專利名稱：一種治療肝纖維化的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療肝纖維化的藥物及其制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
“肝纖維化”，是指各種慢性肝病向終末期肝硬化發(fā)展過程中必經(jīng)的病理過程，患者數(shù)量龐大。慢性肝病患者必然伴有肝纖維化，如不及時(shí)治療將持續(xù)發(fā)展，直到引起肝硬化乃至死亡。我國患慢性乙型肝炎的病人超過3000萬，慢性乙型肝炎患者的相當(dāng)部分人將經(jīng)肝纖維化發(fā)展成肝硬化，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國每年死于肝炎后肝硬化者有40萬人，而治愈肝硬化的唯一途徑是阻斷肝纖維化。肝纖維化是慢性肝炎向肝硬化發(fā)展的前期過程，在決定慢性肝病患者預(yù)后的諸多因素中起著至關(guān)重要的作用，如能在演變?yōu)楦斡不埃ㄟ^某種手段阻斷或逆轉(zhuǎn)肝纖維化的發(fā)生與發(fā)展，在慢性肝病治療學(xué)上將是一個(gè)重大突破。目前，治療肝纖維化的西藥主要有脯氨酸4-羥化酶抑制物、前列腺素E類似藥物、γ-干擾素、前膠原肽、肝細(xì)胞生長因子、白介素10等，但卻存在較大毒副作用。
由于本病的復(fù)雜、頑固性，不可能速戰(zhàn)速?zèng)Q，需長期用藥，故毒副作用低的中醫(yī)藥在干預(yù)肝纖維化方面已顯示出較明顯的優(yōu)勢。我國國中醫(yī)寶庫中被驗(yàn)證有一定治療效果的單方有桃仁、丹參、漢防己、蟲草菌絲等。中藥復(fù)方多成分，多環(huán)節(jié)、多層次、多靶點(diǎn)的藥理學(xué)作用，是其優(yōu)勢的重要特點(diǎn)之一，近年來報(bào)導(dǎo)較多的有強(qiáng)肝軟堅(jiān)湯、扶正化瘀319方、復(fù)方861合劑、扶正化瘀膠囊等。國知局公開了大量的防治肝纖維化的中藥復(fù)方，如CN1243743專利申請公開了由桃仁50-250、丹參300-700、絞股蘭200-600、發(fā)酵蟲草菌粉150-450、松花粉50-250、五味子50-250、淀粉適量制成的治療慢性肝病的藥物；CN1273104專利申請公開了由鱉甲110-130份、赤芍80-90份、當(dāng)歸40-60份、三七40-60份、黨參80-90份、黃芪80-90份、紫河車40-50份、冬蟲夏草20-30份、板藍(lán)根130-150份、連翹130-150份、莪術(shù)20-30份制成的治療慢性乙型肝炎肝纖維化的中藥制劑；CN1308951專利申請公開了以杜仲2-15、補(bǔ)骨脂2-20、枳實(shí)2-15、白芥子2-15、烏藥2-15、小茴香2-10、陳皮2-15、石斛2-15、食鹽2-15、紫蘇2-15、細(xì)辛1-6、姜黃2-15、莪術(shù)2-15為原料制成的治療乙肝的藥物制劑；CN1511574專利申請公開了以丹參400-700重量份、黃芪200-600重量份、桃仁200-400重量份、赤芍200-400重量份、虎杖200-400重量份、白術(shù)200-400重量份、當(dāng)歸100-300重量份、茵陳200-400重量份、雞血藤200-600重量份、女貞子200-400重量份、五味子100-200重量份、甘草100-200重量份為原料制成的防治肝纖維化的藥物；CN1682868專利申請公開了由仙靈脾15-30％、炙鱉甲10-15％、炙黃芪5-10％、枸杞子5-10％、紫丹參5-10％、廣郁金5-10％、苦參1-5％，余為輔料分的質(zhì)量/質(zhì)量百分比配比是仙靈脾15-25％、炙鱉甲10-15％、炙黃芪5-10％、枸杞子5-10％、紫丹參5-10％、廣郁金5-10％、苦參1-5％為原料制成的治療肝纖維化的復(fù)方制劑。肝纖維化的形成與發(fā)展是極其復(fù)雜的過程，目前中醫(yī)對其病機(jī)的認(rèn)識和基本治則尚無定論，因此研發(fā)出得到普遍認(rèn)可的治療肝纖維化中藥復(fù)方實(shí)為廣大患者的渴求。
