專利名稱：一種復(fù)方香菇多糖制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)方香菇多糖制劑及其制備方法，該復(fù)方香菇多糖制劑同時具有抑制腫瘤細胞生長和提高機體免疫力的功效，在癌癥的治療中能起到協(xié)同的治療作用，屬于藥品復(fù)方制劑的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著人類生活環(huán)境、生活水平和生活方式的變化以及醫(yī)學的進步，人類疾病譜發(fā)生了顯著的變化，一般性傳染病逐漸被控制，而惡性腫瘤則成為日益常見且嚴重威脅人類生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一。世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計資料表明，世界癌癥每年發(fā)病1000萬人，死亡700萬人，是僅次于心血管病的人類第2大殺手。
尋找有效的抗癌藥物與方法，徹底攻克癌癥，是世界醫(yī)學界重要的研究課題。化療、放療、手術(shù)治療是當今治療腫瘤的主要手段，但毒副作用較大。能否找到既能殺傷腫瘤細胞，毒副作用又比較小的藥物及治療方法，在腫瘤的治療中顯得尤其重要。
斑蝥酸鈉是由鞘翅目芫菁科昆蟲斑蝥的抗癌有效成分斑蝥素經(jīng)水解成鈉鹽而得。研究報道(王浴生等.中藥藥理與應(yīng)用.北京人民衛(wèi)生出版社，1983111)斑蝥酸鈉能抑制Hela細胞株、人食管鱗癌CaEs-17細胞株及人肝癌BEL-7402細胞株。用電鏡觀察到3H-斑蝥酸鈉可以直接進入小鼠腹水型肝癌細胞的核及核仁。另據(jù)報道(Wang GS.Medical uses of mylabris in ancient and recentstudies.Journal of Ethno pharmacology，1989，26147)斑蝥酸鈉的抗癌作用可能與降低cAMP磷酸二酯酶活性從而提高癌細胞內(nèi)cAMP水平有關(guān)。斑蝥酸鈉還能改善癌細胞和荷瘤小鼠的能量代謝，提高過氧化氫酶的活力，即降低荷瘤小鼠的癌毒素水平，但因斑蝥酸鈉作用機制單一以及抗瘤譜窄等原因，在臨床使用中常常受到限制。
香菇多糖系從人工培養(yǎng)的傘菌科真菌香菇[Lentinus edodes(Berk)Sing]子實體中提取分離純化獲得的均一組分的多糖。香菇多糖(Lentinan)是一種免疫調(diào)節(jié)型靜脈給藥的抗腫瘤藥物，具有劑量低，療效好，毒副作用小等優(yōu)點。臨床上主要應(yīng)用于不能手術(shù)的癌癥病人，能顯著延長患者的存活時間，以及防止手術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)。1966年日本首先從香菇子實體中獲得香菇多糖，20世紀70年代應(yīng)用于臨床。我國于1988年從日本進口，取得良好的療效。但進口價格十分昂貴。1994年我國研制成功與日本香菇多糖同樣劑型的香菇多糖凍干粉針劑并投產(chǎn)。香菇多糖一般與化療藥物聯(lián)合使用。對于復(fù)發(fā)的胃癌和結(jié)腸癌患者的III期臨床4年跟蹤觀察，1，2，3和4年存活率分別較單獨使用化療藥物提高(Tsuburs E.Rationale of Biological Response modifiers in cancer treatment.Amsterdam: Excerpta Medica.1985151)。香菇多糖的毒副作用與通常化療藥物比較，由于輕微，故可忽略不計。在實際應(yīng)用中，香菇多糖主要表現(xiàn)為免疫增強作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種同時具有抑制腫瘤細胞生長和提高機體免疫力的復(fù)方香菇多糖制劑及其制備方法，該復(fù)方香菇多糖制劑，在癌癥的治療中兩者能起到協(xié)同的治療作用，使用方便。
