專利名稱：用于癌癥輔助治療藥物制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于癌癥輔助治療藥物制劑及其制備方法，特別涉及一種以中草藥為原料的癌癥輔助治療藥物制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
黃芪來(lái)源豆科植物蒙古黃芪A.membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus Bge.Hsiao干燥根，為傳統(tǒng)的補(bǔ)氣藥，具有補(bǔ)氣固表，利尿排膿，斂瘡生肌的功效。傳統(tǒng)用于提高人體免疫力等功效，同時(shí)也被用來(lái)補(bǔ)氣，比如疲勞，缺乏精力等癥狀。黃芪的化學(xué)成分研究報(bào)道很多，從中分離出多糖、皂苷、黃酮、氨基酸、微量元素等。近代藥理研究證明，黃芪多糖(polysaccharides)和黃芪皂苷(total Astragloside)為其中的主要成分。其中，黃芪多糖(Astragaluspolysaccharids，APS)具有促進(jìn)免疫功能、提高巨噬細(xì)胞活性、抑制EAS、雙向調(diào)節(jié)血糖等作用。黨參為桔?？浦参稂h參Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.的干燥根，具有補(bǔ)中益氣，健脾生津的功效。黨參含有多糖、皂苷、揮發(fā)油等。
以黨參和黃芪為原料制備的參芪扶正注射液是目前臨床應(yīng)用較廣的中藥制劑，它由等量的黨參和黃芪組方而成，臨床上對(duì)氣虛型的晚期腫瘤患者有良好的療效，具有扶正固本、益氣補(bǔ)虛的功效，能幫助癌癥患者順利完成放療、化療，減少化療藥物的毒副作用，保護(hù)機(jī)體的造血功能，能使患者血象升高，改善免疫功能及消化道癥狀等，提高患者的生存質(zhì)量，并可治療心、腦血管等疾病。參芪扶正注射液為水劑，存在運(yùn)輸不便，質(zhì)量穩(wěn)定性差等問(wèn)題，因此有研究者改進(jìn)其工藝，將其制備成凍干粉針制劑。如申請(qǐng)?zhí)枮?00310113944.1的中國(guó)專利申請(qǐng)，用乙醇回流提取的方法獲得黨參和黃芪中的總皂苷成分，藥渣再用水提醇沉的方法獲得黨參和黃芪中的總多糖成分，將總皂苷和總多糖提取物混合，加入輔料冷凍干燥得凍干粉針制劑。該方法的優(yōu)點(diǎn)是同時(shí)保留了原料藥中的總皂苷總多糖類有效成分，然而，由于在總皂苷的提取之后沒(méi)有進(jìn)一步的純化過(guò)程，在實(shí)踐中不適合制備成適合靜脈用的粉針制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種有效成分含量高、適合靜脈注射使用、高效低毒的用于癌癥輔助治療的藥物制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種制備上述藥物制劑的方法。
本發(fā)明提供的用于癌癥輔助治療的藥物制劑是采用黨參和黃芪為原料，通過(guò)包括以下步驟的方法制得(1)取重量比為1∶0.5-2的黨參和黃芪飲片，加低元醇回流提取，得提取液和藥渣，提取液經(jīng)濃縮、離心和大孔吸附樹(shù)脂柱純化后，進(jìn)一步用堿性大孔樹(shù)脂純化，得總皂苷提取物；(2)步驟(1)得到的藥渣去除溶劑后，用水提取，提取液濃縮后，調(diào)醇度至50-80％沉淀，沉淀加水溶解后再調(diào)醇度至30-40％沉淀，取上清，去除蛋白，進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后順序采用截流分子量為10,000，10,000和3,000的超濾膜超濾，濃縮液進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎可分別得總多糖提取物A、B和C。
(3)取步驟的(1)總皂苷提取物和步驟(2)的總多糖提取物A、B、C中的一種或兩種或三種作為活性成分，二者重量之比是0.1-8∶1，加入適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體，制成注射液、輸液劑或者凍干粉針制劑。
本發(fā)明中所用的低元醇是指C1-C4的醇，是本領(lǐng)域通常用于提取中藥材有效成分，或者是沉淀、純化水溶液中有效成分或雜質(zhì)的常規(guī)或者已知的C1-C4的醇，例如甲醇、乙醇、異丙醇、丙二醇、正丁醇和/或異丁醇，優(yōu)選乙醇。所述的提取、純化、沉淀等過(guò)程可以按照本領(lǐng)域常規(guī)或者已知的方法進(jìn)行。
所述的步驟(1)第一步所用大孔樹(shù)脂可以是任何常規(guī)的或者已知的大孔樹(shù)脂，包括非極性、弱極性、中極性和強(qiáng)極性的大孔樹(shù)脂，例如常用的ADS-21型大孔樹(shù)脂、ADS-17型大孔樹(shù)脂、ADS-16型大孔樹(shù)脂或ADS-F8型大孔樹(shù)脂、DM-130、D-101和D-4020、D101型大孔吸附樹(shù)脂、AB-8型大孔吸附樹(shù)脂、ZTC-1型大孔吸附樹(shù)脂和DidaionHP20型大孔吸附樹(shù)脂等，，優(yōu)選AB-8型大孔吸附樹(shù)脂和D101型大孔吸附樹(shù)脂，更優(yōu)選D101型大孔吸附樹(shù)脂，采用樹(shù)脂的純化過(guò)程可以按照本領(lǐng)域常規(guī)或者已知的方法進(jìn)行。所述的步驟(1)第二步所用大孔樹(shù)脂是弱堿性大孔吸附樹(shù)脂可以是任何常規(guī)的或者已知的弱堿性大孔樹(shù)脂，優(yōu)選D941、D301型大孔吸附樹(shù)脂，也可以是任何常規(guī)的或者已知的弱堿性大孔樹(shù)脂強(qiáng)堿性大孔樹(shù)脂，優(yōu)選D941、D301型大孔吸附樹(shù)脂。
