專利名稱：：桑葉降血糖有效組分組合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及桑葉降血糖有效組分組合物及制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：栽桑養(yǎng)蠶是我國(guó)農(nóng)業(yè)的傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)之一，桑葉在我國(guó)有著大量的資源優(yōu)勢(shì)，但傳統(tǒng)的蠶桑業(yè)只用于養(yǎng)蠶，用途單一。每年按正常情況就有大量的桑葉過剩而被浪費(fèi)，因此尋找桑葉的多用途開發(fā)渠道，開發(fā)成藥品或保健性產(chǎn)品，既可以充分利用自然資源，又可以為蠶桑業(yè)找到新的經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)點(diǎn)，推動(dòng)蠶桑業(yè)發(fā)展。而桑葉在中藥古方就有用于“止消渴”，即現(xiàn)代糖尿病。用桑葉開發(fā)天然安全的治療糖尿病新藥或降血糖的功能性食品已有很多研究，目前關(guān)于桑葉降血糖成分已經(jīng)有一些相關(guān)專利如申請(qǐng)?zhí)?1129976.2“一種桑葉多糖產(chǎn)品及其用途”公開了一種用桑葉提取的桑葉多糖產(chǎn)品和用途，多糖分子量在1500～50000道爾頓之間；申請(qǐng)?zhí)?00410018677.4“具有α-糖苷酶抑制活性的藥物組合物及其用途”，公開了的藥物組合按重量百分比生物堿為5～90％、黃酮類為10～95％；申請(qǐng)?zhí)?1113191.8“具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物、其制備方法及用途”，公開了總生物堿的制備方法；申請(qǐng)?zhí)?3142068.0“桑葉有效成分提取物及制備方法”，公開的提取物中含野尻霉素1.0～3.0％，γ-氨基丁酸0.8～1.5％；申請(qǐng)?zhí)?2125869.4“一種α-糖苷酶抑制劑和它的用途”，公開了一種高效、廉價(jià)且易于獲得的α-糖苷酶抑制劑。以上專利沒有涉及從桑葉中提取桑葉多糖和生物堿有效組分組合物的制備方法，更沒涉及桑葉多糖和桑葉生物堿有效組分組合用于降血糖用途的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種利用?？浦参锷涞娜~子提取的降血糖有效組分組合物桑葉多糖和桑葉生物堿，固態(tài)呈淺棕色或淺黃色粉末，其中桑葉多糖分子量大于100萬道爾頓，重量百分比為20～80％，桑葉生物堿中1-脫氧野尻霉素含量大于50％，重量百分比為80～20％。本發(fā)明提供的桑葉降血糖有效組分組合物，以?？浦参锷涞娜~子為原料，按下述順序的步驟制備得到(1)桑葉除去雜質(zhì)，低溫干燥后粉碎稱重，得桑葉粉末；(2)桑葉粉末用有機(jī)溶劑提取，除去脂溶性部分，然后過濾，取渣去液；(3)濾渣揮去有機(jī)溶劑，得桑粉渣；(4)桑粉渣用熱水提取，過濾，濾液加入乙醇使?jié)舛葹?0％～80％，然后過濾，得上清液和沉淀。(5)步驟(4)中所得的上清液用陽離子樹脂交換，再用陰離子樹脂交換除去雜質(zhì)。(6)步驟(5)中陽離子樹脂用0.4M～0.7M的氨水溶液洗脫，收集陽離子樹脂的氨水洗脫液，濃縮，濃縮液上陰離子樹脂，用水溶液洗脫，收集陰離子樹脂水洗脫液，濃縮，干燥，即得桑葉生物堿，其中主要生物堿成分1-脫氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。(7)步驟(4)中所得的沉淀用水溶解，再加入三氯乙酸除去蛋白，離心；(8)步驟(7)中上清液用NaOH溶液調(diào)pH＝7，離心；(9)步驟(8)中上清液透析，然后加入乙醇使溶液濃度為40％～80％，沉淀，過濾；(10)步驟(9)中所得沉淀，干燥，即得桑葉多糖，多糖分子量大于100萬。