專利名稱：一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒注射制劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明是一種益氣復脈、活血化瘀益心舒注射制劑及其制備方法，屬于藥品的技術領域。
背景技術：
益心舒注射制劑是由人參、麥冬、五味子、黃芪、丹參、川芎、山楂等藥材組成，具有益氣復脈，活血化瘀，養(yǎng)陰生津的功效，用于氣陰兩虛，心悸脈結代，胸悶不舒、胸痛及冠心病心絞痛等癥。心腦血管系統(tǒng)疾病是人類最為常見的一類疾病，是目前威脅人類健康的頭號殺手，已成為當今世界人口的第一大死亡病因。在我國，隨著人口老齡化加速，人民生活水平提高，生活節(jié)奏加快，飲食結構向高熱、高脂化發(fā)展，人群中冠心病、心絞痛等心血管系統(tǒng)疾病也已成為危害人類健康及生命的嚴重疾病之一，心腦血管疾病患者急劇增加，每年死于心血管疾病的已達240萬人以上，占到疾病死亡率的34％，且呈上升趨勢。另一方面，由于飲食結構改變，造成膽固醇攝入量過多，以及工作、生活壓力加大、運動量減少，環(huán)境污染等原因，心腦血管疾病發(fā)病率呈現(xiàn)年輕化的趨勢，三、四十歲的人患心腦血管病的比例逐年增加，心血管疾病的高發(fā)生率與死亡率日益受到社會的廣泛關注。
由于冠心病、心絞痛是常見的多發(fā)病之一，持續(xù)時間長，多為慢性病，需要長期用藥。目前常用的治療冠心病、心絞痛的西藥主要是硝酸酯類藥物、β阻滯劑、鈣拮抗劑及抗血小板聚集藥物，具有如頭痛、眩暈、血壓下降、心動過速等不良反應，長期使用還會產(chǎn)生耐藥性。在已有技術中，使用人參、麥冬、五味子、黃芪、丹參、川芎、山楂等藥材制備成益心舒膠囊來進行治療，益心舒膠囊的制備方法是采用人參生藥粉入藥，而丹參也只是提取醇溶性成分。由于人參生藥粉入藥，服用后，必須先通過膠囊的崩解，生藥粉才能逐漸在胃內溶解、吸收，因而作用較慢、生物利用度較差；此外，丹參只提取醇溶性成分，而最新的研究資料表明，丹參中的水溶性成分丹酚酸B和醇溶性成分丹參酮IIA在心臟微血管內皮細損傷胞時，均能夠提高心臟微血管內皮細胞活力，降低乳酸脫氫酶釋放，降低一氧化氮合成、內皮素釋放，且配伍后的作用優(yōu)于單一成分；在心肌細胞損傷時，對心肌細胞增殖的作用丹酚酸B的作用明顯強于丹參酮IIA丹酚酸B、丹參酮IIA配伍后減少乳酸脫氫酶釋放、一氧化氮合成的作用強于兩者單獨使用，對于減輕細胞的損傷程度，表現(xiàn)在細胞活力的增強，乳酸脫氫酶釋放的減少，也是二者配伍作用強于單獨使用。由此表明，丹參的水溶性成分丹酚酸類物質和脂溶性成分丹參酮類物質均有抗心肌缺血的作用，雖各有側重，但兩者合用的作用強于兩者單獨作用。丹參中脂溶性成分和水溶性成分協(xié)同作用，可使藥效增強，而單獨使用脂溶性成分，大大的減弱了該藥方的藥效。如果將其全部有效成分制成膠囊劑，由于脂溶性成分和水溶性成分的物理特性，膠囊劑中脂溶性成分和水溶性成分混合，相互膠著，不易崩解，可導致作用遲緩，生物利用度低的問題。如果制成注射劑，雖然能夠提高生物利用度，且迅速發(fā)揮作用，但是，采用常規(guī)方法，很難將處方中藥材的有效成分完全提取出來，因為從藥材中提取出來的脂溶性成分難溶于水溶性溶媒中，而從藥材中提取出來的水溶性成分難溶于脂溶性溶媒中，使用一種溶媒或不同比例的溶媒混合，如果比例不當，脂溶性溶媒加入量過小，脂溶性有效部位提取物不能完全溶解，脂溶性溶媒加入量過大，脂溶性有效部位提取物雖然可以溶解，但是，制成藥物的單位體積載藥量降低，不能達到最低有效濃度；在制備注射液和注射用濃溶液的過程中，由于藥物不能溶解在溶媒中，而產(chǎn)生沉淀，使用時影響藥物的吸收，降低藥物療效，甚至導致藥物不良反應；在制備凍干粉劑時，由于成分復雜，冷凍干燥中，若直接以藥液進行凍干，由于成品疏松、比表面積大，極易吸濕，不能成型；在制備噴霧干燥粉劑時，由于成分復雜，所含多糖類粘性物質較多，可直接影響噴霧干燥的效果，易發(fā)生粘壁、結塊現(xiàn)象，且所得浸膏粉末吸濕性較大，不利于浸膏粉的收集；同時，由于脂溶性成分或水溶性成分的難溶性，使用后會導致藥物有效成分在人體內的吸收以及作用的發(fā)揮。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種益氣復脈、活血化瘀益心舒注射制劑及其制備方法，以克服現(xiàn)有技術所存在的膠囊劑中脂溶性成分和水溶性成分混合使相互膠著不易崩解，作用遲緩，生物利用度低的問題，解決了由于溶媒配比不當所致的注射劑溶解性差的問題，也解決了凍干粉劑在制備時成型差的問題，也解決了噴霧干燥時粘壁、結塊、粉末吸濕性較大的問題；本發(fā)明所說的一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒注射制劑，按重量百分比，它是由人參15％、麥冬15％、五味子10％、黃芪15％、丹參20％、川芎10％和山楂15％制備而成，用這些藥材提取的有效部位提取物和輔料制成；其中藥材提取的有效部位提取物包括脂溶性有效部位提取物、水溶性有效部位提取物或者是它們的混合物；輔料包括注射用水、甘露醇、乳糖、右旋糖酐、葡萄糖、聚乙二醇或它們的混合物。制備的注射劑，包括注射液、注射用無菌粉末以及注射用濃溶液。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，按重量百分比，取人參15％、麥冬15％、五味子10％、黃芪15％、丹參20％、川芎10％、山楂15％粉碎成細粉；人參、五味子、丹參用乙醇提取脂溶性有效部位提取物，藥渣備用，濾液合并，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得脂溶性有效部位提取物，備用；藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂加水煎煮，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物；將上述二種有效部位提取物合并后，備用；取上述有效部位提取物，作為注射劑用的活性原料，按照如下方法制備(1)注射液的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.01-0.1倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.05-0.15倍量的右旋糖酐充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌封，滅菌，即得；(2)凍干粉針的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入有效部位提取物0.01-0.1倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.2-0.4倍量的甘露醇充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌裝于20ml的西林瓶中，每瓶裝10ml；然后置于冷凍干燥箱中于-50℃預凍3-5小時后抽真空；冷凝溫度保持不變，24小時后，開箱，制成凍干品，壓蓋，貼簽，即得；(3)無菌粉末的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定的體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.03-0.09倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.06-0.15倍量的乳糖充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液用無菌條件下的噴霧干燥塔進行噴霧，制成無菌粉末，包裝，貼簽，即得；(4)注射用濃溶液的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.1-0.3倍量的甘露醇和上述有效部位提取物0.12-0.36倍量的右旋糖酐及上述有效部位提取物0.02-0.08的葡萄糖，充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液減壓濃縮至適量，灌封，滅菌，即得。
