，以及未決的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)枮?8/473， 008， 申請(qǐng)日為1995年6月6日，這兩個(gè)專利的內(nèi)容在此全文引用。
也可組合如上所描述的實(shí)施例，以控制活性劑的釋放，例如通過產(chǎn)生保 凝膠微球。在此，可通過凝膠系統(tǒng)，也可通過懸浮在聚合物凝膠系統(tǒng)中的微 球，控制活性劑的釋放。
如上所描述的粘性凝膠系統(tǒng)(例如，透明質(zhì)酸酯)可保持懸浮的微球。 凝膠提供與中內(nèi)耳接口組織結(jié)構(gòu)親密的接觸，并因此使得通過微球，將活性 劑穿過膜運(yùn)輸?shù)絻?nèi)耳?；钚詣┽尫湃Q于包含活性劑的微球的大小，較大的 微球通常較慢地釋放囊中的化合物并要經(jīng)歷一個(gè)較長(zhǎng)時(shí)期。為了實(shí)現(xiàn)常速率 施用活性劑，可混合不同大小的微球，以產(chǎn)生在一個(gè)延長(zhǎng)時(shí)期的常速率釋放。 而且，包含微球的凝膠也包括增加膜滲透性的物質(zhì)，以便微球能更容易地通 過膜。
如上所描述的適合于控制活性劑釋放的不同的系統(tǒng)也包括植入體，例如 其可設(shè)置在圓窗膜并以可控方式施用活性劑。在一實(shí)施例中，植入體必不可少地包含有載體媒介，其與活性劑耦聯(lián)。 該載體媒介可包括具有生物相容性的聚合物，或者是相互耦聯(lián)的具有生物相 容性的聚合物的組合，該聚合物可以是可生物降解和非生物可降解的。該合 成物形成為可注射和修改其粘性，例如，如上所描述的熱固性凝膠例如泊洛 沙姆， 一旦插入到中耳，就從液體變?yōu)楦哒承院凸虘B(tài)。通過擴(kuò)散、溶劑藥物、 電擴(kuò)散、滲透作用、活性/消極的運(yùn)輸和相應(yīng)的組合，可釋放包含在載體媒介 中的活性劑。
在另一實(shí)施例中，植入體可包括核和至少一個(gè)覆蓋核的膜。核可包括構(gòu) 成活性劑的合成物，該活性劑溶解或分散在具有生物相容性的聚合物中。與 核或彈性體合成物相比，該膜可由相同或不同的聚合物合成物組成。通過核 的特性以及可選的通過膜的特性，在該植入體中，可控制活性劑的釋放速率。 因此，可由核或膜其中之一或兩者一起，控制活性劑的釋放速率。也可以是， 核主要控制釋放速率，膜僅執(zhí)行釋放速率的最終控制。
如果覆蓋核的膜由兩層或更多層組成，在每一層中所使用的聚合物或彈 性體可以相同或不同。在厚度或材料或兩者上，膜的不同層的組合進(jìn)一步使 得可控活性劑的釋放速率。
如果植入體包括多于一種藥學(xué)活性劑，核可包括不同活性劑的一部分， 該活性劑溶解或分散到相同的聚合物合成物中。在另一實(shí)施例中，核由至少 兩部分組成，每一部分包括至少一種藥學(xué)活性劑。根據(jù)不同的活性劑的期望 釋放速率，可選擇核的不同部分的聚合物成分，并因此在每一部分中是相同 或不同的。核的不同部分可依次相鄰進(jìn)行設(shè)置或設(shè)置為核的一部分包住核的 另一部分的至少一部分。核的不同部分可相互間隔設(shè)置和/或分離在不同的膜 中。對(duì)于至少一種藥學(xué)活性劑，該分離膜可以是可滲透的或不可滲透的。也 可使用一種膜，其對(duì)于第一活性劑是可滲透的，但對(duì)于第二活性劑是不可滲 透的。
可用作植入體的膜的材料可以是例如基于硅氧烷的彈性體，其是由聚二 取代硅氧烷構(gòu)成的彈性體，其中取代主要是較低取代或未取代的垸基或苯基 團(tuán)。這種廣泛使用和優(yōu)選的聚合物是二曱聚硅氧垸。乙烯-乙酸乙浠酯共聚物膜也是合適的，其可作為對(duì)于活性劑擴(kuò)散的速率限制屏障。
藥學(xué)活性劑的釋放動(dòng)力學(xué)不僅受從合成物中釋放所支配，更潛在地受內(nèi) 中耳接口組織結(jié)構(gòu)的重要影響。