為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種復(fù)方香菇多糖制劑，其特征在于，該制劑中有效成分香菇多糖和斑蝥酸鈉的重量比為1∶0.02-0.5，適于臨床應(yīng)用的藥物劑型包括粉針劑、凍干粉針劑、水針劑、輸液劑。
一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，將香菇多糖的免疫增強作用與抗腫瘤藥物斑蝥酸鈉聯(lián)合使用，其制備方法為(1)按重量計稱取香菇多糖1份，放入容器中用0.3-1mol/L的氫氧化鈉水溶液溶解；(2)在步驟(1)溶解液中加入斑蝥酸鈉0.02-0.5份，然后用酸液調(diào)pH至6-10，加入0.04-0.08份的藥物輔料，攪拌溶解，過濾，按照中藥水針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖水針劑；(3)或在步驟(1)溶解液中加入1-60份的藥物輔料，攪拌溶解，再加入斑蝥酸鈉0.02-0.5份，用酸液調(diào)pH至6-10，過濾，按照中藥凍干粉針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖凍干粉針劑；(4)或在步驟(1)溶解液中加入2000-10000份的藥物輔料，攪拌溶解，再加入斑蝥酸鈉0.02-0.5份，然后加入與上述氫氧化鈉溶液等當量的鹽酸，再用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)pH至6-10，過濾，按照中藥輸液劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖輸液劑。
步驟(2)、(3)和(4)中所述的藥物輔料為甘露醇、氨基酸、葡萄糖、右旋糖酐、乳糖、氯化鈉、檸檬酸鹽、碳酸鈉、氫氧化鈉、β-環(huán)糊精及其衍生物、羥乙基淀粉、表面活性劑吐溫-80、吐溫-20、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、帕洛沙姆一種或幾種的混合物；步驟(2)、(3)中所述的調(diào)節(jié)pH至6-10的酸液為鹽酸溶液或檸檬酸水溶液；步驟(2)和(4)中所述的藥物輔料可以為不加。
本發(fā)明的香菇多糖是指從香菇子實體[Lentinus edodes(Berk)Sing]提取、精制的，符合國家藥品質(zhì)量標準WS-320(X-263)-94的注射用香菇多糖；本發(fā)明的斑蝥酸鈉符合國家藥品質(zhì)量標準WS-10001-(HD-0044)-2002的斑蝥酸鈉，其結(jié)構(gòu)為 在復(fù)方香菇多糖輸液劑的制備過程中，加入與氫氧化鈉等當量的鹽酸中和后，所生成的氯化鈉能使輸液產(chǎn)生適宜于人體應(yīng)用的滲透壓。
本發(fā)明中所加入的藥物輔料除具有上述調(diào)節(jié)制劑pH、滲透壓等作用外，還主要作為制劑的賦形劑或增溶劑。
在復(fù)方香菇多糖制劑的研究過程中發(fā)現(xiàn)，水針劑和輸液劑的pH若低于6，則斑蝥酸鈉會轉(zhuǎn)化為斑蝥素而導(dǎo)致產(chǎn)品澄明度不合格；若pH大于10，則制劑使用時刺激性大，故應(yīng)控制水針劑和輸液劑的pH在6-10。
本發(fā)明的有益效果是提供的復(fù)方制劑不但同時發(fā)揮斑蝥酸鈉的抑制腫瘤細胞生長及香菇多糖增強機體免疫力的功效，而且在癌癥的治療中兩者起到協(xié)同的治療作用。
本發(fā)明的優(yōu)點是同時具有抑制腫瘤細胞生長和提高機體免疫力的功效，在癌癥的治療中能起到協(xié)同的治療作用。
具體實施例方式
以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。
實施例1取注射用香菇多糖2克，放入容器中用0.6mol/L的氫氧化鈉水溶液700ml室溫溶解。溶解后加入普通20％甘露醇注射液400ml，攪勻，加入斑蝥酸鈉0.05克，溶解后用1mol/L的檸檬酸溶液調(diào)溶液pH至9，過濾，減壓濃縮至1000ml，無菌過濾，消毒，測含量，分裝，1ml/瓶，冷卻干燥，封口，得復(fù)方香菇多糖凍干粉針。