本發(fā)明者在多年臨床經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)出對治療肝纖維化具有確切作用的保肝寧顆粒劑，該顆粒劑黃芩，丹參，桃仁，黃芪，鱉甲，白背葉根六味中藥制成。本發(fā)明者還先后發(fā)表了多篇論文，采用血清藥理學(xué)方法觀察了保肝寧對肝星狀細(xì)胞(HSC)凋亡[山東中醫(yī)雜志，2004，23(5)294-8]和HSC中Zf9活性的影響及其相關(guān)機(jī)制[四川中醫(yī)，2005，23(4)15-17]；觀察了保肝寧對大鼠肝內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子活性的影響[成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)2005年9月第28卷第3期18]和對肝星狀細(xì)胞中核轉(zhuǎn)錄因子kβ活性的影響及其相關(guān)機(jī)制[中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，25(9)804-9]；探討了保肝寧對肝星狀細(xì)胞HSC-T6細(xì)胞增殖及I型膠原表達(dá)[中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21(2)207-8]、對過氧化氫所致大鼠肝細(xì)胞損傷[廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，19(3)211-4]、對次氮基三醋酸鐵溶液FeNTA致肝星狀細(xì)胞系(HSC T6)細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響[中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2005，15(1)31-4]；研究了保肝寧對肝星狀細(xì)胞內(nèi)NF-kβ活性的影響[陜西中醫(yī)，2004，25(6)569-571]。上述學(xué)術(shù)論文還通過實(shí)驗(yàn)對“保肝寧”的作用機(jī)制進(jìn)行了探索，并進(jìn)行了方解，但未涉及其組分含量和制備方法。本發(fā)明者在實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，“保肝寧”的活血消癥作用略顯不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種改進(jìn)的治療肝纖維化的藥物，該藥物的活血化瘀、行氣消癥作用明顯改善。
本發(fā)明的另一目的是提供該治療肝纖維化的藥物的制備方法。
肝炎后肝纖維化的病因病機(jī)為“濕熱余毒未盡，肝郁氣滯、瘀熱互結(jié)阻絡(luò)”，其中瘀濕熱毒與脾腎兩虧是關(guān)鍵。方中黃芩味苦寒，清熱祛濕解毒，丹參味苦微寒，活血化瘀止痛而不傷氣血，二者共為君藥。鱉甲軟堅(jiān)散結(jié)，入肝絡(luò)而搜邪，又能咸寒滋陰；莪術(shù)辛苦溫，歸肝脾經(jīng)，可行氣破血，消積止痛，是消除癥瘕痞塊之良藥。白背葉根微苦性平，清熱利濕，入肝經(jīng)，又長于舒肝解郁，兼有活血化瘀之效，三者共為臣藥。佐以黃芪和桃仁，取黃芪之甘溫，內(nèi)可補(bǔ)脾肺之氣，令氣旺血行，外可固表御邪，助君藥黃芩以健脾除濕，又助丹參益氣活血。更用桃仁味苦甘平，為化瘀消癥之要藥，以助鱉甲、莪術(shù)化瘀消癥。諸藥共用，共奏清熱祛濕解毒，活血化瘀軟堅(jiān)，益氣疏肝健脾功用。
本發(fā)明治療肝纖維化的藥物組分及其用量是發(fā)明者經(jīng)過大量摸索總結(jié)得出的，該藥物由以下重量配比的原料制成黃芩10-20份、丹參10-30份、桃仁10-20份、黃芪10-30份、鱉甲10-30份、白背葉根10-20份、莪術(shù)油1-3份。
