專利名稱：苦參堿脂質(zhì)體滴丸及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種苦參堿制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
苦參堿(matrine，MAT)來源于豆科植物苦參Sophora flavescens Ait、苦豆子S.alopecuroides L.及廣豆根S.subprostrata Chun et T.Chen中，具有多方面的藥理作用及臨床功能，如抗腫瘤、抗菌、抗寄生蟲、抗病毒、抗心率失常、消腫利尿、抗過敏和減輕環(huán)磷酰胺引起的白細胞減少等作用。苦參堿的抗癌作用機制表明，苦參堿對腫瘤細胞不僅有直接的殺傷作用，還有誘導某些腫瘤細胞向正常細胞分化和促凋亡作用。另外，苦參堿在抗腫瘤的同時，對正常細胞不產(chǎn)生破壞作用，同時還能升高白細胞，提高機體免疫功能。
脂質(zhì)體作為一種新劑型，在抗腫瘤的治療應(yīng)用上，具有許多獨特的作用特點，如對腫瘤細胞具有被動靶向性。這種性能對于提高抗腫瘤藥物臨床療效，降低不良反應(yīng)具有十分重要的意義。
苦參堿目前常用的劑型是注射液，考慮到注射給藥用藥方法復雜，必須到醫(yī)院用藥，對患者來說不很方便，同時注射液一般都存在穩(wěn)定性不好的問題。將苦參堿制備成脂質(zhì)體，可以達到靶向給藥，然而由卵磷脂和膽固醇等組成的傳統(tǒng)脂質(zhì)體是熱力學不穩(wěn)定體系，在體內(nèi)外的弱穩(wěn)定性限制了它的使用，極大影響其作為藥物載體的應(yīng)用。
滴丸劑是由藥物和固體基質(zhì)加熱熔融成溶液混懸液或乳液后，滴入不相混溶的冷凝劑中，由于熔融液滴在冷凝液中的界面張力作用而收縮成丸，隨后冷凝成固態(tài)而制得。滴丸劑是固體分散的一種形式。由于它具有溶出快、生物利用度高、療效好、副作用小、藥物穩(wěn)定性好及制備簡單、質(zhì)量易控等優(yōu)點，因此收到醫(yī)藥界的廣泛重視。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種苦參堿脂質(zhì)體滴丸及其制備方法，該方法解決苦參堿脂質(zhì)體不穩(wěn)定性問題，增加了苦參堿口服新劑型；該方法得到的苦參堿脂質(zhì)體滴丸崩解速度快、吸收完全，具有靶向性。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是一種苦參堿脂質(zhì)體滴丸，其特征在于它主要由苦參堿脂質(zhì)體和輔料原料混合滴制到冷卻液中制成滴丸而成，苦參堿脂質(zhì)體與輔料的重量配比為1∶1-10，輔料為水溶性基質(zhì)；所述的苦參堿脂質(zhì)體主要由苦參堿、大豆卵磷脂和膽固醇原料制備而成，苦參堿與大豆卵磷脂和膽固醇的重量配比為1∶1-5，其中，大豆卵磷脂與膽固醇的重量配比為1-5∶1。
所述的水溶性基質(zhì)為分子量為4000-6000的聚乙二醇、明膠、硬脂酸鈉、甘油、分子量為188的泊洛沙姆等中的任意一種或任意兩種或兩種以上的混合物，任意兩種或兩種以上混合時，為任意配比。