因此，適合于局部給藥內(nèi)耳的本發(fā)明的藥用合成物優(yōu)選包括可增強(qiáng)中內(nèi) 耳接口組織結(jié)構(gòu)滲透性的物質(zhì)，其中在給定的時(shí)間周期，藥學(xué)活性劑可以更 大數(shù)量擴(kuò)散，或在給定的數(shù)量，可更快地?cái)U(kuò)散到內(nèi)耳，或更大的分子可進(jìn)入 內(nèi)耳。然而，這樣的改進(jìn)的滲透性不能擾亂內(nèi)耳外淋巴和中耳空間之間的滲 透平衡，同時(shí)不能在耳蝸產(chǎn)生誘導(dǎo)毒性。目前特別關(guān)注來自滲透增強(qiáng)物質(zhì)的 潛在的耳毒性，其可通過圓窗，并在內(nèi)耳產(chǎn)生細(xì)胞毒素效果。例如，鏈球菌 溶血素可增強(qiáng)圓窗滲透性，但卻產(chǎn)生細(xì)胞毒性。
增強(qiáng)中內(nèi)耳接口組織結(jié)構(gòu)滲透性的物質(zhì)的例子是組胺。同樣，透明質(zhì)酸 同樣示出增強(qiáng)內(nèi)耳接口結(jié)構(gòu)的滲透性并不具有耳毒性，因此優(yōu)選作為本發(fā)明 合成物中的具有生物相容性的聚合物。
本發(fā)明的合成物進(jìn)一步可包括一個(gè)或多個(gè)別的藥學(xué)活性化合物。依據(jù)本 發(fā)明的耳合成物可包括各種成分，其可包括別的生物活性劑，例如抗生素例 如氟奎諾酮類、抗炎劑例如類固醇、可的松、止痛劑、安替比林、苯坐卡因、
普魯卡因、抗氧化劑例如蛋氨酸、N-乙酰半胱氨酸、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素例如GDNF或 BDNF、抗凋亡或抗壞死劑例如亮肽素、半胱氨酸蛋白酶、抑制劑等等。
適合于局部給藥內(nèi)耳的本發(fā)明的藥用合成物包括治療上有效數(shù)量的活性 成分，如果必須的話，進(jìn)一步可包括的成分，例如無機(jī)的或有機(jī)的、固態(tài)或 液態(tài)的藥學(xué)可接受的載體或工具、緩沖劑、賦性劑或添加劑。
對(duì)于局部給藥的合適的工具是有機(jī)的或無機(jī)的物質(zhì)，其實(shí)藥學(xué)上可接受 的并且不與活性化合物反應(yīng)，例如鹽水、酒精、植物油、苯甲醇、乙二醇、 聚乙二醇、三醋酸甘油酯、凝膠、糖類例如乳糖或淀粉、鎂、硬脂酸鹽、滑 石和礦脂。指示制備是己滅菌的和/或包括輔助物質(zhì)例如潤(rùn)滑劑、防腐劑例如 硫柳汞(例如50%)、穩(wěn)定劑和/或潤(rùn)濕劑、乳化劑、影響滲透壓力的鹽、緩 沖物質(zhì)、著色劑、和/或芳化劑。
優(yōu)選的，典型的賦性劑選擇為在對(duì)耳進(jìn)行給藥時(shí)，其不會(huì)增強(qiáng)將試劑傳遞到體循環(huán)或中央神經(jīng)系統(tǒng)。例如，通常地，優(yōu)選的，典型的賦性劑不具有 充分的閉塞特性，其增強(qiáng)經(jīng)皮傳送，并穿過黏膜進(jìn)入體循環(huán)。這樣的閉塞工 具包括烴堿、無水吸收堿例如親水礦脂和無水羊毛脂(例如優(yōu)色林)、和油包 水乳劑堿例如羊毛脂和凍乳酪。更優(yōu)選的，充分非閉塞的工具，其通常包括 水可溶的物質(zhì)，例如油包水乳劑堿(乳酪或親水油膏)和水可溶堿例如基于 聚乙二醇的工具和具有各種試劑的水溶液凝膠例如甲基纖維素、羥乙基纖維
素，以及羥丙基甲基纖維素(例如，K Y凝膠)。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員可選擇合適的典型的賦性劑和工具用于特定通途，特 另lj是參考本領(lǐng)域一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)文本，例如Remington' s Pharmaceutical Sciences, Vol. 18， Mack Publishing Co. ， Easton， PA (1990)，特別是其中的87章。 例如，依據(jù)本發(fā)明的生物活性劑可與增強(qiáng)劑組合，以增強(qiáng)試劑的滲透性。
