專利名稱：栗花提取物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中藥領域，更具體地說，是涉及一種從殼斗科栗屬植物栗(Castanea Mollissima Blume)的雄性花序中提取的有效部位，以及該提取物的制備方法。
背景技術：
以下定義適用于整個說明書及權利要求書栗酮是指從栗花中提取的有效部位，代表栗花提取物中具有治療心、腦血管疾病活性的有效組分，其含量以蘆丁計。
栗花為殼斗科栗屬植物栗(Castanea Mollissima Blume)的雄性花序。栗又稱中國栗、板栗、油栗，是我國的主要栽培品種，分布于全國20多個省、市、區(qū)。主要產區(qū)集中在黃河流域的河北、山東和長江流域的湖北、安徽、江蘇等省。栗花水煎劑在我國民間用于治療久治不愈的腹瀉?！度沼帽静荨酚涊d，栗花微溫、微苦、澀。治瘰疬?！兜崮媳静荨份d治日久赤白痢疾，大腸下血?！端拇ㄖ兴幹尽份d治小兒消化不良及腹瀉不止。國內、外對栗花研究很少，到目前為止，只報道過花中揮發(fā)油成分，其他化學成分及其內在的藥物活性均未深入研究。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種高效、低毒具有治療心、腦血管疾病及高脂血癥活性的栗花提取物。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種栗花提取物的制備方法。
本發(fā)明的解決方案是從干燥栗花中提取一種具有治療心、腦血管疾病及高脂血癥活性的栗花提取物，該提取物中含有5％以上的栗酮。該提取物顯示以下理化特性(1)呈棕黃色或橙黃色粉末，氣微，微苦。
(2)易溶于甲醇、乙醇；溶于水、丙酮、正丁醇；略溶于乙酸乙酯；微溶于二氯甲烷、三氯甲烷；不溶于乙醚、石油醚。
(3)取栗花提取物少許，加甲醇2ml溶解，滴加數滴三氯化鐵試液顯藍色，判定有酚羥基存在；(4)取栗花提取物少許，溶于適量甲醇，溶液點于濾紙上，晾干，噴溴酚藍試液，在藍色背景上顯黃色斑點，判定有有機酸化合物存在；(5)取栗花提取物少許，加甲醇2ml溶解，加少許鎂粉，滴加數滴濃鹽酸，產生紅色泡沫，判定有黃酮類化合物存在；(6)取栗花提取物少許，加醋酐0.5ml溶解，滴加濃硫酸1滴，產生紫紅色，顯示有三萜類化合物存在；(7)取栗花提取物少許，加甲萘酚試液數滴，沿試管壁滴加少量濃硫酸，產生紫紅色環(huán)，顯示有還原糖及其它還原性物質存在；(8)紅外吸收光譜的最大特征吸收峰羥基3382-3385；羰基1693-1698；芳環(huán)1651-1652、1605-1608、1511-1513；碳氧1068-1070、1034-1035。
本發(fā)明所述的栗花提取物的制備方法，包括以下主要步驟(1)栗花粗提物的制?、偃「稍锏睦趸ǎ尤軇┨崛?。溶劑的加入量，以栗花的重量與溶劑的體積比計，每份栗花加5-15份溶劑，可以用冷浸取，也可以加熱浸取。這里所說的溶劑選自水、甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮以及醇與水、丙酮與水、乙醇-丙酮-水的混合物中的一種。
②提取液過濾，濾液濃縮得到栗花粗提物浸膏，其中含有5％以上的栗酮。
(2)栗花粗提物的分離栗花粗提物浸膏加10倍量水溶解，過濾，濾液上層析柱，所選的層析柱選自聚酰胺或纖維素，用水洗滌，除去雜質，再用溶劑洗脫，洗脫液濃縮回收溶劑后，干燥，即得栗酮含量為35％以上的栗花提取物。這里所用的洗脫溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、丁酮和乙酸乙酯；以及二氯甲烷或三氯甲烷或乙酸乙酯與上述溶劑的混合物。
(3)栗花提取物的精制方法(A)栗花提取物加適量水稀釋后，再用溶劑萃取，萃取液蒸餾濃縮，回收溶劑后，干燥，即得到精制的栗花提取物，栗酮的含量達50％以上。這里所說的萃取溶劑選自乙酸乙酯或正丁醇。
或者方法(B)栗花提取物加適量稀醇溶解，用硅藻土拌樣后，晾干，再用方法(2)中的溶劑進行沙氏提取，提取液濃縮，干燥，得到栗酮含量為50％以上的精制栗花提取物。
或者方法(C)栗花提取物加適量稀醇溶解，再加10倍重量(栗花提取物量)的聚酰胺拌勻，晾干，上層析柱，用水洗滌，除去雜質，再用方法(2)中的溶劑洗脫，洗脫液濃縮回收溶劑后，干燥得到栗酮含量為65％以上的精制栗花提取物。