實施例2取注射用香菇多糖2克，放入容器中用0.8mol/L的氫氧化鈉水溶液600ml室溫溶解，溶解后加入普通20％甘露醇注射液400ml及右旋糖酐1.6克，攪勻，加入斑蝥酸鈉0.05克，溶解后用1mol/L的檸檬酸溶液調(diào)溶液pH至9，過濾，減壓濃縮至1000ml，無菌過濾，消毒，測含量，分裝，1ml/瓶，冷卻干燥，封口，得復(fù)方香菇多糖凍干粉針。
實施例3取注射用香菇多糖2克，放入容器中用0.8mol/L的氫氧化鈉水溶液500ml室溫溶解。溶解后加入10％羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液100ml，攪勻，加入斑蝥酸鈉0.05克，溶解后用1mol/L的檸檬酸溶液調(diào)溶液pH至9，過濾，加注射用水至1000ml，無菌過濾，消毒，測含量，分裝，1ml/瓶，冷卻干燥，封口，得復(fù)方香菇多糖凍干粉針。
實施例4取注射用香菇多糖1克，放入容器中用0.2mol/L的氫氧化鈉水溶液700ml室溫溶解。溶解完全后，加入斑蝥酸鈉0.12克，溶解后用0.3mol/L的檸檬酸溶液調(diào)溶液pH至9，過濾，加注射用水至1200ml，無菌過濾，消毒，分灌于適當容器中，封口，即得復(fù)方香菇多糖水針劑。
實施例5取注射用香菇多糖1克，放入容器中用0.2mol/L的氫氧化鈉水溶液700ml室溫溶解。溶解完全后，加入斑蝥酸鈉0.2克，溶解后用0.3mol/L的檸檬酸溶液調(diào)溶液pH至9，再加入60mg吐溫-80，過濾，加注射用水至1200ml，無菌過濾，消毒，分灌于適當容器中，封口，即得復(fù)方香菇多糖水針劑。
實施例6取注射用香菇多糖0.1克，放入容器中用1mol/L的氫氧化鈉水溶液923ml室溫溶解，溶解完全后，加入葡萄糖300克，斑蝥酸鈉0.04克，溶解后加入1mol/L鹽酸溶液923ml，再用相同濃度的鹽酸溶液調(diào)pH至8.5，加注射用水至6000ml，過濾，無菌過濾，滅菌，分灌于適當容器中，即得復(fù)方香菇多糖輸液劑。
實施例7取注射用香菇多糖0.1克，放入容器中用1mol/L的氫氧化鈉水溶液923ml室溫溶解，溶解完全后，加入斑蝥酸鈉0.04克，溶解后加入1mol/L鹽酸溶液923ml，再用相同濃度的鹽酸溶液調(diào)pH至8.5，加注射用水至6000ml，過濾，無菌過濾，滅菌，分灌于適當容器中，即得復(fù)方香菇多糖輸液劑。
本發(fā)明進行了復(fù)方香菇多糖水針劑對腫瘤細胞生長的抑制試驗以驗證并對比其抗腫瘤作用，試驗以市售斑蝥酸鈉注射液為陽性對照。以早幼粒白血病HL-60細胞和QGY7703肝癌細胞為實驗對象。在96孔細胞培養(yǎng)板每孔加入100μL HL-60細胞5×104個或QGY7703細胞1×104個，37℃CO2溫箱中過夜。去掉培養(yǎng)基，然后加入100μL系列量的復(fù)方香菇多糖水針劑或斑蝥酸鈉注射液，每一受試藥品每一劑量為三復(fù)孔，實驗陰性對照為無藥培養(yǎng)液(含藥物最大濃度時的相應(yīng)溶劑量)。細胞在37℃孵箱中孵育72h后，用MTT法(四甲基偶氮唑鹽比色法)測定細胞數(shù)，即結(jié)束前4h棄去細胞培養(yǎng)上清液(HL-60細胞需先離心)，加入100μL新鮮配制含0.2mg/ml的MTT無血清培養(yǎng)基，混勻，37℃繼續(xù)孵育4h，再棄去上清液(HL-60細胞需離心)，加入100DMSO，混勻后用MR700酶標儀測定570nm吸收值。計算細胞存活率％＝(實驗孔測定值/對照孔測定值)×100％。MTT法結(jié)果表明，復(fù)方香菇多糖水針劑早幼粒白血病HL-60細胞和QGY7703肝癌細胞均有較強的抑制作用，且經(jīng)組間t檢驗，復(fù)方香菇多糖水針劑組的細胞存活率低于斑蝥酸鈉注射液組，結(jié)果表明復(fù)方香菇多糖水針劑對上述腫瘤細胞的抑制強于斑蝥酸鈉注射液。
復(fù)方香菇多糖水針劑與斑蝥酸鈉注射液抑制癌細胞作用對比表