人參、五味子、丹參用乙醇提取脂溶性有效部位的方法包括回流提取、滲漉提取或者浸漬提取。回流提取是將人參、五味子、丹參用85％乙醇回流提取2次，第一次3小時，第二次1.5小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度1.15～1.12(20℃)，得脂溶性有效部位提取物；滲漉提取是將人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法用85％乙醇浸漬24小時后進行滲漉，收集滲漉液至無色，合并滲漉液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得脂溶性有效部位提取物；浸漬是將將人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IN酊劑項下的浸漬法用85％乙醇浸漬3-5日，取出上清液，再加入85％乙醇依法浸漬至有效部位充分浸出，合并浸漬液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得脂溶性有效部位提取物。
本發(fā)明還可以這樣來實現(xiàn)，按重量百分比，取人參15％、麥冬15％、五味子10％、黃芪15％、丹參20％、川芎10％、山楂15％，粉碎，人參、五味子、丹參、川芎分別置于二氧化碳超臨界流體萃取機的萃取釜中循環(huán)萃取，收集提取物，備用；藥渣及剩余麥冬、黃芪、山楂加水煎煮，合并煎煮液，濾過，濾液用裝有能切割5萬-1000分子量超濾膜的超濾裝置過濾，將膜上液與膜下液分離，膜上液棄去，膜下液備用；膜下液用裝有能切割100-300分子量的納濾膜的納濾器過濾，將膜上液與膜下液分離，膜下液棄去，收集膜上液，得水溶性提取物；將上述提取物和水溶性提取物合并，備用；取上述有效部位提取物，按照如下方法制備(1)注射液的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.01-0.1倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.05-0.15倍量的右旋糖酐充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌封，滅菌，即得；(2)凍干粉針的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入有效部位提取物0.01-0.1倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.3-0.9倍量的甘露醇充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌裝于20ml的西林瓶中，每瓶裝10ml；然后置于冷凍干燥箱中于-50℃預凍3-5小時后抽真空；冷凝溫度保持不變，24小時后，開箱，制成凍干品，壓蓋，貼簽，即得；(3)無菌粉末的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.03-0.09倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.06-0.15倍量的乳糖充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液用無菌條件下的噴霧干燥塔進行噴霧，制成無菌粉末，包裝，貼簽，即得；(1)注射用濃溶液的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.1-0.3倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.12-0.36倍量的右旋糖酐及上述有效部位提取物0.02-0.08的葡萄糖，充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液減壓濃縮至適量，灌封，滅菌，即得。
人參、丹參、五味子和川芎采用二氧化碳超臨界流體萃取是經(jīng)過分別提取，人參的萃取壓力是25Mpa、萃取溫度是55℃、萃取時間是6小時；丹參應萃取兩次，第一次使用的萃取壓力是20Mpa、萃取溫度是40℃、萃取時間是4小時；第二次使用的萃取壓力是35Mpa、萃取溫度是65℃、萃取時間是8小時；五味子的萃取壓力是25.3Mpa、萃取溫度是60℃、萃取時間是6小時；川芎應萃取兩次，第一次使用的萃取壓力是25.3Mpa、萃取溫度是60℃、萃取時間5小時、第二次使用的萃取壓力是30Mpa、萃取溫度是65℃、萃取時間是6小時。
本發(fā)明具有益氣復脈，活血化瘀，養(yǎng)陰生津之功效，用于氣陰兩虛，心悸脈結代，胸悶不舒、胸痛及冠心病心絞痛見有上述癥狀者。在本發(fā)明的處方諸味藥材提取的有效成分中，富含人參皂苷、丹參酚酸B、丹參酮IIA、五味子素、川芎嗪、山楂黃酮、黃芪苷等生物活性因子，對于心血管疾病有比較好的治療效果；本發(fā)明解決了制備注射劑時藥物中脂溶性有效部位、水溶性有效部位與溶媒難以相互混溶的問題，解決了凍干過程中單一使用有效部位提取物影響凍干成形的問題，也解決了噴霧干燥時粘壁、結塊、吸濕的問題，提高了藥材中提取的脂溶性有效部位或水溶性有效部位在溶媒中的溶解性，提高了藥物的生物利用度，使療效更快、作用更強。
實際上本發(fā)明的核心在于將具有療效的脂溶性有效部位、水溶性有效部位提取出來，提取工藝中采用二氧化碳超臨界萃取技術，首先提取成分明確的丹參酮IIA、人參皂苷、川芎嗪、五味子素等；制備注射劑采用復合輔料，使中藥材中有效部位提取物完全溶解在溶媒中，選用優(yōu)化的復合輔料比例，通過溶解或冷凍干燥或噴霧干燥制成注射劑。在常規(guī)的注射劑制備中，是由固體或液體藥物與溶媒相互溶解成溶液，經(jīng)適當?shù)臑V器過濾或精濾，分裝至容器中，或冷凍干燥，或噴霧干燥后分裝至容器中制成。我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明采用現(xiàn)有的制備方法，不能使脂溶性有效部位提取物、水溶性有效部位提取物同時完全溶解在一種溶媒中，不能使溶液澄清，從而產(chǎn)生混濁而影響其吸收。眾所周知，藥物要在體內溶解后才能吸收，因此，本發(fā)明藥物在注射用水中加入了復合輔料，復合輔料中的聚乙二醇6000，使脂溶性有效部位能夠迅速溶解。兩種不同性質的有效部位能在一種溶媒中溶解，制備凍干粉時能有效成型、噴霧干燥時，出粉率高、粉末形狀好、不易吸潮成為本發(fā)明的關鍵。本發(fā)明中提取出來的脂溶性有效部位提取物和水溶性有效部位提取物，用常規(guī)的溶媒即注射用水，雖然可以將水溶性有效部位提取物完全溶解在注射用水中，但是，脂溶性有效部位提取物則不能完全溶解在注射用水中，從而影響了注射劑在制備時的成形質量和藥物療效；如果使用常規(guī)的非水溶性溶劑作為溶媒，同樣，雖然可以將脂溶性有效部位提取物完全溶解在該溶媒中，但是，水溶性有效部位提取物不能完全溶解在該溶劑中，也影響了注射劑的質量和療效；通過實驗選擇，我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明使用的復合輔料能使水溶性有效部位提取物與脂溶性有效部位提取物增加在注射用水中的溶解度，兩種溶解性各異的有效部位提取物，具有相差較大的極性和介電常數(shù)，使用復合輔料，可相互調節(jié)成與藥物相近的極性和介電常數(shù)，從而增加藥物的溶解度，起到提高溶解度的作用，達到充分溶解的目的。本發(fā)明解決了這個問題，在制備注射劑過程中，加入復合輔料，使難溶的脂溶性有效部位提取物的溶解性增強，因而使藥物加速溶解，吸收增多，生物利用度提高。同時，加入復合輔料，還可使得凍干粉成型好、噴霧干燥粉無粘壁、結塊、吸濕的現(xiàn)象。
以下是本發(fā)明與常規(guī)方法制備注射劑使用注射用水和加入復合輔料使用的效果比較
表1 效果比較