所述的步驟(2)的去除蛋白的方法可以是本領(lǐng)域技術(shù)常規(guī)的或者已知的方法，如Sevage法、三氯乙酸法(TCA法)和鞣酸法(TA法)，優(yōu)選三氯乙酸法，純化過(guò)程可以按照本領(lǐng)域常規(guī)或者已知的方法進(jìn)行。
本發(fā)明的步驟(3)所述的藥學(xué)上可接受的載體，包括制備成注射液所需要的溶劑，該溶劑可以是本領(lǐng)域常用的或者已知的溶劑如水，也可以包括滲透壓調(diào)節(jié)劑，該調(diào)節(jié)劑可以是本領(lǐng)域常用的或者已知的調(diào)節(jié)劑，如葡萄糖、氯化鈉、果糖、木糖等；步驟(3)所述的藥學(xué)上可接受的載體，還可以包括制成凍干粉針劑所需要的賦形劑，例如甘露醇、乳糖、甘氨酸等。所述的注射液、輸液劑和凍干粉針劑可以按照本領(lǐng)域的常規(guī)的或者已知的方法進(jìn)行；所述的藥學(xué)上可接受的載體，根據(jù)需要還可以包括制成凍干粉針劑所需要的緩沖劑和/或助溶劑等。
所述的步驟(3)總皂苷提取物和總多糖提取物的重量之比優(yōu)選0.5-5∶1，最優(yōu)選3∶1。
按照上述方法制備的用于癌癥輔助治療的藥物制劑，優(yōu)選凍干粉針制劑，該凍干粉針制劑優(yōu)選的是活性成分中總皂苷的重量百分含量為10-32.5％，總多糖的重量百分含量為25-87％，黃芪甲苷的重量百分含量為2.5-7％；更優(yōu)選的是活性成分中總皂苷的重量百分含量為12.5-32.5％，總多糖的重量百分含量為35-87％，黃芪甲苷的重量百分含量為4.3-7％。
本發(fā)明提供還提供了上述優(yōu)選的凍干粉針制劑的制備方法，包括以下步驟(1)取重量比為1∶0.5-2的黨參和黃芪飲片，加低元醇回流提取，得提取液和藥渣，提取液經(jīng)濃縮、離心和大孔吸附樹(shù)脂柱純化后，進(jìn)一步用堿性大孔樹(shù)脂純化，得總皂苷提取物；(2)步驟(1)得到的藥渣去除溶劑后，用水提取，提取液濃縮后，調(diào)醇度至50-80％沉淀，沉淀加水溶解后再調(diào)醇度至30-40％沉淀，取上清，去除蛋白，進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后順序采用截流分子量為10,000，10,000和3,000的超濾膜超濾，濃縮液進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎可分別得總多糖提取物A、B和C。
(3)取步驟的(1)總皂苷提取物和步驟(2)的總多糖提取物A、B、C中的一種或兩種或三種作為活性成分，二者重量之比是0.1-8∶1，加入適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體，制成注射液、輸液劑或者凍干粉針制劑。
此處的低元醇的概念同前，優(yōu)選乙醇。
所述的步驟(1)第一步所用大孔樹(shù)脂可以是任何常規(guī)的或者已知的大孔樹(shù)脂，包括非極性、弱極性、中極性和強(qiáng)極性的大孔樹(shù)脂，例如常用的ADS-21型大孔樹(shù)脂、ADS-17型大孔樹(shù)脂、ADS-16型大孔樹(shù)脂或ADS-F8型大孔樹(shù)脂、DM-130、D-101和D-4020、D101型大孔吸附樹(shù)脂、AB-8型大孔吸附樹(shù)脂、ZTC-1型大孔吸附樹(shù)脂和DidaionHP20型大孔吸附樹(shù)脂等，，優(yōu)選AB-8型大孔吸附樹(shù)脂和D101型大孔吸附樹(shù)脂，更優(yōu)選D101型大孔吸附樹(shù)脂，采用樹(shù)脂的純化過(guò)程可以按照本領(lǐng)域常規(guī)或者已知的方法進(jìn)行。所述的步驟(1)第二步所用大孔樹(shù)脂是弱堿性大孔吸附樹(shù)脂可以是任何常規(guī)的或者已知的弱堿性大孔樹(shù)脂，優(yōu)選D941、D301型大孔吸附樹(shù)脂，也可以是任何常規(guī)的或者已知的弱堿性大孔樹(shù)脂強(qiáng)堿性大孔樹(shù)脂，優(yōu)選D941、D301型大孔吸附樹(shù)脂。
本發(fā)明提供的制備方法，優(yōu)選的是包括以下步驟(4)取黨參和黃芪飲片，加低元醇回流提取，得提取液和藥渣，提取液經(jīng)濃縮、離心、弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱純化和弱堿性大孔吸附樹(shù)脂柱純化，收集洗脫液并濃縮干燥得黨參、黃芪總皂苷提取物；(5)步驟(1)得到的藥渣去除溶劑后，用水提取，提取液濃縮后，調(diào)醇度至50-80％沉淀，沉淀加水溶解后再調(diào)醇度至30-40％沉淀，取上清，用三氯乙酸去除蛋白，進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后超濾，濃縮液進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后，采用截流分子量為3000的膜進(jìn)行超濾，濃縮液進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎得黨參、黃芪總多糖提取物。