(11)合并步驟(6)所得生物堿和步驟(10)所得桑葉多糖，即得桑葉降血糖有效組分組合物；本發(fā)明步驟(2)中所用有機(jī)溶劑為石油醚、乙酸乙酯、甲醇、無水乙醇；步驟(5)中所用陽離子交換樹脂為強(qiáng)酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂001×8、大孔弱酸丙烯酸系陽離子交換樹脂D152、弱酸1D1陽離子交換樹脂724、陽離子交換樹脂732；所用陰離子交換樹脂為弱堿330陰離子交換樹脂701、強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂201×4。本發(fā)明制備方法中，凡涉及干燥時(shí)，可采用烘箱干燥、真空干燥、冷凍干燥和/或噴霧干燥。本發(fā)明制備方法中，凡涉及濃縮工藝時(shí)，可采用減壓濃縮、常壓濃縮。本發(fā)明方法中凡涉及沉淀或析出物與液體分離時(shí)，可采用離心分離、膜分離和/或常壓或減壓過濾。粉碎可采用單獨(dú)粉碎和/或混合粉碎。本發(fā)明中凡涉及提取時(shí)，可采用超聲提取、加熱回流提取、或浸提。本發(fā)明固態(tài)呈淺棕色或淺黃色粉末?？裳兄瞥上盗芯哂薪笛亲饔玫乃幤坊蚬δ苄允称罚に囘^程簡(jiǎn)單，成本低，藥效顯著，食用方便并且可以充分利用自然資源。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例及藥效試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。桑葉降血脂有效組分組合物制備實(shí)例如下實(shí)例1取?？浦参锷涞娜~子2kg，除去雜質(zhì)，低溫干燥后粉碎，加入3倍體積的石油醚提取，除去脂溶性成分，然后過濾，取渣去液。濾渣揮去有機(jī)溶劑，得桑粉渣。桑粉渣加入5倍體積熱水提取，過濾，去渣取液。濾液中加入乙醇使?jié)舛葹?0％，沉淀，過濾，得上清液和沉淀。上清液先用001×8(強(qiáng)酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂)純化，用0.4M的氨水洗脫，收集洗脫液，濃縮，再用701(弱堿330陰離子交換樹脂)純化，用水溶液洗脫。洗脫液濃縮干燥后得桑葉生物堿，其中1-脫氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。沉淀用水溶解后加入三氯乙酸除蛋白，離心。取上清液用NaOH溶液調(diào)pH＝7，再離心。取上述上清液透析，透析后加入乙醇使?jié)舛葹?0％，沉淀過濾。沉淀干燥后即得淺黃色桑葉多糖粉末。合并桑葉生物堿和桑葉多糖即得桑葉降血糖有效組分組合物實(shí)例2取?？浦参锷涞娜~子2kg，除去雜質(zhì)，低溫干燥后粉碎，加入5倍體積的乙酸乙酯提取，除去脂溶性成分，然后過濾，取渣去液。濾渣揮去有機(jī)溶劑，得桑粉渣。桑粉渣加入6倍體積熱水提取，過濾，去渣取液。濾液中加入乙醇使?jié)舛葹?0％，沉淀，過濾，得上清液和沉淀。上清液先用D152(大孔弱酸丙烯酸系陽離子交換樹脂)純化，用0.5M的氨水洗脫，收集洗脫液濃縮，再用201×4(強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂)純化，用水溶液洗脫。洗脫液濃縮干燥后得桑葉生物堿，其中1-脫氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。沉淀用水溶解后加入三氯乙酸除蛋白，離心。取上清液用NaOH溶液調(diào)pH＝7，再離心。取上述上清液透析，透析后加入乙醇使?jié)舛葹?0％，沉淀、過濾。沉淀干燥后即得淺黃色桑葉多糖粉末。合并桑葉生物堿和桑葉多糖即得桑葉降血糖有效組分組合物。實(shí)例3取?？浦参锷涞娜~子2kg，除去雜質(zhì)，低溫干燥后粉碎，加入5倍體積的甲醇提取，除去脂溶性成分，然后過濾，取渣去液。濾渣揮去有機(jī)溶劑，得桑粉渣。桑粉渣加入8倍體積熱水提取，過濾，去渣取液。濾液中加入乙醇使?jié)舛葹?0％，沉淀，過濾，得上清液和沉淀。上清液先用724(弱酸1D1陽離子交換樹脂)純化，用0.6M的氨水洗脫，收集洗脫液濃縮，再用201×4(強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂)純化，用水溶液洗脫。洗脫液濃縮干燥后得桑葉生物堿，其中1-脫氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。