從以上表中可以看出，使用本發(fā)明的復合輔料能夠提高其有效部位的溶解性，制備的注射劑溶解性好，凍干粉成型性好，噴霧干燥粉粉粒均勻無粘連。
提供的制備方法中提到的常規(guī)方法、現(xiàn)有技術、已有技術等是指公開的技術、該領域的專業(yè)技術人員可以查閱、實施的方法。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明提供的藥物制劑把藥材中的脂溶性有效部位、水溶性有效部位提取出來，制備成注射劑，使劑型最優(yōu)化，效果更迅速。采用復合輔料，把脂溶性有效部位、水溶性有效部位的提取物完全溶解在注射用水中，在采用過濾技術，將溶液過濾或精濾，有效部位提取物在注射用水中呈分子狀態(tài)高度分散在溶液里，能夠迅速釋放藥物，藥物直接吸收，從而使得藥物的作用更快、更強，提高了生物利用度；改變了現(xiàn)有膠囊劑因人參藥材全藥材粉末入藥生物利用度低的缺點，增加了丹參中丹參酚酸、川芎中川芎嗪等成分的提取、使藥效更強，解決了用常規(guī)方法制備凍干粉成型不好、噴霧干燥時粘壁、結塊、吸潮等現(xiàn)象，以及脂溶性成分溶解不完全而造成的吸收慢、療效差的問題，充分發(fā)揮了該處方的藥理作用。本發(fā)明提供的注射制劑，給藥后能夠迅速到達冠狀動脈，使血管彈性增加，疏通清理血管內淤積的栓塞物，及時控制因心肌缺血、缺氧而引起的心絞痛、心肌梗死。
下面是二種劑型的對比情況，從對比結果看本發(fā)明提供的產(chǎn)品更加合理、優(yōu)點明顯。
表2 膠囊劑與本發(fā)明的注射劑性能比較

