專利名稱：前列地爾納米粒及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥品制劑領域，具體涉及含有擴血管成分前列地爾的納米粒以及該納米粒的制備方法。
背景技術：
前列地爾(alprostadil)在60年代初就已經(jīng)確定了它的化學結構為一個五碳環(huán)和兩條側鏈的廿碳脂肪酸的基本骨架。它是一種具有廣譜生物活性的擴血管物質，通過調節(jié)腺苷酸環(huán)化酶和磷酸二脂酶活性促進細胞內環(huán)磷酸腺苷濃度增加，激活依賴環(huán)磷酸腺苷的一系列蛋白激酶使血管擴張。抑制血小板聚集，增加紅細胞變形能力，從而改善組織微循環(huán)狀態(tài)。前列地爾屬天然前列腺素(PE)類物質，具有廣泛的臨床應用。前列地爾能緩解心絞痛，減少心肌梗死的發(fā)生和心肌梗死面積。據(jù)報道，用前列地爾治療冠心病，緩解心絞痛總有效率達92.4％，其中58.3％的患者心電圖缺血征象恢復到正?；蜈呌谡！Ｇ傲械貭柨蓴U張冠狀血管，增加心肌供血，對心衰有明顯的治療作用。亦廣泛應用于心臟手術后并發(fā)的心力衰竭等癥。此外，前列地爾還可用于治療血小板血凝機制亢進，血液呈高凝狀態(tài)導致的腦梗，以及由糖尿病并發(fā)癥引起的微循環(huán)障礙。
目前，臨床上前列地爾以注射劑(包括注射用凍干粉針)為主，它的主要缺點是藥物在體內易失活，藥效持續(xù)時間短，對注射部位有很強的刺激作用。為了解決這些問題，柳川明他等制備了一種新型制劑前列地爾脂微球載體制劑(最新醫(yī)學.1983，381416-1426.)，商品名凱時，由于前列地爾受到脂微球的保護，減少了其在肺臟中的失活，從而延長了藥效持續(xù)時間，減輕了其對注射部位的刺激作用。鄧意輝等在專利(200410021253)中制備了用注射用油保護的前列地爾注射劑，也起到了延長藥效，減少刺激的作用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種由前列地爾為主要組成成份的前列地爾納米粒。
本發(fā)明的另一目的是提供該前列地爾納米粒的制備方法。
本發(fā)明所述的前列地爾納米粒的組成成分(以重量份數(shù)計)為前列地爾0.5-40份載體材料 5-100份乳化劑0.1-50份這里所說的載體材料選自聚乳酸、乙交酯丙交酯共聚物、聚乙二醇與聚乳酸共聚物、聚乙二醇與乙交酯丙交酯共聚物、大豆磷脂、大豆卵磷脂、卵磷脂、硬脂酸甘油酯中的一種或幾種的混合物。
本發(fā)明所述的前列地爾納米粒根據(jù)它的理化性質，工業(yè)生產(chǎn)規(guī)模等的具體情況有以下幾種制備方法，具體如下1)將前列地爾溶于乙醇后，加入溶有聚合物材料的有機相中，同溶有乳化劑的水相制成O/W型乳狀液，在加入大量水后，油相中的有機相先被水萃取后，有機相被蒸發(fā)除去，留下水相，原來的油滴逐漸變成聚合物和藥物的納米粒。
2)將前列地爾溶解到聚合物材料的非水溶液中，注入到攪拌的水相，使聚合物的溶解度降低形成納米粒。
3)取DL-丙交酯/乙交酯共聚物混懸于水中，加入含前列地爾的丙酮和二氯甲烷，倒入攪拌(300轉/分)的PVA水溶液中，有機試劑迅速擴散進入水相使有機相滴粒徑減小而成納米粒。
4)先取PLA與聚乙二醇單甲醚合成兩親性嵌段共聚物，將它與前列地爾溶于丙酮或其他有機試劑，蒸發(fā)得含前列地爾固體基材，干燥，攪拌加水，即得前列地爾納米粒。
5)將PLA、前列地爾溶于丙酮中，緩慢攪拌下加入含PVA和高濃度鹽的水相，由于水相含濃鹽溶液使兩相不混容，開始形成W/O型乳狀液，繼續(xù)攪拌下加入水相，發(fā)生相轉換，形成O/W型乳狀液。再加水，油滴中的有機試劑向水相擴散，形成納米粒。
