專利名稱：具有抗腫瘤作用的扁藻多糖蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物化工領(lǐng)域，涉及多糖蛋白，特別是從新鮮的海洋亞心型扁藻中提取出的一種多糖蛋白。
背景技術(shù)：
微藻光合利用效率高、個(gè)體小、營養(yǎng)豐富、生長繁殖迅速、對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力強(qiáng)、容易培養(yǎng)，許多國家先后進(jìn)行了微藻培養(yǎng)、營養(yǎng)價(jià)值分析及開發(fā)利用研究，取得了許多成就和進(jìn)展。目前，已被廣泛研究和開發(fā)的微藻包括小球藻(Chlorela sp.)、螺旋藻(Spirulin sp.)、杜氏藻(Dunaliella sp.)、紅球藻(Haematococcus sp.)等，從中生產(chǎn)出了大量用途廣泛的產(chǎn)品，如食品添加劑、保健食品、殺蟲劑、植物生長調(diào)節(jié)劑以及抗菌、抗病毒和抗癌物質(zhì)。然而，還有許多和大量的未被開發(fā)和研究的微藻，其中含有大量的未被人們認(rèn)識(shí)和發(fā)現(xiàn)的具有獨(dú)特或高效作用的新物質(zhì)或者新的利用途徑。如用作海珍品幼體培養(yǎng)的優(yōu)良餌料亞心型扁藻(Platymonas subcordiformis)，就含有一些未被人們認(rèn)識(shí)和發(fā)現(xiàn)的具有獨(dú)特或高效作用的新物質(zhì)或者新的利用途徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從新鮮的海洋亞心型扁藻細(xì)胞中提取出的扁藻多糖蛋白。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了一種以該扁藻多糖蛋白為活性成分的用于抗腫瘤的藥物組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供了上述扁藻多糖蛋白和含有上述多糖蛋白的組合物在抗腫瘤藥物方面的用途。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是利用新鮮的海洋亞心型扁藻，經(jīng)過去離子水清洗、滲透、凍融、去雜蛋白、乙醇沉淀、丙酮洗滌和沉淀干燥過程提取而成的淡乳白色的粉末；此扁藻多糖蛋白中多糖含量為40-70％，蛋白質(zhì)含量為10-30％，在水中的溶解度為110-130mg/100克水，粘度接近于水的粘度，SDS凝膠電泳顯示該扁藻多糖蛋白中含有分子量分別在2.8-3.2萬和3.8-4.2萬的兩種糖蛋白。本發(fā)明優(yōu)選的扁藻多糖蛋白是多糖含量為50-55％，蛋白質(zhì)含量為16-20％，而且該扁藻多糖蛋白中含有平均分子量分別為3萬和4萬的兩種多糖蛋白。這種扁藻多糖蛋白的多糖含量、蛋白質(zhì)含量、水中的溶解度和分子量變化與海洋亞心型扁藻的產(chǎn)地、生長環(huán)境和生長期以及提取過程等因素有關(guān)。
將本發(fā)明的扁藻多糖蛋白用于對(duì)體外腫瘤細(xì)胞和小鼠體內(nèi)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行抑制作用實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其對(duì)體外培養(yǎng)的QGY-7701肝癌細(xì)胞、紅白血病K562細(xì)胞的抑制率為60-75％，電鏡顯示被抑制的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的凋亡特征，即細(xì)胞膜起泡，核染色質(zhì)固縮，周邊聚集，核碎裂成團(tuán)狀散布于胞漿，形成凋亡小體。此扁藻多糖蛋白與順鉑聯(lián)合使用時(shí)，在不降低抑制率的前提下，可減少順鉑使用量的70-75％。將此扁藻多糖蛋白用于對(duì)純系小鼠BL/C57體內(nèi)黑色素瘤進(jìn)行抑制作用研究，發(fā)現(xiàn)其對(duì)腫瘤的抑制率為36-40％，并可促使小鼠的生長。
本發(fā)明的藥物組合物含有治療有效劑量的上述扁藻多糖蛋白為活性成分，以及含有一種或者多種藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的扁藻多糖蛋白和藥物組成物可用于制備各種抗腫瘤的藥物。
本發(fā)明的扁藻多糖蛋白與順鉑的混合物及其含有這種混合物的藥物組成物可用于制備各種抗腫瘤的藥物。
上述所述的藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括稀釋劑、賦形劑如水等；填充劑如淀粉、蔗糖等；黏合劑如纖維素及衍生物、明膠；潤濕劑如甘油；崩解劑如碳酸氫鈉、碳酸鈣等；吸收促進(jìn)劑如季銨鹽；表面活性劑如高碳脂肪醇；吸附載體如高嶺土、皂黏土；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣及聚己二醇等；還可以在組合物中加入其它輔劑如甜味劑、香味劑等。
