專利名稱：丹參丹酚酸a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹參丹酚酸A的制備方法，丹酚酸A的結(jié)構(gòu)如下 技術(shù)背景丹參是最常用的藥材之一，用于治療心絞痛、高血壓、冠心病和中風(fēng)等心腦血管疾病。但一般用的都是從丹參中提取的粗提物或直接用丹參飲片。近二十多年，丹參的主要活性成分丹酚酸類化合物陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)。體外實(shí)驗結(jié)果顯示，丹酚酸類化合物除了用于治療心腦血管疾病，還可治療多種疾病，如肝病、腎病、消化潰瘍、腫瘤等。丹參總酚酸中以丹酚酸B含量最高，因此，人們開發(fā)的重點(diǎn)集中于丹酚酸B，而含量較低而活性較強(qiáng)的丹酚酸A被人們忽略。
杜冠華等人對丹酚酸A的活性進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)丹酚酸A對大鼠離體心肌缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用，對小鼠腦缺血再灌注引起的腦損傷有保護(hù)作用，對樟柳堿或東莨菪堿引起的小鼠記憶獲得障礙具有明顯的改善作用，對大鼠半乳糖性白內(nèi)障形成或有抑制作用，因此在心腦血管方向有有良好的療效。
中國專利CN1397276A，2002年公開了水或醇提、樹脂層析，再經(jīng)硅膠柱層析的純化制備丹酚酸A的方法。中國專利CN1513848A，2003年公開了采用水溫浸、離心、超濾、調(diào)酸、有機(jī)溶劑萃取再經(jīng)反相柱層析制備丹酚酸A的方法。
由于丹酚酸A在藥材中含量低，甚至沒有，因此丹酚酸A產(chǎn)率低，生產(chǎn)成本高，在工業(yè)大生產(chǎn)上有一定的局限性，實(shí)際上并不能從根本上解決丹酚酸A的工業(yè)生產(chǎn)問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種丹酚酸A的制備方法。
本發(fā)明丹參丹酚酸A的制備方法，其工藝步驟為1、提取在水或乙醇水溶液作為提取溶劑時，溫浸溫度為50～99℃，采用乙醇水溶液作為提取溶劑時濃度為10％～95％。提取的方法可以采用回流法、溫浸法?，F(xiàn)以乙醇回流提取的方法為例進(jìn)行說明。
丹參粗粉，加10倍量60％乙醇回流提取3次，每次1.5小時，濾過。
合并提取液，采用過濾，自然沉淀或離心的方法，初步除去提取液中固體雜質(zhì)。
2、柱層析純化丹酚酸A(1)采用特選材料制備色譜柱；(2)色譜柱活化；(3)溶液經(jīng)色譜柱吸附，用水、稀醇水溶液或水-丙酮溶劑洗脫，除去雜質(zhì)；(4)用適當(dāng)濃度的醇水溶液或水-丙酮溶液或乙腈-水溶液，洗脫減壓或常壓濃縮至洗脫液無有機(jī)溶劑在上述步驟(2)中，優(yōu)選填料是大孔樹脂類、離子交換樹脂、MCI-GEL-CHP-20P、Sephadex LH-20凝膠、或C18、C8鍵合相等色譜柱填料，推薦方案為用非極性或弱極性的大孔樹脂做色譜柱填料，優(yōu)選為苯乙烯骨架大孔樹脂。
上述步驟(2)中色譜柱活化的方法可用丙酮、甲醇、乙腈有機(jī)或其他與水的混合物，也可用堿-水溶液，或堿醇溶液活化。
上述步驟(2)中，洗脫用水可含微量的酸或無機(jī)鹽。
上述步驟(2)中，可以單用水洗脫雜質(zhì)或單用稀醇水溶液或低濃度的丙酮-水溶劑洗脫雜質(zhì)，也可先用水洗脫然后再用稀醇水溶液或低濃度的丙酮-水溶劑洗脫雜質(zhì)。
上述步驟(3)中，稀醇水溶液等溶劑可以為甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇的水溶液，也可采用乙腈的水溶液，或他們的混合物。
上述步驟(3)中，稀醇水溶液等溶劑的濃度一般在40％以下，最好用20-30％的濃度，低濃度的丙酮-水溶液常用丙酮含量一般在50％以下，最好為10-30％的濃度。
上述步驟(4)中，適當(dāng)濃度的丙酮-水、醇-水溶液或乙腈-水溶液中，有機(jī)相所占比例一般大于20，最好用35％～60％的濃度。
