專利名稱：一種脈絡(luò)寧注射制劑及其質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種脈絡(luò)寧注射制劑，具體而言，涉及一種脈絡(luò)寧注射制劑及其質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
脈絡(luò)寧注射液是在著名醫(yī)方“四妙勇安湯”的基礎(chǔ)上研制而成的中藥復(fù)方注射劑，由牛膝、玄參、石斛、金銀花四味中藥組成，廣泛應(yīng)用于血栓閉塞性脈管炎、動脈硬化性閉塞癥、腦血栓形成及后遺癥、多發(fā)性大動脈炎、四肢急性動脈栓塞癥、糖尿病壞疽、靜脈血栓形成及血栓性靜脈炎等。中國專利CN1557398A公開了其還具有預(yù)防和治療心絞痛的作用。四位原料藥的主要成分與藥理作用為金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、紅腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山銀花Lonicera confusa DC.或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或帶初開的花。主含有機(jī)酸類成分，目前鑒定出的有機(jī)酸類主要包括綠原酸(Chlorogcnicacid)和異綠原酸(Isocholrogenicacid)、咖啡酸(Caffeicacid)和3，5-二咖啡酰奎尼酸(3-5-O-dicaffeoylquinicacid)等，前三者為金銀花的主要活性成分，具有抗病毒、抗菌、抗炎、退熱、免疫調(diào)節(jié)等作用。
牛膝為莧科植物牛膝(Achuranthes bidentata Bl.)的干燥根。牛膝中含有皂苷類、植物甾酮類、糖類、黃酮類化合物等成分，皂苷類成分為其主要活性成分，其具有抗炎、鎮(zhèn)痛和活血等作用?，F(xiàn)在化學(xué)成分研究證實牛膝皂苷類化合物主要以齊墩果酸型三萜皂苷為主。
玄參為玄參科植物玄參(Scrophularia ningpoenses He msl.)的干燥根。現(xiàn)代研究表明，玄參主要化學(xué)成分有環(huán)烯醚萜類、苯丙素苷、三萜皂苷、黃酮類、有機(jī)芳酸等化學(xué)成分，其中哈巴俄苷與肉桂酸為玄參中含量較高的成分，也是其主要活性成分之一，具有抗炎、降壓、鎮(zhèn)痛、解痙以及免疫促進(jìn)作用。
為蘭科植物環(huán)草石斛Dendrobium loddigesii Rolfe.、馬鞭石斛Dendrobiumfimbriatum Hook.var.oculatum Hook.、黃草石斛Dendrobium chrysanthumWall.、鐵皮石斛Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.或金釵石斛Dendrobiumnobile Lindl的新鮮或干燥莖?，F(xiàn)代研究表明石斛含有的成分有各種生物堿、菲類和聯(lián)芐類、芴酮類、倍半萜類、香豆素類、濱蒿內(nèi)酯等，其中生物堿與濱蒿內(nèi)酯為其主要活性成分，濱蒿內(nèi)酯具有抗炎與清除活性氧的作用，與脈絡(luò)寧的治法方藥有著一定的量效關(guān)系。
現(xiàn)有的脈絡(luò)寧注射液的制備工藝采用水提醇沉法將四種藥材同時提取，然后再用乙酸乙酯萃取得有效成分(見“脈絡(luò)寧注射液的工藝方法”，公開號CN1078148A)，而方中含有綠原酸等對光照和空氣不穩(wěn)定性成分，在貯存過程中容易出現(xiàn)注射液色澤變化、有效成分含量降低等現(xiàn)象，同時方中同時存有有機(jī)酸與生物堿等成分，在水針狀態(tài)下這些成分極易發(fā)生絮凝沉淀，嚴(yán)重影響到脈絡(luò)寧注射液臨床應(yīng)用的安全性和有效性。
現(xiàn)有的脈絡(luò)寧注射液的質(zhì)量控制方法包括綠原酸的薄層鑒別和濱蒿內(nèi)酯的含量測定(見部頒標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-3462-98)，此質(zhì)量控制方法選擇指標(biāo)單一，含量測定采用薄層掃描方法，精密度、準(zhǔn)確性均不高，所以，很難對產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行全面的控制，由此使不良反應(yīng)的發(fā)生率呈逐年增長趨勢(陳愛群等.70例脈絡(luò)寧注射液不良反應(yīng)文獻(xiàn)分析.藥物不良反應(yīng)雜志.2003，2162-165)。
因此，開發(fā)出更加安全、有效、穩(wěn)定的脈絡(luò)寧注射制劑，建立操作性強(qiáng)、檢測指標(biāo)合理、全面控制產(chǎn)品質(zhì)量的質(zhì)量控制方法是廣大醫(yī)藥工作者一直渴望解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種更加安全、有效、穩(wěn)定的脈絡(luò)寧注射制劑。
本發(fā)明的另一目的是提供該脈絡(luò)寧制劑的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實施本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射用粉針劑由石斛、玄參、牛膝、金銀花為原料藥制成，其中肉桂酸含量為大于0.44mg/g，優(yōu)選0.44～0.90mg/g，進(jìn)一步優(yōu)選0.60～0.80mg/g，更優(yōu)選0.60～0.70mg/g。綠原酸含量為大于66.7mg/g，優(yōu)選66.7～133.3mg/g，進(jìn)一步優(yōu)選80.7～105.5mg/g，更優(yōu)選80.7～95.5mg/g。
進(jìn)一步的，本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射制劑還包括濱蒿內(nèi)酯，濱蒿內(nèi)酯含量為大于0.27mg/g，優(yōu)選0.27～0.55mg/g，進(jìn)一步優(yōu)選0.35～0.45mg/g，更優(yōu)選0.35～0.40mg/g。
以上有效成分中，以濱蒿內(nèi)酯的含量表征石斛的含量，以肉桂酸的含量表征玄參的含量，以綠原酸的含量表征金銀花的含量。
本發(fā)明的脈絡(luò)寧粉針劑以下述方法制備而成(1)原料藥重量配比為石斛1～4份 金銀花1～4份 牛膝1～4份 玄參1～4份(2)取處方量的上述藥材粉碎成粗粉，用50～90％乙醇以100～300ml/min速度滲漉提取，收集10～14倍生藥量的滲漉液，低溫減壓回收乙醇，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.0～1.3的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加4～8倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮至50℃下相對密度為1.0～1.3的浸膏，過濾，去除沉淀，調(diào)節(jié)pH值至1～4，等體積乙酸乙酯萃取4～8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50～80℃真空干燥得提取物；(3)在提取物中加注射用水加熱煮沸8～15分鐘，自然放冷，冷藏，過濾，濾液以截留分子量為3000～8000的超濾膜超濾，收集超濾液，濾液中加入賦形劑，補(bǔ)加注射用水至處方量，調(diào)pH值6.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑。
其中，步驟(3)中所述的賦形劑選自甘露醇、PVP、葡聚糖、乳糖、右旋糖苷、蔗糖中的一種或多種。
本發(fā)明通過大量的試驗研究，確定了本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射用粉針劑的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法包括鑒別項和含量測定項，其中鑒別項為牛膝、玄參、石斛、金銀花的薄層鑒別中一種或多種的組合，含量測定項為濱蒿內(nèi)酯、綠原酸、肉桂酸的含量測定種的一種或多種的組合。
其中，鑒別項包括以下全部或部分項目牛膝以牛膝對照藥材、齊墩果酸為對照，照薄層色譜法操作，選擇硅膠G薄層板，環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，硫酸乙醇溶液噴霧顯色；樣品前處理為加乙醇超聲處理，濾過，濾液加鹽酸加熱回流，濾過，加水，石油醚提取，提取液蒸干，殘渣加乙醇使溶解，即得；玄參以玄參對照藥材為對照，照薄層色譜法操作，選擇硅膠G薄層板，正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，香草醛硫酸溶液噴霧顯色；樣品前處理為加水飽和正丁醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；石斛以石斛對照藥材為對照，照薄層色譜法操作，選擇硅膠GF254薄層板，環(huán)己烷-醋酸乙酯-濃氨試液為展開劑，紫外光燈(254nm)下檢視；樣品前處理為加氯仿-甲醇-濃氨試液混合液超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；金銀花以綠原酸、金銀花對照藥材為對照，照薄層色譜法操作，選擇聚酰胺薄膜，醋酸丁酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，置紫外光燈(365nm)下檢視；樣品前處理為加乙醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得。