上述苦參堿脂質(zhì)體滴丸的制備方法，其特征在于它包括如下步驟1)、制備苦參堿脂質(zhì)體苦參堿脂質(zhì)體主要由苦參堿、大豆卵磷脂和膽固醇原料制備而成，苦參堿與大豆卵磷脂和膽固醇的重量配比為1∶1-5，其中，大豆卵磷脂與膽固醇的重量配比為1-5∶1；用熔融法、逆向蒸發(fā)法、乙醚注入法或薄膜超聲法等制備苦參堿脂質(zhì)體；2)、混合熔融按苦參堿脂質(zhì)體和輔料的重量配比為1∶1-10選取苦參堿脂質(zhì)體和輔料，加熱至80℃以上熔融，充分混合攪勻，得熔融物，保溫備用；3)、滴制預熱滴丸機，使滴丸機的儲液室為80℃以上恒溫，將上述得到的熔融物放入儲液室中，以20-60滴/分的滴速滴入滴丸機的冷卻液中，制成滴丸；4)、制成品收集滴丸，濾除冷卻液，干燥得到產(chǎn)品。
所述的冷卻液為甲基硅油、二甲基硅油、液體石蠟或其他植物油。
所述的步驟3)中滴丸機的滴頭的溫度優(yōu)選60-90℃；滴丸機的管口的溫度優(yōu)選70-90℃；冷卻液的最佳溫度梯度是20--10℃；滴距優(yōu)選的范圍是4-16cm。
本發(fā)明苦參堿脂質(zhì)體滴丸可用于治療惡性腫瘤、心律失常、心力衰竭、病毒性心肌炎、冠心病等疾病。
通過藥理實驗研究苦參堿脂質(zhì)體分別對小鼠S180、EAC、H22腫瘤的抑制作用以及對免疫器官的影響。分別用小鼠S180、EAC、H22移植性腫瘤造模，解剖各組荷瘤小鼠，取瘤體、脾臟、胸腺稱濕重并計算抑瘤率，檢測淋巴細胞轉(zhuǎn)化率(LTT)。結(jié)果表明苦參堿脂質(zhì)體中劑量抑瘤作用最高，與同等劑量苦參堿相比，對S180、EAC、H22的抑制作用均優(yōu)于苦參堿、對H22小鼠的LTT高于苦參堿?？鄥A經(jīng)脂質(zhì)體包裹處理后，由于脂質(zhì)體的靶向作用，使苦參堿定向聚集于腫瘤細胞釋放，較苦參堿有更強的抗瘤效果，且在抑瘤的同時增強機體免疫力。同法比較苦參堿脂質(zhì)體滴丸和苦參堿脂質(zhì)體對小鼠S180、EAC、H22腫瘤的抑制作用以及對免疫器官的影響發(fā)現(xiàn)，由于將苦參堿脂質(zhì)體分散于水溶性基質(zhì)中，增加了苦參堿脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，提高了其生物利用度，苦參堿脂質(zhì)體滴丸的抗腫瘤作用與苦參堿脂質(zhì)體相當。
用于體外培養(yǎng)的2.2.15細胞是目前體外抗HBV藥物篩選和評價的較好模型，觀察和比較苦參堿脂質(zhì)體滴丸、苦參堿脂質(zhì)體、苦參堿三者對2.2.15細胞分泌HBsAg，HBeAg的影響及藥物的細胞毒性，初步評價苦參堿脂質(zhì)體的抗HBV作用。結(jié)果表明苦參堿脂質(zhì)體滴丸、苦參堿脂質(zhì)體、苦參堿作用于2.2.15細胞11d后，對細胞的半數(shù)毒性濃度(TC50)分別為8.47mg/ml、7.29mg/ml和1.33mg/m1，對HBsAg和HBeAg抑制的半數(shù)有效濃度(IC50)分別為0.065mg/m1、0.078mg/ml，3.35mg/ml，苦參堿脂質(zhì)體對HBsAg和HBeAg的治療指數(shù)(TI)分別為93.34、90.46和2.17。說明苦參堿脂質(zhì)體滴丸在體外細胞培養(yǎng)中對HBsAg和HBeAg的分泌有較好的抑制作用，可以提高苦參堿的抗HBV作用。
本發(fā)明采用口服的形式，成人每日口服三次，每次0.1-0.2g，三個月為一個療程。
本發(fā)明制備的苦參堿脂質(zhì)體滴丸切片用羅丹蘭染色，用E200型Nikon ECLIPSE生物顯微鏡觀察得到苦參堿脂質(zhì)體在滴丸中形態(tài)完整，見圖3、圖4。
