專利名稱：丹參提取物在制備抗血栓藥物組合物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，是關(guān)于植物丹參提取物在制備新藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
以下定義適用于整個(gè)說明書與權(quán)利要求書丹參多糖是指丹參有效部位提取的一種多糖化合物，該多糖化合物經(jīng)水解后，在硅膠板上作薄層分析，得知丹參多糖是由甘露糖、半乳糖、葡萄糖、木糖及部分未知單糖組成。
血栓病是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一，也是世界各國醫(yī)藥學(xué)家研究的熱點(diǎn)。從天然產(chǎn)物中尋找新的活性成分，并進(jìn)而研制新的藥物也是當(dāng)今攻克臨床頑疾的重要途徑，本發(fā)明應(yīng)用最新科技手段，結(jié)合現(xiàn)代分離鑒定方法，通過對(duì)甘參進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分及其活性研究以期為尋找新的抗血栓病的藥物提供科學(xué)依據(jù)。
丹參為唇形植物，丹參Salvia miltiorrhiza Bge的根及根莖，異名赤參、木羊乳、紫丹參、活血根、紅參等，具有祛淤止痛，活血痛經(jīng)、清心除煩之功效，用于治療月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、癥瑕積聚、胸腹刺痛、熱痹疼痛、瘡瘍腫痛、肝脾腫大、心絞痛等癥，為我國傳統(tǒng)之中藥。目前國內(nèi)、外對(duì)中藥多糖的抗血栓作用研究均未見報(bào)導(dǎo)，對(duì)丹參多糖的研究也未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是，提供一種具抗血栓活性的丹參提取物用于制備抗血栓的藥物組合物。
本發(fā)明的解決方案是從丹參根或莖中提取一種具有抗血栓活性的丹參提取物，該提取物中含有丹參多糖，其含量在10％以上。并呈現(xiàn)以下特性1、萘酚呈色反應(yīng)，呈現(xiàn)藍(lán)紫色環(huán)，判定為多糖；2、蒽酮法檢測，呈綠色反應(yīng)，判定為多糖；3、丹參多糖經(jīng)酸性水解后，在硅膠板上作薄層分析表明丹參多糖由甘露糖、半乳糖、葡萄糖、木糖及部分未知單糖組成。
申請(qǐng)人進(jìn)一步用本發(fā)明的抗血栓藥物組合物進(jìn)行了急毒和藥效試驗(yàn)，觀察了丹參多糖灌胃給藥對(duì)大鼠血小板數(shù)、血小板聚集功能、血液流變學(xué)及頸動(dòng)脈體內(nèi)血栓形成的影響。對(duì)丹參提取物進(jìn)行抗血栓藥效學(xué)研究。并對(duì)丹參提取物進(jìn)行了毒性實(shí)驗(yàn)。
試驗(yàn)一、丹參多糖對(duì)小鼠凝血作用的影響取健康小鼠20只，隨機(jī)分為對(duì)照組及給藥組，給藥劑量為200mg/kg，連續(xù)給藥3天?？綮o脈取血，用玻片挑絲法觀察丹參多糖的抗凝血作用。結(jié)果用藥組凝血時(shí)間為2.63±1.30分鐘，對(duì)照組1.61±0.65分鐘。凝血時(shí)間與對(duì)照組比較明顯延長，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＜0.05。本實(shí)驗(yàn)提示丹參多糖具有延長小鼠凝血時(shí)間的作用。
試驗(yàn)二、丹參多糖對(duì)小鼠非特異性免疫功能的影響(碳粒廓清法)
選體重18-22g小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為丹參多糖大劑量組(200mg/kg)、中劑量組(100mg/kg)、小劑量組(50mg/kg)及陰性對(duì)照組。灌胃給藥，給藥體積0.8ml/20g小鼠，對(duì)照組給等容積蒸餾水，每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥15天。于未次給藥后2小時(shí)，各鼠尾靜脈注射(1∶3)印度墨汁0.1ml/10g體重，于注射印度墨汁后1(t1)和(t2)分鐘后，分別從眼眶靜脈取血20μl，加到2ml蒸餾水中搖勻，用722分光光度計(jì)在600nm下比色，測光密度。并計(jì)算碳廓清指數(shù)K值及吞噬指數(shù)α值。進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，結(jié)果見表1。
表1 丹參多糖對(duì)小鼠碳粒廓清的影響