優(yōu)選步驟為牛膝以牛膝對照藥材、齊墩果酸為對照，照薄層色譜法分別將樣品、牛膝對照藥材、齊墩果酸點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20∶5∶8∶0.1的環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰；其中樣品前處理為加乙醇超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液加鹽酸，加熱回流0.5～2小時，濾過，濾液濃縮，加水，用石油醚提取1～3次，提取液蒸干，殘渣加乙醇使溶解，即得；玄參以玄參對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品、玄參對照藥材點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰，放置15～45分鐘；樣品前處理為加水飽和正丁醇1，超聲處理0.5～1.5小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；石斛以石斛對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品與石斛對照藥材點于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為7.5∶7.5∶0.2的環(huán)己烷-醋酸乙酯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視；樣品前處理為加體積比為5∶1∶0.1的氯仿-甲醇-濃氨試液混合液，超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；金銀花以綠原酸、金銀花對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品、綠原酸與金銀花對照藥材點于同一聚酰胺薄膜上，以體積比為7∶2.5∶2.5的醋酸丁酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；樣品前處理為加乙醇，超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得。
含量測定項包括以下全部或部分項目綠原酸色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為327nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品，加50％甲醇制成每1ml含40μg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 精密稱取注射用粉針劑適量，置量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；肉桂酸色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為277nm，理論板數(shù)按肉桂酸峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取肉桂酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備精密稱取注射用粉針劑適量，置量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；濱蒿內(nèi)酯色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為343nm，理論板數(shù)按濱蒿內(nèi)酯峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取濱蒿內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 精密稱取注射用粉針劑適量，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。
其中，綠原酸含量測定項下流動相中乙腈-0.1％磷酸的比為10∶90，肉桂酸含量測定項下流動相中乙腈-0.1％磷酸的比為32∶68，濱蒿內(nèi)酯含量測定項下流動相中乙腈-0.1％磷酸的比為23∶77。
最佳的，本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射用粉針包括以下全部的質(zhì)量控制項目鑒別項牛膝以牛膝對照藥材、齊墩果酸為對照，照薄層色譜法分別將樣品、牛膝對照藥材、齊墩果酸點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20∶5∶8∶0.1的環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰；其中樣品前處理為加乙醇超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液加鹽酸，加熱回流0.5～2小時，濾過，濾液濃縮，加水，用石油醚提取1～3次，提取液蒸干，殘渣加乙醇使溶解，即得；玄參以玄參對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品、玄參對照藥材點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰，放置15～45分鐘；樣品前處理為加水飽和正丁醇1，超聲處理0.5～1.5小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；石斛以石斛對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品與石斛對照藥材點于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為7.5∶7.5∶0.2的環(huán)己烷-醋酸乙酯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視；樣品前處理為加體積比為5∶1∶0.1的氯仿-甲醇-濃氨試液混合液，超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；
金銀花以綠原酸、金銀花對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品、綠原酸與金銀花對照藥材點于同一聚酰胺薄膜上，以體積比為7∶2.5∶2.5的醋酸丁酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；樣品前處理為加乙醇，超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得。
含量測定項綠原酸色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為10∶90的乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為327nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品，加50％甲醇制成每1ml含40μg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 精密稱取注射用粉針劑適量，置量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；依照本法，本發(fā)明的脈絡(luò)寧粉針劑每瓶含綠原酸(C16H18O9)不得少于30.0mg。
肉桂酸色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為32∶68的乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為277nm，理論板數(shù)按肉桂酸峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取肉桂酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備精密稱取注射用粉針劑適量，置量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；依照本法，本發(fā)明的脈絡(luò)寧粉針劑每瓶含肉桂酸(C9H8O2)不得少于0.2mg。
濱蒿內(nèi)酯色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為23∶77的乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為343nm，理論板數(shù)按濱蒿內(nèi)酯峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取濱蒿內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液，搖勻，即得；
供試品溶液的制備 精密稱取注射用粉針劑適量，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。
依照本法，本發(fā)明的脈絡(luò)寧粉針劑每瓶含濱蒿內(nèi)酯(C11H10O4)不得少于0.12mg。
本發(fā)明的脈絡(luò)寧粉針劑0.45g/瓶，加入0.9％生理鹽水或5％GS250ml中靜滴?？汕鍩狃B(yǎng)陰，活血化瘀；主治陰虛內(nèi)熱、脈絡(luò)瘀阻型動脈粥樣硬化性腦梗塞，癥見半身不遂，口舌歪斜，言語謇澀或不語，感覺減退或消失，眩暈耳鳴，手足心熱，咽干口燥。
本發(fā)明的脈絡(luò)寧注射用粉針劑采用簡潔、適合工業(yè)化生產(chǎn)的制備工藝提高了有效成分的提取率，節(jié)省了藥材用量，最大程度去除雜質(zhì)，且粉針制劑更加穩(wěn)定，克服了液體制劑中不穩(wěn)定的有效成分降解、絮凝等問題的出現(xiàn)；本發(fā)明的質(zhì)量控制方法選擇最能表征藥材有效成分的指標(biāo)全面控制成品質(zhì)量，且方法可操作性強(qiáng)，保證了制劑更加安全、有效。