本發(fā)明的苦參堿脂質(zhì)體滴丸，由于將苦參堿脂質(zhì)體制備成滴丸，既解決了苦參堿的靶向性，又解決了脂質(zhì)體制劑的不穩(wěn)定性問題。同時采用脂質(zhì)體滴丸劑的形式，增加了新劑型，填補了劑型空白。本發(fā)明制備方法簡單，得到的滴丸光滑、圓整、色澤好，且該劑型崩解速度快，吸收完全，具有靶向性，生物利用度高。


圖1是本發(fā)明苦參堿脂質(zhì)體滴丸的圖片(批號20060410)圖2是本發(fā)明苦參堿脂質(zhì)體滴丸的圖片(批號20060412)圖3是本發(fā)明苦參堿脂質(zhì)體滴丸截面顯微鏡圖(批號20060410)圖4是本發(fā)明苦參堿脂質(zhì)體滴丸截面顯微鏡圖(批號20060412)具體實施方式
為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實施例進一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容不僅僅局限于下面的實施例。
實施例1一、用乙醚注入法制備苦參堿脂質(zhì)體(1)制備苦參堿脂質(zhì)體以pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液為溶劑配制1％苦參堿溶液，取120ml于錐形瓶中，將大豆卵磷脂1.2g，膽固醇0.6mg溶于60ml乙醚中。電磁攪拌下緩緩將乙醚溶液用五號針頭(針尖在液面下)，注入苦參堿溶液中，攪拌均勻后加熱至65℃，揮發(fā)除去乙醚，得到苦參堿脂質(zhì)體。
在制得的脂質(zhì)體中加入冷凍保護劑置于冷凍干燥機中冷凍干燥，形成白色粉末狀物質(zhì)，臨用前加水水化即可。
(2)包封率的測定①分離條件分離電壓20KV，檢測波長196～400全波長掃描；測定波長206nm進樣方式壓力進樣；進樣量0.5Psi×5s；緩沖液0.25M/L磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉，PH6.868；溫度25℃。
②對照品溶液的制備取干燥至恒重的苦參堿對照品用蒸餾水制備成不同濃度的溶液，過0.45μm的微孔濾膜，即可。
③供試品溶液的制備取制備的脂質(zhì)體過0.45μm的微孔濾膜進行整粒，即得。
④陰性對照品溶液的制備取空白脂質(zhì)體按上法制備
⑤標準曲線的制備取干燥至恒重的苦參堿對照品0.6mg、1.4mg、2mg、4mg、8mg、12mg，用蒸餾水制備成0.3mg/ml、0.7mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml、6mg/ml的溶液，過0.45μm的微孔濾膜，進樣，高效毛細管電泳法(HPCE)測定。結(jié)果如下，見表1表1.苦參堿不同濃度的峰面積

以苦參堿的濃度對峰面積做一元線性回歸，回歸方程和相關(guān)系數(shù)如下A＝425787.2953C+151823.4011；r＝0.99950。
結(jié)果表明，在0.3～6.025mg/ml濃度范圍內(nèi)濃度和峰面積的線性關(guān)系良好。
⑥精密度試驗取4.005mg/ml苦參堿對照品溶液按上述電泳條件連續(xù)進樣五次，峰面積分別為1842036、1815226、1806812、1823052、1782494，RSD＝1.21％。
