專利名稱：人乳頭瘤病毒的病毒樣顆粒疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用純化的不同型別人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus, HPV)晚期蛋白LI自組裝成的病毒樣顆粒(VLPs)經(jīng)過 適當(dāng)比例配伍，制備HPV疫苗，用于預(yù)防HPV引起的部分疾病。
技術(shù)背景HPV是一類雙鏈小分子DNA病毒，具有嚴(yán)格的種屬特異性，主 要感染人的皮膚和粘膜組織，引起相應(yīng)部位上皮組織的增生性病變。 根據(jù)感染部位可分為皮膚型和粘膜型兩組，粘膜型HPV又根據(jù)引起 病變的性質(zhì)分為兩類引起粘膜上皮良性增生病變的低危型和與人類 多種器官惡性腫瘤(如宮頸癌、陰莖癌、喉及頭頸癌、支氣管癌、食 管癌、口腔癌等)密切相關(guān)的高危型。根據(jù)核酸序列同源性，HPV可 分為100多型，不同型別的HPV引起不同的疾病。HPVl、 2、 3、 4、 7、 10、 26-29在正?；蛎庖呷睋p個(gè)體中引起良性疣。HPV5、 8、 9、 12、 14、 15、 17、 19-25、 36、 46-50在免疫缺損個(gè)體中引起扁平狀損 傷。HPV6、 11、 34、 39、 41-44、 51-55引起生殖道或呼吸道粘膜發(fā) 生非惡性濕疣。完整的HPV病毒顆粒直徑約55nm，由病毒基因組DNA與衣殼 兩部分組成，無包膜，衣殼呈二十面體，由72個(gè)殼粒組成，病毒顆 粒在CsCl中的浮力密度為1.34g/cm3。病毒基因組是雙鏈環(huán)狀DNA， 約8kb?；蚪M含至少8個(gè)開放閱讀框(ORF)，各ORF間可部分或全 部重疊，基因組根據(jù)功能分為三個(gè)功能區(qū)早期區(qū)，編碼6個(gè)非結(jié)構(gòu) 蛋白(E1、 E2、 E4、 E5、 E6、 E7)，編碼的蛋白與病毒的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和 轉(zhuǎn)化作用有關(guān)晚期區(qū)，含L1、 L2兩個(gè)ORF，編碼主要衣殼蛋白L1 和次要衣殼蛋白L2兩個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白，參與病毒粒子的組裝；長(zhǎng)控制區(qū) (LCR)，又稱非編碼區(qū)或上游調(diào)控區(qū)，不編碼任何蛋白，但含有復(fù)制 起點(diǎn)、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子等多種調(diào)控元件，影響病毒的復(fù)制和 轉(zhuǎn)錄。HPV衣殼是由L1和L2蛋白共同構(gòu)成，二者比例約5: 1。單 獨(dú)的Ll蛋白可以自發(fā)組裝成直徑與HPV成熟病毒大小相近(約55nm) 的VLPs， VLPs和天然HPV病毒的形態(tài)相似，都是二十面體結(jié)構(gòu)， 只是VLP內(nèi)部無病毒核酸。
疫苗防治HPV相關(guān)疾病是近幾年來的研究熱點(diǎn)。由于目前無法 通過組織培養(yǎng)獲得大量的HPV病毒，并且考慮到HPVE6、 E7基因 的潛在致癌性，因此，不能通過減毒活疫苗或滅活疫苗等傳統(tǒng)疫苗制 備方式獲得HPV疫苗。伴隨分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的發(fā)展，目 前HPV疫苗研究主要集中在VLPs疫苗、重組病毒疫苗、亞單位疫 苗等。VLPs疫苗主要是以HPV主衣殼蛋白Ll為首選目的蛋白， HPVL1蛋白分別在原核表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)和桿狀病毒表達(dá)系 統(tǒng)中得以表達(dá)，且可自組裝成VLPs，其動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及部分臨床實(shí)驗(yàn)結(jié) 果表明Ll蛋白裝配成的VLPs具有良好的免疫原性。
最早關(guān)于HPV疫苗組份的研究主要集中于HPV6、 HPVll、 HPV16和HPV18,英國(guó)葛蘭素公司在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)分別表達(dá) HPV16和HPV18，美國(guó)默克公司在釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)中分別表達(dá)了 HPV16、 18、 6和11等型別的L1蛋白，所得蛋白能形成病毒樣顆粒。 這些疫苗的配伍成分是基于歐美部分地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)査結(jié)果，也主 要是針對(duì)當(dāng)?shù)氐牟《玖餍兄?。然而全世界流行病學(xué)總體調(diào)查研究結(jié)果 表明，HPV引起惡性腫瘤的型別在世界各地不盡相同。其中HPV16 是最主要的致癌因素，其他型別在世界各地與腫瘤發(fā)生的相關(guān)性不 同，在中國(guó)及亞洲的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，HPV58與宮頸癌的發(fā) 生高度相關(guān)，相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道HPV58的感染率達(dá)到10X以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超 過HPV18 (4%)，這與在歐洲、美洲及非洲的流行病調(diào)査結(jié)果不同。