根據本發(fā)明提供的制備方法，根據需要可以精心設計出多種優(yōu)選的栗花提取物制備工藝。本發(fā)明的一種優(yōu)選制備工藝是包括以下主要步驟
1.取干燥的栗花，加10-12倍重量的水，加熱煮沸提取2-3次，每次1小時，合并提取液，過濾，濾液即為栗花粗提物溶液；2.栗花粗提物溶液上聚酰胺柱；3.先用水洗至流出液呈淡黃色為止，棄去洗滌液，再以丙酮/水(1∶1)的混合溶劑洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；4.濃縮洗脫液，用適量稀醇溶解，再加10倍重量(栗花提取物量)的聚酰胺拌勻，晾干，上層析柱；5.用水洗滌，除去雜質，再用丙酮/水(1∶1)的混合溶劑洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；6.濃縮洗脫液，干燥，得到精制的栗花提取物。含量在50％以上。
本發(fā)明的另一個優(yōu)選制備工藝是包括以下主要步驟1.取干燥的栗花，加9-11倍的甲醇進行冷浸取2-3次，每次24小時，合并浸取液，過濾，濾液濃縮得到浸膏，即為栗花粗提物；2.浸膏加10倍重量(栗花提取物量)的水溶解，過濾，濾液上聚酰胺層析柱；3.先用水洗至流出液呈淡黃色為止，棄去洗滌液，再以丙酮/水(1∶1)混合溶劑洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；4.濃縮洗脫液，得到栗花提取物浸膏；5.浸膏加適量水稀釋，用正丁醇作液液萃?。?.取正丁醇萃取相，減壓濃縮回收正丁醇，得濃浸膏；7.濃浸膏加適量稀醇溶解，再加10倍重量(浸膏量)的聚酰胺拌勻，晾干，上層析柱；8.用水洗滌至流出液呈淡黃色為止，再以丙酮/水(1∶1)混合溶劑洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；9.濃縮洗脫液，回收溶劑，干燥剩余物，即得到精制的栗花提取物。含量在65％以上。
總之，用本發(fā)明提供的制備方法，根據需要可以制備得到栗酮含量在5wt％以上或35wt％以上或50wt％以上或65wt％以上或80wt％以上的栗花提取物。如此制備得到的栗花提取物可用于制備治療心、腦血管疾病藥物組合物，以及制備治療高脂血癥的藥物。
本發(fā)明的優(yōu)點是很明顯的，本發(fā)明利用廢棄的栗花提取含栗酮的提取物，工藝合理，成本低，易于推廣，經提取、分離、精制得到的栗花提取物，其中栗酮含量至少在5wt％以上，經進一步純化可以得到栗酮含量65％以上的栗花提取物。該提取物毒副作用小，具有多靶點生理活性，活性強，用于制藥有利于保證藥物的安全性和有效性。
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明。
1.栗花粗提物的制備方法一、干燥的栗花一份(以重量份計)，加12倍水，煮沸1小時，過濾；濾渣再加10份水，煮沸1小時，過濾。合并二次濾液，減壓濃縮得到栗花粗提物浸膏，含6.5％栗酮。
方法二、取干燥的栗花一份，加10份甲醇，加熱回流提取1小時，過濾；濾渣再加8份甲醇，加熱回流提取1小時，過濾。合并二次濾液，減壓蒸餾回收甲醇，干燥剩余物得到栗花粗提物，栗酮含量為6.8％。
方法三、取干燥的栗花一份，加10份異丙醇，加熱回流提取兩次，每次1小時，過濾，合并濾液，濃縮回收異丙醇，干燥剩余物，得到栗花粗提物，栗酮含量為10.6％。
方法四、取干燥的栗花一份，加10份丙酮，加熱回流提取1小時，過濾；濾渣再加8份甲醇，加熱回流提取1小時，過濾。合并二次濾液，濃縮回收丙酮，干燥剩余物，得到栗花粗提物，栗酮含量為16.5％。
2.栗花粗提物的分離方法五、取栗花粗提物加10倍量水溶解，過濾，濾液上聚酰胺層析柱，用水洗滌，除去雜質，再用丙酮/水(1∶1)混合溶劑為洗脫溶劑進行洗脫，收集洗脫液，濃縮回收溶劑，干燥，得到栗花提取物，栗酮含量為35％以上。
3.栗花提取物的精制方法六、取栗花提取物加水稀釋后，用正丁醇作液液萃取，分離正丁醇相，正丁醇萃取液減壓蒸餾回收溶劑后，干燥，即得到精制的栗花提取物。栗酮的含量達50％以上。
方法七、取栗花提取物，加適量稀醇溶解，拌硅藻土，晾干，用丙酮進行沙氏提取，提取液濃縮，干燥，得到精制栗花提取物。栗酮含量為50％以上。