本發(fā)明的扁藻多糖蛋白可以以組合物的形式通過口服、直腸、靜脈、肌肉或胃腸外給藥方式施用于腫瘤患者的治療。也可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法，如使其活性成分與一種或多種載體或藥物混合，制備各種劑型如片劑、沖劑、膠囊、栓劑、噴霧劑等，優(yōu)選的形式是片劑、沖劑、膠囊、栓劑、噴霧劑、緩釋劑和注射劑；特別優(yōu)選的是口服膠囊。本發(fā)明的藥物組合物中含有重量比為1％-99.5％的活性成分是本發(fā)明扁藻多糖蛋白，優(yōu)選含有重量比為45％-99.5％的活性成分是本發(fā)明扁藻多糖蛋白，最好含有重量比為90％-99.5％的活性成分是本發(fā)明扁藻多糖蛋白。
本發(fā)明的施藥量可根據(jù)用藥途徑、患者年齡、體重、疾病類型和嚴(yán)重程度等變化。
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例可以幫助本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1.利用新鮮的海洋亞心型扁藻，經(jīng)去離子水清洗、滲透、凍融、離心去藻泥、上清液鹽析去雜蛋白、上清液經(jīng)一次無水乙醇沉淀、丙酮二次洗滌沉淀和沉淀干燥步驟制得扁藻多糖蛋白淡乳白色粉末，其組成為多糖含量為40％，蛋白質(zhì)含量為30％。在水中的溶解度為100mg/100克水，粘度接近于水的粘度，而且該扁藻多糖蛋白中含有平均分子量分別為2.8萬和4.2萬的兩種多糖蛋白。
實(shí)施例2.利用新鮮的海洋亞心型扁藻，經(jīng)去離子水清洗、滲透、凍融、離心去藻泥、上清液鹽析去雜蛋白、濃縮上清液后經(jīng)二次無水乙醇沉淀、丙酮二次洗滌沉淀和沉淀干燥步驟制得扁藻多糖蛋白淡乳白色粉末，其組成為多糖含量為70％，蛋白質(zhì)含量為10％。在水中的溶解度為120mg/100克水，粘度接近于水的粘度，而且該扁藻多糖蛋白中含有平均分子量分別為3.2萬和3.8萬的兩種多糖蛋白。
實(shí)施例3.利用新鮮的海洋亞心型扁藻，經(jīng)去離子水清洗、滲透、凍融、離心去藻泥、濃縮上清液后鹽析去雜蛋白、濃縮上清液后經(jīng)二次無水乙醇沉淀、丙酮三次洗滌沉淀和沉淀干燥步驟制得扁藻多糖蛋白淡乳白色粉末，其組成為多糖含量為55％，蛋白質(zhì)含量為20％。在水中的溶解度為130mg/100克水，粘度接近于水的粘度，而且該扁藻多糖蛋白中含有平均分子量分別為2.8萬和3.8萬的兩種多糖蛋白。
實(shí)驗(yàn)例4.抗腫瘤片劑的制備取實(shí)施例1制備的扁藻多糖蛋白10g，加入賦形劑藥用環(huán)糊精30g，混合均勻，造粒壓片，制得片劑。
實(shí)施例5.抗腫瘤膠囊的制備取實(shí)施例1制備的扁藻多糖蛋白10g，加入賦形劑藥用環(huán)糊精10g，混合均勻，造粒，裝入膠囊。
實(shí)施例6.抗腫瘤注射劑的制備取實(shí)施例3制備的扁藻多糖蛋白1.1g，加入注射用水1000ml，溶解，膜過濾；分裝，每瓶2ml。所有操作均應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行。
實(shí)施例7.抗腫瘤膠囊的制備取實(shí)施例2制備的扁藻多糖蛋白6g，順鉑2克，加入賦形劑藥用環(huán)糊精10g，混合均勻，造粒，裝入膠囊。
權(quán)利要求
1.一種具有抗腫瘤作用的多糖蛋白，其特征是利用新鮮的海洋亞心型扁藻，經(jīng)過去離子水清洗、滲透、凍融、去雜蛋白、乙醇沉淀、丙酮洗滌和沉淀干燥過程提取而成的淡乳白色的粉末；該扁藻多糖蛋白中多糖含量為40-70％，蛋白質(zhì)含量為10-30％，在水中的溶解度為110-130mg/100克水，粘度接近于水的粘度，SDS凝膠電泳顯示該扁藻多糖蛋白中含有分子量分別在2.8-3.2萬和3.8-4.2萬的兩種糖蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的扁藻多糖蛋白，其特征是多糖含量為50-55％，蛋白質(zhì)含量為16-20％，而且該扁藻多糖蛋白中含有平均分子量分別為3萬和4萬的兩種多糖蛋白。
3.權(quán)利要求1或者2中扁藻多糖蛋白在制備抗腫瘤藥物中應(yīng)用。
4.用于抗腫瘤的藥物組合物，其特征是其中含有治療有效量的權(quán)利要求1或者2的扁藻多糖蛋白和藥學(xué)上可接受的載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征是其中含有治療有效量的權(quán)利要求1或者2的扁藻多糖蛋白和順鉑。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物化工領(lǐng)域，涉及多糖蛋白，是通過水洗、凍融、去雜蛋白、乙醇沉淀、丙酮洗滌、水浴干燥等過程從新鮮的海洋亞心型扁藻細(xì)胞中提取出的一種多糖蛋白，呈淡乳白色的粉末，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。其中多糖含量為40－70％，蛋白質(zhì)含量為10－30％，在水中的溶解度為110－130mg/100克水，粘度接近于水的粘度。此扁藻多糖蛋白對(duì)體外培養(yǎng)的QGY－7701肝癌細(xì)胞和紅白血病K
文檔編號(hào)A61K38/02GK1843384SQ20061004650
公開日2006年10月11日 申請(qǐng)日期2006年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月29日
發(fā)明者楊海波, 趙蓮華, 劉艷, 于媛, 張欣華, 李英敏 申請(qǐng)人:大連大學(xué)