藥用合成物包括活性成分、生物相容聚合物、以及需要的話，還可包括 佐劑例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、交聯(lián)劑，并可通過制藥領(lǐng)域熟 知的任意方法制備，例如常規(guī)的混合、?；⒄{(diào)制、消溶或凍干等方法。
該合成物可用于制備治療內(nèi)耳疾病的藥物。例如治療耳鳴、聽力喪失、 內(nèi)耳炎或感染、自體免疫性耳病、眩暈、梅尼埃病、內(nèi)耳細(xì)胞惡化或老齡化 內(nèi)耳細(xì)胞惡化。
通過各種施用技術(shù)可實(shí)現(xiàn)對(duì)遭受內(nèi)耳疾病的哺乳動(dòng)物給藥本發(fā)明的合成 物或藥劑。優(yōu)選的，通過插入到中耳進(jìn)行給藥。優(yōu)選的，通過灌輸、注射或 通過外科設(shè)備沉積，實(shí)現(xiàn)給藥藥劑resp.植入體。
這些包括使用有關(guān)設(shè)備或藥物載體，以標(biāo)靶形式將形成物傳遞和/或施用 到內(nèi)中耳接口組織結(jié)構(gòu)，在那里其擴(kuò)散到內(nèi)耳或進(jìn)行活性的灌注。例如，耳 毛細(xì)管傳送(例如，美國(guó)專利號(hào)6， 120,484，申請(qǐng)人Silverstein)、圓窗導(dǎo)管 (例如，申請(qǐng)人Arenberg,美國(guó)專利號(hào)5， 421， 818; 5， 474， 529; 5,476,446; 6， 045， 528 ;或申請(qǐng)人Lenarz ，美國(guó)專利號(hào)6， 377， 849 ，其分案號(hào) 2002/0082554)，或微灌輸(例如，申請(qǐng)人Jukarainen等等，W02004/064912)。 這些技術(shù)進(jìn)一步包括使用相關(guān)的設(shè)備，插入到耳蝸管或耳蝸的其它部分(例 如，申請(qǐng)人Kuzma，美國(guó)專利號(hào))。別的施用技術(shù)是鼓室內(nèi)注射(有時(shí)也稱為"鼓室注射")，然而藥物是經(jīng)過鼓膜注射到中耳，然后特別地?cái)U(kuò)散到圓窗膜(詳
見例如Light J. and Silverstein H., Current Opinion in Otolaryngology & Head and Neck Surgery (12): 378-383 (2004)。可直接經(jīng)過鼓膜、經(jīng)過 通氣管插入到鼓膜或經(jīng)過鼓膜的開口 (例如，經(jīng)過鼓膜耳道瓣)，執(zhí)行該注射。 進(jìn)行注射的形成物的容量特別地在200和500微升之間。
不能通過前述的任意方法注射或灌注的形成物可通過借助外科設(shè)備在鼓 膜上設(shè)置的開口，沉積在標(biāo)靶的內(nèi)中耳接口組織上。
在內(nèi)耳疾病發(fā)作之前、期間或之后，可給藥該形成物。給藥的數(shù)量可各 不相同，其取決于給藥的方法、治療的持續(xù)期、治療主體的條件、內(nèi)耳疾病 的嚴(yán)重程度，并最終由主治醫(yī)生決定。治療持續(xù)期可在幾小時(shí)到幾天、幾周 或幾月之間，并可延長(zhǎng)為長(zhǎng)期治療。在長(zhǎng)期治療的例子中，可對(duì)形成物進(jìn)行 重復(fù)劑量的給藥?？墒┯玫幕衔镏委熡行?shù)量范圍在O. 1毫微克/小時(shí)到大 約100微克/小時(shí)。
治療有效的劑量定義為可抑制或降低治療個(gè)體的內(nèi)耳疾病。治療有效的 劑量也是可抑制或降低害痛個(gè)體內(nèi)耳疾病有效的數(shù)量。如上所述，治療有效 的劑量可各不相同，其取決于選擇的特定化合物、治療的特定條件和給藥的 方法。例如，低劑量的具有較高結(jié)合力的克他命比具有較低結(jié)合力的克他命 更有效。結(jié)果，優(yōu)選具有較高結(jié)合力的芳香基環(huán)己氨類劑。