方法八、取栗花提取物，加適量稀醇溶解，再加10倍重量(栗花提取物量)的聚酰胺拌勻，晾干，上層析柱，用水洗滌，除去雜質，再用丙酮/水(1∶1)為洗脫劑進行洗脫，收集洗脫液，濃縮回收溶劑后，干燥得到精制栗花提取物。栗酮含量為65％以上。
實施例(一)取栗花加12倍重量份的水，煮沸1小時，過濾；濾渣再加10倍量的水，煮沸1小時，過濾；合并二次濾液；加入已處理好的聚酰胺柱中，柱子用水洗滌，至流出液呈淡黃色為止；再用丙酮/水(1∶1)混合溶劑洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；洗脫液濃縮，干燥，即得栗花提取物。栗酮含量為35.21％。
實施例(二)取栗花加10倍量的乙醇加熱回流提取1小時，過濾；濾渣再加8倍量的乙醇加熱回流提取1小時，過濾；二次濾液合并，減壓回收溶劑，剩余物加10倍量的水攪拌溶解，過濾，濾液上聚酰胺柱，柱子用水洗滌，至流出液呈淡黃色為止；再用異丙醇洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；洗脫液減壓回收溶劑，剩余物干燥，即得栗花提取物。栗酮含量為36.86％。
實施例(三)取栗花加10倍量的異丙醇，加熱回流提取2次，每次1小時；過濾，濾液合并，減壓回收溶劑，剩余物加10倍的水攪拌溶解，過濾，濾液上聚酰胺柱，柱子用水洗滌，至流出液呈淡黃色為止；再用甲醇洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；洗脫液減壓回收溶劑，剩余物干燥，即得栗花提取物。栗酮含量為40.80％。
實施例(四)取栗花加10倍量的甲醇，冷浸2次，每次24小時，冷浸液減壓回收溶劑，得到粗制栗花提取物浸膏；再加10倍量的水溶解，過濾，濾液上聚酰胺柱，柱子用水洗滌，至流出液呈淡黃色為止；再用乙醇洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；洗脫液濃縮，得栗花提取物浸膏；加適量水混勻，用正丁醇萃取，萃取液濃縮，干燥，得精制栗花提取物。栗酮含量為54.71％。
實施例(五)取栗花加10倍重量份的丙酮，加熱回流提取2次，每次1小時；提取液過濾，濾液合并，回收溶劑，濃縮得到栗花粗提物浸膏；浸膏加10倍量的水溶解過濾，濾液上聚酰胺柱，柱子用水洗滌，至流出液呈淡黃色為止；再用異丙醇洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；洗脫液濃縮，得栗花提取物浸膏；加適量稀醇溶解，拌硅藻土，晾干，用丁酮沙氏提取，提取液回收溶劑，濃縮，干燥，得精制栗花提取物。栗酮含量為56.23％。
實施例(六)取栗花加10倍重量份的丙酮/水(1∶1)混合溶劑加熱回流提取2次，每次1小時；提取液過濾，濾液合并，回收溶劑，濃縮得到栗花粗提物浸膏；浸膏加10倍量的水溶解過濾，濾液上聚酰胺柱，柱子用水洗滌，至流出液呈淡黃色為止；再用丙酮/水(1∶1)的混合溶劑洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；洗脫液濃縮，得栗花提取物浸膏；栗花提取物浸膏加適量水混勻，用正丁醇萃取，直至萃取液中無三氯化鐵試液反應為止；萃取液減壓回收溶劑，剩余物干燥，得栗花提取物；再加適量稀醇溶解，加10倍量(栗花提取物)的聚酰胺拌勻，晾干，裝層析柱，柱子用水洗滌，至流出液呈淡黃色為止；再用丙酮/水(1∶1)混合溶劑洗脫，洗脫至洗脫液無三氯化鐵試液反應為止，收集洗脫液；洗脫液濃縮，干燥，得精制栗花提取物。栗酮含量為68.52％。
權利要求
1.一種栗花提取物，其特征在于其中含有5wt％以上的栗酮，該提取物顯示以下理化性質(1)呈棕黃色或橙黃色粉末，氣微，微苦；(2)易溶于甲醇、乙醇；溶于水、丙酮、正丁醇；略溶于乙酸乙酯；微溶于二氯甲烷、三氯甲烷；不溶于乙醚、石油醚；(3)與三氯化鐵試液反應顯藍色，顯示有酚羥基存在；(4)與鎂粉-鹽酸反應產生紅色泡沫，顯示有黃酮類化合物存在；(5)與溴酚藍試液反應，在藍色背景上顯黃色斑點，顯示有有機酸化合物存在；(6)與醋酐濃硫酸反應，產生紫紅色，顯示有三萜類化合物存在；(7)與甲萘酚反應，產生紫紅色環(huán)，顯示有還原糖及其它還原性物質存在；(8)紅外光譜的特征吸收峰羥基3382-3385；羰基1693-1698；芳環(huán)1651-1652、1605-1608、1511-1513；碳氧1068-1070、1034-1035。