為了證實本發(fā)明的安全性和有效性，本發(fā)明人進行了該處方相關制劑的毒性試驗和藥理作用比較，證明這種產(chǎn)品的安全性、有效性，采用益心舒注射劑(凍干粉為例)與益心舒膠囊進行主要藥效實驗對照，從多個方面研究本發(fā)明制備的凍干粉劑的部分藥理作用。
益心舒凍干粉毒性試驗1.急性毒性試驗昆明種小鼠，19-22g，♀♂各半，每組♀♂小鼠各10只，實驗前禁食6小時，不禁水，靜脈(iv)給藥，給藥后1小時喂食。
I組iv10％溶液0.4ml/10g，觀察14天。
結果給藥后動物無明顯癥狀，給藥后1小時即進食，觀察期間無死亡，體重增加4-6g。
II組iv15％溶液0.4ml/10g，觀察14天。
結果給藥后動物活動略多，藥后1小時即進食，觀察期間無1只死亡，體重增加4-6g。
III組iv20％溶液0.4ml/10g，觀察14天。
結果給藥后小鼠活動增加，4-5分鐘后小鼠出現(xiàn)肌僵直現(xiàn)象，少動或不動，24小時恢復活動并進食，但活動仍少，呈疲倦狀，48小時恢復給藥前狀況，觀察期間無1只死亡，體重增加3-5g。
故益心舒凍干粉♀♂小鼠最大耐受量均＞8g/kg
2.長期毒性試驗2.1方法Wistar大鼠60只，體重140-160g，隨機分為3組，每組20只，♀♂各半。將益心舒凍干粉用注射用水溶解成0.4g/ml的溶液，對照組藥物混合在飼料中進食。給藥量，藥I組iv4ml/kg·d，藥II組2ml/kg·d，對照組喂普通飼料，共32天。第33天將各組半數(shù)動物取尾血查血象，取頸動脈血查生化指標。解剖動物，對心、肝、脾、肺、腎、胃、腸、睪丸、子宮、卵巢、等器官作大體觀察。然后取藥I組和對照組動物的心、肝、脾、肺、腎、睪丸、子宮作病理學鏡檢。二周后處死另一半動物，檢查以上指標。
2.2結果2.2.1動物一般狀況 給藥及停藥期間，各組大鼠均無異常表現(xiàn)，毛光滑，行為活潑，飲食如常。
2.2.2實驗期間，各組動物體重持續(xù)增長，組間無顯著性差異。(見表3)2.2.3血象 結果列于表4，各組大鼠血象指標均在正常范圍內，組間無顯著性差異。
2.2.4生化指標 結果列于表5，各組大鼠所有指標均在正常范圍內，組間無顯著性差異。
2.2.5臟器系數(shù) 結果列于表6，各組大鼠臟器系數(shù)組間無顯著性差異。
2.2.6病理檢查 大體觀察，各組均有少數(shù)動物肺臟有局部閼血現(xiàn)象，其他器官無明顯病變。病理切片鏡檢，各組鼠器官均未發(fā)現(xiàn)明顯病變，未見與藥物有關的病理變化。
2.3結論益心舒凍干粉給藥32天試驗，二個組大鼠生長發(fā)育、血象、生化指標，臟器系數(shù)，病理檢查等項指標，與對照組比較，均無明顯差異，表現(xiàn)益心舒凍干粉對大鼠無明顯毒性作用。停藥2周，亦未見遲發(fā)性不良反應。
表3 益心舒凍于粉長期毒性試驗——體重(g)增長情況(n＝10，46天后n＝5，X±s)