圖1綠原酸對照品液相色譜2注射用脈絡(luò)寧凍干粉液相色譜圖(綠原酸)圖3缺金銀花陰性對照品液相色譜4肉桂酸對照品液相色譜5注射用脈絡(luò)寧凍干粉液相色譜圖(肉桂酸)圖6缺玄參的陰性對照(有干擾)圖7缺玄參金銀花的陰性對照(無干擾)圖8濱蒿內(nèi)酯對照品色譜9注射用脈絡(luò)寧凍干粉色譜圖(濱蒿內(nèi)酯)圖10缺石斛陰性對照色譜圖下面通過試驗例來說明本發(fā)明的依據(jù)。
試驗例一提取工藝研究1.1提取工藝的比較研究四味藥主要活性成分水溶性與醇溶性均較好，既可用水提取也可用醇提取。然而各種成分在不同溶媒中不同提取方式下其提取效果并不一致，須對其進(jìn)行對比研究。工藝研究中應(yīng)以金銀花中的綠原酸、玄參中的肉桂酸、石斛中的濱蒿內(nèi)酯三個主要活性成分作為評價指標(biāo)，然而，本方遣方復(fù)雜，評價指標(biāo)較多，單指標(biāo)評價存在片面性，因此其提取效果優(yōu)劣應(yīng)以眾指標(biāo)綜合評價判定?？v觀本方理法方藥，方中玄參清熱涼血兼滋陰，加用金銀花宣散清熱，使邪熱自氣分而解，共為臣藥，較之石斛其權(quán)重系數(shù)分別設(shè)為0.4；石斛養(yǎng)陰清熱，為治療虛熱不退、津傷口渴之要藥，既可固護(hù)胃氣，又可養(yǎng)陰生脈、利血行，方中以為佐使之用，較之玄參銀花二味權(quán)重系數(shù)可定為0.2，因此綜合指標(biāo)評分可用下式計算綜合指標(biāo)評分＝綠原酸轉(zhuǎn)移率×0.4+肉桂酸轉(zhuǎn)移率×0.4+濱蒿內(nèi)酯轉(zhuǎn)移率×0.21.1.1藥材的前處理取金銀花(批號021202)、牛膝(批號021205)、玄參(批號021203)、石斛(批號021204)各約25kg，分別凈制，低溫干燥，粉碎機(jī)中打成粗粉(過二號篩)，備用。
1.1.2操作方法分別準(zhǔn)確稱取上述四味藥材粗粉各100g，混合均勻，作為供試藥材，同樣操作準(zhǔn)備供試藥材共三份，作下述試驗。
第一份以70％乙醇滲漉提取，流速4ml/min，接收滲漉液4800ml，HPLC法測定樣品中綠原酸、肉桂酸、濱蒿內(nèi)酯的含量。
第二份以70％乙醇回流提取二次。第一次用7倍量70％乙醇在攪拌下回流提取3小時，第二次加入5倍量70％乙醇在攪拌下回流提取2小時。合并二次乙醇提取液，同濃度乙醇定容，同上測定樣品中綠原酸、肉桂酸、濱蒿內(nèi)酯的含量。
第三份以水煎煮提取二次。第一次以7倍量水在攪拌下煎煮提取3小時，第二次加入5倍量水在攪拌下煎煮提取2小時。合并二次水提取液，以蒸餾水定容后同上測定樣品中綠原酸、肉桂酸、濱蒿內(nèi)酯的含量。
1.1.3結(jié)果三組實驗提取液測定體積和綠原酸、肉桂酸、濱蒿內(nèi)酯的含量，計算提取率及各活性成分的綜合提取率。結(jié)果如表1所示。
表1三種提取方法的對比

