專利名稱：高純度竹紅菌甲素的制備方法
高純度竹紅菌甲素的制備方法技米領(lǐng)域本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是從竹紅菌或竹黃菌中藥材中提取 高純度竹紅菌甲素的制備方法。
技術(shù)背景竹紅菌甲素((hypocrdlineA， HA)是從竹紅菌或竹黃菌中藥材中提取 并通過分離、結(jié)晶、洗滌、萃取、干燥等工藝制得的有效藥用物質(zhì)，其分子結(jié) 構(gòu)式見附圖1。竹紅菌和竹黃菌是我國一種傳統(tǒng)的寄生性藥用真菌，通常寄生 在竹的幼莖、細嫩桿、枝上，是竹桿內(nèi)分泌液千燥后的塊狀，分布于云南、 江蘇、浙江、安徽、福建、江西、湖北、湖南以及亞洲的日本等地。它具有 清熱化痰、清心定驚、舒筋活絡(luò)、祛痛散淤等功效，民間多用竹紅菌或竹黃 菌浸酒，用于治療風濕性關(guān)節(jié)炎、坐骨神經(jīng)痛、腰肌勞損、跌打損傷、胃氣 痛、小兒驚風、急性肝炎等等。近年來，國內(nèi)外學者對竹黃的生物學特性、 化學成分、臨床應(yīng)用等方面進行了一系列的研究，取得了一些進展，竹黃獨 特的生理生化性質(zhì)在醫(yī)藥、食品領(lǐng)域越來越受到人們的關(guān)注。為了全面評價 竹紅菌甲素的藥理作用以及在醫(yī)藥生物領(lǐng)域的應(yīng)用前景，現(xiàn)就竹紅菌甲素理 化特性、藥理作用等方面作一簡要綜述。1.理化特性化學分析表明，竹黃中含有多種單體化合物。王景祥等人從福建仙游縣 出產(chǎn)的竹黃中，經(jīng)醇提、硅膠柱層析分離等技術(shù)，分離鑒定了 4種晶體，分 別是甘露醇、硬脂酸、竹紅菌甲素(hypocrelline A， HA)、竹紅菌乙素 (hypocrellineB， HB)。胡曉等人以四川峨眉山出產(chǎn)的野生竹黃為原料，分別 以石油醚、乙酸乙酯為溶媒浸提，通過硅膠柱層析和制備薄層層析分離，分 離鑒定出5種單體化合物，分別是竹紅菌甲素、乙素、六孢素、硬脂酸乙酯 和硬脂酸。KIShi等人采用甲醇浸提、柱層析、制備性薄層析分離等技術(shù)成功 地從野生竹黃中分離出了丙素(hypocrdlineC， HC)。
在竹黃的眾多活性成分中，竹紅菌素的應(yīng)用前景是最為引人矚目。它是 竹黃的主要有效成分之一，也是竹黃中紅色色素部分，是多種茈醌類衍生物 的混合物。而竹紅菌甲素是分布于我國云南麗江這一特定地域的竹紅菌的主 要成分，它易溶于氯仿、丙酮、乙醚，部分溶于乙醇、甲醇，微溶于石油醚， 不溶于水。醇溶液顯鮮紅色，在紫外燈下觀察顯櫻紅色熒光，在堿溶液中顏 色由紅變綠。作為一種重要的天然光敏色素，竹紅菌甲素在醫(yī)藥和食品領(lǐng)域 有著巨大的潛在應(yīng)用價值。2.藥理作用現(xiàn)代醫(yī)學研究表明，竹黃的藥用價值主要體現(xiàn)在抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗 腫瘤以及毒副作用等方面。在1980年左右，云南省微生物研究所和云南省第 一人民醫(yī)院的科學工作者們就將竹紅菌素用于外陰白色病變和軟化疤痕疙瘩 (肥厚性癍痕)的治療，進而推廣到光療皮膚淀粉樣變苔癬、牛皮癬、頭癬 等皮膚病。而后協(xié)和醫(yī)院皮膚科又成功地將之用于光療色素缺乏刻皮膚白癲 瘋的治療。作為一種分布于自然界生物中的光敏色素，竹紅菌甲素還具有良好的光 敏殺傷腫瘤細胞和抑制愛滋病毒HIV的作用，這也是眾多學者對于竹黃這一 傳統(tǒng)藥用真菌表現(xiàn)出濃厚興趣的主要原因。傅乃武等認為含有竹紅菌素相同 骨架的不同成分都具有不同程度的抗癌活性，無論對體外腫瘤或S180癌細胞 接種小鼠產(chǎn)生的實體腫瘤都有明顯的抑制作用。他們在HA對腫瘤細胞光動 力學作用和體內(nèi)代謝的研究中，認為HA能夠合并照光，可使肝癌細胞DNA 斷鏈，DNA修復緩慢，對HeLa細胞有明顯的殺傷作用。