制備本發(fā)明藥物的最佳重量配比是黃芩15份、丹參20份、桃仁15份、黃芪20份、鱉甲20份、白背葉根20份、莪術(shù)油2份。
本發(fā)明藥物的原料藥可制成臨床上可接受的顆粒劑。
本發(fā)明藥物所用莪術(shù)油的質(zhì)量應(yīng)符合中國藥典2005版一部項(xiàng)下莪術(shù)油的標(biāo)準(zhǔn)，可采用市售的，也可從姜科植物莪術(shù)的根莖中采用公知的方法提取得到。所述莪術(shù)油的制備原料以廣西莪術(shù)(拉丁文為Curcuma Kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang)的干燥根莖為佳。
本發(fā)明藥物的制備方法是1)、按重量配比取莪術(shù)油，每1ml揮發(fā)油用4.5～6克β-環(huán)糊精在30℃～40℃的條件下超聲包合45～60分鐘，抽濾，所得包合物在40℃～60℃條件下干燥3～5小時(shí)，備用；2)、將所述重量配比的鱉甲粉碎過80目篩，加8～12倍量水，提取6～8小時(shí)，靜置，濾過，合并濾液備用；3)、將所述重量配比的黃芪以每次加8～12倍量水、不浸泡，提取兩次，第一次120～150min，第二次90～120min，靜置，濾過，合并濾液備用；4)、將所述重量配比的黃芩、丹參、桃仁、白背葉根以加水量第一次為12～15倍，第二次為9～12倍，不浸泡，提取時(shí)間為第一次90～120min，第二次為60～90min，靜置，濾過，合并濾液，濃縮至1∶1，放冷，加入2倍量乙醇，靜置12小時(shí)，慮過，濾液減壓回收乙醇，得濾液備用；5)、合并上述步驟2)、3)和4)制得的濾液，減壓濃縮、干燥，收集干浸膏，粉碎，過篩，加入步驟1)所制備的β-環(huán)糊精包合物，再加入顆粒劑常用輔料，干壓制粒，得到治療肝纖維化的顆粒劑。
上述制備方法中所用顆粒劑常用輔料是公知的稀釋劑、粘合劑和/或矯味劑等。其中，所述的稀釋劑可以是乳糖、可溶性淀粉、糊精等；所述的粘合劑可以是淀粉；所述的矯味劑可以是蔗糖、阿斯巴甜、蛋白糖。
本發(fā)明所述藥物用于治療肝纖維化具有清熱祛濕解毒、活血化瘀軟堅(jiān)、益氣疏肝健脾之功效。臨床實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明所述藥物對肝纖維化的總有效率為90.1％，明顯逆轉(zhuǎn)率達(dá)79.01％以上，對肝功能改善的總有效率為100％。
以下通過藥理藥效試驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步說明本發(fā)明所述藥物所能達(dá)到的技術(shù)效果。
一、藥理藥效實(shí)驗(yàn)采用本發(fā)明藥物進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，對CCl4復(fù)合因素所致的肝纖維化模型中，對大鼠血清中的致肝纖維化的兩個(gè)因子(轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1、金屬蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)，肝纖維指標(biāo)(透明質(zhì)酸HA、III型前膠原)，肝功指標(biāo)(ALT、AST)都有顯著降低，有著保肝、降酶、抗肝纖維化的作用。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模及處理普通級SD大鼠54只，雌雄各半，體重約228±18g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。從造模即日起隨機(jī)均分為6組正常對照組、CCL4模型組、本發(fā)明藥物高、中、低劑量組、秋水仙堿組。模型組及給藥組上午皮下注射40％四氯化碳花生油(頭次0.5ml/100g，后每隔三日皮下注射量為0.3ml/100g)，下午給藥組予相應(yīng)藥物水溶液或煎劑，模型組予生理鹽水灌胃(每日一次，每次1ml/100g)；正常組予等量的生理鹽水做對照。模型及給藥組予高脂飲食(79.5％玉米粉+20％豬油+0.5％膽固醇)，正常組予正常飲食，六周。