表4 益心舒凍干粉長期毒性試驗——血象測定結果(n＝10，X±s)

表5 益心舒凍干粉長期毒性試驗——血液生化指標測定結果(n＝10，X±s)

表6 益心舒凍干粉長期毒性試驗-內臟器系數(shù)(臟器(g)/體重100g，n＝10，睪丸、子宮n＝5)

益心舒凍干粉主要藥效學試驗1.實驗材料1.1藥物益心舒凍干粉，臨用時配制成0.4g/ml的溶液，由貴州信邦制藥股份有限公司提供；復方丹參片，水楊酸鈉，異丙腎上腺素注射液，膠原蛋白-腎上腺素混合誘導劑按常規(guī)用大鼠脫毛皮膚制作勻漿，離心，用去沉淀離心液與腎上腺素按225∶9比例混合，臨用現(xiàn)配。血府逐瘀湯水煎醇沉液，以下簡稱“血府逐瘀湯”(當歸10g，生地10g，桃仁12g，紅花10g，枳殼6g，赤芍6g，柴胡3g，桔梗5g，川芎5g，牛膝10g，甘草3g，共煎成45ml，每ml相當于原生藥材2g)
1.2動物昆明種小鼠，wistar大鼠、豚鼠，由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供。
2.方法與結果2.1對醋酸致小鼠扭體反應的影響取體重18-20g，雌、雄各半的小鼠40只，隨機分為4組，按表7每日靜脈給藥(其它對照組為ig給藥，以下同。)，連續(xù)5天。末次給藥后30分鐘，腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，觀察每只小鼠15分鐘扭體次數(shù)。結果見表7，可見益心舒凍干粉高、低劑量組與生理鹽水組比較有顯著性差異(P＜0.05)，表明該藥對醋酸所致小鼠扭體反應有明顯抑制作用。
表7 益心舒凍干粉對醋酸致小鼠扭體反應的影響

2.2對熱板法中小鼠痛閾值的影響取體重18-20g雌性小鼠于實驗前在55±0.5℃的熱板上測每鼠痛閾，進行篩選。取40只篩選合格的小鼠，隨機分為4組，重復測其正常痛閾值。取兩次正常痛閾平均值作為該鼠給藥前痛閾值。按表8靜脈給藥，各組均在給藥1小時后，將小鼠置于55±0.5℃熱板上，記錄小鼠自放入到舔后足的時間，超過60秒者按60秒計算。結果見表8，可見各組動物給藥前痛閾之間均無顯著性差異，給藥后，高劑量組可顯著提高小鼠痛閾值，與生理鹽水組比較有顯著差異(P＜0.05)。
表8 益心舒凍干粉對熱板法中小鼠痛閾值的影響

2.3對膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)小鼠體內血栓形成的影響取25-30g雄性小鼠40只，隨機分為4組，按表9每日靜脈給藥，連續(xù)一周。末次給藥后30分鐘，尾靜脈注射膠原蛋白(225μg/只)與腎上腺素(9μg/只)的混合誘導劑，注射后即觀察5分鐘內小鼠死亡數(shù)及15分鐘內小鼠偏癱的未恢復數(shù)，計算該藥對小鼠腦血栓的保護率，并進行X2檢驗結果見表9，可見該藥對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠體內血栓有顯著的保護作用。
表9 益心舒凍干粉對膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)小鼠體內血栓形成的影響

2.4益心舒凍干粉對離體豚鼠心臟灌流的影響每只豚鼠心臟固定在灌流裝置上后，按表10用新鮮蒸餾水配制的任洛氏液灌流10-15分鐘，記錄冠脈流量和心率，結果見表10，可見該藥高、低劑量組均可使冠脈流量增加；增加率分別為26.3、23.05，均明顯高于給藥前(P＜0.05)；心率有所減慢，但與給藥前比較，無顯著性差異(P＞0.05)。
表10 益心舒凍干粉對離體豚鼠心臟灌流的影響(X±SD；n＝10)

2.5益心舒凍干粉對常壓缺氧小鼠生存時間的影響取體重18-20g雌雄各半小鼠，隨機分為5組，按表11每日靜脈給藥，連續(xù)10天，末次給藥后30分鐘，放入內裝7.5g鈉石灰廣口瓶(體積250ml)中，凡士林密封，記錄各組小鼠存活時間，結果見表11，可見該藥高、中劑量組能顯著延長常壓缺氧小鼠存活時間，與生理鹽水組比較有顯著性差異(P＜0.05)，表明該藥可明顯延長心肌及腦缺氧的耐受時間。
表11 益心舒凍干粉對常壓缺氧小鼠生存時間的影響

2.6益心舒凍干粉對垂體后葉素所致大鼠在體急性心肌缺血的影響取體重160-180g，雌雄各半大鼠40只，隨機分為4組，在清醒狀態(tài)下，用胸前導聯(lián)記錄心電圖。按表12靜脈給藥1h后，iv垂體后葉素注射0.5u/kg，約15s注射完畢，描記給藥前后3min心電圖的變化，出現(xiàn)下列指征之一者，即為心肌缺血陽性T波低平(降低原T波高度50％以上)，雙向倒置，ST水平下移0.5mv，心律不齊。比較各組陽性率的差異，結果見表12，可見益心舒凍干粉對垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血，有明顯的拮抗作用。
表12 益心舒凍干粉對垂體后葉素引起大鼠心肌缺血的影響(n＝10)