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種能夠預(yù)防人乳頭瘤病毒感染的由不同型別 HPV病毒樣顆粒配伍的疫苗組合物其中包括HPV 6 LlVLPs、 HPV 16LlVLPs和HPV58LlVLPs等不同型別的VLPs，其中每毫升疫苗 中各組份的含量分別為HPV6LlVLPs: 10 60嗎、HPV16LlVLPs: 5 40嗎和HPV58L1: VLPslO 60嗎。其中所述疫苗組分可附加一 種或兩種其他HPV型別的VLPs。其中附加HPV型別包括HPV1、 HPV2、 HPV3、 HPV5、 HPV8、 HPV 10、 HPV 11、 HPV 18、 HPV31、 HPV33、 HPV35、 HPV45、 HPV52、 HPV53、 HPV57和HPV59。首先獲得重組VLPs，純度大于95%，混合所得各種型別VLPs， 將VLPs混合物與佐劑混合，制備出能預(yù)防人乳頭瘤病毒感染的疫苗。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)l)分別分泌表達(dá)HPV6L1、 HPV16L1和 HPV58L1蛋白，所得各種L1蛋白可自組裝成VLPs。 2)根據(jù)在亞洲
和中國(guó)部分地區(qū)進(jìn)行的人乳頭瘤病毒感染流行病學(xué)調(diào)査結(jié)果，應(yīng)用HPV6、 HPV16和HPV58等型別的Ll蛋白形成的VLPs制備的疫苗 能預(yù)防60%HPV引起的感染。附加的HPV型別可以進(jìn)一步提高疫苗 的預(yù)防效力。


圖1示出重組HPV6、 HPV16和HPV58VLPs混合物電鏡照片。
圖2示出重組HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV58VLPs混合物電鏡照片。
圖3示出小鼠免疫中，針對(duì)單價(jià)HPV6疫苗與針對(duì)HPV6、 HPV16和 HPV58疫苗中HPV6的抗體應(yīng)答的比較。
圖4示出小鼠免疫中，針對(duì)單價(jià)HPV6疫苗與針對(duì)HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV58VLPs疫苗中HPV6的抗體應(yīng)答的比較。
圖5示出小鼠免疫中，針對(duì)單價(jià)HPVll疫苗與針對(duì)HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV58VLPs疫苗中HPV6的抗體應(yīng)答的比較。
圖6示出小鼠免疫中，針對(duì)單價(jià)HPV16疫苗與針對(duì)HPV6、 HPV16 和HPV58疫苗中HPV6的抗體應(yīng)答的比較。
圖7示出小鼠免疫中，針對(duì)單價(jià)HPV16疫苗與針對(duì)HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV58VLPs疫苗中HPV6的抗體應(yīng)答的比較。 圖8示出小鼠免疫中，針對(duì)單價(jià)HPV18疫苗與針對(duì)HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV58VLPs疫苗中HPV6的抗體應(yīng)答的比較。 圖9示出小鼠免疫中，針對(duì)單價(jià)HPV58疫苗與針對(duì)HPV6、 HPV16 和HPV58疫苗中HPV6的抗體應(yīng)答的比較。
圖IO示出小鼠免疫中，針對(duì)單價(jià)HPV58疫苗與針對(duì)HPV6、HPV11、 HPV16、 HPV18和HPV58VLPs疫苗中HPV6的抗體應(yīng)答的比較。
具體實(shí)施方式
以下實(shí)施例是用于說明本發(fā)明，但不是限制其范圍。實(shí)施例I HPV 6 LlVLPs、 HPV 16L1 VLPs和HPV 58 Ll VLPs混合VLPs疫苗的制備將純化的HPV6L1、 HPV16L1和HPV58L1三種VLPs按40|ng: 20pg: 40pg的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃 度約為lmg/ml，充分混合后，于4X:保存。實(shí)施例2 HPV 6 LlVLPs、 HPV 11LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 18LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備將純化的HPV6L1、HPV 11L1、HPV16L1、HPV 18L1和HPV58L1 五種VLPs按40嗎40嗎20嗎40嗎40嗎的比例配制成混合疫 苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4 "C保存。實(shí)施例3單價(jià)VLPs和混合VLPs疫苗免疫原性比較將制備好的單價(jià)VLPs和混合VLPs疫苗分別接種Balb/C小鼠， 小鼠隨機(jī)分組，每組5只，腹腔接種，分別于O、 14、 28天接種。于 接種后28天取血用ELISA法檢測(cè)抗體滴度。 實(shí)施例4 ELISA法檢測(cè)小鼠血清抗體用包被緩沖液將已知抗原稀釋至l)ag/ml，每孔加0.1ml， 4"C過 夜。次日洗滌3次。待檢樣品經(jīng)2倍系列稀釋，最高稀釋度為1: 4096， 取稀釋后的樣品0.1ml加到上述已包被之反應(yīng)孔中，置37X:孵育1 小時(shí)，洗滌。于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體O.lml， 37 t:孵育30-60分鐘，洗滌，最后一遍用DDW洗滌。于各反應(yīng)孔中加 入臨時(shí)配制的TMB底物溶液O.lml， 37X:i0 30分鐘。于各反應(yīng)孔 中加入2M硫酸0.05ml。結(jié)果判定在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm 測(cè)OD值。以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì) 照OD值的2.1倍，即為陽性。