造模結(jié)束后處理實(shí)驗(yàn)約6周末，動(dòng)物禁食不禁水約12小時(shí)后，10％水合氯醛腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈采血，真空負(fù)壓采血管收集，取肝、脾稱重，肝左葉標(biāo)本常規(guī)固定包埋切片HE及Mallory三色染色，光鏡下觀察肝組織細(xì)胞的病理改變及肝臟纖維的增設(shè)程度。
指標(biāo)測定(1)光鏡標(biāo)本石蠟包埋，常規(guī)切片，HE和Mallory三色染色，TGFβ1的免疫組化；(2)血清ALT、AST、ALB、GLB的檢測由南方醫(yī)科大學(xué)生化室用AU5400全自動(dòng)生化分析儀測定；(3)血清HA、LN、III前膠原、IV型膠原的檢測由南方醫(yī)科大學(xué)核醫(yī)學(xué)科用放免法測定；(4)TGFβ1和TIMP-1的檢測采用ELISA法，按試劑說明書操作測定。
統(tǒng)計(jì)方法上述各項(xiàng)指標(biāo)均計(jì)算均數(shù)(x)與標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.5進(jìn)行方差分析。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下對肝功指標(biāo)的影響模型組的ALT、AST較正常組升高860.97％、464.43％(p＜0.01)，經(jīng)本發(fā)明藥物高、中、低三種劑量治療6周后，對增高的ALT、AST活性有顯著降低，降低率分別為71.02％，84.54％，77.78％；63.24％，63.24％，64.24％(p＜0.01)。
在對肝纖維化指標(biāo)的影響方面模型組的HA、III型前膠原較正常組升高407.72％、602.99％(p＜0.01)，經(jīng)本發(fā)明藥物高、中、低三種劑量治療6周后，對增高的HA、III型前膠原的含量有顯著降低，降低率分別為57.87％，69.06％，61.63％(p＜0.05)；30.15％，63.06％，66.30％(p＜0.01)。
對大鼠血清中的致肝纖維化的重要因子(TGF-β1、TIMP-1)的影響模型組的TGF-β1、TIMP-1較正常組升高256.92％，18.49％(p＜0.001)，經(jīng)本發(fā)明藥物高、中、低三種劑量治療6周后，對增高的TGF-β1、TIMP-1含量有顯著降低，降低率分別為25.44％，63.27％，71.32％(p＜0.001)；11.34％，12.84，15.95％(p＜0.001)。
動(dòng)物肝臟的病理學(xué)變化正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞索排列整齊，肝索沿小葉中央靜脈呈放射狀排列，肝竇正常，細(xì)胞核圓而大，位于細(xì)胞中央，胞質(zhì)豐富。匯管區(qū)無炎細(xì)胞浸潤。Mallory三色染色顯示膠原纖維僅局限于小葉中央靜脈、匯管區(qū)等處血管壁。模型組大鼠肝小葉界限不清，肝竇消失。肝細(xì)胞呈氣球樣變，胞質(zhì)廣泛出現(xiàn)大小不等的脂肪滴，肝細(xì)胞大泡性脂變明顯。細(xì)胞核被擠向細(xì)胞周邊，部分細(xì)胞核體積縮小。可見肝細(xì)胞壞死和炎癥細(xì)胞浸潤，成纖維細(xì)胞大量增生。Mallory三色染色顯示膠原纖維顯著增生，形成網(wǎng)格狀或龜殼狀，有時(shí)形成較粗的纖維束向小葉內(nèi)伸展，形成假小葉。本發(fā)明藥物大劑量組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)尚存，肝竇瘀血。