合并步驟(1)和步驟(2)的黨參、黃芪總皂苷提取物和黨參、黃芪總多糖提取物，加入適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體，制成凍干粉針制劑。
本發(fā)明的凍干粉針制劑在使用前，可以把凍干粉針制劑溶解在注射用水或者其他注射液中，也可以溶解在輸液劑中，如用于靜脈樹(shù)注的等滲性介質(zhì)，例如生理鹽水溶液或者5％葡萄糖溶液中。
根據(jù)病癥、治療過(guò)程和患者的具體情況，使用本發(fā)明的藥物制劑的用量一般可以每日1～2支，每支相當(dāng)于原料藥5-15g。
本發(fā)明的中藥組合物的制備方法，其工藝步驟和參數(shù)，是發(fā)明人在大量的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上確定的，為此發(fā)明人付出了大量的創(chuàng)造性的勞動(dòng)，本發(fā)明的方法制備的黃芪總皂苷提取物，總皂苷含量在80％(W/W)以上，轉(zhuǎn)移率在40％以上；總多糖提取物中，總多糖的含量在80％以上，轉(zhuǎn)移率在40％以上。
本發(fā)明的藥物制劑，具有有效成分含量高、療效好、毒性低的特點(diǎn)。經(jīng)藥效學(xué)證明，本發(fā)明的藥物制劑本身雖無(wú)明顯的抗腫瘤作用，但與放療或化療藥物聯(lián)合應(yīng)用有增效和減毒作用，同時(shí)能增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能和抗應(yīng)激能力，其效果相當(dāng)于或好于目前臨床使用的參芪扶正注射液。本發(fā)明的藥物制劑經(jīng)急性毒性試驗(yàn)、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)、安全性試驗(yàn)和過(guò)敏、刺激等試驗(yàn)研究未發(fā)現(xiàn)其有明顯的毒副反應(yīng)。
本發(fā)明所用的測(cè)定方法如下1、黃芪總皂苷含量測(cè)定照分光光度法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VA)測(cè)定。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的黃芪甲苷對(duì)照品，用無(wú)水乙醇制成每1ml含黃芪甲苷0.4mg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物350mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20分鐘，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置水浴蒸干，殘?jiān)?0％甲醇溶液20ml溶解，溶液以每分鐘0.5ml的速度通過(guò)中性氧化鋁柱(4g，100～200目，柱長(zhǎng)20cm，內(nèi)徑1cm)，并繼續(xù)用50％甲醇溶液40ml沖洗，合并通過(guò)液及洗液，水浴蒸干，殘?jiān)蒙倭繜o(wú)水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對(duì)照品溶液0、100、200、300、400、500、600ul，分別置于10ml具塞刻度試管中，分別補(bǔ)加無(wú)水乙醇至0.5ml。名加入8％香草醛無(wú)水乙醇試劑0.5ml，搖勻。置冰水浴中緩緩加入72％硫酸5ml，搖勻，62℃水浴保溫20min。取出立即置冰水浴冷卻至室溫，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VA)在538nm處測(cè)定吸收度。以對(duì)照品濃度為橫座標(biāo)、吸收度值A(chǔ)為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定法精密吸取供試品溶液0.5ml，置10ml具塞刻度試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加入8％香草醛......”起，依法測(cè)定吸收度。計(jì)算，即得。