實(shí)施例5 HPV 6 LlVLPs、 HPV 16LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混 合VLPs疫苗的制備將純化的HPV6L1、 HPV16L1和HPV58L1三種VLPs按10pg:5嗎IO嗎的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4i:保存。實(shí)施例6 HPV 6 LlVLPs、 HPV 16LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混 合VLPs疫苗的制備將純化的HPV6L1 、 HPV16L1和HPV58L1三種VLPs按60pg: 25|ig: 60嗎的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃 度約為lmg/ml，充分混合后，于4。C保存。實(shí)施例7 HPV 6 LlVLPs、 HPV11L1VLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 18LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備將純化的HPV6L1、HPV 11L1、HPV16L1、HPV 18L1和HPV58L1 五種VLPs按10嗎IO嗎5嗎IO嗎10 |ig的比例配制成混合疫 苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4
x:保存。實(shí)施例8 HPV 6 LlVLPs、 HPV11L1VLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 18L1 VLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6U、 HPV 11L1、 HPV16L1、 HPV 18L1和HPV58L1 五種VLPs按60嗎60略20嗎60嗎60嗎的比例配制成混合疫 苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4 "C保存。實(shí)施例9 HPV 6 LlVLPs、 HPV 1LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 31LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV 1L1、 HPV16L1、 HPV31L1和HPV58L1五 種VLPs按60|ug: 60嗎20嗎60昭60叫的比例配制成混合疫苗， 同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4"C保 存。實(shí)施例10HPV6LlVLPs、 HPV1L1VLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV31LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備將純化的HPV6L1、 HPV 1L1、 HPV16L1、 HPV31L1和HPV58L1五種VLPS按IO嗎IO嗎:5嗎IO昭:10嗎的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4-C保 存。實(shí)施例11 HPV 6 LlVLPs、 HPV 1LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV31L1 VLPs和HPV 58 LI VLPs混合VLPs疫苗的制備將純化的HPV6L1、 HPV 1L1、 HPV16L1、 HPV31L1和HPV58L1五
禾中VLPs按40^g: 40|Ig: 20 ng: 40pg: 40 pg的比例酉己偉lj成'混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4t:保 存。實(shí)施例12HPV6LlVLPs、 HPV33LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 45LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV 33Ll、 HPV16L1、 HPV 45L1和HPV58U五種VLPS按40嗎40昭:20昭:40嗎:40 |Llg的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4 。C保存。實(shí)施例13HPV6LlVLPs、 HPV33LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV45LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備將純化的HPV6L1、 HPV33L1、 HPV16L1、 HPV 45L1和HPV58L1五種VLPS按10嗎10, 5)Llg: IO嗎:IO嗎的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4 "C保存。實(shí)施例14HPV6LlVLPs、 HPV33LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV45LlVLPs和HPV 58 Ll VLPs混合VLPs疫苗的制備將純化的HPV6L1、 HPV33L1、 HPV16L1、 HPV 45L1和HPV58L1五種VLPs按60嗎60嗎:25略60嗎:60(Ig的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4'C保存。