沉淀用水溶解后加入三氯乙酸除蛋白，離心。取上清液用NaOH溶液調(diào)pH＝7，再離心。取上述上清液透析，透析后加入乙醇使?jié)舛葹?0％，沉淀，過濾。沉淀干燥后即得淺黃色桑葉多糖粉末。合并桑葉生物堿和桑葉多糖即得桑葉降血糖有效組分組合物。實(shí)例4取?？浦参锷涞娜~子2kg，除去雜質(zhì)，低溫干燥后粉碎，加入5倍體積的無水乙醇提取，除去脂溶性成分，然后過濾，取渣去液。濾渣揮去有機(jī)溶劑，得桑粉渣。桑粉渣加入7倍體積熱水提取，過濾，去渣取液。濾液中加入乙醇使?jié)舛葹?0％，沉淀，過濾，得上清液和沉淀。上清液先用001×8(強(qiáng)酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂)純化，用0.7M的氨水洗脫，收集洗脫液濃縮，再用701(弱堿330陰離子交換樹脂)純化，用水溶液洗脫。洗脫液濃縮干燥后得桑葉生物堿，其中1-脫氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。沉淀用水溶解后加入三氯乙酸除蛋白，離心。取上清液用NaOH溶液調(diào)pH＝7，再離心。取上述上清液透析，透析后加入乙醇使溶液濃度為60％，沉淀，過濾。沉淀干燥后即得淺黃色桑葉多糖粉末。合并桑葉生物堿和桑葉多糖即得桑葉降血糖有效組分組合物。實(shí)例5取?？浦参锷涞娜~子2kg，除去雜質(zhì)，低溫干燥后粉碎，加入4倍體積的無水乙醇提取，除去脂溶性成分，然后過濾，取渣去液。濾渣揮去有機(jī)溶劑，得桑粉渣。桑粉渣加入10倍體積熱水提取，過濾，去渣取液。濾液中加入乙醇使?jié)舛葹?0％，沉淀，過濾，得上清液和沉淀。上清液先用724(弱酸1D1陽離子交換樹脂)純化，用0.8M的氨水洗脫，收集洗脫液濃縮，再用201×4(強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂)純化，用水溶液洗脫。洗脫液濃縮干燥后得桑葉生物堿，其中1-脫氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。沉淀用水溶解后加入三氯乙酸除蛋白，離心。取上清液用NaOH溶液調(diào)pH＝7，再離心。取上述上清液透析，透析后加入乙醇使溶液濃度為50％，沉淀，過濾。沉淀干燥后即得淺黃色桑葉多糖粉末。合并桑葉生物堿和桑葉多糖即得桑葉降血糖有效組分組合物。第二部分藥效試驗(yàn)本發(fā)明提供的桑葉降血糖有效組分組合物有良好的降血糖作用。已經(jīng)過動(dòng)物試驗(yàn)證明，藥效試驗(yàn)報(bào)告如下1、樣品桑葉降血糖有效組分組合物。2、試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠雌雄兼用，體重(22±2)g，由江蘇大學(xué)動(dòng)物中心提供。3、試驗(yàn)方法(1)糖尿病模型的制備健康小鼠，絕食24h后，腹腔注射新鮮配制的四氧嘧啶200mg/kg，3天后取尾血測(cè)血糖，選取血糖值在14.9mmol/L以上的即為糖尿病模型小鼠。(2)形成糖尿病模型的小鼠，按10只為一組，分別腹腔注射實(shí)例1～實(shí)例5的桑葉降血糖有效組分組合物，于第八天測(cè)血糖。(3)血糖值測(cè)定使用ONETOUCHTMBasicTMPlus穩(wěn)捷基礎(chǔ)倍加型血糖監(jiān)測(cè)儀測(cè)定。4、測(cè)試結(jié)果采用不同工藝獲得的桑葉降血糖有效組分組合物降糖試驗(yàn)結(jié)果見表1。表1不同實(shí)例的桑葉降血糖有效組分組合物的降糖效果<tablesid="table2"num="002"><tablewidth="766">(mg/kg，i.p.)