3、調(diào)PH值有機(jī)溶劑萃取將如上溶液用酸或堿調(diào)PH值至2～7，經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，然后分離有機(jī)溶劑得含藥液溶液。優(yōu)選PH值范圍為3～5。有機(jī)溶劑優(yōu)選為乙酸酯類，可以是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等乙酸酯類溶劑。
4、干燥萃取液的干燥可采用一步法，也可采用兩步法。兩步法為先在常壓或減壓條件下濃縮，然后采用真空干燥或冷凍干燥等方法干燥。一步法采用減壓濃縮干燥得到丹酚酸A成品。
本發(fā)明丹參丹酚酸A的制備方法，用水或醇提取，主要是把丹參酚酸類化合物提取完全，是丹酚酸A產(chǎn)率提高的基礎(chǔ)。柱層析時由于在洗脫去雜質(zhì)的過程采用水和低濃度醇溶劑，使反應(yīng)液中的雜質(zhì)得到進(jìn)一步除去在丹酚酸A的洗脫過程中，由于采用適當(dāng)濃度的有機(jī)溶劑-水溶液，使丹酚酸A與其它成分得到較好分離；經(jīng)過柱層析后，還有少量雜質(zhì)存在，經(jīng)過調(diào)解PH值有機(jī)溶劑萃取，最終制得了純度較高的丹酚酸A。最終提取物得量達(dá)3‰以上，丹酚酸A含量達(dá)到90％以上，且質(zhì)量穩(wěn)定、工藝成熟、可以大規(guī)模生產(chǎn)。與其它丹酚酸A的制備方法相比，產(chǎn)率大大提高，成本降低。對于提高丹參療效，充分利用中藥材資源等具有很重要的意義。
具體實(shí)施例下面結(jié)合具體實(shí)施例，對本發(fā)明及一步詳細(xì)說明實(shí)施例一丹酚酸A的制備方法，其工藝步驟為1、水提取(溫浸法)丹參粗粉，加8倍量水80℃溫浸3次，每次1.0小時，濾過。
2、柱層析純化丹酚酸A合并濾液離心(4000轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，取上清液過1400大孔吸附樹脂柱，先用水洗至糖檢測反應(yīng)為陰性，改用20％乙醇洗脫至FeCl3反應(yīng)為陰性，改為40％乙醇洗脫至FeCl3反應(yīng)為陰性，收集洗脫液，60℃減壓濃縮至無醇味。
3、調(diào)PH值，有機(jī)溶劑萃取加鹽酸調(diào)節(jié)PH值至3～5，用藥液1.5倍量體積的乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯相。
4、濃縮干燥減壓濃縮萃取液至浸膏狀，60℃真空干燥6小時，得淡黃色粉末，即為丹參丹酚酸A。
實(shí)施例二與實(shí)施例一基本相同，所不同的是提取過程為60％乙醇水溶液回流提取。具體方法如下丹參粗粉，加10倍量60％乙醇回流提取3次，每次1.5小時，濾過。
實(shí)施例三與實(shí)施例一基本相同，所不同的是提取液反應(yīng)后采用過濾初步除去固體雜質(zhì)。
實(shí)施例四與實(shí)施例一基本相同，所不同的是柱層析純化過程中，直接用10％乙醇水溶液洗脫，除去雜質(zhì)。
實(shí)施例五與實(shí)施例一基本相同，所不同的是柱層析純化過程中，用80％乙醇水溶液洗脫丹酚酸A。
實(shí)施例六與實(shí)施例一基本相同，所不同的是濃縮洗脫液時采用常壓濃縮。
實(shí)施例七與實(shí)施例一基本相同，所不同的是調(diào)PH有機(jī)溶劑萃取時調(diào)PH值至2～3。
實(shí)施例八與實(shí)施例一基本相同，所不同的是調(diào)PH有機(jī)溶劑萃取時采用的有機(jī)溶劑為乙酸丁酯。
實(shí)施例九與實(shí)施例一基本相同，所不同的是濃縮干燥采用一步法直接減壓濃縮干燥得到丹酚酸A成品。
實(shí)施例十與實(shí)施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的是甲醇水溶液。
實(shí)施例十一與實(shí)施例十二基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的是丙酮-水溶液。
實(shí)施例十二與實(shí)施例十二基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的是乙腈水溶液。