肝細(xì)胞呈氣球樣變，胞質(zhì)廣泛出現(xiàn)大小不等的脂肪滴，肝細(xì)胞大泡性脂變較模型組減輕。Mallory三色染色顯示膠原纖維無明顯增生，多數(shù)為輕度增生。有的可見纖維隔形成，但多數(shù)尚未連接。本發(fā)明藥物中劑量組大鼠肝細(xì)胞病理變化同本發(fā)明藥物大劑量組。本發(fā)明藥物小劑量組大鼠肝細(xì)胞病理變化介于模型組及本發(fā)明藥物大劑量組之間，部分大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)尚存，肝竇瘀血。肝細(xì)胞呈氣球樣變，胞質(zhì)廣泛出現(xiàn)大小不等的脂肪滴，肝細(xì)胞大泡性脂變較模型組減輕。Mallory三色染色顯示膠原纖維無明顯增生，多數(shù)為輕度增生，有的可見纖維隔形成。部分大鼠肝小葉界限不清，肝竇消失。肝細(xì)胞呈氣球樣變，胞質(zhì)廣泛出現(xiàn)大小不等的脂肪滴，肝細(xì)胞大泡性脂變明顯。細(xì)胞核被擠向細(xì)胞周邊，部分細(xì)胞核體積縮小?？梢姼渭?xì)胞壞死和炎癥細(xì)胞浸潤，成纖維細(xì)胞大量增生。Mallory三色染色顯示膠原纖維顯著增生，形成網(wǎng)格狀或龜殼狀，有時(shí)形成較粗的纖維束向小葉內(nèi)伸展，形成假小葉。
附表1本發(fā)明藥物對肝纖維化大鼠肝功、肝纖維化指標(biāo)、轉(zhuǎn)化生長子及金屬蛋白酶組織抑制因子的影響(x±sd)

注*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001附表2本發(fā)明藥物對肝纖維化大鼠肝臟膠原纖維增生的影響

注-、+代表肝臟膠原增生程度的分級二、毒理實(shí)驗(yàn)(1)急性毒性實(shí)驗(yàn)本發(fā)明藥物對小鼠灌胃在一日內(nèi)分2次給予的最大給藥量為330g生藥/kg體重，此劑量為臨床成年人擬用劑量的132倍。即表明小鼠能耐受灌胃給予本發(fā)明藥物的劑量為330g生藥/kg體重(為臨床成年人擬用劑量的132倍)。由于在一日內(nèi)分2次灌胃給予較大體積的濃稠藥物，使動(dòng)物攝食量減少，動(dòng)物的體重增長稍慢(無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05)，但在給藥后7天內(nèi)不致引起明顯中毒癥狀和死亡。表明本發(fā)明藥物對動(dòng)物灌胃給藥的急性毒性較小，口服用藥安全。
(2)長期毒性實(shí)驗(yàn)以本發(fā)明藥物高、中、低三種劑量(150、75、37.5g生藥/kg，分別為成年人臨床擬用日服劑量的60倍、30倍和15倍)對大鼠連續(xù)灌胃給藥6個(gè)月。在給藥6個(gè)月后，各組隨機(jī)抽取活殺20只大鼠(雌雄各10只，第一批次)；余下每組20只大鼠停藥觀察3周后再行活殺(雌雄各10只，第二批次)?？崭故占笫蟾怪鲃?dòng)脈血，進(jìn)行血液學(xué)和血液生化學(xué)檢測；取動(dòng)物重要臟器稱重(計(jì)算臟器重量系數(shù))和進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)檢查。試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明藥物高、中、低三種劑量對大鼠的外觀行為、生長(體重增長)、血液學(xué)(造血功能，WBC、RBC、HGB、RC、PLT、HCT、MCV、MCH、MCHC、W-SCR、W-LCR、W-SCC、W-LCC、RDW-CV、POW、MPV)、血液生化學(xué)(主要為肝臟功能和腎臟功能，ALT、AST、”、ALB、BU、Cre、AKP、TBil、Glu、T-CHO)等均未見明顯毒性影響。本發(fā)明藥物三種劑量對大鼠的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腎上腺、甲狀腺、胸腺、子宮、卵巢、睪丸、附睪、前列腺等13種器官的重量系數(shù)均無明顯毒性的影響；上述器官組織，未發(fā)現(xiàn)有明顯的出血、瘀血、腫脹、潰爛或色澤異常等病變情況。