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，丹參多糖不能增加小鼠碳粒廓清速度(K值)，亦不能提高吞噬指數(shù)(α值)。據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定，丹參多糖不具有提高小鼠非特異性免疫功能的作用。
試驗(yàn)三、丹參多糖主要藥效學(xué)研究試驗(yàn)觀察了丹參多糖對(duì)大鼠血小板數(shù)、血小板聚集功能、血液流變學(xué)及頸動(dòng)脈體內(nèi)血栓形成的影響。
1.丹參多糖對(duì)大鼠血小板數(shù)目的影響，結(jié)果詳見表2。
表2 丹參多糖對(duì)大鼠對(duì)血小板數(shù)(×109/L)的影響(X±s，n＝10)

注與給藥前和空白對(duì)照組比較，P＞0.05結(jié)果表明，丹參多糖各劑量組對(duì)大鼠血小板數(shù)無明顯影響。
2.丹參多糖對(duì)大鼠血小板聚集功能的影響，結(jié)果詳見表3、4。
表3.丹參多糖對(duì)ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集功能的影響(X±s，n＝10)

注與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05
表4.丹參多糖對(duì)膠原誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集功能的影響(X±s，n＝10)

注與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01結(jié)果表明，丹參多糖300mg/kg對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有明顯抑制作用；600及300mg/kg對(duì)膠原誘導(dǎo)的血小板聚集有明顯抑制作用，最大聚集率及5分鐘聚集率與對(duì)照組比較均明顯降低。
3.丹參多糖對(duì)大鼠血液粘度的影響，結(jié)果詳見表5。
表5.丹參多糖對(duì)大鼠血液流變學(xué)(mPas)的影響(X±s，n＝8)

注與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01結(jié)果表明，丹參多糖600mg/kg在切變率為“1”時(shí)，可使血液粘度明顯降低，與對(duì)照組比較有非常顯著性差異；切變率為“50”和“200”時(shí)，與對(duì)照組比較無顯著性差異。
4.丹參多糖對(duì)大鼠頸動(dòng)脈體內(nèi)血栓形成的影響，結(jié)果詳見表5。
表5 丹參多糖對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的影響(X±s，n＝10)

注與對(duì)照組比較，*P＜0.05**P＜0.01結(jié)果表明，丹參多糖大、中劑量組均可明顯延長大鼠體內(nèi)血栓形成時(shí)間，小劑量有延長趨勢。
試驗(yàn)四、丹參多糖一般藥理研究觀察丹參多糖灌胃給藥對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響。
1、丹參多糖對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響，結(jié)果詳見表6。
表6 丹參多糖對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響(X±s，n＝10，記錄時(shí)間10min)

注與空白對(duì)照組比較 P＞0.05結(jié)果表明，丹參多糖三個(gè)劑量組對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)均無明顯影響。
2、丹參多糖最大給藥量試驗(yàn)(1)丹參多糖一次性灌胃給藥對(duì)小鼠產(chǎn)生的毒性反應(yīng)選健康小鼠20只，體重20.0±2.0g，雌雄各半。禁食5h后一次灌胃給予20％丹參多糖溶液，0.5ml/20g體重，給藥即刻未見動(dòng)物出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，繼續(xù)觀察14天，未有動(dòng)物死亡，小鼠一般狀況良好，見表7。
表7.灌胃給藥丹參多糖對(duì)小鼠體重的影響

(2)丹參多糖一次性腹腔注射給藥對(duì)小鼠產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)
取健康小鼠40只，體重20.0±2.0g，隨機(jī)分為4組(組間距＝0.75)劑量分別為6.67g/kg、5.00g/kg、3.75g/kg、2.81g/kg，每組10只，雌雄各半。分別腹腔注射不同濃度丹參多糖溶液0.5ml/20g，觀察給藥后即刻及14天內(nèi)動(dòng)物所出現(xiàn)的毒性反應(yīng)及死亡情況。給藥后即刻小鼠未出現(xiàn)明顯中毒癥狀，于給藥后1-2天，第一組死亡動(dòng)物10只，第二組死亡動(dòng)物5只，第三組死亡動(dòng)物2只。死亡發(fā)生在給藥后1-2天。死亡動(dòng)物立即解剖，肉眼觀察各主要臟器未見明顯異常改變。將存活動(dòng)物繼續(xù)觀察至14天，觀察期間食水任服，無動(dòng)物繼續(xù)死亡，一般狀況良好。丹參多糖腹腔注射給藥對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果、各組小鼠給藥后死亡情況及7天、14天后體重情況見表8、表9。
表8.丹參多糖腹腔注射給藥對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

