專(zhuān)利名稱：新型水溶性Pt(Ⅱ)抗癌配合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，特別是涉及到一類(lèi)具有水溶性的鉑(II)抗癌配合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
卡鉑是繼順鉑后的第二代鉑抗癌藥，它的化學(xué)名為cis-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根·二氨合鉑(II)?？ㄣK的結(jié)構(gòu)中保留了抗癌的活性部分(NH3)2Pt2+，并引入親水性的1，1-環(huán)丁烷二羧酸根作離去基團(tuán)，溶解度大大改善，水溶性達(dá)到17mg/ml，比順鉑的溶解度(1mg/ml)高17倍，因此卡鉑的毒性，特別是腎毒性和消化道副作用，明顯低于順鉑，使卡鉑成為目前全世界公認(rèn)的最有效的抗癌藥物之一，已被WHO列為世界基本藥物，收入包括我國(guó)在內(nèi)的世界上大部分國(guó)家的藥典中，在臨床治療癌癥中得到廣泛的應(yīng)用[李以欣譯，癌癥化學(xué)治療的首選藥物，.國(guó)外醫(yī)藥-合成藥，生化藥制劑分冊(cè)，1998，19(2)89-101]。但是卡鉑的抗癌活性仍不高，同時(shí)還存在較大的毒副作用如骨髓抑制等。因此設(shè)計(jì)和合成新型的鉑類(lèi)抗癌藥物是目前抗癌藥研究的熱點(diǎn)[劉偉平，高文桂.治療癌癥的鉑類(lèi)金屬配合物，藥學(xué)進(jìn)展，2001，25(1)27-31]。盡管近年來(lái)也推出了一些新的鉑類(lèi)抗癌藥，如奈達(dá)鉑(Nadaplatin)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、舒鉑(Eptaplatin)，樂(lè)鉑(Loplatin)，但它們的水溶性均低于卡鉑，綜合療效也不如卡鉑并且毒副作用比卡鉑大[尤啟冬，茍少華，抗腫瘤鉑類(lèi)配合物的研究進(jìn)展，藥物化學(xué)進(jìn)展，2003，2161-187]，所以研制水溶性好、活性高、毒性低的鉑類(lèi)抗腫瘤配合物是鉑類(lèi)抗癌藥物的發(fā)展方向之一[Ernest Wong，Christen M G，Current Status of Platinum-based AntitumorDrugs，Chem.Rev.，1999，992451-2466]。

發(fā)明內(nèi)容
通過(guò)對(duì)前人的研究結(jié)果的分析和總結(jié)以及對(duì)卡鉑化學(xué)結(jié)構(gòu)的深入認(rèn)識(shí)，我們認(rèn)為卡鉑之所以有較好的臨床療效是因?yàn)榭ㄣK具有阻斷癌細(xì)胞DNA復(fù)制較理想的化學(xué)構(gòu)造。為此，本發(fā)明以卡鉑為先導(dǎo)化合物，通過(guò)對(duì)卡鉑的離去基團(tuán)1，1-環(huán)丁烷二羧酸根和載體基團(tuán)進(jìn)行化學(xué)修飾，設(shè)計(jì)和合成一類(lèi)以3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根為離去基團(tuán)、以2-取代基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷為載體基團(tuán)的新型抗癌鉑(II)配合物，這類(lèi)配合物水溶性好、抗癌活性高、毒副作用低，具有重大的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。
本發(fā)明的鉑(II)配合物，化學(xué)名為cis-[2-取代基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷·3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根·合鉑(II)]，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下 R＝CH3，C2H5，CH(CH3)2本發(fā)明鉑化合物的制備方法是以K2PtCl4為起始原料，加入KI，轉(zhuǎn)化成K2PtI4，與載體基團(tuán)A2(A2＝2-取代基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷)反應(yīng)，制備出相應(yīng)的cis-[Pt(II)A2I2]中間體，再在水中與3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀等摩爾定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后過(guò)濾分離AgI，母液濃縮和冷凍干燥得到粗品；或cis-[Pt(II)A2I2]先與Ag2SO4在水中等摩爾定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后過(guò)濾分離AgI，母液與等摩爾3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸鋇定量反應(yīng)，過(guò)濾分離BaSO4，母液濃縮和冷凍干燥得到粗品。粗品經(jīng)水∶乙醇＝1∶1的體系中重結(jié)晶得到本發(fā)明的配合物純品。
本發(fā)明的制備方法具有產(chǎn)率高、產(chǎn)品純、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，制備所涉及的化學(xué)反應(yīng)為 本發(fā)明的化合物其特征在于它的溶解度大于卡鉑、抗癌活性明顯高于卡鉑、毒副作用比卡鉑小，可以用于臨床治療癌癥。本發(fā)明的化合物可以制成兩種常規(guī)的制劑—凍干粉和注射液在臨床中使用。
對(duì)于發(fā)明的配合物的抗癌作用將發(fā)明的配合物溶于水中，以卡鉑作對(duì)照采用SRB方法測(cè)定不同濃度(μg/ml)的配合物對(duì)NCI-H460(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)，HT-29(人結(jié)腸癌細(xì)胞)Ls174t(人結(jié)腸癌細(xì)胞)增殖的抑制程度，計(jì)算抑制率，根據(jù)抑制率采用Logit方法計(jì)算IC50(μg/ml)，結(jié)果表明所發(fā)明的配合物L(fēng)LC-0601的抗癌活性明顯高于卡鉑。
各濃度下配合物對(duì)Ls-174t細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率(％)

