專(zhuān)利名稱：：20(r)-人參皂苷組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及--種由20(R)—人參皂苷為活性成分組合而成的組合物，以及這種組合物作為藥品或保健品的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：癌癥是危害人類(lèi)健康的三大疾病之一，其發(fā)病率及死亡率在某些國(guó)家己上升到第"位。因此研制抗癌藥物是廣大醫(yī)藥工作者面臨的重大課題之一。目前幵發(fā)成功的很多抗癌藥物，雖然治療效果較好，但是由于藥物本身的毒副作用太大，導(dǎo)致臨床應(yīng)用受到限制。因此，目前抗癌藥物的研究，一方面繼續(xù)尋找殺死癌細(xì)胞的藥物以增強(qiáng)抗癌藥物的療效，另一方面要尋找以降低抗癌藥物的毒副作用為主要功效的抗癌輔助藥物。腫瘤治療一般分為外科手術(shù)、放射療法、化學(xué)療法3種。腫瘤化療的目的是通過(guò)化學(xué)藥物殺傷腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的死亡或阻止其增殖，但是絕大多數(shù)化學(xué)藥物的細(xì)胞毒性缺乏特異性，它在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，無(wú)選擇的殺傷正常細(xì)胞特別是造血組織細(xì)胞，正常細(xì)胞的損傷常導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥。此外并非所有腫瘤細(xì)胞都對(duì)化療敏感，即使對(duì)化療敏感的腫瘤細(xì)胞，在停止用藥后也易復(fù)發(fā)。由于腫瘤分化異常在腫瘤發(fā)病學(xué)上占有重要地位，所以有學(xué)者提出使用藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的異常分化進(jìn)行逆轉(zhuǎn)，即將腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)分化為正常細(xì)胞或近似正常細(xì)胞，作為抗腫瘤藥物研究的新途徑，而從天然化合物中尋找分化誘導(dǎo)劑成為學(xué)者們研究的熱點(diǎn)。腫瘤細(xì)胞的死亡既可以通過(guò)壞死(necrosis)又口丁以通過(guò)凋亡(ap叩tosis)的形式進(jìn)行，與壞死不同，凋亡的細(xì)胞維持完整的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能，細(xì)胞解體后形成凋亡小體，不引起周?chē)M織炎癥反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡成為惡性腫瘤化療的新目標(biāo)，越來(lái)越多的研究結(jié)果使人們從誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡角度設(shè)計(jì)新的抗腫瘤治療方案，以期提高化療效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于針對(duì)已有技術(shù)存在的不足，提供一種能增強(qiáng)抗癌藥物療效、降低抗癌藥物毒性、主要由20(R)—人參皂苷化合物組成的組合物。本發(fā)明的另一目的在于提供這種藥物組合物在制備預(yù)防和治療放化療引起的白細(xì)胞降低的抗癌輔助藥物及提高機(jī)體免疫力的藥品或保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的20(R)—人參皂苷組合物主要由以下重量百分比的成分組成20(R)—人參皂苷Rg..;3060%、20(R)—人參皂苷Rh21040%、人參皂苷mio3o%，所屬述的人參皂苷in為20(r)—原人參二醇-3-o-e-吡喃木糖基(1一2)e-D-吡喃葡萄糖基(i~^~2)0-D-吡喃葡萄糖苷。在上述組合物中還可以含有重量百分比的20(S)—人參皂苷Rg:,210%，20(S)—人參皂他2210%。但20(R)—人參皂苷Rg3、20(R)—人參皂苷Rh2和人參皂苷III的總含量應(yīng)》60%。本發(fā)明所述的20(R)—人參皂苷Rg3、20(R)—人參皂苷Rh2、人參皂苷ni的結(jié)構(gòu)式如下20(R)—人參皂苷Rg3結(jié)構(gòu)式為R1:—glu—o—glu;R2:—CH,;R:i:—OH。20(R)—人參皂苷Rh2結(jié)構(gòu)式為R1:—glu;R2:—CH:,;R3:—0H。人參皂苷III結(jié)構(gòu)式為:R1:一glu—o—glu—o—xyl;R2:—CH3;R,:—0H。