專利名稱：含有adp受體拮抗劑和硝酸酯類藥物的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于新的西藥復(fù)方。

背景技術(shù)：
硝酸酯類藥物是用于治療心肌缺血性疾病療效最為確切的藥物，它包括硝酸甘油、單硝酸異山梨酯、硝酸異山梨酯、戊四硝酯等。此類藥物現(xiàn)在仍然是臨床上最為常用的治療心肌缺血性疾病的藥物。單硝酸異山梨酯是硝酸酯類藥物的典型代表，它是硝酸異山梨酯的代謝產(chǎn)物之一。其特點(diǎn)是無肝臟首過效應(yīng)，經(jīng)胃腸道吸收完全而迅速，生物利用度幾乎達(dá)100％。適用于冠心病的長期治療和預(yù)防心絞痛的發(fā)作，也適用于心肌梗死后的治療和肺循環(huán)高血壓的治療。
血小板激活后的聚集是凝血系統(tǒng)最為重要的啟動因子，血栓的形成參與了很多的心腦血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生和發(fā)展。在冠狀動脈硬化發(fā)生之后，冠脈內(nèi)血栓的形成極易誘發(fā)心肌缺血和心絞痛的發(fā)作。ADP受體在血小板聚集中占有十分重要的地位。氯吡格雷和日本三共制藥公司、Ube公司共同開發(fā)的Prasugrel(CS-747，LY640315)均具有很強(qiáng)的抗血小板活性。這兩種藥物在作用機(jī)制上均是通過阻斷ADP受體而起作用的，用來防止由血小板表面的二磷酸腺苷受體被封閉而導(dǎo)致的血小板激活。對于需要接受經(jīng)皮冠狀動脈介入(PCI)手術(shù)的急性冠心病患者，氯吡格雷和Prasugrel可以有效的預(yù)防圍術(shù)期和術(shù)后的缺血性事件發(fā)生。
阿司匹林通過抑制TXA2的合成而具有弱的抗血小板作用。小劑量的阿司匹林在臨床上用于預(yù)防老年冠心病和腦中風(fēng)患者的血栓形成，療效確切。阿司匹林和單硝酸異山梨酯的復(fù)方制劑現(xiàn)已應(yīng)用于臨床，對于預(yù)防冠心病患者急性心肌缺血的發(fā)生具有較好的作用。阿司匹林和氯吡格雷、Prasugrel等ADP受體拮抗劑抗血小板的作用機(jī)理完全不同，對于ADP受體拮抗劑和單硝酸異山梨酯聯(lián)合使用在預(yù)防冠心病患者心肌缺血的發(fā)生是否具有很好的效果，尚不能夠得知，二者合用對于患者的安全性也沒有考察過。


發(fā)明內(nèi)容
氯吡格雷現(xiàn)在已經(jīng)應(yīng)用于臨床。Prasugrel，其化學(xué)名稱為2-乙酰氧基-5-(α-環(huán)丙基羰基-2-氟芐基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-c]吡啶，已經(jīng)進(jìn)入III期臨床。我們根據(jù)CN1041730C所公開的化合物結(jié)構(gòu)式，合成了Prasugrel以及其可藥用的鹽，并對氯吡格雷和Prasugrel等ADP受體拮抗劑與單硝酸異山梨酯聯(lián)合使用的協(xié)同性效果進(jìn)行了大量系統(tǒng)的研究。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在大鼠體內(nèi)血栓形成實(shí)驗(yàn)中，單硝酸異山梨酯可以增強(qiáng)ADP受體拮抗劑的抗血栓形成作用，而且其抗血栓形成效果要顯著優(yōu)于單硝酸異山梨酯和阿司匹林聯(lián)合用藥；在大鼠血瘀模型加小劑量垂體后葉素所致的急性心肌缺血實(shí)驗(yàn)中，單硝酸異山梨酯和ADP受體拮抗劑取得了顯著的協(xié)同性作用，而且其效果也明顯優(yōu)于阿司匹林和單硝酸異山梨酯聯(lián)用。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1 氯吡格雷、Prasugrel與單硝酸異山梨酯聯(lián)用對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響 實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察氯吡格雷、Prasugrel分別與單硝酸異山梨酯聯(lián)合使用對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響。