6)將前列地爾和類脂等溶于適宜的有機溶劑中，減壓除去有機溶劑，形成一層脂質薄膜，加入一定量的乳化劑水溶液，超聲分散即可制得粒徑小而分布均勻的納米粒。
7)將前列地爾溶解于含有脂質的乙醇溶液或其他有機試劑，然后加入含有乳化劑的水相中，在高速剪切力(15000～20000轉/分)的攪拌下形成初乳。將初乳于200～500個大氣壓下經(jīng)高壓乳勻機處理2～3次，即可得到所需的納米粒。
8)將前列地爾和類脂溶于與水不互溶的有機溶劑中，加入到含有乳化劑的水相中乳化，揮發(fā)有機溶劑后，類脂在水相中沉淀形成納米粒。
制備方法中的乳化劑選自聚乙烯醇、十二烷基硫酸鈉、單甘油脂肪酸酯、三甘油脂肪酸酯、聚甘油硬脂酸酯、脂肪酸山梨醇、聚山梨酯、賣澤、芐澤、泊洛沙姆、阿拉伯膠、西黃蓍膠、明膠、卵黃、海藻酸鈉、膽酸鈉、甲基纖維素中的一種或幾種的混合物。
為延長前列地爾納米粒的存放時間，可將本發(fā)明的前列地爾納米粒通過真空干燥或冷凍干燥制成粉末狀納米粒，提高納米粒的穩(wěn)定性，為防止干燥工藝中納米粒的聚集和粘連，可以加入支架劑，這里支架劑選自蔗糖、乳糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖、右旋糖苷、木糖醇、山梨醇、果糖中的一種或幾種的混合物。
本發(fā)明的前列地爾納米粒粒徑小于500nm，能顯著延長藥效，提供持續(xù)的治療效果。
本發(fā)明的前列地爾納米粒可以進一步制成注射制劑給予患者，其中注射方式以靜脈注射為主。
實驗表明，將前列地爾制備成納米粒粒制劑，由于受到載體材料的保護，減少了15羥PG脫氫酶對藥物的破壞，使前列地爾的血藥濃度能在較長時間內維持有效，從而延長藥物療效。另外，由于被包裹在納米粒材料中，前列地爾納米粒制劑還降低了前列地爾的毒副作用，提高了前列地爾的穩(wěn)定性。
藥理試驗一、對家兔耳緣靜脈局部刺激試驗試驗方法試驗組及對照組各取家兔3只，分別在左右耳緣靜脈部位各注射一定量藥物和相應溶劑(按每公斤0.2mg試液)，即試驗組為前列地爾納米粒制劑及空白納米粒制劑；對照品為注射用前列地爾及生理鹽水，每天一次，連續(xù)三天。每次給藥后次日觀察注射部位刺激情況，并解剖動物取相應的耳緣靜脈血管段(取耳最遠段1cm處開始，每隔1cm切下0.5cm寬一段)，從遠段開始分別標以A～F六段，以10％福爾馬林固定，經(jīng)乙醇逐級脫水，石蠟包埋，切片，作HE染色。鏡檢應無變性或壞死等刺激性反應。
試驗結果注射用前列地爾納米粒制劑應用于靜脈注射時對家兔耳緣靜脈血管刺激性試驗，采用推薦上臨床的0.2mg/kg的劑量，每天一次，連續(xù)7天后，實驗顯示注射用前列地爾納米粒制劑對家兔耳緣靜脈血管無明顯的與藥物相關的刺激反應；與對照品注射用前列地爾比較有明顯差異。
二、過敏試驗試驗方法取豚鼠30只，隨機分成5組。第一組注射前列地爾納米粒制劑，第二組空白納米粒制劑，第三組陽性對照(0.5％雞卵清蛋白)；第四組參比組注射用前列地爾，第五組參比組相應溶劑生理鹽水。每組隔日腹腔注射相應試液0.5ml/只，連續(xù)共致敏注射3次。然后每組再分成兩個小組，分別在第三次致敏注藥后14天及21天，從脛靜脈注射相應試液1ml。在給藥后15分鐘內，觀察動物不得有抓鼻、咳嗽、興奮不安、呼吸困難、窒息死亡等癥狀。
試驗結果

試驗結論注射用前列地爾納米粒制劑注射液對豚鼠過敏試驗中，當激發(fā)劑量給藥后15分鐘內未見明顯過敏反應。參比組注射用前列地爾也未見過敏反應，兩者相似。