2.7益心舒凍干粉對小鼠耳廓微循環(huán)的影響取18-22g小鼠20只，雌雄兼用，隨機分為4組，每組5只，im20％烏拉坦0.07ml/10g麻醉，用醫(yī)用橡皮膏輕輕拉去耳廓毛，俯位固定于小鼠觀察臺，令小鼠耳廓平展于耳托上，在耳廓上滴1滴液體石蠟，用50-100倍鏡觀察小鼠耳廓微循環(huán)，然后按表13iv給藥，觀察給藥后15min時的微循環(huán)，用給藥前后差值作組間t檢驗，與生理鹽水組比較，結果見表13?？梢娨嫘氖鎯龈煞鄹?、低劑量組對小鼠耳廓毛細血管有明顯的擴張作用，耳廓毛細血管開放數(shù)量明顯增多，血流由線粒流變?yōu)榫€流，血流速度明顯加快，可見益心舒凍干粉有明顯改善微循環(huán)的作用。
3.結語實驗表明，益心舒凍干粉能明顯抑制醋酸所致小鼠扭體反應，提高熱板法中小鼠痛閾值，對膠原蛋白-腎上腺素誘發(fā)小鼠體內血栓有顯著的保護作用，可使離體豚鼠心臟冠脈血流量增加，明顯拮抗垂體后葉素引起的大鼠心肌缺血，明顯延長小鼠心肌及腦缺氧的耐受時間，并且具有明顯改善小鼠耳廓微循環(huán)的作用，這些都提示其具有活血化瘀、止痛等功能，這就為該藥臨床用于胸悶不舒、胸痛等癥提供了一定藥理學依據(jù)。
表13 益心舒凍干粉對小鼠耳廓微循環(huán)的影響(X±SD)

※P＜0.05※※P＜0.01
具體實施例方式
本發(fā)明的實施例一、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g，粉碎，人參、五味子、丹參用乙醇回流提取兩次，第一次3小時，第二次1.5小時，藥渣備用，濾液合并，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定的體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.05倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.1倍量的右旋糖酐充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌封，滅菌，即得。
本發(fā)明的實施例二、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法用85％乙醇浸漬24小時后進行滲漉，收集滲漉液至無色，合并滲漉液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；
4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.1倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.15倍量的右旋糖酐充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌封，滅菌，即得。
本發(fā)明的實施例三、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IN酊劑項下的浸漬法用85％乙醇浸漬5日，取出上清液，再加入85％乙醇依法浸漬至有效部位充發(fā)浸出，合并浸漬液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.01倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.05倍量的右旋糖酐充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌封，滅菌，即得。
本發(fā)明的實施例四、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法用85％乙醇浸漬24小時后進行滲漉，收集滲漉液至無色，合并滲漉液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入有效部位提取物0.05倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.3倍量的甘露醇充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌裝于20ml的西林瓶中，每瓶裝10ml；然后置于冷凍干燥箱中于-50℃預凍3-5小時后抽真空；冷凝溫度保持不變，24小時后，開箱，制成凍干品，壓蓋，貼簽，即得；本發(fā)明的實施例五、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法用85％乙醇浸漬24小時后進行滲漉，收集滲漉液至無色，合并滲漉液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入有效部位提取物0.1倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.4倍量的甘露醇充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌裝于20ml的西林瓶中，每瓶裝10ml；然后置于冷凍干燥箱中于-50℃預凍3-5小時后抽真空；冷凝溫度保持不變，24小時后，開箱，制成凍干品，壓蓋，貼簽，即得；本發(fā)明的實施例六、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IN酊劑項下的浸漬法用85％乙醇浸漬5日，取出上清液，再加入85％乙醇依法浸漬至有效部位充分浸出，合并浸漬液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入有效部位提取物0.01倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.2倍量的甘露醇充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌裝于20ml的西林瓶中，每瓶裝10ml；然后置于冷凍干燥箱中于-50℃預凍3-5小時后抽真空；冷凝溫度保持不變，24小時后，開箱，制成凍干品，壓蓋，貼簽，即得；本發(fā)明的實施例七、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法用85％乙醇浸漬24小時后進行滲漉，收集滲漉液至無色，合并滲漉液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.06倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.1倍量的乳糖充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液用無菌條件下的噴霧干燥塔進行噴霧，制成無菌粉末，包裝，貼簽，即得；本發(fā)明的實施例八、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法用85％乙醇浸漬24小時后進行滲漉，收集滲漉液至無色，合并滲漉液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.09倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.15倍量的乳糖充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液用無菌條件下的噴霧干燥塔進行噴霧，制成無菌粉末，包裝，貼簽，即得；本發(fā)明的實施例九、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IN酊劑項下的浸漬法用85％乙醇浸漬5日，取出上清液，再加入85％乙醇依法浸漬至有效部位充分浸出，合并浸漬液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.03倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.06倍量的乳糖充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液用無菌條件下的噴霧干燥塔進行噴霧，制成無菌粉末，包裝，貼簽，即得；本發(fā)明的實施例十、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法用85％乙醇浸漬24小時后進行滲漉，收集滲漉液至無色，合并滲漉液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.2倍量的甘露醇和上述有效部位提取物0.24倍量的右旋糖酐及上述有效部位提取物0.05的葡萄糖，充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液減壓濃縮至適量，灌封，滅菌，即得。
本發(fā)明的實施例十一、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法用85％乙醇浸漬24小時后進行滲漉，收集滲漉液至無色，合并滲漉液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.3倍量的甘露醇和上述有效部位提取物0.36倍量的右旋糖酐及上述有效部位提取物0.08的葡萄糖，充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液減壓濃縮至適量，灌封，滅菌，即得。
本發(fā)明的實施例十二、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參照中國藥典2005版附錄IN酊劑項下的浸漬法用85％乙醇浸漬5日，取出上清液，再加入85％乙醇依法浸漬至有效部位充分浸出，合并浸漬液，濾過，藥渣備用，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得醇溶性有效部位提取物，備用；2.藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂，加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至約500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物。
3.將上述二種提取物合并后，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.1倍量的甘露醇和上述有效部位提取物0.12倍量的右旋糖酐及上述有效部位提取物0.02倍量的葡萄糖，充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液減壓濃縮至適量，灌封，滅菌，即得。
本發(fā)明的實施例十三、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參、川芎分別置于二氧化碳超臨界流體萃取機的萃取釜中，按下表設定的條件調節(jié)萃取壓力、萃取溫度、萃取時間，收集提取物，備用；超臨界流體萃取萃取壓力、萃取溫度、萃取時間表