(3)穩(wěn)定性實驗①加熱破壞取苦參堿脂質(zhì)體，100℃水浴加熱，觀察分層，聚集，破乳等現(xiàn)象的發(fā)生。由各種方法制得的脂質(zhì)體的出現(xiàn)聚集現(xiàn)象的先后順序依次是硫酸銨梯度法、PH梯度法、Kirby法、薄膜分散法、二次乳化法、逆相蒸發(fā)法，硫酸銨梯度法制備的脂質(zhì)體出現(xiàn)聚集現(xiàn)象的時間為15min，逆相蒸發(fā)法出現(xiàn)聚集現(xiàn)象的時間為35min。
②離心法將脂質(zhì)體置于離心試管中，1000r/min，測試脂質(zhì)體的分層情況，結(jié)果分層情況與各種方法涉及的超聲、攪拌時間有關(guān)，超聲、攪拌時間越長越好，但是超聲、攪拌產(chǎn)熱，所以一般超聲15min為好，與分散的方法無關(guān)。
③滲漏率的測定正交設(shè)計的四因素三水平，經(jīng)過九個處方的試驗，以包封率為指標，選擇乙醚注入法的最佳制備條件。見表2表2.因素水平表

A為PBS的PH值，B為卵磷脂與膽固醇的重量比，C為苦參堿的量，D為水相溶劑的量表3.正交表及實驗結(jié)果

制得的脂質(zhì)體當日測定包封率后，放于冰箱中冷藏保存，10日后測定包封率，按下式計算滲漏率滲漏率＝(當日測得的包封率-定期測定的包封率)/當日測得的包封率×100％。測定逆相蒸發(fā)法九個處方制備的脂質(zhì)體放置十天的滲漏率，結(jié)果如下，見表4表4.不同樣品的滲漏率

可以看出卵磷脂∶膽固醇＝4∶1時，脂質(zhì)體的滲漏率較大。
(4)冷凍干燥實驗脂質(zhì)體既是熱力學不穩(wěn)定體系，又是動力學不穩(wěn)定體系，普通脂質(zhì)體一般放置一個月即出現(xiàn)沉積、顏色變深等現(xiàn)象。于是，將制得的脂質(zhì)體冷凍干燥。
冷凍干燥條件將制得的脂質(zhì)體加入海藻糖，預凍至凍實，再置于樣品盤中，先打開制冷機制冷直至溫度降低至恒溫-58.3℃，再恒溫冷凍24h，形成白色粉末狀物質(zhì)。
將冷凍干燥制得的脂質(zhì)體加水水化，測包封率。其包封率比未冷凍干燥的樣品要低，為48.57％。
二、制備苦參堿脂質(zhì)體滴丸稱取聚乙二醇(6000)15g，置于燒杯中，于90℃上水浴上加熱熔融，加入苦參堿脂質(zhì)體2g，攪拌均勻，保溫待用。預熱滴丸機，使儲液室恒溫為85±1℃，冷卻劑選用二甲基硅油，預冷至10℃，調(diào)節(jié)滴嘴與冷卻液面的距離，將藥液倒入儲液室，啟動閥門，以滴速為35滴/分滴制，在收集口收集滴丸，用紗布吸除表面冷卻劑，常溫真空干燥，即得本發(fā)明苦參堿脂質(zhì)體滴丸，見圖1-2。本發(fā)明制備的苦參堿脂質(zhì)體滴丸切片用羅丹蘭染色，用E200型Nikon ECLIPSE生物顯微鏡觀察得到苦參堿脂質(zhì)體在滴丸中形態(tài)完整，見圖3、圖4。這里用一種配比做重復實驗，得到兩個生產(chǎn)批號不同的同一滴丸。
實施例2一、逆向蒸發(fā)法制備苦參堿脂質(zhì)體取大豆卵磷脂1.2g，膽固醇0.6g，溶于200ml乙醚中，置于錐形瓶中。以pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液配制1％苦參堿溶液，電磁攪拌下，將1％的苦參堿溶液120ml緩緩滴入錐形瓶中，攪拌使與乙醚形成乳濁液，減壓蒸餾1h將乙醚蒸除，得到苦參堿脂質(zhì)體。