王景祥等對HB進 行了小鼠肝癌H22的抑制作用研究，結(jié)果表明小鼠igHB150mg / kg，作用7d， 在光照下對鼠移植瘤株H22有明顯的抑制作用，抑瘤率為34.0% —41.6% 。朱麗青等采用熱板法和扭體法對小鼠進行鎮(zhèn)痛實驗，用大鼠足癰腫脹法 和小鼠耳腫脹法進行抗炎實驗，結(jié)果均表明竹黃中的主要活性成分竹紅菌甲 素具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛的功效。這為臨床用于治療胃氣痛、風濕性關(guān)節(jié)炎、 跌打損傷以及坐骨神經(jīng)痛等疾病提供了藥理基礎(chǔ)，這也是我國民間用于治療 類似疾病取得較好療效的原因所在。竹紅菌甲素作為一種光動力學物質(zhì)，具有很強的抗菌活性。萬象義等用 紙片法對竹紅菌甲素進行了抑菌實驗，結(jié)果表明竹紅菌甲素在光照下可以抑 制某些微生物優(yōu)其是革蘭氏陽性菌)的生長，不同光源、不同光照強度對其 抑菌強度均有影響。松枝澄等則認為竹黃的一些活性成分(竹紅菌甲素)可 以作為植物素抑制某些菌類的代謝.其中機理可能與細胞類脂過氧化機制有 關(guān)。3.在食品生物領(lǐng)域的應(yīng)用竹紅菌甲素是竹紅菌和竹黃菌中主要活性成分，就是竹黃的紅色色素部 分，可溶于丙酮、乙醇和氯仿等有機溶劑，色澤鮮紅且富有保健功能，所以 它作為一種脂溶性食品添加劑(食用色素)，具有獨特的優(yōu)點和廣闊的應(yīng)用前 景?？軏沟葘κ惺壑顸S浸泡液利用制備性薄層層析、重結(jié)晶等技術(shù)進行紅色 素的提取與鑒定，并對成色物質(zhì)竹紅菌甲素和竹紅菌乙素進行了熱穩(wěn)定性和 酸堿穩(wěn)定性的研究，認為它能在酸性至pH8.2范圍內(nèi)保持鮮紅的色澤，且具 有較強的熱穩(wěn)定性。廣泛地在醫(yī)藥、食品、農(nóng)藥等領(lǐng)域得到應(yīng)用，造福人類。然而，現(xiàn)有的從竹紅菌或竹黃菌中提取竹紅菌甲素的方法，所提取得到 的竹紅菌甲素的純度不高，造成資源的浪費和影響藥物的療效。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的提供一種從竹紅菌或竹黃菌中分離、純化制得高純度竹紅 菌甲素(純度大于90.0%)的制備方法。本發(fā)明高純度竹紅菌甲素(Hypocrellin A)的分離、提取制備方法按以 下步驟提取1) 粗提以竹紅菌藥材為原料，將竹紅菌藥材粉碎成粗粉；加2 10倍 量75% 95%乙醇熱回流0. 5 4小時，放冷至室溫，傾出上清夜，藥渣重復上 述回流提取2次，合并前后3次的乙醇提取溶液。2) 濃縮、自然結(jié)晶將乙醇提取液分別轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中,減壓濃縮回 收乙醇至原體積的2/3時，室溫靜置，使其自然結(jié)晶。
3) 重結(jié)晶傾去母液,加乙醇(或丙酮)將結(jié)晶溶解后，室溫靜置使其重 結(jié)晶。4) 精洗結(jié)晶的晶體用20 8(TC的純化水按1: 5 1: 20比例洗滌3次； 棄上清液，盡量傾干水份；5) 再用20 8(TC的60 90石油醚洗滌，直至石油醚溶液基本無色，真空 干燥即得純品，純度大于95%。將上述高效液相色譜(HPLC)分析采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充 劑；以乙腈甲醇2%醋酸(9: 2: 1)為流動相；檢測波長為465nm，流速 為0.8ml/min;柱溫為25"C;進行含量測定，結(jié)果見附圖2。用本發(fā)明的提取物竹紅菌甲素可用于制成軟膏劑、酊劑、氣霧劑、片劑、 膠囊劑和注射劑等多種劑型，以及食品添加劑等，應(yīng)用范圍廣泛。本發(fā)明的高純度竹紅菌甲素的制備方法優(yōu)點是(l)制備方法操作性強， 提取率髙(〉90%); (2)使用的溶劑價廉易得，對環(huán)境無污染；(3)按本發(fā)明的制 備方法制得純度大于99. 6%純品，用于制備藥物制劑的標準品，用于該藥物制 劑有效成分的質(zhì)量控制和分析檢測。