(mmol/L)mmol/L％正常對(duì)照同容量4.96±0.934.75±0.750.0010糖尿病對(duì)照同容量25.25±4.7524.35±5.980.03±15.4010實(shí)例110024.21±5.3115.40±9.20##38.32±31.58*10實(shí)例210020.85±4.3514.19±7.17##34.47±25.67*10實(shí)例310021.41±6.6715.10±6.21#26.44±24.44*10實(shí)例410018.67±4.3711.7±5.67#35.22±15.22*10實(shí)例510023.12±3.1513.58±2.15#41.26±13.45*10</table></tables>與糖尿病對(duì)照組相比*P＜0.05、**P＜0.01；給藥前后與給藥后自身相比#P＜0.05、##P＜0.01試驗(yàn)結(jié)果表明幾種桑葉降血糖有效組分組合物，均有明顯的降血糖作用。a給藥前血糖值，b給藥后血糖值。權(quán)利要求1.一種桑葉降血糖有效組分組合物，其特征在于該有效組分組合物為桑葉多糖和桑葉生物堿，固態(tài)呈淺棕色或淺黃色粉末，其中桑葉多糖分子量大于100萬道爾頓，重量百分比為20～80％，桑葉生物堿中1-脫氧野尻霉素含量大于50％，重量百分比為80～20％。2.權(quán)利要求1所述的一種桑葉降血糖有效組分組合物的制備方法，其特征在于以桑科植物桑樹的葉子為原料，按下述順序的步驟制備得到①桑葉除去雜質(zhì)，低溫干燥后粉碎稱重，得桑葉粉末；②桑葉粉末用有機(jī)溶劑提取，除去脂溶性部分，然后過濾，取渣去液；③濾渣揮去有機(jī)溶劑，得桑葉粉渣；④桑葉粉渣用熱水提取，過濾，濾液加入乙醇使?jié)舛葹?0％～80％，然后過濾，得上清液和沉淀。⑤將所得的上清液用陽離子樹脂交換，再用陰離子樹脂交換除去雜質(zhì)。⑥將陽離子樹脂用0.4M～0.8M的氨水溶液洗脫，收集陽離子樹脂的氨水洗脫液，濃縮，濃縮液上陰離子樹脂，用水溶液洗脫，收集陰離子樹脂水洗脫液，濃縮，干燥，即得桑葉生物堿，其中主要生物堿成分1-脫氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量不少于50％。⑦將所得的沉淀用水溶解，再加入三氯乙酸除去蛋白，離心，得上清液；⑧將步驟⑦得到的上清液用NaOH溶液調(diào)pH＝7，離心；⑨將步驟⑧得到的上清液透析，然后加入乙醇使溶液濃度為40％～80％，沉淀，過濾；⑩將步驟⑨中所得沉淀，干燥，即得桑葉多糖；(11)合并步驟⑥所得生物堿和步驟⑩所得桑葉多糖，即得桑葉降血糖有效組分組合物；上述所用有機(jī)溶劑為石油醚、乙酸乙酯、甲醇、無水乙醇；所用陽離子交換樹脂為強(qiáng)酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂001×8、大孔弱酸丙烯酸系陽離子交換樹脂D152、弱酸1D1陽離子交換樹脂724、陽離子交換樹脂732；所用陰離子交換樹脂為弱堿330陰離子交換樹脂701、強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂201×4。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桑葉降血糖有效組分組合物的制備方法，其特征在于采用烘箱干燥、真空干燥、冷凍干燥和/或噴霧干燥；采用減壓濃縮或常壓濃縮工藝；采用離心分離、膜分離和/或常壓或減壓過濾進(jìn)行沉淀或析出物與液體分離；采用單獨(dú)粉碎和/或混合粉碎；采用超聲提取、加熱回流提取或浸提。全文摘要本發(fā)明涉及桑葉降血糖有效組分組合物及制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。組合物中桑葉多糖分子量大于100萬道爾頓，重量百分比為20～80％，桑葉生物堿中1－脫氧野尻霉素含量大于50％，重量百分比為80～20％。制備時(shí)桑葉除去雜質(zhì)，低溫干燥后粉碎稱重，得桑葉粉末，再用有機(jī)溶劑提取，除去脂溶性部分，然后過濾，取渣去液；濾渣揮去有機(jī)溶劑，得桑粉渣；再用熱水提取，過濾，濾液加入乙醇使?jié)舛葹?0％～80％，然后過濾，得上清液和沉淀。用陽離子樹脂交換，再用陰離子樹脂交換除去雜質(zhì)，濃縮，干燥，即得桑葉生物堿。本發(fā)明工藝過程簡(jiǎn)單，成本低，藥效顯著，食用方便并且可以充分利用自然資源。文檔編號(hào)A61P3/00GK1850166SQ20061003871公開日2006年10月25日申請(qǐng)日期2006年3月8日優(yōu)先權(quán)日2006年3月8日發(fā)明者歐陽臻,賈曉斌,李永輝,常鈺,江濤濤申請(qǐng)人:江蘇大學(xué)