治療的持續(xù)期也可各不相同，其取決于內(nèi)耳疾病的特定形式，即期望治 療的-急性、亞急性或慢性。例如，當(dāng)在一次治療停止后內(nèi)耳疾病不復(fù)發(fā)，優(yōu) 選較短的治療期并且也是足夠的。
通過以下的例子和附圖，可以更深入解釋本發(fā)明的更多細(xì)節(jié)，并且不會(huì) 限制本發(fā)明的范圍。
圖1示出隨時(shí)間變化S-(+)-克他命從5X和7. 5%的透明質(zhì)酸凝膠形式累 積釋放到磷酸鹽緩沖劑溶液。(A)在不存在速率限制膜的情況下，克他命迅 速地從凝膠中釋放；僅在1小時(shí)后，實(shí)現(xiàn)PBS中50%總的累積濃度。(B)使 用具有透析膜的弗朗茲細(xì)胞，以模擬圓窗膜并將克他命釋放到PBS中的速度 顯著地降低，使得釋放將使用大約3天。對(duì)于高濃度的透明質(zhì)酸，該釋放速率顯然更低。(c)當(dāng)在弗朗茲細(xì)胞中使用過濾膜時(shí)，克他命的釋放延長(zhǎng)到大 約60小時(shí)，具有更高濃度的透明質(zhì)酸凝膠將比較低濃度釋放更慢。
圖2示出從2. 8%透明質(zhì)酸形式釋放后外淋巴中的S-(+)-克他命的濃度， 其放置在豚鼠的圓窗龕內(nèi)，然后通過該圓窗擴(kuò)散到內(nèi)耳;在時(shí)間點(diǎn)1小時(shí)(1H)、 3小時(shí)(3H)、 8小時(shí)(8H)、 24小時(shí)(24H)和3天(3D),取樣外淋巴以確定 克他命的濃度。
圖3示出從0. 7%透明質(zhì)酸形式或20%的泊洛沙姆形式釋放后外淋巴中 的s-(+)-克他命的濃度，其放置在豚鼠的圓窗龕內(nèi)，然后通過該圓窗擴(kuò)散到 內(nèi)耳。在給藥后3小時(shí)和48小時(shí)，取樣外淋巴以確定克他命的濃度。
例l
方法和材料
以兩階段方法評(píng)價(jià)從透明質(zhì)酸凝膠形成物釋放NMDA受體拮抗劑克他命， 前面已示出其對(duì)治療耳蝸耳鳴的有效性。在第一階段，執(zhí)行試管實(shí)驗(yàn)以確定 形成物的釋放動(dòng)力。接著該結(jié)果作為動(dòng)物體內(nèi)研究的起點(diǎn)。
試管研究
在磷酸緩沖鹽(PBS)中制備濃度為5和7.5%的透明質(zhì)酸(Hylumed， Genzyme Corp.)。在8%時(shí)，示出由于其高粘性，很難處理該凝膠。在濃度2 % (重量/重量)相當(dāng)于73mM，鹽酸S-(+)-克他命溶解。為了評(píng)價(jià)藥物載體 因子的重要性，也測(cè)試0. 5%和2. 5%的濃度。在PBS中測(cè)量藥學(xué)活性劑的釋 放，PBS作為用于控制釋放研究的通常的接收器液體，在弗朗茲細(xì)胞 (PermeGear)中，不使用任何膜或使用過濾膜或透析膜(分光孔)。采用該膜 以模擬圓窗的速率限制膜。液體溫度保持在人體正常體溫。弗朗茲細(xì)胞的底 部腔室填滿5ml的PBS作為接收器液體。接收器液體包括用于連續(xù)攪動(dòng)的攪 動(dòng)棒。上部腔室填滿大約50mg的凝膠和細(xì)胞聚集物。在不同的時(shí)間點(diǎn)，進(jìn)行 部分提取(特別地lml)并使用UV分光光譜(Agilent 8453)進(jìn)行分析。測(cè) 量以215nm進(jìn)行的吸收，并使用30ml/mg cm消光系數(shù)，計(jì)算濃度。由于提取 的容量是未知的，因此不能確定總的釋放量。每次提取一部分，相同容量的 PBS就補(bǔ)充到弗朗茲細(xì)胞腔室。體內(nèi)研究
基于試管研究得結(jié)果，測(cè)試各種濃度的位于圓窗龕內(nèi)的透明質(zhì)酸