實(shí)施例15HPV6LlVLPs、 HPV33LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV45LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV33 Ll、 HPV16L1、 HPV 45L1和HPV58L1 五種VLPs按60嗎60昭25昭60|ug: 60 pg的比例配制成混合疫 苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4 。C保存。實(shí)施例16 HPV 6 LlVLPs、 HPV2LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 52LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV2L1、 HPV16L1、 HPV 52L1和HPV58L1五 種VLPs按60嗎:60嗎:25 , 60, 60嗎的比例配制成混合疫苗， 同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4"C保 存。實(shí)施例17 HPV 6 LlVLPs、 HPV 2LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 52LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV2L1、 HPV16L1、 HPV52L1和HPV58L1五種VLPs按10嗎:IO嗎:5嗎10|Ig: 10嗎的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為1mg/ml，充分混合后，于4"C保 存。實(shí)施例18HPV6LlVLPs、 HPV2LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 52LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV2L1、 HPV16L1、 HPV52L1和HPV58U五 種VLPs按鄉(xiāng)g: 40嗎:20吸40險(xiǎn)40 |ig的比例配制成混合疫苗， 同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4'C保 存。實(shí)施例19 HPV 6 LlVLPs、 HPV3LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 53LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV3L1、 HPV16L1、 HPV 53L1和HPV58L1五 種VLPs按40, 40, 20 [ig: 40, 40嗎的比例配制成混合疫苗， 同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4t:保 存。實(shí)施例20HPV 6 LlVLPs、 HPV 3LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 53LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV3L1、 HPV16L1、 HPV53L1禾B HPV58L1五 種VLPS按10嗎10|Llg: 5嗎IO嗎:10嗎的比例配制成混合疫苗， 同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4"C保 存。實(shí)施例21HPV 6 LlVLPs、 HPV 3LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 53LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV3L1、 HPV16L1、 HPV53L1和HPV58L1五 種VLPs按60嗎:60, 25嗎60嗎:60嗎的比例配制成混合疫苗， 同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4"C保 存。實(shí)施例22HPV 6 LlVLPs、 HPV SLlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 35LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV5L1、 HPV16L1、 HPV35L1和HPV58L1五
種VLPs按60嗎:60嗎:25嗎60jxg: 60 pg的比例配制成混合疫苗， 同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4"C保 存。實(shí)施例23HPV 6 LlVLPs、 HPV 5LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 35LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV5L1、 HPV16L1、 HPV35L1和HPV58L1五種VLPS按10嗎IO嗎5嗎10|Ig: 10嗎的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4"C保 存。實(shí)施例24HPV 6 LlVLPs、 HPV 5LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 35LlVLPs和HPV 58 LI VLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV5L1、 HPV16L1、 HPV 35L1和HPV58L1五 種VLPs按40嗎:40嗎:20 JIg: 40嗎:40 |Hg的比例配制成混合疫苗， 同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4'C保 存。