二、制備苦參堿脂質(zhì)體滴丸稱取聚乙二醇(6000)10g、聚乙二醇(4000)5g置于燒杯中，于90℃上水浴上加熱熔融，加入苦參堿脂質(zhì)體3g，攪拌均勻，保溫待用。預熱滴丸機，使儲液室恒溫為90±1℃，冷卻劑選用大豆油，預冷至5℃，調(diào)節(jié)滴嘴與冷卻液面的距離，將藥液倒入儲液室，啟動閥門，以滴速為45滴/分滴制，在收集口收集滴丸，用紗布吸除表面冷卻劑，常溫真空干燥，即得本發(fā)明苦參堿脂質(zhì)體滴丸。
實施例3一、薄膜法制備苦參堿脂質(zhì)體大豆卵磷脂1.2g，膽固醇0.6g，溶于200ml乙醚中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓除去有機溶劑，在梨型瓶中形成均勻的磷脂膜，加120ml含苦參堿1％的pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液，浸泡，攪拌洗脫脂質(zhì)膜，可得苦參堿脂質(zhì)體。
二、制備苦參堿脂質(zhì)體滴丸稱取甘油10g、泊洛沙姆6g置于燒杯中，于88℃上水浴上加熱熔融，加入苦參堿脂質(zhì)體3g，攪拌均勻，保溫待用。預熱滴丸機，使儲液室恒溫為88±1℃，冷卻劑選用液體石蠟，預冷至5℃，調(diào)節(jié)滴嘴與冷卻液面的距離，將藥液倒入儲液室，啟動閥門，以滴速為60滴/分滴制，在收集口收集滴丸，用紗布吸除表面冷卻劑，常溫真空干燥，即得本發(fā)明苦參堿脂質(zhì)體滴丸。
實施例4一、逆向蒸發(fā)法制備苦參堿脂質(zhì)體取大豆卵磷脂0.6g，膽固醇0.6g，溶于200ml乙醚中，置于錐形瓶中。以pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液配制1％苦參堿溶液，電磁攪拌下，將1％的苦參堿溶液120ml緩緩滴入錐形瓶中，攪拌使與乙醚形成乳濁液，減壓蒸餾1h將乙醚蒸除，得到苦參堿脂質(zhì)體。
二、制備苦參堿脂質(zhì)體滴丸稱取明膠2g，置于燒杯中，于90℃上水浴上加熱熔融，加入苦參堿脂質(zhì)體2g，攪拌均勻，保溫待用。預熱滴丸機，使儲液室恒溫為80±1℃，冷卻劑選用甲基硅油，預冷至-10℃，調(diào)節(jié)滴嘴與冷卻液面的距離，將藥液倒入儲液室，啟動閥門，以滴速為20滴/分滴制，在收集口收集滴丸，用紗布吸除表面冷卻劑，常溫真空干燥，即得本發(fā)明苦參堿脂質(zhì)體滴丸。
實施例5一、熔融法制備苦參堿脂質(zhì)體將卵磷脂2.5g，膽固醇0.5g溶于氯仿/甲醇(2∶1)10ml混合液中，70℃水浴揮干溶劑，加入油酸0.1g，聚山梨酯80、失水山梨醇單油酸酯混合液0.5g(HLB為9.05)，不斷攪拌，融化；另將苦參堿0.6g，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)0.5g溶于適量新配制的pH 7.4磷酸緩沖液中，水浴加熱至70℃，再將兩者混合，恒溫攪拌1h，加新配制的pH 7.4磷酸緩沖液至100ml，超聲0.5h。即制得苦參堿脂質(zhì)體。
二、制備苦參堿脂質(zhì)體滴丸稱取硬脂酸鈉20g，置于燒杯中，于90℃上水浴上加熱熔融，加入苦參堿脂質(zhì)體2g，攪拌均勻，保溫待用。預熱滴丸機，使儲液室恒溫為90±1℃，冷卻劑選用二甲基硅油，預冷至20℃，調(diào)節(jié)滴嘴與冷卻液面的距離，將藥液倒入儲液室，啟動閥門，以滴速為60滴/分滴制，在收集口收集滴丸，用紗布吸除表面冷卻劑，常溫真空干燥，即得本發(fā)明苦參堿脂質(zhì)體滴丸。