注綜合提取率＝綠原酸提取率×0.4+肉桂酸提取率×0.4+濱蒿內(nèi)酯提取率×0.2由表1可見，以70％乙醇滲漉提取，各指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率及各成分綜合提取率均高于其它兩種提取方式，而固形物的收率較低，因此乙醇滲漉法同現(xiàn)有技術(shù)常用的乙醇回流或者水煎煮法相比具有明顯的優(yōu)勢，采取乙醇滲漉法為宜。
試驗例二鑒別方法的建立鑒別試藥 注射用脈絡(luò)寧凍干粉樣品(批號031017、031023、031028)；綠原酸對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號0753-9909)；齊墩果酸對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號0709-9803)；牛膝對照藥材、玄參對照藥材、石斛對照藥材、金銀花對照藥材購于中國藥品生物制品檢定所；所有化學(xué)試劑均為分析純。
(1)牛膝鑒別取本品8瓶內(nèi)容物，加乙醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液加鹽酸1ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸至約5ml，加水10ml，用石油醚(60-90℃)提取2次，每次20ml，提取液蒸干，殘渣加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺牛膝陰性對照，同法制備陰性對照溶液。再另取牛膝對照藥材2g，加乙醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液加鹽酸1ml，同法制成對照藥材溶液。再取齊墩果酸對照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述四種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸(20∶5∶8∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰。供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照未見干擾。
(2)玄參鑒別 取本品6瓶內(nèi)容物，加水飽和正丁醇30ml，密塞，超聲處理1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺玄參陰性對照，同法制備陰性對照溶液。另取玄參對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰，放置30分鐘。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色主斑點。陰性對照未見干擾。
(3)石斛鑒別 取本品8瓶內(nèi)容物，加氯仿-甲醇-濃氨試液(5∶1∶0.1)混合液40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺石斛陰性對照，同法制備陰性對照溶液。再另取石斛對照藥材4g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-濃氨試液(7.5∶7.5∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的暗斑點。陰性對照未見干擾。
(4)金銀花鑒 別取本品2瓶內(nèi)容物，加乙醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺金銀花陰性對照，同法制備陰性對照溶液。再另取金銀花對照藥材1g，加乙醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為對照藥材溶液。再取綠原酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述四種溶液各2μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照未見干擾。
試驗例三含量測定一、綠原酸注射用脈絡(luò)寧凍干粉為復(fù)方中藥制劑，為了有效地控制本品的質(zhì)量，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中以其主要成分綠原酸為含測指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定本品中綠原酸的含量。
1、儀器與試藥儀器高效液相色譜儀Waters 600E泵，Waters 717自動進(jìn)樣器，Waters PDA2996二極管陣列檢測器；Waters Empower色譜工作站；Mettler AE240(十萬分之一)天平(梅特勒-托利多上海儀器有限公司)；SYZ-A石英亞沸高純水蒸餾器(江蘇信達(dá)儀器廠)。
試藥 綠原酸對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號0753-200111)；乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純；成品及陰性對照品(由本公司提供)。
2、色譜條件的選擇色譜柱Diamonsil C18，5μm，250×4.6mm(迪馬公司產(chǎn))；流動相乙腈-0.1％磷酸(10∶90)；柱溫30℃；流速1.2ml/mim；檢測波長327nm。在此色譜條件下，綠原酸與樣品中其它組分分離良好，理論板數(shù)按綠原酸對照品峰計大于3000。(見圖1)。
3、供試品溶液的制備精密稱取裝量差異項下本品0.3g，置25ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。(見圖2)4、空白試驗 取缺金銀花的陰性對照品，按供試品溶液制備方法操作，依法進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果，在對照品相同保留時間處無吸收峰。表明樣品中無干擾綠原酸的成分存在。(見圖3)5、線性關(guān)系的考察精密稱取綠原酸對照品11.03mg，置250ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，得綠原酸對照品溶液；分別精密吸取上述對照品溶液3μl、5μl、10μl、15μl、25μl，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定綠原酸峰面積，以對照品進(jìn)樣量X(μg)為橫座標(biāo)、峰面積值Y(mv.s)為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表2。
表2綠原酸對照品線性范圍測定結(jié)果