(Hylumed Medical,分子量?jī)砂偎氖f，Genzyme Corp.),并通過與圓窗膜 的自由移動(dòng)的干涉，測(cè)試它們對(duì)聽力的潛在影響。通過將電極設(shè)置在動(dòng)物的 圓窗膜(參考將電極設(shè)置在頸部肌肉)，測(cè)量聽覺神經(jīng)的復(fù)合動(dòng)作電位(CAP), 以測(cè)量有顏色的豚鼠中的聽力閾值。該參考電極和圓窗電極將焊接到固定在 頭骨上的插頭。為此并給藥2微升的凝膠形成物到圓窗龕內(nèi)，通過后面的耳 外科手術(shù)(背方法)打開麻醉的動(dòng)物的水皰。然后使用牙骨質(zhì)(Texton， SS White Manufacturing)再次將該水皰關(guān)閉。使用優(yōu)碘溶液消毒傷口，并將其 縫合。
第一，在人造外淋巴中，制備濃度5%的凝膠，其在前面的試管試驗(yàn)中己 進(jìn)行測(cè)試，然后使用前面已消毒的外科設(shè)備的尖端將其設(shè)置到豚鼠的圓窗龕 內(nèi)。龕內(nèi)凝膠的位置是可視的，例如凝膠是否溢出或保留在原地。在凝膠給 藥前己測(cè)試CAP，在給藥后再一次測(cè)量。由于凝膠的粘性很高，并且可觀察對(duì) 聽力閾值的短時(shí)效應(yīng)，接著，滴定降低凝膠的濃度(3.5%， 3.2%)，并最 終為2.8%，該濃度水平可使得凝膠方便地設(shè)置在圓窗龕內(nèi)，并很好地保留同 時(shí)未觀察到聽力喪失。每個(gè)濃度測(cè)試一個(gè)動(dòng)物。
第二步，使用豚鼠執(zhí)行藥動(dòng)力學(xué)研究，以便評(píng)估體內(nèi)克他命從透明質(zhì)酸 形成物擴(kuò)散，并穿過圓窗膜，進(jìn)入內(nèi)耳。在凝膠給藥后l小時(shí)、3小時(shí)、8小 時(shí)、24小時(shí)和72小時(shí)，對(duì)于一定濃度的藥用化合物，在外淋巴測(cè)試30只動(dòng) 物；在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)試6只動(dòng)物。
使用單劑量i.p.注射6X(Ceva sante animale)0. 3ml/kg的戊巴比妥， 麻醉動(dòng)物；使用后面的耳外科手術(shù)(背方法)打開右耳水皰。然后將2微升 的透明質(zhì)酸形成物(在人造外淋巴中2.8%Hylumed Sterile,分子量?jī)砂偎?十四萬；Genzyme Corp.)和濃度1 milliM的S-(+)-克他命(Sigma-Aldrich) 設(shè)置在內(nèi)耳的圓窗膜上。在前述的每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，在深麻醉(戊巴比妥 50mg/kg)的條件下，斬首一組動(dòng)物。從顳骨中取出右耳蝸并打開水皰。在基 部通過耳蝸造口 (直徑0.2mm)，將小孔鉆到耳蝸。使用消毒的玻璃微型吸液管(在其尖端直徑0.1mm)，從該孔中采樣10微升的外淋巴，該吸液管通過消 毒的導(dǎo)管連接到消毒的微量調(diào)節(jié)注射器。通過液色譜質(zhì)譜使用限量為 0. 2ng/ml(HPLC instrument: Perkin Elmer series 200: mass spectrometer detector: MSD Sciex API 4000 Applied Biosystems; column: Zorbax SB CN 50x2.1 mm 5 Mm-Agilent technologies), 分析樣本。 結(jié)果
試管研究
如圖1所示，透明質(zhì)酸相對(duì)較快地釋放克他命，例如僅通過幾小時(shí)。當(dāng) 采用速率限制膜時(shí)，釋放動(dòng)力學(xué)顯著改變，同時(shí)傳遞延長(zhǎng)到幾天。在7.5%的 較高濃度，與5%相比，透明質(zhì)酸較慢釋放克他命。
藥負(fù)載也顯著影響釋放動(dòng)力學(xué)。當(dāng)凝膠包括0.5%的克他命(重量)，弗 朗茲細(xì)胞中使用過濾器膜的藥用化合物釋放得與簡(jiǎn)單得鹽酸克他命溶液一樣 快。僅通過增加負(fù)載因子到2. 5%,釋放動(dòng)力學(xué)稍微減慢。開始得突釋相當(dāng)?shù)停?在第一小時(shí)僅釋放20%。因此，顯然應(yīng)盡可能使用較高負(fù)載因子延長(zhǎng)釋放動(dòng) 力學(xué)。