2、黃芪甲苷含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水(37∶63)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。理論板數(shù)按黃芪甲苷計(jì)，應(yīng)不低于3000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇溶解，制成每1ml含0.6mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品內(nèi)容物約500mg，加水10ml溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇萃取4次，每次20ml，合并正丁醇液，以氨試液洗滌3次，每次20ml，合并正丁醇液，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶，甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45um濾膜過(guò)濾即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、30μl，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定黃芪甲苷峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量logX(μg)為橫座標(biāo)、峰面積值logY(mv.s)為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
3、多糖分子量分布的測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用凝膠為填充劑，0.1 M氯化鈉為流動(dòng)相，示差折光檢測(cè)器，靈敏度為32。GPC軟件。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取分子量分別為1270，11600，23800，48600，80900，147600的葡聚糖對(duì)照品適量，分別用流動(dòng)相溶解制成每1mL中約含2mg的溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖分子量的對(duì)數(shù)logMw為縱坐標(biāo)，以保留時(shí)間tR為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸處理，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備 精密稱取本品160mg，置5ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法精密吸取供試品溶液25μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得。
4、總多糖含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用凝膠為填充劑，0.1 M氯化鈉為流動(dòng)相，示差折光檢測(cè)器，靈敏度為32。GPC軟件。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取分子量Mw分別為147600，48600，1270的葡聚糖為對(duì)照品，配置為濃度分別0.2，0.1，3.2mg/ml的混合對(duì)照品溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品160mg，置5ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，實(shí)施例不以任何方式限制本發(fā)明實(shí)施例1(1)取黨參、黃芪飲片各5000g，加6倍量70％乙醇，回流提取3次，每次1.5小時(shí)，合并提取液(藥渣揮去溶劑后備用)，減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.25(60℃)的稠膏，加4倍量水使溶解，靜置，離心，取上清液加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂柱上，先用2倍量的蒸餾水洗滌樹(shù)脂柱，再用80％乙醇的洗脫皂苷類成分，收集4倍于樹(shù)脂柱體積的80％的乙醇洗脫液，洗脫液過(guò)D941型大孔吸附樹(shù)脂，再用少量80％乙醇洗脫，收集流出液和洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮至稠膏，濃縮物在60℃下干燥得黨參、黃芪總皂苷提取物。
(2)上述揮去溶劑后的藥渣，加10倍量水，于60℃浸提2次，每次1.5小時(shí)，合并水提液，濃縮至1∶1(每毫升含原生藥材1克)，加入乙醇，使醇濃度達(dá)到70％，靜置24h，傾出上清液，沉淀離心，將離心所得沉淀加適量水(水∶原生藥為1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇濃度達(dá)到35％，靜置24h，離心，取上清液，回收盡乙醇，加適量水調(diào)整體積至相對(duì)密度為1.00~1.05，以1∶1等體積加入5％三氯乙酸溶液，靜置4小時(shí)，離心，取上清液，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，得粗多糖，加適量水(水∶原生藥材為1∶1)溶解，用截留分子量100000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物A；透過(guò)液用10000