實(shí)驗(yàn)材料 氯吡格雷購自北京恒天易德化工有限公司； Prasugrel魯南制藥集團(tuán)科研部有機(jī)合成實(shí)驗(yàn)室合成； 單硝酸異山梨酯魯南制藥集團(tuán)貝特公司生產(chǎn)。
SD大鼠魯南制藥集團(tuán)山東新時代藥業(yè)有限公司動物中心提供。
主要儀器BT87-3型實(shí)驗(yàn)性體內(nèi)血栓形成儀，包頭醫(yī)學(xué)院電器維修科技開發(fā)部制造。
實(shí)驗(yàn)方法 取健康大鼠70只，體重180-230g，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為下列7組 模型對照組，給予生理鹽水灌胃； 氯吡格雷組，給予氯吡格雷8mg/kg灌胃； Prasugrel組，給予Prasugrel 1.5mg/kg灌胃； 單硝酸異山梨酯組，給予單硝酸異山梨酯2.0mg/kg灌胃； 氯吡格雷聯(lián)合用藥組，給予氯吡格雷8mg/kg和單硝酸異山梨酯2.0mg/kg灌胃； Prasugrel聯(lián)合用藥組，給予Prasugrel 1.5mg/kg和單硝酸異山梨酯2.0mg/kg灌胃； 阿司匹林聯(lián)合用藥組，給予阿司匹林1.5mg/kg和單硝酸異山梨酯2.0mg/kg灌胃。
上述動物在灌胃后40min，腹腔注射3％戊巴比妥鈉麻醉，分離一側(cè)頸總動脈，用BT87-3型實(shí)驗(yàn)性體內(nèi)血栓形成儀刺激頸動脈，刺激電流1.5mA，刺激時間為7分鐘，觀察頸動脈血流阻塞時間(即血栓形成時間OT)。
結(jié)果表明，與模型對照組相比較，單硝酸異山梨酯組對大鼠血栓形成時間有延長的趨勢，其他各用藥組可使大鼠血栓形成時間明顯延長，其中，氯吡格雷聯(lián)合用藥組和Prasugrel聯(lián)合用藥組的血栓形成時間延長最為顯著，且明顯優(yōu)于單獨(dú)用藥的氯吡格雷組或Prasugrel組。具體結(jié)果見表1。
表1，氯吡格雷、Prasugrel分別與單硝酸異山梨酯聯(lián)合使用對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響 **與模型對照組相比較，P＜0.01. §§與單硝酸異山梨酯組相比較，P＜0.01. ※※與氯吡格雷組相比較，P＜0.01. ★★與Prasugrel組相比較，P＜0.01. &&與阿司匹林聯(lián)合用藥組相比較，P＜0.01. 我們將實(shí)施例1中所使用的單硝酸異山梨酯用硝酸異山梨酯、硝酸甘油或戊四硝酯代替，同樣取得了很好效果，與ADP受體拮抗劑取得了顯著的協(xié)同性作用。
實(shí)施例2 氯吡格雷、Prasugrel與單硝酸異山梨酯聯(lián)用對血瘀模型大鼠小劑量垂體后葉素所致急性心肌缺血的保護(hù)作用 實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察氯吡格雷、Prasugrel分別與單硝酸異山梨酯聯(lián)合使用對血瘀模型大鼠小劑量垂體后葉素所致急性心肌缺血的保護(hù)效應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)材料 FX-211型單道自動心電圖機(jī)北京福田公司生產(chǎn)； 氯吡格雷購自北京恒天易德化工有限公司； Prasugrel魯南制藥集團(tuán)科研部有機(jī)合成實(shí)驗(yàn)室合成； 單硝酸異山梨酯魯南制藥集團(tuán)貝特公司生產(chǎn)。
SD大鼠魯南制藥集團(tuán)山東新時代藥業(yè)有限公司動物中心提供。
垂體后葉素上海生物化學(xué)制藥廠生產(chǎn)。
乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒購自南京建成生物工程研究所；激酸激酶MB亞型(CK-MB)試劑盒由Rapid Diagnostics，Inc.，Division of MP Biomedicals Inc.公司生產(chǎn)。