圖l是竹紅菌甲素分子結(jié)構(gòu)式；圖2是本發(fā)明提取的竹紅菌甲素HPLC圖譜。
具體實施方式
實施例1:1) 粗提取竹紅菌藥材l,OKg，粉碎成粗粉；加10Kg95X乙醇熱回流l 小時，放冷至室溫，傾出上清夜,藥渣重復上述回流提取2次，合并前后3次的 乙醇提取溶液；2) 濃縮、自然結(jié)晶將乙醇提取液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，減壓回收乙醇至 原體積的2/3時,室溫靜置，使其自然結(jié)晶。3) 重結(jié)晶傾去母液,加乙醇將結(jié)晶溶解后，室溫靜置使其重結(jié)晶。4) 精洗取結(jié)晶的晶體10克，加45"的純化水200毫升洗滌3次；棄上 清液，盡量傾干水份；5)再用45'C的石油醚洗滌,直至石油醚溶液幾乎無色,真空干燥即得純品 純度大于95%。高效液相色譜(HPLC)分析采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 乙腈甲醇2%醋酸(9: 2: l)為流動相;檢測波長為465nm，流速為0. 8ml/min; 柱溫為2-5。C;進行含量測定。實施例2:1) 粗提取竹紅菌藥材l.OKg，粉碎成粗粉；加4Kg95X乙醇熱回流3 小時，放冷至室溫，傾出上清夜，藥渣重復上述回流提取2次，合并前后3次的 乙醇提取溶液；2) 濃縮、自然結(jié)晶將乙醇提取液分別轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，減壓回收乙醇至原體積的2/3時，室溫靜置，使其自然結(jié)晶。3) 重結(jié)晶傾去母液,加乙醇將結(jié)晶溶解后，室溫靜置使其重結(jié)晶。4) 精洗取結(jié)晶的晶體10克，加8(TC的純化水100毫升洗滌3次；棄上 清液，盡量傾干水份；5) 再用70'C的石油醚洗滌,直至石油醚溶液基本無色，真空干燥即得純品， 純度大于99%。高效液相色譜(HPLC)分析:采用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙 腈甲醇2%醋酸(9: 2: 1)為流動相;檢測波長為465nm,流速為0. 8ml/min; 柱溫為25。C;進行含量測定。
權(quán)利要求
1、一種高純度竹紅菌甲素的制備方法，其特征在于按以下步驟進行1)粗提以竹紅菌藥材為原料，將竹紅菌藥材粉碎成粗粉；加2～10倍量75％～95％乙醇熱回流0.5～4小時，放冷至室溫，傾出上清夜，藥渣重復上述回流提取2次，合并前后3次的乙醇提取溶液；2)濃縮、自然結(jié)晶將乙醇提取液分別轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，減壓回收乙醇至原體積的2/3時，室溫靜置，使其自然結(jié)晶；3)重結(jié)晶傾去母液，加乙醇將結(jié)晶溶解后，室溫靜置使其重結(jié)晶；4)精洗結(jié)晶的晶體用20～80℃的純化水按1∶5～1∶20比例洗滌3次，棄上清液，盡量傾干水份；5)再用20～80℃的石油醚洗滌，直至石油醚溶液基本無色，真空干燥即得純品，純度大于95％。
全文摘要
本發(fā)明是一種高純度竹紅菌甲素的制備方法。是從竹紅菌或竹黃菌中藥材中提取并通過分離、結(jié)晶、洗滌、萃取、干燥等工藝及產(chǎn)品純度分析得到高純度竹紅菌甲素(純度大于90.0％)的制備方法，本發(fā)明的提取物可分別制成軟膏劑、酊劑、氣霧劑、片劑、膠囊劑和注射劑等多種劑型，應(yīng)用范圍廣泛。本發(fā)明的制備方法操作性強，提取率高(＞90％)；使用的溶劑價廉易得，對環(huán)境無污染。
文檔編號A61P17/06GK101113130SQ20061001107
公開日2008年1月30日 申請日期2006年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月24日
發(fā)明者嚴家定, 凡 羅, 項迎春 申請人:昆明振華制藥廠有限公司