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物B；透過(guò)液再用3000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物C；(3)取重量比為1∶3的黨參、黃芪總皂苷及總多糖提取物(包括A、B和C)，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％注射用甘露醇、0.5％聚維酮K30，并用10％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值為6.5～7.5，補(bǔ)加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔濾膜濾過(guò)，灌裝7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷凍干燥，壓蓋，封口，即得。
實(shí)施例2按照實(shí)施例1的方法制備本發(fā)明的藥物制劑，只是第(1)步中取黨參3500g，黃芪6500g，所用的大孔吸附樹(shù)脂分別是AB-8型大孔吸附樹(shù)脂和D301型大孔樹(shù)脂，第(2)步提取所用的低元醇是正丁醇，沉淀所用的低元醇是異丙醇；第(3)步的總多糖提取物是A和B。
實(shí)施例3按照實(shí)施例1的方法制備本發(fā)明的藥物制劑，只是第(1)步中取黨參6500g，黃芪3500g，步驟(1)所用的大孔吸附樹(shù)脂是ADS-17型大孔吸附樹(shù)脂，步驟(2)的去除蛋白的方法是Sevage法。
實(shí)施例4(1)取黨參、黃芪飲片各5000g，加10倍量60％乙醇，回流提取1次，3小時(shí)，提取液(藥渣揮去溶劑后備用)減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.25(60℃)的稠膏，加3倍量水使溶解，靜置，離心，取上清液加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂柱上，先用10倍量的蒸餾水洗滌樹(shù)脂柱，再用80％乙醇的洗脫皂苷類成分，收集3倍于樹(shù)脂柱體積的80％的乙醇洗脫液，洗脫液過(guò)D201型大孔樹(shù)脂，再用少量80％乙醇洗脫，收集流出液和洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮至稠膏，濃縮物在50℃下干燥得黨參、黃芪總皂苷提取物；(2)上述揮去溶劑后的藥渣，加6倍量水，于100℃浸提2次，每次3小時(shí)，合并水提液，濃縮至1∶1(每毫升含原生藥材1克)，加入乙醇，使醇濃度達(dá)到60％，靜置24h，傾出上清液，沉淀離心，將離心所得沉淀加適量水(水∶原生藥為1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇濃度達(dá)到35％，靜置24h，離心，取上清液，回收盡乙醇，加適量水調(diào)整體積至相對(duì)密度為1.00~1.05，以1∶1等體積加入5％三氯乙酸溶液，靜置4小時(shí)，離心，取上清液，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，得粗多糖，加適量水(水∶原生藥材為1∶1)溶解，用截留分子量100000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物A；透過(guò)液用10000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物B；透過(guò)液再用3000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物C；(3)取重量比為1∶0.1的黨參、黃芪總皂苷及總多糖提取物(包括總多糖B和C)，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％注射用甘露醇、0.5％Tween-80，并用10％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值為6.5～7.5，補(bǔ)加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔濾膜濾過(guò)，灌裝7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷凍干燥，壓蓋，封口，即得。
實(shí)施例5(1)取黨參、黃芪飲片各5000g，加8倍量60％乙醇，回流提取2次，每次2小時(shí)，提取液(藥渣揮去溶劑后備用)減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.25(60℃)的稠膏，加5倍量水使溶解，靜置，離心，取上清液加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂柱上，先用5倍量的蒸餾水洗滌樹(shù)脂柱，再用80％乙醇的洗脫皂苷類成分，收集2倍于樹(shù)脂柱體積的80％的乙醇洗脫液，洗脫液過(guò)D301型大孔樹(shù)脂，再用少量80％乙醇洗脫，收集流出液和洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮至稠