測定結(jié)果表明，綠原酸對照品在進(jìn)樣量O.13236μg～1.10300μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(見圖4)。
6、精密度試驗精密吸取上述綠原酸對照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定，記錄綠原酸對照品峰面積值，求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。結(jié)果見表3。實驗結(jié)果表明本法精密度良好。
表3精密度試驗

7、穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液(批號031017)，在室溫下，分別于配制后0、4、7、12、24小時測定綠原酸峰面積，每次進(jìn)樣10μl，測定。結(jié)果見表4。實驗結(jié)果表明供試品溶液在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。
表4穩(wěn)定性試驗

8、重現(xiàn)性試驗精密稱取樣品5份(批號031017)，每份約0.3g，按供試品溶液制備方法操作，依法進(jìn)樣測定，計算綠原酸含量，求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果見表5。實驗結(jié)果表明本法重現(xiàn)性良好。
表5重現(xiàn)性試驗

9、回收率測定采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同一批號樣品(批號031017)(綠原酸含量為36.847mg/瓶，每瓶平均裝量為0.45g)約150mg，置25ml量瓶中，精密加入綠原酸對照品溶液(濃度為2.653mg/ml)5ml，照供試品溶液的制備方法操作，即得。按正文方法，進(jìn)樣，測定，計算。結(jié)果表明，本法具有較好的回收率。結(jié)果見表6。
表6綠原酸回收率測定結(jié)果

二、肉桂酸注射用脈絡(luò)寧凍干粉為復(fù)方中藥制劑，為了有效地控制本品的質(zhì)量，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中以其主要成分肉桂酸(經(jīng)試驗證明來自于玄參和金銀花藥材)為含測指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定本品中肉桂酸的含量。
1、儀器與試藥儀器高效液相色譜儀Waters 600E泵，Waters 717自動進(jìn)樣器，Waters PDA2996二極管陣列檢測器；Waters Empower色譜工作站；Mettler AE240(十萬分之一)天平(梅特勒-托利多上海儀器有限公司)；SYZ-A石英亞沸高純水蒸餾器(江蘇信達(dá)儀器廠)。
試藥 肉桂酸對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號0786-9802)；乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純；成品及陰性對照品(由本公司提供)。
2、色譜條件的選擇色譜柱Diamonsil C18，5μm，250×4.6mm(迪馬公司產(chǎn))；流動相乙腈-0.1％磷酸(32∶68)；柱溫30℃；流速1ml/min；檢測波長277nm。在此色譜條件下，肉桂酸與樣品中其它組分分離良好，理論板數(shù)按肉桂酸對照品峰計大于3000。(見圖4)。
3、供試品溶液的制備精密稱取裝量差異項下本品0.3g，置25ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。(見圖5)4、空白試驗精密吸取缺玄參的陰性樣品，按供試品溶液制備方法操作，依法進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果，在對照品相同保留時間處有吸收峰，為了證明此干擾來自何藥味，又對藥材進(jìn)行了肉桂酸測定，發(fā)現(xiàn)在金銀花藥材中含有肉桂酸，且缺金銀花和玄參的陰性對照無干擾。(見圖6、圖7)5、線性關(guān)系的考察精密稱取肉桂酸對照品11.30mg，置25ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取肉桂酸對照品儲備液2ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，得肉桂酸對照品溶液；分別精密吸取上述對照品溶液3μl、5μl、10μl、15μl、20μl，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定肉桂酸峰面積，以對照品進(jìn)樣量X(μg)為橫座標(biāo)、峰面積值Y(mv.s)為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表7。
表7肉桂酸線性范圍測定結(jié)果

測定結(jié)果表明，肉桂酸對照品在進(jìn)樣量0.02712μg～0.18080μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
6、精密度試驗精密吸取上述對照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定，記錄肉桂酸對照品峰面積值，求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果見表8。實驗結(jié)果表明本法精密度良好。
表8精密度試驗

7、穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液(批號031017)，在室溫下，分別于配制后0、2、9、13、24小時測定肉桂酸峰面積，每次進(jìn)樣10μl，測定，結(jié)果見表9。實驗結(jié)果表明供試品溶液在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。
表9穩(wěn)定性試驗

8、重現(xiàn)性試驗精密稱取樣品5份(批號031017)，每份約0.3g，按供試品溶液制備方法操作，依法進(jìn)樣測定，計算肉桂酸含量，求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果見表10。實驗結(jié)果表明本法重現(xiàn)性良好。
表10重現(xiàn)性試驗


9、回收率測定采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同一批號樣品(批號031017)(肉桂酸含量為0.270mg/瓶，每瓶平均裝量為0.45g)約150mg，置25ml量瓶中，精密加入肉桂酸對照品溶液10ml，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。按正文方法，進(jìn)樣，測定，計算。結(jié)果表明，本法具有較好的回收率。結(jié)果見表11。
表11肉桂酸回收率測定結(jié)果

三、濱蒿內(nèi)酯注射用脈絡(luò)寧凍干粉為復(fù)方中藥制劑，為了有效地控制本品的質(zhì)量，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中以濱蒿內(nèi)酯為含測指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定本品中濱蒿內(nèi)酯的含量。
1、儀器與試藥儀器高效液相色譜儀Waters 600E泵，Waters 717自動進(jìn)樣器，Waters PAD2996二極管陣列檢測器；Waters Empower色譜工作站；Mettler AE240(十萬分之一)天平(梅特勒-托利多上海儀器有限公司)；SYZ-A石英亞沸高純水蒸餾器(江蘇信達(dá)儀器廠)。
試藥濱蒿內(nèi)酯對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號1511-200001)；乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純；成品及陰性對照品(由本公司提供)。
2、色譜條件的選擇色譜柱Diamonsil C18，5μm，250×4.6mm(迪馬公司產(chǎn))；流動相乙0腈-0.1％磷酸(23∶77)；柱溫30℃；流速1.0ml/min；檢測波長343nm。在此色譜條件下，濱蒿內(nèi)酯與樣品中其它組分分離良好，理論板數(shù)按濱蒿內(nèi)酯對照品峰計大于3000。(見圖8)。
3、供試品溶液的制備精密稱取裝量差異項下本品0.45g，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。(見圖9)。
4、空白試驗取缺石斛的陰性對照品，按供試品溶液制備方法操作，依法進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果，在對照品相同保留時間處無吸收峰。表明樣品中無干擾濱蒿內(nèi)酯的成分存在。(見圖10)。
5、線性關(guān)系的考察精密稱取濱蒿內(nèi)酯對照品13.52mg，置50ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，得濱蒿內(nèi)酯對照品溶液；分別精密吸取上述對照品溶液3μl、5μl、10μl、15μl、20μl，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定濱蒿內(nèi)酯峰面積，以對照品進(jìn)樣量X(μg)為橫座標(biāo)、峰面積值Y(mv.s)為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表12。
表12濱蒿內(nèi)酯對照品線性范圍測定結(jié)果