20(R)—人參皂苷Rg3具有抗腫瘤、抑制新生血管生成、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡、抗炎、提高荷瘤小鼠的免疫功能等作用，其抗腫瘤活性比它的同分異構(gòu)體20(S)—人參皂苷Rg3強(qiáng)。人參皂苷Rh2可以通過(guò)誘導(dǎo)分化或調(diào)亡，抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖與生長(zhǎng)，并對(duì)正常細(xì)胞的毒性甚低。藥理學(xué)研究表明人參皂苷III對(duì)S180瘤小鼠具有明顯抑制作用；能明顯提高腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活性；明顯提高NK細(xì)胞活性以及明顯提高免疫活性(T細(xì)胞CD4/CD8比值提高)。本發(fā)明具有增強(qiáng)抗癌藥物療效；降低抗癌藥物毒性；預(yù)防和治療放化療引起的白細(xì)胞降低及提髙機(jī)體免疫力的功能。由于組合物中各化學(xué)成分骨架相同使得各成分在抑制多種腫瘤細(xì)胞方面具有相似的作用機(jī)理，不會(huì)產(chǎn)生排斥作用。該組合物由于具有較好的提高免疫活性，與其它抗癌藥物聯(lián)合應(yīng)用能起到減毒增效的作用。本發(fā)明提供的以20(R)—人參皂苷Rg3，Rh2和人參皂苷III為主要成分的組合物作為藥品及保健品在用于上述任一用途時(shí)，其使用劑量范圍為21000mg，優(yōu)選劑量范圍為5500mg。本發(fā)明提供了以20(R)—人參皂苷Rg3，Rh2和人參皂苷III為主要成分的組合物作為藥品及保健品可以以口服或注射途徑給藥，注射給藥可以為靜脈注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射或瘤體內(nèi)注射。口服制劑可以為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、軟膠囊、懸浮液、滴丸；注射用制劑可以為凍干粉針、注射用靜脈乳劑、注射劑、輸液?？诜苿﹥?yōu)選片劑、膠囊劑、顆粒劑；注射用制劑優(yōu)選凍干粉針、注射用靜脈乳劑、注射劑。本發(fā)明所提供的各種藥物劑型均可以以藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。本發(fā)明的藥效學(xué)試驗(yàn)本發(fā)明組合物體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)1、藥物及試劑組合物由昆明滇虹藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)20050201，含量為20(R)—人參皂苷Rg:,61.2克，20(R)—人參皂苷Rh239.75克和人參皂苷III26.25克(實(shí)施例l)。批號(hào)20050205，含量為20(R)—人參皂苷Rg:J5.3克，20(R)—人參皂苷Rh229.25克和人參皂苷I1124.75克(實(shí)施例2)。批號(hào)20050208，20(R)—人參皂苷Rg力.585克，20(R)—人參皂苷Rh20.155克和人參皂苷IIIO.195克(實(shí)施例3)。環(huán)磷酰胺，上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20050205。2、動(dòng)物健康ICR小鼠，1822g，每批實(shí)驗(yàn)采用同一性別。由云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。合格證號(hào)滇實(shí)動(dòng)證子2004009號(hào)。3、瘤種S180(小鼠肉瘤)引自中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所。4、實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)方法(徐叔云等主編，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，第三版，北京人民衛(wèi)生出版社，2002:175979)，取接種后第7天生長(zhǎng)良好的瘤種，用生理鹽水調(diào)整腫瘤細(xì)胞懸液至8X10cells/L，接種于小鼠右側(cè)腋皮下(O.2ml/只)。次日，將動(dòng)物隨機(jī)分組，每組10只。各組小鼠均按O.lml/10g體重灌胃給藥(牛理鹽水配制)，連續(xù)7天。