膏，濃縮物在60℃下干燥得黨參、黃芪總皂苷提取物；(2)上述揮去溶劑后的藥渣，加8倍量水，于80℃浸提3次，每次2小時(shí)，合并水提液，濃縮至1∶1(每毫升含原生藥材1克)，加入乙醇，使醇濃度達(dá)到80％，靜置24h，傾出上清液，沉淀離心，將離心所得沉淀加適量水(水∶原生藥為1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇濃度達(dá)到40％，靜置24h，離心，取上清液，回收盡乙醇，加適量水調(diào)整體積至相對(duì)密度為1.00~1.05，以1∶1等體積加入5％三氯乙酸溶液，靜置4小時(shí)，離心，取上清液，加乙醇至含醇量達(dá)70％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，得粗多糖，加適量水(水∶原生藥材為1∶1)溶解，用截留分子量100000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物A；透過(guò)液用10000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物B；透過(guò)液再用3000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物C；(3)取重量比為1∶8的黨參、黃芪總皂苷及總多糖提取物(包括提取物A、B和C)，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％葡萄糖，并用10％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值為6.5～7.5，補(bǔ)加注射用水至2500ml，用0.22 μ m微孔濾膜濾過(guò)，灌裝7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷凍干燥，壓蓋，封口，即得。
實(shí)施例6(1)取黨參、黃芪飲片各5000g，加9倍量60％乙醇，回流提取2次，每次1.5小時(shí)，提取液(藥渣揮去溶劑后備用)減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.25(60℃)的稠膏，加5倍量水使溶解，靜置，離心，取上清液加于已處理好的AB-8型大孔吸附樹(shù)脂柱上，先用5倍量的蒸餾水洗滌樹(shù)脂柱，再用80％乙醇的洗脫皂苷類成分，收集3倍于樹(shù)脂柱體積的70％的乙醇洗脫液，洗脫液過(guò)D301型大孔樹(shù)脂，再用少量80％乙醇洗脫，收集流出液和洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮至稠膏，濃縮物在60 ℃下干燥得黨參、黃芪總皂苷提取物；(2)上述揮去溶劑后的藥渣，加8倍量水，于70℃浸提3次，每次3小時(shí)，合并水提液，濃縮至1∶1(每毫升含原生藥材1克)，加入乙醇，使醇濃度達(dá)到70％，靜置24h，傾出上清液，沉淀離心，將離心所得沉淀加適量水(水∶原生藥為1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇濃度達(dá)到350％，靜置24h，離心，取上清液，回收盡乙醇，加適量水調(diào)整體積至相對(duì)密度為1.00~1.05，以1∶1等體積加入5％三氯乙酸溶液，靜置4小時(shí)，離心，取上清液，加乙醇至含醇量達(dá)70％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，得粗多糖，加適量水(水∶原生藥材為1∶1)溶解，用截留分子量100000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物A；透過(guò)液用10000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物B；透過(guò)液再用3000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取沉淀，用無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，粉碎，得總多糖提取物C；(3)取重量比為1∶4的黨參、黃芪總皂苷及總多糖提取物(包括提取物A和C)，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％葡萄糖，并用10％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值為6.5～7.5，補(bǔ)加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔濾膜濾過(guò)，灌裝7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷凍干燥，壓蓋，封口，即得。