測定結(jié)果表明，濱蒿內(nèi)酯對照品在進(jìn)樣量0.08112μg～0.5408μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
6、精密度試驗精密吸取上述濱蒿內(nèi)酯對照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定，記錄濱蒿內(nèi)酯對照品峰面積值，求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。結(jié)果見表13。實驗結(jié)果表明本法精密度良好。
表13精密度試驗

7、穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液(批號031017)，在室溫下，分別于配制后0、4、8、12、24小時測定濱蒿內(nèi)酯峰面積，每次進(jìn)樣10μl，測定。結(jié)果見表14。實驗結(jié)果表明供試品溶液在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。
表14穩(wěn)定性試驗

8、重現(xiàn)性試驗精密稱取樣品5份(批號031017)，每份約0.45g，按供試品溶液制備方法操作，依法進(jìn)樣測定，計算濱蒿內(nèi)酯含量，求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果見表15。實驗結(jié)果表明本法重現(xiàn)性良好。
表15重現(xiàn)性試驗

9、回收率測定采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同一批號樣品(批號031017)(濱蒿內(nèi)酯含量為0.177mg/瓶，每瓶平均裝量為0.45g)約250mg，置10ml量瓶中，精密加入上述濱蒿內(nèi)酯對照品溶液3ml，照供試品溶液的制備方法操作，即得。按正文方法，進(jìn)樣，測定，計算。結(jié)果表明，本法具有較好的回收率。結(jié)果見表16。
表16濱蒿內(nèi)酯回收率測定結(jié)果

