專利名稱：海參活性物質作為藥物或保健品的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及海參活性物質在制備藥物或保健品中的應用，尤其涉及海參活性物質在制備治療和預防神經(jīng)退行性疾病及認知損傷的藥物或保健品中的應用。
背景技術：
海參(Holothurian，sea cucumber)素有“海中人參”之稱，歸屬無脊椎動物棘皮動物門(Echinodermata)海參綱(Holothurioider)。在我國海參一向被視為藥食兩用的海產(chǎn)佳品。明代以后，海參收入本草，列為補益藥。《本草從新》評價海參能“補腎益精，壯陽療痿”?！侗静菥V目拾遺》記載有海參治出血性疾病的實例，這也是世界上最早的海參藥用記載。全世界海參約有1200種，均屬海洋種類。在我國海域分布的有140多種，其中以黃、渤海的海參品質最佳。
海參的重要藥用價值及其生物活性物質的研究工作已有許多報道。目前報道的有關活性物質主要有多糖、蛋白多糖及海參皂苷等；這些活性物質的功效主要有抗凝和止血作用，抗腫瘤作用，增強免疫力，延緩衰老，降血糖，抗輻射，抗炎等。但是從海參中提取的多糖等活性物質在促進神經(jīng)干細胞增殖，促進神經(jīng)損傷的修復方面的研究尚未見報道，臨床上也未見海參提取物進行神經(jīng)退行性疾病和認知損傷的治療。
神經(jīng)退行性疾病(又稱神經(jīng)變性疾病)是指由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)過早出現(xiàn)衰變性損傷而導致腦功能障礙的一系列疾病，包括老年癡呆、帕金森病和亨廷頓病等。這些疾病以慢性進展性的記憶、語言、運動障礙為特征，給社會和家庭帶來了沉重的負擔，其患病率隨著年齡增長逐年增高。我國己進入老齡化社會，對這些疾病的預防與治療，減少其危害，具有十分重要的意義。而這些疾病的預防和治療都與神經(jīng)干細胞的增殖及防止神經(jīng)細胞的損傷及對受損神經(jīng)細胞的修復密切相關。

發(fā)明內容針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明要解決的問題是提供一種海參活性物質的新用途，即海參活性物質在制備治療和預防神經(jīng)退行性疾病及認知損傷的藥物或保健品中的應用。
本發(fā)明所述海參活性物質是采用酶解、醇沉、柱層析、冷凍干燥等方法制備的海參提取物，其成分包括多糖、多肽、糖肽中的一種或幾種的聯(lián)合，其中的主要活性成分為糖肽。所述海參提取物的該成分可以從野生或養(yǎng)殖的刺參等海參屬多種動物中提取分離純化而得，海參活性物質的活性組分以具有促進神經(jīng)干細胞增殖和對神經(jīng)細胞損傷的保護及修復作用為活性檢測指標來收集。
本發(fā)明所述的海參活性物質在制備治療和預防神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應用。
本發(fā)明所述的海參活性物質在制備治療和預防神經(jīng)退行性疾病的保健品中的應用。
其中所述神經(jīng)退行性疾病是一系列以神經(jīng)元凋亡為特征的神經(jīng)疾病；優(yōu)選的是肌萎縮側索硬化、阿爾茲海默癥(老年癡呆癥)、帕金森氏癥、享廷頓氏癥、脊-小腦共濟失調III疾病中的一種或多種。
本發(fā)明所述的海參活性物質在制備治療和預防認知損傷的藥物中的應用。
本發(fā)明所述的海參活性物質在制備治療和預防認知損傷的保健品中的應用。
其中所述認知損傷是指由遺傳、疾病、藥物、醫(yī)療、外傷、社會和心理的一種或多種因素造成的心理和生理損傷。
在上述的應用中所述藥物是指通過腔腸或粘膜途徑的方式給藥的制劑。
其中所述制劑是注射劑、口服制劑、外用制劑、噴霧劑、透皮制劑之一。
其中所述制劑優(yōu)選是片劑、膠囊劑、注射劑之一。
在上述的應用中所述保健品是食品、飲品、化妝品之一。
本發(fā)明所述的海參活性物質可以以一定量的海參提取物作為活性成分制備成各種藥物組合物，可接受藥學上的各種載體，這些藥學可接受的載體可以是在現(xiàn)有技術中廣泛用于藥物中的各種載體。所述的藥物組合物可以按現(xiàn)有技術已知的方法如混合、制粒、壓片來制備。所述的藥物組合物還可以包括各種藥學使用的任選輔助組分，如香味劑、著色劑、甜味劑等。
