專利名稱：一種牡蠣活性肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種牡蠣活性肽的制備方法，具體地說(shuō)是利用酶法水解牡蠣蛋白及利用超濾及柱層析技術(shù)分離純化牡蠣活性肽的方法，屬于海洋天然產(chǎn)物與醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
牡蠣(Oyster)是一種海產(chǎn)貝類。牡蠣在分類上屬于軟體動(dòng)物門，瓣鰓綱，異柱目，牡蠣超科，牡蠣科，它是一種食藥兩用的雙殼貝海產(chǎn)品。在我國(guó)南北沿海均有養(yǎng)殖，特別是廣東省近幾年來(lái)發(fā)展較快，牡蠣肉質(zhì)乳白、細(xì)嫩、營(yíng)養(yǎng)豐富，除含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素和糖類等營(yíng)養(yǎng)成分外，還含有人體必需的十多種氨基酸、礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)成分等?，F(xiàn)研究還證明，牡蠣中含有豐富的糖原，是人體內(nèi)細(xì)胞進(jìn)行代謝能源，可改善心臟及血液循環(huán)功能，并能增進(jìn)肝臟的功能，具有保肝作用。糖原可直接為機(jī)體吸收利用，從而減輕胰腺負(fù)擔(dān)，對(duì)糖尿病的防治十分有利。牡蠣提取物有抗菌作用，對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒和流感病毒有抑制作用，其水溶性成分尚可提高動(dòng)物機(jī)體免疫力等等。牡蠣中含有豐富的生物活性物質(zhì)，具有顯著的醫(yī)療保健功效。
從牡蠣中提取活性物質(zhì)的研究早有報(bào)道，并且具有顯著醫(yī)療保健作用的牡蠣保健食品已經(jīng)有大量銷售。如深圳海王集團(tuán)在牡蠣相關(guān)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)研究中，已經(jīng)取得了顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，為了進(jìn)一步推進(jìn)該項(xiàng)目的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，正在努力研發(fā)高效的牡蠣保健食品和藥品。專利文獻(xiàn)“一種牡蠣活性肽的制備方法”，是以太平洋牡蠣為原料，采用酶法水解-納濾脫鹽濃縮工藝制備牡蠣活性肽的方法，屬于食品生物技術(shù)領(lǐng)域，并未涉及到醫(yī)藥領(lǐng)域。近年來(lái)，歐洲、日本、美國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家對(duì)牡蠣中生物活性物質(zhì)的研究日益增多，但是真正從牡蠣中找到具有顯著生物活性的物質(zhì)，并作為藥品進(jìn)行開(kāi)發(fā)的并未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種來(lái)源于牡蠣中的具有生物活性的多肽蛋白類物質(zhì)的制備方法。通過(guò)本發(fā)明的制備方法得到的牡蠣活性多肽純度較高，而且該活性肽是天然提取的物質(zhì)，未經(jīng)過(guò)任何化學(xué)修飾，提取過(guò)程中對(duì)其生物活性進(jìn)行了有效的保護(hù)，可以作為藥品成分加以開(kāi)發(fā)利用。
為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的將牡蠣剝殼、清洗、勻漿、加入蒸餾水得到牡蠣漿液在10℃以下低溫提?。辉傩跄?、離心去渣，取上清液，將上清液凍干后，用葡聚糖凝膠(Sephacryl)s-100 HR柱分離(PH值為7.4的NH4HCO3緩沖液洗脫)，分別收集各峰后取有生物活性的峰再進(jìn)行離子交換柱層析，收集有活性的各峰，凍干后，用凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品，是未經(jīng)任何化學(xué)修飾的天然提取的活性物質(zhì)；或?qū)⒛迪牆{液酶解、滅酶、離心去渣、凍干得到粗提物，粗提物用葡聚糖凝膠Sephadex G25進(jìn)行凝膠柱層析，分別收集各峰后取有生物活性的峰再進(jìn)行離子交換柱層析進(jìn)行分離純化，收集有活性的各峰，凍干后，用凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品，是天然提取的活性物質(zhì)，屬于分子量較小的寡肽。