實(shí)施例7抗腫瘤增效試驗(yàn)對(duì)環(huán)磷酰胺抗Lewis肺癌作用的增效試驗(yàn)于無(wú)菌條件下摘取荷Lewis肺癌小鼠的瘤塊，除去壞死組織，用玻璃勻漿器勻漿，按1∶4倍用無(wú)菌生理鹽水稀釋，然后無(wú)菌條件下每只小鼠(C57BL/6種)右前肢腋窩皮下注射0.2ml，24h后稱動(dòng)物體重并分組。第一組為荷瘤對(duì)照組，給等容積生理鹽水；第二組為化療藥物組，給環(huán)磷酰胺注射劑30mg/kg；第三、四、五組為本發(fā)明的藥物制劑+化療藥物組，同時(shí)給本發(fā)明的藥物制劑(按實(shí)施例1的方法制備)3g生藥/kg、6g生藥/kg、12g生藥/kg和環(huán)磷酰胺注射劑30mg/kg。接種腫瘤后第二天開(kāi)始腹腔注射給藥，0.2ml/10g，每天1次，連續(xù)10天；接種腫瘤后第二天和第六天分別腹腔注射環(huán)磷酰胺注射劑。第10天給藥后24h稱動(dòng)物體重，處死小鼠，剝離瘤塊并稱重，抑瘤率計(jì)算同上。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 本發(fā)明的藥物制劑對(duì)環(huán)磷酰胺抗Lewis肺癌作用的影響(x±s)

與荷瘤對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與環(huán)磷酰胺組比較，*P＜0.05，**1P＜0.01由表1可見(jiàn)，本實(shí)驗(yàn)所用劑量的環(huán)磷酰胺能減輕Lewis肺癌小鼠的瘤重，與荷瘤對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。本發(fā)明的藥物制劑與環(huán)磷酰胺聯(lián)合應(yīng)用，抗小鼠Lewis肺癌的作用增強(qiáng)，大、中、小劑量組抑瘤率依次為7.044％、43.65％和38.86％，與單獨(dú)應(yīng)用環(huán)磷酰胺(抑瘤率為35.81)比較，大劑量組有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，說(shuō)明本發(fā)明的藥物制劑能增強(qiáng)環(huán)磷酰胺抗小鼠Lewis肺癌作用。
對(duì)放療抗H22肝癌作用的增效試驗(yàn)于無(wú)菌條件下抽取荷H22肝癌8天的小鼠腹水，按1∶4倍用無(wú)菌生理鹽水稀釋，然后無(wú)菌條件下每只小鼠(ICR種)腹腔注射0.2ml，24h后稱動(dòng)物體重并分組。第一組為為荷瘤對(duì)照組，給等容積生理鹽水；第二組為放療組，給小劑量X線照射；第三組為參芪扶正注射液組，給參芪扶正注射液6g生藥/kg；第四、五、六組為本發(fā)明的藥物制劑和小劑量X線照射，同時(shí)給本發(fā)明的藥物制劑(按實(shí)施例一的方法制備)3g生藥/kg、6g生藥/kg、12g生藥/kg和小劑量X線照射。接種腫瘤后第二天開(kāi)始開(kāi)始腹腔注射給藥，0.2ml/10g，每天1次，連續(xù)10天；接種腫瘤后第五天給一次性小劑量X線照射(全身照射劑量為12.5mGy/min，總劑量為75mGy)。第10天給藥后24h稱動(dòng)物體重，處死小鼠，剝離瘤塊并稱重，抑瘤率計(jì)算同上。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表13。
表2 本發(fā)明的藥物制劑對(duì)放療抗H22肝癌作用的影響(x±s)

與荷瘤對(duì)照組比較，##P＜0.01；與放療組比較，**P＜0.01由表2可見(jiàn)，本實(shí)驗(yàn)所用劑量的放療能減輕H22肝癌小鼠的瘤重，與荷瘤對(duì)照組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。本發(fā)明的藥物制劑與放療聯(lián)合應(yīng)用，抗小鼠H22肝癌的作用增強(qiáng)，大、中、小劑量組抑瘤率依次為57.35％、47.65％和25.54％，與單獨(dú)應(yīng)用放療組(抑瘤率為24.76)比較，有顯著性差異(P＜0.01)，，說(shuō)明本發(fā)明的藥物制劑能增強(qiáng)放療抗小鼠H22肝癌作用。參芪扶正注射液與放療聯(lián)合應(yīng)用，抗小鼠H22肝癌的作用輕度增強(qiáng)，抑瘤率為36.54％，但與單獨(dú)應(yīng)用放療組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；與同劑量本發(fā)明的藥物制劑比較，有顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明本發(fā)明的藥物制劑增強(qiáng)放療抗小鼠H22肝癌作用強(qiáng)于參芪扶正注射液。
權(quán)利要求
1.一種用于癌癥輔助治療的藥物制劑，采用黨參和黃芪為原料，通過(guò)包括以下步驟的方法制得(1)取重量比為1∶0.5-2的黨參和黃芪飲片，加低元醇回流提取，得提取液和藥渣，提取液經(jīng)濃縮、離心和大孔吸附樹(shù)脂柱純化后，進(jìn)一步用堿性大孔樹(shù)脂純化，得總皂苷提取物；(2)步驟(1)得到的藥渣去除溶劑后，用水提取，提取液濃縮后，調(diào)醇度至50-80％沉淀，沉淀加水溶解后再調(diào)醇度至30-40％沉淀，取上清，去除蛋白，進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后順序采用截流分子量為10,000，10,000和3,000的超濾膜超濾，濃縮液進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎可分別得總多糖提取物A、B和C；(3)取步驟的(1)總皂苷提取物和步驟(2)的總多糖提取物A、B、C中的一種或兩種或三種作為活性成分，二者重量之比是0.1-8∶1，加入適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體，制成注射液、輸液劑或者凍干粉針制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中步驟(3)的總皂苷提取物和總多糖提取物的重量之比是0.5-5∶1。