實(shí)施例25HPV 6 LlVLPs、 HPV 8LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 57LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV8L1、 HPV16L1、 HPV 57L1和HPV58L1五 種VLPs按40嗎40嗎20昭40昭40嗎的比例配制成混合疫苗， 同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4"C保 存。實(shí)施例26HPV 6 LlVLPs、 HPV 8LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 57LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV8L1、 HPV16L1、 HPV57L1和HPV58L1五 種VLPS按10嗎IO嗎:5嗎IO嗎:10 |lg的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4i:保 存。實(shí)施例27HPV 6 LlVLPs、 HPV 8LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 57LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV8L1、 HPV16L1、 HPV57L1禾H HPV58L1五種VLPS按60嗎:60嗎:25 (Ig: 60|Ig: 60 |Llg的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4t:保 存。實(shí)施例28HPV 6 LlVLPs、 HPV10LlVLPs、 HPV16LlVLPs、 HPV 59LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV10L1、 HPV16L1、 HPV597L1和HPV58L1 五種VLPs按60pg: 60嗎25嗎60昭60嗎的比例配制成混合疫 苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4 r保存。實(shí)施例29HPV6LlVLPs、 HPV10LlVLPs、 HPV16LlVLPs、 HPV 59LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV10L1、 HPV16L1、 HPV 597L1和HPV58L1 五種VLPs按40|Hg: 40嗎:20嗎:40嗎:40嗎的比例配制成混合疫 苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4 x:保存。實(shí)施例30HPV6LlVLPs、 HPV 10LlVLPs、 HPV 16LlVLPs、 HPV 59LlVLPs和HPV 58 LlVLPs混合VLPs疫苗的制備 將純化的HPV6L1、 HPV10L1、 HPV16L1、 HPV 597L1和HPV58L1五種VLPS按10嗎10|Ig: 5嗎IO嗎10嗎的比例配制成混合疫苗，同時(shí)加入佐劑氫氧化鋁，終濃度約為lmg/ml，充分混合后，于4 "C保存。
權(quán)利要求
1、一種人乳頭瘤病毒的病毒樣顆粒疫苗，其特征在于每毫升疫苗中各組份的含量分別為HPV6L1VLPs10～60μg、HPV16L1VLPs5～40μg和HPV58L1VLPs10～60μg。
2、 一種如權(quán)利要求1所述的人乳頭瘤病毒的病毒樣顆粒疫苗， 其中所述疫苗組分可附加其他HPV型別的VLPs，其中附加HPV型 別包括一種或兩種如下型別的VLPs: HPV1: 10 60^ig、HPV2: 10 60ng、 HPV3: 10 60|ag、 HPV 5: 10 60(ig、 HPV 8: 10 60|ng、 HPV 10: 10 60嗎、HPV 11: 10 60|ig、 HPV 18: 10 60>ig、 HPV 31: 10 60|ig、 HPV33: 10 60|ig、 HPV35: 10 60pig、 HPV45: 10 60^ig、 HPV 52: 10 60嗎、HPV 53: 10 60|ig、 HPV 57: 10 60(ig和HPV59: 10 60|ig。
3、 如權(quán)利要求1所述的人乳頭瘤病毒的病毒樣顆粒疫苗，其中 還包括一種疫苗佐劑。
4、 如權(quán)利要求3所述的人乳頭瘤病毒的病毒樣顆粒疫苗，疫苗 佐劑為氫氧化鋁。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種人乳頭瘤病毒的病毒樣顆粒疫苗，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。每毫升疫苗中各組份的含量分別為HPV6L1VLPs10～60μg、HPV16L1VLPs5～40μg和HPV58L1VLPs10～60μg。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)分別分泌表達(dá)HPV6L1、HPV16L1和HPV58L1蛋白，所得各種L1蛋白可自組裝成VLPs。根據(jù)在亞洲和中國(guó)部分地區(qū)進(jìn)行的人乳頭瘤病毒感染流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，應(yīng)用HPV6、HPV16和HPV58等型別的L1蛋白形成的VLPs制備的疫苗能預(yù)防60％HPV引起的感染。附加的HPV型別可以進(jìn)一步提高疫苗的預(yù)防效力。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101116745SQ20061001707
公開日2008年2月6日 申請(qǐng)日期2006年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月4日
發(fā)明者劉大維, 維 孔 申請(qǐng)人:長(zhǎng)春百克生物科技有限公司