有益效果本發(fā)明是一種性質穩(wěn)定且可采用工業(yè)化生產(chǎn)的前列地爾納米粒。該項發(fā)明能減少前列地爾給藥劑量，延長前列地爾給藥周期，減少前列地爾的毒副作用，提高前列地爾的生物利用度和治療指數(shù)。本發(fā)明前列地爾納米粒的制備方法有多種，均采用的工藝設備可工業(yè)化規(guī)模、高效率生產(chǎn)，產(chǎn)品質量保持穩(wěn)定，可直接或二次加工制備注射制劑。
具體實施例方式
實施例1將0.5g前列地爾溶解在含5g聚乳酸的乙酸乙酯50ml中，取4g聚乙烯醇溶于100ml水中制成水相，8000r/min高速攪拌乳化10min中，制成O/W型乳狀液，在加入400ml水后萃取乙酸乙酯，減壓蒸餾除去，形成前列地爾的納米顆粒，加入20g甘露醇，冷凍干燥即得。
實施例2將1.0g前列地爾溶解在含10g的聚乳酸的二氯甲烷20ml中，取0.1g泊洛沙姆溶于60ml水中制成水相，5000r/min高速攪拌乳化15min中，制成O/W型乳狀液，在加入200ml水后萃取二氯甲烷，減壓蒸餾除去，形成前列地爾的納米粒，加入60g葡萄糖，冷凍干燥即得。
實施例3將1.0g前列地爾溶解在含20g的PLGA的二氯甲烷40ml中，取2.5g海藻酸鈉溶于80ml水中制成水相，5000r/min高速攪拌乳化10min中，制成O/W型乳狀液，在加入200ml水后萃取二氯甲烷，減壓蒸餾除去，形成前列地爾的納米粒，加入10g甘露醇和15g木糖醇，冷凍干燥即得。
實施例4將5.0g前列地爾溶解到含100g的聚乳酸的丙酮150ml中，注入到含0.1g賣澤的攪拌的水溶液200ml，使聚乳酸的溶解度降低形成納米粒，繼續(xù)攪拌，減壓使丙酮揮去，加入10g蔗糖和15g乳糖，冷凍干燥即得。
實施例5將1.0g前列地爾溶解到含10g的PLGA的丙酮50ml中，注入到含1.0g膽酸鈉的水溶液80ml，攪拌，減壓除去丙酮，加入10g甘露醇和2g右旋糖苷，冷凍干燥即得。
實施例6將1.0g前列地爾溶解到含2g的PLGA的丙酮20ml中，注入到含2.5mg十二烷基硫酸鈉的水溶液80ml，攪拌，減壓使丙酮揮發(fā)，加入10g甘露醇和2g山梨醇，冷凍干燥即得。
實施例7取0.2g前列地爾加入20ml丙酮和5ml二氯甲烷中，加入含1.0gDL-PLGA 8ml的混懸液，倒入含10gPVA水溶液100ml中，攪拌，丙酮迅速擴散進入水相使有機相滴粒徑減小而成納米粒，將二氯甲烷減壓去除，加入10g甘露醇和2g果糖，冷凍干燥即得。
實施例8取1.0g前列地爾加入20ml丙酮和二氯甲烷10ml中，加入含5gDL-PLGA10ml的混懸水溶液，倒入含0.1gPVA水溶液150ml中，攪拌，丙酮迅速擴散進入水相使有機相滴粒徑減小而成納米粒，將二氯甲烷減壓去除，加入10g甘露醇和2g海藻糖，冷凍干燥即得。
實施例9取1.5g前列地爾加入35ml丙酮和二氯甲烷0.5ml中，加入含4.5gDL-PLGA 20ml的混懸水溶液，倒入含2gPVA水溶液100ml中，攪拌，丙酮迅速擴散進入水相使有機相滴粒徑減小而成納米粒，將二氯甲烷減壓去除，加入10g甘露醇，冷凍干燥即得。
實施例10先取PLA與聚乙二醇單甲醚合成兩親性聚乙二醇與聚乳酸共聚物，將其6g與前列地爾1g溶于丙酮10ml，吹氮氣蒸發(fā)得前列地爾固體基材，干燥，加水50ml，攪拌，加甘露醇3.5g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例11先取PLGA與聚乙二醇單甲醚合成兩親性聚乙二醇與乙交酯丙交酯共聚物，將其10g與前列地爾2g溶于丙酮50ml，吹氮氣蒸發(fā)得前列地爾固體基材，干燥，攪拌加PBS 150ml，離心除去大粒子，加葡萄糖10g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例12將PLA7g、前列地爾1g溶于丙酮20ml中，緩慢攪拌下加入含2gPVA和6g氯化鎂的水溶液10ml，由于水相含濃鹽溶液使兩相不混容，開始形成W/O型乳狀液，繼續(xù)攪拌下加入水相50ml，發(fā)生相轉換，形成O/W型乳狀液。