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中步驟(3)的總皂苷提取物和總多糖提取物的重量之比是3∶1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中步驟(3)的凍干粉針制劑，活性成分中總皂苷的重量百分含量為10-32.5％，總多糖的重量百分含量為25-87％，黃芪甲苷的重量百分含量為2.5-7％。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其中步驟(3)的凍干粉針制劑，活性成分中總皂苷的重量百分含量為12.5-32.5％，總多糖的重量百分含量為35-87％，黃芪甲苷的重量百分含量為4.3-7％。
6.權(quán)利要求5的制劑的制備方法，包括以下步驟(1)取黨參和黃芪飲片，加低元醇回流提取，得提取液和藥渣，提取液經(jīng)濃縮、離心、弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱純化和弱堿性大孔吸附樹(shù)脂柱純化，收集洗脫液并濃縮干燥得黨參、黃芪總皂苷提取物；(2)步驟(1)得到的藥渣去除溶劑后，用水提取，提取液濃縮后，調(diào)醇度至50-80％沉淀，沉淀加水溶解后再調(diào)醇度至30-40％沉淀，取上清，用三氯乙酸去除蛋白，進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后超濾，濃縮液進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后，采用截流分子量為3000的膜進(jìn)行超濾，濃縮液進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎得黨參、黃芪總多糖提取物；(3)合并步驟(1)和步驟(2)的黨參、黃芪總皂苷提取物和黨參、黃芪總多糖提取物，加入適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體，制成凍干粉針制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述的弱極性大孔樹(shù)脂是D101型大孔樹(shù)脂或者AB-8型大孔樹(shù)脂。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述的弱堿性大孔樹(shù)脂是D941、D301或D201型大孔樹(shù)脂。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述的低元醇是乙醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，包括如下步驟(1)取等量的黨參和黃芪飲片，加用5-10倍量的60-80％乙醇，回流提取1-3次，每次1.5-3小時(shí)，得提取液和藥渣，提取液經(jīng)濃縮、離心、D101型大孔吸附樹(shù)脂柱純化和D941型大孔樹(shù)脂純化，收集洗脫液并濃縮干燥得黨參、黃芪總皂苷提取物；(2)步驟(1)得到的藥渣去除溶劑后，加6-12倍量的水，于50-100℃，浸提1-3次，每次1-2.5小時(shí)，調(diào)醇度至60-80％沉淀，沉淀加水溶解后再調(diào)醇度至30-40％沉淀，取上清，去除蛋白，進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后順序采用截流分子量為10,000，10,000和3,000的超濾膜超濾，濃縮液進(jìn)一步調(diào)醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎得黨參、黃芪總多糖提取物；(3)取步驟的(1)總皂苷提取物和步驟(2)的總多糖提取物A、B、C中的一種或兩種或三種作為活性成分，二者重量之比是0.1-8∶1，加入適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體，制成凍干粉針制劑。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供一種有效成分含量高、適合靜脈注射使用、高效低毒的用于癌癥輔助治療的藥物制劑。
文檔編號(hào)A61K9/19GK101084981SQ200610014198
公開(kāi)日2007年12月12日 申請(qǐng)日期2006年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月8日
發(fā)明者夏忠庭, 葉正良, 鄭永鋒, 李學(xué)敏 申請(qǐng)人:天津天士力之驕藥業(yè)有限公司