具體實施方式
下面通過具體實施方式
來進(jìn)一步說明本發(fā)明，旨在列舉本發(fā)明的具體實施方式
，不以任何形式構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
實施例一脈絡(luò)寧粉針劑的制備取3000g石斛、6000g玄參、6000g牛膝、5000g金銀花粉碎成粗粉，用70％乙醇以300ml/min速度滲漉提取，收集12倍生藥量的滲漉液，低溫減壓回收乙醇，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.20的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加8倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮至50℃下相對密度為1.15的浸膏，過濾，去除沉淀，調(diào)節(jié)pH值至1～2，等體積乙酸乙酯萃取8次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，50℃真空干燥得提取物338g。提取物中加注射用水2000ml加熱煮沸8分鐘，自然放冷，冷藏，過濾，濾液以截留分子量為5000的超濾膜超濾，收集超濾液，濾液中加入甘露醇200g，PVP 2g，補(bǔ)加注射用水至3000ml，調(diào)pH值6.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑1000支。
實施例二一脈絡(luò)寧粉針劑的制備取5000g石斛、5000g玄參、5000g牛膝、5000g金銀花粉碎成粗粉，用70％乙醇以100ml/min速度滲漉提取，收集12倍生藥量的滲漉液，低溫減壓回收乙醇，減壓濃縮至50℃下相對密度為1.20的浸膏，離心去除不溶性雜質(zhì)，加6倍量水，充分?jǐn)嚢?，靜置過夜，過濾，濾液減壓濃縮至50℃下相對密度為1.20的浸膏，過濾，去除沉淀，調(diào)節(jié)pH值至1～2，等體積乙酸乙酯萃取6次，合并萃取液，回收乙酸乙酯，60℃真空干燥得提取物345g。提取物中加注射用水2000ml加熱煮沸10分鐘，自然放冷，冷藏，過濾，濾液以截留分子量為5000的超濾膜超濾，收集超濾液，濾液中加入甘露醇330g，PVP 6g，補(bǔ)加注射用水至3000ml，調(diào)pH值6.5～7.0，除菌過濾，濾液分裝于西林瓶中，加塞，冷凍干燥，包裝，得凍干粉針劑1000支。
二鑒別(1)牛膝鑒別取粉針劑8瓶內(nèi)容物，加乙醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液加鹽酸1ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸至約5ml，加水10ml，用石油醚(60-90℃)提取2次，每次20ml，提取液蒸干，殘渣加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺牛膝陰性對照，同法制備陰性對照溶液。再另取牛膝對照藥材2g，加乙醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液加鹽酸1ml，同法制成對照藥材溶液。再取齊墩果酸對照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述四種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸(20∶5∶8∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰。供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照未見干擾。
(2)玄參鑒別取粉針劑6瓶內(nèi)容物，加水飽和正丁醇30ml，密塞，超聲處理1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺玄參陰性對照，同法制備陰性對照溶液。另取玄參對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰，放置30分鐘。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色主斑點。陰性對照未見干擾。
(3)石斛鑒別取粉針劑8瓶內(nèi)容物，加氯仿-甲醇-濃氨試液(5∶1∶0.1)混合液40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺石斛陰性對照，同法制備陰性對照溶液。再另取石斛對照藥材4g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-濃氨試液(7.5∶7.5∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的暗斑點。陰性對照未見干擾。
(4)金銀花鑒別取粉針劑2瓶內(nèi)容物，加乙醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺金銀花陰性對照，同法制備陰性對照溶液。再另取金銀花對照藥材1g，加乙醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為對照藥材溶液。再取綠原酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述四種溶液各2μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照未見干擾。
三含量測定綠原酸1、儀器與試藥儀器高效液相色譜儀Waters 600E泵，Waters 717自動進(jìn)樣器，Waters PDA2996二極管陣列檢測器；Waters Empower色譜工作站；Mettler AE240(十萬分之一)天平(梅特勒-托利多上海儀器有限公司)；SYZ-A石英亞沸高純水蒸餾器(江蘇信達(dá)儀器廠)。
試藥綠原酸對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號0753-200111)；乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純；成品及陰性對照品(由本公司提供)。
2、色譜條件的選擇色譜柱Diamonsil C18，5μm，250×4.6mm(迪馬公司產(chǎn))；流動相乙腈-0.1％磷酸(10∶90)；柱溫30℃；流速1.2ml/min；檢測波長327nm。在此色譜條件下，綠原酸與樣品中其它組分分離良好，理論板數(shù)按綠原酸對照品峰計大于3000。
3、供試品溶液的制備精密稱取裝量差異項下本品0.3g，置25ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
4、樣品測定取樣品三支，照供試品溶液制備方法制備，分別精密吸取供試品溶液10μl，按上述色譜條件測定，計算樣品中綠原酸的平均含量為36.847mg/瓶。
肉桂酸
1、儀器與試藥儀器同綠原酸含量測定.
試藥肉桂酸對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號0786-9802)；乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純；成品及陰性對照品(由本公司提供)。
2、色譜條件的選擇色譜柱Diamonsil C18，5μm，250×4.6mm(迪馬公司產(chǎn))；流動相乙腈-0.1％磷酸(32∶68)；柱溫30℃；流速1ml/min；檢測波長277nm。在此色譜條件下，肉桂酸與樣品中其它組分分離良好，理論板數(shù)按肉桂酸對照品峰計大于3000。(見圖6～8)。
3、供試品溶液的制備精密稱取裝量差異項下本品0.3g，置25ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
4、樣品測定取樣品三支，照供試品溶液制備方法制備，分別精密吸取供試品溶液10μl，按上述色譜條件測定，計算樣品中綠原酸的平均含量為0.277mg/瓶。
濱蒿內(nèi)酯1、儀器與試藥儀器同綠原酸含量測定試藥濱蒿內(nèi)酯對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號1511-200001)；乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純；成品及陰性對照品(由本公司提供)。
2、色譜條件的選擇色譜柱Diamonsil C18，5μm，250×4.6mm(迪馬公司產(chǎn))；流動相乙腈-0.1％磷酸(23∶77)；柱溫30℃；流速1.0ml/min；檢測波長343nm。在此色譜條件下，濱蒿內(nèi)酯與樣品中其它組分分離良好，理論板數(shù)按濱蒿內(nèi)酯對照品峰計大于3000。
3、供試品溶液的制備精密稱取裝量差異項下本品0.45g，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
4、樣品測定取樣品三支，照供試品溶液制備方法制備，分別精密吸取供試品溶液10μl，按上述色譜條件測定，計算樣品中綠原酸的平均含量為0.187mg/瓶。
權(quán)利要求
1.一種脈絡(luò)寧注射用粉針劑，由石斛、玄參、牛膝、金銀花為原料藥制成，其特征在于，肉桂酸含量為0.44～0.90mg/g，綠原酸含量為66.7～133.3mg/g。
2.如權(quán)利要求1所述的脈絡(luò)寧注射用粉針劑，其特征在于，其中濱蒿內(nèi)酯含量為0.27～0.55mg/g。
3.如權(quán)利要求2所述的脈絡(luò)寧注射用粉針劑，其特征在于，肉桂酸含量為0.60～0.80mg/g，綠原酸含量為80.7～105.5mg/g，濱蒿內(nèi)酯含量為0.35～0.45mg/g。
4.如權(quán)利要求2所述的脈絡(luò)寧注射用粉針劑，其特征在于，肉桂酸含量為0.60～0.70mg/g，綠原酸含量為80.7～95.5mg/g，濱蒿內(nèi)酯含量為0.35～0.40mg/g。
5.權(quán)利要求1～4任一所述的脈絡(luò)寧注射用粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法包括鑒別項和含量測定項，其中鑒別項為牛膝、玄參、石斛、金銀花的薄層鑒別中一種或多種的組合，含量測定項為濱蒿內(nèi)酯、綠原酸、肉桂酸的含量測定中的一種或多種的組合。
6.如權(quán)利要求5所述的脈絡(luò)寧注射用粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法鑒別項包括以下全部或部分項目牛膝以牛膝對照藥材、齊墩果酸為對照，照薄層色譜法操作，選擇硅膠G薄層板，環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，硫酸乙醇溶液噴霧顯色；樣品前處理為加乙醇超聲處理，濾過，濾液加鹽酸加熱回流，濾過，加水，石油醚提取，提取液蒸干，殘渣加乙醇使溶解，即得；玄參以玄參對照藥材為對照，照薄層色譜法操作，選擇硅膠G薄層板，正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，香草醛硫酸溶液噴霧顯色；樣品前處理為加水飽和正丁醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；石斛以石斛對照藥材為對照，照薄層色譜法操作，選擇硅膠GF254薄層板，環(huán)己烷-醋酸乙酯-濃氨試液為展開劑，紫外光燈(254nm)下檢視；樣品前處理為加氯仿-甲醇-濃氨試液混合液超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；金銀花以綠原酸、金銀花對照藥材為對照，照薄層色譜法操作，選擇聚酰胺薄膜，醋酸丁酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，置紫外光燈(365nm)下檢視；樣品前處理為加乙醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得。