體內(nèi)研究
如圖2所示，在1小時(shí)內(nèi)可實(shí)現(xiàn)從2. 8%透明質(zhì)酸凝膠擴(kuò)散并穿過圓窗膜 進(jìn)入到內(nèi)耳的外淋巴中的最大濃度的克他命。接著，三天后觀察最后的計(jì)量 水平，濃度迅速降低。如下有幾點(diǎn)結(jié)論
1、 凝膠形成物有能力經(jīng)過3天釋放克他命到內(nèi)耳，盡管具有較低濃度的 透明質(zhì)酸(2. 8%比5 resp. 7. 5%)并且藥物負(fù)載大約低于試管實(shí)驗(yàn)73折疊(按 重量，0，027%比達(dá)2.5%)。因此，其是比較有吸引力的治療內(nèi)耳疾病的形成 物類型。
2、 當(dāng)與凝膠中初始的藥學(xué)活性劑的濃度相比，測(cè)量的外淋巴的克他命的 濃度顯然較低。這可解釋為克他命損失到中耳，并被黏膜吸收，無能的消極 擴(kuò)散過程推動(dòng)更多的藥用合成物進(jìn)入外淋巴，或快速地從外淋巴中清除藥物。 另外，采樣技術(shù)導(dǎo)致測(cè)量濃度向下的偏差，因?yàn)樽钚×恳残枰獙⑼饬馨筒糠?從內(nèi)耳中摘下，可能該部分并未分布有藥用合成物。例如，將稀釋的分布。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可知藥用化合物的濃度在耳蝸內(nèi)其基部是最高的，在中部 較低，在頂部區(qū)域最可能沒有(前庭階)。
3、給定的許多參數(shù)可影響從設(shè)置在圓窗龕內(nèi)的凝膠形成物釋放動(dòng)力學(xué)并 擴(kuò)散過圓窗龕，在試管模型中，非常有限地考慮它們的能力，以評(píng)估藥學(xué)活 性劑是否并且如何施用到內(nèi)耳從而治療內(nèi)耳疾病。因此需要使用合適的體內(nèi) 模型。
例2
盡管前面的實(shí)驗(yàn)探究了從相當(dāng)粘性的凝膠形成物釋放克他命的動(dòng)力學(xué)， 但其不能注射到中耳，接下來我們?cè)u(píng)估兩種可注射的凝膠形成物，其賦予了 更容易處理的有點(diǎn)。
方法和材料
通過接有針的lml注射器，對(duì)16只豚鼠給藥100微升的透明質(zhì)酸(Hylumed Sterile, Genzyme Corp.)或包含鹽酸S-(+)-克他命(Cristalia)的泊洛沙姆。 一半的動(dòng)物接受0.5%透明質(zhì)酸凝膠，該透明質(zhì)酸凝膠是依據(jù)歐洲藥典(參考 4005000)，制備于pH7.4的磷酸緩沖溶液中。在4攝氏度，使用磁性攪拌器 工作一夜，克他命將溶解于濃度為lmM的凝膠中。通過接有針的lml注射器， 對(duì)剩余的一半豚鼠注射20%泊洛沙姆凝膠。使用磁性攪拌器(500i"mp)，緩慢 將600mgLutro1粉末添加到3ml同樣的磷酸緩沖溶液中。接著，混合過程持 續(xù)16小時(shí)，以得到具有最小粘性的透明的溶液。對(duì)于透明質(zhì)酸凝膠，使用磁 性攪拌器工作一夜，克他命可溶解于濃度為lmM的泊洛沙姆溶液中。 一旦與 豚鼠的中耳組織接觸后，泊洛沙姆凝膠化并幾乎變成固體。
為了注射凝膠形成物，使用單劑量i.p.注射6%(Ceva sante animale)0.3ml/kg的戊巴比妥，麻醉動(dòng)物；使用后面的耳外科手術(shù)(背方法) 打開右耳水皰。然后使用牙骨質(zhì)(Texton， SS White Manufacturing)再次將 該水皰關(guān)閉。使用優(yōu)碘溶液消毒傷口，并將其縫合。3小時(shí)后，在深麻醉(戊 巴比妥50mg/kg)的條件下，斬首每凝膠形成物組4只動(dòng)物以采樣外淋巴，在 48小時(shí)后對(duì)剩余的動(dòng)物作同樣處理。在基部通過耳蝸造口 (直徑0.2mm)，將 小孔鉆到耳蝸。