再加水100ml，油滴中的丙酮向水相擴散，形成納米粒。加葡萄糖15g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例13將PLA15g、前列地爾1.5g溶于丙酮20ml中，緩慢攪拌下加入含4g阿拉伯膠和4g西黃蓍膠和8g氯化鎂的水溶液15ml，由于水相含濃鹽溶液使兩相不混容，開始形成W/O型乳狀液，繼續(xù)攪拌下加入水相80ml，發(fā)生相轉換，形成O/W型乳狀液。再加水160ml，油滴中的丙酮向水相擴散，形成納米粒。加甘露醇25g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例14將PLA10g、前列地爾1g溶于丙酮20ml中，緩慢攪拌下加入含5g聚山梨酯和6g氯化鎂的水溶液10ml，由于水相含濃鹽溶液使兩相不混容，開始形成W/O型乳狀液，繼續(xù)攪拌下加入水相40ml，發(fā)生相轉換，形成O/W型乳狀液。再加水150ml，油滴中的丙酮向水相擴散，形成納米粒。加右旋糖苷15g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例15將前列地爾1g和大豆磷脂8g溶于25ml丙酮中，減壓除去有機溶劑，形成一層脂質薄膜，加入含0.6g芐澤為乳化劑的水溶液50ml，超聲5分鐘，分散均勻后，加甘露醇5g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例16將前列地爾0.5g和大豆磷脂8g和卵磷脂1g溶于35ml乙酸乙酯中，減壓除去有機溶劑，形成一層脂質薄膜，加入含1g明膠的水溶液100ml，超聲分散，加甘露醇7g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例17將前列地爾1g和卵磷脂10g溶于55ml二氯甲烷中，減壓除去有機溶劑，形成一層脂質薄膜，加入含5g脂肪酸山梨醇的水溶液100ml，超聲分散，加甘露醇15g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例18將前列地爾1g和卵磷脂15g溶于25ml丙酮中，減壓除去有機溶劑，形成一層脂質薄膜，加入含2g卵黃和3g膽酸鈉的水溶液100ml，超聲分散，加甘露醇15g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例19將前列地爾1g溶解于含有6g卵磷脂的乙醇溶液15ml中，然后加入含有泊洛沙姆1g的水100ml，在高速剪切力的攪拌下(20000轉/分)形成初乳。減壓去乙醇，再將初乳于200～500個大氣壓下經(jīng)高壓乳勻機處理2～3次，即可得到所需的納米粒。加甘露醇15g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例20將前列地爾1g溶于含有5g硬脂酸甘油酯的25ml乙醇溶液中，然后加入含有0.6g甲基纖維素的100ml水，在高速剪切力的攪拌下(20000轉/分)分散，形成初乳。