本發(fā)明由于在提取過(guò)程對(duì)其提取成份的生物活性進(jìn)行了有效的保護(hù)，使所得天然活性物質(zhì)經(jīng)體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明提取的天然活性多肽具有抗腫瘤活性，有可能成為一種新型的抗腫瘤藥物。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。
實(shí)施例1將牡蠣剝殼，取牡蠣肉，用4℃水清洗后，勻漿，按照1∶1的重量比例加入蒸餾水低溫(4℃)提取2小時(shí)后，絮凝，離心去渣，取上清液，將上清液凍干后，用Sephacryl s-100 HR柱分離(0.03mol/lNH4HCO3緩沖液洗脫)，分別收集各峰后，取有生物活性的峰再用陰離子瓊脂糖凝膠DEAE-Sepharose-FF離子交換柱層析(PH8.5Tris-HCl緩沖液，0～0.3mol/lNaCl梯度洗脫)，收集有活性的各峰，凍干后，用葡聚糖凝膠Sephadex G15凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品。
實(shí)施例2
將牡蠣剝殼、清洗、勻漿、按照1∶1的重量比例加入蒸餾水，并按照底物2％重量比加入胰蛋白酶，45℃酶解4小時(shí)、滅酶、離心去渣、凍干得到酶解粗提物，粗提物用葡聚糖凝膠Sephadex G25進(jìn)行凝膠柱層析，收集各峰，再用陰離子瓊脂糖凝膠DEAE-Sepharose-FF離子交換柱層析進(jìn)行分離純化(PH8.5Tris-HCl緩沖液，0～0.3mol/lNaCl梯度洗脫)，收集有活性的各峰，凍干后，用Sephadex G15凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品。該活性肽是天然提取的物質(zhì)，屬于分子量較小的寡肽，提取過(guò)程對(duì)其生物活性進(jìn)行了有效的保護(hù)。
權(quán)利要求
1.一種牡蠣活性肽的制備方法，其特征在于按照以下步驟制備將牡蠣剝殼、清洗、勻漿、加入蒸餾水得到牡蠣漿液在10℃以下低溫提??；再絮凝、離心去渣，取上清液，將上清液凍干后，經(jīng)柱分離，NH4HCO3緩沖液洗脫或?qū)⒛迪牆{液酶解、滅酶、離心去渣、凍干得到粗提物，粗提物進(jìn)行凝膠柱層析；分別收集各峰后取有生物活性的峰再進(jìn)行離子交換柱層析，收集有活性的各峰，凍干后，用凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牡蠣活性肽的制備方法，其特征在于將牡蠣剝殼，取牡蠣肉，用4℃水清洗后，勻漿，按照1∶1的重量比例加入蒸餾水在4℃下提取2小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牡蠣活性肽的制備方法，其特征在于牡蠣勻漿上清液經(jīng)柱分離，PH值為7.4的NH4HCO3緩沖液洗脫或酶解粗提物凝膠柱層析收集各峰后，取有生物活性的峰再用離子交換柱層析，用PH8.5Tris-HCl緩沖液，0～0.3mol/lNaCl梯度洗脫，收集有活性的各峰，凍干后，凝膠柱脫鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用酶法水解牡蠣蛋白及利用柱層析技術(shù)分離純化牡蠣活性肽的方法。將牡蠣剝殼、清洗、勻漿、加入蒸餾水得到牡蠣漿液在低溫下提??；絮凝、離心去渣，取上清液，將上清液凍干后，用Sephacryl s－100 HR柱分離或?qū)⒛迪牆{液酶解、滅酶、離心去渣、凍干得到粗提物，粗提物進(jìn)行凝膠柱層析；收集各峰，再用離子交換柱層析進(jìn)行分離純化，收集有活性的各峰，凍干后，用凝膠柱脫鹽，得到牡蠣天然活性多肽純品。通過(guò)本發(fā)明的制備方法得到的牡蠣活性多肽純度較高，具有抗腫瘤活性，而且該活性肽是天然提取的物質(zhì)，提取過(guò)程中對(duì)其生物活性進(jìn)行了有效的保護(hù)，可以作為藥品加以開(kāi)發(fā)利用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101037468SQ20061004322
公開(kāi)日2007年9月19日 申請(qǐng)日期2006年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月16日
發(fā)明者韓玉謙, 馮曉梅, 趙志強(qiáng), 蔣新, 管華詩(shī) 申請(qǐng)人:中國(guó)海洋大學(xué)