專利名稱：栗花提取物在制藥中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，更具體的說是關(guān)于一種從殼斗科栗屬植物栗(Castanea mollissima Blume)花的提取物在制藥中的用途。
背景技術(shù)：
以下定義適用于整個(gè)說明書和權(quán)利要求書
栗酮是指從栗花中提取的有效部位，代表栗花提取物中具治療心腦血管疾病活性地有效組分，其含量以蘆丁計(jì)。
栗花為殼斗科栗屬植物栗(Castanea mollissima Blume)的雄性干燥花序。栗，又稱中國栗、板栗、油栗，是我國的主要栽培品種，分布全國20多個(gè)省市區(qū)，主要產(chǎn)區(qū)集中在黃河流域的河北、山東和長江流域的湖北、安徽、江蘇等省。栗花水煎劑在我國民間用于治療久治不愈的腹瀉?！度沼帽静荨酚涊d，栗花微溫，微苦、澀，治瘰癘。《滇南本草》載治目久赤，白痢疾，大腸下血?！端拇ㄖ兴幹尽份d治小兒消化不良及腹瀉不止。國內(nèi)外對(duì)栗花的研究很少，到目前為止，只報(bào)道過花中揮發(fā)油成分，其它化學(xué)成分及其內(nèi)在的藥物活性均未見深入報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種栗花提取物在制備治療心腦血管病藥物組合物中的用途。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供栗花提取物在制備治療高脂血癥藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明是從干燥的栗花中提取有效組分。取干栗花加10倍量的水，煮沸1小時(shí)，過濾；濾渣再加8倍量的水，煮沸1小時(shí)，過濾；二次濾液合并后，加入已處理好的聚酰胺柱中。先用水洗滌，除去雜質(zhì)；再用11丙酮/水混合溶媒洗脫，洗脫至洗脫液對(duì)三氯化鐵試液無反應(yīng)為止。洗脫液濃縮干燥，即得栗花提取物。經(jīng)分析，提取物中含有下列類型化合物生物堿、木脂素、黃酮、三萜、有機(jī)酸、甾醇、多元醇等。該提取物顯示如下理化特性
1.呈棕黃色或橙黃色粉末，氣微，微苦。
2.易溶于甲醇、乙醇；溶于水、丙酮、正丁醇；略溶于乙酸乙酯；微溶于二氯甲烷、三氯甲烷；不溶于乙醚、石油醚。
3.與三氯化鐵試液反應(yīng)顯藍(lán)色，顯示有酚羥基存在。
4.與鹽酸-鎂粉反應(yīng)產(chǎn)生紅色泡沫，顯示有黃酮類化合物存在。
5.與溴酚藍(lán)試液反應(yīng)，在藍(lán)色背景上顯示黃色斑點(diǎn)，顯示有機(jī)酸化合物存在。
6.與醋酐濃硫酸反應(yīng)，產(chǎn)生紫紅色，顯示有三萜化合物存在。
7.與甲萘酚試液反應(yīng)，產(chǎn)生紫紅色環(huán)，顯示有還原糖和其它還原性物質(zhì)存在。
8.紅外光譜的特征吸收峰
羥基3382～3385羰基1693～1698
芳環(huán)1651～16521605～16081511～1513
碳氧1068～10701034～1035
9.黃酮含量在5wt％以上
本發(fā)明用栗花提取物進(jìn)行了急毒和藥效試驗(yàn)，試驗(yàn)觀察了栗花提取物在治療心腦血管疾病的作用機(jī)理及其對(duì)高脂血癥的治療作用。
1.栗花提取物對(duì)小鼠產(chǎn)生的毒性反應(yīng)
栗花提取物一次性灌胃給藥對(duì)小鼠產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，結(jié)果見表1
表1.灌胃給栗花提取物對(duì)小鼠體重的影響
試驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠一次性灌胃給栗花提取物10.0g/kg，無動(dòng)物死亡。
該劑量已達(dá)栗花提取物最大濃度和最大灌胃給藥體積，無法測出灌胃給藥小鼠LD50。
2.栗花提取物對(duì)小鼠常壓下耐缺氧作用的影響
栗花提取物對(duì)小鼠常壓下耐缺氧作用的影響，結(jié)果詳見表2。
表2 栗花提取物對(duì)小鼠常壓下耐缺氧作用的影響(X±s，n＝8)
注與空白對(duì)照組比較 *P＜0.05 **P＜0.01
從表2中可以看出，栗花提取物兩個(gè)劑量組均可以明顯延長小鼠常壓下耐缺氧的存活時(shí)間。
3.栗花提取物對(duì)大鼠急性不完全性腦缺血的保護(hù)作用
栗花提取物對(duì)大鼠急性不完全性腦缺血的保護(hù)作用，結(jié)果詳見表3。
表3.栗花提取物對(duì)急性不完全性腦缺血大鼠腦指數(shù)和腦含水量的影響(X±s，n＝10)
注與腦缺血模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01