實(shí)驗(yàn)方法取健康大鼠80只，體重180-230g，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為下列8組 正常對照組、模型對照組、氯吡格雷組、Prasugrel組、單硝酸異山梨酯組、氯吡格雷聯(lián)合用藥組、Prasugrel聯(lián)合用藥組和阿司匹林聯(lián)合用藥組。
其中，正常對照組，每天灌胃同體積的生理鹽水，連續(xù)7d；模型對照組，每天灌胃同體積生理鹽水，連續(xù)7d，第7天皮下注射鹽酸腎上腺素(Adr)8μg(8ml)/kg共2次，兩次間隔4h，在2次注射腎上腺素之間(第一次注射后2h)將大鼠浸入冰水內(nèi)5min。處置后停食，次日上午腹腔注射腦垂體后葉素10U/kg，正常對照組腹腔注射等體積的蒸餾水。其它各用藥組在給予垂體后葉素前12小時和1小時兩個時間點(diǎn)分別給予各組相對應(yīng)的藥物。氯吡格雷組，給予氯吡格雷8mg/kg灌胃；Prasugrel組，給予Prasugrel 1.5mg/kg灌胃；單硝酸異山梨酯組，給予單硝酸異山梨酯2.0mg/kg灌胃；氯吡格雷聯(lián)合用藥組，給予氯吡格雷8mg/kg和單硝酸異山梨酯2.0mg/kg灌胃；Prasugrel聯(lián)合用藥組，給予Prasugrel1.5mg/kg和單硝酸異山梨酯2.0mg/kg灌胃；阿司匹林聯(lián)合用藥組，給予阿司匹林1.5mg/kg和單硝酸異山梨酯2.0mg/kg灌胃。
在造血瘀模型之前以及腹腔注射垂體后葉素誘發(fā)心肌缺血后2min、5min、8min、15min，用FX-211型單道自動心電圖機(jī)記錄心電圖，以T波上升≥50％、T波變低平、雙向、倒置作為心肌缺血指標(biāo)，用ST-T的振幅變化率來表示心肌缺血的嚴(yán)重程度。5小時后，斷頭處死大鼠，取血4ml，3000r/min離心30分鐘。按照試劑盒說明書中的方法檢測血清中乳酸脫氫酶(LDH)和激酸激酶MB亞型(CK-MB)的活性。
所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多組間比較用方差分析。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果 藥物對心肌缺血大鼠心電圖ST-T振幅變化率的影響比較見表2。與模型對照組相比較，氯吡格雷聯(lián)合用藥組和Prasugrel聯(lián)合用藥組在腹腔注射垂體后葉素2min后心電圖的ST-T振幅變化率小于模型對照組(P＜0.01)；氯吡格雷組、Prasugrel組和單硝酸異山梨酯組在腹腔注射垂體后葉素15min后心電圖的ST-T振幅變化率小于模型對照組(P＜0.05)；阿司匹林聯(lián)合用藥組在腹腔注射垂體后葉素8min后心電圖的ST-T振幅變化率小于模型對照組(P＜0.01)； 由表中的數(shù)據(jù)可以看出，氯吡格雷聯(lián)合用藥組和Prasugrel聯(lián)合用藥組在5min和8min兩個時間點(diǎn)上，氯吡格雷和單硝酸異山梨酯聯(lián)合使用，Prasugrel和單硝酸異山梨酯聯(lián)合使用對心肌缺血大鼠心電圖ST-T振幅變化率的抑制作用取得了顯著的協(xié)同性作用。這就充分表明，氯吡格雷和單硝酸異山梨酯聯(lián)合使用，Prasugrel和單硝酸異山梨酯聯(lián)合使用對急性心肌缺血取得了顯著的協(xié)同性作用，并且其效果要顯著優(yōu)于阿司匹林聯(lián)合用藥組。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2.藥物對心肌缺血大鼠心電圖ST-T振幅變化率的影響比較(x±s) *與模型對照組相比較，P＜0.05. **與模型對照組相比較，P＜0.01. §與單硝酸異山梨酯組相比較，P＜0.05. §§與單硝酸異山梨酯組相比較，P＜0.01. ※與氯吡格雷組相比較，P＜0.05. ※※與氯吡格雷組相比較，P＜0.01. ★與Prasugrel組相比較，P＜0.05. ★★與Prasugrel組相比較，P＜0.01. &與阿司匹林聯(lián)合用藥組相比較，P＜0.05. &&與阿司匹林聯(lián)合用藥組相比較，P＜0.01. 