經(jīng)與空白對照組比較，本發(fā)明藥物高劑量(150g生藥/kg)對大鼠的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腎上腺、甲狀腺、胸腺、胃、十二指腸、前列腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢等15種器官組織的形態(tài)亦未發(fā)現(xiàn)有明顯的病理學(xué)損害性變化。
三、臨床實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目組對發(fā)明藥物的臨床療效進(jìn)行了觀察。將128例分為2組，治療組81例給予發(fā)明藥物，對照組47例給予大黃庶蟲丸治療。并觀察2組患者的臨床癥狀、肝功能、血清肝纖維化指標(biāo)的改變。結(jié)果治療組顯效64例，有效9例，無效8例，總有效率90.1％。對照組顯效21例，有效9例，無效17例，總有效率63.8％，2組總有效率比較，差異有非常顯著性意義。并能顯著改善患者乏力、飽脹、納差等臨床癥狀，能降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、血清總膽汁，能明顯降低血清透明質(zhì)酸、IV型膠原、III型前膠原肽水平。
表1發(fā)明藥物對肝纖維化的治療作用

與對照組比較，P＜0.01表2發(fā)明藥物對肝纖維化患者的臨床癥狀改善

對照組相比，*p＜0.05**p＜0.01
四、本發(fā)明藥物與背景技術(shù)中提及的保肝寧的藥效學(xué)比較實(shí)驗(yàn)取普通級SD大鼠54只，雌雄各半，體重約228±18g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。從造模即日起隨機(jī)均分為7組正常對照組、CCL4模型組、本發(fā)明藥物高、中、低劑量組、保肝寧組、秋水仙堿組。模型組及給藥組上午皮下注射40％四氯化碳花生油(頭次0.5ml/100g。后每隔3日皮下注射量為0.3ml/100g)，下午給藥組予相應(yīng)藥物水溶液或煎劑，模型組予生理鹽水灌胃(每日一次，每次1ml/100g)；正常組予等量的生理鹽水做對照。模型及給藥組予高脂飲食(79.5％玉米粉+20％豬油+0.5％膽固醇)，正常組予正常飲食，六周。
造模結(jié)束后處理進(jìn)行指標(biāo)測定(1)光鏡標(biāo)本石蠟包埋，常規(guī)切片，HE和Mallory三色染色；(2)血清ALT、AST、ALB、GLB的檢測用AU5400全自動(dòng)生化分析儀測定；(3)血清HA、LN、III前膠原、IV型膠原的檢測用放免法測定；(4)TGFβ1和TIMP-1的檢測采用ELISA法，按試劑說明書操作測定。
上述各項(xiàng)指標(biāo)均計(jì)算均數(shù)(x)與標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.5進(jìn)行方差分析。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)在對肝功指標(biāo)的影響方面模型組的ALT、AST較正常組升高860.97％、464.43％(p＜0.01)，經(jīng)本發(fā)明藥物高、中、低三種劑量治療6周后，對增高的ALT、AST活性有顯著降低，降低率分別為71.02％，84.54％，77.78％；63.24％，63.24％，64.24％(p＜0.01)。而保肝寧組的降低為62.57％及58.26％，說明加入莪術(shù)后對肝功指標(biāo)的改善有明顯加強(qiáng)作用。