2.藥渣及剩余麥冬、黃芪、山楂加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液用裝有能切割2.5萬分子量超濾膜的超濾裝置過濾，將膜上液與膜下液分離，膜上液棄去，膜下液備用；膜下液用裝有能切割150分子量的納濾膜的納濾器過濾，將膜上液與膜下液分離，膜下液棄去，收集膜上液，得水溶性有效部位提取物；3.將上述提取物與水溶性有效部位提取物合并，備用；4.取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.05倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.1倍量的右旋糖酐充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并保溫10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌封，滅菌，即得；本發(fā)明的實施例十四、1.取人參150g、麥冬150g、五味子100g、黃芪150g、丹參200g、川芎100g、山楂150g粉碎成細粉，人參、五味子、丹參、川芎分別置于二氧化碳超臨界流體萃取機的萃取釜中，按下表設定的條件調節(jié)萃取壓力、萃取溫度、萃取時間，收集提取物，備用；超臨界流體萃取萃取壓力、萃取溫度、萃取時間表

2.藥渣及剩余麥冬、黃芪、山楂加水煎煮2次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液用裝有能切割5萬分子量超濾膜的超濾裝置過<p>表1

以上結果表明，卡鉑及所用鉑類化合物增效劑-抗腫瘤抗生素(阿霉素、表柔比星、依達比星、戊柔比星)在該濃度單獨應用時對多種腫瘤細胞生長均有明顯的抑制作用，當聯(lián)合應用時可表現(xiàn)出顯著的增效作用。
試驗4、鉑類化合物和鉑類化合物增效劑(緩釋注射劑)的抑瘤作用所用的腫瘤細胞包括CNS-1、C6、9L、胃腺上皮癌(SA)、骨腫瘤(BC)、乳腺癌(BA)、肺癌(LH)、甲狀腺乳頭狀腺癌(PAT)、肝癌等。將鉑類化合物和鉑類化合物增效劑按10ug/ml濃度加到體外培養(yǎng)24小時的各種腫瘤細胞中，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后計數(shù)細胞總數(shù)。其腫瘤細胞生長抑制效果見表2所示。
表2