為了更好地理解本發(fā)明的實質及本發(fā)明所述海參活性物質的作用效果，申請人利用海參活性物質進行了細胞和動物試驗，藥理實驗及結果表明本發(fā)明所述的海參活性物質對于正常神經(jīng)干細胞有明顯的增殖作用，并有利于神經(jīng)元細胞間突觸的聯(lián)結和建立及修復；對谷氨酸等外界因素導致的神經(jīng)細胞損傷具有良好的保護和修復作用。這些發(fā)現(xiàn)從機理上表明，海參活性物質對于老年癡呆、帕金森病和亨廷頓病等神經(jīng)退行性疾病的病理、病理生理變化具有良好的改善作用，對各類神經(jīng)細胞的損傷具有良好的保護和修復作用。預示海參活性物質在制備治療和預防神經(jīng)退行性疾病及認知損傷的藥物或保健品中有很大的開發(fā)應用前景。
具體實施方式
實施例1海參活性物質的提取。
新鮮刺參，去除內臟，洗凈，破碎成1cm3的左右的小塊，加入5-15倍水勻漿。
勻漿液分別經(jīng)胃蛋白酶(酶量為海參濕重的0.4％，pH2.0-2.5，溫度50℃，時間5h)、胰蛋白酶(酶量為海參濕重的0.45％，pH8.0-8.5，溫度50℃，時間5h)酶解，酶解完后，煮沸滅酶活，離心(10000r/min，10min)取上清液。
上清液醇沉，離心(6000r/min，15min)得沉淀物，再用蒸餾水溶解，經(jīng)DEAE纖維素柱分離，210nm檢測吸收峰，收集活性組分(以對神經(jīng)細胞的活性為指標)，并凍干。
將凍干的海參活性物質再用蒸餾水溶解，經(jīng)凝膠柱分離，210nm檢測吸收峰，收集活性組分(以對神經(jīng)細胞的活性為指標)。
活性物質經(jīng)sephadexG-25脫鹽后凍干，得純海參活性物質。
實施例2海參活性物質對神經(jīng)干細胞的增殖作用。
取孕13.5～14天的Wistar大鼠，頸椎脫臼處死。
無菌條件下分離、取出胚胎，在無菌培養(yǎng)皿中，于解剖顯微鏡下分離，獲取神經(jīng)細胞。置于二氧化碳培養(yǎng)箱中，37℃，5％二氧化碳飽和濕度培養(yǎng)48h后進行分組實驗。
神經(jīng)細胞在96孔板中培養(yǎng)48小時后，分別加入5mg/ml實施例1制備的刺參提取物，使刺參提取物的終濃度分別為100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml，設正常對照組，37℃，5％二氧化碳飽和濕度培養(yǎng)48小時，后進行MTT測定。
表1刺參提取物對神經(jīng)細胞的作用
從表1中可以看出，刺參提取物對神經(jīng)細胞具有明顯增殖作用。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，加入刺參提取物的神經(jīng)細胞，神經(jīng)元之間連接緊密，神經(jīng)突觸明顯，有大量神經(jīng)球出現(xiàn)，而且各個神經(jīng)球之間有明顯的神經(jīng)纖維連接建立，與未加入刺參提取物的對照樣本相比顯著不同。神經(jīng)細胞在體外不增殖，如果在體外有增殖現(xiàn)象，一般應是神經(jīng)干細胞的增殖。因此可以推測，海參提取物對神經(jīng)系統(tǒng)尤其是神經(jīng)干細胞增殖有顯著促進作用。
實施例3海參活性物質對神經(jīng)細胞氧化性損傷的保護作用。
取孕13.5-14天的Wistar大鼠，頸椎脫臼處死。
無菌條件下分離、取出胚胎，在無菌培養(yǎng)皿中，于解剖顯微鏡下分離，獲取神經(jīng)細胞。置于二氧化碳培養(yǎng)箱中，37℃，5％二氧化碳飽和濕度培養(yǎng)48h后進行分組實驗。
神經(jīng)細胞在96孔板中培養(yǎng)48小時后，分別加入5mg/ml實施例1制備的刺參提取物，使刺參提取物的終濃度分別為100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml，設正常對照組。
培養(yǎng)12小時后，每孔加入谷氨酸培養(yǎng)液，使谷氨酸的終濃度為2mmol/ml，37℃，5％二氧化碳飽和濕度培養(yǎng)36小時后，進行MTT測定。
表2刺參提取物對神經(jīng)細胞谷氨酸氧化性損傷的保護作用
從表2所示結果可以看出，海參提取物對神經(jīng)細胞谷氨酸氧化性損傷有明顯保護作用，其保護作用隨作用濃度的增大而增大，300μg/ml以上甚至可以完全拮抗谷氨酸對神經(jīng)細胞的損傷作用。谷氨酸損傷在多種神經(jīng)退行性疾病發(fā)揮著重要作用，海參提取物對這種損傷的保護作用表明，海參提取物可以有效用于神經(jīng)退行性疾病的預防和治療。
實施例4海參活性物質注射劑的制備。