在對肝纖維化指標(biāo)的影響方面模型組的HA、III型前膠原較正常組升高407.72％、602.99％(p＜0.01)，經(jīng)本發(fā)明藥物高、中、低三種劑量治療6周后，對增高的HA、III型前膠原的含量有顯著降低，降低率分別為57.87％，69.06％，61.63％(p＜0.05)；30.15％，63.06％，66.30％(p＜0.01)。而保肝寧組的降低為52.60％及40.26％，效果明顯不如本發(fā)明藥物高中劑量組。
對大鼠血清中的致肝纖維化的重要因子(TGF-β1、TIMP-1)的影響模型組的TGF-β1、TIMP-1較正常組升高256.92％，18.49％(p＜0.001)，經(jīng)本發(fā)明藥物高、中、低三種劑量治療6周后，對增高的TGF-β1、TIMP-1含量有顯著降低，降低率分別為25.44％，63.27％，71.32％(p＜0.001)；11.34％，12.84，15.95％(p＜0.001)。而保肝寧組的降低為41.82％及8.56％，效果明顯不如本發(fā)明藥物。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1處方黃芩15克、丹參20克、桃仁15克、黃芪20克、鱉甲20克、白背葉根20克、莪術(shù)油2.0毫升。
制備方法1)、按處方量取莪術(shù)油，每1ml揮發(fā)油用4.5克β-環(huán)糊精在35℃的條件下超聲包合50分鐘，抽濾，所得包合物在45℃條件下干燥4小時(shí)，備用。
2)、鱉甲粉碎過80目篩，加8倍量水，提取6小時(shí)，靜置，濾過，合并濾液備用；
3)、黃芪以每次加8倍量水、不浸泡，提取兩次，第一次150min，第二次120min，靜置，濾過，合并濾液備用；4)、黃芩、丹參、桃仁、白背葉根以加水量第一次為12倍，第二次為9倍，不浸泡，提取時(shí)間為第一次90min，第二次為60min，靜置，濾過，合并濾液，濃縮至1∶1，放冷，加入2倍量乙醇，靜置12小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，得濾液備用。
5)、合并上述步驟2)、3)和4)制得的濾液，減壓濃縮、干燥，收集干浸膏，粉碎，過篩，加入步驟1)所制備的β-環(huán)糊精包合物，再加入適量阿斯巴甜、可溶性淀粉、微粉硅膠，干壓制粒，即得。
用法和用量本品為無糖顆粒劑，每日3次，每次5克，水沖服。
實(shí)施例2處方黃芩10克、丹參30克、桃仁10克、黃芪30克、鱉甲20克、白背葉根20克、莪術(shù)油1.0毫升。
制備方法1)、按處方量取莪術(shù)油，每1ml揮發(fā)油用4.5克β-環(huán)糊精在30℃的條件下超聲包合60分鐘，抽濾，所得包合物在55℃條件下干燥3小時(shí)，備用。
2)、鱉甲粉碎過80目篩，加10倍量水，提取8小時(shí)，靜置，濾過，合并濾液備用；3)、黃芪以每次加10倍量水、不浸泡，提取兩次，第一次120min，第二次90min，靜置，濾過，合并濾液備用；4)、黃芩、丹參、桃仁、白背葉根以加水量第一次為13倍，第二次為10倍，不浸泡，提取時(shí)間為第一次120min，第二次為80min，靜置，濾過，合并濾液，濃縮至1∶1，放冷，加入2倍量乙醇，靜置12小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，得濾液備用。
5)、合并上述步驟2)、3)和4)制得的濾液，減壓濃縮、干燥，收集干浸膏，粉碎，過篩，加入步驟1)所制備的β-環(huán)糊精包合物，再加入適量蛋白糖、糊精、微粉硅膠，干壓制粒，即得。
用法和用量本品為無糖顆粒劑，每日3次，每次5克，水沖服。
實(shí)施例3處方黃芩20克、丹參100克、，桃仁15克、黃芪15克、鱉甲20克、白背葉根10克、莪術(shù)油1.5毫升。
制備方法1)、按處方量取莪術(shù)油，每1ml揮發(fā)油用5克β-環(huán)糊精在35℃的條件下超聲包合60分鐘，抽濾，所得包合物在60℃條件下干燥5小時(shí)，備用。