從表3中可以看出，腦缺血模型組的腦指數(shù)和腦含水量明顯高于假手術(shù)組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.01)，說明腦缺血模型建立成功。栗花提取物大劑量組明顯降低急性不完全性腦缺血大鼠的腦指數(shù)和腦含水量，小劑量組雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但有降低趨勢(shì)。表明栗花提取物可明顯減輕大鼠急性不完全性腦缺血所引起的腦水腫。
4.栗花提取物對(duì)垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血的影響
栗花提取物對(duì)垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血的影響，結(jié)果詳見表4。
表4 栗花提取物對(duì)垂體后葉素致大鼠急性心肌缺血的拮抗作用
結(jié)果表明，栗花提取物大、小劑量組均可明顯減少由垂體后葉素所致的急性心肌缺血陽性率，與空白對(duì)照組比較有明顯差異(P＜0.05)。
5.栗花提取物對(duì)大鼠血液粘度的影響
栗花提取物對(duì)大鼠血液粘度的影響，結(jié)果見表5。
表5 栗花提取物對(duì)大鼠血液粘度的影響(n＝10，x±s)
注與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01
由表5可見，栗花提取物大劑量組0.10g/kg可以明顯降低大鼠血液粘度。
6.栗花提取物對(duì)大鼠頸總動(dòng)脈血栓形成的影響
栗花提取物對(duì)大鼠頸總動(dòng)脈血栓形成的影響，結(jié)果見表6。
表6 栗花提取物對(duì)大鼠頸總動(dòng)脈血栓形成的影響(X±s，n＝9)
注與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01
結(jié)果表明，栗花提取物大劑量組0.10g/kg可明顯延長大鼠體內(nèi)血栓形成時(shí)間。說明栗花提取物具有抑制體內(nèi)血栓形成的作用。
7.栗花提取物對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響
栗花提取物對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響，結(jié)果詳見表7。
表7 栗花提取物對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響(X±s，n＝10，記錄時(shí)間10min)
注與空白對(duì)照組比較 P＞0.05
結(jié)果表明，栗花提取物二個(gè)劑量組對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)均無明顯影響。
8.栗花提取物對(duì)小鼠高脂血癥的影響
栗花提取物對(duì)小鼠高脂血癥的影響，結(jié)果詳見表8。
表8 栗花提取物對(duì)小鼠高脂血癥的影響(X±s，n＝10)
注與高脂對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01
從表8中可以看出，栗花提取物大、小劑量組均明顯降低由于腹腔注射蛋黃乳液造成的高脂血癥小鼠的血清TC和LDL-c值，并相對(duì)地升高HDL-c值。結(jié)果表明栗花提取物能有效地預(yù)防蛋黃乳液引起的小鼠高脂血癥。
9.栗花提取物對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響
試驗(yàn)觀察了栗花提取物灌胃給藥對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用。結(jié)果見表9。
表9栗花提取物對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠收縮期血壓(mmHg)的影響(n＝6X±S)
注*與藥前相比，*P＜0.05，**P＜0.01
結(jié)果表明，栗酮280mg/kg灌胃給藥7天可明顯降低自發(fā)性高血壓大鼠收縮壓，與藥前相比差異顯著(P＜0.01)。
10.栗花提取物對(duì)大鼠體內(nèi)氧自由基的影響
方法Wistar大鼠30只，雌雄各半，體重217±31g。隨機(jī)分為3組，即空白對(duì)照組、栗花提取物大劑量組0.5g/kg、小劑量組0.25g/kg。灌胃給藥。每天1次，連續(xù)7天。給藥體積為2ml/200g大鼠。空白對(duì)照組給予等容積的生理鹽水。于末次給藥后1.0小時(shí)從頸靜脈竇取血2.5ml，離心得血清，測定丙二醛(MDA)和過氧化物歧化酶(SOD)。
表10.栗花提取物對(duì)大鼠血清MDA和SOD含量的影響(x±s n＝10)
注與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05