權(quán)利要求
1.一種苦參堿脂質(zhì)體滴丸，其特征在于它主要由苦參堿脂質(zhì)體和輔料原料混合滴制到冷卻液中制成滴丸而成，苦參堿脂質(zhì)體與輔料的重量配比為1∶1-10，輔料為水溶性基質(zhì)；所述的苦參堿脂質(zhì)體主要由苦參堿、大豆卵磷脂和膽固醇原料制備而成，苦參堿與大豆卵磷脂和膽固醇的重量配比為1∶1-5，其中，大豆卵磷脂與膽固醇的重量配比為1-5∶1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦參堿脂質(zhì)體滴丸，其特征在于所述的水溶性基質(zhì)為分子量為4000-6000的聚乙二醇、明膠、硬脂酸鈉、甘油、分子量為188的泊洛沙姆中的任意一種或任意兩種或兩種以上的混合物，任意兩種或兩種以上混合時，為任意配比。
3.如權(quán)利要求1所述的苦參堿脂質(zhì)體滴丸的制備方法，其特征在于它包括如下步驟1)、制備苦參堿脂質(zhì)體苦參堿脂質(zhì)體主要由苦參堿、大豆卵磷脂和膽固醇原料制備而成，苦參堿與大豆卵磷脂和膽固醇的重量配比為1∶1-5，其中，大豆卵磷脂與膽固醇的重量配比為1-5∶1；用熔融法、逆向蒸發(fā)法、乙醚注入法或薄膜超聲法制備苦參堿脂質(zhì)體；2)、混合熔融按苦參堿脂質(zhì)體和輔料的重量配比為1∶1-10選取苦參堿脂質(zhì)體和輔料，加熱至80℃以上熔融，充分混合攪勻，得熔融物，保溫備用；3)、滴制預熱滴丸機，使滴丸機的儲液室為80℃以上恒溫，將上述得到的熔融物放入儲液室中，以20-60滴/分的滴速滴入滴丸機的冷卻液中，制成滴丸；4)、制成品收集滴丸，濾除冷卻液，干燥得到產(chǎn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種苦參堿脂質(zhì)體滴丸的制備方法，其特征在于所述的冷卻液為甲基硅油、二甲基硅油、液體石蠟。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種苦參堿脂質(zhì)體滴丸的制備方法，其特征在于所述的步驟3)中滴丸機的滴頭的溫度為60-90℃；滴丸機的管口的溫度為70-90℃；冷卻液的溫度梯度是20--10℃；滴距的范圍是4-16cm。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種苦參堿制劑及其制備方法。一種苦參堿脂質(zhì)體滴丸，其特征在于它主要由苦參堿脂質(zhì)體和輔料原料混合滴制到冷卻液中制成滴丸而成，苦參堿脂質(zhì)體與輔料的重量配比為1∶1－10，輔料為水溶性基質(zhì)；所述的苦參堿脂質(zhì)體主要由苦參堿、大豆卵磷脂和膽固醇原料制備而成，苦參堿與大豆卵磷脂和膽固醇的重量配比為1∶1－5，其中，大豆卵磷脂與膽固醇的重量配比為1－5∶1。該方法解決苦參堿脂質(zhì)體不穩(wěn)定性問題，增加了苦參堿口服新劑型；該方法得到的苦參堿脂質(zhì)體滴丸崩解速度快、吸收完全，具有靶向性，生物利用度高。
文檔編號A61P7/10GK1895226SQ20061001930
公開日2007年1月17日 申請日期2006年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月8日
發(fā)明者劉小平, 王靜, 王瑩, 秦磊, 周園, 沈亮 申請人:武漢理工大學