權(quán)利要求
1.一種復(fù)方香菇多糖制劑，其特征在于，該制劑中有效成分香菇多糖和斑蝥酸鈉的重量比為1∶0.02-0.5，適于臨床應(yīng)用的藥物劑型包括粉針劑、凍干粉針劑、水針劑、輸液劑。
2.一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，將香菇多糖的免疫增強作用與抗腫瘤藥物斑蝥酸鈉聯(lián)合使用，其制備方法為(1)按重量計稱取香菇多糖1份，放入容器中用0.3-1mol/L的氫氧化鈉水溶液溶解；(2)在步驟(1)溶解液中加入斑蝥酸鈉0.02-0.5份，然后用酸液調(diào)pH至6-10，加入0.04-0.08份的藥物輔料，攪拌溶解，過濾，按照中藥水針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖水針劑；(3)或在步驟(1)溶解液中加入1-60份的藥物輔料，攪拌溶解，再加入斑蝥酸鈉0.02-0.5份，用酸液調(diào)pH至6-10，過濾，按照中藥凍干粉針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖凍干粉針劑；(4)或在步驟(1)溶解液中加入2000-10000份的藥物輔料，攪拌溶解，再加入斑蝥酸鈉0.02-0.5份，然后加入與上述氫氧化鈉溶液等當量的鹽酸，再用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)pH至6-10，過濾，按照中藥輸液劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖輸液劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，步驟(2)、(3)和(4)中所述的藥物輔料為甘露醇、氨基酸、葡萄糖、右旋糖酐、乳糖、氯化鈉、檸檬酸鹽、碳酸鈉、氫氧化鈉、β-環(huán)糊精及其衍生物、羥乙基淀粉、表面活性劑吐溫-80、吐溫-20、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、帕洛沙姆一種或幾種的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，步驟(2)、(3)中所述的調(diào)節(jié)pH至6-10的酸液為鹽酸溶液或檸檬酸水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，步驟(2)和(4)中所述的藥物輔料不加。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)方香菇多糖制劑及其制備方法，其特征在于，按重量計稱取香菇多糖，用氫氧化鈉水溶液溶解，在溶解液中加入斑蝥酸鈉，然后用酸液調(diào)pH值，無菌過濾，按照中藥水針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖水針劑；或在溶解液中加入藥物輔料，攪拌溶解，再加入斑蝥酸鈉，用酸液調(diào)pH值，無菌過濾，按照中藥凍干粉針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖凍干粉針劑；或在溶解液中加入斑蝥酸鈉，然后加入與氫氧化鈉溶液等當量的鹽酸，再用鹽酸溶液調(diào)pH值，無菌過濾，按照中藥輸液劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖輸液劑。本發(fā)明的優(yōu)點是同時具有抑制腫瘤細胞生長和提高機體免疫力的功效，在癌癥的治療中能起到協(xié)同的治療作用。
文檔編號A61P35/00GK1850104SQ20061002429
公開日2006年10月25日 申請日期2006年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月2日
發(fā)明者金幸 , 陳林祥, 朱益峰 申請人:上海慈瑞醫(yī)藥科技有限公司