使用消毒的玻璃微型吸液管(在其尖端直徑0. lmm)，從該孔中采樣io微升的外淋巴，該吸液管通過消毒的導(dǎo)管連接到消毒的微量調(diào)節(jié)注 射器。通過液色譜質(zhì)譜使用限量為0. 2ng/ml (HPLC instrument: Perkin Elmer series 200; mass spectrometer detector: MSD Sciex API 4000 Applied Biosystems; column: Zorbax SB CN 50x2. 1 mm 5 Mm-Agilent technologies)， 分析樣本。 結(jié)果
如圖3所示，使用較小粘性的透明質(zhì)酸形成物不能顯著地改變給藥后3 小時(shí)和48小時(shí)時(shí)間點(diǎn)的外淋巴中的濃度。這示出可在內(nèi)耳中注射類似濃度的 形成物。圖3進(jìn)一步示出泊洛沙姆也提供有效的穿過圓窗膜的釋放，但是在3 小時(shí)時(shí)外淋巴中的濃度是透明質(zhì)酸濃度的兩倍。這可能是由于不同的釋放動(dòng) 力學(xué)或者是凝膠在圓窗龕內(nèi)的固化，使得其固定在原處，從而使得與圓窗膜 有更好的接觸。3小時(shí)后，大部分的液態(tài)透明質(zhì)酸形成物已從圓窗龕內(nèi)流出， 甚至從中耳空間流到咽喉。
權(quán)利要求
1、一種合成物，其特征在于，包括(i)藥學(xué)活性劑，其選自芳香基環(huán)己氨類或相應(yīng)的衍生物、相似物或藥學(xué)活性鹽；及(ii)具有生物相容性的聚合物或其組合。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成物，其特征在于，所述合成物是固態(tài)、半 固態(tài)、凝膠肽或液態(tài)。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的合成物，其特征在于，所述合成物是溶液、 懸浮液或熱固性凝膠。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的合成物，其特征在于，所述具有 生物相容性的聚合物選自天然產(chǎn)生的多糖，或人工合成的聚合物，或兩者的 混合物。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的合成物，其特征在于，所述具有生物相容性的 聚合物選自塊(共)聚合物。
6、 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的合成物，其特征在于，所述具有生物相容 性的聚合物選自透明質(zhì)酸、卵磷脂凝膠、(聚)丙胺酸衍生物、普朗尼克、 聚(乙烯)乙二醇、泊洛沙姆、脫乙酰幾丁質(zhì)、利多卡因葡聚糖、膠原質(zhì)、 纖維蛋白或相應(yīng)的混合物。
7、 根據(jù)權(quán)利要求4至6中任一項(xiàng)所述的合成物，其特征在于，所述具有 生物相容性的聚合物是可生物降解的。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的合成物，其特征在于，所述芳香 基環(huán)己氨類是麗DA拮抗劑。
9、 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的合成物，其特征在于，所述芳香基環(huán)己氨 類的通式I為-(I)其中，R" R2、 R3、 R4、 R5、 Re禾口 R7是H、 Cl、 F、 I、 CH3、 CH2CH3、 NH2、 0H、 C0NH2、 C0C1或C00H。
10、 根據(jù)權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)所述的合成物，其特征在于，所述藥 學(xué)活性劑是2-(2-氯苯基)-2-(甲氨基)-環(huán)已酮(克他命)，優(yōu)選(S)-克他命。