各濃度下配合物對(duì)H46O細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率(％)

各濃度下配合物對(duì)HT29細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率(％)

對(duì)于發(fā)明的配合物的急性毒性昆明種小鼠，體重20-22克，雌、雄各半，購(gòu)自上海斯萊克試驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)SCXK(滬)2004-0005。LLC-0601用5％葡萄糖溶液配制。小鼠單次靜脈注射不同劑量的LLC-0601。給藥后觀察死亡率及毒性情況，共觀察14天，根據(jù)死亡率應(yīng)用Bliss方法計(jì)算LD10，LD50，LD90。

試驗(yàn)測(cè)得所發(fā)明的配合物L(fēng)LC-0601注射給藥的LD50＝372.7mg/kg(95％的可信度305.2～454.9mg/kg)，相同的實(shí)驗(yàn)測(cè)得卡鉑注射給藥的LD50＝130mg/kg，因此LLC-0601急性毒性比卡鉑明顯低。
實(shí)施方式(1)3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀的制備先按文獻(xiàn)報(bào)道的方法[Inorganica Chimica Acta，2004，357，4452-4466]制備3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸(mp 151℃-152℃)。取3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸10g，溶于100ml的水中，用1mol/L NaOH調(diào)節(jié)PH＝6-7，加入130mmol、100mlAgNO3(過(guò)量5％)，得到3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀沉淀，過(guò)濾收集，用水、乙醇洗滌后在60-70℃下真空干燥4小時(shí)，得到21.7g 3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀，產(chǎn)率94.2％。
(2)cis-[Pt(II)A2I2]中間體的制備按文獻(xiàn)報(bào)道的工藝路線[J.Med.Chem.，1994，37，1471-1485]合成載體基團(tuán)A2[A2＝2-甲基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷；2-乙基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷；2-異丙基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷]。
稱取5g K2PtCl4(12mmol)溶于50ml水中，過(guò)濾除去不溶物，在60℃下，緩慢加入含KI 12g(72mmol)的水溶液50ml，避光反應(yīng)1小時(shí)后，滴加等摩爾的載體基團(tuán)A2(12mmol)，得到黃色沉淀，過(guò)濾收集，用水、乙醇洗滌后在60-70℃下真空干燥4小時(shí)，分別得到cis-[Pt(II)A2I2]6.7g(R＝CH3)、7.1g(R＝C2H5)7.0g(R＝CH(CH3)2)，產(chǎn)率92-95％。
(3)cis-[2-異丙基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷·3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根·合鉑(II)](LLC-0601)的合成取5g的cis-[Pt(II)A2I2](R＝CH(CH3)2)，懸浮100ml水中，加入等摩爾量的1-環(huán)丁烷二羧酸銀3g，在45℃下攪拌反應(yīng)15小時(shí)，檢查反應(yīng)完全后過(guò)濾除去AgI沉淀，母液減壓濃縮到20ml，冷凍干燥得白色晶體，在水∶乙醇＝1∶1的體系中重結(jié)晶提純得到精品3.2克，產(chǎn)率76％，水溶性為40mg/ml(室溫)。
特征結(jié)構(gòu)參數(shù)為<1>元素分析C 31.7％，N 5.34％，H 4.61％，Pt 37.2％與理論值C 31.9％，N 5.31％，H 4.55％，Pt 37.0％一致。<2>FAB+-MS(m/e，RI)527(M+，100％)，368(M+-C6H6O5，20％)，368(A2+，60％)。<3>IR(cm-1，KBr壓片)3225(s，vNH3)，2937(w，vCH2)，1623(ws vas(COO))，1392(s vs(COO))，1094(m，vC-OH)。這些參數(shù)符合所發(fā)明的配合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