藥物對心肌缺血大鼠血清中乳酸脫氫酶(LDH)和激酸激酶MB亞型(CK-MB)活性的影響見表3。由表中的數(shù)據(jù)可以看出，單硝酸異山梨酯、氯吡格雷或Prasugrel分別單獨(dú)使用，對血瘀模型大鼠小劑量垂體后葉素所致急性心肌缺血沒有表現(xiàn)出顯著的保護(hù)作用，僅單硝酸異山梨酯組的CK-MB活性與模型組相比較有顯著性差異。氯吡格雷聯(lián)合用藥組和Prasugrel聯(lián)合用藥組在降低血清中LDH活性和CK-MB活性方面取得了顯著的協(xié)同性作用，且其保護(hù)作用要顯著優(yōu)于阿司匹林聯(lián)合用藥組。
表3.藥物對心肌缺血大鼠血清中LDH和CK-MB活性的影響 *與模型對照組相比較，P＜0.05. **與模型對照組相比較，P＜0.01. §§與單硝酸異山梨酯組相比較，P＜0.01. ※※與氯吡格雷組相比較，P＜0.01. ★★與Prasugrel組相比較，P＜0.01. &與阿司匹林聯(lián)合用藥組相比較，P＜0.05.&&與阿司匹林聯(lián)合用藥組相比較，P＜0.01. 我們將實(shí)施例2中所使用的單硝酸異山梨酯用硝酸異山梨酯、硝酸甘油或戊四硝酯代替，同樣取得了很好效果，與ADP受體拮抗劑取得了顯著的協(xié)同性作用。
實(shí)施例3 氯吡格雷單硝酸異山梨酯片 氯吡格雷20g 單硝酸異山梨酯 10g 甘露醇 10g 乳糖40g 微晶纖維素 20g 6％PVP的無水乙醇溶液適量 山榆酸甘油酯2g 制備工藝 氯吡格雷和單硝酸異山梨酯分別過100目篩，甘露醇、乳糖、微晶纖維素過80目篩，稱取處方量的氯吡格雷和單硝酸異山梨酯以及甘露醇、乳糖、微晶纖維素混合均勻，加入6％PVP的無水乙醇溶液適量制粒，50℃以下干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的山榆酸甘油酯作為潤滑劑，壓片即得。
實(shí)施例4 氯吡格雷單硝酸異山梨酯緩釋膠囊 a、 氯吡格雷 30g 空白丸芯 300g 7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 200g 制備工藝 將氯吡格雷過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中。開造粒包衣機(jī)，入風(fēng)壓力0.5bar，入風(fēng)溫度35℃，CYL3bar，CAP10.6bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速145rpm，噴入7％PVP溶液(溶劑為95％乙醇)。造粒結(jié)束，50℃烘干，出料。
b、 a中制得的含氯吡格雷小丸 乙基纖維素 50g 硬脂酸 60g 聚乙二醇-40008g 滑石粉 10g 95％乙醇 1000g 制備工藝 將a中制得的含氯吡格雷小丸倒入下料斗中。開造粒包衣機(jī)，入風(fēng)溫度35℃，入風(fēng)壓力0.5bar，CYL3bar，CAP1 1.0bar，蠕泵6％，轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速160rpm，噴入乙基纖維素、硬脂酸和聚乙二醇-6000的95％乙醇溶液。包衣結(jié)束，50℃烘干，出料。
c、 單硝酸異山梨酯 5g 空白丸芯 30g 7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇) 30g 制備工藝 將單硝酸異山梨酯過120目篩，處方量稱取，倒入下料斗中，開造粒包衣機(jī)，入風(fēng)壓力0.5bar，入風(fēng)溫度30℃，CYL3bar，CAP10.8bar，倒入空白丸芯，造粒。下料速度4rpm，蠕泵12％，轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速130rpm，噴入7％PVP溶液(溶劑為90％乙醇)。造粒結(jié)束，45℃烘干，出料。
d、將b與c制得的小丸采用硬膠囊藥物填充機(jī)按照每兩粒膠囊中含氯吡格雷與單硝酸異山梨酯的重量分別為30mg和5mg進(jìn)行填充，即可。