減壓除乙醇，將初乳于200～500個大氣壓下經(jīng)高壓乳勻機處理2～3次，即可得到所需的納米粒，加葡萄糖15g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例21將前列地爾1g溶解于15ml含有5g大豆磷脂的丙酮溶液中，然后加入含有聚乙烯醇0.5g的水80ml，在高速剪切力的攪拌下形成初乳。減壓除去丙酮，將初乳于200～500個大氣壓下經(jīng)高壓乳勻機處理4～5次，即可得到所需的納米粒。加甘露醇8g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例22將前列地爾1g溶解于15ml含有6g大豆卵磷脂的乙酸乙酯溶液中，然后加入含有聚乙烯醇0.5g的水80ml，在高速剪切力的攪拌下形成初乳。減壓除去乙酸乙酯，將初乳于200～500個大氣壓下經(jīng)高壓乳勻機處理4～5次，即可得到所需的納米粒，加甘露醇8g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例23將前列地爾1g溶解于含有5g硬脂酸甘油酯的丙酮溶液25ml中，然后加入含有膽酸鈉1g的水100ml，在高速剪切力的攪拌下形成初乳。減壓除去丙酮，將初乳于200～500個大氣壓下經(jīng)高壓乳勻機處理4～5次，即可得到所需的納米粒，加葡萄糖10g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例24將前列地爾1g、單甘油脂肪酸酯0.6g、5g卵磷脂溶解于丙酮溶液25ml中，然后加入含有賣澤2g的水100ml，在高速剪切力的攪拌下形成初乳。減壓除去丙酮，將初乳于200～500個大氣壓下經(jīng)高壓乳勻機處理4～5次，即可得到所需的納米粒，加甘露醇8g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例25將前列地爾1g、三甘油脂肪酸酯1.5g、6g大豆卵磷脂溶解于丙酮溶液35ml中，然后加入水100ml，在高速剪切力的攪拌下形成初乳。減壓除去丙酮，將初乳于200～500個大氣壓下經(jīng)高壓乳勻機處理4～5次，即可得到所需的納米粒。加蔗糖8g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例26將前列地爾1g、聚甘油硬脂酸酯2g、硬脂酸甘油酯5g溶解于丙酮溶液25ml中，然后加入水100ml，在高速剪切力的攪拌下形成初乳。減壓除去丙酮，將初乳于200～500個大氣壓下經(jīng)高壓乳勻機處理4～5次，即可得到所需的納米粒。加甘露醇8g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例27將前列地爾1g和大豆磷脂6g溶于丙酮15ml中，加入到含有阿拉伯膠4g的水溶液50ml中，超聲乳化15分鐘，減壓揮發(fā)除去有機溶劑后，類脂在水相中沉淀形成納米粒。加甘露醇12g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
實施例28將前列地爾1g和大豆卵磷脂9g溶于二氯甲烷25ml中，加入到含有泊洛沙姆0.8g的水溶液100ml中，攪拌乳化10分鐘，減壓揮發(fā)有機溶劑后，類脂在水相中沉淀形成納米粒。加甘露醇10g，冷凍干燥即得前列地爾納米粒。
權利要求
1.一種前列地爾的納米粒制劑，其配方組成為前列地爾0.5-40份載體材料5-100份乳化劑0.1-50份。
2.根據(jù)權利要求1所述的前列地爾納米粒制劑，其特征在于載體材料選自聚乳酸、乙交酯丙交酯共聚物、聚乙二醇與聚乳酸共聚物、聚乙二醇與乙交酯丙交酯共聚物、大豆磷脂、大豆卵磷脂、卵磷脂、硬脂酸甘油酯中的一種或它們的幾種混合物。