11、 根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的合成物，其特征在于，進(jìn)一步 包括的成分選自藥學(xué)可接受的工具、緩沖劑、賦性劑、添加劑和可增加中內(nèi) 耳接口組織結(jié)構(gòu)滲透性的物質(zhì)。
12、 根據(jù)權(quán)利要求ll所述的合成物，其特征在于，所述可增加中內(nèi)耳接 口組織結(jié)構(gòu)滲透性的物質(zhì)是組胺。
13、 一種藥劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的合成物。
14、 根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥劑，其特征在于，所述藥劑是藥物可釋放 的形成物。
15、 根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的藥劑，其特征在于，作為藥物可釋放 的所述藥劑經(jīng)過若干小時(shí)到若干星期釋放藥學(xué)活性劑。
16、 根據(jù)權(quán)利要求14至15中任一項(xiàng)所述的藥劑，其特征在于，當(dāng)將所 述藥劑送入中耳，所述藥劑可注射并可改變其粘性。
17、 根據(jù)權(quán)利要求13至16中任一項(xiàng)所述的藥劑，其特征在于，通過暴 露于化學(xué)試劑，可改變所述藥劑的釋放特性。
18、 根據(jù)權(quán)利要求13至17中任一項(xiàng)所述的藥劑，其特征在于，通過生 物粘附或機(jī)械特性，所述藥劑標(biāo)靶釋放到選擇的中內(nèi)耳接口組織結(jié)構(gòu)。
19、 根據(jù)權(quán)利要求13至18中任一項(xiàng)所述的藥劑，其特征在于，所述藥 劑形成為植入體。
20、 一種根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的合成物的用途，其特征在 于，制備或使用根據(jù)權(quán)利要求13至19所述的治療內(nèi)耳疾病的藥劑。
21、 根據(jù)權(quán)利要求20所述的合成物的用途，其特征在于，用于治療耳鳴、聽力喪失、內(nèi)耳炎或感染、自免疫性疾病、眩暈或梅尼埃病。
22、 根據(jù)權(quán)利要求21所述的合成物的用途，其特征在于，用于治療興奮毒性誘導(dǎo)的耳細(xì)胞惡化或老年化誘導(dǎo)的耳細(xì)胞惡化。
23、 一種治療遭受內(nèi)耳疾病的哺乳動(dòng)物的內(nèi)耳的方法，其特征在于，對(duì) 遭受內(nèi)耳疾病的哺乳動(dòng)物，給藥根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的合成物 或根據(jù)權(quán)利要求13至19的藥劑。
24、 根據(jù)權(quán)利要求23所述方法，其特征在于，通過插入到中耳，執(zhí)行給 藥所述合成物。
25、 根據(jù)權(quán)利要求23所述方法，其特征在于，通過灌注、注射或借助 外科設(shè)備沉積，執(zhí)行給藥所述合成物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種合成物，其包括(I)藥學(xué)活性劑，選自芳香基環(huán)己氨類化合物或相應(yīng)的衍生物、類似物或藥學(xué)活性鹽；以及(II)生物相容聚合物或者生物相容聚合物的組合。包含這些合成物的合成物或藥劑可用于預(yù)防和/或治療內(nèi)耳疾病，例如耳鳴。
文檔編號(hào)A61P27/16GK101309667SQ200580051703
公開日2008年11月19日 申請(qǐng)日期2005年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月28日
發(fā)明者托馬斯·邁耶 申請(qǐng)人:奧里斯醫(yī)學(xué)股份有限公司