末次給藥24小時(shí)后，頸椎脫臼處死動(dòng)物，取瘤塊，胸腺和脾，稱重并計(jì)算抑瘤率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表l組合物對(duì)小鼠S180肉瘤生長(zhǎng)的抑制作用(mean土SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>卞<0.05，，<0.01與溶劑對(duì)照組比較三個(gè)實(shí)驗(yàn)例結(jié)果表明，本發(fā)明提供的20(R)—人參皂苷Rg:i，Rb和人參皂苷111的含量比在3060%:1040%:103(m范圍內(nèi)對(duì)S180肉瘤生長(zhǎng)呈劑量依賴性抑制作用，給藥組與溶劑對(duì)照組(NS)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。高、中、低三個(gè)劑量組抑瘤率均在35%以上，已經(jīng)顯示突出的抑瘤作療效。陽(yáng)性對(duì)照(環(huán)磷酰胺)組抑瘤率高達(dá)68%，但同時(shí)對(duì)免疫器官(脾、胸腺指數(shù))有明顯的抑制作用，對(duì)比之下"組合物"各劑量組未見(jiàn)對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制作用。本發(fā)明涉及上述組合物在制備增強(qiáng)抗癌藥物療效、降低抗癌藥物毒性的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及上述組合物在制備治療放化療引起的白細(xì)胞降低的抗癌輔助藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及上述組合物在制備預(yù)防放化療引起的白細(xì)胞降低的抗癌輔助藥物和保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及上述組合物在制備治療放化療引起的白細(xì)胞降低的抗癌輔助藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及上述組合物在制備提高機(jī)體免疫力的藥品或保健品中的應(yīng)用。具體實(shí)施例方式組合物的來(lái)源及人參皂苷III結(jié)構(gòu)鑒定三七葉苷經(jīng)酸堿處理得轉(zhuǎn)化后總皂苷，皂苷部分(l.0g)以硅膠(200—300目)吸附進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿甲醇水(8:2:0.2)洗脫，薄層層析檢査，合并色點(diǎn)相同份數(shù)，得Frl、Fr2和Fr3三個(gè)部分，F(xiàn)rl部分以氯仿甲醇(95:5)進(jìn)行反復(fù)硅膠柱層析，蒸干，少量甲醇-水溶解，靜置得無(wú)色針晶20(R)—人參皂苷Rh2(0.12g)。Fr2部分以氯仿甲醇水(8:2:0.2)進(jìn)行反復(fù)硅膠柱層析，蒸干，少量甲醇溶解，靜置得顆粒狀結(jié)晶20(R)—人參皂苷Rg3(0.48g)。Fr3部分以反相RP-18柱層析(甲醇水8:2)進(jìn)行反復(fù)硅膠柱層析，蒸千，少量甲醇溶解，靜置得無(wú)色針晶人參皂苷III(O.14g)2。經(jīng)紅外(IR)、質(zhì)譜(EI-MS，ESI-MS，F(xiàn)AB-MS)、氫譜('H麗R)、碳譜(':'C麗R)、二維核磁共振技術(shù)(HMQC、HMBC、'H-'HCOSY、':t-'HCOSY、ROESY)等光譜數(shù)據(jù)鑒定了它們的結(jié)構(gòu)分別是為20(R)—原人參二醇一3-0-3-吡喃葡萄糖苷即20(R)—人參皂苷Rh2，20(R)--原人參二醇-3-0-3-D-吡喃葡萄糖基(i一2)0-D-吡喃葡萄糖苷即20(R)—人參皂苷Rg"20(R)—原人參二醇-3-0-吡喃木糖基(1~*^)P-D-吡喃葡萄糖基(1一2)3-d-吡喃葡萄糖苷即人參皂苷ni。20(R)—人參皂苷Rh2的結(jié)構(gòu)鑒定無(wú)色針晶(MeOH-H20)，醋酐-硫酸反應(yīng)呈紅色，說(shuō)明該化合物為三萜類(lèi)成分。NNR及DEPT譜中S107.O處觀察到葡萄糖的C-V信號(hào)，并在S78.863.l處見(jiàn)到與0-D吡喃葡萄糖苷一致的5個(gè)碳信號(hào)，并且50.6(d，C-17)，22.8(q，C-21)及43.3(t，C-22)的特征信號(hào)說(shuō)明該化合物為20(R)型的四環(huán)三萜皂苷類(lèi)成分。