實(shí)施例十三與實(shí)施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的MCI-GEL CHP-20P作色譜柱填料。
實(shí)施例十四與實(shí)施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用C18鍵合相作色譜柱填料。
實(shí)施例十五與實(shí)施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的C8鍵合相作色譜柱填料。
實(shí)施例十六與實(shí)施例一基本相同，所不同的是在柱層析分離、純化丹酚酸A的洗脫過程中，采用的Sephadex LH-20作色譜柱填料。
本發(fā)明所要求保護(hù)的具體技術(shù)方案，不限于上述實(shí)施例(具體試驗結(jié)果見下頁附表1)所表達(dá)的技術(shù)方案的具體組合。
附表1



使用儀器類型高效液相色譜儀 梯度方法恒流檢測器紫外檢測器 儀器型號Agilent 1100檢測波長285nm柱型號Kromasil KR100-7C18柱(250×4.6mm)積分方法面積歸一法圖1實(shí)施例四產(chǎn)品高效液相含量測定2實(shí)施例六產(chǎn)品高效液相含量測定3實(shí)施例八產(chǎn)品高效液相含量測定4實(shí)施例十六產(chǎn)品高效液相含量測定圖
權(quán)利要求
1.一種丹參丹酚酸A的制備方法，其工藝步驟為步驟一、提取提取為將丹參飲片或粉碎的丹參采用水或不同濃度乙醇作為提取溶劑，采用溫浸、回流法提取，采用過濾、自然沉淀或離心方法初步除去固體雜質(zhì)。步驟二、柱層析純化丹酚酸A(1)采用過濾、自然沉淀或離心方法初步除去固體雜質(zhì)；(2)采用特選材料制備色譜柱。所采用的填料是大孔樹脂類、離子交換樹脂、MCI-GEL-CHP-20P、Sephadex LH-20凝膠、或C18、C8鍵合相等色譜柱填料；(3)色譜柱活化；(4)溶液經(jīng)色譜柱吸附，用水、稀醇水溶液或水-丙酮溶劑洗脫，除去雜質(zhì)。再用適當(dāng)濃度的醇水溶液或水-丙酮溶液或乙腈-水溶液洗脫，減壓或常壓濃縮至洗脫液無有機(jī)溶劑。步驟三、調(diào)PH值有機(jī)溶劑萃取將如上溶液用酸或堿調(diào)PH值至2～7，經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，然后分離有機(jī)溶劑得含藥液溶液。步驟四、濃縮干燥
2.權(quán)利要求1所述的丹酚酸A的制備方法，其特征是水或乙醇水溶液作為提取溶劑時，溫浸溫度為50～99℃，采用乙醇水溶液作為提取溶劑時濃度為10～95％。
3.權(quán)利要求1所述的步驟二柱層析純化丹酚酸A(2)中所采用的填料為非極性或弱極性的大孔樹脂。優(yōu)選為聚苯乙烯骨架的大孔樹脂。
4.權(quán)利要求1所述的步驟三調(diào)PH值有機(jī)溶劑萃取中，優(yōu)選PH值范圍為3～5。有機(jī)溶劑優(yōu)選為乙酸酯類，可以是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等乙酸酯類溶劑。
5.權(quán)利要求1所述的步驟四濃縮干燥中采用減壓濃縮或常壓濃縮，干燥采用真空干燥或冷凍干燥。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種丹參丹酚酸A的制備方法。將丹參藥材用水或醇提取。濃縮提取液后，柱色譜純化丹酚酸A，再經(jīng)調(diào)pH值有機(jī)溶劑萃取，濃縮干燥，即得丹酚酸A。用本發(fā)明方法制備丹酚酸A提取率高，純度好，提取物中丹酚酸A含量可達(dá)90％以上，且質(zhì)量穩(wěn)定，可大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號A61K125/00GK1887849SQ20061005244
公開日2007年1月3日 申請日期2006年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月13日
發(fā)明者黎豫杭, 柴建國, 張善飛, 潘迎鋒, 張建兵 申請人:正大青春寶藥業(yè)有限公司