按Bliss統(tǒng)計(jì)法計(jì)算 LD50＝4.6927g/kg，95％可信限(L95)＝3.9101-5.6497g/kg。
表9.丹參多糖腹腔注射給藥小鼠死亡情況和存活小鼠體重情況

結(jié)論小鼠一次性灌胃給丹參多糖5.0g/kg，給藥后動(dòng)物未出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)，觀察過程中，未見動(dòng)物死亡。
小鼠一次性腹腔注射給丹參多糖的LD50為4.6927(3.9101-5.6497)g/kg。
(3)丹參多糖最大給藥量試驗(yàn)①、一般狀況及體重各劑量組大鼠在連續(xù)給藥90天過程中及停藥后，一般狀況良好，皮毛有光澤，體一般狀況良好，體重與給藥前比均有所增加。
②、血液學(xué)檢測給藥前、給藥45天、90天及停藥15天后，各劑量組紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類及血小板計(jì)數(shù)與對(duì)照組比較無顯著差異。
③、血生化學(xué)檢測(包括血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、總蛋白、白蛋白、堿性磷酸酶、血糖、肌酐、尿素氮、血清膽固醇)用藥前、用藥45天、90天及停藥15天后，各劑量組大鼠上述各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較無明顯差異。
④、臟器系數(shù)各劑量組臟器系數(shù)在給藥90天及停藥15天后，與對(duì)照組比較無顯著差異。
⑤、病理學(xué)檢查大、中、小劑量組在給藥90天及停藥15天各劑量組大鼠心、肝、脾、肺、腎等送檢臟器未見明顯病理組織學(xué)改變，與對(duì)照組比較無明顯差異。
試驗(yàn)結(jié)果表明(1)大、中、小劑量組動(dòng)物健康存活，一般狀況良好，體重與給藥前相比均有增加.500～125mg/kg麥特好是安全劑量范圍。
(2)大、中、小劑量組臟器系數(shù)在給藥90天及停藥15天后，與對(duì)照組比較無顯著差異。
通過以上實(shí)驗(yàn)證明了丹參提取物的藥理活性，從而確認(rèn)丹參提取物可以用于制備抗血栓病的藥物組合物，在所述的藥物組合物中含有抗血栓活性的丹參提取物，以及藥學(xué)上可以接受的載體。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
實(shí)施例一取丹參根莖0.9kg，加水8kg，煮沸提取1.5小時(shí)，濾過，濾液備用，藥渣再加水8kg煮沸提取1小時(shí)，濾過，合并兩次濾液，將合并后的濾液濃縮噴霧干燥即得含有多糖10％的丹參提取物。將本提取物加4倍溶解，加乙醇至乙醇含量為80％靜置，過濾干燥，即得丹參糖為50％的具有抗血栓活性的丹參提取物。
將丹參提取物純品，按常規(guī)方法制成片劑或膠囊劑每片0.3g，供臨床口服治療血栓病使用。本品使用時(shí)，片劑或膠囊劑一日三次，每次0.3～0.6g。
權(quán)利要求
1.一種具抗血栓活性的丹參提取物，在制備抗血栓藥物組合物中的用途，其中所述的藥物組合物中含有抗血栓活性的丹參提取物，以及藥學(xué)上可以接受的載體。
全文摘要
一種具抗血栓活性丹參提取物，以丹參的根或根莖為原料，通過粉碎，溶劑提取、精制、得到丹參多糖含量大于10％的丹參提取物。經(jīng)進(jìn)一步純化最終可得到丹參多糖含量80％以上的丹參提取物，工藝合理，操作簡便。經(jīng)藥效學(xué)及毒理學(xué)試驗(yàn)證明，本丹參提取物具有較好的抗血栓作用，可用于制備抗血栓藥物組合物。該提取物制成的藥物，毒副作用較小，其有效成分明確，服用量較少，在一定程度上也可減小毒副作用，更有利保證藥物的安全性和有效性。
文檔編號(hào)A61P7/02GK1839935SQ200610042229
公開日2006年10月4日 申請(qǐng)日期2006年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月24日
發(fā)明者邢來田, 仲英, 王福文, 王菊, 王芃, 劉魯, 張秀芹, 楊尚軍, 胡志力, 劉愛芹, 朱燕, 李 杰, 許雙慶 申請(qǐng)人:山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所, 山東省新技術(shù)制藥研究所