13C-NNR(125MHZ，C晶N):39.2(t，C-1)，26.7(t，C-2),88.8(d,C-3)，40.0(s，C-4),56.4(d，C-5)，18.5(t，C-6)，35.2(t'C-7)，39.7(s，C-8)，50.4(d，C-9),37.0(s,C-IO),32.2(t，C-11)，70.9(d，C-12)，49.2(d，C一13)，51.8(s,C—14)，31.4(t，C一15)，26.8(t，C一16)，50.6(d，c-17)，16.8(q,c-18)，16.4(q，c-19)，73.0(s，c-20)，22.8(q，C一21)，43.3(t,C—22)，22.6(t，C—23)，162.1(d，C—24)，130.8(s'C-25),25.9(q，C-26)，17.7(q，C-27),28.2(q，C-28)，15.9(q，C-29)，17.4(q，C-30)。糖部分C-1C-6:107.0，75.8，78.8，71.9，78.5，63.1。據(jù)此該化合物的結(jié)構(gòu)鑒定為20(R)—原人參二醇-3-0-3-D葡萄吡喃糖苷，即20(R)-人參皂苷Rh2。20(R)—人參皂苷Rg3的結(jié)構(gòu)鑒定白色無(wú)定型粉末，醋酑-硫酸反應(yīng)呈紅色，說(shuō)明該化合物為三萜類(lèi)成分。l:iC麗R及DEPT譜中S104.8，105.9處觀察到葡萄糖的C-l和C-l〃信號(hào)，并在S83.1—62.5處見(jiàn)到與P-D吡喃葡萄糖苷一致的10個(gè)碳信號(hào)，并且50.6(d，C-17)，22.8(q，C-21)及43.3(t，C-22)的特征信號(hào)說(shuō)明該化合物為20(R)型的四環(huán)三萜皂苷類(lèi)成分。C-NNR(125MHz，C細(xì)39.2(t,C-1)，26.7(t，C-2)，88.8(d,C-3),40.0(s，C-4)，56.4(d,C-5),18.5(t，C-6)，35.2(t，C-7)，39.7(s,C-8)，C一9)，37.0(s，C—10)，32.2(t，C—11)，70.9(d，C—12),C-13)，51.8(s,C-14)，31.4(t,C-15),26.8(t，C-16)，C-17)，16.8(q，C-18),16.4(q，C-19)，73.0(s,C-20)，C-21),43.3(t，C一22)，22.6(t，C-23),162.1(d，C—24)，C-25)，25.9(q，C-26),17.7(q，C-27)，28.2(q，C-28)，C-29)，17.4(q，C-30)。糖部分C-1'C-6':104.8，83.2，77.6，71.4，77.6，62.6，C—1A'C—6':105.9，76.5，77.8，71.4，77.8，62.6。據(jù)此該化合物的結(jié)構(gòu)鑒定為20(R)—原人參二醇-3-P-D吡喃葡萄糖基(12)D-吡喃葡萄糖苷，即20(R)-人參皂苷Rg3。正反相硅膠薄層層析與20(R)-人參皂苷R&標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，Rf值均相同，進(jìn)一步確定該化合物為20(R)-人參皂苷Rg3。人參皂苷III的結(jié)構(gòu)鑒定無(wú)色針晶(甲醇)，醋酐-硫酸反應(yīng)呈紅色，說(shuō)明50.4(d，49.2(d，50.6(d，22.8(q，130.8(s，15.9(q，該化合物為三萜類(lèi)成分。FAB()-MS給出化合物的分子離子峰為916(100%)。KiC隨及DEPT譜中S104.8，103.2處觀察到葡萄糖的C-1'，C-l'信號(hào)及S106.5處觀察到木糖的C-1'〃信號(hào)，并在S84.6—63.0處見(jiàn)到與兩個(gè)e-D吡喃葡萄糖苷和一個(gè)木糖一致的14個(gè)碳信號(hào)，并且S84.6，83.0進(jìn)一步說(shuō)明兩個(gè)葡萄糖直接相連后再與木糖相連。50.5(d，C-17)，22.8(q，C-21)及43.3(t，C-22)的特征信號(hào)說(shuō)明該化合物為20(R)型的四環(huán)三萜皂苷類(lèi)成分。l:iC-NNR(125腿z，C晶N):39.2(t，C-1)，26.8(t，C-2)，89.0(d，C—3)，39.8(s，C-4)，56.5(d，C-5)，18.5(t，C-6)，35.3(t,C—7)，40.1(s，C-8)，50.4(d，C—9)，37.0(s，C一10)，31.5(t,C-11)，70.7(d，C-12)，49.3(d，C-13)，51.8(s,C-14),32.2(t，c-15)，26.7(t，C-16)，50.5(d，C—17)，16.4(q，C—18)，15.9(q，C一19),73.0(s，C—20)，22.8(Q，C-21)，43.3(t，C-22)，22.7(t，C-23),126.1(d，C-24),130.8(s,c—25)，25.9(q，c-26)，17.7(q，c-27)，28.2(q，c-28)，15.9(q，C-29)，16.7(q，C-30)。