實(shí)施例5 氯吡格雷硝酸異山梨酯分散片 氯吡格雷15g 硝酸異山梨酯25g 甘露醇 24g 羥丙基纖維素30g 交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮 30g 5％PVPK30水溶液 適量 硬脂酸鎂 0.6g 制備工藝 將處方量的氯吡格雷和硝酸異山梨酯過100目篩，甘露醇、羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮過80目篩，混勻后加入適量5％PVPK30水溶液制粒，加入硬脂酸鎂后壓片即可。
實(shí)施例6 硝酸甘油prasugrel緩釋膠囊 處方A 硝酸甘油溶液 20g 羥丙基淀粉 50g 水溶性淀粉 20g 20％淀粉漿 適量 處方B 鹽酸prasugrel 5g 乙基纖維素 25g 硬脂酸 10g 羧甲基淀粉鈉 30g PVP5g 8％PVPk30無水乙醇溶液 適量 制備工藝 將處方A中的羥丙基淀粉、水溶性淀粉分別過100目篩，混勻、加入處方量的硝酸甘油溶液，再加20％淀粉漿適量制粒，50℃以下烘干，18目篩整粒，將處方B中的prasugrel、乙基纖維素、硬脂酸、羧甲基淀粉鈉、PVP分別過100目篩，混勻、加8％PVPk30無水乙醇溶液適量制粒，烘干，整粒。將處方A和處方B按重量比1∶1進(jìn)行膠囊填充即可。
實(shí)施例7 戊四硝酯prasugrel緩釋片 戊四硝酯60g prasugrel 8g 乳糖 30g 羥丙基甲基纖維素-15M 20g 8％PVP的95％乙醇溶液 適量 山榆酸甘油酯 2g 制備工藝 戊四硝酯和prasugrel分別過100目篩，乳糖、羥丙基甲基纖維素-15M過80目篩，分別按照處方量稱取，混合均勻，加入8％PVP的95％乙醇溶液適量制粒，60℃干燥，16目篩整干顆粒，干顆粒中加入處方量的山榆酸甘油酯。壓片即得。
實(shí)施例8 單硝酸異山梨酯prasugrel膠囊 單硝酸異山梨酯 15g 馬來酸prasugrel3g 預(yù)膠化淀粉 20g 微晶纖維素 20g 羧甲基淀粉鈉 10g 10％淀粉漿 適量 制備工藝 將處方中的單硝酸異山梨酯、prasugrel、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素和羧甲基淀粉鈉分別過100目篩，按處方量稱取，混勻、加10％淀粉漿適量制粒，55℃以下烘干，18目篩整粒，膠囊充填即可。
實(shí)施例9 單硝酸異山梨酯prasugrel注射液 單硝酸異山梨酯4.0g 硫酸prasugrel 4.0g 丙二醇200ml 加注射用水至總量 1000ml 制備工藝 將處方量的單硝酸異山梨酯和prasugrel溶解于適量的丙二醇和注射用水的混合液中，加注射用水至注射液總量為1000ml，調(diào)pH值4.0-6.0，過濾，分裝即可。
權(quán)利要求
1.一種用于治療心肌缺血性疾病的藥物組合物，其特征在于它含有硝酸酯類藥物和二磷酸腺苷受體拮抗劑。
2.如權(quán)利要求1所述的二磷酸腺苷受體拮抗劑，其特征在于它是氯吡格雷、Prasugrel或其鹽。
3.如權(quán)利要求1所述的硝酸酯類藥物，其特征在于它是硝酸甘油、單硝酸異山梨酯、硝酸異山梨酯或戊四硝酯。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于它是口服的固體制劑。
5.如權(quán)利要求4所述的口服固體制劑，其特征在于它是片劑、膠囊、分散片、緩釋片、緩釋膠囊或注射液。
全文摘要
本發(fā)明通過藥理試驗(yàn)證實(shí)了硝酸酯類藥物可以增強(qiáng)ADP受體拮抗劑的抗血栓形成作用，而且其抗血栓形成效果要顯著優(yōu)于硝酸酯類藥物和阿司匹林聯(lián)合用藥；硝酸酯類藥物和ADP受體拮抗劑取得了顯著的協(xié)同性作用，而且其效果也明顯優(yōu)于阿司匹林和單硝酸異山梨酯聯(lián)用。
文檔編號A61K9/52GK101028517SQ200610044408
公開日2007年9月5日 申請日期2006年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月2日
發(fā)明者趙志全 申請人:魯南制藥集團(tuán)股份有限公司