7.如權(quán)利要求5所述的脈絡(luò)寧注射用粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法鑒別項包括以下全部或部分項目牛膝以牛膝對照藥材、齊墩果酸為對照，照薄層色譜法分別將樣品、牛膝對照藥材、齊墩果酸點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20∶5∶8∶0.1的環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰；其中樣品前處理為加乙醇超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液加鹽酸，加熱回流0.5～2小時，濾過，濾液濃縮，加水，用石油醚提取1～3次，提取液蒸干，殘渣加乙醇使溶解，即得；玄參以玄參對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品、玄參對照藥材點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰，放置15～45分鐘；樣品前處理為加水飽和正丁醇l，超聲處理0.5～1.5小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；石斛以石斛對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品與石斛對照藥材點于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為7.5∶7.5∶0.2的環(huán)己烷-醋酸乙酯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視；樣品前處理為加體積比為5∶1∶0.1的氯仿-甲醇-濃氨試液混合液，超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；金銀花以綠原酸、金銀花對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品、綠原酸與金銀花對照藥材點于同一聚酰胺薄膜上，以體積比為7∶2.5∶2.5的醋酸丁酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；樣品前處理為加乙醇，超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得。
8.如權(quán)利要求5所述的脈絡(luò)寧注射用粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法的含量測定項包括以下全部或部分項目綠原酸色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為327nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品，加50％甲醇制成每1ml含40μg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 精密稱取注射用粉針劑適量，置量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；肉桂酸色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為277nm，理論板數(shù)按肉桂酸峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取肉桂酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 精密稱取注射用粉針劑適量，置量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；濱蒿內(nèi)酯色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為343nm，理論板數(shù)按濱蒿內(nèi)酯峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取濱蒿內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 精密稱取注射用粉針劑適量，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。
9.如權(quán)利要求8所述的脈絡(luò)寧注射用粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，綠原酸含量測定項下流動相中乙腈-0.1％磷酸的比為10∶90，肉桂酸含量測定項下流動相中乙腈-0.1％磷酸的比為32∶68，濱蒿內(nèi)酯含量測定項下流動相中乙腈-0.1％磷酸的比為23∶77。
10.權(quán)利要求5所述的脈絡(luò)寧注射用粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，該方法為鑒別項牛膝以牛膝對照藥材、齊墩果酸為對照，照薄層色譜法分別將樣品、牛膝對照藥材、齊墩果酸點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20∶5∶8∶0.1的環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰；其中樣品前處理為加乙醇超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液加鹽酸，加熱回流0.5～2小時，濾過，濾液濃縮，加水，用石油醚提取1～3次，提取液蒸干，殘渣加乙醇使溶解，即得；玄參以玄參對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品、玄參對照藥材點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，105℃加熱至色斑顯色清晰，放置15～45分鐘；樣品前處理為加水飽和正丁醇l，超聲處理0.5～1.5小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；石斛以石斛對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品與石斛對照藥材點于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為7.5∶7.5∶0.2的環(huán)己烷-醋酸乙酯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視；樣品前處理為加體積比為5∶1∶0.1的氯仿-甲醇-濃氨試液混合液，超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得；金銀花以綠原酸、金銀花對照藥材為對照，照薄層色譜法分別將樣品、綠原酸與金銀花對照藥材點于同一聚酰胺薄膜上，以體積比為7∶2.5∶2.5的醋酸丁酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；樣品前處理為加乙醇，超聲處理15～45分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，即得。含量測定項綠原酸色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為10∶90的乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為327nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品，加50％甲醇制成每1ml含40μg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 精密稱取注射用粉針劑適量，置量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；肉桂酸色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為32∶68的乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為277nm，理論板數(shù)按肉桂酸峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取肉桂酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備精密稱取注射用粉針劑適量，置量瓶中，加50％甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；濱蒿內(nèi)酯色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為23∶77的乙腈-0.1％磷酸為流動相，檢測波長為343nm，理論板數(shù)按濱蒿內(nèi)酯峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取濱蒿內(nèi)酯對照品，加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備 精密稱取注射用粉針劑適量，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種脈絡(luò)寧注射制劑，具體而言，是一種脈絡(luò)寧粉針劑及其質(zhì)量控制方法。本發(fā)明由石斛、牛膝、玄參、金銀花四種藥材按一定重量份配比提取有效成分后加入藥用賦形劑，經(jīng)超濾、調(diào)pH值，除菌過濾，加塞，冷凍干燥得凍干粉針劑。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法包括四味藥材的鑒別和濱蒿內(nèi)酯、肉桂酸、綠原酸的含量測定。本發(fā)明的藥物有效成分含量高，劑型穩(wěn)定，采用的質(zhì)量控制方法可操作性強(qiáng)，能很好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。
文檔編號A61P9/00GK101085224SQ20061001421
公開日2007年12月12日 申請日期2006年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月8日
發(fā)明者葉正良, 鄭永鋒, 宋兆輝, 白雨 申請人:天津天士力之驕藥業(yè)有限公司