糖部分C-1'C-6:104.8，83.0，77.8，71.9，77.7，63.0，C—1〃C一6〃103.2，84.6，78.3，71.2，78.0，63.0，C--1705':106.5，76.0，78.7，70.9，67.5，據(jù)此該化合物的結(jié)構(gòu)鑒定為20(R)—原人參二醇-3-0-P-吡喃木糖基(1~*"2)3-D-吡喃葡萄糖基(i一2)e-D-吡喃葡萄糖苷。實(shí)施例l:膠囊劑制備稱取20(R)一人參皂苷Rg361.2克，20(R)—人參皂苷Rh239.75克和人參皂苷III26.25克，加入淀粉867.8克，混勻，過(guò)篩，用乙醇水溶液作為粘合劑，制成適宜軟材，18目篩制粒，6CrC烘箱干燥5小時(shí)，16目篩整粒，加入5克硬脂酸鎂，混勻，制成1000粒。實(shí)施例2:片劑制備稱取20(R)—人參皂苷Rg375.3克，20(R)—人參皂苷Rh229.25克和人參皂苷III24.75克，加入淀粉865.7克，混勻，過(guò)篩，用乙醇水溶液作為粘合劑，制成適宜軟材，18目篩制粒，6(TC烘箱干燥5小時(shí)，16目篩整粒，加入5克硬脂酸鎂，混勻，壓制成1000片。實(shí)施例3:注射用制劑制備稱取20(R)一人參皂苷Rg:,O.585克，20(R)一人參皂苷歸155克和人參皂苷IIIO.195克，加入20ml正丁醇和30ml的丙二醇使皂苷完全溶解，將0.15克鹽酸丁卡因、0.02克的枸櫞酸加入到40ml注射用水中，使完全溶解，并將上述水溶液加入到藥物溶液中，混合均勻；以硼砂和硼酸調(diào)節(jié)PH值為5.5士1.0:加入0.1%的針用活性炭85。C保溫30分鐘，G3垂熔玻璃漏斗過(guò)濾，0.22txm的微孔濾膜過(guò)濾；濾液分裝于7ml西林瓶中，每支裝量2ml(分裝好的注射劑可以直接壓塞、壓鋁蓋成針劑；或經(jīng)凍干機(jī)凍干制成凍干粉針)。權(quán)利要求1、一種20(R)-人參皂苷組合物，其特征在于主要由以下重量百分比的成分組成20(R)-人參皂苷Rg330～60％、20(R)-人參皂苷Rh210～40％、人參皂苷III10～30％，所述的人參皂苷III為20(R)一原人參二醇-3-O-β-吡喃木糖基(1→2)β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)β-D-吡喃葡萄糖苷。2、如權(quán)利要求1所述的20(R)—人參皂苷組合物，其特征在于所述的20(R)—人參皂苷Rg:i、20(R)—人參皂苷Rh2和人參皂苷m的總含量大于等于60%。3、如權(quán)利要求1所述的20(R)—人參皂苷組合物，其特征在于還有以下重量百分比的成分20(S)—人參皂苷Rg3210%。4、如權(quán)利要求1所述的20(R)—人參皂苷組合物，其特征在于還有以下重量百分比的成分20(S)—人參皂Rh2210%。5、權(quán)利要求l一5所述組合物在制備增強(qiáng)抗癌藥物療效、降低抗癌藥物毒性的藥物中的應(yīng)用。6、權(quán)利要求l一5所述組合物在制備治療放化療引起的白細(xì)胞降低的抗癌輔助藥物中的應(yīng)用。7、權(quán)利要求1—5所述組合物在制備預(yù)防放化療引起的白細(xì)胞降低的抗癌輔助藥物和保健品中的應(yīng)用。8、權(quán)利要求l一5所述組合物在制備治療放化療引起的白細(xì)胞降低的抗癌輔助藥物中的應(yīng)用。9、權(quán)利要求l一5所述組合物在制備提高機(jī)體免疫力的藥品或保健品中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種由20(R)-人參皂苷為活性成分組合而成的組合物，以及這種組合物作為藥品或保健品的應(yīng)用。本發(fā)明所述的20(R)-人參皂苷組合物主要由以下重量百分比的成分組成20(R)-人參皂苷Rg₃30～60％、20(R)-人參皂苷Rh₂10～40％、人參皂苷III10～30％，所述的人參皂苷III為20(R)一原人參二醇-3-O-β-吡喃木糖基(1→2)β-D-比喃葡萄糖基(1→2)β-D-吡喃葡萄糖苷。本發(fā)明涉及到這種藥物組合物在制備預(yù)防和治療放化療引起的白細(xì)胞降低的抗癌輔助藥物及提高機(jī)體免疫力的藥品或保健品中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61P37/02GK101116669SQ20061001109公開(kāi)日2008年2月6日申請(qǐng)日期2006年8月2日優(yōu)先權(quán)日2006年8月2日發(fā)明者周家礽,汪伯良,勇沈,陳植和,黃曉東申請(qǐng)人:昆明滇虹藥業(yè)有限公司