2.根據權利要求1所述的栗花提取物，其特征在于所述的栗花提取物中，栗酮的含量在35wt％以上。
3.根據權利要求2所述的栗花提取物，其特征在于所述的栗花提取物中，栗酮的含量在50wt％以上。
4.根據權利要求3所述的栗花提取物，其特征在于所述的栗花提取物中，栗酮的含量在65wt％以上。
5.根據權利要求4所述的栗花提取物，其特征在于所述的栗花提取物中，栗酮的含量在80wt％以上。
6.權利要求1所述的栗花提取物的制備方法，其特征在于包括以下主要步驟(1)栗花粗提取物的制?、偃「稍锏睦趸ㄓ萌軇┨崛?；②提取液過濾，濾液濃縮得到栗花粗提物浸膏；(2)栗花粗提物的分離浸膏加水溶解，過濾，濾液上層析柱，用水洗滌，除去雜質，再用溶劑洗脫，洗脫液濃縮回收溶劑后，干燥，即得栗花提取物；(3)栗花提取物的精制(A)栗花提取物用水溶解后，再用溶劑萃取，得到精制栗花提取物；或者(B)栗花提取物加稀醇溶解，用硅藻土拌樣后，晾干，再用溶劑進行沙氏提取，提取液濃縮，干燥，得到精制栗花提取物；或者(C)栗花提取物加稀醇溶解，以聚酰胺拌樣，晾干，上層析柱，用水洗滌，除去雜質，再用溶劑洗脫，洗脫液濃縮回收溶劑后，干燥，即得精制栗花提取物；
7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于在操作步驟(1)-①中用于提取栗花的溶劑選自水、甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮以及醇與水、丙酮與水、乙醇-丙酮-水的混合物中的一種。
8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于在操作步驟(3)的方法中用于精制栗花提取物的溶劑選自乙酸乙酯或正丁醇。
9.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于在操作步驟(2)和(3)的方法(B)、(C)中所用的溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、丁酮和乙酸乙酯；以及二氯甲烷或三氯甲烷或乙酸乙酯與上述溶劑的混合物。
10.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于在操作步驟(2)和(3)的方法(C)中所說的層析柱選自聚酰胺或纖維素。
11.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于所說的栗花提取物的制備工藝，包括以下主要步驟(1)取干燥的栗花用水加熱煮沸提??；(2)提取液過濾，濾液上聚酰胺柱；(3)先用水洗去雜質，再以1∶1的丙酮/水混合溶劑洗脫，收集洗脫液；(4)洗脫液回收溶劑，濃縮，干燥，得到栗花提取物。
12.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于所說的栗花提取物的制備工藝，包括以下主要步驟(1)栗花加甲醇進行冷浸取，浸取液濃縮得浸膏；(2)浸膏加10倍量的水溶解，過濾，濾液上聚酰胺層析柱；(3)先用水洗去雜質，再用1∶1的丙酮/水混合溶液為洗脫劑進行洗脫；(4)濃縮洗脫液，回收丙酮，得濃浸膏；(5)濃浸膏加適量水稀釋，用正丁醇萃??；(6)取正丁醇萃取相，減壓濃縮，回收正丁醇，干燥，得栗花提取物。
全文摘要
本發(fā)明是一種栗花提取物，以栗花為原料，通過溶劑提取、分離、精制，得到栗酮含量大于5％的栗花提取物，經進一步純化可得到栗酮含量65％以上的栗花提取物。該提取物為橙黃色粉末，氣微，微苦，可用于制備治療心、腦血管疾病及高脂血癥的藥物。本發(fā)明原材料易得，工藝合理、成本低，具有較好的經濟效益和社會效益。
文檔編號A61P1/00GK1839901SQ20061004221
公開日2006年10月4日 申請日期2006年1月23日 優(yōu)先權日2006年1月23日
發(fā)明者丁杏苞, 唐文照, 王曉靜, 孫敏耀, 杜成林, 賈獻慧 申請人:山東省醫(yī)學科學院藥物研究所