權利要求
1.一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒注射制劑，按重量百分比，它用人參15％、麥冬15％、五味子10％、黃芪15％、丹參20％、川芎10％和山楂15％制備而成，其特征在于用這些藥材提取的有效部位提取物和輔料制成；其中藥材提取的有效部位提取物包括脂溶性有效部位提取物、水溶性有效部位提取物或者是它們的混合物；輔料包括注射用水、甘露醇、乳糖、右旋糖酐、葡萄糖、聚乙二醇或它們的混合物。
2.根據(jù)權利要求1所述的益氣復脈、活血化瘀的益心舒注射制劑，其特征在于包括注射液、注射用無菌粉末以及注射用濃溶液。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的益氣復脈、活血化瘀的益心舒注射制劑的制備方法，其特征在于按重量百分比，取人參15％、麥冬15％、五味子10％、黃芪15％、丹參20％、川芎10％、山楂15％，粉碎；人參、五味子、丹參用乙醇提取脂溶性有效部位提取物，藥渣備用，濾液合并，減壓濃縮至20℃時測定相對密度為1.15-1.12，得脂溶性有效部位提取物，備用；藥渣及麥冬、黃芪、川芎、山楂加水煎煮，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至500ml，加入等量的85％乙醇，充分攪拌后，靜置過夜，濾去沉淀物，濾液回收乙醇并濃縮至80℃時測定相對密度為1.30-1.36，得水溶性有效部位提取物；將上述二種有效部位提取物合并后，備用；取上述有效部位提取物，作為注射劑用的活性原料，按照如下方法制備(1)注射液的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.01-0.1倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.05-0.15倍量的右旋糖酐充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌封，滅菌，即得；(2)凍干粉針的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定的體積的80％，攪拌均勻，加入有效部位提取物0.01-0.1倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.2-0.4倍量的甘露醇充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌裝于20ml的西林瓶中，每瓶裝10ml；然后置于冷凍干燥箱中于-50℃預凍3-5小時后抽真空；冷凝溫度保持不變，24小時后，開箱，制成凍干品，壓蓋，貼簽，即得；(3)無菌粉末的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定的體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.03-0.09倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.06-0.15倍量的乳糖充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液用無菌條件下的噴霧干燥塔進行噴霧，制成無菌粉末，包裝，貼簽，即得；(4)注射用濃溶液的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定的體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.1-0.3倍量的甘露醇和上述有效部位提取物0.12-0.36倍量的右旋糖酐及上述有效部位提取物0.02-0.08的葡萄糖，充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液減壓濃縮至適量，灌封，滅菌，即得。
4.根據(jù)權利要求3所述的益氣復脈、活血化瘀的益心舒注射制劑的制備方法，其特征在于人參、五味子、丹參用乙醇提取的方法包括回流提取、滲漉提取或者是浸漬提取。
5.根據(jù)權利要求1或2所述的益氣復脈、活血化瘀的益心舒注射制劑的制備方法，其特征在于按重量百分比，取人參15％、麥冬15％、五味子10％、黃芪15％、丹參20％、川芎10％、山楂15％，粉碎，人參、五味子、丹參、川芎分別置于二氧化碳超臨界流體萃取機的萃取釜中循環(huán)萃取，收集提取物，備用；藥渣及剩余麥冬、黃芪、山楂加水煎煮，合并煎煮液，濾過，濾液用裝有能切割5萬-1000分子量超濾膜的超濾裝置過濾，將膜上液與膜下液分離，膜上液棄去，膜下液備用；膜下液用裝有能切割100-300分子量的納濾膜的納濾器過濾，將膜上液與膜下液分離，膜下液棄去，收集膜上液，得水溶性有效部位提取物；將上述二氧化碳超臨界提取物和水溶性有效部位提取物合并，備用；取上述有效部位提取物，按照如下方法制備(1)注射液的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定的體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.01-0.1倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.05-0.15倍量的右旋糖酐充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌封，滅菌，即得；(2)凍干粉針的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定的體積的80％，攪拌均勻，加入有效部位提取物0.01-0.1倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.3-0.9倍量的甘露醇充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液灌裝于20ml的西林瓶中，每瓶裝10ml；然后置于冷凍干燥箱中于-50℃預凍3-5小時后抽真空；冷凝溫度保持不變，24小時后，開箱，制成凍干品，壓蓋，貼簽，即得；(3)無菌粉末的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.03-0.09倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.06-0.15倍量的乳糖充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液用無菌條件下的噴霧干燥塔進行噴霧，制成無菌粉末，包裝，貼簽，即得；(4)注射用濃溶液的制備取上述有效部位提取物加注射用水稀釋至規(guī)定的體積的80％，攪拌均勻，加入上述有效部位提取物0.1-0.3倍量的聚乙二醇6000和上述有效部位提取物0.12-0.36倍量的右旋糖酐及上述有效部位提取物0.02-0.08的葡萄糖，充分溶解，加入0.1％的注射用活性炭，加熱至80℃并維持10分鐘，過濾除炭，加注射用水至近全量，用10％的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為7.5，用0.45μm的微孔濾膜精濾，并用0.22μm的微孔濾膜進行除菌過濾，濾液減壓濃縮至適量，灌封，滅菌，即得。
6.按照權利要求5所述的益氣復脈、活血化瘀的益心舒注射制劑的制備方法，其特征在于人參的萃取壓力是25Mpa、萃取溫度是55℃、萃取時間是6小時；丹參應萃取兩次，第一次使用的萃取壓力是20Mpa、萃取溫度是40℃、萃取時間是4小時；第二次使用的萃取壓力是35Mpa、萃取溫度是65℃、萃取時間是8小時；五味子的萃取壓力是25.3Mpa、萃取溫度是60℃、萃取時間是6小時；川芎應萃取兩次，第一次使用的萃取壓力是25.3Mpa、萃取溫度是60℃、萃取時間5小時、第二次使用的萃取壓力是30Mpa、萃取溫度是65℃、萃取時間是6小時。
全文摘要
本發(fā)明是一種益氣復脈、活血化瘀的益心舒注射制劑及其制備方法，是用人參、麥冬、五味子、黃芪、丹參、川芎及山楂制備而成，它由藥材的有效部位提取物和一定比例的注射用水、甘露醇、聚乙二醇、乳糖、右旋糖酐、葡萄糖、或它們的混合物組成，具有益氣復脈，活血化瘀，養(yǎng)陰生津的功效，用于氣陰兩虛，心悸脈結代，胸悶不舒、胸痛及冠心病心絞痛見有上述癥狀者。
文檔編號A61P9/00GK1850185SQ20061005095
公開日2006年10月25日 申請日期2006年3月1日 優(yōu)先權日2006年3月1日
發(fā)明者張觀福 申請人:貴州信邦遠東藥業(yè)有限公司