3.根據(jù)權利要求1所述的前列地爾納米粒制劑，其特征在于乳化劑選自聚乙烯醇、十二烷基硫酸鈉、單甘油脂肪酸酯、三甘油脂肪酸酯、聚甘油硬脂酸酯、脂肪酸山梨醇、聚山梨酯、賣澤、芐澤、泊洛沙姆、阿拉伯膠、西黃蓍膠、明膠、大豆磷脂、大豆卵磷脂、卵磷脂、海藻酸鈉、膽酸鈉、甲基纖維素中的一種或幾種的混合物。
4.如權利要求1所述的前列地爾納米粒制劑的制備方法，由以下幾種方法的一種或兩種制得1)將前列地爾分散在聚合物材料的有機相中，同溶有乳化劑的水相制成O/W型乳狀液，在加入大量水后，油相中的有機相先被水萃取，后被蒸發(fā)除去，原來的油滴逐漸變成聚合物和藥物的納米粒；2)將前列地爾溶解到聚合物材料的非水溶液中，注入到攪拌的水相，使聚合物的溶解度降低形成納米粒；3)取DL-丙交酯/乙交酯共聚物混懸于水中，加入含前列地爾的丙酮和二氯甲烷，倒入攪拌的PVA水溶液中，有機試劑迅速擴散進入水相使有機相滴粒徑減小而成納米粒；4)先取PLA與聚乙二醇單甲醚合成兩親性嵌段共聚物，將它與前列地爾溶于丙酮或其他有機試劑，蒸發(fā)得前列地爾固體基材，干燥，攪拌加水，即得前列地爾納米粒；5)將PLA、前列地爾溶于丙酮中，緩慢攪拌下加入含PVA和高濃度鹽的水相，由于水相含濃鹽溶液使兩相不混容，開始形成W/O型乳狀液，繼續(xù)攪拌下加入水相，發(fā)生相轉換，形成O/W型乳狀液，再加水，油滴中的有機試劑向水相擴散，形成納米粒；6)將前列地爾和類脂等溶于適宜的有機溶劑中，減壓除去有機溶劑，形成一層脂質薄膜，加入一定量的乳化劑水溶液，超聲分散即可制得粒徑小而分布均勻的納米粒；7)將前列地爾溶解于含有脂質的乙醇溶液或其他有機試劑，然后加入含有乳化劑的水相中，在高速剪切力的攪拌下形成初乳，將初乳于200～500個大氣壓下經(jīng)高壓乳勻機處理數(shù)次，即可得到所需的納米粒；8)將前列地爾和類脂溶于與水不互溶的有機溶劑中，加入到含有乳化劑的水相中乳化，揮發(fā)有機溶劑后，類脂在水相中沉淀形成納米粒。
5.根據(jù)權利要求4所述的前列地爾納米粒的制備方法，其特征在于可以通過冷凍干燥或真空干燥得到粉末狀納米粒。
6.根據(jù)權利要求1所述的前列地爾納米粒，其特征在于可以加入支架劑進行冷凍干燥。
7.根據(jù)權利要求6所述的前列地爾納米粒，其特征在于支架劑選自蔗糖、乳糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖、右旋糖苷、木糖醇、山梨醇、果糖中的一種或幾種的混合物。
8.根據(jù)權利要求1所述的前列地爾納米粒，其特征在于粒徑小于500nm。
9.根據(jù)權利要求1所述的前列地爾納米粒，其特征在于可進一步制成注射制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種前列地爾的納米制劑及制備方法，包括治療有效量的前列地爾和載體，載體包括聚乳酸、乙交酯丙交酯共聚物、聚乙二醇與聚乳酸共聚物、聚乙二醇與乙交酯丙交酯共聚物、大豆磷脂、大豆卵磷脂、卵磷脂、硬脂酸甘油酯中的一種或幾種的混合物。前列地爾納米制劑的特點是前列地爾受到載體的保護，避免了其在體內過早的失活，延長了藥效持續(xù)時間，減少了藥物對血管的刺激作用，增加了臨床應用的耐受性，而且藥物本身穩(wěn)定性增加。
文檔編號A61K31/185GK101088493SQ20061002759
公開日2007年12月19日 申請日期2006年6月12日 優(yōu)先權日2006年6月12日
發(fā)明者李亞平, 陳伶俐, 顧王文 申請人:中國科學院上海藥物研究所