2)、鱉甲粉碎過80目篩，加12倍量水，提取7小時(shí)，靜置，濾過，合并濾液備用；3)、黃芪以每次加12倍量水、不浸泡，提取兩次，第一次130min，第二次100min，靜置，濾過，合并濾液備用；4)、黃芩、丹參、桃仁、白背葉根以加水量第一次為15倍，第二次為10倍，不浸泡，提取時(shí)間為第一次100min，第二次為90min，靜置，濾過，合并濾液，濃縮至1∶1，放冷，加入2倍量乙醇，靜置12小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，得濾液備用。
5)、合并上述步驟2)、3)和4)制得的濾液，減壓濃縮、干燥，收集干浸膏，粉碎，過篩，加入步驟1)所制備的β-環(huán)糊精包合物，再加入適量蔗糖、乳糖、可溶性淀粉，濕法制粒，即得。
用法用量本品為含糖顆粒劑，每日3次，每次15克，水沖服。
權(quán)利要求
1.一種治療肝纖維化的藥物，其特征是該藥物由以下重量配比的原料制成的黃芩10-20份、丹參10-30份、桃仁10-20份、黃芪10-30份、鱉甲10-30份、白背葉根10-20份、莪術(shù)油1-3份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療肝纖維化的藥物，其中各原料的重量配比是黃芩15份、丹參20份、桃仁15份、黃芪20份、鱉甲20份、白背葉根20份、莪術(shù)油2份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種治療肝纖維化的藥物，其特征是所述藥物的原料藥可制成臨床上可接受的顆粒劑。
4.權(quán)利要求3所述治療肝纖維化的藥物的制備方法是1)、按重量配比取莪術(shù)油，每1ml揮發(fā)油用4.5～6克β-環(huán)糊精在30℃～40℃的條件下超聲包合45～60分鐘，抽濾，所得包合物在40℃～60℃條件下干燥3～5小時(shí)，備用；2)、將所述重量配比的鱉甲粉碎過80目篩，加8～12倍量水，提取6～8小時(shí)，靜置，濾過，合并濾液備用；3)、將所述重量配比的黃芪以每次加8～12倍量水、不浸泡，提取兩次，第一次120～150min，第二次90～120min，靜置，濾過，合并濾液備用；4)、將所述重量配比的黃芩、丹參、桃仁、白背葉根以加水量第一次為12～15倍，第二次為9～12倍，不浸泡，提取時(shí)間為第一次90～120min，第二次為60～90min，靜置，濾過，合并濾液，濃縮至1∶1，放冷，加入2倍量乙醇，靜置12小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，得濾液備用；5)、合并上述步驟2)、3)和4)制得的濾液，減壓濃縮、干燥，收集干浸膏，粉碎，過篩，加入步驟1)所制備β-環(huán)糊精包合物，再加入顆粒劑常用輔料，干壓制粒即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述治療肝纖維化的藥物的制備方法，其特征是所述的顆粒劑常用輔料是稀釋劑、粘合劑和/或矯味劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療肝纖維化的藥物，該藥物以黃芩、丹參、桃仁、黃芪、鱉甲、白背葉根、莪術(shù)油為原料，并根據(jù)每味中藥的不同特性，將原料分類水提，合并、濃縮、干燥、粉碎后加入經(jīng)超聲包合的莪術(shù)油和顆粒劑常用輔料，干壓制粒制成顆粒劑。本發(fā)明所述藥物用于治療肝纖維化具有清熱祛濕解毒、活血化瘀軟堅(jiān)、益氣疏肝健脾之功效。臨床實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明所述藥物對肝纖維化的總有效率為90.1％，明顯逆轉(zhuǎn)率達(dá)79.01％以上，對肝功能改善的總有效率為100％。
文檔編號A61P1/16GK1883690SQ20061003575
公開日2006年12月27日 申請日期2006年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月2日
發(fā)明者呂志平 申請人:南方醫(yī)科大學(xué)