處方以重量百分比計，海參活性物質40％，甘露醇60％。
制備方法(1)安瓿洗滌干凈，干燥滅菌；(2)稱取海參活性物質40克，甘露醇60克，攪拌溶解；(3)補加注射用水至處方量，用0.22μm微孔濾膜過濾；(4)中間品檢驗；(5)灌裝，每支2ml，熔封；(6)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘；(7)全檢。
本發(fā)明中，海參活性物質是預防/治療神經(jīng)退行性疾病的活性成分，甘露醇基本無藥理作用，它僅起著凍干骨架的作用。該針劑具有活性強，安全性好的優(yōu)點。
實施例5海參活性物質口服片劑制備。
上述片劑主要有海參活性物質及輔料組成，其中輔料可以是填充劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑中的部分或全部，輔料的用量不超過海參活性物質總重量的8倍。
優(yōu)選的制片處方以重量份計，海參活性物質100份填充劑 100份速崩劑 90份粘合劑 80份潤滑劑 6份其中填充劑可以是磷酸氫鈣、糊精或乳糖；速崩劑可以是L-HPC或干淀粉；粘合劑可以是PVP溶液或淀粉漿；潤滑劑是硬脂酸鎂。
片劑的生產(chǎn)工藝是按處方量，稱取海參活性物質，加入填充劑、速崩劑，混合均勻，然后加入處方量的粘合劑混合制成濕粒，低溫40-65℃干燥，再加入潤滑劑混合均勻，壓片，最后用高分子衣料(如HPMC、EC、MC)包薄膜衣。
實施例6海參活性物質膠囊劑制備。
上述膠囊劑主要有海參活性物質及輔料組成，其中輔料可以是填充劑、崩解劑、粘合劑中的部分或全部，輔料的用量不超過海參活性物質總重量的5倍。
優(yōu)選的制片處方以重量份計，海參活性物質 100份填充劑 80份速崩劑 80份粘合劑 60份其中填充劑可以是磷酸氫鈣、糊精或乳糖；速崩劑可以是L-HPC或干淀粉；粘合劑可以是PVP溶液或淀粉漿。
上述膠囊劑的生產(chǎn)工藝是按處方量，稱取海參活性物質，加入填充劑、速崩劑，混合均勻，然后加入處方量的粘合劑混合制成濕粒，低溫40-65℃干燥，粉碎后，以處方量用膠囊裝料，得海參活性物質膠囊劑。
實施例7海參活性物質飲料制備。
處方以重量百分比計，海參活性物質40％，蒸餾水60％。制備方法以常規(guī)飲料制備工藝，將上述重量百分比的海參活性物質與蒸餾水混合，以市場供應對象不同，分別添加常規(guī)量的香味劑、著色劑、甜味劑，制成500ml、1250ml、2000ml包裝的飲料。
權利要求
1.海參活性物質在制備治療和預防神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應用。
2.海參活性物質在制備治療和預防神經(jīng)退行性疾病的保健品中的應用。
3.海參活性物質在制備治療和預防認知損傷的藥物中的應用。
4.海參活性物質在制備治療和預防認知損傷的保健品中的應用。
5.如權利要求1或2所述的應用，其特征是所述神經(jīng)退行性疾病以神經(jīng)元凋亡為特征，是肌萎縮側索硬化、阿爾茲海默癥、帕金森氏癥、享廷頓氏癥、脊一小腦共濟失調III疾病中的一種或多種。
6.如權利要求3或4所述的應用，其特征是所述認知損傷是指由遺傳、疾病、藥物、醫(yī)療、外傷、社會和心理的一種或多種因素造成的心理和生理損傷。
7.如權利要求1或3所述的應用，其特征是所述藥物是指通過腔腸或粘膜途徑的方式給藥的制劑。
8.如權利要求7所述的應用，其特征是所述制劑是注射劑、口服制劑、外用制劑、噴霧劑、透皮制劑之一。
9.如權利要求8所述的應用，其特征是所述制劑是片劑、膠囊劑、注射劑之一。
10.如權利要求2或4所述的應用，其特征是所述保健品是食品、飲品、化妝品之一。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種海參活性物質在制備治療和預防神經(jīng)退行性疾病及認知損傷的藥物或保健品中的應用。所述藥物是指通過注射、口服、腔腸或粘膜途徑的方式給藥的制劑。所述保健品是食品、飲品、化妝品之一。本發(fā)明為預防和治療神經(jīng)退行性疾病及認知損害提供了有效的活性物質，為海參活性物質在制備治療和預防神經(jīng)退行性疾病及認知損傷的藥物或保健品中的應用提供了科學依據(jù)和產(chǎn)品制備方法。
文檔編號A61K9/20GK1872094SQ200610043810
公開日2006年12月6日 申請日期2006年4月17日 優(yōu)先權日2006年4月17日
發(fā)明者吉愛國, 宋淑亮 申請人:山東大學