從表中可以看出，栗花提取物大劑量組可以明顯降低大鼠血清MDA含量，并顯著增加SOD含量，說明栗花提取物具有清除氧自由基的作用。鼠傷寒沙門氏菌基因回復(fù)突變?cè)囼?yàn)，觀察栗花提取物的遺傳安全性。
栗花提取物鼠傷寒沙門氏菌基因回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(Ames試驗(yàn))，結(jié)果見表11。
試驗(yàn)結(jié)果表明，栗花提取物各劑量組對(duì)四個(gè)菌株TA97、TA98、TA100和TA102的回復(fù)菌落都未超過自然回復(fù)菌落數(shù)的2倍，故試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
表11.栗花提取物的TA97、TA98、TA100和TA102致突變性試驗(yàn)結(jié)果
*-S9TA97、TA98、TA100、TA102敵克松(50μg/皿)
+S9TA97、TA98、TA100、TA102 2-氨基芴(20μg/皿)
綜合上述試驗(yàn)結(jié)果表明，
1.小鼠一次性灌胃給栗花提取物10.0g/kg，無動(dòng)物死亡。該劑量已達(dá)栗花提取物最大濃度和最大灌胃給藥體積，無法測出灌胃給藥小鼠LD50。
2.栗花提取物0.5g/kg和1.0g/kg均能明顯增加小鼠常壓下耐缺氧能力。
3.栗花提取物0.5g/kg和0.25g/kg可明顯減輕大鼠急性不完全性腦缺血所引起的腦水腫。
4.栗花提取物0.5g/kg和0.25g/kg對(duì)垂體后葉素致冠狀動(dòng)脈痙攣引起的大鼠急性心肌缺血有明顯的拮抗作用。
5.栗花提取物0.10g/kg可以明顯降低大鼠血液粘度。
6.栗花提取物0.10g/kg可明顯延長大鼠體內(nèi)血栓形成時(shí)間。
7.栗花提取物1.0g/kg和0.5g/kg對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)均無明顯影響。
8.栗花提取物1.0g/kg和0.5g/kg均顯著降低蛋黃乳液致高脂血癥模型小鼠血清膽固醇、低密度脂蛋白的含量，并相對(duì)升高高密度脂蛋白含量。表明栗花提取物能有效地預(yù)防蛋黃乳液引起的小鼠高脂血癥。
9.栗花提取物280mg/kg灌胃給藥7天可明顯降低自發(fā)性高血壓，大鼠收縮壓，與藥前相比差異顯著(P＜0.01)。
10.栗花提取物0.5g/kg可以明顯降低大鼠血清MDA含量，并顯著增加SOD含量，說明栗酮具有清除氧自由基的作用。
以上實(shí)驗(yàn)證明了栗花提取物的藥理活性，從而確認(rèn)栗花提取物可以用于制備心、腦血管病的藥物組合物，在所述的藥物組合物中含有栗花提取物以及藥學(xué)上可以接受的載體。實(shí)驗(yàn)還證明了栗花提取物也可以用于制備治療高脂血癥的藥物組合物。
具體實(shí)施例方式
下面在以實(shí)際例子來對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
取干栗花1kg，加10kg水，煮沸1小時(shí)，過濾；濾渣再加8kg水，煮沸1小時(shí)，過濾；二次濾液合并后，加入已處理好的聚酰胺柱中。先用水洗滌，除去雜質(zhì)；再用1∶1丙酮/水混合溶媒洗脫。洗脫液濃縮成浸膏，干燥，即得栗花提取物純品25g，含量在30％以上。
將栗花提取物，按常規(guī)方法制成片劑或膠囊或針劑，每片0.1g，供臨床口服治療心、腦血管病使用。
本品使用時(shí)，治療心、腦血管病片劑或膠囊一日三次，每次0.1～0.2g；注射用靜脈滴注每日一次，每次50～100mg。
權(quán)利要求
1.栗花提取物在制備治療心腦血管病藥物組合物中的用途，其中所述的藥物組合物中含有栗花提取物，以及藥學(xué)上可以接受的載體。
2.栗花提取物在制備治療高脂血癥藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明是一種從栗花中提取的栗花提取物，可用于制備治療心腦血管病的藥物組合物，在該藥物組合物中含有栗花提取物以及藥學(xué)上可接受的載體。栗花提取物也可以在制備治療高脂血癥藥物中的應(yīng)用。經(jīng)藥效學(xué)及毒理學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明栗花提取物制成的藥物，毒副作用較小，有效成分明確，服用劑量少，更有利于保證藥物的安全性和有效性。
文檔編號(hào)A61K133/00GK1839900SQ20061004221
公開日2006年10月4日 申請(qǐng)日期2006年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月23日
發(fā)明者丁杏苞, 解硯英, 唐文照, 王曉靜, 王元書, 王福文, 孫敏耀, 杜成林 申請(qǐng)人:山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所