(4)cis-[2-乙基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷·3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根·合鉑(II)](LLC-0602)的合成取3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸10g，溶于100ml的水中，用1mol/L NaOH調(diào)節(jié)PH＝6-7，加入65mmol、100ml BaCl2(過(guò)量5％)，得到3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸鋇沉淀，過(guò)濾收集，用水、乙醇洗滌后在60-70℃下真空干燥4小時(shí)，得到16.9g 3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸鋇，產(chǎn)率91.8％。
取5g的cis-[PtA2I2](R＝C2H5)，懸浮100ml水中，加入等摩爾量的硫酸銀2.58g，在45℃下閉光攪拌反應(yīng)8小時(shí)，檢查反應(yīng)完全后過(guò)濾除去AgI沉淀。在母液中再加入等摩爾量的3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸鋇2.44g，再在45℃下攪拌反應(yīng)6小時(shí)，檢查反應(yīng)完全后過(guò)濾除去BaSO4沉淀，母液減壓濃縮到15ml，冷凍干燥得白色晶體，在水∶乙醇＝1∶1的體系中重結(jié)晶提純得到精品3.3克，產(chǎn)率80％，水溶性大于50mg/ml(室溫)。
特征結(jié)構(gòu)參數(shù)為<1>元素分析C 30.2％，N 5.41％，H 4.31％，Pt 37.8％與理論值C 30.4％，N 5.45％，H 4.29％，Pt 38.0％一致。<2>FAB+-MS(m/e，RI)514(M+，100％)，符合所發(fā)明的配合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
權(quán)利要求
1.化學(xué)名為cis-[2-取代基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷·3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根·合鉑(II)]的鉑(II)配合物，取代基為甲基或乙基或異丙基，具有下列化學(xué)結(jié)構(gòu)式 R＝CH3，C2H5，CH(CH3)2
2.權(quán)利要求1配合物的制備方法，包括下列步驟和反應(yīng)以cis-[PtA2I2]為原料(A2＝2-取代基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷)，在水中與3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀等摩爾定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后過(guò)濾分離AgI，母液濃縮和冷凍干燥得到本發(fā)明的化合物的粗品，粗品經(jīng)水∶乙醇＝1∶1的體系中重結(jié)晶得到純品。
3.權(quán)利要求1配合物的制備方法，包括下列步驟和反應(yīng)以cis-[PtA2I2]先與Ag2SO4在水中等摩爾定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后過(guò)濾分離AgI，母液與等摩爾3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸鋇定量反應(yīng)，過(guò)濾分離BaSO4，AgI，母液與等摩爾3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸鋇定量反應(yīng)，過(guò)濾分離BaSO4，母液濃縮和冷凍干燥得到本發(fā)明的化合物的粗品，粗品經(jīng)水∶乙醇＝1∶1的體系中重結(jié)晶得到純品。
4.權(quán)利要求1配合物的用途權(quán)利要求1的化合物具有水溶性好、抗癌活性高、毒性低的特性，可以制成凍干粉或注射液，用于臨床治療癌癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型的水溶性鉑(Ⅱ)抗癌配合物cis－[2－取代基－(4R，5R)－4，5－雙(氨甲基)－l，3－二氧環(huán)戊烷·3－羥基－1，1－環(huán)丁烷二羧酸根·合鉑(Ⅱ)]，取代基為甲基或乙基或異丙基。它的制備是以cis－[PtA
文檔編號(hào)A61K9/08GK1821253SQ20061001075
公開(kāi)日2006年8月23日 申請(qǐng)日期2006年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月17日
發(fā)明者樓麗廣, 劉偉平, 諶喜珠, 侯樹(shù)謙, 李永年 申請(qǐng)人:昆明貴研藥業(yè)有限公司